Αφηρημένο

Ιστορικό

Διαταραχές στα μόρια προσκόλλησης κυττάρου συνδέονται με μεταβολές στην συγκροτήματα καντερίνη-κατενίνης και είναι πιθανό να παίξει μείζονα ρόλο στην εισβολή και τη μετάσταση? τις επιπτώσεις τους στην πρώιμη προκαρκινικά στάδια παραμένει ακόμη άγνωστη. Δείξαμε ALCAM υπερέκφραση στις αρχές στοματικές αλλοιώσεις και κυτταροπλασματική συσσώρευση της σε στοματικό καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων (OSCC) να είναι ένας προγνωστικός δείκτης της εξέλιξης της νόσου και την κακή πρόγνωση. Αυτή η μελέτη εξετάσαμε την υπόθεση ότι μεταβολές στην Ε-καδερίνης και β-κατενίνη εκφράσεις είναι πρώιμα γεγονότα στην στοματική ογκογένεση, που συνδέονται με την πρόγνωση της νόσου, και συσχετίζονται με διαταραχές στην έκφραση ALCAM.

Μέθοδοι

Εκφράσεις Ε-καδερίνης και β-κατενίνης αναλύθηκαν στην ίδια ομάδα των 105 OSCCs, 76 στοματικές αλλοιώσεις και 30 κανονικά από το στόμα ιστούς με ανοσοϊστοχημεία και συσχετίστηκε με κλινικοπαθολογικών παραμέτρων και την πρόγνωση. Η επίδραση του siRNA μεσολαβεί knockdown ALCAM επί Ε-καδερίνης και β-κατενίνη προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας κηλίδα western, συνεστιακή μικροσκοπία και ανάλυση RT-PCR σε από του στόματος καρκινικά κύτταρα.

Αποτελέσματα

Σημαντική απώλεια του μεμβρανώδης έκφραση Ε-καδερίνης και β-κατενίνης παρατηρήθηκε από την κανονική, υπερπλασία, δυσπλασία να OSCCs (p

τάση & lt? 0.001)? και συσχετίστηκε με κυτταροπλασματική συσσώρευση ALCAM σε OSCCs (p = 0.006). Η πολυπαραγοντική ανάλυση έδειξε απώλεια μεμβράνη β-κατενίνης και ALCAM /β-κατενίνης

πυρηνικής /κυτταροπλασματική συσσώρευση να είναι σημαντικοί προγνωστικοί για τα τέλη κλινικό στάδιο (p & lt? 0.001, OR = 8.7? P = 0.006, OR = 9,9, αντίστοιχα) και κομβικό μετάσταση (ρ = 0.003, OR = 3.8? ρ = 0.025, OR = 3,4 αντίστοιχα). παλινδρόμησης Cox έδειξε E-cadherin απώλεια μεμβράνης /ALCAM κυτταροπλασματική έκφραση [p & lt? 0.001? HR = 4.8] να είναι ανεξάρτητοι δυσμενείς prognosticators στην OSCCs. siRNA μεσολαβεί αποσιώπηση των ALCAM οδήγησε σε ταυτόχρονη αύξηση της E-cadherin και β-κατενίνης τόσο σε επίπεδο μεταγραφής και πρωτεΐνες.

Συμπεράσματα

Απώλειες E-cadherin και β-κατενίνης εκφράσεις είναι νωρίς γεγονότα στην προφορική ογκογένεση? ενώσεις τους με την επιθετική συμπεριφορά του όγκου και υποτροπή της νόσου υπογραμμίζουν το δυναμικό τους ως προγνωστικοί δείκτες. Συσχέτιση της απώλειας της Ε-καδερίνης και β-κατενίνης με κυτταροπλασματική συσσώρευση ALCAM τόσο

in vitro

και

in vivo

υποδηλώνει ότι αυτές οι δυναμικές αλλαγές στο σύστημα κυτταρικής προσκόλλησης μπορεί να παίζει κεντρικό ρόλο στον καρκίνο του στόματος .

Παράθεση: Kaur J, Sawhney Μ, Dattagupta S, Shukla ΝΚ, Srivastava Α, Walfish PG, et al. (2013) Κλινική σημασία των αλλαγμένη έκφραση της β-κατενίνης και Ε-καντερίνης του στόματος Δυσπλασία και καρκίνος: πιθανή σχέση με την έκφραση ALCAM. PLoS ONE 8 (6): e67361. doi: 10.1371 /journal.pone.0067361

Επιμέλεια: Hiromu Suzuki, Σαπόρο Ιατρικό Πανεπιστήμιο, την Ιαπωνία

Ελήφθη: 30 Νοεμ 2012? Αποδεκτές: 16η του Μάη του 2013? Δημοσιεύθηκε: 28 Ιούνη 2013

Copyright: © 2013 Kaur et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Η οικονομική υποστήριξη του έργου αυτού από το Ίδρυμα Όρους Σινά του Τορόντο Da Vinci Gala Έρανος, ο Άλεξ και η Simona Shnaider πρόεδρος σε καρκίνο του θυρεοειδούς, του Καναδά Ινστιτούτα Ερευνών Υγείας για καρέκλα σε προχωρημένο καρκίνο του Diagnostics, Γιώργος Knudson Oakdale Golf Ταμείο Τουρνουά Raiser, και το Τμήμα Mount Sinai Hospital Ιατρικής Ταμείου Έρευνας αναγνωρίζεται με ευγνωμοσύνη. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς δήλωσαν ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

διαταραχές στην ενορχηστρωμένη διαμόρφωση της κυτταρικής προσκόλλησης ελαττωμάτων αιτία στην αρχιτεκτονική ιστού που παίζουν κρίσιμους ρόλους στην ανάπτυξη του καρκίνου [1] – [3]. E-cadherin εντοπίζεται στην επιφάνεια των επιθηλιακών κυττάρων σε περιοχές επαφής κυττάρου-κυττάρου είναι γνωστή ως προσκολλημένους συνδέσμους και εμπλέκεται στην προσκόλληση κυττάρου-κυττάρου σε επιθηλιακούς ιστούς [4] – [6]. β-κατενίνης αλληλεπιδρά με καντερίνες μέσω κυτταροπλασματική περιοχή του. α-κατενίνης συνδέει την Ε-καδερίνη και σύμπλοκο β-κατενίνης σε νημάτια ακτίνης. Η διάσταση του συμπλόκου Ε-καδερίνης-κατενίνης από κυτταρική μεμβράνη είναι σημαντική σε κακοήθη πρόοδο. Σε πολλές επιθηλιακών καρκίνων, μεμβρανώδη Ε-καδερίνης χάνεται και β-κατενίνη διίσταται στο κυτταρόπλασμα και συσσωρεύεται στον πυρήνα ως παράγοντα μεταγραφής, ταυτόχρονα με την εξέλιξη του όγκου [5]. Κάτω ρύθμιση του μεμβρανώδη Ε-καδερίνης και β-κατενίνης, και κυτταροπλασματική /πυρηνική συσσώρευση του β-κατενίνης έχουν αναφερθεί στο παρελθόν σε αρκετούς καρκίνους και κρατήστε υπόσχεση ως προγνωστικοί δείκτες [7].

την ανάπτυξη στοματικών πλακώδους καρκίνωμα (OSCC) είναι μια διαδικασία πολλών σταδίων που περιλαμβάνει αλληλεπιδράσεις μεταξύ πολλών παραγόντων, όπως ο καπνός που σχετίζονται ενδοστοματική καρκινογόνα, παξιμάδι του arec, betel λίρες και η κατανάλωση αλκοόλ, και /ή ιογενών λοιμώξεων [8], [9]. Οι OSCCs συχνά προηγείται κλινικά έκδηλη βλάβες συχνά λευκοπλακία, και ο κίνδυνος των πολλαπλών καρκίνων είναι 5-10 φορές μεγαλύτερη σε ασθενείς με OSCCs προηγείται λευκοπλακία [8], [10]. Αυτές οι βλάβες συχνά εξελίσσονται σε καρκίνο εάν δεν αντιμετωπισθεί [11]. Ένας μέσος ετήσιος ρυθμός μετασχηματισμού του 1% έχει προταθεί με βάση διάφορες μελέτες αναφέρουν 5% μετασχηματισμού που παρατηρείται σε 5 χρόνια [11], [12]. Στην Ινδία, πάνω από το 80% των OSCCs προκύπτουν από τις υπάρχουσες στοματικές αλλοιώσεις (OLS) [13], [14]. Η ικανότητα να προβλέψουμε το αποτέλεσμα της OLS παραμένει μια μεγάλη πρόκληση για την έγκαιρη παρέμβαση. Η έγκαιρη ανίχνευση των OLS που θα εξελιχθεί σε επεμβατικές όγκους είναι απαραίτητο να βελτιωθεί η κακή πρόγνωση των ασθενών με καρκίνο του στόματος.

Οι δυναμικές αλλαγές στην κυτταρική προσκόλληση που εκδηλώνεται με διαχωρισμό των μεμβρανώδη συγκρότημα E-cadherin-β-κατενίνης εμπλέκεται στην απώλεια των επιθηλιακών συνοχή ως ένα σημαντικό γεγονός στην εισβολή και τη μετάσταση. Ενεργοποιημένα λευκοκύτταρα μόριο κυτταρικής προσκόλλησης (ALCAM) /MEMD /CD166) είναι μια διαμεμβρανική γλυκοπρωτεΐνη του υπεροικογένειας ανοσοσφαιρίνης που μεσολαβεί προσκόλληση κυττάρου-κυττάρου τόσο μέσω ομοφιλική (ALCAM-ALCAM) και ετερόφιλα (ALCAM-CD6) αλληλεπιδράσεις [15], [16]. Δείξαμε έκφραση ALCAM αυξάνεται σε όλες και κυτταροπλασματική συσσώρευση της σε OSCC είναι ένας προγνωστικός δείκτης της εξέλιξης της νόσου και κακή πρόγνωση [17]. Εδώ, επιδιώξαμε να ερευνήσει την κλινική σημασία της Ε-καδερίνης και β-κατενίνη έκφραση σε σειριακές τομές ιστών του ίδιου συνόλου των ασθενών από διαφορετικά στάδια της νόσου με ανοσοϊστοχημεία, για τον εντοπισμό στάδιο-ειδική πρωτεΐνη μετατροπές και προσδιορίζεται η σχέση τους με την έκφραση ALCAM. Οι πειραματικές αποδείξεις προς υποστήριξη των συσχετίσεων μεταξύ διαταραχών στην έκφραση ALCAM και μεταβολές στην Ε-καδερίνης και β-κατενίνης εκφράσεις δόθηκαν από σύντομης παρεμβολής RNA (siRNA) που προκαλείται knockdown ALCAM και προσδιορισμό της αλλαγής στην έκφραση όλων αυτών των τριών πρωτεϊνών τόσο σε μεταγραφή και τα επίπεδα της πρωτεΐνης.

Υλικά και Μέθοδοι

ιστών Δείγματα

Αυτή η μελέτη εγκρίθηκε από την Επιτροπή Ανθρωπίνων Δεοντολογίας του All India Ινστιτούτο Ιατρικών Επιστημών, Νέο Δελχί, Ινδία. Για ανοσοϊστοχημική ανάλυση χειρουργικά ιστών ή δειγμάτων βιοψίας από OSCC, δυσπλασία, υπερπλασία και ιστολογικά φυσιολογικό στοματικών ιστών ελήφθησαν από Χειρουργικής Ογκολογίας Μονάδα Dr. B.R. Αμπεντκάρ Ινστιτούτο Ρόταρυ Αντικαρκινικό Νοσοκομείο, Όλα Ινδία Ινστιτούτο Ιατρικών Επιστημών, Νέο Δελχί, Ινδία, με προηγούμενη ενημέρωσε γραπτή συγκατάθεση των ασθενών.

κλινικοπαθολογοανατομικών Χαρακτηριστικά Ασθενών

Εκατόν πέντε βασικά ασθενείς OSCC (εύρος ηλικίας, 29-75 ετών, μέση ηλικία 40 έτη) που υποβάλλονται σε θεραπευτική χειρουργική επέμβαση καρκίνου του στόματος, στην χειρουργική Ογκολογική Μονάδα του Δρ BR Αμπεντκάρ Ινστιτούτο Ρόταρυ Cancer Hospital, Όλα Ινδία Ινστιτούτο Ιατρικών Επιστημών, Νέο Δελχί, Ινδία είχαν εγγραφεί στη μελέτη αυτή μετά από προηγούμενη γραπτή συγκατάθεση των ασθενών. Η κλινική και παθολογική δεδομένων, συμπεριλαμβανομένης της κλινικής σταδιοποίησης ΤΝΜ (όγκος, κόμβος, μετάσταση βασίζεται στην Ένωση Διεθνές Κέντρο le ταξινόμηση του καρκίνου ΤΝΜ), τη θέση της βλάβης, ιστοπαθολογικές διαφοροποίηση, την ηλικία και το φύλο καταγράφηκαν σε ένα προ-σχεδιασμένο performa όπως περιγράφηκε προηγουμένως [ ,,,0],17]. Η διάγνωση βασίστηκε σε κλινική εξέταση και ιστοπαθολογική ανάλυση των δειγμάτων ιστού. Η κατανομή χώρο των περιπτώσεων OSCC ήταν: στοματικού βλεννογόνου (36), τη γλώσσα (35), κυψελίδα (12), τα χείλη (6) και άλλους δικτυακούς τόπους (16), συμπεριλαμβανομένων των ginigivobuccal αύλακα, σκληρό ουρανίσκο, τη μαλακή υπερώα, retromolar τρίγωνο και το δάπεδο του στόμα. Οι όγκοι ιστολογικά βαθμολογήθηκαν ως καλά, μέτρια ή κακή διαφοροποιούνται ΤΣΡ. Βιοψίες από OLS με ιστολογική ένδειξη της υπερπλασίας (56 περιπτώσεις) και δυσπλασία (20 περιπτώσεις) συμπεριλήφθηκαν επίσης σε αυτή τη μελέτη. Η κατανομή ιστοσελίδα της OLS ήταν: στοματικού βλεννογόνου (53), τη γλώσσα (12), κυψελίδα (5), των χειλιών (4) και ginigivobuccal αύλακα (2). Τριάντα μη κακοήθεις ιστοί που λαμβάνονται από ένα μακρινό σημείο της OSCCs (με ιστολογικά επιβεβαιωμένο κανονικά από το στόμα επιθήλιο εδώ να αναφέρονται ως στοματική φυσιολογικούς ιστούς) αξιολογήθηκαν επίσης για έκφραση ALCAM. Μετά την εκτομή, οι ιστοί αμέσως καταψύχθηκαν σε υγρό Ν

2 και αποθηκεύτηκε στους -80 ° C μέχρι την περαιτέρω χρήση και ένα κομμάτι συλλέχθηκε σε 10% φορμαλίνη και εγκλείστηκαν σε παραφίνη για ιστοπαθολογική και ανοσοϊστοχημικές αναλύσεις.

Ανοσοϊστοχημεία

παραφίνης ενσωματωμένα τμήματα (5 μm πάχος) δείγματα ανθρώπινου ιστού του στόματος χρωματίστηκαν με αιματοξυλίνη και ηωσίνη για ιστοπαθολογική ανάλυση, και ανοσοχρώση έγινε σε σειριακές τομές όπως περιγράφηκε προηγουμένως από Sawhney

κ.ά.

. [17]. Εν συντομία, τομές ιστού μετά από ανάκτηση αντιγόνου σε κιτρικό ρυθμιστικό επωάστηκαν με αντι-Ε-καδερίνης ή αντι-β-κατενίνης αντισώματα (0,2 μg /ml) (Santa Cruz Biotechnology Inc., Santacruz, CA) για 16 ώρες στους 4 ° C. Αντισώματα ανιχνεύθηκαν χρησιμοποιώντας βιοτινυλιωμένο δευτερογενές αντίσωμα και επισημασμένο με υπεροξειδάση στρεπταβιδίνη συγκρότημα χρησιμοποιώντας Dako LSAB συν κιτ (Dako Labs, Glostrup, Δανία) χρησιμοποιώντας διαμινοβενζιδίνη (DAB) ως χρωμογόνο. Σε αρνητικούς ελέγχους, το πρωτογενές αντίσωμα αντικαταστάθηκε από μη-άνοση IgG του ίδιου ισότυπου να εξασφαλίσει ειδικότητα. Ο καρκίνος του μαστού τομές ιστού με γνωστές ανοσοθετικότητα για Ε-καδερίνης ή β-κατενίνης χρησιμοποιήθηκαν ως θετικοί μάρτυρες σε κάθε παρτίδα των τμημάτων που αναλύθηκαν.

Θετική Κριτήριο για ανοσοϊστοχημική χρώση

Η ανοσοχρώση αξιολογήθηκε σε τυχαία επιλέγονται πέντε μη επικαλυπτόμενες περιοχές των τομών ιστού με επιθηλιακά κύτταρα περισσότερο από 80%. Για το E-cadherin, ειδική χρώση στην μεμβράνη ορίστηκε ως θετική χρώση. Τα πλακίδια βαθμολογήθηκαν ως ακολούθως: ≥50% κύτταρα όγκου που δείχνει ανοσοαντιδραστικότητα βαθμολογήθηκαν ως θετικά για έκφραση Ε-καδερίνης, ενώ εκείνοι που δείχνει ανοσοχρώση σε & lt? Κύτταρα όγκου κατά 50% βαθμολογήθηκαν ως αρνητικά [18]. Για την έκφραση της πρωτεΐνης β-κατενίνης, ειδική χρώση στην μεμβράνη /κυτταρόπλασμα /πυρήνων ορίστηκε ως θετική χρώση. Για τη χρώση της μεμβράνης τα πλακίδια βαθμολογήθηκαν ως ακολούθως: κύτταρα όγκου ≥50% που δείχνει ανοσοαντιδραστικότητα βαθμολογήθηκαν ως θετικά, ενώ εκείνοι που δείχνει ανοσοχρώση σε & lt? Κύτταρα όγκου κατά 50% βαθμολογήθηκαν ως αρνητικά [18]. Για κυτταροπλασματική /πυρηνική χρώση των β-κατενίνης Τα πλακίδια βαθμολογήθηκαν ως ακολούθως: 0, & lt? Κύτταρα όγκου 10% που δείχνει ανοσοαντιδραστικότητα? 1 = 10-30 κύτταρα% του όγκου δείχνει ανοσολογική? 2, ≥31-50 κύτταρα% του όγκου δείχνει ανοσολογική? 3, & gt? 50 κύτταρα% του όγκου δείχνει ανοσολογική αντίδραση. Η ανοσοϊστοχημική έρευνα ήταν τυφλό, δηλαδή οι διαφάνειες κωδικοποιήθηκαν και παθολόγος δεν έχουν προηγούμενη γνώση του τοπικού φορτίου του όγκου, lymphonodular εξάπλωση και την ταξινόμηση των OSCCs ενώ σκοράροντας την ανοσολογική αντίδραση.

Συνέχεια Μελέτη

Εβδομήντα-δύο από τους 105 ασθενείς OSCC, οι οποίοι υποβλήθηκαν σε θεραπεία της πρωτοπαθούς OSCC την περίοδο 2002-2005, θα μπορούσαν να παρακολουθούνται τακτικά στην κλινική παρακολούθηση, ενώ 33 ασθενείς είχαν χαθεί για την παρακολούθηση. Επιβίωση κατάσταση των ασθενών επαληθεύτηκε και να ενημερώνονται τακτικά από τα αρχεία Tumor Registry, Ινστιτούτο του Ρόταρυ Αντικαρκινικό Νοσοκομείο, το Δεκέμβριο του 2010. Σύμφωνα με το πρωτόκολλο μας, οι ασθενείς OSCC με Τ

1 και Τ

2 όγκοι υποβλήθηκαν σε θεραπεία με ριζική ακτινοθεραπεία ή χειρουργική επέμβαση και μόνο, ενώ πλειονότητα των ασθενών με Τ

3 και Τ

4 νόσος κατεργάστηκαν χρησιμοποιώντας έναν συνδυασμό ρίζα χειρουργείο που ακολουθείται από μετεγχειρητική ρίζα ακτινοθεραπεία όπως περιγράφεται [19]. Οι ασθενείς παρακολουθήθηκαν περιοδικά και τον χρόνο επανεμφάνισης καταγράφηκε. Εάν ένας ασθενής πέθανε κατά τη διάρκεια της παρακολούθησης, ο χρόνος επιβίωσης των ασθενών λογοκρίθηκε κατά τη στιγμή του θανάτου. Ιατρικό ιστορικό, κλινική εξέταση, και ακτινολογική αξιολόγηση χρησιμοποιήθηκαν για να προσδιοριστεί αν ο θάνατος προήλθε από υποτροπιάζοντα καρκίνο (ασθενείς με υποτροπιάζουσα) ή από οποιαδήποτε άλλη αιτία. επιζώντες ελεύθερη νόσου ορίστηκαν ως ασθενείς χωρίς κλινικές και ακτινολογικές ενδείξεις τοπικό, περιφερειακό, ή μακρινή υποτροπή κατά τη χρονική στιγμή της τελευταίας παρακολούθησης. Τοπική-περιοχική υποτροπή /θάνατος παρατηρήθηκε σε 32/72 (44%) ασθενείς παρακολουθούνται στην παρούσα μελέτη. Οι ασθενείς που δεν παρουσίασαν υποτροπή ήταν ζωντανοί μέχρι το τέλος της περιόδου παρακολούθησης. Μεταξύ των 33 ασθενών που χάθηκαν για την παρακολούθηση, δεν θα μπορούσε να εξακριβωθεί ο αριθμός των θανάτων? Ως εκ τούτου, η συνολική επιβίωση δεν μπορούσε να θεωρηθεί ως ένα ξεχωριστό παράμετρος στη μελέτη μας. Μόνο επιβίωσης ελεύθερης νόσου των ασθενών μελετήθηκε. Νόσος επιβίωσης χωρίς εκφράστηκε ως ο αριθμός των μηνών από την ημερομηνία της χειρουργικής επέμβασης για την τοπική-περιφερειακή υποτροπή. Οι ασθενείς παρακολουθήθηκαν για μια περίοδο διάμεσο 24 μήνες και μέγιστη 91 μήνες.

Στατιστική Ανάλυση

Τα ανοσοϊστοχημικά δεδομένα υποβλήθηκαν σε στατιστική ανάλυση με τη χρήση του λογισμικού SPSS 17.0 (Chicago IL). Οι σχέσεις μεταξύ των E-cadherin, β-κατενίνης και την έκφραση ALCAM και κλινικοπαθολογικών παραμέτρων δοκιμάστηκε σε μονοπαραγοντική ανάλυση με δοκιμή Chi-Square, δοκιμασία Chi-Square για την τάση, του Fisher exact test και ανάλυση λογιστικής παλινδρόμησης. Για τον προσδιορισμό ανεξάρτητους προγνωστικούς παράγοντες για την ογκογένεση, ανάλυση λογιστικής παλινδρόμησης διεξήχθη σταδιακό τρόπο για τις μεμονωμένες μεταβλητές, clinicopatholgical παραμέτρους και τις πρωτεΐνες Ε-καδερίνης, β-κατενίνης και ALCAM. Διαφορετικοί συνδυασμοί μεταβλητών δημιουργήθηκαν για να εκτιμηθεί η συσχέτιση μεταξύ αυτών των συνδυασμών και πρόγνωση του ασθενούς. Παρακολούθηση μελέτες αναλύθηκαν με Kaplan-Meier και δοκιμασία αναλογικού κινδύνου του Cox. Μόνο επιβίωσης ελεύθερης νόσου αξιολογήθηκε στην παρούσα μελέτη, καθώς ο αριθμός των θανάτων που οφείλονται σε εξέλιξη της νόσου δεν επιτρέπουν μια αξιόπιστη στατιστική ανάλυση. Η συσχέτιση μεταξύ της έκβασης και των μεταβλητών των ασθενών εκτιμήθηκε από δοκιμασία log-rank. Δύο όψεων σ τιμές υπολογίστηκαν και p & lt?. 0.05 θεωρήθηκε ως σημαντική

σύντομης παρεμβολής RNA με τη μεσολάβηση

Ανθρώπινο κεφάλι και το λαιμό καρκίνωμα από πλακώδες επιθήλιο γραμμή, SCC-4 κύτταρα διατηρούνται ALCAM Νοκ ντάουν

σε ϋΜΕΜ που περιέχει 10% FBS, 100 μg /ml στρεπτομυκίνη, 100U /ml πενικιλίνη στους 37 ° C σε υγροποιημένη ατμόσφαιρα 5% CO

2. SCC-4 κύτταρα επιμολύνθηκαν παροδικά χρησιμοποιώντας αντιδραστήριο Hiperfect (Qiagen) και ένα αμβλύ άκρο duplex του RNA ολιγονουκλεοτιδίων, 5′-AAG CCC GAU GGC UCC CCA GUA UU-3 ‘και 5’-GGG AAU ACU GAG CCA GGC UCG UU -3 ‘. SCC-4 κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με διάφορες συγκεντρώσεις siRNA (1-15 ηΜ) και με διάφορες συγκεντρώσεις του αντιδραστηρίου Hiperfect (1-4,5 μί). ALCAM siRNA (15 ηΜ) με 4,5 μί Hiperfect αντιδραστηρίου για 48 ώρες βρέθηκε να είναι η καλύτερη συγκέντρωση με μέγιστη αποτελεσματικότητα επιμόλυνσης (95%) και τη μέγιστη σίγηση της γονιδιακής έκφρασης ALCAM (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Σαράντα οκτώ ώρες μετά την επιμόλυνση, siRNA επεξεργασμένα κύτταρα χρησιμοποιήθηκαν σε επόμενα πειράματα.

Reverse Transcription-PCR Ανάλυση

Ολικό RNA απομονώθηκε από SCC-4 κύτταρα (έλεγχος και μορφομετατροπείς siRNA) όπως περιγράφηκε προηγουμένως [20]. PCR ενίσχυση πραγματοποιήθηκε σε ένα συνολικό όγκο 20 μΐ που περιέχει 3 μΐ αντίστροφης μεταγράφεται ρυθμιστικού cDNA, 10Χ PCR, 10 mM dNTPs, 20 μΜ από κάθε εκκινητή και 1unit Taq πολυμεράσης, (Gibco BRL, Gaithersburg, MD). Μετά από 5 λεπτά αρχική μετουσίωση, 35 κύκλους ενίσχυσης του 1 λεπτού στους 94 ° C, 2 λεπτά στους ειδική θερμοκρασία ανόπτησης και 1 λεπτό στους 72 ° C διεξήχθησαν, ακολουθούμενη από μία επιμήκυνση 10 λεπτά στους 72 ° C. Για την ενίσχυση του cDNA ALCAM πρόσθιο εκκινητή, 5′-GTC TGG GCA ΑΤΑ GTG ACT CC-3 ‘και αντίστροφος εκκινητής 5′-AAC CAT TGC AAG TGG ΑΑΑ CC-3′ χρησιμοποιήθηκαν. Για το E-cadherin cDNA, προς τα εμπρός εκκινητή 5’-CAG CAC GTA CAC AGC ΚΔ AA-3 ‘και αντίστροφος εκκινητής TGA GGC ΤΤΤ GGA TTC CT-3 5′-ACC »χρησιμοποιήθηκαν. Για το β-κατενίνης cDNA, προς τα εμπρός εκκινητή 5’-ΟΑΑ ACG GCT TTC AGT TGA GC-3 ‘και αντίστροφος εκκινητής 5′-CTG GCC ΑΤΑ TCC ACC AGA GT-3′ χρησιμοποιήθηκαν. β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως ένας εσωτερικός έλεγχος για να διασφαλιστεί ότι ίση ποσότητα RNA χρησιμοποιήθηκε για τον έλεγχο και siRNA επιμολυσμένα κύτταρα. Για την β-ακτίνη cDNA, προς τα εμπρός εκκινητή 5′-CAG CCA TGT ACG TTG CTA TCC AG -3 χρησιμοποιήθηκαν και αντίστροφο εκκινητή 5’-GTT ΤΕΕ ΤΟΟ ATG CCA CAG GAC -3 ‘. Τα προϊόντα PCR διαχωρίστηκαν σε γέλη αγαρόζης 1,5%, χρωματίστηκαν με βρωμιούχο αιθίδιο, και έγινε ορατό με AlphaEase FC Software (έκδοση 3.1.1) οι εντάσεις των ζωνών PCR ποσοτικοποιήθηκαν με Chemi Imager IS-4400 (Άλφα Innotech Corp, CA) όπως περιγράφηκε νωρίτερα [14].

ανοσοαποτύπωσης

ALCAM siRNA επιμολυσμένα SCC-4 κύτταρα για 48 ώρες και μη κατεργασμένα κύτταρα ελέγχου χρησιμοποιήθηκαν για την παρασκευή των κυτταρικών εκχυλισμάτων με βρασμό το κυτταρικό ίζημα σε ρυθμιστικό SDS-λύσεως. Εν συντομία, το εκχύλισμα ολόκληρων κυττάρων (100 μα πρωτεΐνη /λωρίδα) διαχωρίστηκαν με SDS-PAGE και μεταφέρθηκαν σε μεμβράνη νιτροκυτταρίνης [21]. Οι μεμβράνες νιτροκυτταρίνης φράχθηκαν με 10% μη λιπαρό γάλα για όλη τη νύχτα στους 4 ° C και ανιχνεύθηκαν με αντι-ALCAM? αντισώματα Ε-καδερίνη και β-κατενίνης (Santa Cruz Biotechnology Inc., Santacruz, CA) για 2 ώρες στους 37 ° C. Στη συνέχεια, οι μεμβράνες ανιχνεύθηκαν με δευτερογενή αντισώματα προς αυτές τις πρωτεΐνες (αντι-κατσίκα 1:5000 και αραίωση αντι-ποντικού 1:2000). Οι κηλίδες ανιχνεύθηκαν και πάλι με α-τουμπουλίνης για την κανονικοποίηση για ίσες φόρτωσης πρωτεΐνης. Οι κηλίδες αναπτύχθηκαν χρησιμοποιώντας Αντιδραστήριο Ενισχυμένη χημειοφωταύγειας (ECL) (Amersham, Buckinghamshire, UK) όπως περιγράφεται [21].

Ομοεστιακή Laser Μικροσκοπία

SCC-4 κύτταρα που αναπτύσσονται σε καλυπτρίδες σε επεξεργασία με ALCAM siRNA για 48 ώρες και υποβάλλονται σε επεξεργασία για συνεστιακή μικροσκοπία λέιζερ όπως περιγράφηκε προηγουμένως [21]. Τα κύτταρα ξεπλύθηκαν σε PBS Dulbecco (DPBS), στερεώθηκαν σε μεθανόλη για 5 λεπτά. στους -20 ° C και επωάστηκαν με αντι-ALCAM, Ε-καδερίνης και αντισώματα β-κατενίνης (10 ng /ml) ελήφθη από SantaCruz Biotechnologies Inc., Santacruz, CA. Μετά το ξέπλυμα σε DPBS, οι καλυπτρίδες επωάστηκαν με βιοτινυλιωμένο δευτερεύον αντίσωμα (αντι-κουνελιού /κατσίκα, LSAB + Kit, ϋΑΚΟ Cytomations, Glostrup, Denmark) για 45 λεπτά. στους 37 ° C που ακολουθείται από επώαση με συζευγμένα με στρεπταβιδίνη φθοριόχρωμα, ισοθειοκυανική φλουορεσκεΐνη (FITC) (ϋΑΚΟ Cytomations, Δανία). Στη συνέχεια, οι καλυπτρίδες αντίθετα με ιωδιούχο προπίδιο (ΡΙ) (10 mg /ml? Sigma-Aldrich, ΜΟ) για 30 δευτερόλεπτα. Οι καλυπτρίδες στη συνέχεια ξεπλύθηκαν και τοποθετήθηκαν σε μέσο στερέωσης. Διαφάνειες εξετάστηκαν με συνεστιακή λέιζερ σάρωσης μικροσκόπιο, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [21].

Αποτελέσματα

Ανοσοϊστοχημική Ανάλυση της E-cadherin μεμβρανώδη Έκφραση σε κανονική ιστών του στόματος, Υπερπλασία, Δυσπλασία και OSCC

Ε-καδερίνης στην μεμβράνη των επιθηλιακών κυττάρων παρατηρήθηκε σε 27/30 (90%) των ιστολογικά φυσιολογικό στοματικούς ιστούς με περιστασιακή κυτταροπλασματική έκφραση (Πίνακας 1, Σχήμα 1Α). Σημαντική απώλεια της Ε-καδερίνης μεμβρανώδη έκφραση παρατηρήθηκε σε υπερπλασία [19/56, 34% (Σχήμα 1 Β) σε σύγκριση με τις κανονικές του στόματος ιστούς (3/30, 10%), [ρ = 0.015? OR = 4.6, 95% C.I. = 1,2 – 17,2], και 12/20, 60% δυσπλασία (Σχήμα 1C) [H /D: p = 0,06? OR = 2.9, 95% C.I. = 1,0 – 8,4]. ανάλυση τάσεων Chi-Square έδειξαν σημαντική απώλεια της Ε-καδερίνης μεμβρανώδη έκφραση σε ιστούς από διαφορετικά στάδια της ανάπτυξης του καρκίνου του στόματος (κανονική, υπερπλασία, δυσπλασία και διηθητικό καρκίνο? p

τάση & lt? 0.001). Απώλεια Ε-καδερίνης μεμβρανώδη έκφραση παρατηρήθηκε σε 61/105 OSCCs (58%) (Πίνακας 1, Σχήμα 1 D) και συνδέθηκε με αργά κλινικό στάδιο (p = 0.006, OR = 3.1, 95% CI = 1,3 – 7,0), αύξηση της επιβάρυνσης του όγκου (p = 0,03? OR = 2,4, 95% CI = 01.01 – 05.03), και κομβικά μετάσταση (p = 0,04? OR = 2,4, 95% CI = 1/1 έως 5/3)

ιστολογικά φυσιολογικό. τομές ιστού δείχνει μεμβρανώδη ανοσοαντιδραστικότητα για Ε-καδερίνης (Α), και β-κατενίνη (G) πρωτεΐνες. Η υπερπλαστική (Β), δυσπλαστικά (C), OSCC (D) τομές ιστού που απεικονίζει την απώλεια μεμβρανώδη χρώση για Ε-καδερίνης. Η υπερπλαστική (H), δυσπλαστικά (Ι), OSCC (J) τμήματα ιστού που απεικονίζει την απώλεια μεμβρανώδη χρώση για β-κατενίνης. Σε αρνητικούς ελέγχους, για Ε-καδερίνη (Ε) και β-κατενίνης (F), το πρωτογενές αντίσωμα αντικαταστάθηκε από μη-άνοση IgG του ίδιου ισότυπου να εξασφαλίσει ειδικότητα. Ο καρκίνος του μαστού τομές ιστών χρησιμοποιήθηκε ως θετικός έλεγχος έδειξε χρώση μεμβράνης για Ε-καδερίνης (Κ) και β-κατενίνης (L) πρωτεΐνες. Αρχική μεγέθυνση Χ 200.

Η

Σύλλογος απώλεια της έκφρασης μεμβρανώδη E-cadherin με την πορεία της νόσου

Εβδομήντα δύο ασθενείς OSCC θα μπορούσε να ακολουθηθεί για μέγιστο χρονικό διάστημα 91 μήνα (διάμεση 24 μήνες). Kaplan-Meier ανάλυση επιβίωσης και το μοντέλο αναλογικών κινδύνων του Cox αποκάλυψε ότι οι ασθενείς με E-cadherin θετικούς όγκους αυξήθηκε μέση ελεύθερη νόσου επιβίωση (DFS) 74 μήνες σε σύγκριση με εκείνους με την απώλεια της μεμβρανώδη ανοσοθετικότητα (διάμεσος DFS = 18 μήνες) [p = 0.001? HR = 3.9? 95% CI = 01.06 έως 09.06] (Εικόνα 2Α)

Α: απώλεια της E-cadherin μεμβρανώδη (E-CAD

-) έκφραση, Β:. Απώλεια της β-κατενίνης μεμβρανώδη (β-CATM

-) έκφραση, C: απώλεια της Ε-καδερίνης και β-κατενίνη μεμβρανώδη (Ε-CAD

– /β-cat M

-) έκφραση, D: ALCAM κυτταροπλασματική θετική και Ε-καδερίνης απώλεια μεμβράνη (Ε-CAD

– /ALCAM C

+).

Η

Ανοσοϊστοχημική Ανάλυση της β-κατενίνης Έκφραση σε κανονική ιστών του στόματος, υπερπλασία, Δυσπλασία και OSCC

β κατενίνης ήταν κυρίως παρούσες στη μεμβράνη των επιθηλιακών κυττάρων σε 27/30 (90%) του ιστολογικά φυσιολογικό ιστών του στόματος? περιστασιακά κυτταροπλασματική /πυρηνική χρώση παρατηρήθηκε επίσης (Πίνακας 1, Σχήμα 1 G). Σημαντική απώλεια της έκφρασης μεμβράνη β-κατενίνης παρατηρήθηκε σε υπερπλασία [20/56, 36%, ρ = 0,01? OR = 5.0, 95% C.I. = 1,3 – 18,6, (Σχήμα 1)] σε σύγκριση με την κανονική του στόματος ιστούς (3/30, 10%), και σε δυσπλασία σε σύγκριση με υπερπλασία [14/20, 70%, (σχήμα 1θ), ρ = 0.008? OR = 4.2, 95% C.I. = 01.04 – 12.06]. Σημαντική αύξηση στην κυτταροπλασματική /πυρηνική συσσώρευση του β-κατενίνης παρατηρήθηκε σε δυσπλασία σε σύγκριση με υπερπλασία (p = 0.046? OR = 3.1? 95% C.I. = 1,0 – 9,5) (Πίνακας 1). ανάλυση τάσεων Chi-Square έδειξαν σημαντική απώλεια μεμβρανώδη έκφρασης β-κατενίνης και αύξηση στο κυτταροπλασματικό /πυρηνική συσσώρευση της σε ιστούς από διαφορετικά στάδια του καρκίνου του στόματος (κανονική, υπερπλασία, δυσπλασία, και διηθητικό καρκίνο? p

τάση & lt? 0.001 και p

τάση = 0.003 αντίστοιχα).

Απώλεια μεμβρανώδη έκφρασης β-κατενίνης παρατηρήθηκε σε 65 από 105 () OSCCs 62% (Σχήμα 1J, Πίνακας 1) και συνδέθηκε με αργά κλινικό στάδιο (p = 0.001, OR = 7,4, 95% CI = 3,1 – 18,1), αύξηση της επιβάρυνσης του όγκου (p = 0.001, OR = 4,1, 95% CI = 1/8 έως 9/4) και κομβικά μετάσταση (p = 0.003, OR = 3,7, 95% CI = 01.06 – 08.09). Σε OSCCs 28 105 (27%) περιπτώσεις έδειξαν κυτταροπλασματική /πυρηνική συσσώρευση του β-κατενίνης και συνδέθηκε με αργά κλινικό στάδιο (p = 0.014, OR = 3.6, 95% CI = 01.02 – 10.06) και το φορτίο του όγκου (ρ = 0,025 , OR = 2,8, 95% CI = 1.1 – 7.2).

Σύλλογος Απώλεια μεμβρανώδη έκφρασης της β-κατενίνης με την πορεία της νόσου

Απώλεια μεμβρανώδη β-κατενίνης ανοσοθετικότητα συνδέθηκε με μειωμένη νόσο ελεύθερο επιβίωση (DFS διάμεσος = 15 μήνες) σε σύγκριση με τους ασθενείς με θετικούς όγκους μεμβράνη β-κατενίνης (διάμεσος DFS = 78 μήνες) [p & lt? 0.001? HR = 7,8? 95% CI = 2,7 – 22,3] (Εικόνα 2Β).

Σύνδεσης μεταξύ Ε-καδερίνης και της β-κατενίνης σε στοματικές αλλοιώσεις και OSCCs

Σημαντική συσχέτιση παρατηρήθηκε μεταξύ της απώλειας των μεμβρανώδη E-cadherin και εκφράσεις β-κατενίνης σε OLS (ρ = 0.001, OR = 16,7, 95% CI = 5,3 – 52,7, Πίνακας 2) και OSCCs (ρ = 0.001, OR = 8.8, 95% CI = 3,6 – 21,7, Πίνακας 2). Απώλεια μεμβρανώδη E-cadherin και β-κατενίνης όταν λαμβάνονται ως ένα φαινότυπο (E-CAD

– /β-cat M

-) συσχετίζεται σημαντικά με προχωρημένο στάδιο του όγκου (p = 0.004, OR = 3,2, 95% CI = 1/4 έως 7/1), κομβικό μετάσταση (p = 0.005, OR = 3,1, 95% CI = 01.04 – 06.09) και αργά το κλινικό στάδιο (p & lt? 0.001, OR = 5,5, 95% CI = 2,2 – 13,4). ανάλυση των τάσεων Chi-Square έδειξε σημαντική απώλεια μεμβρανώδη E-cadherin και β-κατενίνης (E-CAD

– /β-cat M

-) σε διάφορα στάδια της στοματικής καρκινογένεσης (κανονική, υπερπλασία, δυσπλασία και διηθητικό καρκίνο ? p

τάσης = 0.008). Επιπλέον, η απώλεια της E-CAD

– /β-cat M

– ανοσοθετικότητα συσχετίστηκε με μειωμένο ελεύθερο νόσου-επιβίωση [διάμεσος DFS = 14 μήνες, σε σύγκριση με το β-κατενίνης θετικούς όγκους και E-cadherin μεμβράνης με διάμεση ελεύθερη νόσου επιβίωση 71 μηνών. (p & lt? 0.001? HR = 4,7? 95% CI = 02.01 – 10.01)] (Εικόνα 2C)

Η

σύνδεσης μεταξύ E-cadherin, β-κατενίνης και ALCAM έκφραση σε στοματικές αλλοιώσεις

για να εξερευνήσουν τη σημασία της ALCAM στη βιολογική ανάπτυξη διηθητικού καρκίνου και μετάσταση, είναι σημαντικό να καθοριστεί ο συσχετισμός της με διαταραχές στην έκφραση των συστατικών προσκόλλησης διασταύρωση. Ενώσεις μεταξύ των πρωτεϊνών εκφράσεις E-cadherin, β-κατενίνης και ALCAM προσδιορίστηκαν (Πίνακας 2), ως έκφραση της πρωτεΐνης ALCAM είχε επίσης αναλύθηκαν στην ίδια ομάδα ασθενών σε προηγούμενη μελέτη [17]. Η απώλεια της έκφρασης μεμβρανώδη β-κατενίνης βρέθηκε να σχετίζεται σημαντικά με τη συνολική (p = 0.018? OR = 3.3, 95% CI = 1.2 έως 8.8, Πίνακας 2) και κυτταροπλασματική (p = 0.008? OR = 3.6, 95% CI = 1.4 έως 9.3, Πίνακας 2) έκφραση ALCAM.

Μεταξύ των υπερπλασίες αναλύθηκαν (n = 56) σε αυτή τη μελέτη, η απώλεια του μεμβρανώδη Ε-καδερίνης βρέθηκε να σχετίζεται σημαντικά με την απώλεια της έκφρασης β-κατενίνης (ρ & lt ? 0.001, OR = 24,0, 95% CI = 5,6 – 102). Η απώλεια της έκφρασης μεμβρανώδη β-κατενίνης βρέθηκε να σχετίζεται σημαντικά με τη συνολική έκφραση ALCAM (p = 0.017? OR = 4.5, 95% C.I. = 1,2 – 16,0). Απώλεια της μεμβράνης E-cadherin και β-κατενίνης λαμβάνονται μαζί ως ένα φαινότυπο (E-CAD

– /β-CATM

-) σχετίζεται σημαντικά με τη συνολική ανοσοθετικότητα ALCAM στην υπερπλασία. Μεταξύ των δυσπλασίες αναλύθηκαν (n = 20), η απώλεια της έκφρασης μεμβρανώδη β-κατενίνης βρέθηκε να σχετίζεται σημαντικά με ALCAM κυτταροπλασματική ανοσοθετικότητα (ρ = 0,05? OR = 9.0, 95% CI = 1,0-100)

σύνδεσης μεταξύ E-cadherin, β-κατενίνης και Έκφραση ALCAM σε OSCC

Σύλλογοι μεταξύ ALCAM, E-cadherin και τις εκφράσεις της β-κατενίνης προσδιορίστηκαν σε OSCC (Πίνακας 2). Απώλεια Ε-καδερίνης μεμβρανώδη έκφραση βρέθηκε να σχετίζεται σημαντικά με κυτταροπλασματική έκφραση ALCAM (ρ = 0.038, OR = 2.2, 95% C.I = 1,0-5,0). Η απώλεια της έκφρασης μεμβράνη β-κατενίνης συσχετίζεται σημαντικά με τη συνολική έκφραση ALCAM (p = 0.001? OR = 3.9, 95% CI = 1,7 – 9,0), και κυτταροπλασματική ανοσοθετικότητα ALCAM (p = 0.002? OR = 3.7, 95% CI = 1.6- 8.7). Απώλεια μεμβράνης Ε-καδερίνης και β-κατενίνης όταν λαμβάνεται ως ένα φαινότυπο (E-CAD

– /β-cat M

-). Συσχετίστηκε σημαντικά με τη συνολική και κυτταροπλασματική ανοσοθετικότητα ALCAM σε OSCC (Πίνακας 2)

ανεξάρτητους προγνωστικούς παράγοντες για την μετάβαση από την κανονική για την ΕΓ και καρκινικού φαινοτύπου

για τον προσδιορισμό των ανεξάρτητων προγνωστικών για τη μετάβαση από την κανονική για την ΕΓ, ανάλυση λογιστικής παλινδρόμησης πραγματοποιήθηκε με σταδιακό τρόπο. Από αυτές τις μεταβλητές, οι παράμετροι που προέκυψαν σημαντικές σε μονοπαραγοντική και πολυπαραγοντική αναλύσεις συνοψίζονται στον Πίνακα 3. ALCAM κυτταροπλασματική έκφραση (p = 0,024? OR = 11,6? 95% CI = 1,4 – 98,2) προέκυψε ότι είναι η πιο σημαντική φαινότυπος για μετάβαση της φυσιολογικό βλεννογόνο του στόματος σε ΕΓ. Απώλεια μεμβρανώδη έκφρασης της β-κατενίνης αναδείχθηκε ως το πιο σημαντικό προγνωστικό παράγοντα για τη μετάβαση από υπερπλασίας σε δυσπλαστικές βλάβες (p = 0.01, OR = 4,2, 95% Ο.Ι. = 01.03 – 12.06). αναλύσεις πολυπαραγοντική λογιστική παλινδρόμηση έδειξε ότι η απώλεια της μεμβρανώδη έκφρασης Ε-καδερίνης είναι η πιο σημαντική φαινότυπος για τη μετάβαση των ΕΓ να OSCC (p = 0,02? OR = 2,0? 95% CI = 1/1 έως 3/7)

Η

Η κλινική έκβαση των ασθενών

ανεξάρτητους προγνωστικούς παράγοντες για κλινικές παραμέτρους, φορτίο όγκου, κομβικό συμμετοχή και κλινικό στάδιο της OSCC.

για τον προσδιορισμό των ανεξάρτητων προγνωστικών για κλινικές παραμέτρους, φορτίο όγκου, κομβικό συμμετοχή και κλινικές στάδιο, ανάλυση λογιστικής παλινδρόμησης διεξήχθη με σταδιακό τρόπο για Ε-καδερίνη, β-κατενίνης και ALCAM μεμονωμένα, ή σε συνδυασμό, σε 105 OSCCs (Πίνακας 3). απώλεια μεμβράνη β-κατενίνης (ρ = 0.001, OR = 4.2? 95% CI = 01.08 έως 10.02) και β-κατενίνης πυρηνικών /κυτταροπλασματική συσσώρευση (ρ = 0.027, OR = 3.1? 95% CI = 01.01 έως 08.03) ήταν οι πιο σημαντικοί προγνωστικοί για αυξημένη επιβάρυνση του όγκου. απώλεια μεμβράνη β-κατενίνης (ρ = 0.003, OR = 3,8? 95% CI = 1/6 έως 9/3) και τη συνολική έκφραση ALCAM /β-κατενίνης πυρηνικών /κυτταροπλασματική συσσώρευση (ρ = 0.025, OR = 3.4, 95% CI = 1.2 έως 9.7 ) ήταν οι πιο σημαντικοί προγνωστικοί για κομβικά μετάσταση. Σε συνδυασμό δεικτών, η έκφραση ALCAM /β-κατενίνης πυρηνικών /κυτταροπλασματική συσσώρευση (ρ = 0.006, OR = 9.9, 95% CI = 1,9 – 51,5) και απώλεια μεμβράνη β-κατενίνης (ρ & lt? 0.001, OR = 8,7? 95% CI = 3,3 -22,8) ήταν οι πιο σημαντικοί προγνωστικοί για τα τέλη κλινικό στάδιο (Πίνακας 3).

Σύλλογος μεταβολές στην E-cadherin, β-κατενίνης και την έκφραση ALCAM με την έκβαση της νόσου.

σημαντική συσχέτιση παρατηρήθηκε μεταξύ μειωμένο ελεύθερο νόσου-επιβίωση και το στάδιο του όγκου [p = 0,03? Αναλογία κινδύνου (HR) = 2.5? 95% C.I. = 1.1 – 5.6].

Για το δυνατόν πρόσθετο προγνωστική ικανότητα ανάλυσης επιβίωσης Kaplan-Meier και το μοντέλο αναλογικών κινδύνων του Cox χρησιμοποιήθηκαν για την ανάλυση διαφορετικούς συνδυασμούς των πιθανών βιοδεικτών, προκειμένου να αξιολογηθεί η συσχέτιση των αλλαγών σε διάφορα βιοδείκτες με την κλινική έκβαση . Αν και διάφορους συνδυασμούς βρέθηκαν να είναι σημαντική (Πίνακας 3), η πιο σημαντική φαινότυπος που προέκυψε ως ανεπιθύμητες μάντης ήταν: αυξημένη κυτταροπλασματική έκφραση ALCAM + απώλεια μεμβρανώδη Ε-καδερίνης? ALCAM C

+ /E-CAD

– (p & lt? 0.001? HR = 4,8? 95% CI = 2.2 έως 9.9, Εικόνα 2D). (Πίνακας 3)

Με βάση τα δεδομένα μας,