Αφηρημένο

τοκοτριενόλες έχουν δείξει πολλές βιολογικές λειτουργίες, όπως αντιοξειδωτικές, αντι -cancer, διατήρηση της γονιμότητας και τη ρύθμιση του ανοσοποιητικού συστήματος και ούτω καθεξής. Σε αυτή τη μελέτη, μετά το τάισμα με τοκοτριενόλη πλούσιο κλάσμα από φοινικέλαιο (TRF) για 2 εβδομάδες, Balb /c γυμνών ποντικών εμβολιάστηκαν ανθρώπινου κόλον SW620 καρκίνος των κυττάρων και στη συνέχεια συνέχισε να τροφοδοτεί TRF για 4 εβδομάδες. Κατά τον τερματισμό των πειραμάτων, ξενομοσχευμάτων απομακρύνθηκαν και προσδιορίστηκε η έκφραση της Wnt-οδών που σχετίζονται με πρωτεΐνη με ανοσοϊστοχημεία ή κηλίδωση Western. Οι ιστοί του ήπατος ομογενοποιήθηκε για τον προσδιορισμό των επιπέδων των ενζύμων αντιοξειδωτική δραστηριότητα ή μηλονοδιαλδεϋδης (MDA). Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι TRF ανέστειλε σημαντικά την αύξηση ξενομοσχευμάτων σε γυμνά ποντίκια. TRF επηρέασε επίσης τη δραστηριότητα των ενζύμων αντιοξειδωτικών στον ιστό του ήπατος των ποντικών. Αυτές οι αλλαγές έγιναν εν μέρει συνέβαλε στην ενεργοποίηση της Wnt οδών ή επηρεάζουν σχετική πρωτεΐνη τους. Έτσι, αυτά τα ευρήματα αυτά δείχνουν ότι η ισχυρή αντικαρκινική δράση της TRF σχετίζεται με τη ρύθμιση των οδών σήματος Wnt

Παράθεση:. Zhang JS, Zhang SJ, Li Q, Liu YH, Ο Ν, Zhang J, et al . (2015) Tocotrienol κλάσμα πλούσιο (TRF) καταστέλλει την ανάπτυξη του καρκίνου του παχέος εντέρου Ανθρωπίνων ξενομοσχεύματα σε Balb /C Nude ποντίκια από την Wnt Pathway. PLoS ONE 10 (3): e0122175. doi: 10.1371 /journal.pone.0122175

Ακαδημαϊκό Επιμέλεια: Terence Lee, Πανεπιστήμιο του Χονγκ Κονγκ, Χονγκ Κονγκ

Ελήφθη: 12, Νοεμβρίου, 2014? Δεκτές: 7 Φεβρουαρίου 2015? Δημοσιεύθηκε: 25 του Μάρτη του 2015

Copyright: © 2015 Zhang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα δεδομένα είναι εντός του χαρτιού

Χρηματοδότηση: το έργο χρηματοδοτήθηκε από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (Νο 30.771.801? 81472968).. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Η tocotrienol πλούσιο κλάσμα από φοινικέλαιο (TRF) ελήφθη ως ένα δώρο είδος από τον Δρ Yu BingYun από Palm Nutraceuticals Sdn. Bhd, Μαλαισία. Αυτό δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων να PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών.

Εισαγωγή

Ο καρκίνος του παχέος εντέρου είναι μία από τις πιο κοινές κακοήθειες και απειλεί την υγεία του ανθρώπου στον κόσμο. Σύμφωνα με τις διαθέσιμες αναφορές, η συντριπτική πλειοψηφία του καρκίνου του παχέος εντέρου συνοδεύεται από την ενεργοποίηση της οδού σήματος Wnt [1-3]. Wnt σηματοδοτικό μονοπάτι είναι ένα περίπλοκο δίκτυο αλληλεπιδράσεων πρωτεΐνης, η οποία έχει βρεθεί στην πρόοδο της εμβρυϊκής ανάπτυξης και του καρκίνου. Ταυτόχρονα, έχει συμμετέχοντα στις κανονικές φυσιολογικές διεργασίες των ενηλίκων [3]. Οποιεσδήποτε αλλαγές στη σύνθεση του μονοπατιού Wnt σήματος θα οδηγήσει στην ανώμαλη της μεταγωγής σήματος, με τη σειρά του στον κακοήθη μετασχηματισμό κυττάρων, και, τέλος, πυροδοτώντας την εμφάνιση των κακοήθων όγκων. Wnt σηματοδοτικό μονοπάτι αποτελείται κυρίως από μια σειρά πρωτεϊνών όπως εξωκυτταρικά παράγοντα (Wnt), υποδοχείς διαμεμβράνης frizzled (FRZ), β-κατενίνης και παράγοντας Τ κυττάρων (TCF) κλπ [4]. Ενεργοποιημένος Wnt αλληλεπιδράσεις σήματος με την κυτταροπλασματική πρωτεΐνη, β-κατενίνης μπορεί να μείνει σταθερότητα και τη συσσώρευση στο κυτταρόπλασμα. Το σωρευτικό β-κατενίνης στη συνέχεια εισέρχεται στον πυρήνα cooperationg με το TCF για να ενεργοποιηθεί η μεταγραφή των γονιδίων στόχων όπως η κυκλίνη Dl και c-myc, κλπ [4]. Έτσι, είναι αξιοσημείωτο ότι διαφορετικά στάδια στις οδούς σήματος Wnt έχουν διαφορετικές ρυθμιστικών παραγόντων [1, 5].

Τα ενεργά συστατικά από φυσικά φυτά είναι η πρώτη επιλογή έχει την ιδιότητα θανάτωσης καρκινικών κυττάρων και καμία ζημιά στο φυσιολογικά κύτταρα. Τοκοτριενόλες ως ένα δραστικό συστατικό που εξάγεται από τα δέντρα και σιτηρά φοίνικα, έχουν δυνητικό δραστικότητα για αναστολή της ανάπτυξης των καρκινικών κυττάρων [1, 2, 6-9]. Στην τοκοφερόλη πλούσιο κλάσμα από φοινικέλαιο (TRF), 23,5% από αυτούς είναι συνολικού τοκοτριενόλες το οποίο είναι 10,7% για το γ-τοκοφερόλη. Σε προηγούμενη μελέτη, TRF μπορούσε να προκαλέσει μια ανεξάρτητη της ρ53 μονοπάτι θανάτου σε ανθρώπινα κύτταρα καρκίνου του παχέος εντέρου RKO [10]. Eitsuka κ.ά., έχουν αναφέρει ότι η βιταμίνη Ε η οποία περιέχει υψηλές συγκεντρώσεις τοκοτριενόλη (δ-τοκοτριενόλη) μπορεί να αναστέλλει την ανάπτυξη των ανθρώπινων κυττάρων αδενοκαρκινώματος κόλου με ρύθμιση προς τα κάτω της δραστικότητας τελομεράσης [11]. Xu W et al. παρατήρησε την λειτουργία του γ-τοκοτριενόλη στην ανθρώπινη καρκίνο του παχέος εντέρου ΗΤ-29 κύτταρα για να βρουν ότι το γ-τοκοτριενόλη κατέστειλε ένα σημαντικό συστατικό σε Wnt μονοπάτια-το σήμα β-κατενίνης /Tcf σε κύτταρα ΗΤ-29 [12]. Επιπλέον, τοκοτριενόλες ή TRF έχουν αναφερθεί διάφορα είδη κυττάρων κακοήθους καρκινώματος

in vitro

και

in vivo

[1, 8, 9, 13-15]. γ-Tocotrienol θα μπορούσε να αναστείλει την ανάπτυξη του ανθρώπινου γαστρικού καρκινικά κύτταρα και chemosensitize να καπεσιταβίνη σε ένα μοντέλο ποντικού ξενομοσχεύματος μέσω της ρύθμισης της NF-κΒ μονοπάτι [15]. TRF κατέστειλε την ανάπτυξη των κυττάρων του όγκου με μείωση επαναγγείωση [13] και η έκφραση του γονιδίου του όγκου στον καρκίνο του μαστού MCF-7 κύτταρα εμβολιασμό στους γυμνούς ποντικούς [14]. Σε σύγκριση με τους ποντικούς ελέγχου, η έκφραση της ιντερφερόνης-επαγώγιμη διαμεμβρανική πρωτεΐνη-1 γονιδίου και του CD59 γλυκοπρωτεΐνης πρόδρομο γονίδιο ήταν προφανώς επάνω ρυθμισμένη στα ποντίκια TRF-αγωγή.

προηγούμενες μελέτες μας έχουν δείξει ότι η δ -tocotrienol θα μπορούσε να προκαλέσει μια paraptosis που μοιάζει με θάνατο σε κύτταρα καρκίνου του παχέος εντέρου SW620, και έχουν επιπτώσεις της Wnt οδών σήματος [2]. Έτσι, υποθέσαμε ότι η παρόμοια ανασταλτική λειτουργία του τοκοτριενόλη μπορεί να υφίστανται στην μια μελέτη σε ζώα. Σε αυτή τη μελέτη, ήμασταν να καθοριστεί αν TRF ανέστειλε την ανάπτυξη των ανθρώπινων καρκινικών κυττάρων στο παχύ έντερο Balb /c γυμνών ποντικών και πώς TRF επηρέασαν τις οδούς σήματος Wnt. Τα αποτελέσματα αυτά θα μας βοηθούν να κατανοήσουμε τον μηχανισμό της τοκοτριενόλες για την αντικαρκινική ιδιότητα.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθική Δήλωση

Το πειραματικό πρωτόκολλο ζώων εγκρίθηκε από την Επιτροπή το Ηθική των πειραμάτων σε ζώα της Tianjin Κέντρο Ελέγχου και Πρόληψης Νοσημάτων (αριθμός άδειας: TJCDC0111). Η μελέτη αυτή πραγματοποιήθηκε σε αυστηρή συμφωνία με τη Λαϊκή Δημοκρατία της Κίνας Εργαστήριο Κανονισμών των ζώων.

Χημικά και αντιδραστήρια

Αντιδραστήρια για τον προσδιορισμό της αιμοσφαιρίνης, ερυθρών αιμοσφαιρίων, λευκών αιμοσφαιρίων αντιδραστήρια, λεμφικό, μονοκύτταρα , ουδετερόφιλα, ηωσινόφιλα και βασεόφιλα αγοράστηκαν από Sysmex. Τα κιτ ανίχνευσης δείκτη οξείδωσης ήταν από Nanjing Jiancheng Εμβιομηχανική Ινστιτούτο (Nanjing, Κίνα). Το διάλυμα εκχύλισης πρωτεΐνης PRO-PREP ήταν από το Πεκίνο SBS Genetech Co, Ltd (Πεκίνο, Κίνα).

καλλιέργειας κυττάρων

SW620 κυττάρων ανθρώπινου καρκινώματος του παχέος εντέρου αγοράστηκαν από το Cancer Institute της Κινεζικής Ακαδημίας της Ιατρικής Επιστήμης (Πεκίνο, Κίνα). Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε L-15 μέσο που περιέχει 2 mmol /L Ε-γλουταμίνη και 2 g /L διττανθρακικό νάτριο (Gibco), συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου βοός (FBS, Gibco), αντιβιοτικά (100 U /mL πενικιλίνης και 100 μg /mL στρεπτομυκίνης) στους 37 ° C σε υγροποιημένη ατμόσφαιρα με 95% αέρα και 5% CO

2. Πριν από 90% συρροή, κύτταρα διαβιβάστηκαν χρησιμοποιώντας 0,25% θρυψίνη που περιείχε 0,02% EDTA.

Animal θεραπεία

Πενήντα άνδρες (17-22g) και πενήντα γυναίκες (14-19g) BALB /c nude ποντίκια (ηλικίας 6-8 εβδομάδων) αγοράστηκαν από Vital River Laboratory Animal Technology Co, Ltd (Πεκίνο, Κίνα). Τα ποντίκια κρατήθηκαν να προσαρμοστούν στις συνθήκες για 5 ημέρες πριν από την έναρξη του πειράματος. θερμοκρασία δωματίου ζώο είναι περίπου 20-25 ° C, σχετική υγρασία είναι περίπου 40-70%. Οι ποντικοί πόσιμο νερό, κλινοσκεπάσματα και σίτιση κλουβιά έχουν αυτόκαυστο πριν δοθεί σε ποντίκια

Ποντίκια χωρίστηκαν τυχαία σε 5 ομάδες (20 ανά ομάδα) με το σωματικό βάρος, εξίσου σε άνδρες και γυναίκες, καθώς ακόλουθες ομάδες:. αρνητικός έλεγχος ομάδα, το μοντέλο όγκου ομάδα, και τρεις δόσεις των τοκοτριενόλη πλούσιο κλάσμα (TRF, Palm Nutraceuticals Sdn Bhd.., Μαλαισίας) από τις ομάδες φοινικέλαιο. Τα συστατικά σε TRF φαίνονται στον Πίνακα 1. TRF διαλύθηκε σε σογιέλαιο. Τρεις δόσεις των 5, 10 και 20 mg /kg σωματικού βάρους (σ.β.) του TRF που ήταν ισοδύναμη με γ-τοκοτριενόλη είχαν τη ποντικούς με διασωλήνωση. Ταυτόχρονα, καθετηριασμό την ομάδα αρνητικού ελέγχου και μοντέλο όγκου ομάδα με την ίση σογιέλαιο διαλύτη. Δύο εβδομάδες αργότερα, τα ποντίκια, συμπεριλαμβανομένων του μοντέλου όγκου ομάδα εγχύθηκαν 0,1 ml η λογαριθμική φάση των κυττάρων SW620 (1.0 × 10

7 /mL) στην μασχάλη του κάθε ποντικού. Όλα τα ζώα παρατηρήθηκαν ημερησίως και ακόμη δόθηκαν έλαιο TRF /σόγιας για 4 εβδομάδες. Κατά τη διάρκεια του πειράματος, τα ζώα ελεύθερα πήρε τροφή και νερό. Μετά το πλήρες αίμα συλλέχθηκε από κάνθο οφθαλμού σε κάθε ζώο υπό γενική αναισθησία, όλα τα ζώα υποβλήθηκαν σε ευθανασία με αυχενική εξάρθρωση. Μετρήθηκαν Το βάρος των οργάνων, συμπεριλαμβανομένων του ήπατος, της σπλήνας και των νεφρών, και του ιστού του όγκου. Μέρη ιστούς όγκων μονιμοποιήθηκαν σε φορμαλίνη 4%, στη συνέχεια αφυδατώθηκαν και εγκλείστηκαν σε παραφίνη για ανοσοϊστοχημική χρώση. Οι υπόλοιποι ιστούς όγκων καταψύχθηκαν σε -80 ° C για western αποτύπωση.

Η

Προσδιορισμός του δείκτη οξείδωσης σε ιστούς ήπατος

Οι ιστοί ήπατος ομογενοποιήθηκε κάτω από το λουτρό πάγου. ευρετήρια Οξείδωση συμπεριλαμβανομένων υπεροξειδική δισμουτάση (SOD), γλουταθειόνη-Px (GSH-Ρχ), μηλονοδιαλδεϋδης (MDA) και καταλάσης (CAT) μετρήθηκαν στο ομογενοποίημα ήπατος όπως περιγράφεται μια προηγούμενη μελέτη [16] ή εντολή ακολουθούμενη κατασκευαστή.

Ανοσοϊστοχημεία

Οι διαφάνειες των καρκινικών ιστών αποπαραφινοποιήθηκαν σε ξυλόλιο και επανυδατώθηκαν μέσω διαβαθμισμένης αλκοόλης ακολουθούμενη από immunohistochemistrical χρώση όπως περιγράφεται μια προηγούμενη μελέτη [17]. Εν συντομία, οι τομές θερμάνθηκαν για 10 λεπτά στους 95-100 ° C σε 10 mmol /L ρυθμιστικού διαλύματος κιτρικού νατρίου (ρΗ 6.0). Τρία τοις εκατό του υπεροξειδίου του υδρογόνου προστέθηκε στα τμήματα για την απενεργοποίηση ενδογενών υπεροξειδασών και κατόπιν προστέθηκαν 10% φυσιολογικό ορό κατσίκας για να εμποδίσει μη ειδική σύνδεση. Οι τομές στη συνέχεια επωάστηκαν στους 4 ° C όλη τη νύκτα με αντι-Wnt-1, ή αντι-c-myc, ή αντισώματα αντι-β-κατενίνης (Santa Cruz Biotechnology, Inc. Santa Cruz, CA). Οι τομές στη συνέχεια επωάστηκαν με βιοτινυλιωμένη IgG αντι-ποντικού ή αντι-κουνελιού IgG (ZSGB-ΒΙΟ, Ltd Πεκίνο, Κίνα) για 30 λεπτά, ακολουθούμενο από συζευγμένη με υπεροξειδάση στρεπταβιδίνη (ZSGB-BIO Co., Ltd.) για 30 λεπτά. Οι τομές χρωματίστηκαν με 3, 3′-διαμινοβενζιδίνη (DAB) για 3 λεπτά και αντίθετα με αιματοξυλίνη. Ο αρνητικός έλεγχος με την παράλειψη του πρωτογενούς αντισώματος που ακολουθείται επίσης το ίδιο πρωτόκολλο. Ο αριθμός των θετικών κυττάρων μετρήθηκε υπό μικροσκόπιο (200 Χ). Η αναλογία των θετικών κυττάρων υπολογίστηκε σε κάθε ομάδα.

κηλίδωση

Σύνολο εκχύλιση Western πρωτεΐνης από ιστούς όγκων χρησιμοποιώντας RIPA ρυθμιστικό (Cell Signaling Technology, Inc. Danvers, ΜΑ) και κηλίδωση Western διεξήχθησαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως μελέτες [18, 19]. Τα ακόλουθα πρωτεύοντα αντισώματα χρησιμοποιήθηκαν: αντι-Wnt-1, αντι-β-κατενίνης, αντι-c-myc, αντι-κυκλίνης D1, αντι-ΜΜΡ-7, αντι-αξίνη-2, αντι-ΑΡΟ, αντι-c- Jun, ή αντι-β-ακτίνης αντισώματα (Santa Cruz Biotechnology, Inc.). Τα δευτερεύοντα αντισώματα που αντιστοιχεί στον τύπο του πρωτογενούς αντισώματος χρησιμοποιώντας αντι-ποντικού ή αντι-κουνελιού IgG υπεροξειδάση κοχλιαρίας (HRP) -σύζευγμα (1: 1000 αραίωση, Cell Signaling Technology, Inc.). Οι ζώνες πρωτεΐνης έγιναν ορατές με την ενισχυμένη κιτ χημειοφωταύγειας. Η ποσοτικοποίηση των ζωνών πρωτεΐνης μετρήθηκαν με FluorChem Συστήματα απεικόνισης (Άλφα Innotech). Τα δεδομένα τυποποιήθηκαν με β-ακτίνη.

Στατιστική ανάλυση

Όλα τα δεδομένα εκφράζονται ως μέσοι όροι ± τυπική απόκλιση (S.D.). Οι διαφορές μεταξύ των ομάδων ελέγχου και θεραπείας εκτιμήθηκαν με μονόδρομη ANOVA που ακολουθείται από το τεστ Student-Newman-Keuls (SNK). Οι διαφορές θεωρήθηκαν σημαντικές σε

P

C, 10 mg /kg σ.β. D 20 mg /kg σ.β. * P C, 10 mg /kg σ.β. D 20 mg /kg σ.β. * P C, 10 mg /kg σ.β. D 20 mg /kg σ.β. * Ρ & lt? 0,05, ** ρ & lt?. 0,01, σε σύγκριση με την ομάδα θετικού ελέγχου

Η

Για να επιβεβαιωθεί ανοσοϊστοχημική αποτελέσματα της β-κατενίνης, Wnt και c-myc σε ξενομοσχεύματα, β-κατενίνης, Wnt και η έκφραση πρωτεΐνης c-myc επίσης εξετάστηκε σε ξενομοσχεύματα με κηλίδωση Western. Τα αποτελέσματα φαίνονται στο Σχ. 5. TRF επίσης μείωσε σημαντικά την έκφραση του β-κατενίνης, Wnt και c-myc πρωτεΐνης σε ξενομοσχεύματα σε σύγκριση με την ομάδα θετικού ελέγχου (

ρ

& lt? 0,05). Τα αποτελέσματα αυτά έχουν την ίδια τάση με τα ευρήματα με ανοσοϊστοχημεία. Για να καθορίσει περαιτέρω τους πιθανούς μηχανισμούς της TRF για αναστολή της ανάπτυξης ξενομοσχευμάτων, μονοπάτια Wnt σχετίζονται πρωτεΐνη όπως η κυκλίνη D1, ΜΜΡ-7, αξίνη-2, c-jun, APC, επιζών, GSK-3β προσδιορίστηκε σε αυτή τη μελέτη. Όπως φαίνεται στο Σχ. 5 και 6, TRF μείωσε σημαντικά την έκφραση της κυκλίνης D1 και survivin σε ξενομοσχεύματα. TRF αύξησε σημαντικά την έκφραση αξίνης-2 και GSK-3β σε ξενομοσχεύματα. Ωστόσο, TRF έδειξε μια διαφορετική τάση στην έκφραση της ΜΜΡ-7 και c-jun σε ξενομοσχεύματα μεταξύ αρσενικών και θηλυκών ποντικών σε σύγκριση με την ομάδα θετικού ελέγχου

* ρ & lt?. 0,05, σε σύγκριση με την ομάδα θετικού ελέγχου.

η

* p & lt? 0,05, σε σύγκριση με την ομάδα θετικού ελέγχου

η

Συζήτηση

το φοινικέλαιο περιέχει κυρίως δύο είδη των κοινών λιπαρών οξέων, παλμιτικό οξύ. (C16) και ελαϊκό οξύ (C18), τα οποία έχουν χρησιμοποιηθεί ως φυσική τροφή πάνω από πέντε χιλιάδες χρόνια. φοινικέλαιο, όχι μόνο μπορεί να είναι εύκολη πέψη και την απορρόφηση, αλλά είναι επίσης να επωφεληθούν στο ανθρώπινο σώμα, λόγω των υψηλών στερεών γλυκερίνης που εμποδίζουν το φαγητό από την υδρογόνωση και κρατήστε το σταθερά για να είναι κατάλληλο για ζεστό κλίμα ως ένα καλό καρύκευμα στη ζύμη και το ψωμί. Εξευγενισμένο ελαΐνης φοίνικα έχει πλούσια σε τοκοφερόλες και τοκοτριενόλες, που είναι ισομερή της βιταμίνης Ε Η βιταμίνη Ε, ένα λιποδιαλυτή βιταμίνη, εξάγεται από φοινικέλαιο, που περιέχει κυρίως α-, β-, γ-, δ-τοκοτριενόλη, ή α- τοκοφερόλη. Έτσι, φοινικέλαιο θεωρείται ως ένα μείγμα από βιταμίνη Ε, η οποία είναι γνωστή ως κλάσματα από παλάμη τοκοτριενόλη πλούσιο έλαιο (TRF). TRF έχει πολλές βιολογικές δραστηριότητες, ειδικά τοκοτριενόλες μειωμένη αθηροσκλήρωση των κουνελιών, τα οποία μπορεί να σχετίζονται με την αντιοξειδωτική δράση του TRF [20], η βελτίωση της παγκρεατικής φλεγμονής και ίνωσης σε DBTC επαγόμενη αρουραίους CP [21], την πρόληψη ή τη θεραπεία ασθενειών σε σκύλους [22], νευροπροστατευτικές επιδράσεις [23], και τις δραστηριότητες κατά του καρκίνου [2]. Στην ερευνητική ομάδα μας, χρησιμοποιήσαμε υψηλή δόση των 20 mg /kg του TRF που ήταν ισοδύναμη με 1,09 mg βιταμίνης Ε /ποντίκια ανά ημέρα. Είναι μικρότερη από ότι στην ημερήσια πρόσληψη τοκοτριενόλες (1.9-2.1 mg /ημέρα /άτομο) για τα ιαπωνικά [24] και Finish διατροφή (10.3 χλστγρ α-τοκοφερόλη /ημέρα /άτομο) [25]. Σε προηγούμενες μελέτες μας, τοκοτριενόλες έδειξε μια αναστολή της ανάπτυξης του καρκίνου του παχέος εντέρου SW620 και κύτταρα ΗΤ29 [1, 2]. Αν και μια δοσο-εξαρτώμενη σχέση του βάρους του όγκου σε θηλυκούς ποντικούς δεν δούμε σε αυτή τη μελέτη, η αναστολή της ανάπτυξης του όγκου παρατηρήθηκε σε κάθε ομάδα. Μπορεί να είναι χαμηλή απορρόφηση στην υψηλή δόση ομάδα TRF κατά τη διάρκεια μερικών εβδομάδων σίτιση. Έτσι, σε αυτή τη μελέτη, τα ευρήματά μας έδειξαν ότι TRF είχε δυνατότητες αναστολής της εμβολιάστηκαν ανθρώπινου κόλον SW620 καρκίνος κύτταρα να γυμνά ποντίκια, συμπεριλαμβανομένων των επιπτώσεων στην ανάπτυξη του όγκου, τα επίπεδα αντιοξειδωτικών στο ήπαρ, και τους πιθανούς μηχανισμούς.

TRF ενισχυμένη δραστηριότητες του αντιοξείδωση στο ήπαρ

είναι περιβαλλοντικά επιβλαβείς παράγοντες, όπως η υπεριώδης ακτινοβολία, ιονίζουσα ακτινοβολία, που εκτίθενται σε χημικά καρκινογόνα, κλπ εκτεθεί σε οργανισμούς για να παράγουν ελεύθερες ρίζες, όπως αντιδραστικές ρίζες οξυγόνου (ROS), αντιδραστικά είδη άζωτο (RNS). Σε παθολογικές καταστάσεις, αν οι ελεύθερες ρίζες υπερβαίνει τις αμυντικές δυνατότητες του αντιοξειδωτικού αμυντικού συστήματος, οι ελεύθερες ρίζες μπορεί να συσσωρευτεί στους οργανισμούς να προκαλέσει το οξειδωτικό στρες. Βιοφίλμ φωσφολιπίδιο υπολείμματα πολυακόρεστων λιπαρών οξέων είναι εξαιρετικά ευαίσθητα σε ελεύθερες ρίζες, η οποία είναι η πλέον σημαντικός στόχος για ριζική επίθεση να συμβεί υπεροξείδωση των λιπιδίων [26, 27]. Λιπιδίων μεταβολίτες υπεροξείδωση μπορούν να επιτεθούν βάσεις του DNA, η οποία προκάλεσε μια ποικιλία από οξειδωτικές βλάβες του DNA να αυξηθεί η αστάθεια του γονιδιώματος. Αυτό είναι ένα κοινό ότι οι ελεύθερες ρίζες συγκέντρωση και αντιοξειδωτική δράση διαταραχές συμβαίνουν πάντα σε καρκίνους [28]. Τοκοτριενόλες σαρκοφάγων ελεύθερες ρίζες με την υπεροξείδωση των λιπιδίων. Τοκοτριενόλες παρουσίασαν ισχυρή αντιοξειδωτική ικανότητα από τοκοφερόλες [29]. Όταν τοκοτριενόλη και τοκοφερόλη έχουν δοθεί σε αρουραίους ή ανθρώπους, τοκοτριενόλη έδειξε οξείδωση προστατευτική δράση, αλλά δεν επηρεάζει την τοκοφερόλη [30]. Στη μελέτη μας, μικρή ποσότητα τοκοτριενόλες και α-τοκοφερόλη βρίσκεται στο TRF. Ωστόσο, TRF έδειξαν μειωμένη ανθρώπινα ξενομοσχεύματα καρκίνου του παχέος εντέρου σε γυμνούς ποντικούς. Αντιοξειδωτική δράση του τοκοτριενόλες επιτυγχάνεται με επαγωγή αντιοξειδωτικά ένζυμα όπως δισμουτάση υπεροξειδίου (SOD) και η καταλάση (CAT) [31], μειωμένη συνένζυμο II (NADPH), γλουταθειόνη υπεροξειδάσης (GSH-Ρχ) [32]. Αυτά τα ένζυμα των ελεύθερων ριζών συμπεριλαμβανομένων των σούπερ οξυγόνου ελεύθερων ριζών [33], την προστασία και τη διατήρηση της υγείας του οργανισμού. Σε αυτή τη μελέτη, TRF θα μπορούσε να αυξήσει τη δραστικότητα της CAT σε ποντικούς. Πρότεινε ότι SW620 κυττάρων θα μπορούσε να επηρεάσει το αντιοξειδωτικό αμυντικό σύστημα, καθιστώντας τα ποντίκια στο οξειδωτικό στρες. TRF θα μπορούσε να αυξήσει τις δραστηριότητες της SOD και της GSH-Px να σβήνω τις ελεύθερες ρίζες με σκοπό την προστασία των συνθηκών υγείας. Αλλά εμείς δεν εξήγησε γιατί TRF αύξησε επίσης το επίπεδο της MDA η οποία αντανακλάται στα επίπεδα της οξείδωσης των λιπιδίων.

TRF ανέστειλε ξενομοσχευμάτων σε ποντίκια με κανονισμό της Wnt οδών

μονοπάτια Wnt παίξει ένα σημαντικό ρόλο σε πολλές σύνθετη διαδικασία βιοχημικών αντιδράσεων στα κύτταρα. Σε κανονικά μη-πολλαπλασιαζόμενα κύτταρα, όπως επιθηλιακά κύτταρα του παχέος εντέρου, τα σήματα Wnt είναι αδύναμοι και μόνο ένα πολύ μικρό ποσό της ενδοκυτταρικής πρωτεΐνης β-κατενίνης [34]. Η ενεργοποίηση των σημάτων Wnt στα εντερικά κύτταρα μπορούν να επάγουν τον πολλαπλασιασμό επί του εντερικού σωματιδίου κρύπτη και τελικά, να οδηγήσει στην εμφάνιση του καρκίνου του παχέος εντέρου [35, 36]. β-κατενίνης ελέγχει την κανονική οδό και ρυθμίζεται από το σύμπλεγμα καταστροφή, που αποτελείται από δύο κινάσες Ser /Thr, GSK-3β (γλυκογόνο συνθάσης κινάσης-3β) και CKI, δύο πρωτεΐνες ικρίωμα, Axin και APC (αδενωματώδη πολυποδίαση coli) [37 ]. Όταν ο συνδέτης /WG Wnt είναι απούσα, Axin συγκρότημα στο κυτταρόπλασμα σε μία σταθερή κατάσταση, CK1α, ΟδΚ3β στο συγκρότημα διαδοχικά φωσφορυλιωμένη β-κατενίνης, φωσφορυλιωμένη β-κατενίνη σε ειδικές θέσεις θα μπορούσε να αναγνωριστεί από το ένζυμο Ε3 λιγκάσης της ουμπικουϊτίνης β-Trcp , και στη συνέχεια να απο-διαβάθμισης με πρωτεασώματος, για να εξασφαλιστεί η συμπύκνωμα της β-κατενίνης διατηρείται σε σχετικά χαμηλό επίπεδο [38]. Μόλις Wnt signalings ενεργοποιηθεί, Wnt πρωτεΐνη δεσμεύεται με Frizzled (Fz) υποδοχείς, το ενεργοποιημένο Fz προσληφθεί Dsh στην μεμβράνη, και σε συνδυασμό με Axin στο συγκρότημα προς αποπολυμερισμό του συμπλόκου το οποίο σύναψη APC, Axin και GSK-3β [39]. Το συγκρότημα αποπολυμερισμού και β-κατενίνης στο κυτταρόπλασμα είναι σωρευτικά, τότε tranlocation στην πυρηνική και σε συνδυασμό με την (παράγοντας Τ-κυττάρων) TCF για την ενεργοποίηση του Wnt γονίδιο το οποίο μπορεί να προκαλέσει την προς τα κάτω γονίδια όπως c-myc, κυκλίνη D1, μεταγραφή survivin που σχετίζονται με κακοήθεια [40]. ΡΡ1 φωσφατάση πρωτεΐνης και ΡΡ2Α συμμετέχουν επίσης στη διαδικασία αυτή. Αυτοί οι παράγοντες μπορούν να συνδυαστούν με Axin, και APC να αποφωσφορυλιώνει Axin και β-κατενίνης και αναστέλλουν το σχηματισμό συμπλόκου και την αποικοδόμηση των β-κατενίνης [5]. Εκκρίνεται κατσαρωμένα σχετίζονται πρωτεΐνες (SFRPs), οι ανταγωνιστές Wnt, ως οικογένεια νέων παχέος ογκοκατασταλτικών υποψήφια γονίδια, θα μπορούσε να αναστείλει σηματοδότηση Wnt και την έκφραση των γονιδίων στόχων β-κατενίνης κυκλίνη D1 και c-myc σε β-κατενίνης ενεργοποιούμενη κόλον καρκίνος SW480 και HCT-116 κύτταρα, τα οποία οδηγούν σε αναστολή της ανάπτυξης του όγκου [41, 42].

Φωτογραφικές όπως εσκουλετίνης [43], λουτεολίνη [44], διοσκινης [45] και της ρεσβερατρόλης [46] έχουν έχουν αναφερθεί με τον καρκίνο αντι-παχέος εντέρου, μέσω κανονισμού του Wnt μονοπατιού /β-κατενίνης. Wnt σηματοδοτικό μονοπάτι ανησυχεί να είναι ένας πιθανός στόχος για νέα θεραπευτικά καρκίνου του παχέος εντέρου. Επιπλέον, τοκοτριενόλες έχουν μια ισχυρή επίδραση κατά του όγκου και τη ρύθμιση του μονοπατιού σηματοδότησης Wnt η οποία μπορεί να παίζουν ένα ρόλο στην μηχανισμό κατά του όγκου. γ-Tocotrienol μπορεί να αναστέλλει την αγγειογένεση του SGC-7901-CM-επαγόμενη HUVECs, η οποία είναι θεμελιώδους σημασίας στην ανάπτυξη του όγκου, και η ανασταλτική δράση σχετίζεται με την δραστηριότητα μειώνουν D1 β-κατενίνης και κυκλίνης [47]. Tocotrienol επίσης ρυθμισμένα προς τα κάτω την έκφραση της β-κατενίνης στα καρκινικά βλαστικά κύτταρα [48]. Σε προηγούμενη μελέτη μας, δ-, γ-Tocotrienol έδειξαν την ανασταλτική της ανάπτυξης σε ανθρώπινα κύτταρα καρκίνου του παχέος εντέρου SW620 και HCT-8 μέσω καταστολής της δραστικότητας του Wnt μονοπατιών σηματοδότησης [1, 2]. Προκειμένου να διερευνηθεί κατά πόσον τοκοτριενόλες επίσης δείχνουν επιδράσεις κατά του όγκου

in vivo

, τα ανθρώπινα ξενομοσχεύματα καρκίνου του παχέος εντέρου σε ποντίκια Balb /c γυμνά ποντίκια χρησιμοποιήθηκαν για να μελετηθεί περαιτέρω η παρόμοιο αποτέλεσμα αναστολή της ανάπτυξης του όγκου που προκαλείται από TRF. TRF εξάγεται από φοινικέλαιο και εμπλουτισμένο σε τοκοτριενόλες. TRF έδειξε τη λειτουργία βιολογική αντικαρκινικών και βρέθηκε επίσης να μειώσει τα επίπεδα της IL-6, IL-8 και VEGF που σχετίζονται με την αγγειογένεση in HUVEC και 4Τ1 ποντικού καρκίνος του μαστού κύτταρα [49]. Μετά συμπλήρωμα TRF, η έκφραση της IL-24 mRNA, μιας κυτοκίνης αναφερθεί ότι έχει αποτελέσματα κατά του όγκου, αύξηση κατά 2 φορές στους ιστούς του όγκου των ποντικών BALB /c [50]. Τα ευρήματά μας έδειξαν ότι TRF μείωσε σημαντικά το βάρος του ξενομοσχευμάτων, αύξησε την έκφραση των οδών Wnt παραγόντων που συνδέονται με Axin-2, της GSK-3β, APC και μείωσε την πρωτεΐνη έκφραση Wnt-1, β-κατενίνης και στόχος β-κατενίνης γονιδίων κυκλίνης D1 , c-myc, επιβιώνουν σε ξενομοσχεύματα γυμνών ποντικών. Αυτά τα δεδομένα έδειξαν ότι TRF ανέστειλε την ανάπτυξη του ανθρώπινου κόλον ξενομοσχευμάτων καρκίνου σε γυμνούς ποντικούς από την καταστολή των οδών Wnt. Προηγούμενες μελέτες έδειξαν επίσης ότι η καταστολή του μονοπατιού σηματοδότησης Wnt είχε σχέση με την αναστολή του καρκίνου του κόλον κύτταρα πολλαπλασιασμού και της διαφοροποίησης, επαγωγή απόπτωσης, καταστολή της ανάπτυξης του κόλου όγκου [51, 52].

Αν και α-τοκοφερόλη και τοκοτριενόλες είναι γνωστή ως ένα ισχυρό αντιοξειδωτικό και δυνητικών αντικαρκινικών παραγόντων, η σχέση μεταξύ της ικανότητας των αντιοξειδωτικών και αντικαρκινικές δεν είναι σαφής. Είναι ενδιαφέρον ότι η σηματοδότηση Wnt μονοπάτι δεν συνδέεται μόνο με την ανάπτυξη όγκου, αλλά επίσης μετέχει στην οξειδωτικού στρες [53, 54]. Ωστόσο, τα συμπληρώματα annatto-τοκοτριενόλη επαγόμενη απόπτωση και γήρανση-όπως τερματικό σύλληψη πολλαπλασιασμό σε κύτταρα όγκου και σε /neu διαγονιδιακούς ποντικούς HER-2, και αυξημένη παραγωγή ROS σε κύτταρα όγκου [55]. Αυτό έδειξε ότι η αντικαρκινική δραστικότητα του τοκοτριενόλη μπορεί να σχετίζεται με την επαγωγή του οξειδωτικού στρες. Στη μελέτη μας, TRF αύξησε τις δραστηριότητες της GSH-Px και CAT στο ήπαρ των ποντικών. Ωστόσο, οι ακριβείς μηχανισμοί της TRF επί των ανασταλτικών της ανάπτυξης όγκου και για τη ρύθμιση αντιοξειδωτικό δείκτης που απαιτείται για να μελετηθεί περαιτέρω.

Εν περιλήψει, τοκοτριενόλη πλούσιο κλάσμα από φοινικέλαιο (TRF) ανέστειλε την ανάπτυξη των ξενομοσχευμάτων ανθρώπινου καρκίνου του παχέως εντέρου σε ποντικούς Balb /c γυμνά ποντίκια. Αυτή η αναστολή εν μέρει συνέβαλε να αυξηθεί το σύστημα των ενζύμων αντιοξειδωτική και επηρεάζουν την έκφραση των οδών Wnt που σχετίζονται με την πρωτεΐνη. Έτσι, TRF έχει ισχυρή ανέστειλε την ανάπτυξη του όγκου

in vivo

.

Υποστήριξη Πληροφορίες

S1 αρχείου. Περιέχει πίνακες Α, Β, Γ

πίνακα Α σε S1 αρχείου, η επιρροή του TRF επί τον συντελεστή όργανο του BALB /c γυμνά ποντίκια. Πίνακας Β S1 αρχείου, τα αποτελέσματα της TRF σε δείκτες των αιματολογία στα γυμνά ποντίκια. Πίνακας C σε S1 αρχείου, τα αποτελέσματα της TRF για την ταξινόμηση των λευκοκυττάρων στα γυμνά ποντίκια

doi:. 10.1371 /journal.pone.0122175.s001

(DOCX)

Ευχαριστίες

Οι συγγραφείς ευχαριστήσω τον Δρ Yu BingYun ο οποίος προέρχεται από το Palm Nutraceuticals Sdn.Bhd, της Μαλαισίας για την ευγενική παροχή tocotrienol πλούσιο κλάσμα από φοινικέλαιο (TRF).