Αφηρημένο

Τα επίπεδα miRNA μεταβάλλεται σε πορογενές αδενοκαρκίνωμα του παγκρέατος (PDA), η πιο κοινή και θανατηφόρα παγκρεατική κακοήθεια, και ανέπαφη την επεξεργασία miRNA είναι απαραίτητη για την προδιαγραφή γενεαλογία κατά τη διάρκεια του παγκρέατος ανάπτυξης. Ωστόσο, ο ρόλος της επεξεργασίας miRNA σε PDA δεν έχει διερευνηθεί. Εδώ μελετάμε το ρόλο των miRNA βιογένεση στην ανάπτυξη PDA με τη διαγραφή του miRNA ένζυμο επεξεργασίας Dicer σε ένα μοντέλο PDA ποντίκι οδηγείται από ογκογόνο Kras. Θεωρούμε ότι η απώλεια του Dicer επιταχύνει Kras οδηγείται κυψελωτά αποδιαφοροποίηση και κυψελωτά να πορογενές μεταπλασία (ADM), μια διαδικασία που έχει αποδειχθεί για να προηγηθεί και να προωθήσει τις προδιαγραφές των προδρόμων PDA. Ωστόσο, χωρίς περιορισμούς ADM εμφανίζει επίσης υψηλά επίπεδα απόπτωσης. απώλεια Dicer δεν επιταχύνει την ανάπτυξη του Kras οδηγείται πρόδρομες PDA ή PDA, αλλά εκπληκτικά, παρατηρούμε ότι το ποντίκι PDA μπορεί να αναπτυχθεί χωρίς Dicer, αν και εις βάρος των πολλαπλασιαστική ικανότητα. Τα στοιχεία μας δείχνουν ότι η επεξεργασία ανέπαφη miRNA συμμετέχει σε δύο περιορίζουν pro-ογκογόνο αλλαγές στην παγκρεατική διαφοροποίηση καθώς και η διατήρηση της βιωσιμότητας κατά την έναρξη PDA

Παράθεση:. Morris JP IV, Γκριρ R, Russ ΗΑ, von Figura G, Kim GE, Busch A, et al. (2014) Dicer Ρυθμίζει Διαφοροποίηση και Βιωσιμότητας κατά τη διάρκεια του ποντικιού καρκίνο του παγκρέατος Μύηση. PLoS ONE 9 (5): e95486. doi: 10.1371 /journal.pone.0095486

Συντάκτης: Murray Korc, Indiana University School of Medicine, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 3 Ιανουαρίου, 2014? Αποδεκτές: 26 Μαρτίου του 2014? Δημοσιεύθηκε: May 1, 2014

Copyright: © 2014 Morris et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Εργασία σε Ομάδα Matthias Hebrok υποστηρίχθηκε από μια επιχορήγηση από την AACR καρκίνο του παγκρέατος Δίκτυο δράσης. www.pancan.org. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

παγκρεατικού πόρου αδενοκαρκίνωμα (PDA) φαίνεται να αναπτυχθούν μέσα από μια σειρά από πορογενές πρόδρομες βλάβες, συμπεριλαμβανομένων των πιο κοινός τύπος, παγκρεατικό ενδοεπιθηλιακή νεοπλασία (PanIN). Και οι δύο PanINs και PDA έκθεμα Kras μεταλλάξεις, οι οποίες μπορεί να είναι ένα αρχικό συμβάν. μοντέλα ποντικών υποστηρίζουν αυτή την ιδέα ως στοχευμένη και επίμονη έκφραση των μεταλλαγμένων Kras στον παγκρεατικό επιθήλιο του ποντικιού και ανακεφαλαιώνει την ακολουθία PanIN στο PDA που παρατηρούνται σε ανθρώπους, και είναι απαραίτητη για τη συντήρηση της νόσου [1], [2], [3]. Τα στοιχεία από τα μοντέλα ποντικού υποδηλώνει ότι μεταλλαγμένο Kras μπορεί να συμβάλει στην έναρξη PDA με τον επαναπρογραμματισμό κυψελοειδή κύτταρα σε έναν αγωγό σαν γενεαλογία ικανή να γίνει PanINs μέσω μιας διαδικασίας που ονομάζεται acinar να πόρου μεταπλασία (ADM) [4], [5], [6]. Αυτή η ικανότητα να αλλάξει παγκρεατική πλαστικότητα μπορεί να είναι ένα σημαντικό βήμα στην έναρξη PDA, καθώς έχουν κυψελοειδή κύτταρα έχει δειχθεί ότι είναι εντυπωσιακά πιο ευαίσθητα στην εξαρτώμενη Kras ανάπτυξη PanIN σύγκριση με τα κύτταρα αγωγό [7]. Δεδομένου ότι οι προσπάθειες σε άμεση αναστολή των ογκογόνων Kras ήταν γενικά ανεπιτυχείς [8], τον ορισμό των ζωτικών μεσολαβητές προ-ογκογόνο διαφοροποίησης και της βιωσιμότητας κατάντη των μεταλλαγμένων Kras μπορεί να αντιπροσωπεύουν εναλλακτικές θεραπευτικές προσεγγίσεις.

Τα microRNAs (miRNAs) είναι μια κατηγορία μικρό, μη-κωδικοποιητική RNAs που ρυθμίζουν την γονιδιακή έκφραση μετα-μεταγραφικά. Τα επίπεδα παρεκκλίνουσα miRNA συνδέεται με την ανάπτυξη του όγκου, και να οδηγήσει σε ακατάλληλη έκφραση των ογκογονιδίων και καταστολείς όγκων [9]. Καρκίνο που σχετίζεται επίπεδα miRNA προκύπτουν από την misexpression συγκεκριμένων miRNAs, καθώς και η απορρύθμιση της βιογένεσης οδού miRNA [10]. Τα miRNAs γενικά προς τα κάτω σε ανθρώπινους καρκίνους [11], και ανέστειλε την επεξεργασία miRNA προωθεί την ογκογένεση [12]. Ωστόσο, η απώλεια της επεξεργασίας miRNA μπορεί να είναι ασύμβατη με την ανάπτυξη ορισμένων όγκων [13], [14], [15], γεγονός που υποδηλώνει ότι κρίσιμα όρια της μεταποίησης miRNA μπορεί να εμπλέκεται στη διατήρηση της βιωσιμότητας κατά τη διάρκεια του μετασχηματισμού. Ενώ τα miRNAs misexpressed σε PanINs και PDA, και είναι γνωστό ότι ρυθμίζουν μονοπάτια που συμβάλλουν στην έναρξη και την πρόοδο [16] PDA, [17], [18], [19], ο ρόλος ότι η επεξεργασία miRNA διαδραματίζει στην ανάπτυξη PDA δεν ήταν διερευνώνται.

με τη διαγραφή του ενζύμου miRNA επεξεργασίας Dicer σε Kras οδηγείται μοντέλο ποντικού των PDA, διαπιστώνουμε ότι η επεξεργασία των miRNAs ρυθμίζει τόσο της διαφοροποίησης και της βιωσιμότητας κατά τη διάρκεια Kras οδηγείται παγκρέατος μετασχηματισμού. διαγραφή Dicer προωθεί Kras οδηγείται απώλεια της ταυτότητας acinar και ADM αλλά επίσης οδηγεί σε αυξημένα επίπεδα απόπτωσης και μειωμένη έκφραση των γονιδίων που εμπλέκονται στη διατήρηση της βιωσιμότητας κατά την ανάπτυξη PanIN και σε PDA. Απροσδόκητα, έχουμε βρει ότι ποντίκι PDA μπορεί να αναπτυχθεί σε απουσία Dicer, αν και με μειωμένο πολλαπλασιασμό. Στο σύνολό τους, το έργο αυτό υποδηλώνει έναν κρίσιμο ρόλο για την επεξεργασία miRNA στην Kras οδηγείται έναρξη PDA.

Αποτελέσματα

Dicer Απώλεια Επιταχύνει Driven Kras διαγραφή πόρου μεταπλασία

Dicer στις αρχές του παγκρέατος προγόνους αποτελέσματα σε παγκρεατικά αγενεσία και μεταγεννητική θάνατο [20]. Ως εκ τούτου, ελέγξαμε εάν μια ξεχωριστή Pdx1 οδηγείται στέλεχος Cre,

Pdx1-Cre

Αργά

, επιτρέπεται παγκρέατος ανάπτυξη στη ρύθμιση της απώλειας της λειτουργίας Dicer.

Pdx1-Cre

Αργά

αποτελέσματα στην καθυστερημένη αναπτυξιακή δραστηριότητα σε σύγκριση με τον οδηγό Pdx1-Cre απασχολούνται από Lynn

et al

, με αποτέλεσμα ανασυνδυασμού σε ένα πιο περιορισμένο σύνολο των ενήλικων κυττάρων, ειδικά πιο acini, μερικά ενδοκρινή κύτταρα, και σπάνια σε κύτταρα αγωγό [21]. Προτείνοντας χρονική απαιτήσεις για Dicer στην ανάπτυξη του παγκρέατος,

Pdx1-Cre

Αργά? Dicer

Flox /Flox

(

Dicer

Homo

) ποντίκια αναπτυχτεί και εμφανίζεται κατάφωρα κανονική ανάπτυξη του παγκρέατος σε p0 ακόμη και στο πλαίσιο της μειώθηκε σημαντικά την έκφραση Dicer σύγκριση με τον έλεγχο

Pdx1- Cre

Αργά? Dicer

Flox /+

ποντίκια (

Dicer

Het

) (Σχήμα S1 Α, Β, Ε).

Στην ηλικία των 3 εβδομάδων, acini, αγωγοί, και νησίδες ήταν αναγνωρίσιμα στο

Dicer

Homo

ποντίκια (Εικόνα 1Α), αν και υπήρχαν κάποιες περιοχές εξωκρινών με μειωμένη χρώση ηωσίνης. Ανοσοφθορισμός έδειξε κανονική κατανομή του δείκτη αμυλάσης κυψελιδικά, αγωγός δείκτη CK19, και ινσουλίνη δείκτη β-κυττάρων (Σχήμα 1Β). μορφολογία Exocrine ήταν διαταραγμένο αν και, όπως διαπιστώθηκε συχνά αποδιοργανωμένη acini με μικρές, αποσπασματικές κύτταρα δεν ανιχνεύθηκαν σε δείγματα αναφοράς (Σχήμα 1Β, Σχήμα S2), παρόμοια με αποδιοργανωμένη κυψελοειδή κύτταρα παρατηρούνται σε σωματικά hypomorphs Dicer [22]. Παγκρέατος μάζα σε

Dicer

Homo

ποντίκια ήταν επίσης μειωμένη (Σχήμα 1D) στη ρύθμιση της μειωμένης έκφρασης Dicer (Σχήμα 1C). Παρά τις αλλαγές στην μορφολογία, δεν παρατηρήσαμε κύτταρα συν-εκφράζουν αμυλάση και αυξημένα επίπεδα CK19 όπως παρατηρείται σε κυψελιδικά κύτταρα υποβάλλονται σε Kras οδηγείται ADM (Σχήμα S3), που υποδηλώνει ότι οι αποδιοργανωμένη κυψελοειδή κύτταρα δεν υποβάλλονταν σε ενεργά ADM.

(Α). Αιματοξυλίνη και ηωσίνη (Η & amp? Ε) χρώση της ηλικίας 3 εβδομάδων πάγκρεας από το

Dicer

ποντίκια Het

και

Dicer

Homo

. (Α) acini, (D) αγωγού, και (Ι) νησίδες. Κλίμακα bar 100 μΜ. (Β) ανοσοφθορισμού για αμυλάση (κόκκινο), CK19 (πράσινο), και της ινσουλίνης (μπλε) σε 3 εβδομάδων

Dicer

Het

και

Dicer

Homo

ποντίκια. Κλίμακα bar 100 μΜ. (ΝΤΟ). Μειωμένη έκφραση Dicer σε 3 εβδομάδες σε RNA που εξάγεται από πάγκρεας ιστό υποδεικνύεται γονότυπους. Μέση ± SD, η = 3 (D). μάζα Πάγκρεας: αναλογία βάρους σώματος στο 3 εβδομάδες σε υποδεικνυόμενες γονότυπους. Οι Ρ-τιμές που υπολογίζονται από δύο-tailed, unpaired t-τεστ συγκρίνοντας

Dicer

Het

και αναφέρεται γονότυπους. (Μέση τιμή ± SD,

Dicer

Het

n = 17,

Dicer

Homo

n = 14,

Kras? Dicer

Het n = 9, Kras ? Dicer

Homo

n = 14). (ΜΙ). H & amp? Ε χρώση ηλικίας 3 εβδομάδων

Kras? Dicer

Het

και

Kras? Dicer

Homo

ποντίκια. Ένθετα: E-αριστερά, Σπάνιες επίκεντρο της μεταπλασία και PanIN? δεξιά, πορογενές μεταπλασία στο

Kras? Dicer

Homo

ποντίκια. Κλίμακα bar 100 μΜ. (F) Ανοσοϊστοχημεία για Αμυλάση, SOX9, CK19 σε 3 εβδομάδων

Kras? Dicer

Het

και

Kras? Dicer

Homo

ποντίκια. μπαρ κλίμακα 100 μΜ

Η

Για να δοκιμαστεί η επίδραση της απώλειας Dicer για Kras οδηγείται παγκρέατος μετασχηματισμού, δημιουργήσαμε

Pdx1-Cre

αργά.? LSL-Kras

G12D? Dicer

Flox /Flox

(

Kras? Dicer

Homo

) ποντίκια. Όπως και άλλα μοντέλα που στοχεύουν μεταλλαγμένο Kras στην εμβρυϊκή πάγκρεας,

Pdx1-Cre

Αργά? LSL-Kras

G12D

ποντίκια να αναπτυχθεί σταδιακά η ADM, καθώς και PanINs, με PDA που προκύπτουν σε ορισμένα ζώα μετά από μακρά καθυστέρηση [23]. Παρόμοια με αυτά τα μοντέλα [1], σε ηλικία 3 εβδομάδων, το πάγκρεας μάζα σε

Pdx1-Cre

Αργά? LSL-Kras

G12D? Dicer

Flox /+

(

Kras? Dicer

Het

) ποντίκια ήταν ελαφρώς, αλλά σημαντικά, αυξημένη σε σύγκριση με

Dicer

Het

ποντίκια (Σχήμα 1D ). Το διαμέρισμα εξωκρινείς στο

Kras? Dicer

Het

ποντικούς εμφανίστηκε χονδροειδώς φυσιολογικά, αποτελούμενες κυρίως από αμυλάσης θετικών κυττάρων κυψελοειδή, με σπάνιες περιοχές αμυλάσης αρνητικών ADM και χαμηλής PanINs βαθμού εκφράζουν μέτρια έως υψηλά επίπεδα CK19 και SOX9 (Σχήμα 1 F), πορογενές /παγκρεατικής εμβρυϊκά δείκτες προγονικά χαρακτηριστικό του Kras οδηγείται ADM και σχηματισμό PanIN [6]. Σε αντίθεση,

Kras? Dicer

Homo

πάγκρεας εμφανίζεται μειωμένη έκφραση Dicer (σχήμα 1Γ), ήταν ατροφικό (Σχήμα 1D), και κατείχε εκτεταμένη αντικατάσταση του διαμερίσματος εξωκρινών με μεταπλαστικού δομές αγωγό που μοιάζει με σπάνια ADM στο

Kras? Dicer

Het

ποντίκια (Σχήμα 1Ε). Πορογενές μεταπλασία στο

Kras? Dicer

Homo

ποντίκια εμφανίζεται μειωμένη έκφραση της αμυλάσης, χαμηλή έως μέτρια έκφραση του CK19, και ισχυρή έκφραση της SOX9 (Σχήμα 1 F). συσσώρευση SOX9 παρατηρήθηκε επίσης στις δομές διατηρώντας κάποια κυψελωτά μορφολογία (Σχήμα 1 F). Πορογενές μεταπλασία δεν παρατηρήθηκε σε p0 στο

Kras? Dicer

Homo

ποντικούς (Σχήμα S1D), υποδηλώνοντας ότι η ανεπάρκεια Dicer στο πλαίσιο της μεταλλαγμένης Kras δεν μπλοκάρει την εμβρυϊκή ανάπτυξη acinar και ADM εμφανίζεται μεταξύ γέννησης και ηλικία των 3 εβδομάδων. Ως εκ τούτου, η απώλεια Dicer στο πλαίσιο των μεταλλαγμένων Kras επιταχύνει δραματικά την ADM, μια διαδικασία που έχει αποδειχθεί ότι τόσο προηγηθεί και να προωθήσει Kras οδηγείται σχηματισμό PanIN [4], [6], [24].

Dicer Απώλεια συμβιβασμοί acinar Ταυτότητα και προωθεί Kras Driven κυψελιδικά να πορογενές επαναπρογραμματισμός

για να διερευνήσει γιατί

Kras? Dicer

Homo

ποντίκια υποβάλλονται σε επιταχυνόμενη Kras οδηγείται η ADM, ρωτήσαμε αν Dicer κύτταρα ανεπαρκή κυψελωτά ανάρμοστα εμφανίσει ιδιότητες που σχετίζονται με την ADM, όπως δείκτες των acinar το άγχος και την απώλεια της ταυτότητας acinar. Να επικεντρωθεί σε κύτταρα που είχαν υποστεί Cre ανασυνδυασμός συμπεριλάβαμε μια Cre επαγώγιμων YFP αλληλόμορφο που εκφράζεται υπό όρους από τον τόπο Rosa 26 (

R26-EYFP

). χρώση YFP αποκάλυψε ότι τόσο το διαμέρισμα εξωκρινών στο

Pdx1-Cre

Αργά? Dicer

Flox /Flox? R26-EYFP

(

Dicer

Homo? YFP

) ποντίκια και ADM στο

Pdx1-Cre

Αργά? LSL-Kras

G12D? Dicer

Flox /Flox? R26-EYFP

(

Kras? Dicer

Homo? YFP

) ποντίκια που προέρχεται από τα κύτταρα στα οποία Cre ήταν ενεργός, και όχι από την επέκταση ενός un-ανασυνδυαστεί πληθυσμού (Σχήμα 2Β, D).

(Α-Δ) clusterin (μπλε) και YFP (πράσινο) χρώση σε 3 εβδομάδων

Dicer

Het? YFP

(Α),

Dicer

Homo? YFP

(Β),

Kras? Dicer

Het? YFP

(C), και

Kras? Dicer

Homo? YFP

ποντίκια (D). μπαρ κλίμακα 100 μΜ (Ε) ανάλυση RT-PCR του Dicer, miRNA-141 και 216β (αριστερά), κυψελωτά εμπλουτισμένο γονίδια αμυλάσης και Mist1 (κέντρο) και αγωγός εμπλουτίζεται γονίδια CK19 και SOX9 (δεξιά) του YFP +, CD49f +, CD133- κύτταρα από

Dicer

Het? YFP

(n = 4),

Dicer

Homo? YFP

(n = 4),

Kras? Dicer

Het? YFP

(n = 3), και

Kras? Dicer

Homo? YFP

(n = 3) ποντικών. Η μέση ± SD. Οι Ρ-τιμές που υπολογίζονται από δύο-tailed, unpaired t-τεστ συγκρίνοντας

Dicer

Het

και

Dicer

Hom °

τιμές έκφραση CK19 και SOX9.

για να προσδιορίσετε εάν η απώλεια Dicer οδήγησε σε κυψελιδικά στρες που συνδέεται με την ADM, εξετάσαμε την έκφραση της clusterin, ένα δείκτη της τόνισε, de-διαφοροποιούνται acini [6], [25]. Clusterin ήταν κυρίως απουσιάζει στο YFP + κυψελοειδή κύτταρα ελέγχου

Dicer

Het? YFP

και

Kras? Dicer

Het? YFP

ποντίκια, αλλά ήταν παρούσα σε σπάνιες YFP + ADM στο

Kras? Dicer

Het? YFP

ζώα (Σχήμα 2Α, C). δεν υποδηλώνει ότι το ελλιπές κύτταρα Dicer είναι κάτω από την πίεση που παρατηρείται στην ADM, clusterin παρατηρήθηκε μόνο ομοιόμορφα σε YFP + ADM στο

Kras? Dicer

Homo? YFP

ποντίκια, αλλά εκφράζεται επίσης ευρέως σε YFP + κυψελοειδή κύτταρα στο

Dicer

Homo? YFP

ζώα (Σχήμα 2Β, D).

Για να ελέγξετε αν κυψελωτά στρες αντιστοιχούσε με μειωμένη ταυτότητα κυψελωτά, τροποποιήσαμε ένα πρωτόκολλο διαλογής προηγουμένως αναπτυχθεί για την απομόνωση των παγκρεατικών προγονικών κυττάρων [26] για να διαχωρίσετε ειδικά διαφοροποιημένη κυψελωτά και κύτταρα των πόρων. Βρήκαμε ότι τα ενήλικα πάγκρεας, ενηλίκων acini και αγωγών εκφράζουν την επιθηλιακά δείκτη CD49f, ενώ διαφοροποιημένα αγωγοί εκφράζουν επίσης CD133 (Σχήμα S4B, C). RT-PCR για

Η αμυλάση

και

Mist1

, και

CK19

και

SOX9

, εμπλουτισμένα σε acinar και αγωγών κύτταρα, αντίστοιχα, αποκάλυψε ότι η διαλογή Based επί CD49f και CD133 αφέθηκε για αποτελεσματικό διαχωρισμό αυτών των πληθυσμών (Σχήμα S4A, 4D). Έκφραση τελεστές Notch Hes1, Hey1, και Hey2, περιορίζεται σε centroacinar και τερματικό κύτταρα αγωγού στο ενήλικο πάγκρεας [27], φαίνεται να διαχωρίζεται από το CD49f + CD133 + πληθυσμό αγωγού (Σχήμα S4E).

YFP +, CD49f + CD133- κύτταρα ταξινομήθηκαν από όλες τις 4 γονότυπους. Στην ηλικία των 3 εβδομάδων επίπεδα Dicer και την έκφραση των 2 εκφράζεται σε αφθονία miRNAs μειώθηκαν σημαντικά στα κύτταρα ταξινομημένο από το

Dicer

Homo? YFP

και

Kras? Dicer

Homo? YFP

ποντικούς σε σύγκριση με τους μάρτυρες, με και χωρίς Kras (Σχήμα 2Ε αριστερά). Για να προσδιοριστεί η επίδραση της απώλειας Dicer στη διαφοροποίηση εξωκρινείς, αναλύσαμε την έκφραση των δεικτών acinar αμυλάση και Mist1 και τους δείκτες του αγωγού CK19 και SOX9, σε YFP +, CD49f + CD133- κύτταρα. Ταξινομημένα κύτταρα από

Dicer

Homo? YFP

ποντίκια επέδειξαν μειωθεί σημαντικά η έκφραση του

Η αμυλάση

και σεμνά μειώθηκε

Mist1

σε σύγκριση με κύτταρα από

Dicer

Het? YFP

ποντίκια (Σχήμα 2Ε μέση). Αν και η έκφραση των δεικτών διαφοροποίησης acinar μειώθηκαν, δεν παρατηρήσαμε μια συνεπή αύξηση των πόρου δείκτες

CK19

ή

SOX9

σε αυτά τα κύτταρα (Σχήμα 2Ε δεξιά), παρόμοια με την έλλειψη διαδεδομένη CK19 misexpression σημειώνεται στο σχήμα 1D. Σε κύτταρα CD49f + CD133- από

Kras? Dicer

Homo? YFP

ποντίκια, ωστόσο,

Η αμυλάση

και

Mist1

έκφραση μειωθεί περαιτέρω, και

CK19

και

SOX9

έκφρασης αυξήθηκε, σε σύγκριση με τα κύτταρα . από όλους τους άλλους γονότυπους, σύμφωνη με ιστολογική αύξηση της ADM

Είναι ενδιαφέρον, παρατηρήσαμε επίσης μια μέτρια, αλλά όχι στατιστικά σημαντική, τάση προς μείωση στην έκφραση Mist1 στα κύτταρα ταξινομημένο από το

Kras? Dicer

Het? YFP

ποντίκια σε σύγκριση με το

Dicer

Het? YFP

μάρτυρες, υποδεικνύοντας ότι μεταλλαγμένο Kras μόνη της μπορεί να αρχίσει να θέτει σε κίνδυνο την ταυτότητα κυψελωτά πριν από την επαγωγή του πόρου γονιδίων ή μορφολογία. Στο σύνολό τους, αυτά τα δεδομένα δείχνουν ότι η απώλεια Dicer θέτει σε κίνδυνο την ταυτότητα acinar και προκαλεί τόνισε κατάσταση που επιταχύνει Kras οδηγείται επαναπρογραμματισμό του πόρου και της ADM.

Dicer Απώλεια δεν επιταχύνει PanIN ή PDA Ανάπτυξης

Απώλεια αδενοκυψελών ταυτότητα και ADM επιταχύνει την ανάπτυξη PanIN [6], [24], [28], [29] και την ταχεία ADM και ανάπτυξη PanIN, που προκαλείται από οξεία και χρόνια παγκρεατίτιδα, για παράδειγμα, μπορεί να οδηγήσει σε μειωμένη λανθάνουσα PDA [30], [31] , [32]. Ως εκ τούτου, αναμένεται να παρατηρήσουμε πιο γρήγορα PanIN και PDA ανάπτυξης στο

Kras? Dicer

Homo

ποντίκια σε σύγκριση με τον έλεγχο

Kras? Dicer

Het

ποντίκια. Παρά τη δραματική διαφορά στην ADM παρατηρήθηκε σε 3 εβδομάδες σε

Kras? Dicer

Homo

σε σύγκριση με το

Kras? Dicer

Het

ποντίκια, ποσοτικοποίηση των βλαβών PanIN σε μια μικρή ομάδα των ποντικών σε 9 εβδομάδες δεν έδειξε στατιστικά σημαντική διαφορά στη συχνότητα των θετικών μπλε της Αλσατίας πορογενές βλάβες, γεγονός που υποδηλώνει ότι η απώλεια Dicer δεν επιταχύνει την ανάπτυξη PanIN (Σχήμα 3Α , Β, C). Μακροπρόθεσμη εξέλιξη της νόσου συγκλίνει επίσης ανεξάρτητα από την κατάσταση Dicer όρους. Εμείς δεν βρήκε καμία στατιστικά σημαντική διαφορά στην επιβίωση ενός μικρού ομάδα της ηλικίας

Kras? Dicer

Homo

και

Kras? Dicer

Het

ποντίκια (διάμεση επιβίωση 336 έναντι 441,5 ημέρες, χ

2 = 0,2271, p = 0,6637, υπολογίζεται χρησιμοποιώντας τη δοκιμή Logrank) (Σχήμα 3F). 6/7 του

Kras? Dicer

Het

ποντίκια ανέπτυξαν τοπικά ή ευρύτερα επεμβατική PDA που ήταν γενικά μέτρια διαφοροποιημένα, αλλά περιλαμβάνεται ένα αδιαφοροποίητο καρκίνο. 4 από 6

Kras? Dicer

Homo

ποντίκια ανέπτυξαν μετρίως διαφοροποιημένων, τοπικά ή ευρύτερα επεμβατική, PDA με παρόμοια συχνότητα της μετάστασης και η κυτταρική μορφολογία (Σχήμα 3D, Ε, Πίνακας S1).

(Α-Β) Αντιπρόσωπος της Αλσατίας μπλε χρώση στις 9 εβδομάδες στο

Kras? Dicer

Het

(Α) και

Kras? Dicer

ποντίκια Homo

(Β). στ: το λίπος. Κλίμακα bar 100 μΜ. C, Ποσοτικοποίηση των μπλε της Αλσατίας θετική βλάβες από 9 εβδομάδων

Kras? Dicer

Het

και

Kras? Dicer

Homo

ποντίκια. Γραμμές υποδεικνύουν μέσα. Ρ-τιμή που υπολογίζεται από μια δίπλευρη ασύζευκτη δοκιμασία t. (D, E) Εκπρόσωπος ιστολογία του PDA από το

Kras? Dicer

Het

(D) και

Kras? Dicer

Homo

ποντίκια (Ε). Κλίμακα bar 100 μΜ. καμπύλη (F) Επιβίωση του

Kras? Dicer

Het

(n = 7) και

Kras? Dicer

Homo

(n = 6) ποντικούς.

Η

Dicer διαγράφεται κύτταρα έχουν δειχθεί ότι outcompeted από unrecombined κύτταρα σε άλλα παράγωγα ενδόδερμα όργανα, στο ήπαρ, για παράδειγμα [33] , και την εξάλειψη των ανασυνδυάζονται κυττάρων θα μπορούσε να συμβάλει στην έλλειψη της αναμενόμενης διαφορά στην εξέλιξη της νόσου σε

Kras? Dicer

Homo

έναντι

Kras? Dicer

Het

ποντίκια. Σε αντίθεση με το χρονικό σημείο 3 την εβδομάδα, όταν η κανονική κυψελοειδή κύτταρα ήταν πολύ λιγότερο συχνές σε

Kras? Dicer

Homo

έναντι

Kras? Dicer

Het

ποντίκια, σημαντικές περιοχές της κανονικής αδενοκυψελών ιστού βρέθηκαν στο Kras? Dicer

Η

o

m

o

ποντίκια σε αυτό το χρονικό σημείο (Σχήμα 3Α, Β). Σημειώσαμε επίσης την παρουσία του λίπους αντικατάσταση παγκρέατος ιστού σε ορισμένες

Kras? Dicer

Homo

ζώα (Σχήμα 3Β). Η εξέταση του ιστού διανομής YFP στο πάγκρεας του

Kras? Dicer

Het? YFP

έναντι

Kras? Dicer

Homo? YFP

ζώα αποκάλυψαν αξιοσημείωτη μείωση στην κατανομή YFP στις 9 εβδομάδες (Σχήμα S5), γεγονός που υποδηλώνει εμπλουτισμού πληθυσμών με κύτταρα που δεν είχαν υποστεί ανασυνδυασμό. Ως εκ τούτου, παρά τα αρχικά προώθηση της ADM που επιταχύνει κανονικά PanIN και PDA ανάπτυξη, εξέλιξη PDA δεν είναι σημαντικά αυξημένη σε περίπτωση απουσίας του Dicer και μπορεί να σχετίζεται με την επιλογή ενάντια ανεπάρκεια Dicer.

Dicer Απώλεια συμβιβασμοί Βιωσιμότητα κατά τη διάρκεια Kras Driven ADM

απώλεια Dicer οδηγεί σε αυξημένη απόπτωση σε ορισμένα όργανα ενδοδερμικής (π.χ. ήπαρ και το έντερο [33], [34] για να αντιμετωπιστεί εάν η έλλειψη της προβλεπόμενης επιτάχυνση της ανάπτυξης PanIN σε

Kras? Dicer

Homo

ποντίκια μπορεί να συνεπάγεται αυξημένο κυτταρικό θάνατο, θα ελεγχθεί TUNEL + /YFP + κυττάρων σε ηλικία των 3 εβδομάδων σε αντίθεση με τις σπάνιες διπλά θετικά κύτταρα στο

Dicer

Het?. YFP

και

KRAS? Dicer

Het? YFP

ποντίκια,

Dicer

Homo?. YFP

ποντίκια εμφάνισαν υψηλότερο σχετικό ποσοστό των TUNEL + /YFP + κύτταρα (Σχήμα 4Β, E) Επιπλέον, βρήκαμε ένα πρόσθετη αύξηση των διπλών θετικών κυττάρων στο

Kras? Dicer

Homo? YFP

ποντίκια σε σύγκριση με το

Dicer

Het? YFP

και

Kras? Dicer

Het? YFP

ποντίκια (Εικόνα 4D, E). Είναι ενδιαφέρον ότι, η απώλεια Dicer φάνηκε να συνεργούν με μεταλλαγμένο Kras να προάγουν θάνατο κυττάρου, όπως

Kras? Dicer

Homo? YFP

ποντίκια εμφάνισαν σημαντικά περισσότερα απόπτωση από

Dicer

Homo? YFP

κύτταρα (Σχήμα 4Ε). Ως εκ τούτου, ενώ η επεξεργασία άθικτο Dicer περιορίζει Kras οδηγείται κυψελωτά να πορογενές επαναπρογραμματισμό, μερικοί εξαρτώνται σήματα Dicer μπορεί να απαιτούνται για τη διατήρηση της βιωσιμότητας κατά τη διάρκεια Kras οδηγείται μεταπλασία.

(Α-Δ) TUNEL (μπλε) και YFP (πράσινο) χρώση σε 3 εβδομάδες παλιά

Dicer

Het? YFP

(Α),

Dicer

Homo? YFP

(Β),

Kras? Dicer

Het? YFP

(C), και

Kras? Dicer

Homo? YFP

ποντίκια (D). Κλίμακα bar 100 μΜ. Ε Ποσοτικοποίηση των + YFP + κυττάρων TUNEL στο (Α-Δ). Η μέση ± SD.

Dicer

Het? YFP

(n = 3),

Dicer

Homo? YFP

(n = 4),

Kras? Dicer

Het? YFP

(n = 3), και

Kras? Dicer

Homo? YFP

ποντικών (η = 4). P-τιμή που υπολογίζεται από μια δίπλευρη ασύζευκτη t-test του + YFP + κύτταρα ΤϋΝΕΕ στο

Dicer

Homo? YFP

και

Kras? Dicer

Homo? YFP

ποντίκια. ΣΤ Λοβίων εμπλουτίζεται και βιωσιμότητα που σχετίζεται γονίδια από την ανάλυση της έκφρασης (αριστερά). RT-PCR ανάλυση των Nupr1, Agr2, Itih4, και Reg3b στα κυψελιδικά εμπλουτισμένα κύτταρα από

Dicer

Het? YFP

(n = 4),

Dicer

Homo? YFP

(n = 4),

Kras? Dicer

Het? YFP

(n = 3), και

Kras? Dicer

Homo? YFP

(n = 3) ποντίκια (δεξιά). Η μέση ± SD. Ρ-τιμή που υπολογίζεται από μια δίπλευρη ασύζευκτη δοκιμασία t σύγκριση της έκφρασης Agr2 σε ταξινομημένη κύτταρα από

Dicer

Het? YFP

και

Kras? Dicer

Het? YFP

ποντίκια.

Η

Πραγματοποιήσαμε ανάλυση της έκφρασης στην οθόνη των εξαρτώμενων Dicer παράγοντες που δυνητικά εμπλέκονται στη διατήρηση της βιωσιμότητας κατά τη διάρκεια Kras οδηγείται ADM. Για να συγχρονίσετε καλύτερα ADM στο

Kras? Dicer

Het

και

Kras? Dicer

Homo

ποντίκια, χρησιμοποιήσαμε κερουλεΐνης παγκρεατίτιδας. Όπως είχε προβλεφθεί από τις προηγούμενες μελέτες [6], κερουλεΐνη θεραπεία στον έλεγχο, ηλικίας 3 εβδομάδες

Kras? Dicer

Het

ποντίκια οδήγησε στην ανάπτυξη του αγωγού όπως δομές 2 ημέρες μετά τη θεραπεία (Σχήμα S6a), και εκτεταμένη αντικατάσταση του διαμερίσματος εξωκρινών με την ADM, PanINs, και ίνωση, 21 ημέρες μετά την αγωγή (Σχήμα S6C). Αντανακλώντας την έλλειψη της επιταχυνόμενης ανάπτυξης PanIN μεταξύ 3 και 9 εβδομάδες σε

Kras? Dicer

Homo

ποντίκια (Σχήμα 3F), παρατηρήσαμε λιγότερο μεταπλασία και πολύ πιο φυσιολογική κυψελωτά ιστού 21 ημέρες μετά κερουλεΐνης θεραπεία σε

Kras? Dicer

Homo

ποντίκια (Σχήμα S6D). RNA-Seq ανάλυση συγκεντρωμένων RNA από FACS απομονωθεί YFP +, CD49f +, CD133- κυψελιδικά κύτταρα από ηλικίας 3 εβδομάδες

Kras? Dicer

Het? YFP

(3 ποντίκια) και

Kras? Dicer

Homo? YFP

(5 ποντικοί) ποντικούς 2 ημέρες μετά κερουλεΐνη (Σχήμα S6E) αποκάλυψε -120 γονίδια σημαντικά μειωτικά μεταξύ μεταλλαγμένου και ελέγχου. Υποστηρίζοντας την παρατήρηση ότι η απώλεια του Dicer θέτει σε κίνδυνο τη διαφοροποίηση κυψελωτά, 42 γονίδια που συνδέονται με τερματικά διαφοροποιημένα κυψελιδικά κύτταρα σημαντικά μειωτικά (Σχήμα 4F, Πίνακας S2, πλήρες σύνολο δεδομένων πίνακα S3). Επίσης μειώνεται ήταν γονίδια που εμπλέκονται στη διατήρηση της βιωσιμότητας κατά την αναγέννηση ή ογκογένεσης, συμπεριλαμβανομένων Nupr1 /Ρ8, Agr2, Itih4, και τα μέλη της οικογένειας πρωτεΐνης Reg3 (Σχήμα 4F, Πίνακας S2). Πρόσφατα, δύο Nupr1 και Agr2 έχει αποδειχθεί ότι υπερεκφράζεται κατά την διάρκεια της εξέλιξης PanIN-PDA και να παίζουν ένα ρόλο στην ανάπτυξη και τη διατήρηση PanIN PDA βιωσιμότητα [35], [36], [37]. έκφραση Reg3 οικογένειας πρωτεϊνών ενεργοποιείται σε απόκριση προς παγκρεατίτιδα [38], και μέλος της οικογένειας Reg3b (επίσης γνωστή ως ΡΑΡ1) ειδικά εμπλέκεται στη διατήρηση της βιωσιμότητας acinar και μπορεί να δράσει προς τα κάτω του Nupr1 [39], [40]. Παρά το γεγονός ότι δεν Itih4 έχει εμπλακεί στην ανάπτυξη PDA, έχει αποδειχθεί ότι εμπλέκεται στη διατήρηση της βιωσιμότητας κατάντη της κρίσιμης PDA μεσολαβητής c-myc [41] σε ένα μοντέλο καρκίνου του ήπατος [42]. RT-PCR ανάλυση των εν λόγω υποψήφια γονίδια σε ταξινομημένο acini από 3 εβδομάδων ποντικούς αποκάλυψε ότι η έκφραση τους συσχετίζεται αντίστροφα με την απόπτωση (Σχήμα 4F, δεξιά). Nupr1, Agr2, Itih4 και Reg3b έκφραση μειώθηκε σε ταξινομημένη κύτταρα από

Kras? Dicer

Homo? YFP

ποντίκια σε σύγκριση με τον έλεγχο

Dicer

Het? YFP

και

Kras? Dicer

Het? YFP

ζώα. Επίσης, Agr2, έκφραση Itih4 και Reg3b μειώθηκε σε ταξινομημένα κύτταρα από

Dicer

Homo? YFP

ποντικούς σε σύγκριση με τους μάρτυρες. Είναι ενδιαφέρον, Agr2 ήταν επίσης σημαντικά αυξημένη στα κύτταρα ταξινομημένο από το

Kras? Dicer

Het? YFP

ποντίκια σε σύγκριση με κύτταρα από

Dicer

Het? YFP

ποντίκια, γεγονός που υποδηλώνει ότι Kras μπορεί να συμβάλει στην Agr2 ρύθμιση προς τα πάνω, ακόμη και πριν συμβεί η ADM. Ως εκ τούτου, η έκφραση Dicer απαιτείται για τη συντήρηση του ώριμου κατάσταση διαφοροποίησης acinar και για την έκφραση των γονιδίων προ-βιωσιμότητας κατά τη διάρκεια Kras οδηγείται ADM.

Ποντίκι PDA μπορεί να αναπτυχθεί με την απουσία του Dicer

Dicer τα επίπεδα έχει δειχθεί ότι είναι σημαντικοί ρυθμιστές της ογκογένεσης, που ενεργεί ως καταστολέας όγκου haploinsufficient στο πλαίσιο του μεταλλαγμένου Kras στις δύο όγκων του πνεύμονα και σαρκώματα, καθώς και σε ρετινοβλάστωμα [13], [14]. Ωστόσο, οι όγκοι σε αυτά τα μοντέλα φαίνεται να προκύπτουν από κύτταρα τα οποία έχουν διατηρήσει την έκφραση ενός τουλάχιστον unrecombined υπό όρους αλληλόμορφο. Για να προσδιορίσετε αν ελαττωματικών κυττάρων Dicer ήταν ικανές να συμβάλλουν στην Kras οδηγείται PDA εξετάσαμε την έκφραση Dicer και γονιδιωματική ανασυνδυασμού από 3 κυτταρικές σειρές PDA που δημιουργείται από το

Kras? Dicer

Het

και

Kras? Dicer

Homo

ποντίκια. Με RT-PCR παρατηρήσαμε παρόμοια έκφραση Dicer σε όλες τις κυτταρικές σειρές τριών PDA που προέρχονται από

Kras? Dicer

Het

ποντίκια (Εικόνα 5Α). Λόγω του υψηλού ποσοστού της απόπτωσης που παρατηρήθηκε σε ηλικία 3 εβδομάδων, η μειωμένη έκφραση των γονιδίων που υποστηρίζουν την ανάπτυξη PanIN, και η έλλειψη της επιταχυνόμενης εξέλιξης της νόσου, περιμέναμε να παρατηρήσουμε κατακράτηση τουλάχιστον ένα αλληλόμορφο σε γραμμές PDA που προέρχονται από

Kras? Dicer

Homo

PDA. Παραδόξως, βρήκαμε ότι μία γραμμή που αναγράφεται μειώθηκε δραματικά την έκφραση Dicer, ενώ οι δύο υπόλοιπες γραμμές εκφράζεται είτε παρόμοια, ή υψηλότερη, επίπεδο, όπως

Kras? Dicer

Het

προέρχεται γραμμές. Αλληλόμορφο ειδική PCR αποκάλυψε ότι Dicer ανασυνδυασμού συσχετίζεται άμεσα με την έκφραση (Εικόνα 5Β: «Undel», δεν εξαρτάται από Dicer αλληλόμορφο ανασυνδυασμού? «Hemi», ανασυνδυασμός ένα αλληλόμορφο? «Homo», ανασυνδυασμός των δύο αλληλόμορφα). RT-PCR για 3 ώριμες miRNAs αναφερθεί ότι είναι υπερ-εκφράζεται σε ανθρώπινα PDA [43], [44] έδειξε μείωση σε όλες τις 3 miRNAs στο ομόζυγη διαγραφή γραμμή σε λιγότερο από 95% αυτής που εκφράζονται στην Ξεδιαγράφηκαν γραμμή (Σχήμα 5C) . Ως εκ τούτου, Kras οδηγείται PDA στο ποντίκι φαίνεται σε θέση να αποφύγει αρνητική επιλογή κατά την έναρξη της νόσου και στην ανάπτυξη στην απουσία του Dicer. Όπως είχε προβλεφθεί από τα μοντέλα που αποδεικνύουν ότι η ρύθμιση προς τα κάτω, αλλά όχι πλήρη απώλεια της επεξεργασίας miRNA, μπορεί να ενισχύσει την ογκογένεση [12], [13], η ημιζυγωτική διαγράφεται γραμμή αυξήθηκε ταχύτερα, ενώ η ομόζυγη διαγραφή γραμμή πιο αργή (Σχήμα 5D). Όλα τα 3 κυτταρικές σειρές ήταν επίσης σε θέση να σχηματίζουν όγκους όταν εμφυτεύονται υποδόρια στην ανοσολογική ανεπαρκή ποντίκια, με κινητική αντανακλώντας τα ποσοστά αύξησης καλλιέργειας κυττάρων (Σχήμα 5Ε). Αλληλόμορφων ειδική PCR αποκάλυψε ότι οι όγκοι δεν ήταν αποτέλεσμα κύτταρα που υποβλήθηκαν σε αυθόρμητη ανασυνδυασμού (UnDel, Hemi), ή από ένα μολυσματική υποπληθυσμό ικανών κυττάρων Dicer (Homo), αν και κάναμε παρατηρούμε την παρουσία του αμπλικονίου WT Dicer σε όγκους που προέρχονται από το Hemi και Homo γραμμές, ενδεικτικό της πρόσληψης στρωματικών υποδοχής (Σχήμα 5F). Ως εκ τούτου, αν και εξάλειψη Dicer βλάπτει τη βιωσιμότητα κατά τα πρώτα στάδια της Kras οδηγείται νεοπλασία, η απώλεια του Dicer δεν είναι αμοιβαία αποκλειόμενες με παγκρεατικά μετασχηματισμού.

Α. Dicer RT-PCR σε κυτταρικές σειρές PDA που δημιουργείται από το

Kras? Dicer

Het

(μπλε) και

Kras? Dicer

Homo

(κόκκινο) ποντίκια. Κάθε ράβδος αντιπροσωπεύει δεδομένα από 3 ανεξάρτητα φρεάτια της κάθε κυτταρικής σειράς. Η μέση ± SD. Β PCR ανίχνευση WT, unrecombined (UNREC), και διαγράφεται (DEL) Dicer γονιδιακού τόπου σε κυτταρικές σειρές από A. Οι έλεγχοι είναι ενισχυμένο DNA από εμβρυϊκούς ινοβλάστες ποντικού (ΠΜΑ) της έδειξε Dicer γονότυπο παρακάτω αδενοϊική θεραπεία Cre. Γ miRNA QPCR για miRNA-16, 107, 191 σε κυτταρικές σειρές που προέρχονται από

Kras? Dicer

Homo

ποντίκια. Κάθε ράβδος αντιπροσωπεύει 3 ανεξάρτητα φρεάτια της κάθε κυτταρικής σειράς. Η μέση ± SD. Δ Η ανάπτυξη των κυτταρικών σειρών PDA που προέρχονται από

Kras? Dicer

Homo

ποντίκια. Κάθε σημείο αντιπροσωπεύει τιμές από 3 ανεξάρτητες φρεάτια. Η μέση ± SD. Ρ-τιμή που υπολογίζεται από μια δίπλευρη ασύζευκτη δοκιμασία t σύγκριση του αριθμού των κυττάρων στις 72 ώρες σε καλλιέργειες Undel και κυττάρων Homo. την ανάπτυξη του όγκου Ε υποδόρια κυτταρικών σειρών PDA που προέρχονται από

Kras? Dicer

Homo

ποντίκια. Η μέση ± SD σε κάθε χρονική στιγμή. Undel (n = 7), Hemi (n = 7), Homo (n = 12). ΣΤ PCR ανίχνευση WT, UNREC και DEL Dicer γονιδιακού τόπου στον υποδόριο όγκους κατά τη στιγμή της θυσίας στο Ε έλεγχοι είναι Dicer

fl

o

χ /+ ΠΜΑ αγωγή με αδενοϊικό Cre όπως στο Β Tumor τα DNAs προηγείται ενίσχυση του DNA από γονικές κυτταρικές σειρές.

η

Συζήτηση

λειτουργία Dicer είναι απαραίτητη για την ανάπτυξη πολλών οργάνων, συμπεριλαμβανομένων των ιστών που προέρχονται από ενδόδερμα όπως το ήπαρ και ο εντέρου [33], [34]. Συντήρηση της έκφρασης Dicer στις αρχές Pdx1 θετικό παγκρεατική προγόνους απαιτείται για την ανάπτυξη τόσο του παγκρεατικής εξωκρινούς και ενδοκρινικές διαμερίσματα [20]. Εδώ, θα διαπιστώσετε ότι η λειτουργία Dicer παραμένει σημαντική σε όλη την ανάπτυξη του παγκρέατος και παίζει ένα ρόλο στη ρύθμιση της ταυτότητας acinar και η βιωσιμότητα. Το μοντέλο μας χρησιμοποιεί μια γραμμή οδήγησης που ξεκινά Dicer ανασυνδυασμό στις αναπτυσσόμενες πάγκρεας σε μεταγενέστερο εμβρυϊκό στάδιο από τον οδηγό Cre χρησιμοποιείται από Lynn και οι συνεργάτες του [21]. Παρατηρούμε ελάχιστες μακροσκοπικές επιπτώσεις στην ανάπτυξη του παγκρέατος, γεγονός που υποδηλώνει απαιτήσεις στάδιο ευαίσθητο για την επεξεργασία miRNA σχετικά με την ίδρυση και την επέκταση εξωκρινείς και ενδοκρινείς προγόνους. Ωστόσο, τα κυψελοειδή κύτταρα που αναπτύσσουν είναι ασταθή τόσο σε σχέση με την τερματική διαφοροποίηση και τη βιωσιμότητά τους. Τα στοιχεία ταυτότητας acinar μειωτικά, και η κυτταρική στρες και της απόπτωσης αυξάνονται και τα δύο. Ως εκ τούτου, οι αρμόδιες επεξεργασία miRNA φαίνεται να παραμένουν σημαντικά ακόμη και στην ώριμη διαμέρισμα εξωκρινών.

Επειδή διαγραφή Dicer σε αυτό το μοντέλο επιτρέπει την ανάπτυξη του παγκρέατος ήμασταν σε θέση να διερευνήσει το ρόλο της λειτουργίας Dicer στο Kras ανάπτυξη μεσολάβηση PDA. μοντέλα ποντικιού έχουν αποκαλύψει ότι ογκογόνος Kras μπορεί να λειτουργήσει ως «κύριος ρυθμιστής» της ανάπτυξης PDA, για την ίδρυση καταγωγές που μπορούν να οδηγήσουν σε PanINs και PDA και υπόλοιπο κρίσιμη για την εξέλιξη [1], [2], [3]. Σημαντικές ενδείξεις υποδεικνύουν ότι κυψελοειδή κύτταρα μπορούν να προκαλέσουν PanINs μέσω της πραγματοποίησης ADM, μια διαδικασία κατά την οποία κυψελοειδή κύτταρα χάνουν την τερματική διαφοροποίηση σε βάρος ενός απο-διαφοροποιημένα, αγωγός κατάσταση όμοια [4], [5], [6], [7 ]. KRAS οδηγείται ADM εμφανίζεται σταδιακά, αλλά μπορεί να επιταχυνθεί με συμβιβασμούς διαφοροποίηση κυψελωτά. Προσβολές όπως παγκρεατίτιδα, η οποία προκαλεί την αναγέννηση συνδέονται αποδιαφοροποίηση [6], [45], η ενεργοποίηση του συνδέεται προγονικών οδών (π.χ. Notch [24]), και αδρανοποιώντας τα γονίδια που διατηρούν την κατάσταση κυψελοειδή [28], [29], [46] όλα επιταχύνει δραματικά Kras γνώμονα την ADM και την ανάπτυξη PanIN. Ως εκ τούτου, η απώλεια της ταυτότητας αδενοκυψελών μπορεί να είναι ένα βασικό εμπόδιο για την εξαρτώμενη από Kras προδιαγραφές των πρόδρομων PDA προέρχεται κυψελωτά. Τα στοιχεία μας δείχνουν ότι η απώλεια της λειτουργίας του Dicer απομακρύνει το φράγμα διαφοροποίηση για Kras οδηγείται ADM. Η ADM εμφανίζεται σε 3 εβδομάδες σε

Kras?