Αφηρημένο

Ιστορικό

Παρά την αρχική θετική ανταπόκριση της στην ορμονοθεραπεία εκτομή, οι καρκίνοι του προστάτη πάντα επαναληφθεί στην πιο επιθετική, ανθεκτική στη θεραπεία, μορφές. Η έλλειψη της κατανόησης των υποκείμενων γενετικών αλλαγών για τη μετάβαση από την εξαρτώμενη από ανδρογόνο (AD) προς την ΑΗΠ την ανάπτυξη του καρκίνου του προστάτη εμποδίζει την ικανότητά μας να αναπτύξουν στόχους με γνώμονα θεραπευτικές στρατηγικές για την αποτελεσματική θεραπεία του καρκίνου του προστάτη ADI.

Μεθοδολογία /Principal Εκτίμηση

με διαλογή σε βιβλιοθήκη ανθρώπινης ενεργοποιημένης κινασών, έχουμε εντοπίσει

Tpl2

, το οποίο κωδικοποιεί μια κινάση σερίνης /θρεονίνης, όπως οδήγηση ADI ανάπτυξη καρκίνου του προστάτη. ενεργοποίηση Tpl2 με υπερ-έκφραση είτε άγριου τύπου ή ένα ιδιοσυστατικά ενεργοποιημένη μορφή του Tpl2 επαγόμενης ανάπτυξης ADI, ενώ η καταστολή της

Tpl2

έκφρασης και δραστικότητας κινάσης του στην ADI κύτταρα καρκίνου του προστάτη ανέστειλαν τον πολλαπλασιασμό κυττάρου υπό συνθήκες ανδρογόνο εξαντλημένο . Το πιο σημαντικό,

Tpl2

υπερεκφράζεται σε ADI καρκίνους του προστάτη τόσο του

PTEN

μοντέλο διαγραφή του ποντικιού και τα κλινικά δείγματα καρκίνου του προστάτη.

Συμπεράσματα /Σημασία

Μαζί αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι το

Tpl2

κινάσης διαδραματίζει έναν κρίσιμο ρόλο στην προώθηση της ADI εξέλιξης του καρκίνου του προστάτη. Επιπλέον, η καταστολή της Tpl2 μειώνει την ανάπτυξη ADI καρκίνο του προστάτη και υψηλή συχνότητα Tpl2 υπερέκφραση σε ανθρώπινα δείγματα καρκίνου του προστάτη ADI επικυρώνει Tpl2 ως στόχος για τη θεραπεία αυτής της θανάσιμης ασθένειας

Παράθεση:. Jeong JH, Bhatia Α , Toth Ζ, Ω S, Inn KS, Liao CP, et al. (2011)

Tpl2 /COT /MAP3K8 (Tpl2)

Ενεργοποίηση Προωθεί ανδρογόνων εξάντληση Ανεξάρτητο (ADI) του προστάτη ανάπτυξη του καρκίνου. PLoS ONE 6 (1): e16205. doi: 10.1371 /journal.pone.0016205

Επιμέλεια: Jean-Marc Vanacker, Institut de Génomique Fonctionnelle de Lyon, Γαλλία

Ελήφθη: 7 του Σεπτεμβρίου 2010? Αποδεκτές: 8 Δεκεμβρίου, 2010? Δημοσιεύθηκε: 18 Γενάρη, 2011

Copyright: © 2011 Jeong et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο χρηματοδοτήθηκε και υποστηρίζεται από DoD 060.868 και ACS επιχορήγηση IRG-58-007-48 να JHJ, ΝΙΗ χορηγεί CA 109.147 και R01 CA 136.924 σε GAC, ΝΙΗ χορηγεί CA 59705 και CA 113 392 να PRB, και CA082057, CA31363, CA115284, AI083025, DE019085, CA148616, Hastings Ιδρύματος, και Fletcher Ίδρυμα Jones να JUJ. (https://cdmrp.army.mil/, https://www.cancer.org/, https://www.nih.gov/, https://www.fletcherjonesfdn.org/). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ο καρκίνος του προστάτη επηρεάζει 1 στους 6 Αμερικανούς άνδρες, με περισσότερα από 2 εκατομμύρια ζουν σήμερα με την ασθένεια. Η χειρουργική επέμβαση είναι αποτελεσματική, με σχεδόν 100% των ασθενών που παρέμειναν χωρίς καρκίνο για αρκετά χρόνια, εάν η ασθένεια εντοπίζεται νωρίς και τα καρκινικά κύτταρα περιορίζεται στον προστάτη [1]. Ωστόσο, όταν ο καρκίνος εξαπλώνεται πέρα ​​από τον προστάτη αδένα, το αποτέλεσμα είναι σχεδόν πάντα θανατηφόρα. Δεδομένου ότι ο καρκίνος του προστάτη κύτταρα απαιτούν τεστοστερόνης να τροφοδοτήσουν την ανάπτυξη και την επιβίωσή τους, η θεραπεία στέρησης ανδρογόνων έχει σχεδιαστεί για να σταματήσει την ανάπτυξη του καρκίνου είτε σταματώντας την παραγωγή της τεστοστερόνης ή την πρόληψη της ορμόνης από το να ενεργεί επί κυττάρων καρκίνου του προστάτη [2]. Παρά την αρχική θετική ανταπόκριση στην ορμονοθεραπεία, προστάτη καρκινικά κύτταρα σταθερά επαναληφθεί σε μια επιθετική, ανδρογόνων εξάντληση-ανεξάρτητο (ADI) μορφή. Ενώ γενετικές αλλοιώσεις που σχετίζονται με την έναρξη και την πρόοδο του καρκίνου του προστάτη έχουν εντατικά μελετηθεί [3], [4], [5], [6], [7], εκείνες στις οποίες βασίζεται η μετάβαση από την εξαρτώμενη από ανδρογόνο (Αϋ) να ADI προστάτη την ανάπτυξη του καρκίνου είναι σχετικά λιγότερο καλά κατανοητές. Αυτή η έλλειψη κατανόησης παρεμποδίζει την ικανότητά μας να αναπτύξουμε στόχου με γνώμονα θεραπευτικές στρατηγικές για την αποτελεσματική θεραπεία του καρκίνου του προστάτη ADI.

Με την παρουσία ανδρογόνων, ο υποδοχέας ανδρογόνου (AR) υφίσταται φωσφορυλίωση, διμερισμό και μετατόπιση σε ο πυρήνα, όπου αυτή συνδέεται με στοιχεία απόκρισης ανδρογόνων (ARE) θέσεις, με αποτέλεσμα την μεταγραφική ενεργοποίηση γονιδίων στόχων [8]. Ωστόσο, αναγκάζοντας τα δεδομένα, συμπεριλαμβανομένων RNAi knockdown και την εισαγωγή των ανταγωνιστών του υποδοχέα ανδρογόνων (AR), δείχνουν ότι AR εξακολουθεί να είναι απαραίτητη για την ανάπτυξη καρκίνου του προστάτη ADI [9], [10], [11]. Ως εκ τούτου, υπό συνθήκες ανδρογόνων εξαντλημένο, ADI καρκινικά κύτταρα του προστάτη φαίνεται να αναπτύξουν στρατηγικές ενδοκυτταρική που ενεργοποιούν το μονοπάτι σηματοδότησης AR. Έχουν προταθεί πολλές υποκείμενων μηχανισμών: αύξηση

AR

έκφραση μέσω της

AR

ενίσχυση γονιδίου, αυξημένη

AR

ευαισθησία μέσα από ενισχυμένη σταθερότητα AR και πυρηνικού εντοπισμού, διεύρυνε εξειδίκευση συνδέτη AR μέσω μεταλλάξεων σε περιοχή σύνδεσης προσδέματος του, και την αυξημένη δραστηριότητα AR μέσω μετα-μεταφραστικές τροποποιήσεις [12], [13], [14], [15], [16], [17], [18]. Από την άλλη πλευρά, η ενεργοποίηση άλλων οδών μεταγωγής σήματος, όπως ενεργοποίηση BCL-2, μπορεί επίσης να παρακάμψει την απαιτούμενη ενεργοποίησης AR για τον πολλαπλασιασμό και την επιβίωση των κυττάρων καρκίνου του προστάτη [19]. Τέλος, μια προϋπάρχουσα υποπληθυσμός ADI κυττάρων καρκίνου του προστάτη με προγονικά /βλαστοκύτταρα γνωρίσματα μπορεί να γίνει κυρίαρχη υπό συνθήκες ανδρογόνο εξαντλημένο [20].

Πολλές μελέτες δείχνουν ότι η ενεργοποίηση του μονοπατιού RAS /RAF /MEK /ERK μπορεί να συσχετισθεί με την ανάπτυξη καρκίνου του προστάτη ADI [5], [13], [21], [22]. Πρόσφατα, ένα γενετικά τροποποιημένο ποντίκι (GEM) μοντέλο, στο οποίο η έκφραση ενός ισχυρός ενεργοποιητής του RAS-ΜΑΡΚ σηματοδότηση, Β-RAF

E600, στοχεύει στο επιθήλιο του προστάτη χρησιμοποιώντας ένα tet-επαγώγιμο σύστημα, που αναπτύχθηκε επεμβατική αδενοκαρκίνωμα , και αυτό προχώρησε περαιτέρω σε νωχελικός βλάβες ADI μετά τον ευνουχισμό [23]. Ωστόσο, αντι-διαισθητικά, ενεργοποιώντας μεταλλάξεις στο μονοπάτι RAS /RAF /MEK /ERK είναι σπάνια σε ανθρώπινους καρκίνους του προστάτη, αν και αυτοκρινείς και παρακρινείς βρόχοι αυξητικού παράγοντα φαίνεται να ενεργοποιούν την οδό [24], [25]. Είναι σημαντικό, μια πρόσφατη μελέτη πρότεινε ότι χρωμοσωματικών αναδιατάξεων της κινάσης RAF είναι ένα επιπλέον πηγές MEK /ERK ενεργοποίηση σηματοδότησης, συμβάλλοντας στην ανάπτυξη και την εξέλιξη [26] του καρκίνου του προστάτη.

Για τον εντοπισμό νέων γονιδίων κινάσης σχετικές να ADI ανάπτυξη καρκίνου του προστάτη, θα διαλογή μια βιβλιοθήκη ανθρώπινης ενεργοποιημένης κινασών. Εδώ, αναφέρουμε την ταυτοποίηση μιας κινάσης σερίνης /θρεονίνης,

Tpl2

, ως κινητήρια ADI ανάπτυξη καρκίνου του προστάτη μέσω της ενεργοποίησης του μονοπατιού σηματοδότησης ΜΕΚ /ERK και NF-κΒ. Αυτό παρέχει μια ένδειξη για την εξεύρεση συμπληρωματικών πηγών ενεργοποίηση της οδού /ERK ΜΕΚ στο ADI καρκίνους του προστάτη. Επιπλέον, η καταστολή της Tpl2 μειώνει την ανάπτυξη του καρκίνου του προστάτη ADI και μια υψηλή συχνότητα της Tpl2 υπερέκφραση σε ανθρώπινα δείγματα καρκίνου του προστάτη ADI επικυρώνει Tpl2 ως στόχος για τη θεραπεία αυτής της θανάσιμης ασθένειας.

Αποτελέσματα

ο εντοπισμός των Tpl2, με διαλογή σε βιβλιοθήκη του κινάσες που ενεργοποιούνται Ανθρώπου

για την ταυτοποίηση νέων γονιδίων που σχετίζονται με την κινάση ADI ανάπτυξη καρκίνου του προστάτη, θα διαλογή μία βιβλιοθήκη από 354 ενεργοποιημένων ανθρώπινων κινασών αποτελείται από 98 ανοικτά πλαίσια ανάγνωσης κινάση που σχετίζονται με ( ORFs) και 256 ανθρώπινης κινασών κλωνοποιήθηκε σε ένα πύλη-συμβατό φορέα ρετροϊού προορισμού, ΝΣΚ-MF-DEST, στην οποία μία αλληλουχία μυριστοϋλίωσης και μια ετικέτα FLAG-επιτόπου (MF) προστέθηκαν στο Ν-άκρα του κάθε εισάγεται ORF [27] . Ως ένδειξη για την οθόνη, χρησιμοποιήσαμε ένα κατασκεύασμα ανταποκριτή που περιέχει το

cis-ρυθμιστικών

περιοχή υποκινητή (5.8 kb που περιέχει ένα

AR

ενισχυτή) του ειδικού προστατικού αντιγόνου (

PSA

) γονίδιο, το οποίο εκφράζεται σε υψηλό βαθμό σε φυσιολογικό επιθήλιο προστάτη και σε όγκους του προστάτη [28], [29]. Η δραστηριότητα προαγωγέα /ενισχυτή μπορεί να μετρηθεί με ένα συγχωνευμένο

λουσιφεράσης

γονιδίου αναφοράς (Σχήμα 1Α). Προκειμένου να εντοπιστούν πιθανές κινάσης γονίδια μπορεί να επάγει την μεταγραφική δραστηριότητα του

PSA

ενισχυτή /υποκινητή

cis-ρυθμιστικών

περιοχή κάτω από συνθήκες ανδρογόνων εξαντλημένο, κάθε μόρφωμα κινάσης, μαζί με το πλασμίδιο αναφοράς , συν-επιμολύνθηκε σε ατομικά φρεάτια ενός 12 φρεατίων πλάκα που περιείχε εξαρτώμενων από ανδρογόνα LNCaP κύτταρα (AD-LNCaP) αναπτύχθηκαν σε μέσα συμπληρωμένα με R1881, ένα συνθετικό ανδρογόνο (Σχήμα 1Α). Είκοσι τέσσερις ώρες μετά την επιμόλυνση, τα κύτταρα LNCaP AD-επωάστηκαν με το μέσο που περιέχει 10% απογυμνωμένο με ενεργό άνθρακα εμβρυϊκό βόειο ορό (CS-FBS) χωρίς R1881. Μετά από 24 ώρες επώασης, η μεταγραφική δραστικότητα του

PSA

ενισχυτή /υποκινητή

cis-ρυθμιστικών

περιοχή κάτω από συνθήκες ανδρογόνο εξαντλημένο μετρήθηκε με δοκιμασίες λουσιφεράσης. Από 354 ενεργοποιημένων γονιδίων ανθρώπινης κινάσης, η έκφραση του

Tpl2

γονιδίου σε AD-LNCaP κυττάρων που επάγεται το υψηλότερο επίπεδο του PSA μεταγραφική δραστικότητα απουσία του R1881 (Σχήμα 1Β άνω). Ως έλεγχοι, άλλα ογκογονίδια, όπως

RAF

και

RAS

που έχουν προηγουμένως είναι γνωστό ότι σχετίζονται με την ανάπτυξη καρκίνου του προστάτη ADI, συμπεριλήφθηκαν [5], [22], [23] , [26], [30]. έκφρασή τους μάλιστα που προκαλείται μεταγραφική δραστηριότητα του

PSA

ενισχυτή /υποκινητή

cis-ρυθμιστικών

περιοχή κάτω από συνθήκες ανδρογόνο εξαντληθεί σε μερικούς, αλλά μικρότερο βαθμό από ό, τι

Tpl2

. Ωστόσο, όταν δοκιμάστηκε σε υποδοχέα ανδρογόνων (AR) -αρνητική DU-145 κύτταρα καρκίνου προστάτη, Tpl2

δεν επάγει την μεταγραφική δραστικότητα ADI, υποδηλώνοντας ότι η έκφραση AR είναι

αναγκαία για την ADI μεταγραφική ενεργοποίηση του

PSA

ενισχυτή /υποκινητή

cis-ρυθμιστικών

περιοχή που προκαλείται από το

Tpl2

(Εικόνα 1Β μέση? παρακαλώ σημειώστε την αλλαγή στην κλίμακα του άξονα Υ). Από την άλλη πλευρά, τα κύτταρα ανδρογόνο εξάντληση-ανεξάρτητο C4-2B (ADI-C4-2B) έδειξαν υψηλά ενδογενή επίπεδα μεταγραφική δραστικότητα του

PSA

ενισχυτή /υποκινητή

cis-ρυθμιστικών

περιοχή σε η απουσία R1881 (Σχήμα 1Β κάτω). Τα στοιχεία αυτά εγείρουν την πιθανότητα ότι προϋπάρχουσες γενετικές και επιγενετικές αλλοιώσεις στα κύτταρα ADI-C4-2B συμβάλλουν στο υψηλό ενδογενές επίπεδο της μεταγραφικής δραστηριότητας ADI οδηγείται από το

PSA

ενισχυτή /υποκινητή

cis-ρυθμιστικών

περιοχή. Θα πρέπει να σημειωθεί η επαγωγή της μεταγραφικής δραστηριότητας του

PSA

ενισχυτή /υποκινητή

cis-ρυθμιστικών

περιοχή από

Tpl2

υπερέκφραση σε AD-LNCaP κύτταρα ήταν πιο εντυπωσιακό (μεγαλύτερη από 20 φορές) σε χαμηλά επίπεδα (0.1~0.001 ηΜ) R1881, η οποία είναι συγκρίσιμη με τα φυσιολογικά επίπεδα ανδρογόνων σε ασθενείς που έχουν υποβληθεί σε ευνουχισμό χειρουργική (Σχήμα 1 C). Επιπλέον, η ενεργοποίηση της μεταγραφής ADI καταργήθηκε με μια θεραπεία αναστολέα Tpl2 όταν είτε με Tpl2 υπερέκφραση σε AD-LNCaP κύτταρα ή απλά με ενδογενή έκφραση Tpl2 στην ADI-C4-2B κύτταρα (Εικόνα 1D). Για να ελεγχθεί η πιθανότητα ότι το υψηλό ενδογενές επίπεδο δραστηριότητας μεταγραφική ADI του

PSA

ενισχυτή /υποκινητή

cis-ρυθμιστικών

περιοχή στα κύτταρα ADI-C4-2B μπορεί να οφείλεται σε αυξημένη έκφραση Tpl2, συγκρίναμε το επίπεδο έκφρασης του

Tpl2

στα κύτταρα AD-LNCaP και ADI-C4-2B. Πράγματι, τα κύτταρα ADI-C4-2B έδειξε υψηλότερο επίπεδο

Tpl2

έκφρασης σε σχέση με το AD-LNCaP κύτταρα (Σχήμα S1 Α). Επιπλέον, σε C4-2B κύτταρα, η δραστικότητα του PSA ενισχυτή /υποκινητή ανταποκρίνεται σε χαμηλά επίπεδα εξωγενούς έκφρασης Tpl2, αλλά όχι σε υψηλά επίπεδα έκφρασης Tpl2 (Σχήμα S1B). Είναι πιθανό ότι τα υψηλά επίπεδα της Tpl2 εξωγενών έκφρασης σε κύτταρα C4-2B, τα οποία εκφράζουν ήδη υψηλότερο επίπεδο ενδογενούς έκφρασης Tpl2 από τα κύτταρα LNCaP, να οδηγήσει σε αρνητικές επιπτώσεις στη δραστηριότητα PSA ενισχυτή /υποκινητή. Ως εκ τούτου, έχουμε εντοπίσει

Tpl2

ως υποψήφιο ογκογονίδιο, η οποία μπορεί να σχετίζεται με την ανάπτυξη καρκίνου του προστάτη ADI.

(Α) Σχηματική της ταυτότητας του υποψήφιων γονιδίων που μπορεί να επάγει τη μεταγραφική ενεργοποίηση του α

PSA

ενισχυτή /υποκινητή

cis-ρυθμιστικών

ρεπόρτερ περιοχή κατασκευάσει υπό συνθήκες ανδρογόνο εξαντληθεί σε κύτταρα LNCaP ανδρογόνο-εξαρτώμενη. MYR, αλληλουχία μυριστοϋλίωσης? ΕΙΝΑΙ, στοιχεία απόκρισης ανδρογόνων? CS-FBS, απογυμνωμένο με ενεργό άνθρακα εμβρυϊκό βόειο ορό. (Β) Σχετική δραστηριότητα LUC (ο

δραστικότητα PSA

ενισχυτή ΛΟΥΣΙΦΕΡΑΣΗΣ /υποκινητής είναι κανονικοποιημένο στη δραστηριότητα βήτα-γαλακτοσιδάσης pGL3) μετρήθηκε μετά από 24 ώρες επώασης με 10% CS-FBS χωρίς R1881 (εκτός από τη δεύτερη στήλη με 10% CS-FBS + 1 ηΜ R1881 ως μάρτυρας), μετά την ταυτόχρονη διαμόλυνση των πλασμιδίων που εκφράζουν ιδιοσυστατικά ενεργοποιημένες μορφές των υποδεικνυόμενων κινάσης γονίδια. Οι φορές τιμές επαγωγής (σχετική δραστηριότητα LUC διαιρείται με τη σχετική βασική δραστηριότητα LUC του φορέα ελέγχου) που αναφέρεται στην γραφική παράσταση για τα κύτταρα LNCaP. δραστηριότητες σε σχέση LUC κατά την

Tpl2

έκφραση υποδεικνύονται με κόκκινο χρώμα. είναι στατιστικά σημαντικές αυξήσεις στα LUC δραστηριότητες, σε σύγκριση με τον έλεγχο φορέα χωρίς θεραπεία R1881 που σημειώνονται με * (ρ & lt? 0,05). (C) Σχετική δραστηριότητα LUC με αυξανόμενη συγκέντρωση R1881 σε κύτταρα LNCaP συν-επιμολύνθηκαν παροδικώς με πλασμίδια που εκφράζουν είτε μυριστοϋλιωμένες

Tpl2

ή με κενό φορέα. Οι στατιστικά σημαντικές αυξήσεις στη δραστηριότητα LUC σε σύγκριση με κάθε αντίστοιχη συγκέντρωση R1881 με φορέα ελέγχου που σημειώνονται με * (ρ & lt? 0,05). (D) Σχετική δραστηριότητα LUC με αυξανόμενη συγκέντρωση του αναστολέα Tpl2 είτε στην AD-LNCaP κύτταρα συν-επιμολύνθηκαν παροδικώς με πλασμίδια που εκφράζουν μυριστοϋλιωμένες

Tpl2

ή σε μη επιμολυσμένα ΑΙ-C4-2B κύτταρα. Οι σχετικές δραστηριότητες LUC με /χωρίς R1881 αναφέρεται στο μαύρο ως μάρτυρες. είναι στατιστικά σημαντικές αυξήσεις στα LUC δραστηριότητες, σε σύγκριση με τον έλεγχο φορέα χωρίς θεραπεία R1881 που σημειώνονται με * (ρ & lt? 0,05). Όλα τα πειράματα εκτελέστηκαν τρεις φορές με το καθένα εις τριπλούν, και κάθε στήλη αντιπροσωπεύει τη μέση τιμή ± τυπική απόκλιση.

Η

Tpl2 Ενεργοποίηση Προκαλεί το ADI ανάπτυξη της AD προστάτη καρκινικά κύτταρα

Για να επαληθεύσετε αν

Tpl2

λειτουργικά σχετίζεται με την ανάπτυξη καρκίνου του προστάτη ADI κυττάρων, ερευνήσαμε τις λειτουργικές συνέπειες της υπερέκφραση ή καταστολή

Tpl2

σε AD ή καρκίνο του προστάτη ADI κύτταρα, αντίστοιχα. Πρώτον, για να διαπιστωθεί αν

Tpl2

υπερέκφραση είναι επαρκείς για την προώθηση της ADI ανάπτυξη του καρκίνου του προστάτη, έχουμε καθιερώσει σταθερές κυτταρικές σειρές AD-LNCaP που υπερεκφράζουν είτε Ν-τελικό myc-tagged αγρίου τύπου [

myc-Tpl2

(WT)], ένα ιδιοσυστατικά ενεργοποιημένη μορφή με μια διαγραφή 70 αμινοξέων στο του C-άκρο [

myc-Tpl2

(ΔΟ)], ή μια κινάση-αδρανής μορφή του

Tpl2

[

myc-Tpl2

(D270A)] με χρήση του φορέα pBabe-puro (Σχήμα 2Α). Η έκφραση του κάθε γονιδίου σε μεταγωγή επιβεβαιώθηκε με κηλίδα western (Σχήμα 2Β). Είναι ενδιαφέρον ότι, η έκφραση του

myc-Tpl2

(ΔΟ) μόνιμα ενεργοποιημένη μεταλλαγμένη ήταν χαμηλότερη από εκείνη του

myc-Tpl2

(WT) και

myc-Tpl2

D270A μεταλλαγμένο παρά έχοντας το υψηλότερο επίπεδο φωσφόρου ERK, ένα προς τα κάτω μόριο σηματοδότησης (Σχήμα 2Β). Για να εξαλειφθεί η πιθανότητα επιπτώσεων επίπεδο έκφρασης, ιδρύσαμε ένα άλλο σύνολο σταθερών κυτταρικών σειρών AD-LNCaP που υπερεκφράζουν είτε C-τερματικά σημαία-tagged αγρίου τύπου (

Tpl2

Μ.Β.-σημαία), μια συντακτικά ενεργοποιημένη μορφή με τη διαγραφή των 70 αμινοξέων στο C-τελικό άκρο (

Tpl2

-delC-σημαία), ή μια κινάση-ανενεργή μορφή του

Tpl2

(

Tpl2

– ανενεργό-σημαία) χρησιμοποιώντας τον φορέα pEF-IRES-puro (Εικόνα S2). Η προϋπόθεση αυτή έδειξε επίσης την χαμηλότερη έκφραση του

Tpl2

-delC-σημαία από

Tpl2

Μ.Β. σημαία και

Tpl2

-inactive-σημαία (Εικόνα S2), γεγονός που υποδηλώνει ότι η έκφραση ενός συστατικά ενεργοποιημένη μορφή

Tpl2

παραπάνω φυσιολογικά επίπεδα μπορεί να έχει αρνητικές επιπτώσεις στο κύτταρο. Ωστόσο, ανεξάρτητα

Tpl2

επίπεδα έκφρασης, συνολικής LNCaP κύτταρα που εκφράζουν είτε

myc-Tpl2

(WT) ή myc-

Tpl2

(ΔΟ) παρουσίασαν επιτάχυνση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων σε ανδρογόνα στερηθεί, Χαμηλό, και πλούσια σε συνθήκες σε σύγκριση με κύτταρα LNCaP που εκφράζουν είτε μόνο φορέα ή myc-

Tpl2

(D270A) μεταλλαγμένο (Σχήμα 2C). Ειδικότερα, τα κύτταρα LNCaP που εκφράζουν myc-

Tpl2

(ΔΟ) έδειξε στατιστικά σημαντικές αυξήσεις στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων σε σύγκριση με κύτταρα μάρτυρες (LNCaP-GFP) υπό τον όρο ανδρογόνου εξαντλημένο και σε χαμηλά επίπεδα του R1881 (0.01 ηΜ και 0,1 ηΜ) σε 3, 6, 9 ημέρες (* p-value & lt? 0,05). Παρόμοια δεδομένα ελήφθησαν με σταθερές κυτταρικές γραμμές κατασκευάζονται με τον φορέα pEF-IRES-puro (Εικόνα S2). Ως εκ τούτου, τα δεδομένα αυτά δείχνουν ότι

Tpl2

ενεργοποίηση από πάνω εκφράζουν είτε άγριου τύπου ή μόνιμα ενεργοποιημένη μορφή της Tpl2 οδηγεί στην προώθηση της ανάπτυξης ADI της AD-LNCaP κύτταρα.

(Α ) Σχηματική καθιερώσει σταθερές LNCaP κυτταρικών σειρών που υπερεκφράζουν είτε

GFP

, ένα άγριου τύπου myc-tagged

Tpl2

[

myc-Tpl2

(WT)], ένα myc- tagged συστατικώς ενεργοποιημένη μορφή του

Tpl2

με μια περικοπή από 70 αμινοξέα σε C-άκρο της [

myc-Tpl2

(ΔΟ)], ή ένα myc-tagged κινάσης ανενεργό μορφή

Tpl2

[

myc-Tpl2

(D270A)] χρησιμοποιώντας το φορέα έκφρασης pBabe-puro. (Β) ανάλυση κηλίδας Western για την ανίχνευση της έκφρασης του

Tpl2

κατασκευάσματα ανωτέρω (όπως υποδεικνύεται με βέλη στο κόκκινο). β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος για τη φόρτωση της ίδιας ποσότητας πρωτεϊνών. (Γ) προσδιορισμούς ΜΤΤ για τη μέτρηση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων των σταθερών κυτταρικών σειρών πάνω σε απουσία ή με χαμηλά επίπεδα R1881 (0,01 ηΜ, 0,1 ηΜ και 1 ηΜ). Οι στατιστικά σημαντικές αυξήσεις στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων σε σύγκριση με τα κύτταρα ελέγχου (LNCaP-GFP) που σημειώνονται με * (p & lt? 0,05).

Η

Η καταστολή της Tpl2 έκφραση ή αναστολή της κινάσης δραστηριότητά της ADI του καρκίνου του προστάτη κυττάρων οδηγεί σε μειωμένη διάδοσης φαινότυποι

στη συνέχεια, για να διαπιστωθεί αν ο καρκίνος του προστάτη ADI κύτταρα εξαρτώνται από

Tpl2

για την ανάπτυξή τους κυττάρων ADI, θα κατασταλεί

Tpl2

έκφραση ή δραστηριότητα, είτε με shRNA μεσολάβηση knockdown ή με επεξεργασία αναστολέα Tpl2, αντίστοιχα. Όπως φαίνεται στο Σχήμα S1,

Tpl2

έκφραση ήταν είναι υψηλότερη σε ADI-C4-2B κύτταρα από ό, τι στην AD-LNCaP κύτταρα. Η μειωμένη έκφραση του

Tpl2

στα κύτταρα ADI-C4-2B από shRNA μεσολάβηση νοκ ντάουν χρησιμοποιώντας τον φορέα pLKO.1-TRC επιβεβαιώθηκε με κηλίδα western (Σχήμα 3Α). κύτταρα ADI-C4-2B με μειωμένη έκφραση του

Tpl2

έδειξε σημαντικά μειωμένο ρυθμό πολλαπλασιασμού υπό συνθήκες ανδρογόνο εξαντλημένο (Σχήμα 3Β). Επιβεβαιώσαμε αυτά τα στοιχεία με πρόσθετες shRNA μεσολάβηση σύστημα νοκ ντάουν χρησιμοποιώντας το pGIPZ φορέα λεντοϊού (Σχήμα S3). Επιπλέον, η ανάπτυξη των κυττάρων ADI κυττάρων ADI-C4-2B επίσης μειωθεί σημαντικά κατά τη θεραπεία ενός αναστολέα Tpl2 [Σχήμα 3C? Η 50% ανασταλτική συγκέντρωση (IC

50) του 4.0 μΜ προσδιορίστηκε όπως στο Σχήμα S4]. Η καταστολή των MEK /ERK μονοπάτι σε κύτταρα ADI-C4-2B με τη θεραπεία των Tpl2 επιβεβαιώθηκε με κηλίδα western (Σχήμα 3D). Μαζί, αυτά τα δεδομένα δείχνουν ότι

Tpl2

ενεργοποίηση είναι απαραίτητη για την αποτελεσματική ανάπτυξη ADI της ADI-C4-2B κύτταρα.

(Α) ανάλυση κηλίδος Western για να δείξει το ποσό των

Tpl2

έκφραση στα σταθερές C4-2B κυτταρικές γραμμές που εκφράζουν τις υποδεικνυόμενες τα siRNAs χρησιμοποιώντας τον φορέα λεντοϊού pLKO.1-TRC κατά τη στιγμή της ακόλουθης δοκιμασίας ΜΤΤ. β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος για τη φόρτωση της ίδιας ποσότητας πρωτεϊνών. δοκιμασίες (Β) ΜΤΤ για τη μέτρηση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων των σταθερών κυτταρικών σειρών απουσία R1881. * P & lt? 0,05. (Γ) προσδιορισμούς ΜΤΤ για τη μέτρηση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων του ανδρογόνου εξάντληση-ανεξάρτητο κύτταρα C4-2B με τη θεραπεία αναστολέα Tpl2 (4 μΜ). (Δ) Η καταστολή των ΜΕΚ οδού /ERK σε κύτταρα ADI-C4-2B με την αύξηση της συγκέντρωσης του αναστολέα Tpl2 επιβεβαιώθηκε με κηλίδα western.

Η

Tpl2 Ενεργοποίηση Προωθεί ADI προστάτη ανάπτυξη του καρκίνου του PTEN Διαγραφή Μοντέλο Ποντικού

Προηγουμένως, είχε αποδειχθεί ότι διαλληλικών όρους ΡΤΕΝ διαγραφή στο επιθήλιο του προστάτη θα μπορούσε να επάγει αδενοκαρκινώματος που ανακεφαλαιώνει τα περισσότερα από τα ιστοπαθολογικά χαρακτηριστικά του καρκίνου του ανθρώπινου προστάτη [31], [32], [33]. Το πιο σημαντικό, ανδρογόνων αυτών των ποντικών με χειρουργικό ευνουχισμό οδήγησε στην εμφάνιση του ADI ανάπτυξης καρκίνου του προστάτη (Σχήμα 4Α) [33]. Πρόσφατα, κυτταρικές σειρές καρκίνου του προστάτη καθιερώθηκαν από πρωτογενείς καρκίνους του προστάτη του

PTEN

μοντέλο διαγραφή [34]. Μετά από μακροχρόνια καλλιέργεια αυτών των κυττάρων υπό συνθήκες ανδρογόνα εξαντλημένο, ADI καρκίνο του προστάτη, όπως κύτταρα ορίζονται ως κύτταρα «Ε» εξελίχθηκε μετά από μια πρώτη μαζική κυτταρικό θάνατο των κυττάρων AD. Επιπλέον, κυτταρικές σειρές καρκίνου του προστάτη ήταν επίσης ιδρύθηκε από υποτροπιάζοντα καρκίνο του προστάτη ADI που αναπτύχθηκε μετά από χειρουργικό ευνουχισμό και το όνομα κύτταρα «CE» [34]. Σε αντίθεση με τα Ε κύτταρα, αυτές οι κυτταρικές γραμμές CE ανδρογόνων εξάντληση ανεξάρτητη από την αρχή, έτσι ώστε δεν υπήρχε αρχική μαζική θάνατο των κυττάρων κάτω από συνθήκες ανδρογόνο εξαντληθεί. Για να διερευνήσουν κατά πόσον

Tpl2

ενεργοποίησης είναι φυσιολογικά σχετίζονται με την ανάπτυξη του όγκου ADI

in vivo

, πρέπει πρώτα συνέκριναν τα επίπεδα έκφρασης του

Tpl2

μεταξύ Ε κυτταρικές σειρές (Ε2 και Ε4) και κυττάρων CE γραμμές (CE1, CE2, και CE3). κυττάρων CE γραμμές (CE1, CE2, και CE3) έδειξαν υψηλότερα επίπεδα

Tpl2

έκφρασης σε σχέση με κυτταρικές σειρές Ε (Ε2 και Ε4) με κηλίδα western και ανοσοϊστοχημεία (Εικόνα 4Β και 4Γ). Είναι ενδιαφέρον, κυτταρικές σειρές Ε έδειξαν ελαφρώς υψηλότερα επίπεδα

AR

έκφραση από κυτταρικές σειρές CE, γεγονός που υποδηλώνει ότι κυτταρικές σειρές Ε μπορεί να έχουν αποκτήσει ανάπτυξη ADI αν και AR υπερέκφραση (Σχήμα 4Β). Η ανάπτυξη των κυττάρων ADI των κυττάρων CE (CE1, CE2, και CE3) ήταν περισσότερο σημαντικά επηρεάστηκε από E κύτταρα (Ε2 και Ε4), όταν υποβάλλεται σε επεξεργασία με την αύξηση των επιπέδων του αναστολέα Tpl2 (Εικόνα 4D). Συλλογικά, αυτές οι παρατηρήσεις δείχνουν ότι

Tpl2

απαιτείται επίσης για την αποδοτική ανάπτυξη των κυττάρων του καρκίνου του προστάτη ADI στο μοντέλο ποντικού.

(Α) Σχηματική της «Pb-Cre4 :: PTEN

f /f :: β-Actinp-GFP

f /f-Luc «μοντέλο ποντικού, όπου το

οι ΡΤΕΝ

αλληλόμορφα διαγράφεται ομόζυγο και

λουσιφεράσης

εκφράζεται στο επιθήλιο του προστάτη από το ειδικό προστατικό

Probasin

υποκινητή (Pb) καθοδηγούμενου Cre έκφραση της ανασυνδυάσης. Αυτοί οι ποντικοί ανέπτυξαν ένωση του προστάτη ενδοεπιθηλιακή νεοπλασία (ΡΙΝ), προστατικό αδενοκαρκίνωμα επεμβατική, και μεταστατικό καρκίνο του προστάτη στους χρόνους που υποδεικνύονται. Το πιο σημαντικό, ανδρογόνων αυτών των ποντικών με χειρουργικό ευνουχισμό οδήγησε στην εμφάνιση του καρκίνου του ADI ανάπτυξη του προστάτη σε χρόνους που κυμαίνονται από 7 έως 28 εβδομάδες μετά τον ευνουχισμό σε όλους τους ζωντανούς ποντικούς. κυτταρικές σειρές καρκίνου του προστάτη Ε2 και Ε4 καθιερώθηκαν αρχικά από τα καρκινικά κύτταρα του προστάτη πρωτογενή πριν από τον ευνουχισμό, που αργότερα εξελίχθηκε ανάπτυξη ADI κατόπιν μακροχρόνιας καλλιέργειας υπό συνθήκες ανδρογόνο εξαντληθεί. Ωστόσο, CE1, CE2, και CE3 κυτταρικές σειρές καρκίνου του προστάτη καθιερώθηκαν από ADI καρκίνους του προστάτη μετά τον ευνουχισμό. Φωτογραφίες (200Χ) είναι αντιπροσωπευτικά των κυττάρων μορφολογίες των κυττάρων Ε2 και CE1. (Β) ανάλυση κηλίδος Western για να συγκριθούν τα επίπεδα έκφρασης του AR και Tpl2 μεταξύ των κυτταρικών σειρών Ε (Ε2 και Ε4) και κυτταρικές γραμμές CE κύτταρα (CE1, CE2, και CE3).

β-ακτίνης

χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος για τη φόρτωση της ίδιας ποσότητας πρωτεϊνών. Μ.Χ., ανδρογόνο-εξαρτώμενη? ADI, ανδρογόνο εξάντληση ανεξάρτητη? και AR, υποδοχέα ανδρογόνου. (C) Ανοσοϊστοχημική ανάλυση για να εξετάσει

Tpl2

έκφραση σε AD και ADI προστάτη του

PTEN

μοντέλο διαγραφή του ποντικιού. Ανθρώπινα δωδεκαδάκτυλο ιστός που εκφράζουν υψηλά επίπεδα ενδογενούς Tpl2 χρησιμοποιήθηκε ως θετικός έλεγχος (άνω δεξιά). Ως αρνητικός έλεγχος, ο ιστός χρωματίστηκε μόνο με το δευτερεύον αντίσωμα (άνω αριστερά). PCA, αδενοκαρκίνωμα του προστάτη. (D) δοκιμασίες ΜΤΤ για τη μέτρηση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων του Ε κυττάρων (Ε2 και Ε4) και κύτταρα CE (CE1 και CE3) με τη θεραπεία των διαφόρων επιπέδων του αναστολέα Tpl2 (0, 1, 5, ή 10 μΜ). Τα στατιστικά σημαντικές μειώσεις στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων σε σύγκριση με τη θεραπεία του οχήματος που σημειώνονται με * (p & lt? 0,05).

Η

έκφραση Tpl2 ρυθμίζεται αυξητικά σε ανθρώπινα δείγματα καρκίνου του προστάτη ADI

Τέλος, για την επικύρωση η κλινική σημασία του

Tpl2

κινάσης δράση στην ανθρώπινη ανάπτυξη του καρκίνου του προστάτη ADI, εξετάσαμε τη συχνότητα του

Tpl2

έκφραση σε ADI ανθρώπινο προστάτη δείγματα καρκίνου χρησιμοποιώντας μικροσυστοιχίες ιστό (TMA). Αξιολογήσαμε την ανοσοχρώση Tpl2 της 12ης κανονική (Ν), 52 ορμόνη-αφελή (ΗΝ), 52 ορμονοάντοχου (HR), 26 ορμόνη-αφελή μεταστατικό (HN Met), και 12 ορμονοάντοχου μεταστατικό (HR Met) φορμόλη σταθερό ενσωματωμένα σε παραφίνη δείγματα. Το Σχήμα 5Α δείχνει αντιπροσωπευτικές φωτογραφίες της έκφρασης Tpl2 του φυσιολογικό προστάτη, ορμόνη-αφελής καρκίνο του προστάτη, και του καρκίνου του προστάτη ανθρώπινου προστάτη δείγματα TMA ορμονοάντοχου. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 5Β, η συνολική συχνότητα χρώση των Tpl2 αυξήθηκε σε δείγματα ορμόνη-αφελή (34,8%) και ορμονοάντοχου (36,5%) σε σύγκριση με φυσιολογικά δείγματα προστάτη (18,2%). Οι αυξήσεις είναι πιο σημαντικό σε μεταστατικό καρκίνο του προστάτη δείγματα με 46.2% (ρ & lt? 0,05) από ορμόνη-αφελή μεταστατικών και 41,7% των μεταστατικών δειγμάτων ορμόνες πυρίμαχα, υποδηλώνοντας ότι η έκφραση Tpl2 μπορεί επίσης να συνδέεται με τη μετάσταση του καρκίνου του προστάτη. Ειδικότερα, τόσο η συνολική μέση βαθμολογία χρώσης και η συχνότητα των δειγμάτων με έντονη καταπόνηση σκορ αυξήθηκε με την εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη (Σχήμα 5Β). Λαμβανόμενα μαζί, αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι TMA έκφραση Tpl2 ρυθμίζεται αυξητικά με την εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη.

(Α) Αντιπροσωπευτική φωτογραφίες του κάθε κανονικό προστάτη (Ν), ορμόνη-αφελή καρκίνου του προστάτη (ΗΝ), ορμόνη-πυρίμαχων καρκίνο του προστάτη (HR), ορμόνη-αφελή μεταστατικό καρκίνο του προστάτη (HN Met), και ορμόνη-μεταστατικό καρκίνο του προστάτη (HR Met) των χρωματισμένων μικροσυστοιχίες ιστό ανθρώπινου προστάτη. έκφραση Tpl2 ανιχνεύθηκε με ανοσοϊστοχημική ανάλυση χρησιμοποιώντας αντίσωμα εναντίον Tpl2. (Β) Στατιστική ανάλυση της έκφρασης Tpl2 σε κάθε ομάδα της Ν, ΠΝ, HR, HN Met, δείγματα ανθρώπινου δυναμικού Met των χρωματισμένων μικροσυστοιχίες ανθρώπινο ιστό του προστάτη σε όρους μέσες βαθμολογίες χρώσης και χρώση ποσοστό. Στατιστικά σημαντικές διαφορές στις μέσες χρώση βαθμολογία είναι σημειωμένα με * (p & lt? 0,05). Οι συνολικοί αριθμοί του δείγματος για κάθε ομάδα σημείωσε. Ένταση χρώσης βαθμολογήθηκε ανεξάρτητα από δύο ουρολογικές παθολόγους με 0 (χωρίς χρώση), 1 (ασθενής χρώση), 2 (ενδιάμεσο χρώση) και 3 (ισχυρή χρώση) για κάθε δείγμα.

Η

Συζήτηση

Ο καρκίνος του προστάτη μπορεί να αντιμετωπιστεί εύκολα και να θεραπευτεί, εάν ανιχνεύεται στα πρώιμα στάδιά της, όταν η ανάπτυξη του όγκου είναι ακόμη περιορίζεται στον προστάτη. Ωστόσο, όταν ο καρκίνος εξαπλώνεται πέρα ​​από τον αδένα του προστάτη, θεραπεία γίνεται δύσκολη, αν και οι θεραπευτικές επιλογές, όπως θεραπεία ακτινοβολίας, ορμονοθεραπεία, και χημειοθεραπεία χρησιμοποιούνται με διάφορους βαθμούς αποτελεσματικότητας. Η εμφάνιση της μια πιο επιθετική, ανδρογόνων εξάντληση-ανεξάρτητο (ADI) μορφή του καρκίνου του προστάτη είναι επιπλοκή συχνό φαινόμενο και η αιτία για την αποτυχία της θεραπείας με αυξητική. Ως εκ τούτου, οι μελέτες που σχετίζονται με την αναγνώριση και τον χαρακτηρισμό της γενετικής υποκείμενων ADI ανάπτυξη καρκίνου του προστάτη είναι κρίσιμες για τις μελλοντικές εξελίξεις του στόχου με γνώμονα θεραπευτικές στρατηγικές για την αποτελεσματική θεραπεία του καρκίνου του προστάτη ADI. Σε αυτή τη μελέτη, με διαλογή σε βιβλιοθήκη ανθρώπινης ενεργοποιημένης κινασών, ταυτοποιήσαμε και χαρακτηρίζεται από ένα γονίδιο κινάσης,

Tpl2

, που φαίνεται να οδηγεί ADI ανάπτυξη καρκίνου του προστάτη. Το πιο σημαντικό,

Tpl2

υπερεκφράζεται σε ADI καρκίνους του προστάτη τόσο του

PTEN

μοντέλο διαγραφή του ποντικιού και τα κλινικά δείγματα καρκίνου του προστάτη. Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν σθεναρά ότι

Tpl2

κινάσης διαδραματίζει έναν κρίσιμο ρόλο στην προώθηση της εξέλιξης ADI καρκίνου του προστάτη.

Tpl2

, επίσης γνωστή ως την εξέλιξη του όγκου θέση 2, το οποίο κωδικοποιεί μια προϊόν με μία διαγραφή του Ο-τερματική περιοχή του αρχικά κλωνοποιήθηκε ως ένα γονίδιο μετασχηματισμού από μια ανθρώπινη κυτταρική γραμμή καρκινώματος του θυρεοειδούς, και ονομαζόταν

κρεβατάκι

(καρκίνος του θυρεοειδούς Osaka) [35]. Σχεδόν ταυτόχρονα, ήταν επίσης αναγνωριστεί ως πρωτεϊνική κινάση που σχετίζεται με την ανάπτυξη των Τ-κυττάρων λεμφώματος, όταν ανακαλύφθηκε ότι ο λευχαιμίας ποντικού Moloney προϊικού γονιδιώματος είχαν ενσωματωθεί στο τελευταίο εσώνιο του

Tpl2

γονίδιο με αποτέλεσμα μια διαγραφή του Ο-τερματικού της [36]. Ένα διαγονιδιακό ποντίκι μελέτη έδειξε ότι μόνο διαγονιδιακά ποντίκια που εκφράζουν ένα C-τερματικό διαγράφεται μορφή

Tpl2

υπό τον έλεγχο ενός εγγύς

Lck

υποκινητή αναπτύχθηκε λέμφωμα Τ-κυττάρων, γεγονός που υποδηλώνει ότι το Ο-τερματικό τομέα του άγριου τύπου

Tpl2

παίζει ανασταλτικό ρόλο στη δράση της κινάσης της [37]. Στην πραγματικότητα, το C-τερματικό διαγράφεται Tpl2 έχει αυξημένη σταθερότητα και υψηλότερη ειδική δραστικότητα της κινάσης από τον άγριο τύπο. Επιπλέον, Tpl2 αλληλεπιδρά με αρνητικός ρυθμιστής, ο NF-κΒ-ανασταλτική πρωτεΐνη NF-κB1 ρ105 έως C-τελικό άκρο της, και έτσι το C-τερματικό διαγράφεται Tpl2 δεν είναι ευαίσθητη σε ρ105 αρνητική ρύθμιση [38], [39]. Είναι ενδιαφέρον ότι,

Tpl2

έκφραση επίσης ρυθμίζεται αυξητικά σε περίπου 40% των ανθρώπινων δειγμάτων καρκίνου του μαστού, η οποία μπορεί να προκληθεί από την αύξηση των

Tpl2

αριθμούς αντιγράφου γονιδίου [40]. Ως εκ τούτου, είναι σημαντικό να καθοριστεί αν Tpl2 ενεργοποίηση σηματοδότησης σε δείγματα ανθρώπινου καρκίνου του προστάτη μπορεί να οφείλεται είτε στην γενετική μετάλλαξη σε μια C-τερματική περιοχή ή την αύξηση αριθμού αντιγράφου γονιδίου. Τα στοιχεία μας έδειξαν ότι η Tpl2 εκφράζεται σε υψηλότερο επίπεδο σε κύτταρα ADI-C4-2B από ό, τι στην AD-LNCaP κύτταρα, συμβάλλοντας έτσι στην υψηλή ενδογενή επίπεδο ενεργοποίησης ADI μεταγραφική του

PSA

ενισχυτή /υποκινητή

cis-ρυθμιστικών

περιοχή στα κύτταρα ADI-C4-2B (Σχήμα S1). Συγκρίναμε επίσης η

Tpl2

ακολουθίες των δύο κυτταρικών σειρών, αλλά δεν ανίχνευσε καμία διαφορά ακολουθία, γεγονός που υποδηλώνει ότι ο φαινότυπος ADI κυττάρων C4-2B δεν συνδέεται με συγκεκριμένες μεταλλάξεις στο το

Tpl2

γονίδιο. Επιπλέον, μια προηγούμενη μελέτη έδειξε ότι το επίπεδο του mRNA της

Tpl2

στον προστάτη του ποντικιού αυξήθηκε μετά χειρουργικό ευνουχισμό, αλλά στη συνέχεια μειώθηκε μετά την εκ νέου χορήγηση τεστοστερόνης [41]. Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι microarray

Tpl2

έκφραση στον προστάτη είναι αντιστρόφως ρυθμίζεται από την τεστοστερόνη στο μεταγραφικό επίπεδο. Ως εκ τούτου, είναι πιθανό ότι μειωμένο επίπεδο ανδρογόνων με την ορμονοθεραπεία μπορεί να αυξήσει την έκφραση Tpl2, με αποτέλεσμα την επιβίωση του καρκίνου του προστάτη και τον πολλαπλασιασμό κυττάρων κάτω από συνθήκες ανδρογόνο εξαντληθεί. Αυτή η υπόθεση είναι υπό ενεργή έρευνα.

Με την παρουσία ανδρογόνων, AR υποβάλλεται σε φωσφορυλίωση, διμερισμό και μετατόπιση εντός του πυρήνα, όπου αυτή συνδέεται με Οι θέσεις, με αποτέλεσμα την μεταγραφική ενεργοποίηση γονιδίων στόχων [8] . Ωστόσο, πολλές εκθέσεις αναφέρουν ότι AR εξακολουθεί να είναι απαραίτητη για την ανάπτυξη ADI καρκίνο του προστάτη [9], [10]. Όσο για τους υποκείμενους μηχανισμούς των Tpl2 μεσολάβηση ανάπτυξης ADI καρκίνου του προστάτη, το ερώτημα είναι αν αυτή η δράση απαιτεί την έκφραση AR και τη δραστηριότητα. Η κατάργηση της ενεργοποίησης Tpl2 μεσολάβηση PSA υποκινητή στο AR-αρνητικών DU-145 κύτταρα καρκίνου του προστάτη υποδηλώνει ότι

Tpl2

μεσολάβηση ADI την ανάπτυξη του καρκίνου του προστάτη μπορεί να εξαρτάται ακόμα σε δραστηριότητα AR.