Αφηρημένο

την ανάπτυξη του καρκίνου και τη διάδοση έχουν μελετηθεί εκτενώς για μεγάλο χρονικό διάστημα. Παρ ‘όλα αυτά, πολλές νέες παρατηρήσεις σχετικά με ανατομική των εκδηλώσεων του καρκίνου εξακολουθούν να αναφέρονται όπως ο σχηματισμός ενός vasculogenic μοιάζει δίκτυο εντός επιθετικούς όγκους. Σε αυτή την έρευνα, νέα είδη μικρο-αγωγών, που ονομάζεται Primo-σκάφη, βρέθηκαν μέσα στην κοιλιακή κοιλότητα του NCI-Η460 καρκίνου του πνεύμονα μοντέλα ξενομοσχεύματος ποντικού. Αυτές οι αγγειακές κλωστές διανεμήθηκαν σε μεγάλο βαθμό από τις επιφάνειες των διαφόρων οργάνων και συχνά συνδέεται με περιτοναϊκή οζίδια όγκου. Η ιστολογική και ανοσοφθορισμού έρευνες έδειξαν ότι οι Primo-σκάφη είχαν χαρακτηριστικά που ήταν εμφανώς διαφορετικά από εκείνα παρόμοια εμφάνιση λεμφαγγείων. Είχαν πολλαπλά κανάλια περιβάλλονται με χαλαρά collageneous μήτρες, η οποία είναι σε αντίθεση με την δομή μονού καναλιού άλλων αγγειακών συστημάτων. Οι πυρήνες ραβδόμορφα ευθυγραμμίζονται κατά μήκος των καναλιών υποτεθεί ότι είναι τα ενδοθηλιακά κύτταρα των Primo-αγγεία, αλλά LYVE-1, ένα ειδικός δείκτης λεμφαγγεία, δεν εκφράστηκε, η οποία δείχνει μια σαφή διαφορά από λεμφικά ενδοθηλιακά κύτταρα. Στο σύνολό τους αυτά τα ευρήματα σχετικά και το χαρακτηρισμό των νέων νηματοειδή αγγειακών δομών σε μοντέλα καρκίνου μπορεί να έχει σημαντικές συνέπειες για την πρόγνωση του καρκίνου και για τη θεραπεία

Παράθεση:. Yoo JS, Ayati ΜΗ, Kim ΗΒ, Zhang Wb, Soh KS ( 2010) Χαρακτηρισμός του συστήματος Primo-Αγγειακή στην κοιλιακή κοιλότητα του Καρκίνου του πνεύμονα μοντέλο ποντικού και οι διαφορές του από το λεμφικού συστήματος. PLoS ONE 5 (4): e9940. doi: 10.1371 /journal.pone.0009940

Επιμέλεια: Syed A. Αζίζ, Health Canada, Καναδάς

Ελήφθη: 27 Γενάρη του 2010? Αποδεκτές: 9 του Μαρτίου 2010? Δημοσιεύθηκε: 1, Απριλίου του 2010

Copyright: © 2010 Yoo et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η έρευνα υποστηρίχθηκε από μια Υποδομών Systems Biology Ίδρυση Επιχορήγηση από την Gwangju Ινστιτούτο Επιστήμης και Τεχνολογίας. Jung Ήλιος Yoo υποστηρίχθηκε από τη Σεούλ Science Fellowship. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Primo-σκάφη (Bonghan αγωγοί) είναι νέα είδη μικρο-αγωγούς και υποτίθεται ότι είναι η μηχανιστική υποστήριξη των μεσημβρινών του βελονισμού στην παραδοσιακή ασιατική ιατρική. Στις αρχές της δεκαετίας του 1960, Bong-Han Κιμ της Βόρειας Κορέας ισχυρίστηκαν ότι έχουν ανακαλύψει αυτά τα κανάλια, πήρε το όνομά του, το οποίο διαμορφώνεται ένα νέο κυκλοφοριακό σύστημα σε όλο το σώμα του ζώου [1]. Δεν, ωστόσο, αποκαλύπτει μέθοδο του παρατηρώντας το σύστημα με λεπτομέρεια, έτσι ώστε μέχρι πρόσφατα, δεν ακριβή επιβεβαίωση της δουλειάς του ολοκληρώθηκε ποτέ, παρά τις πολλές προσπάθειες στην Κίνα, την Ιαπωνία και τη Ρωσία, με εξαίρεση, για μερική αναπαραγωγή από μια ιαπωνική ανατόμος , Fujiwara [2].

οι παρατηρήσεις του Primo-σκαφών σε κουνέλια, αρουραίους και ποντίκια πρόσφατα εφαρμόζοντας σύγχρονες τεχνικές βιο-απεικόνισης [3], η οποία δεν έχει επιβεβαιωθεί μόνο αξιώσεις Κιμ, αλλά παρείχε επίσης νέα ευρήματα και πληροφορίες, όπως

in vivo

χρώση των Primo-σκάφη με Trypan blue [4] και την ύπαρξη Primo-σκαφών μέσα λιπώδεις ιστούς [5] και στις επιφάνειες του υποδόριου ιστού του όγκου [6]. Επιπλέον, ορισμένα στοιχεία για μια λειτουργία με υγρό διεξαγωγή του Primo-αγγειακό σύστημα έχει παρασχεθεί από τις μετρήσεις της ταχύτητας ροής [7] και το ιξώδες του ρευστού [8].

Στην παρούσα εργασία, παρατηρήσαμε primo -vessels στις επιφάνειες των κοιλιακών οργάνων και γύρω από την περιτοναϊκή οζίδια όγκου σε πνεύμονα μοντέλα ποντικών με καρκίνο. Για να φωτιστούν οι πρότυπα κατανομής των Primo-σκαφών στο πλαίσιο της βιολογίας του καρκίνου, χρησιμοποιήσαμε δύο σύνολα μοντέλων καρκίνου, δηλαδή, υποδόρια (SC) μοντέλο ξενομοσχεύματος και η ενδοπεριτοναϊκή (ip) πειραματικό μοντέλο μετάστασης χρησιμοποιώντας χορήγηση ΝΟΙ-Η460 ανθρώπινου πνεύμονα καρκινικά κύτταρα [9], [10]. Trypan blue χρώση υπό

in vivo

και

in situ

συνθήκες [4], [11] εφαρμόστηκε για να αποκαλύψει την έκταση των Primo-αγγεία σε ποντίκια που φέρουν όγκο, η οποία ήταν δυνατή λόγω με το χρώμα που απορροφάται κατά προτίμηση μέσα στην χαλαρή δομή του Primo-σκαφών σε σύγκριση με άλλες κοιλιακό ιστούς.

Θα πραγματοποιηθεί, επίσης, ιστολογικές και ανοσοφθορισμού έρευνες για τη διάκριση των Primo-σκαφών από παρόμοια εμφάνιση λεμφαγγείων. Η διάκριση μεταξύ Primo-σκάφη και τα λεμφαγγεία έχει μια επικείμενη θέμα λόγω των ομοιοτήτων αυτών των μορφολογικών χαρακτηριστικών. Αν και αυτό το πρόβλημα εν μέρει επιλυθεί από τη χρήση συμβατικών ιστολογία και ηλεκτρονική μικροσκοπία [12], [13], μια πιο πειστική εξέταση, όπως ανοσοϊστοχημεία με ένα αξιόπιστο μοριακού δείκτη του λεμφικά ενδοθηλιακά κύτταρα, LYVE-1 [14], [15], [16], δεν είχε δοκιμάσει μέχρι αυτή την έρευνα. Στο οποίο πραγματοποιήσαμε ανοσοχρώση με LYVE-1, εκτός από τη χρήση διαφόρων συμβατικών ιστολογικές εξετάσεις, για να δείξει τη διάκριση μεταξύ Primo-σκάφη και τα λεμφαγγεία.

Αποτελέσματα

διεγχειρητική απεικόνιση του Primo-σκαφών σε sc Ξενομοσχεύματα

Για να απεικονίσει Primo-σκάφη υποδορίως ξενομοσχεύματα ποντίκι, εκτελέσαμε προσεκτική κοιλιακή χειρουργική επέμβαση σε δύο έως οκτώ εβδομάδες μετά τον εμβολιασμό του 1 × 10

7 ΝΟΙ-Η460 καρκινικά κύτταρα ανθρώπινου πνεύμονα. Το Σχήμα 1 παρουσιάζει ανατομικές εικόνες της Primo-αγγειακό σύστημα, χρωματίστηκαν με trypan blue (μπλε χρώμα), στο εσωτερικό των κοιλίες του s.c. ποντίκια που φέρουν όγκους.

Επί τόπου

trypan blue εξάπλωσης υπό πραγματικές συνθήκες αποκάλυψε ημιδιάφανο Primo-αγγεία (βέλη) σε λιπώδεις ιστούς (Σχήματα 1Α λεπτό έντερο, AW? κοιλιακό τοίχωμα

Η

Η ιστολογική Χαρακτηρισμός Primo-σκαφών με την H & amp?. Ε και MT χρώσης

Μια περαιτέρω χαρακτηρισμό για να βρείτε μια διακριτική μορφολογία των Primo-σκάφη διεξήχθη με τη χρήση ενός histopatholgic εξέταση. Το Σχήμα 3 παρουσιάζει τυπικό Primo-κόμβους και Primo-σκάφη που λαμβάνεται από ξενομοσχεύματα καρκίνου του πνεύμονα. Αιματοξυλίνη και ηωσίνη (Η &? Ε) τριχρωματική και του Masson (ΜΤ) χρώση αποκάλυψε πολλαπλούς αυλούς (βέλη) με επιπλέοντα κύτταρα (βέλη) σε όλα τα δείγματα, και αυτή η δομή πολλαπλών αυλών είναι διαφορετική από τη δομή μονού αυλού της λέμφου ή τα αιμοφόρα αγγεία . Επιπλέον, χρώση MT αποκάλυψε Primo-αγγειακό σύστημα που αποτελείται από χαλαρές ίνες κολλαγόνου (μπλε χρώμα) που περιβάλλει τους αυλούς. Αυτό το αποτέλεσμα δείχνει ότι Primo-σκάφη δεν μπορούν να εκληφθούν ως πηγμένο θρόμβων ή άλλα αντικείμενα

(Α) Παρουσιάζονται σε ένα αντιπροσωπευτικό αιματοξυλίνη και ηωσίνη (Η & amp? Ε). -stained Primo-κόμβο διατομή (επάνω) και τριχρωματική ενός του Masson (MT) -stained παρακείμενο τμήμα (κάτω). Δικαίωμα αριθμοί είναι διευρυμένη εικόνες από τα αριστερά σχήματα. (Β) που απεικονίζονται είναι Primo-σκάφος διατομές που βάφτηκαν με Η &? Ε (αριστερά) και ΜΤ (δεξιά). (Γ) Η &? Ε χρώση λοξή τομή που περιλαμβάνει τόσο μια Primo-κόμβο (διπλό βέλος) και ένα Primo-σκάφος (μια διακεκομμένη βέλος). Μια εικόνα του Primo-κόμβο μεγεθύνθηκε στο σχήμα δεξιά. Υπάρχουν πολλά lumens (βέλη) με κυμαινόμενο κύτταρα (βέλη) σε όλα τα δείγματα τα οποία είναι διαφορετική από μια ενιαία δομή αυλό της λέμφου ή τα αιμοφόρα αγγεία. Επιπλέον, χρώση MT αποκάλυψε Primo-αγγειακό σύστημα αποτελείται από χαλαρές ίνες κολλαγόνου (μπλε χρώμα) γύρω lumens.

Η

Η ανοσοχρώση με Λεμφικό δείκτης των λεμφαγγείων, LYVE-1

Για να πειστικά διακρίσεις Primo-σκάφη από λεμφαγγείων, είμαστε δίπλα διεξήχθη ανοσοϊστοχημική εξέταση με LYVE-1. Το Σχήμα 4 απεικονίζει τα αποτελέσματα της χρώσης ανοσοφθορισμού της Primo-σκάφος σε ένα ξενομόσχευμα καρκίνου των πνευμόνων. Primo-σκάφους και του λεμφικού αγγείου διατομές υποβλήθηκαν σε αγωγή με πολυκλωνικό αντίσωμα αντι-LYVE1 (πράσινο) ή πολυκλωνικό αντίσωμα ελέγχου ισοτύπου και παρατηρήθηκαν με συνεστιακή μικροσκοπία φθορισμού. Λήφθηκαν επίσης εικόνες φθορισμού DAPI (μπλε) -exhibiting πυρήνες και εικόνες DIC. Τα λεμφικά ενδοθηλιακά κύτταρα με ισχυρή θετική χρώση σαφώς βρίσκεται στο εσωτερικό όριο του λεμφικού αγγείου (Σχ. 4Α), ενώ δεν υπάρχουν LYVE-1 θετικά κύτταρα φαίνεται στο Primo-σκάφος (Εικ. 4C). αγωγή με αντίσωμα ελέγχου ισοτύπου δεν έδειξε φθορίζον σήμα, αποδεικνύοντας τα αποτελέσματα χρώσης για να είναι αξιόπιστη. Ένα μέρος του ίδιου δείγματος που είχαν υποβληθεί σε θεραπεία με μόνο ϋΑΡΙ χωρίς κοπή και είχαν τοποθετηθεί κατά μήκος αποκαλυφθεί ευθυγραμμισμένα ραβδόμορφο πυρήνες γύρω από τους αυλούς, οι οποίες πυρήνες υποτίθεται ότι είναι τα ενδοθηλιακά κύτταρα του Primo-σκάφος (Εικ. 4Ε).

διατομές Primo-σκάφος υποβλήθηκαν σε αγωγή με πολυκλωνικό αντίσωμα αντι-LYVE1 (πράσινο) ή πολυκλωνικό αντίσωμα ελέγχου ισο-τύπου (C, D) και παρατηρήθηκαν με συνεστιακή μικροσκοπία. Λεμφικού διατομές σκάφος βάφτηκαν με τα ίδια αντισώματα και παρατηρήθηκαν ως θετικοί έλεγχοι (Α, Β). Λήφθηκαν επίσης εικόνες φθορισμού του ϋΑΡΙ (μπλε) που παρουσιάζουν πυρήνες και εικόνες DIC. Λεμφικού ενδοθηλιακών κυττάρων με ισχυρή θετική χρώση σαφώς βρίσκεται στο εσωτερικό όριο του λεμφικού σκάφος, ενώ δεν LYVE-1 θετικά κύτταρα παρατηρήθηκαν στο Primo-σκάφος. Ένα μέρος του ίδιου δείγματος που υποβλήθηκε σε επεξεργασία μόνο με ϋΑΡΙ χωρίς κοπή και συναρμολογείται αποκάλυψε διαμήκως ευθυγραμμισμένα πυρήνες ράβδου σχήματος που περιβάλλει lumens υποτίθεται ότι είναι τα ενδοθηλιακά κύτταρα του Primo-σκάφους (Ε).

Η

Συζήτηση

η παρούσα μελέτη είναι η πρώτη ανατομική επίδειξης και ανοσοφθορισμό διερεύνηση της Primo-αγγειακό σύστημα, ένα νέο δίκτυο αγγειακού υγρού αγώγιμο, στον πνεύμονα μοντέλα ποντικών με καρκίνο. Κυρίως διανέμεται Primo-σκάφη παρατηρήθηκαν στις επιφάνειες των κοιλιακών οργάνων, σε συνδυασμό με την ανάπτυξη του όγκου. Primo-σκάφη θα μπορούσαν να διακριθούν από παρόμοια εμφάνιση λεμφαγγείων 1) από την υψηλή τους

in vivo

συγγένεια με χρώση με trypan blue, 2) από τα χαρακτηριστικά ιστολογική τους, δηλαδή, δομή πολλαπλών αυλών με χαλαρά collageneous μήτρες, και 3) με ανοσιοχημικές χαρακτηριστικό τους, δηλαδή, αρνητική έκφραση της LYVE-1.

Προνομιακή χρώση των Primo-σκαφών από trypan μπλε κάτω από το

in vivo

συνθήκες ήταν αναφερθεί στο παρελθόν [4]. Σε αυτό το άρθρο, εφαρμόζονται και αφαιρούνται 0,1% trypan μπλε κάτω από τον αέρα, αποτρέποντας την γενικευμένη εξάπλωση σε όλη την κοιλιακή κοιλότητα, για να αποκαλύψει ολόκληρη τη διανομή των Primo-σκάφη με υψηλή αντίθεση στους ιστούς φόντο. Αυτή η υψηλή διείσδυση και χρώση trypan blue επί Primo-σκάφη μπορούν να εξηγηθεί από τις Primo-σκάφη έχουν περισσότερο χαλαρή μήτρα ιστού με κάποια ανοίγματα και πόρους στο εξωτερικό όριο από άλλους ιστούς. Trypan Blue είναι ένα πολύ γνωστό ζωτική χρωστική και έχει χρησιμοποιηθεί για την οπτικοποίηση της ενδοθήλιο του κερατοειδούς σε χειρουργική εμπρόσθιου τμήματος [17] ή την πρόσθια κάψα σε χειρουργική επέμβαση καταρράκτη [18] ή επιωχρικών μεμβρανών σε πολλαπλασιαστική χειρουργική υαλοαμφιβληστροειδοπάθεια [11]. Η εργασία αυτή επιβεβαίωσε την αποτελεσματικότητα της χρήσης ζωτική χρώση με trypan blue για να απεικονίσει τη διανομή των κοιλιακών Primo-σκαφών.

Βρήκαμε καλά ανεπτυγμένη κοιλιακό δίκτυα Primo-σκαφών σε ποντικούς που φέρουν όγκο, για πρώτη φορά. Ειδικά, συχνά παρατηρείται Primo-σκάφη συνδεδεμένο με οζίδια του όγκου, με την ανάπτυξη αυτής της νέας αρχιτεκτονικής πιθανώς οδηγείται από τις ανάγκες του όγκου, δηλ προβλέποντας παροχή διατροφής στον όγκο και για την αποτελεσματική μεταφορά των αποσπασμένων κυττάρων όγκου για μετάσταση. Παρά το γεγονός ότι θα πρέπει να αντιμετωπιστούν περαιτέρω ποσοτικές μελέτες σχετικά με το φορτίο του όγκου και μορφομετρία των Primo-σκάφη, τα προκαταρκτικά αυτά ανατομικά ευρήματα μπορεί να παρέχει σημαντικές επιπτώσεις για την πρόγνωση του καρκίνου και για τη θεραπεία

Λόγω της εμφανούς μορφολογική ομοιότητα -. Διάφανη λεπτή δομή – μεταξύ λεμφαγγεία και Primo-σκάφη, διακρίνοντας μεταξύ τους είναι κρίσιμη. Μια διάκριση που βασίζεται στο ακαθάριστο ανατομικά χαρακτηριστικά [19] και ιστολογική λεπτομέρειες [12] σε κουνέλια αναφέρθηκε πριν. Οι Primo-σκάφη πλωτά μέσα στην ροή των λεμφικών αγγείων των αρουραίων και κουνελιών προδήλως αποδεικνύεται ότι πρόκειται για δύο διαφορετικά συστήματα [20], [21], [22]. Σε αυτή την έρευνα, καταφέραμε όχι μόνο μια συμβατική ιστολογική αλλά και ανοσοφθορισμό εξέταση Primo-σκαφών που λαμβάνονται από ποντίκια που φέρουν όγκους να επαληθεύσει τα ευρήματα των προηγούμενων εκθέσεων. Η &? Ε και χρώση MT αποκάλυψε πολλαπλούς αυλούς που περιβάλλεται με χαλαρές ίνες κολλαγόνου στο Primo-σκάφη, και οι εν λόγω δομές πολλαπλών αυλών ήταν διαφορετική από την δομή μονού αυλού της λέμφου ή τα αιμοφόρα αγγεία. Αυτό το αποτέλεσμα δείχνει ότι Primo-σκάφη δεν μπορεί να είναι λάθος για λεμφαγγείων, πηγμένο θρόμβων, ή άλλα αντικείμενα. Επιπλέον, ένας ειδικός δείκτης των λεμφαγγείων, LYVE-1, δεν εκφράστηκε καθόλου στο Primo-σκάφη παρέχοντας μια σαφής διαφορά μεταξύ Primo-σκάφη και τα λεμφαγγεία. Ραβδόμορφα πυρήνες ευθυγραμμισμένα διαμήκως γύρω από τους αυλούς του Primo-σκαφών, και αν και αυτές οι πυρήνες υποτεθεί ότι ανήκουν σε ενδοθηλιακά κύτταρα, δεν ήταν λεμφικά ενδοθηλιακά κύτταρα.

Στην παρούσα εργασία επικεντρώθηκε στη διαφορά μεταξύ της Primo-σκάφη και τα λεμφαγγεία λόγω της ομοιότητάς τους με εμφανή αναζητούν. Εμείς δεν τονίζουν την ιδιαιτερότητα των Primo-σκάφη από τα αιμοφόρα αγγεία, γιατί αυτά τα δύο είναι προφανώς διακριτά στην ανατομική εξέταση. Primo-σκάφη στην κοιλιακή κοιλότητα είναι δομή πολλαπλών αυλών και δεν συμμορφώνονται με την περιτόναια των εσωτερικών οργάνων (Σχ. 1 και 2). Σε αντίθεση, τα αιμοφόρα αγγεία είναι δομή μονού αυλού και βρίσκονται στο περιτόναια. Primo-σκάφη είναι ημι-διαφανές, γαλακτώδες λευκού χρώματος και βάφονται καλά με trypan μπλε κάτω από το

in vivo

συνθήκες, ενώ τα αιμοφόρα αγγεία είναι κόκκινου χρώματος και μόλις χρωματίζονται με μπλε τρυπάνης. Δεδομένου ότι το Primo-αγγειακό σύστημα είναι ένα εντελώς διαφορετικό σύστημα από την καρδιο-αγγειακού συστήματος σχηματισμού του θα πρέπει να είναι μια ξεχωριστή διαδικασία από την αγγειογένεση. Θα είναι αξιόλογη δοκιμή αυτό χρησιμοποιώντας ανοσοφθορισμό με αντι CD31-αντίσωμα το οποίο χρησιμοποιείται ευρέως για την αποκάλυψη ενδοθηλιακά κύτταρα του αιμοφόρου αγγείου προέλευσης.

Primo-σκάφη συχνά βρίσκονται κατά μήκος του εξωτερικού των αιμοφόρων αγγείων, οπότε μπορεί να υπάρχουν μια ισχυρή συσχέτιση μεταξύ των πυκνοτήτων των πολύ μικρών σκαφών και primo-σκάφη. Αυτή τη στιγμή μπορούμε να αναφέρουμε μόνο ότι υπάρχει μια ένδειξη ότι μικρο πυκνότητα των πλοίων και η πυκνότητα Primo-σκάφος έχει μια θετική συσχέτιση σε συνδυασμό με την ανάπτυξη και μετάσταση όγκου. Η έρευνά μας δεν είναι η πρώτη για την αναφορά νέων αγωγών που είναι εμφανώς διαφορετικά από το αίμα ή λεμφαγγεία που σχετίζονται με τα γεγονότα του καρκίνου. Hendrix et al. βρέθηκε εξωκυτταρική μήτρα πλούσια σε δίκτυα μέσα επιθετική ιστό όγκου το 1999 [23]. Αυτοί που σχηματίζεται από ένα αναστροφή των κυττάρων όγκου σε ένα αδιαφοροποίητο φαινότυπο και ανακεφαλαιώνει εμβρυϊκών αγγειογένεση, τη λεγόμενη αγγειογενείς μιμητισμό [15]. Με παρόμοιο τρόπο Primo-σκάφη θα μπορούσε να σχηματιστεί από εμβρυϊκά διαδικασίες αγγειακού συστήματος-όπως. Από αναπτύχθηκαν Primo-σκάφη για την περιτονία του υποδόριου ιστού σε ποντίκια που φέρουν όγκο [6], είναι ένα σημαντικό ζήτημα να διευκρινιστεί η πιθανή σύνδεση ή σχέση των vasculogenic-όπως τα δίκτυα και τις Primo-σκάφη μεταξύ του εσωτερικού και του εξωτερικού όγκου ιστού.

Εν κατακλείδι, έχουμε αποδείξει την εκτεταμένη παρουσία Primo-σκαφών σε ποντίκια που φέρουν όγκο και την εξέχουσα διαφορά μεταξύ των ιστολογικών και των ανοσοχημικών χαρακτηριστικά του Primo-σκαφών και των λεμφικών αγγείων. Αυτά τα ευρήματα και αναλύσεις, οι οποίες δείχνουν μια νέα λειτουργία του Primo-αγγειακό σύστημα, διαφορετικό από εκείνο των λεμφαγγείων, σε συνδυασμό με τα γεγονότα του καρκίνου, μπορεί να αποτελέσει τη βάση για μια νέα θεραπεία για τον έλεγχο της ανάπτυξης και της διάδοσης του καρκίνου.

υλικά και Μέθοδοι

Cell Culture

NCI-Η460 καρκινικά κύτταρα ανθρώπινου πνεύμονα ελήφθησαν από την κορεατική Κυτταρική Γραμμή Τράπεζα (Σεούλ, Κορέα). Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε RPMI-1640 (Gibco-Invitrogen, USA) συμπληρωμένο με 1% πενικιλλίνη-streptomcyin και 10% ορό εμβρύου βοός (FBS) σε 95% αέρα και 5% CO

2 στους 37 ° C.

Μοντέλο Καρκίνου των ζώων

Γυναίκα γυμνά ποντίκια (BALB-c-nu /nu, ηλικίας ηλικίας 5-7 εβδομάδων, βάρους 15-20 g, n = 20? Japan SLC, Inc., Hamamatsu, Japan) χρησιμοποιήθηκαν σύμφωνα με τις οδηγίες του ιδρύματος στο πλαίσιο εγκεκριμένων πρωτοκόλλων. Χρησιμοποιήθηκαν δύο σειρές μοντέλων καρκίνου. Το πρώτο μοντέλο είναι το μοντέλο ξενομοσχεύματος ποντικού πρότυπο υποδόρια (s.c.) [9]. Δέκα ποντίκια εμβολιάστηκαν s.c. στην ράχη με 1 × 10

7 ΝΟΙ-Η460 ανθρώπινο καρκίνο του πνεύμονα κυττάρων (σε 1-mL RPMI-1640) για το σχηματισμό όγκου κάτω από το δέρμα. Το άλλο μοντέλο όγκου είναι η ε.π. πειραματικό μοντέλο μετάστασης. ΝΟΙ-Η460 ανθρώπινου πνεύμονα καρκινικά κύτταρα εγχύθηκαν ε.π. ως ένα κυτταρικό εναιώρημα σε γυμνούς ποντικούς (1 × 10

7 κύτταρα ανά ζώων, η = 10) όπως περιγράφηκε προηγουμένως [9], [10]. Όλες οι έρευνες που αφορούν τα ζώα έχουν εγκριθεί από την Instisute του Εργαστηρίου Ζώων Πόρων του Εθνικού Πανεπιστημίου της Σεούλ.

διεγχειρητική απεικόνιση

Για την αναγνώριση Primo-αγγειακό σύστημα μέσα κοιλιακή κοιλότητα υποδορίως και ε.π. πνεύμονα μοντέλα καρκίνου, εκτελέσαμε χειρουργική ποντίκι δυο έως οκτώ εβδομάδες μετά τον εμβολιασμό των κυττάρων ΝΟΙ-Η460 υπό γενική anethesis με ε.π. ένεση zoletil /Rompun. Πρώτον, η μέση γραμμή της κοιλιάς ποντίκι τέμνεται και οι ενδοκοιλιακών οργάνων εκτέθηκαν προσεκτικά. Στη συνέχεια, ένα 0.1% κυανού τρυπανίου διάλυμα, προηγουμένως διηθείται μέσω 0,22 μm-διηθητικό χαρτί μέγεθος πόρων, εφαρμόστηκε στάγδην επί των εκτεθειμένων όργανα [4]. Μετά το ξέπλυμα μακριά τη βαφή με θερμό φυσιολογικό ορό, Primo-κόμβους και Primo-σκάφη εντοπίστηκαν με άμεση απεικόνιση της χειρουργικής ανατομίας με ένα χειρουργικό μικροσκόπιο (SZX12, Όλυμπος, Ιαπωνία). Τέλος, οι εικόνες συλλήφθηκαν με μια κάμερα CCD (ΑΣ 70, η Olympus, Ιαπωνία).

Η ιστολογική Αναλύσεις

Μετά την διεγχειρητική απεικόνιση του Primo-αγγειακό σύστημα,

ex vivo

εξέταση πραγματοποιήθηκε με ιστολογική χρώση των δειγμάτων. Για το σκοπό αυτό, Primo-κόμβους και σκάφη σταθεροποιήθηκαν σε 10% ουδέτερη ρυθμισμένη φορμαλίνη (NBF) για 12 ώρες στους 4 ° C, ξεπλύθηκαν σε αλατόνερο ρυθμισμένο με φωσφορικό (PBS), αφυδατώθηκαν σε διαβαθμισμένη σειρά αιθανόλης, διαυγάστηκε σε ξυλόλιο, και τα ενσωματωμένα σε Paraplast (Sigma, USA). Paraplast εγκάρσιες τομές, 6μm σε πάχος, κόβεται με μικροτόμο έγιναν επόμενη χρωματίστηκαν με αιματοξυλίνη και ηωσίνη (Η &? Ε) για γενική μορφολογική παρατήρηση, και με τριχρωματική του Masson (ΜΤ) για την οπτικοποίηση των ινών κολλαγόνου. Στη συνέχεια, οι τομές τοποθετήθηκαν με Neomount, και εξετάστηκαν με ένα μικροσκόπιο φωτός (BX51, της Olympus, Japan). Οι εικόνες ελήφθησαν με μια κάμερα CCD (Axiophot, Zeiss, Germany).

Η ανοσοϊστοχημεία

Για να χαρακτηρίσουμε Primo-σκάφη κατά λεμφαγγείων, πραγματοποιήσαμε ανοσοϊστοχημική διερεύνηση, με IgG αντι-LYVE-1 πολυκλωνικό αντισώματος (pAb), ένα ειδικό δείκτη του λεμφαγγείων. Primo-σκάφη και λεμφικών αγγείων στην επιφάνεια του κοιλιακού οργάνου σε ποντικούς που φέρουν όγκο συλλέχθηκαν, ενσωματωμένα σε OCT, και καταψύχθηκαν ταχέως σε υγρό άζωτο. Διατομές (10 μm) σταθεροποιήθηκαν σε παγωμένο ακετόνη για 5 λεπτά, πλύθηκαν σε PBS, και αποκλείστηκαν με διάλυμα CAS-Block (Invitrogen, USA) επί 2 ώρες στους 37 ° C. Τα πλακίδια επωάστηκαν με κουνελιού αντι-ποντικού LYVE-1 (2,5 μg /ml, Abcam, UK) όλη τη νύκτα στους 4 ° C, που ακολουθείται από πλύσεις και ανίχνευση με αντίσωμα κατσίκας αντι IgG κουνελιού συζευγμένο με Alexa Fluor 488 (1:500, Molecular Probes , ΗΠΑ). Τα πλακίδια υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με DAPI για πυρηνικό αντιχρωστική, επικαλύφθηκαν σε αντιξεθωριάσματος αντιδραστήριο (Molecular Probes, USA). Ένα μέρος του ίδιου δείγματος υποβλήθηκε σε επεξεργασία με μόνο ϋΑΡΙ και κατά μήκος ολόκληρου τοποθετηθεί σε αντιξεθωριάσματος αντιδραστήριο. Τα δείγματα απεικονίστηκαν με συνεστιακή μικροσκοπία (LSM500, Zeiss, Germany).

Ευχαριστίες

Σας ευχαριστούμε Byung-Cheon Lee και Saeyoung Ahn για τις χρήσιμες συζητήσεις.