Αφηρημένο

επιθηλιακό καρκίνο των ωοθηκών είναι μια από τις πιο κακοηθειών περιστατικό που είναι διαβόητη λόγω της evasiveness του για την έγκαιρη διάγνωση και υψηλά ποσοστά θνησιμότητας. Επιθηλιακοί καρκίνοι των ωοθηκών εξαρτώνται σε παθολογικές αγγείωσης υψηλά και αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα είναι γνωστό ότι είναι μία από τις πιο αποτελεσματικές αγγειογόνους παράγοντες. Πολυμορφισμοί του γονιδίου VEGF, σε αυτή τη μελέτη, αξιολογήθηκαν για σύνδεση με την κακοήθεια και άλλες κλινικο-παθολογική παράγοντες. 300 δείγματα υπόθεση και 320 ηλικία και εμμήνων κατάσταση μάρτυρες είχαν εντυπώθηκαν στη μελέτη. rs699947, rs833061, rs1570360, rs2010963, rs1413711 και rs3025039 ήταν οι έξι πολυμορφισμούς μονών νουκλεοτιδίων που εξετάστηκαν. Η γονοτύπηση εκτελέστηκε με αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης και μήκους περιοριστικού θραύσματος πολυμορφισμού. rs 3025039 έδειξε τεράστια υπόσχεση ως δείκτης για την επιθετικότητα της νόσου και στην επανάληψη και παράγοντα για την κακή πρόγνωση. rs699947 έδειξε τουλάχιστον συσχέτιση με τη νόσο και κλινικο-παθολογικών παραγόντων που μελετήθηκαν. rs833061, rs 1570360 έδειξε σημαντική συσχέτιση με κάποια κλινικο-παθολογικών παραγόντων, όπως οι διμερείς θλίψη των ωοθηκών και μετεγχειρητικές επίπεδα CA-125. rs2010963 που συνδέονται με την παρουσία ασκίτη σε μεγαλύτερες ποσότητες. Οι SNPs υπό εξέταση δεν έδειξε τρομερή δεσμού σε δείγματα μελέτη μας. Μια ανάλυση χρωμοσωμάτων (εξαιρουμένων rs699947 και rs1413711) αποκάλυψε 5 πρωτοπόροι είναι παρούσα σε & gt? 85% του πληθυσμού με TGGC και CGCC συνδέει σημαντικά ως προστατευτική και τους παράγοντες κινδύνου αντίστοιχα. Αυτές οι απλότυποι έδειξαν εξαρτώμενη από τη δόση προσθετικό αποτέλεσμα των φαινομενική λειτουργικότητά τους. Η μελέτη αυτή είναι μοναδική και η πρώτη του είδους που διενεργείται στην ινδική πληθυσμού της Νοτιοανατολικής Ασίας

Παράθεση:. Janardhan Β, Vaderhobli S, Bhagat R, Chennagiri Srinivasamurthy P, Venketeshiah Reddihalli P, Gawari R, et al. (2015) Διερεύνηση των επιπτώσεων του αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα πολυμορφισμοί στα επιθηλιακά ωοθηκών: μια μελέτη στον Ινδικό πληθυσμό. PLoS ONE 10 (7): e0131190. doi: 10.1371 /journal.pone.0131190

Επιμέλεια: Chih-Hsin Tang, η Κίνα Ιατρικού Πανεπιστημίου, Ταϊβάν

Ελήφθη: 27 του Φεβρουαρίου, 2015? Αποδεκτές: 30η Μαΐου του 2015? Δημοσιεύθηκε: 9, Ιουλίου, 2015

Copyright: © 2015 Janardhan et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. η εργασία αυτή υποστηρίχθηκε από το Συμβούλιο ινδική Ιατρικής Έρευνας, Ref No: 5/13/28/2010-NCD-III. Ο χρηματοδότης δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος των ωοθηκών, η κύρια αιτία θανάτου από γυναικολογικό κακοήθειες είναι η πέμπτη πιο κοινή αιτία θνησιμότητας στις γυναίκες της καυκάσια φυλή. Η επιβίωση είναι άμεσα συνδεδεμένη με το στάδιο με 5 χρόνια επιβίωση 93% για αυτούς που διαγνώστηκαν με εντοπισμένη ασθένεια, αλλά μόνο το 31% για τα άτομα με μακρινό ασθένεια. Δυστυχώς, τα δύο τρίτα των ασθενών παρουσιάζει με μακρινό νόσου κατά τη στιγμή της διάγνωσης. Στην Ινδία, υπήρξε μια χαμηλή συχνότητα, αλλά μια σταθερή αύξηση του ποσοστού επιπολασμού ηλικία τυποποιημένη του καρκίνου των ωοθηκών κατά 3% ετησίως σε διαφορετική κατάσταση μητρώα κατά τη διάρκεια μιας χρονικής περιόδου [1].

Η πλειοψηφία των ωοθηκών καρκίνους (80-90%) είναι επιθηλιακών όγκων των ωοθηκών (EOCs). Η προέλευση και η παθογένεια της EOC παραμένουν gallingly φευγαλέα, εν μέρει επειδή είναι σπάνιο να βρεθεί σαφώς καθορισμένες πρόδρομες βλάβες, και εν μέρει επειδή EOCs τείνουν να έχουν ένα σύνθετο και ετερογενές ιστολογία που αψηφά μια απλή βιολογική εξήγηση. Η έλλειψη πρακτικών μεθόδων διαλογής και η απουσία σαφών συμπτωμάτων στα πρώιμα στάδια της εξέλιξης του όγκου κατέστησαν EOCs δύσκολο να αντιμετωπιστεί με επιτυχία. Η πακλιταξέλη (ταξόλη) και χημειοθεραπεία με βάση την πλατίνα (σισπλατίνη ή η καρβοπλατίνη) αντιπροσωπεύουν καθιερωμένη θεραπεία μετά τη χειρουργική debulking. Δυστυχώς, ακόμη και με τη σύγχρονη χημειοθεραπεία, οι περισσότεροι ασθενείς με προχωρημένη νόσο και υποτροπή πεθάνουν από τη νόσο.

Μια αναπόφευκτη κατάσταση που αναπτύσσεται σε μικροπεριβάλλοντα όγκου είναι υποξία. Αυτό είναι ένας σημαντικός παράγοντας διεγερτική για την αγγειογένεση, η οποία είναι μια προωθητική παράγοντας για επιθετικές κακοήθειες. Υπάρχουν αρκετοί αγγειογόνους παράγοντες και ακόμη αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF-A) έχει touted ως η πιο ισχυρή μόριο στη διαδικασία της αγγειογένεσης. VEGF-A εκκρίνεται από πολλά κύτταρα όγκου ίη vitro και είναι ιδιαίτερα ρυθμίζεται αυξητικά στους περισσότερους ανθρώπινους καρκίνους. Η έκφραση του VEGF-A συσχετίζεται με ενδοογκική πυκνότητα αγγείου και κακή πρόγνωση σε ασθενείς με καρκίνο και η αναστολή είναι γνωστό ότι μειώνεται όγκου πυκνότητα αγγείων και την ανάπτυξη του όγκου [2, 3].

Ο VEGF-A γονίδιο βρίσκεται στο χρωμόσωμα 6p12 και περιλαμβάνει ένα 14-kb περιοχή κωδικοποίησης, αποτελείται από οκτώ εξόνια και παρουσιάζει εναλλακτική συρραφή για να σχηματίσει μία οικογένεια πρωτεϊνών. Ο VEGF-A γονίδιο περιέχει υποξία Responsive Στοιχείων (HREs) σε 5`and 3`UTRs του. VEGF-A ρυθμίζεται αυξητικά υπό συνθήκες υποξίας από τη σύνδεση του HIF-1 (υποξία επαγώγιμοι Factor -1) προς την HRE [4]. Η υποξία προκαλεί επίσης τη σταθεροποίηση του VEGF-A mRNA με τη δέσμευση των αγνώστων παραγόντων να 3`UTR του. VEGF-A διαμορφώνεται επίσης από μία ποικιλία παραγόντων ανάπτυξης και κυτοκινών. Έτσι το γονίδιο υπόκειται σε πολυεπίπεδη διαμόρφωση της έκφρασης υπό υποξία [5]. Το γονίδιο είναι άκρως πολυμορφικός και αρκετά μελέτες έχουν δείξει μερικά από τα SNPs να ρυθμίζουν τη γονιδιακή έκφραση και επάγουν υψηλότερα επίπεδα VEGF-A πλάσμα.

Πολλές μελέτες έχουν ερευνήσει το ρόλο των πολυμορφισμών VEGF-A ως γενετικός προσδιοριστής για ευαισθησία και την έκβαση σε μαστού, του προστάτη, μη μικροκυτταρικός καρκίνος του πνεύμονα (NSCLC), και καρκίνο του παχέος εντέρου. Σε παγκόσμιο επίπεδο, διάφορες μελέτες σχετικά με τη σύνδεση αυτών των πολυμορφισμών με τον κίνδυνο και τη θεραπεία έκβαση έγιναν, αλλά αποτελέσματα που επιτεύχθηκαν μεταξύ διαφορετικών φυλών και των καρκίνων ήταν πολύ μεταβλητή. Για παράδειγμα, η rs3025039 αλληλόμορφο «Τ» που προσδίδεται προστασία έναντι του καρκίνου του μαστού, αλλά αντίθετα, αυξημένο κίνδυνο καρκίνου του παχέος εντέρου. Ομοίως, η rs2010963 αλληλόμορφο «C» προέβλεψε υψηλότερο κίνδυνο NSCLC και του καρκίνου του προστάτη, αλλά προέβλεψε μειωμένο κίνδυνο για καρκίνο του παχέος εντέρου, [6]. Η έλλειψη συναίνεσης για το ρόλο αυτών των SNPs μπορεί να οφείλεται σύνδεσή τους με άλλες σκοτεινές παράγοντες ή λόγω SNPs ρυθμίζουν την έκφραση του γονιδίου στο σύνολό της, η οποία έχει πολλές ισομορφές που περιλαμβάνουν τόσο προ και αντι-αγγειογενετική ισομορφές κάνοντας μια 2 κατευθύνσεων της διαφοροποίησης είναι εφικτό από αυτά τα SNPs. Ίσως, συνεργασία με απλοτύπων θα είναι πιο έξυπνη από την ατομική SNPs. Αυξημένη κατανόηση της λειτουργικότητας αυτών των πολυμορφισμών και ο ρόλος τους στη βιολογία του όγκου είναι σημαντικό να διακρίνουμε τους λόγους για ασυνέπειες στη βιβλιογραφία, η οποία μπορεί επίσης να βοηθήσει στο σχεδιασμό μελέτες συσχέτισης στο μέλλον.

Οι πολυμορφισμοί που περιλαμβάνονται σε αυτή τη μελέτη είναι rs699947, rs1570360, rs833061, rs2010963, rs1413711 και rs3025039 και είναι κοινώς γνωστό ως VEGFA-2578 A /C, -1154G /A, -460 C /T, 405 G /C, 674 C /T και 936 C /Τ, αντίστοιχα. VEGFA-2578 A /C ονομάζεται μετά τη θέση του σε σχέση με τη θέση έναρξης της μετάφρασης (-1540 bp σε σχέση με τη θέση έναρξης μεταγραφής), και βρίσκεται στην περιοχή του υποκινητή. Παρομοίως 405 G /C είναι επίσης γνωστό ως -634 G /C. Τα ονόματα για τα άλλα πολυμορφισμούς με βάση τις θέσεις σε σχέση με την έναρξη της μεταγραφής (-460, 405) ή στο τέλος (936) θέση, και έτσι αυτοί οι SNP εντοπίζονται στον υποκινητή, 5′-αμετάφραστη (UTR) και 3 ‘ -UTR περιοχές, αντίστοιχα. 674 C /T είναι παρούσα στο ιντρόνιο 1 περιοχή του γονιδίου. Τα SNPs σε αυτό το έγγραφο αναφέρεται με τους αντίστοιχους αριθμούς τους id dbSNP. Αυτές οι SNPs βρίσκονται σε άμεση γειτνίαση με την περιοχή HRE και η αλληλουχία σηματοδότησης του πεπτιδίου στο γονίδιο. Αυτό τους βάζει στο προσκήνιο για τις δυνατότητες της διαμόρφωσης της γονιδιακής έκφρασης ανάλογα με το αλληλόμορφο παρόν.

Τα 6 πολυμορφισμούς του VEGF-A γονίδιο έχουν συμπεριληφθεί στη μελέτη ασθενών-μαρτύρων μας, του επιθηλιακού καρκίνου των ωοθηκών με στόχο την διερεύνηση του ρόλου των γενετικών παραλλαγών ως διαγνωστικά ή προγνωστικά εργαλεία και την αντιστοιχία τους με την κατάσταση της νόσου και κλινικοπαθολογοανατομικές παράγοντες. Σας παρουσιάζουμε μια πρώτη τέτοια έρευνα που απασχολούν τον πληθυσμό από την ινδική υποήπειρο της Νοτιοανατολικής Ασίας.

Αποτελέσματα

Συσχέτιση πολυμορφισμών με

νόσο

Οι έξι πολυμορφισμοί γονότυπος σε 300 περιπτώσεις και 320 ελέγχους βρέθηκαν όλα να είναι σε ισορροπία Hardy-Wienberg. Η κατανομή και η ένωση αλληλόμορφων παρουσιάζεται στα Σχ 1 και 2 από την άποψη της OR και 95% διάστημα εμπιστοσύνης. rs 1570360, RS 833061, rs 2010963 και 3025039 RS παρουσίασαν πολύ ισχυρή συσχέτιση (ρ τιμή & lt? 0.001) με την κατάσταση της νόσου. rs 1413711 εμφάνισαν σημαντική συσχέτιση με τη νόσο, καθώς και (ρ τιμή 0,01). rs 699947 δεν έδειξε συσχέτιση με την κατάσταση της νόσου στην ομάδα μελέτης. Η γονοτυπική κατανομή των SNP φαίνεται στο σχήμα 3 και η αξιολόγηση στο πλαίσιο τόσο των κυρίαρχων και υποτελούς μοντέλα για την ένωση υπολογίστηκε. Ανάμεσα στα δοκιμασμένα πρότυπα, το κυρίαρχο μοντέλο έδειξε υψηλότερη σημασία της σύνδεσης με την ασθένεια (τα δεδομένα φαίνονται στον Πίνακα S1).

Η

Η

Συσχέτιση πολυμορφισμών με κακοήθεια και άλλες κλινικο-παθολογικών παραγόντων

Ένα σύνολο έντεκα κλινικοπαθολογοανατομικών παράγοντες συμπεριλήφθηκαν στη μελέτη, όπως η ηλικία κατά τη διάγνωση, έμμηνο κατάσταση, το στάδιο της νόσου, την ποιότητα, ιστοπαθολογική εξέταση, οι διμερείς θλίψη των ωοθηκών, προεγχειρητική πλάσμα CA-125 επίπεδα, τύπο όγκου , παρουσία ή απουσία του ασκίτη, την παρουσία ή απουσία υπολειμματικής νόσου και υποτροπής σε διάστημα ενός έτους χειρουργική μετεγχειρητική. (S2 Πίνακας επιστρατεύει τις κλινικοπαθολογοανατομικές παράγοντες που περιλαμβάνονται στη μελέτη). επίπεδα CA125 μετα-op αξιολογήθηκαν επίσης για συνεργασία με τους πολυμορφισμούς να συσχετίζονται με την πρόγνωση, παράλληλα με την επανάληψη, αν και τα στοιχεία για όλα τα δείγματα δεν θα μπορούσε να ανακτηθεί. Παρ ‘όλα αυτά, μια δοκιμασία σύνδεσης έγινε για διαθέσιμα υποσύνολο δεδομένων. Στην ανάλυση σύνδεσης για το σύνολο της υπόθεσης ομάδα μεταξύ των πολυμορφισμών και κλινικο-παθολογικών παραγόντων, SNPs rs 699 947 και rs 1413711 έδειξαν καμία συσχέτιση με κακοήθεια ή ασθένεια κατάσταση. Όλες οι άλλες SNPs έδειξε σημαντική συσχέτιση με κακοήθεια με τιμή ρ & lt? 0.001. Ο Πίνακας 1 συνοψίζει τα αποτελέσματα που λαμβάνονται για τη σύνδεση του πολυμορφισμού με κάθε μία από τις κλινικοπαθολογοανατομικών παράγοντες.

Η

δεδομένων Σύνδεση και ενώσεις απλότυπος

Εμείς δεν θα μπορούσε να παρατηρήσει κάποια σημαντική σχέση μεταξύ οποιουδήποτε από τα πολυμορφισμών (Σχήμα 4). Αν και rs1413711 και rs3025039 παρουσιάζουν μια δίκαιη έκταση της σύνδεσης με ένα D ‘αξία των 0.605, αλλά είναι πολύ πίσω από το πρότυπο κόψει ανέλαβε στο D’ 0,8 ή πέρα. Αξιολόγηση των απλοτύπων, συμπεριλαμβανομένων όλων των SNPs δεν αποφέρει κανένα σαφές προσκήνιο-runner, καθώς και. Όταν μια ανάλυση απλότυπου διεξήχθη με εξαίρεση rs699947 και rs1413711, ένα σύνολο 5 απλοτύπων από 16 δημιουργούνται μέσω ΦΑΣΗ είχε μια συχνότητα & gt? 5%. Οι απλότυποι υπό εξέταση περιλαμβάνονται το SNPs rs833061, rs1570360, rs2010963 και rs3025039. TGGC (37%), CGGC (19%), CGCC (9%), TGCC (12%) και TAGC (8%) αντιπροσώπευαν το 85% του πληθυσμού της μελέτης. Πίνακας 2 υποθέτει απλοτύπων αυτών, η συχνότητά τους στις ομάδες-μαρτύρων και τη δοκιμή p-value σύνδεση αυτών των απλοτύπων με την ασθένεια. Από αυτά TGGC παρατηρήθηκε στο 50% του συνολικού πληθυσμού σε ελέγχους, αλλά μόνο το 24% των περιπτώσεων και σχετίζεται σημαντικά ως παράγοντας θωράκισης. CGCC παρατηρήθηκε να είναι στο 11% των περιπτώσεων, αλλά μόνο στο 6% των ελέγχων και σχετίζονται σημαντικά με την κατάσταση της νόσου.

Η

Επιπτώσεις των απλοτύπων στην επιθετικότητα της νόσου και κακοήθεια

οι απλότυποι προαναφερθείσες εξετάστηκαν για οποιαδήποτε συσχέτιση με την επιθετικότητα της νόσου και κακοήθεια. Απλότυπος TGGC σχετίζεται πολύ σημαντικά ως προστατευτικός παράγοντας (τιμή p & lt? 0.001) σε ομόζυγη κατάσταση. Η ετερόζυγη κατάσταση TGGC δεν έδειξε καμία επίδραση ή ένωση. CGCC σχετίζεται σημαντικά με την κακοήθεια (τιμή p 0,0198). Παρατηρήθηκε επίσης ότι η υψηλή κακοήθη δυνατότητα παρατηρήθηκε σε φορείς της CGCC απλοτύπων σε ομόζυγη κατάσταση, αλλά ετεροζυγωτίας δεν είχε σημαντική επίδραση. Αυτό δημιουργεί την αντίληψη ότι οι απλοτύπων TGGC και CGCC μπορεί να έχει ένα αριθμό αντιγράφων ή δοσοεξαρτώμενη επίδραση. Παρατηρήσαμε ότι υποδοχής ασθενών σε CGCC έδειξε υψηλότερη συχνότητα εμφάνισης της παρουσίας & gt? 500ml ασκίτη (στατιστική σημαντικότητα δεν επιτευχθεί) και τα υψηλότερα προεγχειρητική επίπεδα πλάσματος CA-125 (τιμή p 0,017). Οικοδεσπότες να απλότυποι CGCC και CGGC παρουσίασε επίσης μια υψηλότερη ροπή προς την επιθετική νόσο και κακοήθεια. Ο πίνακας 3 δίνει μια γενική εικόνα των συχνοτήτων απλότυπου σε ομόζυγη και ετερόζυγη συνθήκες και την ένωσή τους με την εμφάνιση της νόσου είναι matriculated με διόρθωση Yates ‘εφαρμόζεται. Δεν παρατηρήθηκε συσχέτιση μεταξύ οποιωνδήποτε από τις απλοτύπων με υποτροπή της νόσου εντός προθεσμίας ενός έτους, ούτε ήταν αυτό που σχετίζεται με την κατάσταση υπολειμματικής νόσου στην παρούσα μελέτη.

Η

Συζήτηση

Η ανάγκη για ένα σύστημα αγγειακό υποστήριξη είναι απαραίτητη για την ανάπτυξη, είτε πρόκειται για κύτταρα όγκου ή φυσιολογικά κύτταρα. Όγκου αγγειογένεση είναι ένα πρωταρχικό γεγονός που ικανοποιεί αυτή την ανάγκη, χωρίς την οποία τα καρκινικά κύτταρα δεν μπορούν να αναπτυχθούν πέρα ​​από 2 χιλιοστά και να μείνει αδρανής [7]. Μια περίπλοκη ισορροπία μεταξύ προ και αντι-αγγειογενετικών παραγόντων είναι απαραίτητη για την υγιή αγγειογένεση. EOCs, όντας εξαρτώμενη από αγγειογένεση, απαιτούν ένα αγγειογόνο διακόπτη που κλίνει την ισορροπία ευνοεί την αγγειογένεση [8]. Σε προχωρημένο καρκίνο των ωοθηκών, ο VEGF-A επαγόμενη παθολογική αγγειογένεση οδηγεί σε κακοήθη ασκίτη παραγωγή και την ενδεχόμενη εξέλιξη της νόσου και την αποτυχία της θεραπείας. Μια πληθώρα SNPs στο VEGF-A γονίδιο έχουν ανακαλυφθεί που έχουν συσχετιστεί με τη ρύθμιση των επιπέδων του VEGF-A έκφραση πρωτεΐνης και την ευαισθησία σε διάφορα καρκινώματα [9-13]. Μελέτες ανακρίνει την επίδραση των πολυμορφισμών και δοκιμές κύρος τους ως προγνωστικοί δείκτες ή παράγοντες κινδύνου είναι μακριά και λίγες και οι περισσότεροι από αυτούς σε Καυκάσου αγώνες. Μελέτες που απασχολούν την ασιατική υποσύνολο είναι αραιά.

Μεταξύ των λίγων μελετών σε καρκίνους των ωοθηκών, rs3025039 παρατηρήθηκε να συνδέεται ως παράγοντας κινδύνου σε μία μελέτη [14] και συνδέθηκε με καλύτερη πρόγνωση σε μία άλλη μελέτη [15] . Η μελέτη μας εμπλέκεται το SNP με κακή πρόγνωση και παράγοντα κινδύνου, όπως στην πρώην μελέτη. rs2010963 που σχετίζονται έντονα με καλύτερη πρόγνωση, αλλά αδύναμη συσχέτιση σε περίπτωση rs803361 [16]. Η μελέτη έδειξε επίσης ότι η ζυγωτίας πραγματοποιήθηκε ανεξάρτητη προγνωστική σημασία. Μια μελέτη συμπεριλαμβανομένων rs2010963, rs1570360 και rs699947 δεν έδειξε σημαντική συσχέτιση των πολυμορφισμών με τις κλινικο-παθολογικές παραμέτρους, αλλά σχετίζεται με σημαντική μεταβολή του VEGF-A έκφραση, αλλά χωρίς συσχέτιση με την επιβίωση χωρίς εξέλιξη ή την πρόγνωση και πρότεινε σημαντική ανισορροπία σύνδεσης μεταξύ αυτών των πολυμορφισμών [17 ]. Η ανάλυση απλότυπος στη μελέτη δεν έδειξε σημαντική συσχέτιση με κλινικο-παθολογικές παραμέτρους, αν και ένα από απλοτύπων τους AGCGC (rs699947, rs1570360, rs833061, rs2010963 και rs3025039) έδειξε σημαντική συσχέτιση με την επιβίωση χωρίς εξέλιξη.

Η SNPs σε μας μελέτη αν και εμφάνισε ισχυρή σύνδεση με την κατάσταση της νόσου, δεν έδειξε καμία σημαντική σύνδεση μεταξύ τους, όπως αναφέρθηκε σε διάφορες άλλες μελέτες [18-22]. Αρκετά από τα SNPs που περιλαμβάνονται έδειξε σημαντική συσχέτιση με ορισμένες κλινικο-παθολογικών παραμέτρων. rs3025039 έδειξε σημαντικές συσχετίσεις με κακοήθη δυνητικότητα, στάδια ΦΥΓΩ, διμερείς θλίψη, τα επίπεδα CA125 πλάσμα μετα-op, ασκίτης και στην επανάληψη δείχνει να είναι πολλά υποσχόμενη δείκτης για φτωχή πρόγνωση. rs1413711 και rs2010963 σχετίζονται σημαντικά με την παρουσία ασκίτη αλλά η σημασία δεν παρατηρήθηκε με αυξημένα επίπεδα ασκίτη. rs833061 που σχετίζονται με τη διμερή θλίψη των ωοθηκών και ακόμα πιο έντονα στο πλαίσιο του κακοήθους υποσύνολο των δειγμάτων περίπτωση. rs699947 δεν έδειξε συσχέτιση με την κατάσταση της νόσου ή άλλων κλινικο-παθολογικών παραμέτρων.

Η ασάφεια στα δεδομένα πολυμορφισμό σε πληθυσμούς θα μπορούσε εν μέρει να εξηγηθεί από την άποψη των θέσεων αυτών και ανέφερε πολυμορφισμούς και τις ισομορφές του VEGF-A, ότι είναι γνωστό ότι είναι αντι-αγγειογενετική. Όσο μια αγγειογενετική διακόπτης εμφανίζεται υπέρ της αγγειογένεσης σε περίπτωση ογκογένεση, υπάρχει επίσης ένας μηχανισμός αυτορρύθμισης σε σχέση με τον VEGF-A γονίδιο που διατηρεί μια λεπτή ισορροπία μεταξύ θετικών και αντιαγγειογενετική ισομορφές του VEGF -Ένα γονίδιο.

το εξόνιο 8 του VEGF-A γονίδιο έχει μια μοναδική ικανότητα να παράγουν τόσο υπέρ και κατά αγγειογενετική ισομορφές του VEGF-A. Ενώ εξόνιο 8α παρέχει pro-angiogenecity, εξόνιο 8β προσδίδει αντι-angiogenecity. Το εναλλακτικό μάτισμα που παράγει mRNA με 8β κωδικόνια παράγουν ένα πλήρες σύνολο των ισομορφών του VEGF-A που αντικρούουν πλήρως τα αποτελέσματα του mRNA των υποσυνόλων 8a. Perrin et al ανέφεραν ότι η έκφραση του VEGF-A

ΧΧΧΒ ισομορφές συμβάλλουν στην ανταγωνιστική αναστολή με σύνδεση προς τους υποδοχείς, αλλά δεν διεγείρει φωσφορυλίωση τυροσίνης απαραίτητη για μεταγενέστερους αγγειογενετική δραστηριότητα, όπως προκαλείται από VEGF-A

XXXa ισομορφών. Το VEGF-A

ΧΧΧΒ ισομορφές είναι, ως εκ τούτου ενδογενείς αντι-αγγειογόνοι παράγοντες που σχηματίζονται με εναλλακτικό μάτισμα και λέγεται να επηρεάζεται από άλλες συνθήκες αυξητικού παράγοντα και διαθεσιμότητας παράγοντας ματίσματος. Το VEGF-A

έχουν 165b ισομορφές αναφερθεί ότι ρυθμίζεται προς τα κάτω σε διάφορους καρκίνους όπως καρκίνωμα νεφρικών κυττάρων, του προστάτη και καρκινώματος του κόλου [23-25].

Αυτή η ιδιαίτερη πτυχή του VEGF-A μάτισμα και αναπληρωματικών παραγωγή ισομορφή είναι σίγουρα αξίζει μια λεπτομερή μελέτη από το εξερευνητικό μελέτες για SNPs σε όλο τον κόσμο δεν έχει δώσει το δεδομένα συναίνεση που είναι implicative. Μέρος λόγος για αυτό είναι η μεταβαλλόμενη κατάσταση in-vivo σε ασθενείς με καρκίνο. EOCs είναι ακόμη πιο περίπλοκη δεδομένου ότι μια πρόσφατη έκθεση τους έδειξε να είναι πιο περίπλοκη προέλευση και όχι μόνο επιφανειακό επιθήλιο [26]. Αυτό ετερογενή InVivo mileu κάνει τη διαμόρφωση του VEGF-A γονιδιακής έκφρασης εξαιρετικά περίπλοκη.

Οι rs SNPs 699947, rs 833 061 και rs 1550360 στην περιοχή του υποκινητή είναι κοινά τόσο για το VEGF-A

XXXa και VEGF -Ένα

ισομορφές ΧΧΧΒ και ως εκ τούτου μια ένωση αυτών των SNPs με την ασθένεια θα μπορούσε να σημαίνει είτε τρόπους. Κάποιος, θα μπορούσε να συμφωνούν ότι οι προ-αγγειογενετικών ισομορφών που εκφράζονται ολοένα και περισσότερο ή θα μπορούσε επίσης να σημαίνει ότι οι αντι-αγγειογενετική ισομορφές είναι να κατασταλεί. SNP rs 2010963 είναι εντός του 5 ‘περιοχή UTR. Το VEGF-A γονίδιο είναι μοναδική στο γεγονός ότι έχει μια περιοχή 1038bp 5’UTR που έχει 2 IRES (εσωτερική ριβοσωματική θέσεις εισόδου) στοιχεία (IRES-Α και IRES-Β) που είναι διαφορικά τεθεί σε χρήση, ανάλογα με τις συνθήκες ενδοκυτταρικής του νορμοξία και υποξία [27]. Ως εκ τούτου, η επίδραση της rs 2010963 θα μπορούσαν να μετατρέψουν ακαθόριστα λαμβάνοντας υπόψη το γεγονός ότι τα νέα μια μακρά μορφή του VEGF-A mRNA (με την προσθήκη ενός αλληλουχία 180 αμινοξέων) παράγεται το οποίο διαμορφώνει την περαιτέρω έκφραση των mRNAs VEGF-A. rs 1413711 είναι, σε αυτή τη μελέτη, δεν είναι καλά μελετημένη και τα άλλα πολυμορφισμοί αλλά είναι ακόμη αξίζει ένα ρολόι, που είναι στην περιοχή ενδονίου 1. Στη μελέτη μας, δεν ασκεί καμία σημαντική συσχέτιση με τις κλινικοπαθολογοανατομικών παράγοντες, αλλά είχε συνδέσει με μεγάλη σημασία (p = 0.01), με την κατάσταση της νόσου. SNP rs 3025039 είναι καλά τεκμηριωμένη, είναι μέσα στην περιοχή 3 ‘UTR του VEGF-A γονίδιο. Είναι γνωστό ότι επηρεάζουν την εκκρινόμενα επίπεδα του VEGF-A πρωτεΐνη και έχει αποδειχθεί ότι έχει σημαντική συσχέτιση στις περισσότερες από τις μελέτες ασθενών-κοόρτης. Αυτό το SNP, στη μελέτη μας πάρα παρουσίασαν πολύ ισχυρή συσχέτιση με την κατάσταση της νόσου και φτωχότερη πρόγνωση.

Αυτή η ερευνητική μελέτη είναι το πρώτο στην προσπάθειά της σε αυτό τον πληθυσμό και συνοπτικά παρουσιάζει rs3025039 να σχετίζεται ως ένα πολλά υποσχόμενο δείκτη για πρόγνωση ενώ άλλοι πολυμορφισμοί στη μελέτη συνδέθηκαν με μερικές κλινικο-παθολογικών παραμέτρων και ήταν ασαφή για προγνωστικούς τις δυνατότητές τους. Οι πολυμορφισμοί έκαναν δείχνουν μια ισχυρή συσχέτιση με κακοήθεια και ως εκ τούτου μπορεί να ενοχοποιηθεί ως παράγοντες κινδύνου. Αυτή συνοπτικά είναι το μόνο χαρτί που εξετάζει την επίδραση των πολυμορφισμών VEGF-A στο επιθηλιακό καρκίνο των ωοθηκών στον πληθυσμό της Νοτιοανατολικής Ασίας, ειδικά παν-Ινδικό.

Υλικά και Μέθοδοι

συλλογή δειγμάτων

Ένα σύνολο 300 ασθενών που έχουν διαγνωστεί με πρωτοπαθή επιθηλιακών όγκων των ωοθηκών στο Memorial Institute Kidwai Ογκολογίας, Μπανγκαλόρ, Ινδία, συμπεριλήφθηκαν στη μελέτη.

το αρχικό θεσμικό διάγνωση του επιθηλιακού καρκίνου των ωοθηκών επιβεβαιώθηκε από επανεξέταση των παθολογικών διαφανειών από ανώτερους παθολόγους. Από τις 300 περιπτώσεις, 202 (67,3%) ήταν κακοήθεις περιπτώσεις, 31 (10,3%) ήταν οριακά ή χαμηλής κακοήθους δυναμικού (LMP) όγκους και 67 (22,4%) ήταν καλοήθεις όγκους. Από αυτά, ο αριθμός των δειγμάτων προ-εμμήνων ανήλθε σε 88 (29,3%) και μετα-εμμήνων δείγματα σε 212 (70,7%). 320 υγιή άτομα ελέγχου, σε συνδυασμό με την ηλικία και την κατάσταση της εμμηνόπαυσης, είχαν προσληφθεί για τη μελέτη. Ο μέσος όρος ηλικίας της υπόθεσης ομάδα ήταν 51 ± 12 ετών και 48 ± 17 έτη για τους ελέγχους. 30,9% (99/320) των ελέγχων προ-εμμηνοπαυσιακές και 69,1% (221/320) ήταν μετεμμηνοπαυσιακές. 65,8% των περιπτώσεων ήταν υψηλή στάδιο και υψηλής ποιότητας, και 63,8% των περιπτώσεων ήταν ορώδες επιθηλιακών καρκίνων των ωοθηκών. 64,9% των περιπτώσεων είχε διμερείς θλίψη και 86,6% των περιπτώσεων έδειξαν υψηλά επίπεδα CA125. Ασκίτης παρατηρήθηκε στο 80% των περιπτώσεων. S2 πίνακα του δίνει μια σε λεπτομέρειες ενόψει της δημογραφίας των περιπτώσεων λαμβάνονται υπόψη στη μελέτη. 5ml αίματος συλλέχθηκε από όλα τα υποκείμενα, πριν από τη θεραπεία, σε φιαλίδια ηπαρίνη και υποβάλλονται σε επεξεργασία αμέσως μετά εκεί. Το κυτταρικό ίζημα αποθηκεύεται σε -20 ° C για την απομόνωση του DNA και του γονότυπου.

Όλοι οι όγκοι βαθμολογήθηκαν σύμφωνα με τα κριτήρια του ΠΟΥ και ανέβασε σύμφωνα με την Ομοσπονδία Γυναικολογίας και Μαιευτικής (FIGO) ταξινόμηση. Πληροφορίες σχετικά με τη διάγνωση του καρκίνου, το στάδιο της νόσου (FIGO), ιστολογικές βαθμό και υπότυπο, προ λειτουργική CA-125 επίπεδα, υπολειμματικής νόσου και υποτροπής ήταν αποκομμένη από τα ιατρικά αρχεία.

έγκρισης μελέτης δόθηκε από το Διοικητικό Συμβούλιο αναθεώρηση Θεσμικές και η ιατρική Επιτροπή Δεοντολογίας και γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από όλους τους συμμετέχοντες.

απομόνωση DNA

το γονιδιακό DNA εκχυλίζεται από δείγμα περιφερικού αίματος χρησιμοποιώντας κιτ εκχύλισης QIAamp® DNA (QIAGEN) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. συγκέντρωση του DNA μετρήθηκε με nanodrop από Thermo Scientific.

γονοτυπικός

Αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης-περιορισμού μήκους θραύσματος πολυμορφισμού (PCR-RFLP) χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό των πολυμορφισμών 6 VEGF-A με τη χρήση προηγουμένως δημοσιευμένα πρωτόκολλα με μικρές τροποποιήσεις.

Η PCR διεξήχθη σε ένα 30 μΙ μείγμα αντίδρασης με 50-100 εκμαγείο DNA, 1U Taq πολυμεράσης ενζύμου (Bangalore Genei) και ρυθμιστικό διάλυμα 1Χ παρέχονται μαζί με το ένζυμο. 0.3μΜ των αντίστοιχων εναρκτήρων (Sigma), 0.5 mM dNTP αναμειγνύεται και 1,5 έως 2 mM MgCl

2 αποτελούσαν το μίγμα PCR. Η PCR πραγματοποιήθηκε σε ένα θερμικό ανακυκλωτή Eppendorf PCR με αρχική μετουσίωση στους 95 ° C για 5 λεπτά που ακολουθείται από 35-40 κύκλους μετουσίωσης στους 95 ° C για 40 δευτερόλεπτα, ανόπτηση για 40 δευτερόλεπτα, επέκταση στους 72 ° C για 20 -40 δευτερόλεπτα και μια τελική επέκταση για πέντε λεπτά στους 72 ° C. Οι εκκινητές PCR και τα αντίστοιχα θερμοκρασίες ανόπτησης που χρησιμοποιείται για κάθε SNP σε παρατίθενται στον Πίνακα 4.

Η

Τα ληφθέντα αμπλικόνια DNA υποβλήθηκαν σε πέψη για μία νύχτα με το ένζυμο περιορισμού. Τα ένζυμα περιορισμού αγοράζονται από το New England Biolabs και συνθήκες θερμοκρασίας διασπάσεως ακολουθείται το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Τα ένζυμα που χρησιμοποιήθηκαν ήταν BglII (rs699947), BstUI (rs833061), MnlI (rs1570360), ΒδίτιΡΙ (rs 2010963), BaeGI (rs 1413711) και ΝΙθΙΙΙ (rs3025039). BstUI χρησιμοποιήθηκε σε συγκέντρωση 2U ενώ τα υπόλοιπα από τα ένζυμα χρησιμοποιήθηκαν σε μία συγκέντρωση 1U σε όγκο μίγμα αντιδράσεως 25 μΙ. Οι πέψη αμπλικόνια διαχωρίστηκαν σε μια γέλη αιθίδιο βρωμίδιο που κυμαίνονται από 1,5 έως 3% αγαρόζη ανάλογα με το μέγεθος αμπλικονίου. Τα μεγέθη των ζωνών διαπιστώθηκαν με τη χρήση ενός 50 bp και 100 bp σκάλα.

Linkage, απλότυπος και στατιστική ανάλυση

Η ανάλυση σύνδεσης και απλότυπου διεξήχθη χρησιμοποιώντας haploview 4.2 και η φάση 2.1.1 έκδοση. Το χ

2 δοκιμή εφαρμόστηκε για να καθοριστεί αν οι κατανομές γονότυπου ήταν εντός της ισορροπίας Hardy-Wienberg. πλατεία Chi και υλικοτεχνική αναλύσεις παλινδρόμησης εφαρμόστηκε για να εξετάσει σύνδεσης μεταξύ της μεταφοράς των δεικτών και την κατάσταση της νόσου και άλλων κλινικοπαθολογοανατομικές παράγοντες. Όλες οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του SPSS έκδοση 21.

Υποστήριξη Πληροφορίες

S1 πίνακα. Μια ανάλυση των πολυμορφισμών στο πλαίσιο των κυρίαρχων και υποτελούς μοντέλα

doi:. 10.1371 /journal.pone.0131190.s001

(DOC)

S2 πίνακα. Δημογραφία και κλινικοπαθολογικών πτυχές των περιπτώσεων (συνολικά 300)

doi:. 10.1371 /journal.pone.0131190.s002

(DOC)

Ευχαριστίες

Είμαστε ευγνώμονες στους ασθενείς με του οποίου τη συνεργασία αυτή η μελέτη ήταν δυνατό. Σας ευχαριστούμε Δρ Β Shanmugam, κα Lakshmi Subramaniam και η κα Anisha Raju για την πολύτιμη εισροές καθώς και βοήθεια στην ανάλυση των δεδομένων τους.