Abstract

Belinostat είναι ένας αναστολέας υδροξαμική HDAC κατηγορίας που έχει επιδείξει δραστικότητα στο περιφερικό λέμφωμα Τ-κυττάρων και υποβάλλεται σε κλινικές δοκιμές για μη-αιματολογικές κακοήθειες. Μελετήσαμε τις φαρμακοκινητικές ιδιότητες της belinostat σε ασθενείς με ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα για να προσδιοριστεί η κύρια οδός μεταβολισμού της belinostat. Οι φαρμακοκινητικές ιδιότητες της belinostat σε ασθενείς με καρκίνο του ήπατος που χαρακτηρίζεται από ταχεία κάθαρση από το πλάσμα του belinostat με εκτεταμένο μεταβολισμό με περισσότερες από 4 φορές μεγαλύτερη σε σχέση με τη συστηματική έκθεση του κύριου μεταβολίτη, belinostat γλυκουρονίδιο από εκείνη της belinostat. Υπήρξε σημαντική διατομική μεταβλητότητα των belinostat γλυκουρονιδίωση. Η κύρια οδός μεταβολισμού περιλαμβάνει γλυκουρονιδίωση μέσω του UGT1A1 και μια καλή συσχέτιση έχει εντοπιστεί μεταξύ του σχηματισμού belinostat γλυκουρονίδιο και γλυκουρονιδίωση γνωστών υποστρωμάτων UGT1A1. Επιπλέον, ηπατικά μιτοχόνδρια υπόθαλψη UGT1A1 * 28 αλληλόμορφα έχουν χαμηλότερη δραστηριότητα γλυκουρονιδίωση για belinostat σε σύγκριση με εκείνους με άγριου τύπου UGT1A1. Η κύρια μεταβολική οδός της belinostat είναι μέσω γλυκουρονιδίωσης διαμεσολαβείται κυρίως από UGT1A1, μια ιδιαίτερα πολυμορφικό ένζυμο. Η κλινική σημασία αυτού του ευρήματος παραμένει να καθοριστεί

Δίκη ΕΓΓΡΑΦΕΣ

ClinicalTrials.gov NCT00321594

Παράθεση:. Wang LZ, Ramírez J, Yeo W, Chan Μ-ΥΜ , Thuya WL, Lau J-YA, et al. (2013) γλυκουρονιδίωσης από UGT1A1 είναι το κυρίαρχο Διαδρομή του Μεταβολικού Διάθεση Belinostat σε ήπατος ασθενείς με καρκίνο. PLoS ONE 8 (1): e54522. doi: 10.1371 /journal.pone.0054522

Επιμέλεια: Γιάννης Luk, Johnson & amp? Johnson Medical, Κίνα

Ελήφθη: 2, Αυγ 2012? Αποδεκτές: 12, Δεκ, 2012? Δημοσιεύθηκε: 30, Ιαν 2013

Copyright: © 2013 Wang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Η μελέτη χρηματοδοτήθηκε από το Εθνικό Ίδρυμα Ερευνών της Σιγκαπούρης (Experimental Therapeutics Program) και το Εθνικό Συμβούλιο Ιατρικής Έρευνας της Σιγκαπούρης (NMRC /CSA /021/2010). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα. Παρακαλείστε να σημειώσετε ότι belinostat είναι ένα προϊόν TopoTarget. Αυτό δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων σε όλες τις PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών.

Εισαγωγή

δεακετυλάσης αναστολείς

ιστόνης (HDACis) έχει αποδειχθεί ότι έχει αντικαρκινική δράση στα κακοήθη κύτταρα μέσω ακετυλίωση των πρωτεϊνών τόσο ιστόνης και μη-ιστόνης. Η ακετυλίωση των ιστονών διαμεσολαβεί διαμόρφωση επιγενετική των γονιδίων που μπορεί να διεγείρει απόπτωση, αναστέλλουν την κυτταρική ανάπτυξη και να μειώσει νεοαγγειογένεσης [1] – [7]. Αρκετές HDACis έχουν εγκριθεί για τη θεραπεία του περιφερικού ή δερματικό Τ-κυτταρικό λέμφωμα [8] – [10]

Belinostat είναι ένα παν-ιστόνης αναστολέα με βάση υδροξαμικό οξύ αποακετυλάσης στην κλινική ανάπτυξη ως αντικαρκινική θεραπεία in. μια σειρά αιματολογικών και στερεές κακοήθειες, τόσο ως μονοθεραπεία όσο και θεραπείες συνδυασμού [11] – [18]. Επί του παρόντος belinostat έχει χορηγηθεί fast track και χαρακτηρισμός ορφανού φαρμάκου από την Αμερικανική Υπηρεσία Τροφίμων και Φαρμάκων για τη θεραπεία της υποτροπιάζουσα ή ανθεκτική περιφερικών Τ-κυτταρικό λέμφωμα. Αν και κλινικά το φάρμακο έχει σχετικά καλά ανεκτή, οι συχνές ανεπιθύμητες ενέργειες που περιλαμβάνονται κόπωση, ναυτία και έμετο, και λήθαργο, φθάνοντας βαθμού 3 στη μέγιστη ανεκτή δόση των 1200 mg /m

2 δίδεται στο 30 λεπτό (min) εγχύσεις για 5 διαδοχικές ημέρες κάθε 3 εβδομάδες. Belinostat είναι διαθέσιμο σε δύο στόματος και ενδοφλέβια σκευάσματα, και καθώς το φάρμακο αναμένεται να χορηγηθούν σε χρόνια βάση, είναι πιθανή αθροιστική τοξικότητα. Ως εκ τούτου, θα ήταν σημαντικό να προσδιοριστεί το μεταβολισμό της belinostat, να κατανοήσουν του

in vivo

διάθεση. Μέχρι σήμερα, πολύ λίγα είναι γνωστά για τις μεταβολικές οδούς της belinostat

Άλλα μέλη των αναστολέων HDAC κατηγορίας υδροξαμικό οξύ, όπως vorinostat και panobinostat υποβάλλονται σε πρωτογενή μεταβολισμό μέσω γλυκουρονιδίωσης [19] – [21].. Από την άλλη πλευρά, romidepsin, ένα κυκλικό αναστολέα HDAC κατηγορίας τετραπεπτίδιο, υφίσταται μεταβολισμό κυρίως από το CYP3A4 [22]. Ως εκ τούτου, υποθέσαμε ότι γλυκουρονιδίωση θα ήταν η κύρια οδός για το μεταβολισμό του belinostat. Επιπλέον, πολλές ισομορφές γλυκουρονοσυλ τρανσφεράσης είναι ιδιαίτερα πολυμορφικές και λειτουργία των επιπτώσεων, για παράδειγμα, ομόζυγη διαγραφή του αλληλόμορφα UGT2B17 (UGT2B17 * 2) καταλήγει σε διαταραχές στο μεταβολισμό του vorinostat [23]. Κατά συνέπεια, θα ήταν σημαντικό να αναγνωρίσετε το βασικό μεταβολισμό του φαρμάκου ισομορφή belinostat, για να κατανοήσουν καλύτερα την επιρροή της φαρμακογενετικής στην διατομική μεταβλητότητα των φαρμακοδυναμική belinostat. Αυτό παρέχει επίσης καθοδήγηση για περαιτέρω μελέτες αλληλεπίδρασης.

Σε αυτή τη μελέτη, μελετήσαμε τη φαρμακοκινητική της belinostat και προσδιορίζονται οι μεταβολίτες του με βάση τα φάσματα μάζας και μέγιστη απορρόφηση UV. Έχουμε προσδιορίσει το κυρίαρχο μεταβολίτη της belinostat ως belinostat γλυκουρονίδιο, και περαιτέρω μελέτησε την γλυκουρονιδίωση της belinostat χρησιμοποιώντας ένα πάνελ UGT ισοενζύμων και τα ανθρώπινα ηπατικά μιτοχόνδρια, για να προσδιοριστεί η κύρια ισομορφή υπεύθυνο για το μεταβολισμό της. Τέλος, το δυναμικό φαρμακογενετική επιρροή στη φαρμακοδυναμική της belinostat εξερευνήθηκε

Υλικά και Μέθοδοι

Το πρωτόκολλο για τη δοκιμή αυτή είναι διαθέσιμη ως υποστηρικτικές πληροφορίες.? βλέπε πρωτόκολλο S1.

Αντιδραστήρια

Belinostat (PXD101) ήταν ένα δώρο από το National Cancer Institute (Bethesda, MD, USA). Belinostat γλυκουρονίδιο (belinostat-G) ήταν χρωματογραφικώς διαχωρίστηκε με HPLC-UV και απομονώνεται από το ανθρώπινο πλάσμα χρησιμοποιώντας ένα συλλέκτη κλάσματος. χημική δομή και η καθαρότητα του έχει επαληθευτεί μέσω LC-MS /MS (API 4000 φασματόμετρο μάζας τριπλού τετραπόλου? ΑΒ Sciex, Concord, Καναδάς) και την ανάλυση HPLC-UV. Vorinostat γλυκουρονίδιο (vorinostat-G), το εσωτερικό πρότυπο, ήταν ένα δώρο από την Merck Sharp & amp? Dohme (ΙΑ) Corp. ακετονιτρίλιο (καθαρότητας HPLC), μεθανόλη (καθαρότητας HPLC), αιθανόλη (αναλυτικής καθαρότητας), μυρμηκικό οξύ (αναλυτικής καθαρότητας), διένυδρο όξινο φωσφορικό δι-νάτριο (Na

2HPO

4.2H

2O) και ορθοφωσφορικού οξέος (85%) ελήφθησαν από την Merck (Darmstadt, Γερμανία). Απευθείας QTM νερό (Millipore Milford, ΜΑ, USA) χρησιμοποιήθηκε για την παρασκευή κινητή φάση. Ανθρώπινα UGT υπερσωμάτια και UGT Αντιδράσεως-διαλύματα Α και Β αγοράστηκαν από BD Gentest (San Jose, CA, USA). Αυτά είναι cDNA εκφράζεται UGTs και ένα πάνελ 12 (UGT1A1, UGT1A3, UGT1A4, UGT1A6, UGT1A7, UGT1A8, UGT1A9, UGT1A10, UGT2B4, UGT2B7, UGT2B15, UGT2B17) χρησιμοποιήθηκε.

ανθρώπινο ηπατικό μικρόσωμα Προετοιμασία

Ανθρώπινο συκώτια από 37 κανονικές Καυκάσου δότες υποβάλλονται σε επεξεργασία στο εργαστήριο του Δρ Μαίρη Relling του στο Νοσοκομείο του ST Jude Children Ερευνών (Memphis, TN, USA) και παρέχονται από το Σύστημα ήπατος ιστών Προμηθειών και διανομής (που χρηματοδοτείται από # N01- DK-9-2310) και από τη Συνεργατική Ανθρώπινο Δίκτυο ιστών. Τα 37 ανθρώπινα μικροσώματα ήπατος (HLM) απομονώθηκαν από διαφορετικές συκώτι δείγμα χωρίς συσχέτιση μεταξύ τους. Μικροσώματα παρασκευάστηκαν με διαφορική φυγοκέντρηση.

Μελέτη Κοόρτεις

Αυτή η πολυκεντρική δοκιμή φάσης Ι της belinostat έγινε στο Χονγκ Κονγκ και τη Σιγκαπούρη. Όλοι οι ασθενείς παρέχεται γραπτή συγκατάθεση σύμφωνα με την ορθή κατευθυντήριες οδηγίες κλινικής πρακτικής, και το πρωτόκολλο εγκρίθηκε από τα θεσμικά διοικητικά συμβούλια αναθεώρηση του Prince of Wales Hospital, το Χονγκ Κονγκ και το Εθνικό Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο, Σιγκαπούρη. Δεκαεπτά ασθενείς έλαβαν θεραπεία με belinostat σε κλιμακούμενες δόσεις του 600 (n = 3), 900 (η = 3), 1200 (n = 6), 1400 (n = 5) mg /m

2 ημερησίως με ενδοφλέβια (IV) έγχυση επί 30 λεπτά για 5 ημέρες κάθε 21 ημέρες.

φαρμακοκινητική εκτίμηση

δείγματα αίματος συλλέχθηκαν σε προκαθορισμένα χρονικά σημεία δειγματοληψίας την ημέρα 1 σε προ-δόση, 15 λεπτά, 30 λεπτά, 45 λεπτά, 1 ώρα (h), 1,5 ώρα, 2 ώρες, 3 ώρες, 5 ώρες και 24 ώρες postinfusion και ημέρα 5 σε προ-δόση, 30 λεπτά, 1 ώρα, 1,5 ώρες, 3 ώρες, 5 ώρες postinfusion και την ημέρα 22 μετά την έναρξη της 30 λεπτά iv έγχυση σε μια κλινική δοκιμή Φάσης Ι των belinostat. Δείγματα φλεβικού αίματος είχαν συλλεχθεί σε σωλήνες με ηπαρίνη. Συνολικές δείγματα αίματος φυγοκεντρήθηκαν στα 3000 g για 10-15 λεπτά και το πλάσμα (υπερκείμενο) διαχωρίζεται από το κυτταρικό ίζημα και αποθηκεύεται σε χαλκοσωλήνες στους -80 ° C μέχρι την ανάλυση. Οι συγκεντρώσεις των belinostat και belinostat γλυκουρονίδιο ποσοτικοποιήθηκαν με ένα τροποποιημένο υψηλής απόδοσης υγρή χρωματογραφία μέθοδος /φασματομετρίας μάζας [24]. Εν συντομία, vorinostat-G χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικό πρότυπο για belinostat-G. Το φασματόμετρο μάζας λειτούργησε σε κατάσταση θετικού ιόντος με τις βέλτιστες μάζα μεταβάσεις του belinostat-G:

m /z

495 & gt? 93 και vorinostat-G:

m /z

441 & gt? 232, αντίστοιχα . Η αναλυτική μέθοδος ήταν καλά επικυρωμένη με καλή γραμμικότητα (συντελεστής προσδιορισμού, r

2≥0.999) στην περιοχή των 1-100 μΜ για belinostat-G.

Αναγνώριση Belinostat μεταβολιτών και Απομόνωση Belinostat- G

διαλογής μεταβολιτών σε δείγματα ασθενών υποβλήθηκε σε επεξεργασία με HPLC-UV στα 268 nm, το μέγιστο μήκος κύματος απορρόφησης του belinostat. Baseline διαχωρισμός όλων των αναλυτών επιτεύχθηκε σε

18 (× 2,1 χιλιοστά, 5 μm 150 mm) στήλη του Alltima C. Κινητή φάση Α διαλύτης ήταν 20 mM Na

2HPO

4 (ρΗ 4,2, ρυθμίζεται με ορθοφωσφορικό οξύ), η κινητή φάση διαλύτης Β αποτελείται από 70% ακετονιτρίλιο και 30% μεθανόλη (ν /ν). Μία βαθμίδωση πρόγραμμα κινητή φάση χρησιμοποιήθηκε – αρχική ποσοστό διαλύτη Α ήταν 75% (ν /ν) και εκείνη του διαλύτη Β ήταν 25% (ν /ν)? ποσοστό του διαλύτη Β αυξήθηκε σε 95% (ν /ν) επί 13 λεπτά και αμέσως επανέρχεται στο 25% (v /v) για 7 λεπτά πριν την έγχυση του επόμενου δείγματος. Συνολικός χρόνος λειτουργίας του κάθε δείγματος ήταν 25 λεπτά. Ο ρυθμός ροής διατηρήθηκε στο 0,5 mL /min.

Οι πιθανοί μεταβολίτες belinostat περαιτέρω επαληθεύονται με ένα φασματόμετρο μάζας εν σειρά στο Q1, το προϊόν και πρόδρομος σαρώσεις. Η απομόνωση και ο καθαρισμός του κύριου μεταβολίτη της belinostat διεξήχθη σε Nova-Pak 3,9 × 300 mm στήλη C18 (Waters, Ιρλανδία), χρησιμοποιώντας 20 mM ρυθμιστικό οξικού αμμωνίου (ρΗ 5,0) και 100% μεθανόλη σε μία αρχική σύνθεση κινητής φάσης του 60% :40% (ν /ν) με ρυθμό ροής 0.6 κ.εκ. /λεπτό. Η μεθανόλη αυξήθηκε σε 95% επί 10 λεπτά και αμέσως επανέρχεται στο 40% για 6 λεπτά πριν από την επόμενη ένεση. β-γλυκουρονιδάσης υδρόλυση και φασματομετρία μάζας (τόσο σε θετικό και αρνητικό τρόπο) για να εκτιμηθεί η καθαρότητα και ταυτότητα του κύριου μεταβολίτη.

Όξινο Δοκιμή σταθερότητας για Belinostat-G

1 mg /mL του belinostat -G και vorinostat-G παρασκευάστηκε σε διάφορα οχήματα με διαφορετικές τιμές pH. Τα οχήματα αυτά συμπεριλαμβάνονται 10 mM οξικό αμμώνιο (ρΗ = 6.5), 10 mM μυρμηκικού αμμωνίου (ρΗ = 6,0), 0,1% οξικό οξύ (ρΗ = 3,2) και 0,1% μυρμηκικό οξύ (ρΗ = 2.6). Όλα αυτά τα δείγματα δοκιμής επωάστηκαν στους 37 ° C για 24 ώρες. Milli Q νερό (ρΗ = 5.5) χρησιμοποιήθηκε ως διάλυμα ελέγχου που αποθηκεύτηκε σε -20 ° C. Όλα τα δείγματα αναλύθηκαν με LC-MS /MS για να ληφθούν οι τιμές των εμβαδών των κορυφών των belinostat-G και vorinostat-G. Το όξινο σταθερότητα των δύο συζευγμένων ενώσεων αξιολογήθηκε μέσω της σύγκρισης της κορυφής αναλογία περιοχής των δειγμάτων σε σχέση με τον έλεγχο.

In Vitro

Ισχύς αξιολόγησης για Belinostat και Belinostat-G

Για να προσδιορισμό της παρουσίας ή απουσίας του δοσοεξαρτώμενη δραστικότητα belinostat και belinostat-G κατά ηπατοκυτταρικό καρκίνο, κύτταρα ανθρώπινου ηπατοκυτταρικού καρκινώματος ήπατος (HepG2) σπάρθηκαν σε δύο πλάκες 24 φρεατίων σε 10000 κύτταρα ανά φρεάτιο. Για μία πλάκα, 5 διαφορετικές συγκεντρώσεις belinostat προστέθηκαν για να ληφθεί 2 επαναλήψεις ανά συγκέντρωση (0.1, 0.5, 1, 2, 5, 10 μΜ). Για την άλλη πλάκα, ίσες γραμμομοριακές συγκεντρώσεις belinostat-G προστέθηκαν παρομοίως. Μετά από 72 ώρες, τα κύτταρα χρωματίστηκαν με γεντιανή Violet βαφής (0,5% w /v? Β.Ρ.) και αξιολογήθηκαν για βιωσιμότητα. Περαιτέρω, οι ευαισθησίες των HepG2 να belinostat και belinostat-G ποσοτικά μετρήθηκε χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία MTS. Εν συντομία, τα κύτταρα HepG2 σπάρθηκαν σε πλάκες 96 φρεατίων σε 3000 κύτταρα /φρεάτιο σε επεξεργασία με επτά διαφορετικές δόσεις belinostat ή belinostat-G και στη συνέχεια αξιολογούνται για την αναστολή της ανάπτυξης με Promega CellTiter 96® ΑΟ

ueous μη ραδιενεργά Δοκιμασία Κυτταρικού Πολλαπλασιασμού . Μετά από επώαση 24 h, διάλυμα φαρμάκου 100 μL ή κενό μέσο προστέθηκε σε κάθε φρεάτιο πλακών 96 φρεατίων. 72 ώρες αργότερα, 20 μί του MTS /PES προστέθηκαν σε κάθε φρεάτιο για επώαση για 3 ώρες. Οι τιμές OD μετρήθηκε σε μήκος κύματος 490 nm. αναστολή της ανάπτυξης των κυττάρων υπολογίστηκε με βάση τις μονάδες φωταύγειας με αφαίρεση του υποβάθρου ανάγνωσης για τα φρεάτια μόνο μέσο που περιέχει. Η αναστολή ανάπτυξης ορίζεται ως το ποσοστό του μέσου όρου φωταύγειας μονάδες από φρεάτια με φάρμακο αγωγή εκείνου που προέρχεται από φρεάτια ελέγχου χωρίς θεραπεία. Το πείραμα έγινε εις τριπλούν. IC

50 τιμές υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας λογισμικό GraphPad PRISM (GraphPad Software, Inc., La Jolla, CA, USA).

Western Blotting

Για ανάλυση κηλίδος Western, τα κύτταρα HepG2 αγωγή με belinostat συλλέχθηκαν και λύθηκαν σε ρυθμιστικό διάλυμα κυτταρικής λύσης που περιέχει 50 mM Tris HCl, ρΗ 7,4, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1% Triton Χ-100 (Sigma-Aldrich) και το κοκτέιλ αναστολέα πρωτεάσης (Roche). Οι πρωτεϊνικές συγκεντρώσεις ποσοτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας την δοκιμασία Bradford (Invitrogen). Οι πρωτεΐνες διαχωρίστηκαν σε πήκτωμα 12% SDS-PAGE και μεταφέρθηκαν σε μεμβράνη νιτροκυτταρίνης. Η μη ειδική πρωτεΐνη σύνδεση παρεμποδίστηκε με επώαση με 5% άπαχο γάλα (BioRad Laboratories) σε 0.1% PBS-Tween (PBST) σε θερμοκρασία δωματίου για 1 ώρα και επωάστηκε με ειδικά αντισώματα, ιστόνη Η3 και Ac-Η3 [K9 /Κ14] (κυτταρική σηματοδότηση), στους 4 ° C όλη τη νύκτα. Στη συνέχεια προστέθηκαν και επωάστηκαν σε θερμοκρασία δωματίου για 1 ώρα που ακολουθείται από ανίχνευση χρησιμοποιώντας ένα ενισχυμένο κιτ χημειοφωταύγειας (GE Healthcare) κατάλληλο είδος-ειδική αρμορακίας peroxidises-συζευγμένα δευτερογενή αντισώματα.

Διαλογή 12 Ανθρώπινη UGT υπερσωμάτια και Κινητική Ανάλυση

Ένα τυπικό επώαση αποτελούνταν από 50 μg του UGT, 2 mM UDPGA (UGT Αντίδραση διάλυμα Α), 50 mM Tris-HCl, 8 mM MgCl

2 και 0,025 mg /ml αλαμεθικίνη (UGT Αντίδραση διάλυμα Β) σε τελικό όγκο επώασης 100 μL. Πριν από την προσθήκη του υποστρώματος, το μίγμα επώασης προθερμασμένο και εξισορροπήθηκε για 5 λεπτά στους 37 ° C. Οι αντιδράσεις ξεκίνησαν με προσθήκη διαλύματος belinostat 10 μΜ σε DMSO και επωάστηκαν στους 37 ° C για 30 λεπτά? Οι αντιδράσεις τερματίστηκαν με προσθήκη 200 μι παγωμένη μεθανόλη και στροβιλισμό. Το μείγμα επώασης στροβιλίστηκε και φυγοκεντρήθηκε (10.060

ζ

) στους 4 ° C για 10 λεπτά, και τα υπερκείμενα αναλύθηκαν. Εντόμων μικροσώματα χωρίς UGT cDNA χρησίμευσε ως αρνητικός μάρτυρας. Κινητικές παράμετροι (

K

m και

V

max) της belinostat γλυκουρονιδίωσης από υπερσωμάτια UGT1A1 προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας συγκεντρώσεις υποστρώματος των 10-750 μΜ. Οι επωάσεις διεξήχθησαν όπως περιγράφεται παραπάνω. Τρία ανεξάρτητα πειράματα για την κινητική ανάλυση.

Μελέτη Συσχέτιση με UGT1A1 υποστρώματα, UGT1A1 Gene Expression και UGT1A1 * 28 Πολυμορφισμός

Σε μια μελέτη συσχέτισης της γλυκουρονιδίωσης της belinostat και UGT1A1 υποστρώματα, belinostat γλυκουρονιδίωση ήταν μετράται όπως περιγράφεται παραπάνω χρησιμοποιώντας 100 μΜ belinostat και 50 μg HLM? Αυτή η συγκέντρωση των belinostat επιλέχθηκε καθώς είναι κοντά στο χιλιόμετρο της UGT1A1. Η γλυκουρονιδίωση της χολερυθρίνης, η θυροξίνη και SN-38 σε αυτά τα μικροσώματα, μέτρηση της έκφρασης του γονιδίου UGT1A1 και γονοτυπική για UGT1A1 * 28 έχουν περιγραφεί προηγουμένως [25] – [27].

Ανάλυση Δεδομένων

ταχύτητα σχηματισμού Belinostat-G (

ν

) υπολογίστηκε ως Cm, 30 min /χρόνο επώασης /συγκέντρωσης CYP, όπου Cm, 30 λεπτά ήταν η συγκέντρωση του μεταβολίτη μετά από 30 λεπτά επώασης. Γραφικές παραστάσεις της συγκέντρωσης του υποστρώματος, S (άξονας Χ) έναντι

ν

(άξονας Υ) στη συνέχεια κατασκευάστηκαν. Km και Vmax υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας την εξίσωση Michaelis-Menten (λογισμικό GraphPad, Inc., San Diego, CA, USA). (1)

σύνδεσης μεταξύ belinostat γλυκουρονίδιο συγκέντρωση και UGT1A1 υποστρώματα διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας τόσο συσχέτισης Pearson και (λογισμικό GraphPad Prism, La Jolla, CA) δοκιμές συσχετισμού Spearman του. Οι φαρμακοκινητικές παράμετροι υπολογίστηκαν με βάση μη-διαμερισματικό μοντέλο ανάλυσης χρησιμοποιώντας WinNonlin έκδοση λογισμικού 5.3 (Pharmsight, Sunnyvale, CA, USA). Σχετική έκθεση του belinostat-Θ στο πλάσμα των ασθενών εκπροσωπήθηκε από την μοριακή αναλογία AUC συγκέντρωση belinostat-G πάνω belinostat. Ένας τρόπος ανάλυση διακύμανσης (ANOVA) χρησιμοποιήθηκε για να προσδιοριστεί η σημαντικότητα μεταξύ των γονότυπων με δοκιμές Tukey posthoc για προσαρμογή για τη σύγκριση μεταξύ των επιμέρους ομάδων. Μια τιμή του ρ & lt? 0,05 θεωρήθηκε ως σημαντική

Αποτελέσματα

Φαρμακοκινητική και Μεταβολισμός Belinostat στο ανθρώπινο πλάσμα

Οι συγκεντρώσεις των belinostat και belinostat-G σε 17 ασθενείς. εγγεγραμμένοι σε μια φάση Ι κλινική δοκιμή σε ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα (HCC) έχουν ποσοτικοποιηθεί για την εκτίμηση των φαρμακοκινητικών παραμέτρων (Πίνακας 1). Belinostat ακολούθησε γραμμική φαρμακοκινητική σε δόσεις που κυμαίνονται 600 με 1400 mg /m

2, με μεγαλύτερες διακύμανσης της κάθαρσης σε υψηλότερες δόσεις. Οι συντελεστές διακύμανσης της κάθαρσης (CL) ήταν 29,0% και 30,6% στα 1200 και 1400 mg /m

2, αντίστοιχα. Belinostat αποβλήθηκε ταχέως μετά από ενδοφλέβια διοίκηση, λόγω της εντατικής φάσης ΙΙ γλυκουρονίδιο σύζευξη, Μ1 (εικόνα 1)

Χρωματογράφημα κατά την ημέρα 5 και την ημέρα 22 (Α).? day1 (Β).

Η

Πέντε μεταβολίτες της belinostat ταυτοποιήθηκαν μέσω σύγκρισης της απορρόφησης υπεριώδους ακτινοβολίας (UV) των δειγμάτων πλάσματος στα 268 nm πριν και μετά τη χορήγηση. Παρόμοια προφίλ χρωματογραφημάτων ανιχνεύθηκαν την ημέρα 1 (Εικόνα 1Β) και την ημέρα 5 (Σχήμα 1Α). Τα ιόντα προϊόντος MS /MS των πέντε αυτών των μεταβολιτών παρακολουθούνται σε θετικό τρόπο υποστηρίζεται ταυτοποίηση χημική δομή τους (Πίνακας 2). Η γλυκουρονιδίωση ήταν η πιο σημαντική οδός belinostat μεταβολισμό? δύο εναλλακτικές οδούς βιομετατροπής εμπλέκονται μεθυλίωση σε μεθύλιο belinostat και τη μείωση του υδροξαμικού ομάδας με την αντίστοιχη belinostat αμίδιο του. Belinostat οξύ και belinostat γλυκοζίτη ήταν 2 άλλες ελάσσονες μεταβολίτες που ανιχνεύθηκαν. Η προτεινόμενη οδός μεταβολισμού της belinostat υποδεικνύεται στο Σχήμα 2. Οι χημικές δομές αυτών των μεταβολιτών προτείνεται με βάση πρωτονιωμένο μόριο κορυφές μάζα τους [Μ + Η]

+, 2 φορές μόριο μάζα κορυφές [2Μ + Η]

+ και των χαρακτηριστικών μάζα του κατακερματισμού που δημιουργείται από σάρωση προϊόν. Αυτές οι δομές αυτές επιβεβαιώθηκαν περαιτέρω με ανάλυση των ιόντων κατακερματισμού των προδρόμων ιόντων, η οποία αποκάλυψε μια κοινή ιόν προϊόν (m /z 93, θραύσμα φαινυλαμινο) του belinostat και πέντε μεταβολίτες της. Με βάση τις δομές μεταβολίτη, ο υδροξαμίδιο ήμισυ είναι το κλειδί δομή για την ισχύ της belinostat. Σάρωση των φασμάτων m /z από το πλάσμα ασθενών που υποστηρίζονται γλυκουρονιδίωση belinostat μέσω ανίχνευσης του 495, 989, 493 αντιπροσωπεύει την πρωτονιωμένη belinostat G, πρωτονιωμένα διπλό belinostat G, και αποπρωτονιώνονται belinostat G, αντιστοίχως. Η χημική δομή του belinostat-G απομονώνεται από το πλάσμα διαλευκάνθηκε με φασματομετρία μάζας. Μια σειρά από φάσματα μάζας των belinostat-G αποκτήθηκαν να προτείνει τη χημική δομή. Για παράδειγμα, m /z 495 και m /z 989 ταυτοποιήθηκαν ως πρωτονιωμένη μόριο κορυφές μάζα του [Μ + Η]

+ και 2 φορές μόριο μάζα κορυφές [2Μ + Η]

+, αντίστοιχα. Σάρωση σε αρνητικό τρόπο ανιχνεύεται αντιστοιχεί αποπρωτονιωμένη μητρικό ιόν του ως m /z 493 [Μ-Η]

-. Μια παρόμοια μάζα κατακερματισμό προφίλ σε θετικό τρόπο βρέθηκε τόσο για belinostat και belinostat-G. Με βάση το ιόν κοινό προϊόν (θραύσμα φαινυλαμινο), μια σάρωση πρόδρομου ιόντος m /z 93, υποβλήθηκε σε επεξεργασία επί belinostat και belinostat-G να αντλήσει μητρική ιόντα τους ως m /z 319 [Μ + Η]

+ για belinostat και m /z 495 [Μ + Η]

+ για belinostat-G, αντιστοίχως. Υποθέτοντας αυτό ήταν σωστή, θα πρέπει να αναμένεται οι χημικές δομές των μεταβολιτών της να έχουν παρόμοια φάσματα υπεριώδους για αυτούς τους μεταβολίτες και μητρική ένωση του καθώς λόγω ομοιότητας για τις βασικές μοριακές δομές τους, και αυτό υποστηρίχθηκε από UV φασματική ανάλυση που δημιουργούνται από τον ανιχνευτή σειράς διόδων (DAD) δείχνει παρόμοια μέγιστο μήκος κύματος στα 268 nm για belinostat και πέντε μεταβολίτες της.

Η

Ο κύριος μεταβολίτης ταυτοποιήθηκε ως belinostat-G η οποία επιβεβαιώθηκε περαιτέρω μέσω του ενζύμου αντίδραση υδρόλυσης. Το απομονωμένο belinostat-G από δείγματα πλάσματος ασθενών υποβλήθηκε σε

Escherichia coli-

προέρχεται β-γλυκουρονιδάση (6.8 mg /mL) επώαση για 5 ώρες, και το προκύπτον μίγμα της αντίδρασης αναλύθηκε μέσω LC-MS /MS. Η ποσοτική ανάλυση της φαρμακοκινητικής έδειξε ότι η έκθεση belinostat-G ήταν 4 φορές μεγαλύτερη από εκείνη του belinostat στο ανθρώπινο πλάσμα βασίζεται στη μοριακή AUC αναλογία συγκέντρωσης belinostat-G /belinostat (Πίνακας 1). Ως εκ τούτου, belinostat γλυκουρονιδίωση επιβεβαιώθηκε να είναι η κυρίαρχη μεταβολική οδός για belinostat.

Σταθερότητα των Belinostat-G σε όξινο περιβάλλον

Για να χαρακτηριστεί περαιτέρω η γλυκουρονιδίωση της belinostat, ελέγξαμε την όξινη σταθερότητα της belinostat -ΣΟΛ. Belinostat-G και vorinostat-G, ένα παράλληλο έλεγχο για belinostat-G, είχαν αποδειχθεί ότι είναι σταθερό μετά από 24 ώρες επώασης στους 37 ° C σε διάφορα όξινα διαλύματα (ρΗ 2.6- ρΗ 6.5). Η διακύμανση σε συγκεντρώσεις που μετρήθηκαν κατά την έναρξη του πειράματος και μετά από 24 ώρες ήταν πολύ οριακή (& lt? 4%). Αυτό είναι σύμφωνο με προτεινόμενη O-συζευγμένο δομή μας belinostat-G (M1) που φαίνεται στο Σχήμα 2. Ωστόσο, τα ανήλικα αποικοδόμηση (7%) ταυτοποιήθηκε μόνο όταν η τιμή του ρΗ μειώθηκε σε 2,6. Τα αποτελέσματα επιβεβαίωσαν belinostat είναι συζευγμένο με γλυκουρονιδικούς στη θέση Ο, ως Ο-γλυκουρονίδια, αλλά όχι Ν-γλυκουρονίδια της υδροξαμικά οξέα είναι σταθερά σε όξινο περιβάλλον [28], [29]. Όπως vorinostat-G έχει επιβεβαιωθεί ότι είναι μια O-συζευγμένο γλυκουρονίδιο [30], αποδεικνύει ότι το απομονωμένο belinostat-G είναι ένα Ο-συζευγμένο μεταβολίτης, καθώς και.

Προσδιορισμός

In Vitro

Η κυτταροτοξικότητα Επιδράσεις belinostat και belinostat-G

Σχήμα 3a και 3b δείχνουν τα αποτελέσματα των συγκεντρώσεων δόση αύξηση του belinostat και belinostat-G διεξάγεται σε ξεχωριστά τρυβλία 24 φρεατίων μετά από επώαση για 72 ώρες. Καθώς η συγκέντρωση belinostat αυξημένη, αριθμός των βιώσιμων κυττάρων (χρώση ιώδες) έδειξαν δοσοεξαρτώμενη μείωση. Αντιστρόφως, αυξανόμενες συγκεντρώσεις belinostat-G δεν φαίνεται να επηρεάζει τη βιωσιμότητα των κυττάρων εντός του εύρους συγκέντρωσης που εξετάστηκε. Ως εκ τούτου, σε ισομοριακές συγκεντρώσεις μεταξύ 0-10 μΜ, belinostat καταδεικνύει σημαντική δοσο-εξαρτώμενη κυτταροτοξικότητα ενώ belinostat-G δεν το κάνει. Επιπλέον, τα αποτελέσματα των δοκιμασιών MTS ήταν επίσης συνεπής με εκείνη της δοκιμασίας χρώσης (Σχήμα 3c). Ιστονών Η3 ακετυλίωση για belinostat έκθεση κατέδειξε την ώρα και εξαρτάται από τη συγκέντρωση αύξηση (Εικόνα 3d)

α:. Belinostat επώασης? β: belinostat-G επώασης? (Templates για τις συγκεντρώσεις προστέθηκε (κατώτερο) και τα αποτελέσματα των συγκεντρώσεων δόση αύξηση 24 φρεατίων σε HepG2 κύτταρα (άνω) c:. MTS αποτελέσματα για belinostat (IC

50 = 6,4 μΜ) και belinostat-G (δεν μπορεί να συγκλίνει) .. δ: Belinostat δραστηριότητα ακετυλίωση στα κύτταρα HepG2 (Western blot) Α: ακετυλο της ιστόνης 3 αυξάνεται με αύξηση της δόσης μετά από επώαση 5 ώρες? Β: Κινητική αλλαγές της ακετυλο ιστόνης 3 με το χρόνο αύξηση στα 10 μΜ

Η

In Vitro

Μεταβολισμός Διαλογή UGTs για Belinostat-G Σχηματισμός και ενζυμική κινητική

UGT1A1 γλυκουρονιδιώνεται belinostat σημαντικά (Εικόνα 4Α), ενώ δεν παρατηρήθηκε καμία μεταβολισμό μετά από επώαση με UGT1A4, UGT1A6, UGT1A7 , UGT1A9, UGT1A10, UGT2B15 και UGT2B17. Μικρά μεταβολισμού (λιγότερο από 3%) ανιχνεύθηκε με UGT1A3, UGT1A8, UGT2B4 και UGT2B7. 73,6% και 89,4% των belinostat μετατράπηκε σε belinostat-G μετά από 2 ώρες και 4 ώρες επώασης με UGT1A1, αντίστοιχα (Σχήμα 4Β). ενζυματική κινητικές παράμετροι για τη γλυκουρονιδίωση belinostat εκτιμήθηκαν με σύμπτωση των δεδομένα δεξαμενής από επωάσεις UGT1A1 πραγματοποιήθηκαν εις τριπλούν με την εξίσωση Michaelis-Menten. Οι φαινόμενες τιμές Km και Vmax για το σχηματισμό γλυκουρονίδιο ήταν 99,6 μΜ και 353,1 pmol /min /mg πρωτεΐνης, αντίστοιχα (Εικόνα 5). Η εγγενής εκκαθάριση (Vmax /Km) για το σχηματισμό του belinostat-G υπολογίστηκε ότι είναι 3,5 μL /min /mg πρωτεΐνης. Στα μικροσώματα εντόμων ελέγχου, δεν παρατηρήθηκε σχηματισμός belinostat-G.

Η

Οι φαινόμενες τιμές Km και Vmax για το σχηματισμό γλυκουρονίδιο ήταν 99,6 μΜ και 353,1 pmol /min /mg πρωτεΐνης, αντίστοιχα.

συσχέτιση των γλυκουρονιδίωση της belinostat με UGT υποστρώματα

Σε ανθρώπινα ηπατικά μικροσώματα, η συσχέτιση μεταξύ γλυκουρονιδίωση της belinostat και UGT υποστρώματα ελέγχθηκαν με τη χρήση παραμετρικών (συσχέτιση του ατόμου) και μη-παραμετρικές (συσχέτισης Spearman του) δοκιμών. Belinostat-G σχηματισμό συσχετίζεται έντονα με το σχηματισμό της χολερυθρίνης γλυκουρονίδιο (Εικόνα 6Α) (Pearson r

2 = 0,53? Spearman r

2 = 0,61 p & lt? 0.0001) και άλλες καθιερωμένες υποστρώματα του UGT1A1 όπως θυροξίνη και SN38 (Pearson r

2 = 0,68? Spearman r

2 = 0,81 και Pearson r

2 = 0,82? Spearman r

2 = 0,62, αντίστοιχα, όλα τα p & lt? 0.001) (Σχήμα 6Β, και 6C). Οι συγκεντρώσεις Belinostat-G μετά από επώαση με το HLM συσχετίζονται καλά με την έκφραση UGT1A1 mRNA (Pearson, r

2 = 0,66, ρ & lt? 0,0001, Σχήμα 7Α). Στο σύνολό τους, αυτά υποδηλώνουν ότι το UGT1A1 είναι το κυρίαρχο UGT ισομορφή σε belinostat γλυκουρονιδίωση

Α:. Χολερυθρίνη-G? Β: θυροξίνη-4-G /CPT-11? . C: SN38-G /CPT11

Η

Α: Συσχέτιση του σχηματισμού belinostat γλυκουρονίδιο με την έκφραση UGT1A1 σε ανθρώπινα ηπατικά μιτοχόνδρια? Β: Belinostat σχηματισμό γλυκουρονίδιο από ανθρώπινα ηπατικά μιτοχόνδρια σύμφωνα με άγριου τύπου, ετερόζυγα και ομόζυγα UGT1A1 * 28 γονότυπους

Η

UGT1A1 γονότυπος και γλυκουρονιδίωση της Belinostat σε μικροσώματα ανθρώπινου ήπατος και Συσχέτιση με UGT1A1 Gene Expression

UGT1A1 είναι ένα πολυμορφικό ένζυμο με αλληλόμορφες παραλλαγές που επηρεάζουν την ενζυμική της δράση. UGT1A1 * 28 είναι μια συχνή πολυμορφισμός που μειώνει δραστηριότητα γλυκουρονιδίωση. Ως εκ τούτου, για να προσδιοριστεί η επίδραση του UGT1A1 * 28 για το σχηματισμό της belinostat-G, μετρήσαμε τις συγκεντρώσεις belinostat-G μετά από επώαση των belinostat με κάθε ένα από 37 δείγματα HLM προηγουμένως ο γονότυπος για

UGT1A1 * 28

. Τα 30-λεπτά μετά επώαση συγκεντρώσεις belinostat-G (μέση ± SD) ήταν 15,39 ± 6,00, 11,35 ± 4,11 και 7,14 ± 3,28 μmol για UGT1A1 * 1 ομόζυγο, UGT1A1 * 28 ετερόζυγα και ομόζυγα μικροσώματα, αντίστοιχα. Ένας τρόπος ανάλυση ANOVA έδειξε ότι σημαντική διαφορά μεταξύ των ομάδων ανιχνεύθηκε (p = 0.01). ανάλυση Tukey posthoc πρότεινε ότι μόνο η διαφορά μεταξύ UGT1A1 * 1 και UGT1A1 * 28 ομόζυγη μικροσώματα ήταν στατιστικά σημαντική. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 7Β, UGT1A1 * 1 ομόζυγη μιτοχόνδρια είχε 2 φορές μεγαλύτερες μέσες συγκεντρώσεις belinostat-G σε σύγκριση με UGT1A1 * 28 ομόζυγη μιτοχόνδρια μετά την επώαση (

σ

& lt? 0.001)

Συζήτηση

Για τις γνώσεις μας, αυτή είναι η πρώτη έκθεση που περιγράφει την γλυκουρονιδίωση της belinostat. Έχουμε αποδείξει ότι belinostat υφίσταται εκτεταμένο μεταβολισμό μέσω γλυκουρονιδίωση συμβαίνουν στο χαρακτηριστική ομάδα υδροξαμικού, που οδηγεί σε απενεργοποίηση της κυτταροτοξικότητας της. Αυτό είναι σύμφωνο μεταξύ άλλων αναστολέων υδροξαμίδιο HDAC κατηγορίας, καθώς, όπου γλυκουρονιδίωση διαδραματίζει σημαντικό ρόλο στο μεταβολισμό τους. Το προφίλ του μεταβολίτη μετά από επώαση με ένα πάνελ υπερσωμάτια υπερεκφράζουν συγκεκριμένους UGT ισομορφές, συσχέτιση με ποσοστά γλυκουρονιδίωση γνωστά υποστρώματα UGT1A1 χρησιμοποιώντας ανθρώπινα ηπατικά μιτοχόνδρια, και η ανάλυση του προφίλ φασματομετρίας μάζας των belinostat σε μια σειρά ασθενών με καρκίνο του ήπατος στοιχεία που αποδεικνύουν ότι belinostat γλυκουρονιδίωση

in vitro

και

in vivo

διαμεσολαβείται κυρίως από UGT1A1. Είναι ενδιαφέρον ότι, το ένζυμο που μεταβολίζει ισομορφή πρωτίστως άλλη υδροξαμικό βασίζεται vorinostat αναστολέα HDAC

in vivo

είναι UGT2B17, ενώ belinostat μεταβολίζεται από UGT1A1, η οποία είναι μια πιο άφθονη ισομορφή στο ανθρώπινο ήπαρ [31]. UGT1A1 είναι παρούσα στην γαστρεντερική οδό, η οποία θα μείωνε πιθανό από του στόματος απορρόφηση του belinostat, και να οδηγήσει σε μειωμένη βιοδιαθεσιμότητα [32]. Επιπλέον, η υψηλή απόδοση του UGT1A1 για το μεταβολισμό belinostat πιθανότατα θα μειώσει περαιτέρω από του στόματος βιοδιαθεσιμότητα της μέσω εκτεταμένου μεταβολισμού πρώτης διόδου, θέτοντας μια πρόκληση στην ανάπτυξη της προφορικής belinostat.

Οι αναστολείς HDAC που βρίσκονται σε κλινική ανάπτυξη έχουν δυνατότητες για σοβαρές παρενέργειες. Κάποιες ενέργειες που σχετίζονται κατηγορίας περιλαμβάνουν θρομβοκυτταροπενία, παρατεταμένο διάστημα QT στο ηλεκτροκαρδιογράφημα, έντονη κόπωση και γαστρεντερικές παρενέργειες, και αυτά φαίνεται να είναι δοσοεξαρτώμενη. Belinostat έχει συνδεθεί με την κόπωση, διάρροια και επιμήκυνση του διαστήματος QT στη φάση Ι και ΙΙ δοκιμές [11], [33]. Εν όψει των στενό θεραπευτικό παράθυρο, είναι σημαντικό να προσδιοριστούν οι παράγοντες όπως η φαρμακογενετική της belinostat που αντιπροσωπεύουν διατομική μεταβλητότητα της φαρμακοκινητικής της. Έχουμε στο παρελθόν έδειξαν ότι οι ασθενείς με διαγραφή αλληλόμορφα UGT2B17 έχουν χαμηλότερη vorinostat-γλυκουρονίδιο σε αναλογία vorinostat περιοχής κάτω από την καμπύλη και μεγαλύτερη παρενέργειες [20]. Κατά συνέπεια, θα ήταν σημαντικό να κατανοήσουν την έκταση της διακύμανσης της φαρμακοκινητικής belinostat και φαρμακοδυναμικές ιδιότητες που αποδίδονται σε πολυμορφικά έκφρασης του UGT1A1. Η μελέτη μας σε μικροσώματα ανθρώπινου ήπατος είναι το πρώτο βήμα προς αυτή την κατεύθυνση.

UGT1A1 * 28 είναι ένας γενετικός πολυμορφισμός στην περιοχή υποκινητή όπου ένας πρόσθετος TA επανάληψης είναι παρούσα στο πλαίσιο ΤΑΤΑ που έχει συνήθως 6 TA επαναλαμβάνεται, και οδηγεί σε μειωμένη έκφραση του UGT1A1 [34]. Σε ανθρώπινα ηπατικά μικροσώματα, γλυκουρονιδίωση του SN-38, ο ενεργός μεταβολίτης της ιρινοτεκάνη, είναι λιγότερο αποτελεσματική σε μικροσώματα υπόθαλψη UGT1A1 * 28 σε σύγκριση με άγριου τύπου γονότυπο [25]. Να συμπίπτει, τα άτομα με ένα ή περισσότερα UGT1A1 * 28 αλληλόμορφα βιώνουν υψηλότερο κίνδυνο ουδετεροπενίας από θεραπεία με ιρινοτεκάνη σε δόσεις υψηλότερες από 250 mg /m

2 [35], [36]. Αυτός ο πολυμορφισμός είναι επίσης πιο συχνή σε Καυκάσιους από τους Ασιάτες, με συχνότητα αλληλομόρφων περίπου 30% στους Καυκάσιους και 10% στους Ασιάτες [37]. Τα στοιχεία μας δείχνουν ότι UGT1A1 * 28 σχετίζεται με μειωμένη γλυκουρονιδίωση belinostat, γεγονός που υποδηλώνει ότι οι ασθενείς με γονότυπο αυτό μπορεί ενδεχομένως να έχουν μεγαλύτερη έκθεση σε δραστικές belinostat που προκύπτουν από διαταραγμένη κάθαρση του belinostat. Αν και οι κλινικές συνέπειες αυτής της υψηλότερης έκθεσης με τη συνιστώμενη δόση του belinostat είναι προς το παρόν άγνωστη, οι υψηλότερες τοξικότητες σε belinostat αναμενόμενο. Αν αυτό αποδειχθεί, γονοτυπική UGT1A1 πριν belinostat θεραπεία, όπως είναι σήμερα διαθέσιμα για την ιρινοτεκάνη, είναι ένας τρόπος για να εξατομικεύουν τη θεραπεία.

Είτε UGT1A1 * 28 επηρεάζει τις φαρμακοκινητικές ιδιότητες και πιο αποφασιστικά η φαρμακοδυναμική των belinostat σε ασθενείς παραμένει σε να μελετηθεί? τα δεδομένα μας υποστηρίζει την ανάγκη για τέτοιου είδους μελλοντικές μελέτες σε ασθενείς.