Αφηρημένο

Ιστορικό

Survivin είναι ένας αναστολέας της απόπτωσης και της έκφρασης πάνω συνδέεται με την κακή πρόγνωση σε πολλές κακοήθειες. Ενώ αρκετές μελέτες έχουν αναλύσει την έκφραση survivin σε οισοφαγικό καρκίνωμα πλακώδους κυττάρου, λίγοι έχουν επικεντρωθεί στην οισοφαγικό αδενοκαρκίνωμα (EAC) και /ή καρκίνο γειτονικών πλακώδες επιθήλιο (υπόθεση). Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν 1) να προσδιοριστεί ο βαθμός της survivin μέχρι ρύθμισης σε δείγματα της ΑΗΚ και την υπόθεση, 2) να αξιολογήσει αν η έκφραση survivin στην ΑΗΚ και στην υπόθεση συσχετίζεται με υποτροπή ή /και του θανάτου, και 3) να εξετάσει την επίδραση της αναστολή της survivin σε απόπτωση σε κύτταρα ΑΗΚ.

Μέθοδοι

Φρέσκα κατεψυγμένα δείγματα της ΑΗΚ και υπόθεση από τον ίδιο ασθενή χρησιμοποιήθηκαν για qRT-PCR και ανάλυση κηλίδας Western, και φορμόλη σταθερό, παραφινώδη ενσωματωμένα ιστός χρησιμοποιήθηκε για ανοσοϊστοχημεία. κυτταρικές σειρές ΑΗΚ, OE19 και OE33, επιμολύνθηκαν με μικρά παρεμβαλλόμενα RNA (siRNA που) με νοκ ντάουν έκφραση survivin. Αυτό επιβεβαιώθηκε από qRT-PCR για την έκφραση survivin και ανάλυση κηλίδας Western των διασπασμένη PARP, διασπασμένη κασπάση 3 και survivin. δεδομένων έκφραση survivin συσχετίζεται με την κλινική έκβαση.

Αποτελέσματα

έκφραση survivin ήταν σημαντικά υψηλότερη σε δείγματα όγκων ΑΗΚ σε σχέση με την υπόθεση από τον ίδιο ασθενή. Ασθενείς με υψηλή έκφραση της survivin στα καρκινικά ΑΗΚ είχαν αυξημένο κίνδυνο θανάτου. έκφραση survivin σημειώθηκε επίσης στην υπόθεση και να συσχετίζεται με αυξημένο κίνδυνο υποτροπής μακρινό. αξιολόγηση γραμμή κυττάρων έδειξαν ότι η αναστολή της survivin ως αποτέλεσμα την αύξηση στην απόπτωση

Συμπέρασμα

Υψηλότερη έκφραση της survivin σε καρκινικό ιστό συσχετίστηκε με αυξημένο κίνδυνο θανάτου.? ενώ survivin έκφρασης στην υπόθεση ήταν μια ανώτερη προγνωστικός δείκτης της υποτροπής. Η αναστολή της survivin σε κυτταρικές σειρές ΑΗΚ παρουσίασε περαιτέρω αύξηση της απόπτωσης, υποστηρίζοντας τα πιθανά οφέλη των θεραπευτικών στρατηγικών απευθύνονται σε αυτό το δείκτη

Παράθεση:. Malhotra U, Ζαΐντι AH, Kosovec JE, Kasi μμ, Komatsu Υ, Rotoloni CL, et al. (2013) προγνωστική αξία και στοχευμένη αναστολή της Σουρβιβίνης Έκφραση σε αδενοκαρκινώματος του οισοφάγου και τον καρκίνο-Δίπλα πλακώδες επιθήλιο. PLoS ONE 8 (11): e78343. doi: 10.1371 /journal.pone.0078343

Επιμέλεια: Nupur Gangopadhyay, Πανεπιστήμιο του Pittsburgh, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 29 Ιούλ, 2013? Αποδεκτές: 13, Σεπτεμβρίου, 2013? Δημοσιεύθηκε: 4 Νοεμβρίου, 2013

Copyright: © 2013 Malhotra et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. David Gold και Ειρήνη Blumenkranz για την παροχή στήριξης επιχορήγησης. αριθμούς επιχορήγηση και η διεύθυνση URL δεν είναι διαθέσιμες. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

καρκίνος του οισοφάγου είναι σήμερα η όγδοη πιο κοινή μορφή καρκίνου σε όλο τον κόσμο? με οισοφαγικό αδενοκαρκίνωμα (ΑΗΚ) αντιπροσωπεύει το 50% των περιπτώσεων καρκίνου του οισοφάγου [1] – [5]. Η πενταετής επιβίωση για τον καρκίνο του οισοφάγου είναι μικρότερη από 20% και η συχνότητα εμφάνισης της αυξήθηκε κατά σχεδόν τρεις φορές στο δυτικό ημισφαίριο τα τελευταία 20 έτη [6], [7]. Οι περισσότεροι ΑΗΚ ασθενείς που διαγνώστηκαν με προχωρημένο στάδιο της νόσου και να έχουν χαμηλά ποσοστά μακροχρόνιας επιβίωσης με τις απασχολούνται σήμερα χημειοθεραπευτικούς παράγοντες [5], [8], [9]. Η αποτελεσματικότητα των σημερινών αγωγών έχει φθάσει σε ένα πλατώ και περαιτέρω ενίσχυση των κυτταροτοξικών παραγόντων ή κλιμάκωση της δόσης ακτινοβολίας έχει αποδειχθεί ότι σχετίζεται με σημαντικές αρνητικές παρενέργειες. Κατά συνέπεια, η ανάγκη για την ανάπτυξη αποτελεσματικών στοχευμένων θεραπειών που αποσκοπούν στην αγωγή ειδικοί μηχανισμοί της καρκινογένεσης απαιτούνται προκειμένου να βελτιωθεί η επιβίωση [2] -. [4], [10], [11]

Σουρβιβίνη, επίσης γνωστή ως Βακιλλοϊική αναστολέας της απόπτωσης που περιέχει επανάληψη 5 ή BIRC5, είναι ένας αναστολέας της απόπτωσης ή προγραμματισμένου κυτταρικού θανάτου [10] – [13]. Ο μηχανισμός δράσης μέσω της εσωτερικής οδού είναι η εξής: survivin συνδέεται με και αναστέλλει κασπάση 9, προκαλώντας την απενεργοποίηση του αποπτωτικό μονοπάτι? procaspase 3 δεν διασπάται και επομένως δεν διασπά PARP (Poly ADP-ριβόζη πολυμεράση)? ως αποτέλεσμα, PARP παραμένει ενεργή και συνεχίζει με επιδιόρθωση του DNA, με αποτέλεσμα την παρεμπόδιση της απόπτωσης (Εικόνα 1) [8], [10], [11], [13], [14]. Κανονικά survivin βρίσκεται μόνο κατά τη διάρκεια της ανάπτυξη του εμβρύου ως μέσου για τη ρύθμιση της σωστής κυτταρική διαίρεση και ανάπτυξη και δεν ανιχνεύεται στους περισσότερους τελικά διαφοροποιημένα φυσιολογικούς ιστούς [15]. Μερικά φυσιολογικούς ιστούς ενήλικα με επίμονη έκφραση survivin περιλαμβάνουν αιμοποιητικά βλαστικά κύτταρα [16], θυμοκύτταρα [17], τα μελανοκύτταρα [18], γαστρικό βλεννογόνο [19] και το επιθήλιο του κόλου [19]. Οι μελέτες ανέφεραν αυξημένη έκφραση survivin σε έναν αριθμό καρκίνων συμπεριλαμβανομένου του μαστού, του πνεύμονα, μελάνωμα, λευχαιμία, λέμφωμα, του παχέος εντέρου, του παγκρέατος, και κ.λπ. [15]. Αποδεικτικά στοιχεία υποστηρίζει επίσης υπερέκφραση survivin σε οισοφαγικό καρκίνωμα των πλακωδών κυττάρων και η σύνδεσή της με φτωχή πρόγνωση [3], [4], [8], [10], [11], [20]. Επειδή survivin δεν εκφράζεται στην πλειοψηφία των υγιών ιστών, αντιπροσωπεύει ένα ιδανικό στόχο για την ανάπτυξη νέων παραγόντων του καρκίνου [3], [4], [8], [10], [11], [13], [20 ], [21]. Στην πραγματικότητα παράγοντες που στοχεύουν survivin βρίσκονται σήμερα σε φάση Ι και φάσης ΙΙ των κλινικών δοκιμών σε ασθενείς με προχωρημένο καρκίνο, όπου οι μέθοδοι της αναστολής περιλαμβάνουν αντιπαράλληλα ολιγονουκλεοτίδια (ASOs), μεταγραφικοί καταστολείς, και ανοσοθεραπεία [10], [14], [22]. Ορισμένοι από αυτούς τους παράγοντες έχουν δείξει υποσχόμενα αρχικά αποτελέσματα, ωστόσο καμία δεν έχουν βελτιώσει τη συνολική επιβίωση [3], [4], [7], [10], [11], [14], [22] – [24].

Survivin συνδέεται με και αναστέλλει κασπάσης 9, κασπάσης 9 είναι σε θέση να διασπάσει κασπάσης 3, κασπάσης 3 δεν είναι σε θέση να διασπάσει PARP, PARP προάγει την επιδιόρθωση του DNA και δεν επάγει την απόπτωση.

Η

Αν και εκεί έχουν υπάρξει πολλές αναφορές ανάλυση του ρόλου της survivin σε οισοφαγικό καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων (SCC), πολύ λίγες μελέτες έχουν ασχοληθεί με το ρόλο της στην οισοφαγικού αδενοκαρκινώματος (EAC) [3], [4], [7] – [9], [21] , [25], [26]. Σε έκφραση προσθήκη αυτού του αντι-αποπτωτική γονιδίου στο καρκίνο παρακείμενο πλακώδες επιθήλιο (CASE) δεν έχει μελετηθεί. Ο σκοπός της μελέτης μας, ως εκ τούτου, ήταν 1) να προσδιοριστεί ο βαθμός της survivin μέχρι ρύθμισης σε δείγματα της ΑΗΚ ασθενών και την υπόθεση, 2) να αξιολογήσει υποτροπής και της επιβίωσης με την έκφραση survivin στην ΑΗΚ και στην υπόθεση των ιστών, και 3) να εξετάσει την επίδραση της αναστολής survivin στην απόπτωση σε κυτταρικές σειρές ΑΗΚ.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθική Δήλωση

Η μελέτη διεξήχθη μετά από την έγκριση από το Πανεπιστήμιο του Πίτσμπουργκ Διοικητικού κριτική Θεσμική. Τα δείγματα ελήφθησαν από το UPMC Cancer Center – καρκίνο του οισοφάγου Μητρώο Κινδύνων, Πανεπιστήμιο του Πίτσμπουργκ IRB Αριθμός Μελέτης 98-122 με URL: https://www.upmccancercenter.com/trials/trialDisplay.cfm?id=2277 type=D. Ως μέρος της μελέτης, όλα τα δείγματα ασθενών ελήφθησαν με πλήρη γραπτή συγκατάθεση.

τηλέφωνα Γραμμές

Οι κυτταρικές σειρές ΑΗΚ OE19 (JROECL19) και OE33 (JROECL33) ελήφθησαν μέσω της Sigma-Alderich (St. Louis, ΜΟ). Και οι δύο διατηρήθηκαν σε Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 μέσο ανάπτυξης κυττάρου (Life Technologies, Carlsbad, CA, 21870076), συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου βοός (FBS) (Life Technologies, Carlsbad, CA, 26140079), 1% L-γλουταμίνη (Life Technologies, Carlsbad, CA, 25030081), 1% Πενικιλλίνη-Στρεπτομυκίνη (Life Technologies, Carlsbad, CA, 15070063). Όλα τα κύτταρα αποθηκεύτηκαν σε 25 cm

2 φιάλες και επωάστηκαν στους 37 ° C με 5% CO

2 υγροποιημένο αέρα. Θρυψίνη-ΕϋΤΑ (Life Technologies, Carlsbad, CA, 25200072) χρησιμοποιήθηκε για τη συγκομιδή των κυττάρων από φιάλη τους και να προετοιμάσει ένα ενιαίο εναιώρημα κυττάρων για ανάλυση Western blot και Αντίστροφη Μεταγραφή -. Αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (RT-PCR)

siRNA Επιμόλυνση

OE33 και OE19 σπάρθηκαν σε πλάκα 6 φρεατίων σε μία πυκνότητα 4 χ 10

5 24 ώρες πριν από την επιμόλυνση. Τα κύτταρα επιμολύνθηκαν με είτε μικρές RNAs παρεμβολής (siRNAs) ή χωρίς επεξεργασία. Οι κατηγορίες siRNA που χρησιμοποιούνται περιλαμβάνονται survivin συγκεκριμένες siRNA, ή αρνητικό μάρτυρα (αγωνίζομαι) (Dharmacon, Lafayette, CO, D-001810-10-05). Κάθε διάλυμα siRNA αραιώθηκε από το απόθεμα 100 μΜ έως 5 μΜ σε RNase-free H

2O, στη συνέχεια αραιώνεται έως 0,25 μΜ σε Opti-ΜΕΜ (Life Technologies, Carlsbad, CA, 31985062). Ταυτόχρονα, 2 μί αντιδραστηρίου επιμόλυνσης 4 (Dharmacon, Lafayette, CO, το Τ-2004) ανά αντίδραση αραιώνεται με 98 μι Opti-ΜΕΜ. Τα διαλύματα επωάστηκαν ξεχωριστά για 5 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου, αναμειγνύονται μαζί, και επωάζεται για άλλα 20 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Το τελικό διάλυμα siRNA αραιώθηκε σε 1 mL ανά αντίδραση με Opti-ΜΕΜ για μια τελική συγκέντρωση 25 ηΜ. Τα κύτταρα επωάστηκαν στους 37 ° C σε 5% CO

2 υγροποιημένο αέρα, με μια αλλαγή μέσου RPMI μετά από 24 ώρες. Ολόκληρο κυτταρικό λύμα συλλέχθηκε σε 48 ώρες για ανάλυση RNA ή 72 ώρες για την ανάλυση πρωτεϊνών.

Ασθενείς και Παρασκευή ιστών

Η μελέτη διεξήχθη μετά από την έγκριση από το Πανεπιστήμιο του Πίτσμπουργκ Διοικητικού κριτική Θεσμική. Οι ασθενείς που υποβλήθηκαν σε οισοφαγεκτομή για τοπική οισοφαγικό αδενοκαρκίνωμα από την αρχή του 2008 μέχρι το τέλος του 2010 είχαν συμπεριληφθεί στη μελέτη. Σαράντα επτά δείγματα υποβλήθηκαν σε διαλογή και μετά την αφαίρεση καρκίνωμα πλακώδους κυττάρου, καρκίνο αδενοχοληδωτό, και μπλοκ ιστού με λιγότερο από 70% του όγκου, συνολικά 37 δείγματα ασθενών αναλύθηκαν για αυτή τη μελέτη. Κλινικά δεδομένα όπως η ηλικία, το φύλο, την εθνικότητα, το κλινικό στάδιο, ζωτικής σημασίας για την κατάσταση, το ιστορικό καπνίσματος, η συνολική επιβίωση και ο χρόνος μέχρι την υποτροπή λήφθηκε από το Τμήμα Καρδιοχειρουργικής κλινικής βάσης δεδομένων. Για τη διασφάλιση της εμπιστευτικότητας των ασθενών, ένας έντιμος σύστημα μεσίτη χρησιμοποιήθηκε για την παροχή αποχαρακτηριστούν κλινική σύνολο δεδομένων που συνδέονται με τα δείγματα ιστών [27]. Φρέσκα κατεψυγμένου ιστού ενσωματωμένα σε OCT χρησιμοποιήθηκε για ποσοτική αλυσίδα μεταγραφή-αντίδραση πολυμεράσης αντίστροφης (qRT-PCR) και ανάλυση στυπώματος Western. Φορμαλίνη σταθερό, έχει εμπεδωθεί με παραφίνη (FFPE) ιστός χρησιμοποιήθηκε για ανοσοϊστοχημεία.

Ανάλυση Western Blot

Η πρωτεΐνη συλλέχθηκε από κάθε ομάδα θεραπείας κυτταρική γραμμή με την προσθήκη ρυθμιστικού λύσης (RIPA ρυθμιστικό διάλυμα που περιέχει 0.1% πρωτεάσης μείγμα κοκτέιλ αναστολέα, 0,1% Halt φωσφατάση μείγμα κοκτέιλ αναστολέα και 1% PMSF) και χρησιμοποιώντας ένα κελί ανυψωτικό. Το διάλυμα περιστράφηκε για μία ώρα στους 4 ° C για να λυθούν πλήρως τα κύτταρα, στη συνέχεια στροβιλίστηκε στις 12.000 g στους 4 ° C για 20 λεπτά για να διαχωριστεί η πρωτεΐνη. Το υπερκείμενο που περιέχει την πρωτεΐνη συλλέχθηκε και ποσοτικά χρησιμοποιώντας δοκιμασία BCA Pierce (Thermofisher, Rockford, IL, 23227). Τριάντα-πέντε μα πρωτεΐνης από κάθε δείγμα μετουσιώθηκε και επιλύονται από 4-20% βαθμιαία πηκτή SDS-PAGE (Bio-Rad, Hercules, CA, 161-1159), στη συνέχεια ηλεκτροκηλιδώθηκαν σε μία μεμβράνη Immobilon-P PVDF νιτροκυτταρίνης (Millipore Corporation , Billerica ΜΑ, IPVH08100). Η μεμβράνη αποκλείστηκε σε 5% άπαχο αποξηραμένο γάλα σε ΤΒδ-Τ σε θερμοκρασία δωματίου για μία ώρα. Το αντίσωμα ενδιαφέροντος επωάστηκε με την μεμβράνη στους 4 ° C όλη τη νύκτα, ακολουθούμενο από 1,5 ώρες επωάσεως σε θερμοκρασία δωματίου στο αντίστοιχο χρένο δευτερεύον αντίσωμα συζευγμένο με υπεροξειδάση (Cell Signal, Boston ΜΑ, 7074 ή 7076, 1:3,000) Survivin αντίσωμα ( Santa Cruz Biotechnology, Dallas, TX, SC-47750) χρησιμοποιήθηκε σε 1:200, κασπάσης-3 (Cell Signal, Boston, MA, 9665) σε 1:1,000, διασπασμένης PARP (Cell Signal, Boston, MA, 9546) στο 1:2,000 και β-ακτίνης (Sigma-Aldrich, St. Louis, ΜΟ, A1978) στους 1:30,000 χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης. Σήματα αναπτύχθηκαν χρησιμοποιώντας ένα αντιδραστήριο χημειοφωταύγειας (Fisher Scientific, Pittsburgh, ΡΑ, 509,049,324)

Ποσοτική Αντίστροφη Μεταγραφή -. Αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR qRT-)

Ολικό RNA καθαρίστηκε από κυτταρικές γραμμές χρησιμοποιώντας το RNeasy Micro Kit (Qiagen, Valencia, CA, 74004). Εν συντομία, σφαιρίδια που περιέχουν 1 × 10

6 κύτταρα στροβιλίστηκαν σε RLT ρυθμιστικό λύσης και το RNA εκχυλίζεται ακολουθώντας το πρωτόκολλο του κατασκευαστή χρησιμοποιώντας ένα όγκο έκλουσης 14 ul. Χρησιμοποιώντας ένα ND-2000 φασματοφωτόμετρο (Nanodrop Technologies, Inc, Wilmington, DE), η ποιότητα και η ποσότητα του RNA εκτιμήθηκε με OD

260/280. Συμπληρωματικό DNA (cDNA) μεταγράφηκε αντίστροφα από 3 μg ολικού RNA χρησιμοποιώντας RNA σε cDNA ecodry πρόμιγμα σε έναν συνολικό όγκο 20 υΙ (Clontech, Mountain View, CA, 639,547) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Οι συνθήκες της αντίδρασης ήταν 42 ° C για 60 λεπτά, που ακολουθείται από 70 ° C για 10 λεπτά χρησιμοποιώντας θερμοκυκλωτή ΑΒΙ Prism 7900HT PCR (Applied Biosystems, Carlsbad, CA). PCR διεξήχθη σε ένα συνολικό όγκο 20 υΐ με χρήση 600 ng cDNA, 1 × Taqman PCR καθολικής βασικού μείγματος (Invitrogen, Grand Island, ΝΥ, 4.304.437), και 1 × Survivin ή εκκινητή GAPDH (Applied Biosystems, Carlsbad, CA hs03043576_m1 και hs99999905_m1) για κάθε αντίδραση. Οι παράμετροι κυκλοποίησης ήταν: ένας κύκλος στους 95 ° C για δέκα λεπτά, ακολουθούμενη από 45 κύκλους των 95 ° C για 15 δευτερόλεπτα, και 60 ° C για ένα λεπτό σε ένα σύστημα StepOne Plus (Applied Biosystems, Carlsbad, CA). Ολες οι αντιδράσεις έτρεξαν σε τεχνικά διπλούν.

Εκχύλιση του συνολικού RNA από φρέσκο ​​κατεψυγμένο ιστό έγινε χρησιμοποιώντας το Qiagen RNeasy Mini Kit (Qiagen, Valencia, CA 74104). Εν συντομία, 10 μm τομές των ΥΧΕ κόπηκαν σε RLT ρυθμιστικό, λύθηκαν χρησιμοποιώντας ένα 20 gauge αμβλύ άκρο της βελόνας και το RNA εκχυλίζεται ακολουθώντας τις οδηγίες του κατασκευαστή χρησιμοποιώντας ένα όγκο έκλουσης 50 ul. qRT-PCR εκτελέστηκε με το One-βήμα qRT-PCR Kit (Life Technologies, Carlsbad, CA 4310299) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή σε ένα συνολικό όγκο 20 υΐ με χρήση 2 μΐ λύματος ιστού και 1 × Survivin ή 1 × GAPDH εκκινητή ( Life Technologies, Carlsbad, CA hs03043576_m1 και hs99999905_m1) για κάθε αντίδραση. Οι συνθήκες του κύκλου που χρησιμοποιήθηκαν ήταν: 1 κύκλος των 50 ° C για 30 λεπτά, 95 ° C για 2 λεπτά, και 50 κύκλοι των 95 ° C για 15 δευτερόλεπτα, 60 ° C για 45 δευτερόλεπτα χρησιμοποιώντας ΑΒΙ Prism 7700 Σύστημα Ανίχνευσης Αλληλουχίας (Applied Biosystems , Carlsbad, CA). Ολες οι αντιδράσεις έτρεξαν σε τεχνικά τριπλούν. οικόπεδα ενίσχυσης για τις δύο κατηγορίες του δείγματος, κυτταρικές σειρές και κατεψυγμένα ιστοί εξετάστηκαν με StepOne λογισμικό, που παρέχεται με το σύστημα StepOne Plus, για να καθοριστεί το όριο κύκλου (CT). GAPDH χρησιμοποιήθηκε για ομαλοποίηση των δεδομένων έκφρασης. Η 2

-ΔCT μέθοδος αυτή χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό survivin φορές έκφρασης σε καρκινικό ιστό και CASE.

Η ανοσοϊστοχημεία

τομές FFPE ανοσοχρώστηκαν να δείξει την έκφραση survivin στα καρκινικά ΑΗΚ και σε συνδυασμό πλακώδη επιθηλιακά δείγματα . Αντιδραστική ανθρώπινης αμυγδαλής και μη-άνοσο ορό έτρεξαν παράλληλα ως θετικός και αρνητικός έλεγχος, αντίστοιχα. Δείγματα ιστών κόπηκαν σε 4 μm πάνω φορτισμένη διαφάνειες και αποπαραφινοποιήθηκαν. Τα πλακίδια βυθίστηκαν σε 0,01% Triton X-100 για δέκα λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου, ξεπλύθηκαν σε βρύσης H

2O, τότε βυθίζεται σε 10 mM κιτρικό ρυθμιστικό, ρΗ 6.0 στους 95 ° C για 20 λεπτά για ανάκτηση αντιγόνου. Κλειδώματος συνέβη κατά 3% H

2O

2 ακολουθούμενο από μια πλύση με νερό της βρύσης. Μετά από τρεις πλύσεις του 1 × Tris ρυθμιστικό αλατούχο διάλυμα με 0,001% Tween20 (TBS-T), οι πλάκες περαιτέρω μπλοκαριστεί σε 2.5% φυσιολογικό ορό αλόγου (Vector Laboratories, Burlingame, CA, MP7401). Η survivin πρωτογενές αντίσωμα (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, sc47750) εφαρμόστηκε σε 1:50, όλη τη νύκτα στους 4 ° C. Τα πλακίδια πλύθηκαν τρεις φορές σε ΤΒδ-Τ, στη συνέχεια επωάζονται σε ImmPress αντιδραστήριο αντι-κουνελιού (Vector Laboratories, Burlingame, CA, MP7401) για 30 λεπτά για να βοηθήσουν στην ανίχνευση της έκφρασης της survivin. Και πάλι, τα πλακίδια πλύθηκαν τρεις φορές σε ΤΒδ-Τ, και αναπτύχθηκε με τη χρήση ImmPact DAB (Vector Laboratories, Burlingame, CA, SK4105).

Στατιστική Ανάλυση

Οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του λογισμικού SPSS (ΙΒΜ, Armonk, NY, έκδοση 20). Η τιμή p & lt? 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική. Μέσα σε κάθε δείγμα ιστού, οι μέσες τιμές των επιπέδων έκφρασης Σουρβιβίνης mRNA (προσδιορίζεται από 2

-ΔCT μέθοδος) αξιολογήθηκαν σε αμφότερα ιστό EAC όγκου (επίπεδο survivin όγκου) και τα δείγματα CASE ιστού (κανονικό επίπεδο survivin). t δοκιμή Student χρησιμοποιήθηκε για να συγκρίνει μέση του όγκου και τα κανονικά επίπεδα survivin. λειτουργούν χαρακτηριστική ανάλυση του δέκτη (ROC) χρησιμοποιήθηκε για να προσδιοριστεί εάν τα επίπεδα survivin θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί για να καθορίσει τις ομάδες υψηλού και χαμηλού κινδύνου για υποτροπή? τα κατώτατα όρια υψηλού κινδύνου /χαμηλού κινδύνου είναι εγκατεστημένοι στο ROC αναλύσεις χρησιμοποιήθηκαν για την κατηγοριοποίηση των ασθενών υψηλού κινδύνου /χαμηλού κινδύνου και για τα δύο επίπεδα survivin ιστού CASE και τα επίπεδα survivin ιστού ΑΗΚ. Ξεχωριστές αναλύσεις ROC διεξήχθησαν πρόβλεψη υποτροπής από τα επίπεδα survivin ΥΠΟΘΕΣΗ ιστού και από τα επίπεδα survivin ιστό της ΑΗΚ. Και στις δύο περιπτώσεις οπτική επιθεώρηση των παραγόμενων γραφικά στοιχεία χρησιμοποιήθηκαν σε συνδυασμό με εισηγμένες Survivin σημεία κοπής βαθμολογίας με αντίστοιχη ευαισθησία και (1 μείον) ειδικότητα, προκειμένου να προσδιοριστεί η βέλτιστη κατώτατα όρια για τον ορισμό των ομάδων υψηλού και χαμηλού ρίσκου.

Όσον αφορά την η διαδικασία ROC για τον προσδιορισμό κατωφλίου, χρησιμοποιήσαμε την κλασική μέθοδο της οπτική επιθεώρηση της καμπύλης για τον προσδιορισμό ότι το σημείο που βρίσκεται πλησιέστερα προς την άνω αριστερή γωνία του σχήματος ROC, μαζί με την επιθεώρηση των αντίστοιχων ευαισθησίας και ειδικότητας τιμές κατά μήκος διαθέσιμες τιμές. Αυτό έδωσε τη δυνατότητα να εξακριβώσουν τα οποία αξίας παρείχε την καλύτερη δυνατή ισορροπία μεταξύ ευαισθησίας και ειδικότητας. Κατά την επιθεώρηση των στοιχείων ROC, ο έλεγχος αυτός ήταν σχετικά απλή για την περίπτωση, όμως ήταν κάπως λιγότερο ξεκάθαρη όσον αφορά τα επίπεδα των καρκινικών κυττάρων. Σε αυτή την περίπτωση, μια τιμή δεν επιλέχθηκε οποία τόνισε την ευαισθησία σε βάρος της ειδικότητα, όπως ψευδώς αρνητικών κρίθηκαν να είναι πιο επικίνδυνο από ό, τι ήταν ψευδώς θετικά. Αυτό στηρίχθηκε περισσότερο σε μεγάλο βαθμό από τις υπολογισμένες τιμές ευαισθησίας /ειδικότητας καθώς υπήρχε μια μη-σημαντική AUC (περιοχή κάτω από την καμπύλη) και ως εκ τούτου δεν είναι οπτικά εμφανές σημείο κοπής.

Καμπύλη Kaplan-Meier δημιουργήθηκε για να προσδιοριστεί η επιβίωση βασίζονται σε υψηλής και ομάδες επανεμφάνιση χαμηλού κινδύνου. Μια Mantel-Cox Σύνδεση Test Rank διεξήχθη προκειμένου να συγκρίνουν τη συνολική επιβίωση μεταξύ των ομάδων υψηλού κινδύνου. Ένα Cox μοντέλο αναλογικών κινδύνων που χρησιμοποιούνται για την αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας του επιπέδου survivin εντός δύο δείγματα CASE και ιστών ΑΗΚ στην πρόβλεψη της θνησιμότητας.

Αποτελέσματα

Η υπερέκφραση της survivin σε κυτταρικές σειρές ΑΗΚ, τα ανθρώπινα όγκου και CASE ιστός

έκφραση Σουρβιβίνης mRNA ήταν σημαντικά υψηλότερη σε δείγματα όγκων συγκριτικά με δείγματα ΥΠΟΘΕΣΗ ιστού επί ανάλυση qRT-PCR (Σχήμα 2Α). Κατά μέσο όρο, τα δείγματα όγκων αποδεικνύεται επίπεδα έκφρασης της survivin 3 × μεγαλύτερη από εκείνη του ιστού CASE (ρ & lt?. 0.00001 Σχήμα 2Β). Ανοσοϊστοχημεία (Σχήμα 3) και ανάλυση Western Blot (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα) επιβεβαίωσε επίσης την έκφραση survivin τόσο όγκου ΑΗΚ καθώς και την υπόθεση

Α:. QRT-PCR πραγματοποιήθηκε για σύγκριση της έκφρασης της survivin μεταξύ του όγκου και των παρακείμενων πλακώδη επιθηλιακά ιστός. Β: Κατά μέσο όρο, τα δείγματα όγκων έδειξε 3 × μεγαλύτερη έκφραση survivin από ζεύγη παρακείμενο ιστό

Η

έκφραση Σουρβιβίνης αξιολογήθηκε μέσω χρώση IHC, ιστό του όγκου και των παρακείμενων πλακώδες επιθήλιο έδειξαν παρουσία χρώση ενδεικτικό της έκφρασης της survivin.. Τα βέλη αντιπροσωπεύουν θετική χρώση.

Η

Η αναστολή της survivin σε κυτταρικές σειρές ΑΗΚ οδήγησε σε αυξημένη απόπτωση

siRNA απευθύνονται σε survivin οδήγησε σε μειωμένη έκφραση της survivin σε OE19 και κυτταρικές σειρές OE33 σύγκριση με τους μάρτυρες επί qRT-PCR (Σχήμα 4Α). Παρομοίως, siRNA επώαση οδήγησε σε μειορύθμιση της έκφρασης της survivin σε αμφότερες τις κυτταρικές γραμμές στην ανάλυση Western Blot. Η μείωση της survivin έκφρασης είχε ως αποτέλεσμα προς τα πάνω ρύθμιση του κατάντη αποπτωτικής πρωτεΐνης, διασπασμένη PARP. Διασπασμένη κασπάση 3 καταναλώθηκε μέσω της αντίδρασης με PARP, με αποτέλεσμα την προς τα πάνω ρύθμιση του διασπασμένης ΡΑΚΡ (Σχήμα 4Β).

κυτταρικές σειρές OE19 και OE33 EAC επιμολύνθηκαν με siRNA και έκφραση survivin αναλύθηκε μεταξύ επιμολυσμένες κυτταρικές γραμμές ελέγχου και. Αμφότερες οι κυτταρικές γραμμές που μορφομετατρέπονται με siRNA έδειξαν σαφή αναστολή και προς τα κάτω ρύθμιση της survivin έκφρασης. Β: Western blot του siRNA αναστολή της survivin σε κυτταρική σειρά ΑΗΚ. siRNA επωάστηκε με κυτταρικές σειρές OE19 και OE33 να αναστέλλουν την έκφραση survivin. β-ακτίνης χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης. Survivin ήταν μειωτικά, ενώ κατάντη πρωτεϊνών αποπτωτικών διασπασμένη κασπάση 3 και διασπασμένη PARP ήταν ρυθμισμένη προς τα πάνω. Η ρύθμιση προς τα πάνω προς τα κάτω αποπτωτικών πρωτεϊνών δείχνει απόπτωση συμβαίνει μέσω της επώασης με siRNA.

Η

Κλινικές επιπτώσεις της survivin υπερέκφραση

Τριάντα επτά ΑΗΚ ασθενείς που υποβλήθηκαν σε οισοφαγεκτομή για τοπική αδενοκαρκινώματος του οισοφάγου συμπεριλήφθηκαν στην μελέτης (Πίνακας 1). Τα δείγματα αποτελούνται τριάντα άνδρες (81%) και επτά γυναίκες (19%) με ηλικίες που κυμαίνονται από 44 έως 90 ετών (μέσος όρος = 62.76, SD = 10,94). διανομής στάδιο της κοόρτης μελέτη βασίζεται στη μεικτή επιτροπή Αμερικής για τον Καρκίνο (AJCC) σταδιοποίηση του καρκίνου επιβεβαίωσε 6 ασθενείς με σταδίου Ι νόσο, 13 με τη φάση ΙΙ και 18 ασθενείς με νόσο σταδίου ΙΙΙ (Πίνακας 2). Επτά ασθενείς έλαβαν θεραπεία με νεο-επικουρική και δεκαοκτώ ασθενείς έλαβαν επικουρική χημειοθεραπεία μετά τη χειρουργική επέμβαση. Δύο ασθενείς στην νεο-επικουρική ομάδα έλαβε ταυτόχρονη χημειο-ακτινοβολία και η πλειονότητα των ασθενών έλαβαν πλατίνα /φθοριοουρακίλη βασίζεται συνδυασμός χημειοθεραπείας (Πίνακας 3). Σε μια μέση παρακολούθηση των 12,06 μήνες, δεκατρείς ασθενείς ανέπτυξαν υποτροπής, 12 ασθενείς με απομακρυσμένη υποτροπή και 1 ασθενής για τις οποίες δεν είχε αναφερθεί δεδομένων. Από τους 12 ασθενείς με απομακρυσμένη υποτροπή, 3 είχαν επίσης τοπική υποτροπή. Δέκα ασθενείς (77%) είχαν πεθάνει κατά τη στιγμή της μακροχρόνιας παρακολούθησης.

Η

Η

ROC ανάλυση έδειξε ότι ένα όριο μεγαλύτερο από ή ίσο με 2,85 για μέση survivin έκφραση mRNA σε περίπτωση ήταν ενδεικτική ενός αυξημένου κινδύνου για την απομακρυσμένη υποτροπή με ευαισθησία 0,77, ειδικότητα 0,83, και AUC 0,73 (p & lt?. .05 PPV = 0,71, NPV = 0,87) (Σχήμα 5). Έτσι, οι ασθενείς που εμφανίζουν μέση survivin έκφρασης των 2,85 ή μεγαλύτερο σε περίπτωση που ταξινομήθηκαν στην ομάδα υψηλού κινδύνου και τα άτομα με επίπεδα έκφρασης λιγότερο από 2,85 ταξινομήθηκαν στην ομάδα χαμηλού κινδύνου. Παρά τη φυσιολογική ιστολογική εμφάνιση, survivin υπερέκφραση σε περίπτωση που αποδειχθεί ότι είναι ένας δείκτης των μακρινών υποτροπής. Survivin έκφρασης σε ιστό του όγκου δεν σχετίζεται με την υποτροπή. Κατηγοριοποίηση σε ομάδες υψηλού και χαμηλού κινδύνου με βάση ένα κατώτατο όριο

όγκου

survivin έκφρασης του 3,66 δεν προέβλεψαν υποτροπής (p = 0.55), αλλά είχε προβλέψει αύξηση των πιθανοτήτων θανάτου από την ΑΗΚ (περιγράφεται στη συνέχεια).

Η πιθανότητα για απομακρυσμένη υποτροπή καθορίστηκε για τα επίπεδα survivin σε ανθρώπινους όγκους της ΑΗΚ και των παρακείμενων πλακώδη επιθηλιακού ιστού. Ένα αυξημένο επίπεδο survivin σε παρακείμενες πλακώδη επιθηλιακού ιστού προσδιορίστηκε να είναι ένας παράγοντας κινδύνου για την απομακρυσμένη υποτροπή (p = 0.02).

Η

Οι καμπύλες επιβίωσης Kaplan-Meier δημιουργήθηκαν για τις ομάδες υψηλού και χαμηλού κινδύνου με βάση την υπόθεση survivin έκφρασης. Η ομάδα υψηλού κινδύνου κατέδειξε μια ένωση με αυξημένη θνησιμότητα, αν και ο συσχετισμός δεν έφθασε σημασία (ρ = 0,12, Σχήμα 6). Η ανάλυση Kaplan-Meier για survivin όγκου ομάδες υψηλού και χαμηλού κινδύνου απέδωσε παρόμοια αποτελέσματα (p = 0.11).

Οι καμπύλες επιβίωσης Kaplan-Meier δημιουργήθηκαν για τις ομάδες υψηλού και χαμηλού κινδύνου που βασίζεται σε παρακείμενες πλακώδες έκφραση CASE επιθηλιακά survivin. Η ομάδα υψηλού κινδύνου κατέδειξε μια ένωση με αυξημένη θνησιμότητα, αν και ο συσχετισμός δεν έφθασε σημασία. Η ανάλυση Kaplan-Meier για survivin όγκου ομάδες υψηλού και χαμηλού κινδύνου απέδωσε παρόμοια αποτελέσματα (p = 0.11).

Η

Ένα Cox μοντέλο αναλογικών κινδύνων που χρησιμοποιούνται για την αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας του επιπέδου survivin εντός δύο περιπτώσεις και όγκου της ΑΗΚ δείγματα ιστού στην πρόβλεψη της θνησιμότητας. Άλλοι παράγοντες κινδύνου εξετάστηκαν ήταν ηλικία κατά τη στιγμή της οισοφαγεκτομή, η χρήση του καπνού (σε συσκευασία ανά έτη), η κατανάλωση αλκοόλ, και το ιστορικό του οισοφάγου Barrett (Πίνακας 4). Το κάπνισμα συσχετίστηκε με υψηλότερο ποσοστό θανάτου (p = 0.06) με τις πιθανότητες θνησιμότητας είναι 1.018 μεγαλύτερος για κάθε πακέτο ετησίως καπνίσει. έκφραση survivin σε καρκινικό ιστό συσχετίστηκε με αυξημένο κίνδυνο θανάτου (p = 0.05). Η πιθανότητα ενός ασθενή στην ομάδα survivin όγκου υψηλού κινδύνου που αντιμετωπίζουν θανάτου ήταν 5,23 φορές μεγαλύτερη από εκείνη του ασθενούς κατηγοριοποιούνται στην ομάδα χαμηλού κινδύνου (p & lt? .05)

Η

Συζήτηση

.

οι μελέτες έχουν δείξει υψηλότερα επίπεδα survivin σε μεταπλαστικών κυλινδρικό επιθήλιο και επιθήλιο δυσπλαστικών Barrett σε σύγκριση με πλακώδη ιστό ενισχύοντας έτσι την υπόθεση ότι η προς τα πάνω ρύθμιση του γονιδίου αυτού είναι πιθανό ένα πρώιμο συμβάν που προηγείται ανάπτυξη αδενοκαρκινώματος [12]. Οι εκθέσεις έχουν υποστηρίξει επίσης survivin ως πιθανή βιοδείκτη σε οισοφαγικό καρκίνωμα των πλακωδών κυττάρων [28], αλλά υπάρχουν αντικρουόμενα στοιχεία σχετικά με προγνωστική το ρόλο της στην οισοφαγικού αδενοκαρκινώματος [29]. Σε μια μελέτη από Rosato και οι συνεργάτες του, η έκφραση survivin δεν είχαν προγνωστική αξία για τους ασθενείς με την ΑΗΚ. [9] Ο στόχος της παρούσας μελέτης ήταν να αξιολογηθεί ο ρόλος αυτού του αντι-αποπτωτικό γονίδιο σε μεγαλύτερο βάθος σε οισοφαγικό αδενοκαρκίνωμα και CASE λαμβάνοντας υπόψη την ετερογένεια όγκου όπως επίσης και την έκφραση των γενετικών αλλαγών πριν από την ιστολογική εκδήλωση του φαινοτύπου του όγκου σε παρακείμενες επιθήλιο .

Ανάλυση του ανθρώπινου ιστού χρησιμοποιώντας IHC, κηλίδος Western, και qRT-PCR επιβεβαίωσε αυξητική ρύθμιση της survivin σε καρκινικό ιστό της ΑΗΚ σε σχέση με την υπόθεση. Τα αποτελέσματά μας διαπιστωθεί ότι αυξημένη έκφραση survivin σε καρκινικό ιστό ΑΗΚ είναι ένας παράγοντας κινδύνου για θάνατο με την ομάδα survivin όγκων υψηλού κινδύνου είναι 5 φορές πιο πιθανό να πεθάνουν από εκείνα που κατηγοριοποιούνται στην ομάδα survivin χαμηλού κινδύνου. Είναι πιθανό ότι η υψηλότερη έκφραση μέσα στον ιστό του όγκου ΑΗΚ μπορεί να αφορά την επιθετικότητα του όγκου (δηλαδή, επιδείνωση κυτταρική απορύθμιση), ως εκ τούτου συσχετίζεται με τη θνησιμότητα. Ωστόσο, με βάση το μέγεθος του δείγματος μας, αυτή η μελέτη είναι πιθανό μικρής ισχύος και ότι θα απαιτηθούν μεγαλύτερες σειρές ασθενών να μελετήσει περαιτέρω αυτές τις ενώσεις.

Επιπλέον, η έκφραση της survivin σε περίπτωση που δεν ήταν εντελώς απούσα, όπως θα αναμενόταν για τελικά διαφοροποιημένη φυσιολογικό πλακώδες επιθήλιο [10], [11]. Λαμβάνοντας υπόψη στοιχεία που αποδεικνύουν προς τα πάνω ρύθμιση αυτού του γονιδίου σε προ-κακοήθη μεταπλαστικού και των δυσπλαστικών κυλινδρικό επιθήλιο, τα στοιχεία μας δείχνουν ότι η survivin υπερέκφραση μπορεί να είναι ένα πρώιμο γενετικό γεγονός που συνέβη σε ιστολογικά φυσιολογικό να εμφανίζονται πλακώδες επιθήλιο πριν από την ανάπτυξη των μεταπλασία και μετατροπή σε αδενοκαρκίνωμα. Αν και ο βλεννογόνος πλησίον του όγκου διατηρεί πλακώδους διαφοροποίησης, φιλοξενεί υπερέκφραση αυτής της αντι-αποπτωτικής γονίδιο που θα μπορούσε να είναι ένας πιθανός οδηγός της ογκογένεσης. Εναλλακτικά, θα μπορούσε να υποτεθεί ότι με βάση τη συσχέτιση με υποτροπή, survivin έκφρασης στην περίπτωση που θα μπορούσε να θεωρηθεί ως το μοριακό ισοδύναμο ενός θετικού περιθωρίου ή /και προγνωστικός δείκτης των μακρινών υποτροπής. Εάν τα αυξημένα επίπεδα survivin στην υπόθεση αντιπροσωπεύει μοριακή απόδειξη ότι παρακείμενο ιστό δείχνει σημάδια της κακοήθειας, η πρόγνωση μπορεί να είναι χειρότερο από ότι προβλέπεται από το σύστημα ταξινόμησης pTNM. Θα μπορούσε να υποτεθεί ότι το γεγονός ότι δεν υπήρξε αύξηση της θνησιμότητας σε ασθενείς με αυξημένα επίπεδα survivin στην υπόθεση θα μπορούσε να αντιπροσωπεύει ένα σφάλμα τύπου II δευτερεύον του μικρού μεγέθους του δείγματος. Μεγαλύτερες μελέτες μπορεί να συμβάλει στην αποσαφήνιση αυτών των ενώσεων

Το γεγονός ότι survivin έκφρασης στον όγκο δεν σχετίζεται με την υποτροπή θα μπορούσε να είναι από το γεγονός ότι αυτοί οι ασθενείς είχαν πεθάνει πριν θα μπορούσε να τεκμηριωθεί υποτροπή.? Αυτή η υπόθεση υποστηρίζεται από το γεγονός ότι υπήρχαν περισσότερες ασθενείς με προχωρημένη νόσο στάδιο στην ομάδα έκφραση όγκου υψηλού κινδύνου. Επιπλέον, όπως αποδεικνύεται από προηγούμενες μελέτες, κάθε όγκου επιδεικνύει σημαντική ετερογένεια με παραλλαγές ενδο-όγκου σε σωματικές μεταλλάξεις, αλληλικές σύνθεση, ογκοκατασταλτικό και ογκογόνο απορύθμιση [30]. Η επικράτηση των πολλαπλών μοναδικών κλώνων σε ιστό δείγμα όγκου μπορεί να οδηγήσει σε αντιφατικά αποτελέσματα κατά την εκτέλεση μοριακό προφίλ ενός συγκεκριμένου καρκίνου. Στην παρούσα μελέτη, φορές αλλαγή της mRNA της survivin ήταν εξαιρετικά μεταβλητή στον ιστό του όγκου σε σύγκριση με CASE, και αυτό μπορεί να αντανακλά την ετερογένεια του όγκου και να προσφέρει μια πιθανή εξήγηση για την έλλειψη συσχετισμού με υποτροπή του όγκου. ΥΠΟΘΕΣΗ αποδειχθεί πιο συνεπή επίπεδα και είναι ίσως ένα καλύτερο υπόστρωμα για την αξιολόγηση της survivin ως προγνωστικός δείκτης σε ασθενείς με την ΑΗΚ. Τα στοιχεία αυτά υπογραμμίζουν την ανάγκη για μια συντονισμένη προσπάθεια για την τράπεζα και να αναλύσει τον καρκίνο δίπλα ιστολογικά φυσιολογικό να εμφανίζονται ιστού για μοριακή ανάλυση σε ΑΗΚ και ίσως άλλων όγκων.

Ανάλυση γραμμή κυττάρων στην παρούσα μελέτη επιβεβαίωσε σαφή αναστολή της survivin μέσω επιμόλυνσης με siRNA. Survivin ήταν αποτελεσματικά μειωτικά και διασπασμένη κασπάση 3 καταναλώθηκε στην αντίδραση που οδηγεί σε προς τα πάνω ρύθμιση του διασπασμένης ΡΑΚΡ, υποδεικνύοντας ότι η αναστολή με survivin οδηγεί στην ενεργοποίηση του αποπτωτικού μονοπατιού. Καθώς survivin δεν εκφράζεται σε φυσιολογικό ιστό, είναι πιθανώς ένας ιδανικός στόχος για νέους παράγοντες [10], [11]. Ως εκ τούτου, η αποτελεσματική αναστολή μέσω siRNA με κατάντη ενεργοποίηση της απόπτωσης υποστηρίζει την εγκυρότητα των μελλοντικών κλινικών δοκιμών στην ΑΗΚ αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας ενός νέου μέσου που χρησιμοποιεί siRNA ή άλλων ανασταλτικών οδών [10].

Εν κατακλείδι οι παρούσες υποστηρίζει μελέτη προς τα πάνω ρύθμιση της survivin ως πιθανή πρόωρη γενετική αλλαγή στην ΑΗΚ που συμβαίνουν στην κανονική εμφάνιση CASE. έκφραση survivin μέσα ΑΗΚ ιστού ήταν σημαντικός προγνωστικός δείκτης θνησιμότητας, ενώ το επίπεδο έκφρασης της survivin σε περίπτωση που ήταν πιο αξιόπιστος προγνωστικός δείκτης της υποτροπής του όγκου. Επιπλέον αποδείξαμε επίσης ότι η αναστολή της survivin σε κυτταρικές σειρές ΑΗΚ οδηγεί σε προς τα πάνω ρύθμιση της απόπτωσης που υποστηρίζουν την περαιτέρω αξιολόγηση των θεραπευτικών στρατηγικών απευθύνονται σε αυτό το δείκτη.

Οι περιορισμοί της μελέτης περιλαμβάνουν το μικρό μέγεθος του δείγματος και μια σχετικά μικρότερη διάρκεια της ακολουθω. Περαιτέρω μελέτες με μεγαλύτερα μεγέθη δειγμάτων και πλέον παρακολούθηση μπορεί να βοηθήσει στην αποσαφήνιση ορισμένων από τις ενώσεις σημειωθεί σε μελέτες σχετικά με survivin έκφρασης στην ΑΗΚ και στην υπόθεση. Αυτό θα βοηθήσει επίσης τον έλεγχο για περισσότερες παράγοντες που επηρεάζουν την επανάληψη και την επιβίωση σε ασθενείς με την ΑΗΚ.

Ευχαριστίες

Ο Δρ. James D. Luketich για την υποστήριξή του από τη μελέτη.