Αφηρημένο

Ιστορικό

Η αγγειογενετική σηματοδότησης VEGF-ανεξάρτητο παίζει σημαντικό ρόλο στην ανάπτυξη του καρκίνου του παχέος εντέρου (CRC). Ωστόσο, επιπτώσεις της στην κλινική έκβαση της CRC δεν έχει αναφερθεί. Αυτή η μελέτη είχε ως στόχο να διερευνήσει τη συσχέτιση μεταξύ των γενετικών παραλλαγών σε αρκετές μεγάλες γονίδια σηματοδοτικό μονοπάτι του VEGF-ανεξάρτητο και τη συνολική επιβίωση των ασθενών με CRC.

Μέθοδοι

Επτά πολυμορφισμούς μονών νουκλεοτιδίων (SNPs) σε τέσσερις σημαντικές VEGF-ανεξάρτητο αγγειογενετική γονίδια (

ANGPT1

,

AMOT

,

DLL4

και

ENG

) ήταν ο γονότυπος σε ένα κινεζικό πληθυσμό με 408 ασθενείς CRC.

Αποτελέσματα

Ένα SNP, rs1954727 στο

ANGPT1

, συσχετίστηκε σημαντικά με CRC συνολική επιβίωση. Σε σύγκριση με τους ασθενείς με ομόζυγο άγριου τύπου γονότυπο του rs1954727, τα άτομα με ετερόζυγη και ομόζυγη γονότυπους παραλλαγή παρουσίασαν θετική συνολική επιβίωση, με αναλογία κινδύνου (HR) 0,89 (95% διάστημα εμπιστοσύνης [CI] 0,55 – 1,43,

P

= 0,623), και 0,32 (95% CI 0,15 έως 0,71,

P

= 0.005), αντίστοιχα (

P

τάση = 0,008). Σε στρωματοποιημένη ανάλυση, η συσχέτιση αυτή παρέμεινε σημαντική σε ασθενείς που υποβάλλονται σε χημειοθεραπεία (

P

τάση = 0,012), αλλά όχι σε αυτούς χωρίς χημειοθεραπεία. Εμείς αξιολογηθούν περαιτέρω τα αποτελέσματα της χημειοθεραπείας στην CRC επιβίωσης που ήταν στρωματοποιημένη με γονότυπους rs1954727. Βρήκαμε ότι η χημειοθεραπεία είχε ως αποτέλεσμα μια σημαντικά καλύτερη συνολική επιβίωση στους ασθενείς που CRC (HR = 0,44, 95% CI 0,26 έως 0,75,

P

= 0,002), η οποία ήταν ιδιαίτερα εμφανής σε εκείνους τους ασθενείς με την ετερόζυγο γονότυπο rs1954727 (HR = 0,45, 95% CI 0,22 έως 0,92,

P

= 0,028).

Συμπέρασμα

Τα στοιχεία μας δείχνουν ότι rs1954727 στο

ANGPT1

γονίδιο μπορεί να είναι ένα προγνωστικό βιοδείκτη για τη συνολική επιβίωση των ασθενών με CRC, ιδιαίτερα σε εκείνα που λαμβάνουν χημειοθεραπεία, ένα εύρημα που εγγυάται επικύρωση σε μεγαλύτερους ανεξάρτητους πληθυσμούς

Παράθεση:. Dai J, Wan S, Zhou F, Myers RE, Guo Χ, Li B, et al. (2012) γενετικός πολυμορφισμός σε ένα VEGF-Ανεξάρτητη αγγειογένεση Gene ANGPT1 και τη συνολική επιβίωση του καρκίνου του παχέος εντέρου Οι ασθενείς μετά από χειρουργική εκτομή. PLoS ONE 7 (4): e34758. doi: 10.1371 /journal.pone.0034758

Επιμέλεια: Masaru Katoh, Εθνικό Κέντρο Καρκίνου, Ιαπωνία

Ελήφθη: 7 Οκτ, 2011? Αποδεκτές: 5 Μαρτίου, 2012? Δημοσιεύθηκε: 4 του Απριλίου 2012

Copyright: © 2012 Dai et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Το έργο που αναφέρονται εδώ υποστηρίζεται από μια επιχορήγηση εκκίνησης από το Πανεπιστήμιο Τόμας Τζέφερσον, χορηγεί 2009CB521704 από την εθνική βασική Ερευνητικό Πρόγραμμα της Κίνας, και να χορηγήσει 30.872.927 από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Παγκοσμίως, ο καρκίνος του παχέος εντέρου (CRC) είναι η τρίτη πιο συχνή κακοήθεια και η τέταρτη κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο με περίπου 1.234.000 νέα κρούσματα και 608.000 θανάτους το 2008 [1]. CRC είναι μια ασθένεια που είναι σε μεγάλο βαθμό επηρεάζεται από τον τρόπο ζωής και διατροφικών παραγόντων [2], ωστόσο, πρόσφατες μελέτες έχουν δείξει ότι μεταξύ των ατόμων γενετικές παραλλαγές μπορεί να επηρεάσουν σημαντικά τον κίνδυνο CRC [3], [4], [5]. Επιπλέον, συσσωρεύοντας στοιχεία, συμπεριλαμβανομένων εκείνων που προέρχονται από τις δικές μας μελέτες, έχει επίσης δείξει ότι πολυμορφισμοί ενός νουκλεοτιδίου (SNPs) μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως υποκατάστατο βιοδείκτες του γενετικού υποβάθρου των ασθενών CRC για την πρόβλεψη θεραπευτικής απόκρισης και την πρόγνωση [6], [7], [8], [9].

Tumor αγγειογένεση, η δημιουργία νέων αιμοφόρων αγγείων, είναι ένα κρίσιμο κυτταρική διαδικασία που επηρεάζει την ανάπτυξη των κυττάρων του όγκου, εισβολή, τοπικές-περιφερειακές επανάληψη, και μεταστατική εξάπλωση CRC, καθιστώντας ένας ελκυστικός στόχος για την ανάπτυξη αντικαρκινικών φαρμάκων κυτταρική ανάπτυξη [10] .Η όγκου, εισβολή, και οι μεταστάσεις επηρεάζονται σε μεγάλο βαθμό από την ισορροπία των λειτουργιών του ενδογενούς αγγειογενετική και αντι-αγγειογόνους παράγοντες [10]. Τα αγγειακά ενδοθηλιακά παράγοντες ανάπτυξης (VEGFs) και οι υποδοχείς της (VEGFRs) παίζουν κεντρικό ρόλο στην οδό της αγγειογένεσης [11]. Οι λειτουργικές αναστολείς του VEGF και VEGFRs, όπως αντι-VEGF αντίσωμα εξουδετέρωσης και μικρών μορίων που μπλοκάρουν την δραστικότητα κινάσης τυροσίνης του VEGFRs, έχουν εγκριθεί ως αντι-αγγειογένεσης θεραπείες για πολλούς καρκίνους, συμπεριλαμβανομένων CRC [12]. Ωστόσο, η μεγάλη αντίσταση στα αντι-αγγειογενετική θεραπείες που στοχεύουν το μονοπάτι VEGF διέγειρε την έρευνα για θεραπείες που στοχεύουν τον VEGF-ανεξάρτητη αγγειογένεση μονοπάτι [12], [13], όπως προ-αγγειογενετική οδών που προκαλείται από αγγειοποιητίνες /ΤΙΕ-2 και Delta /Notch [14], [15], καθώς και αντι-αγγειογενετική οδών που προκαλείται από πρωτεΐνες angiomotin και ενδογλίνη [16], [17].

Γενετικές παραλλαγές στην

VEGF

γονίδιο έχουν έχουν αναφερθεί ότι διαμορφώνουν την έκφραση του γονιδίου του VEGF [18], [19], [20]. Έχουν επίσης συσχετιστεί με την αιτιολογία και κλινικά αποτελέσματα των CRC [21], [22], [23]. Ωστόσο, αν και βασική μελέτες έχουν αποκαλύψει ουσιαστικό ρόλο του VEGF-ανεξάρτητα γονίδια μονοπάτι στην αιτιολογία και την κλινική έκβαση της CRC, καμία μελέτη δεν έχει αναφερθεί για τη σύνδεση μεταξύ των γενετικών παραλλαγών αυτών των γονιδίων και CRC πρόγνωση. Ο στόχος της παρούσας πιλοτικής μελέτης ήταν να αξιολογηθεί η σχέση μεταξύ SNPs σε αρκετές μεγάλες γονίδια αγγειογενετική μονοπάτι VEGF-ανεξάρτητο με τη συνολική επιβίωση των ασθενών με CRC.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθική

Αυτή η μελέτη εγκρίθηκε από τα θεσμικά συμβούλια αναθεώρηση της τέταρτης Στρατιωτικό Ιατρικό Πανεπιστήμιο. Μια έγγραφη συγκατάθεση με την υπογραφή ελήφθη για κάθε ασθενή.

πληθυσμό ασθενών και κλινικών συλλογής δεδομένων

Αυτή η μελέτη εστιάστηκε στις VEGF-ανεξάρτητο γονίδιο αγγειογένεση SNPs ως πιθανοί προγνωστικοί παράγοντες της CRC πρόγνωση. Ως εκ τούτου, όλα τα θέματα που περιλαμβάνονται στην παρούσα μελέτη είχε ιστοπαθολογικά επιβεβαίωσε CRC. Αρχικά, 496 ασθενείς CRC προσλήφθηκαν μεταξύ Φεβρουαρίου 2006 και Απριλίου 2010 τα Τμήματα της Γενικής Χειρουργικής στο Νοσοκομείο Xijing και το Νοσοκομείο Tangdu που είναι συνδεδεμένες με την τέταρτη Στρατιωτικό Ιατρικό Πανεπιστήμιο σε Xi’an, Κίνα. Δεν υπήρχαν περιορισμοί προσλήψεων από την ηλικία, το φύλο και το στάδιο του καρκίνου. Όλοι οι ασθενείς CRC δεν είχαν προηγούμενο ιστορικό άλλες μορφές καρκίνου, η χημειοθεραπεία, ή ακτινοθεραπεία. Όλοι οι ασθενείς CRC είχαν πρόσφατα διαγνωστεί και ιστοπαθολογικά επιβεβαίωσε ότι έχουν αδενοκαρκίνωμα. Για τους σκοπούς της παρούσας μελέτης, 88 ασθενείς αποκλείστηκαν, για τους ακόλουθους λόγους: δεν υποβάλλονται σε χειρουργική επέμβαση ή έλαβε μόνο παρηγορητική λειτουργία (26 ασθενείς), είχαν ελλιπή κλινικές πληροφορίες ή δεν διέθεταν την παρακολούθηση (48 ασθενείς), έχασαν τη ζωή τους μέσα σε ένα μήνα από την χειρουργική επέμβαση (6 ασθενείς) και είχε κακή ποιότητα ή /και η ποσότητα του δείγματος DNA (8 ασθενείς). Τέλος, 408 χειρουργικά ασθενείς με πλήρη κλινική και την παρακολούθηση των δεδομένων καθώς και δείγματα DNA υψηλής ποιότητας συμπεριλήφθηκαν στην παρούσα μελέτη. Όλοι οι ασθενείς ήταν Κινέζοι Χαν.

Δημογραφικά και κλινικά δεδομένα

Λεπτομερής δημογραφικές και κλινικές πληροφορίες που συλλέγονται μέσω συνέντευξης πρόσωπο με πρόσωπο, ιατρική ανασκόπηση διαγραμμάτων, ή διαβούλευση με τους θεράποντες ιατρούς. Τα δημογραφικά δεδομένα που συλλέγονται περιλαμβάνουν την ηλικία, το φύλο, η εθνικότητα, το κάπνισμα, το καθεστώς πόσιμο, και ο δείκτης μάζας σώματος (ΔΜΣ). Τα κλινικά δεδομένα που συλλέγονται περιλαμβάνουν στιγμή της διάγνωσης, το χρόνο της χειρουργικής επέμβασης και /ή χημειοθεραπείες, την ώρα του θανάτου του, το στάδιο του όγκου, τη διαφοροποίηση, το site τοποθεσία, λεμφαδένα εισβολής, πρωτόκολλο θεραπείας, και CEA στον ορό (καρκινοεμβρυϊκό αντιγόνο). Ένα πρότυπο παρακολούθησης πραγματοποιήθηκε από έναν εκπαιδευμένο κλινικό ειδικός μέσα στο χώρο της συνέντευξης, άμεση κλήση, ή ιατρική εξέταση γράφημα. Τα τελευταία στοιχεία παρακολούθησης στην ανάλυση αυτή λήφθηκε το Φεβρουάριο του 2011. Για τον ασθενή που εγγράφονται μετά τον Αύγουστο του 2008, 5-ml αίματος ήταν διαθέσιμο για την εξαγωγή γονιδιακού DNA με τη χρήση του E.Z.N.A. Αίμα DNA Midi Kit (Omega Bio-Tek, Norcross, GA). Για ασθενείς που εντάχθηκαν πριν από τον Αύγουστο του 2008, γονιδιακό DNA εξήχθη από περίπου 100 mg των παρακείμενων φυσιολογικών ιστών που λαμβάνονται από έναν παθολόγο μετά την επέμβαση με τη χρήση του E.Z.N.A. DNA ιστού Kit (Omega Bio-Tek).

επιλογή SNP και του γονότυπου

Τέσσερα μεγάλα γονίδια στην αγγειογενετική μονοπάτι VEGF-ανεξάρτητο μελετήθηκαν, συμπεριλαμβανομένων των

AGNPT1

το οποίο κωδικοποιεί ένα ΤΙΕ2 αγωνιστή που διεγείρει το ΡΙ3Κ-Akt μονοπάτι σηματοδότησης ως σήμα επιβίωσης και σταθεροποιεί τα αιμοφόρα αγγεία,

DLL4

(Delta-σαν 4 συνδέτη), το οποίο κωδικοποιεί μια πρωτεΐνη που εκκρίνεται από τα ενδοθηλιακά κύτταρα και προάγει την αγγειογένεση με καταστολή μη λειτουργικής αρχής βλάστηση των αγγειακών ενδοθηλιακών κυττάρων,

AMOT

(Angiomotin) που κωδικοποιεί έναν αναστολέα αγγειοστατίνης που διαμεσολαβεί το σχηματισμό σωλήνα και τη μετανάστευση των ενδοθηλιακών κυττάρων προς παράγοντες ανάπτυξης κατά το σχηματισμό νέων αιμοφόρων αγγείων, και

ENG

(ΕηάοβΗη) το οποίο κωδικοποιεί ένα συστατικό του συμπλόκου υποδοχέα παράγοντα βήτα μετασχηματιστικής ανάπτυξης που εμπλέκονται στην αγγειογένεση, καρδιαγγειακή ανάπτυξη, και αγγειακή ομοιόσταση. επιλεγεί πιθανώς λειτουργική SNPs, σε λειτουργικές περιοχές, συμπεριλαμβανομένης της προωθητές, εξόνια, και αμετάφραστες περιοχές (UTRs) χρησιμοποιούσαν μια σειρά από web-based SNP εργαλεία επιλογής (ελεύθερα διαθέσιμο σε https://snpinfo.niehs.nih.gov/snpfunc.htm) , με την οποία μπορεί κανείς να επιλέξει με βάση SNPs ανισορροπία σύνδεσης (LD) και προβλεπόμενη λειτουργικά χαρακτηριστικά και των δύο κωδικοποίησης και μη-κωδικοποίησης SNPs. Οι ‘και 3’ περιοχές που πλευρίζουν 5 αυθαιρέτως ορίζεται σε 1000 bp για όλα τα γονίδια. Επιλέχθηκαν μόνο επικυρωθεί SNPs και SNPs με μικρές συχνότητα αλληλόμορφο (MAF) & lt? 5% σε ασιατικό πληθυσμό αποκλείστηκαν. Στην περίπτωση πολλαπλών πιθανώς λειτουργική SNPs μέσα στο ίδιο μπλοκ απλότυπος (που ορίζεται από τον συντελεστή δεσμό r

2 & gt? 0,8), μόνο ένας SNP είχε συμπεριληφθεί. Τέλος, συνολικά επτά SNPs εντοπίστηκαν για τα τέσσερα γονίδια, μεταξύ των οποίων δύο SNPs σε

ANGPT1

(rs1954727 και rs9297395), τρία SNPs στο

AMOT

(rs2286064, rs2286063, rs640009), ένα SNP στο

DLL4

(rs12439845) και ένα SNP στο

ENG

(rs7865146). Γονοτυπική πραγματοποιήθηκε με τη χρήση του συστήματος προσδιορισμού του γονότυπου Sequenom iPlex (Sequenom Inc, CA). Το προσωπικό του εργαστηρίου διεξαγωγή του γονότυπου τυφλώθηκαν στις πληροφορίες των ασθενών. Το μέσο ποσοστό πρόσκληση για την γονοτυπική ήταν 99,4%. μέτρα ελέγχου αυστηρό ποιοτικό υλοποιήθηκαν κατά τη διάρκεια της ανάλυσης γονότυπου με πάνω από το 99% συμφωνία μεταξύ των δειγμάτων γονότυπου εις διπλούν.

Η στατιστική ανάλυση

Το τελικό σημείο αξιολογήθηκε σε αυτή τη μελέτη ήταν η συνολική επιβίωση, που ορίζεται ως ο χρόνος από την αρχική χειρουργική επέμβαση σε θάνατο ή την τελευταία παρακολούθηση. αναλογία κινδύνου (HR) και το διάστημα εμπιστοσύνης 95% (95% CI) υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας μια πολυπαραγοντική Cox μοντέλο αναλογικών κινδύνων, την προσαρμογή για την ηλικία, το φύλο, το κάπνισμα, το ποτό κατάσταση, BMI, τη θέση του όγκου, η διαφοροποίηση του όγκου, το στάδιο του όγκου και χημειοθεραπεία , ανάλογα με την περίπτωση. Απλότυπου /diplotype προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας το λογισμικό HelixTree (Χρυσή Helix, Inc.), και HR εκτιμήθηκε με πολυμεταβλητή Cox μοντέλο αναλογικών κινδύνων, χρησιμοποιώντας τον απλότυπο /diplotype περιέχουν όλους αλληλόμορφα άγριου τύπου ως αναφορά. Οι δοκιμές για τις αλληλεπιδράσεις μεταξύ των SNPs και η πηγή του DNA διεξήχθησαν με τη συμπερίληψη ενός όρου μεταξύ προϊόντων στο μοντέλο αναλογικού κινδύνου του Cox. δοκιμασία log-rank χρησιμοποιήθηκε για να αξιολογήσει τις διαφορές της συνολικής επιβίωσης μεταξύ των διαφόρων ομάδων ασθενών. SAS στατιστικό πακέτο (SAS έκδοση λογισμικού 9.2, Cary, NC) χρησιμοποιήθηκε για τις αναλύσεις. Όλα τα

P

τιμές σε αυτή τη μελέτη ήταν δύο όψεων.

P

≤0.05 θεωρήθηκε το όριο της στατιστικής σημαντικότητας.

Αποτελέσματα

Ασθενείς Χαρακτηριστικά

Ένα σύνολο 408 χειρουργικά ασθενείς CRC συμπεριλήφθηκαν σε αυτή την μελέτη, με μέσο όρο ηλικίας τα 59,4 χρόνια (εύρος, 22 έως 90 ετών) και ο μέσος ΔΜΣ 22,7 (εύρος, 15,8 έως 32,9). Μεταξύ των ασθενών, 56,4% (n = 230) ήταν άνδρες και 46,6% (n = 178) ήταν γυναίκες. Η πλειονότητα των ασθενών δεν ήταν ποτέ καπνιστές (70,8%) και ποτέ πότες (89,5%). Το ποσοστό των ασθενών με καρκίνο του παχέος εντέρου (47.1%) ήταν ελαφρώς χαμηλότερη από ασθενείς με καρκίνο του ορθού (52,9%). Περίπου 47,1% των ασθενών είχαν το στάδιο του όγκου II, ενώ το στάδιο 0, I, III και IV όγκοι ήταν παρόντες στο 2,0%, 14,2%, 27,2% και 9,6% των ασθενών, αντίστοιχα. Περίπου 66,4% των ασθενών είχαν μέτρια διαφοροποιημένο όγκων και 78,2% ασθενείς υποβλήθηκαν σε θεραπεία με χημειοθεραπεία μετά από χειρουργική επέμβαση. Σε μια διάμεσος χρόνος παρακολούθησης των 22,9 μηνών, περίπου το 23,0% (n = 94) των ασθενών που είχαν αποβιώσει κατά την τελευταία παρακολούθηση (Φεβρουάριος 2011) (Πίνακας 1).

Η

Σύνδεσης μεταξύ ατομικές SNPs και τη συνολική επιβίωση σε ασθενείς με CRC

Οι ενώσεις των επτά επιλεγμένα SNPs με CRC επιβίωσης αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας μονοπαραγοντική και πολυπαραγοντική ανάλυση προσαρμογή για την ηλικία, το φύλο, το κάπνισμα, το καθεστώς πόσιμο, BMI, τη θέση του όγκου, της διαφοροποίησης των όγκων , το στάδιο του όγκου, και χημειοθεραπεία. Τα αποτελέσματα συνοψίζονται στον Πίνακα 2. Μεταξύ αυτών, ένας SNP, rs1954727 που βρίσκεται στην περιοχή 3 ‘UTR του

ANGPT1

γονίδιο, συσχετίστηκε σημαντικά με τη συνολική επιβίωση σε ασθενείς CRC τόσο μονοπαραγοντική και αναλύσεις πολλαπλών μεταβλητών. Στην πολυπαραγοντική ανάλυση, σε σύγκριση με το ομόζυγο άγριου τύπου γονότυπο (WW), η ετερόζυγη (WV) και ομόζυγη παραλλαγή γονότυπο (VV) του rs1954727 συσχετίστηκε με HR 0,89 (95% CI 0,55 έως 1,43,

P

= 0,623) και 0,32 (95% CI 0,15 έως 0,71,

P

= 0.005), αντίστοιχα, με παρατηρείται σημαντική επίδραση δόσης-απόκρισης (

P

τάση = 0,008, Πίνακας 2 ). Συνδεθείτε τεστ κατάταξης έδειξε μια σημαντική διαφορά στη συνολική επιβίωση μεταξύ του άγριου τύπου και ομόζυγη παραλλαγή γονότυπους του rs1954727 (log rank

P

= 0.019, Εικόνα 1). Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι rs1954727 ήταν ανεξάρτητος προγνωστικός δείκτης της CRC την επιβίωση του πληθυσμού της μελέτης μας. Επιπλέον, έχουμε τυχαία επιλεγμένους 50 ασθενείς συμπεριελήφθησαν στη μελέτη αυτή τόσο με το αίμα και τους φυσιολογικούς ιστούς διαθέσιμα και ο γονότυπος όλων των επτά SNPs στις δύο DNAs αίματος και ιστού για αυτούς τους ασθενείς. Τα αποτελέσματα προσδιορισμού του γονότυπου ήταν 100% συγκλίνουσες μεταξύ δειγμάτων αίματος και DNA ιστού. Επιπλέον, για κάθε μία από τις επτά SNPs, πραγματοποιήσαμε μια δοκιμή για την αλληλεπίδραση (ετερογένεια) μεταξύ της πηγής SNP και το DNA και δεν εντόπισε καμία σημαντική αλληλεπίδραση (

P

για την αλληλεπίδραση για τη συνολική επιβίωση κυμαίνεται από 0,143 για rs1954727 να 0.651 για rs2286063, τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Στο σύνολό τους, αυτές οι γραμμές των αποδεικτικών στοιχείων έδειξε ότι οι διαφορετικές πηγές DNA δεν επηρέασε τα συμπεράσματα που προσδιορίζονται στην παρούσα μελέτη.

Η

Σύλλογος rs1954727 με τη συνολική επιβίωση των ασθενών CRC στρωματοποιημένη με βάση τα χαρακτηριστικά υποδοχής

Θα αναλυθούν περαιτέρω την επίδραση του rs1954727 στη συνολική επιβίωση σε ασθενείς με CRC στρωματοποιημένη με δημογραφικά και κλινικά χαρακτηριστικά. Όπως φαίνεται στον Πίνακα S1, η σημαντική βελτίωση της συνολικής επιβίωσης παρέχει το rs1954727 παρατηρήθηκε σε ηλικιωμένους ασθενείς (HR = 0,12, 95% CI, 0,03 – 0,60,

P

= 0,010), άρρενες ασθενείς (HR = 0,20, 95% CI, 0,05 έως 0,75,

P

= 0,017), μη καπνιστές (HR = 0,28, 95% CI, 0,11 έως 0,73,

P

= 0,009), ποτέ δεν πότες (HR = 0.35, 95% CI, 0,15 έως 0,84,

P

= 0.018), και οι ασθενείς με χαμηλότερο επίπεδο εκπαίδευσης (HR = 0,28, 95% CI, 0,08 έως 0,94,

P

= 0,040 ), με χημειοθεραπεία (HR = 0,33, 95% CI, 0,14 έως 0,79,

P

= 0,012), με καρκίνο του παχέος εντέρου (HR = 0,09, 95% CI, 0,02 έως 0,40,

P

= 0.002), με την κακή και μέτρια διαφοροποίηση του όγκου (HR = 0,32, 95% CI, 0,13 έως 0,78,

P

= 0,012), με το στάδιο 3 ή 4 όγκους (HR = 0,16, 95% CI, 0,04 – 0,65,

P

= 0,011), και με τόσο χαμηλότερο ή υψηλότερο ΔΜΣ (HR = 0,20, 95% CI, 0,04 έως 0,97,

P

= 0,045, ή HR = 0,32, 95% CI, 0,11 έως 0,92,

P

= 0,035, αντίστοιχα). Η σημαντική δοσοεξαρτώμενη επίδραση που απορρέουν από rs1954727 ήταν εμφανής σε ασθενείς που ήταν ηλικίας (

P

τάσης = 0.006), αρσενικό (

P

τάση = 0,012), ποτέ δεν καπνιστής (

P

τάση = 0,021), ποτέ δεν πότης (

P

τάσης = 0.025), και ασθενείς με υψηλότερο ΔΜΣ (

P

τάση = 0,025), με χημειοθεραπεία (

P

τάση = 0,012), με τη θέση του όγκου του καρκίνου του παχέος εντέρου (

P

τάση = 0,012), με την κακή και μέτρια διαφοροποίησης του όγκου (

P

τάσης = 0.016), και με προχωρημένο στάδιο όγκου 3-4 (

P

τάση = 0,003). Μεταξύ των 319 ασθενών που λαμβάνουν χημειοθεραπεία, 308 (96,6%) έλαβαν το δοσολογικό σχήμα FOLFOX, συμπεριλαμβανομένων φολινικό οξύ (FOL), fluorouracil (F) και οξαλιπλατίνη (ΟΧ). Ο περιορισμός της ανάλυσης σε εκείνους τους ασθενείς που λαμβάνουν το FOLFOX απέδωσε παρόμοια αποτελέσματα με αυτά της τρέχουσας ανάλυσης (δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Αναλογικός αποτελέσματα της χημειοθεραπείας στην CRC συνολική επιβίωση από rs1954727

Επειδή η πλειοψηφία των ασθενείς CRC σε αυτή τη μελέτη υποβλήθηκαν σε θεραπεία με χημειοθεραπεία, θα αξιολογηθούν περαιτέρω τα ρυθμιστικά αποτελέσματα σχετικά με τη σύνδεση μεταξύ της χημειοθεραπείας και τη συνολική επιβίωση των ασθενών, στρωματοποιημένη με rs1954727. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 3, οι ασθενείς που λαμβάνουν χημειοθεραπεία είχαν μια σημαντικά καλύτερη συνολική επιβίωση με HR 0,44 (95% CI, 0,26 – 0,75,

P

= 0,002), σε σύγκριση με ασθενείς χωρίς χημειοθεραπεία. Αυτή η σημαντική επίδραση στην επιβίωση των ασθενών που παρέχει χημειοθεραπεία παρατηρήθηκε μόνο σε ασθενείς με τον ετερόζυγο γονότυπο του rs1954727 στην στρωματοποιημένη ανάλυση (HR = 0,45, 95% CI 0,22 έως 0,92,

P

= 0.028), αλλά όχι σε εκείνα που φέρουν το ομόζυγο άγριου τύπου ή παραλλαγής γονότυπο.

η

απλότυπου και diplotype του

ANGPT1

γονιδίων και CRC συνολική επιβίωση

Οι αναλύσεις απλότυπος και diplotype διεξήχθησαν σε αξιολογήσει το συνδυασμένο αποτέλεσμα των δύο SNPs στο

ANGPT1

γονίδιο στο CRC συνολική επιβίωση. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 4, υπήρχαν τέσσερις απλότυποι της τάξης των rs9297395 και rs1954727 (W_W: 52,5%, W_V: 42,2%, V_W: 4,3%, και V_V: 1,0%) και τρεις diplotypes (W_W-W_W: 28,8%, W_W-W_V: 44,3%, και W_V-W_V: 19,7%), με συχνότητα & gt? 1% του πληθυσμού της μελέτης. Σε σύγκριση με τον απλότυπο που περιέχει το αλληλόμορφο άγριου τύπου για τα δύο SNPs (W_W), οι ασθενείς με τον απλότυπο του W_V επέδειξαν μία σημαντικά καλύτερη συνολική επιβίωση (HR = 0,59, 95% CI 0,42 έως 0,83,

P

= 0,002), το οποίο ήταν σύμφωνο με την κύρια ανάλυση επίδραση του SNP rs1954727. Για την ανάλυση diplotype, σε σύγκριση με την diplotype περιέχει το ομόζυγο γονότυπο άγριου τύπου και για τις δύο SNPs (W_W-W_W), diplotype που περιέχει ένα αντίγραφο του απλότυπου W_V (W_W-W_V) και δύο αντίγραφα του W_V απλότυπου (W_V-W_V) εμφάνισε μια σταδιακή βελτίωση της συνολικής επιβίωσης με HR 0,74 (95% CI 0,44 έως 1,24, P = 0,247) και 0.30 (95% CI 0,13 έως 0,67,

P

= 0.004), αντίστοιχα. Πραγματοποιήσαμε επίσης την απλότυπος και αναλύσεις diplotype για τα τρία SNPs στο

AMOT

γονίδιο, όμως, δεν παρατηρήθηκαν σημαντικά ευρήματα (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Η

Συζήτηση

σε αυτή τη μελέτη, ανέφεραν σημαντική συσχέτιση της συνολικής επιβίωσης σε μία ομάδα από 408 χειρουργικά επεξεργασμένο ασθενείς CRC με γενετική παραλλαγή, rs1954727, σε

ANGPT1

, ένα κεντρικό γονίδιο στη αγγειογόνο σηματοδότηση VEGF-ανεξάρτητο μονοπάτι. Επιπλέον, έχουμε εντοπίσει μια αληθοφανή αλληλεπίδραση μεταξύ αυτού του SNP και τη χημειοθεραπεία για τη διαμόρφωση CRC επιβίωση των ασθενών.

αναστολέων αγγειογένεσης στοχεύουν το VEGF οδού, όπως bevacizumab, sunitinib και sorafenib σηματοδότησης, έχουν επιδείξει σημαντική θεραπευτική αποτελεσματικότητα σε διάφορες μορφές καρκίνου και έχουν εγκριθεί από τον Αμερικανικό Οργανισμό Τροφίμων και Φαρμάκων στη θεραπεία του καρκίνου [24]. Ωστόσο, αυτές οι VEGF-στόχευση θεραπείες κατά της αγγειογένεσης συχνά έχει ως αποτέλεσμα μόνο μεταβατικές αποκρίσεις σε ασθενείς με καρκίνο, κυρίως λόγω των δύο τρόπων αντίσταση στην αναστολή της αγγειογένεσης, προσαρμοστική αντίσταση και εγγενή μη ανταπόκριση [13]. Και οι δύο τρόποι αντίστασης μπορεί να αποδοθεί στην εγγενή ετερογένεια των γενετικά ασταθής καρκινικά κύτταρα, η παρουσία των πλεοναζόντων αγγειογόνων παραγόντων, και την πρόσληψη αιμοποιητικών κυττάρων και φλεγμονώδη κύτταρα στην μάζα του όγκου [13]. Είναι κατανοητό ότι οι θεραπευτικές προσεγγίσεις που στοχεύουν ταυτόχρονα πολλαπλές αγγειογενετικών παραγόντων, φλεγμονώδεις μονοπάτια και τις διαδικασίες της μετάστασης θα μπορούσε να προκαλέσει περισσότερα κλινικά σημαντικές ανταποκρίσεις [25]. Το μονοπάτι ANGPT-TIE παρουσιάζει μια ελκυστική ευκαιρία για μια τέτοια θεραπευτική παρέμβαση, δεδομένου ότι είναι ζωτικής σημασίας όχι μόνο για την αγγειογένεση και την αγγειακή ομοιόσταση σε ένα VEGF-ανεξάρτητο τρόπο, αλλά παρέχει επίσης έναν σημαντικό σύνδεσμο μεταξύ της αγγειογένεσης και τα μονοπάτια της φλεγμονής [25].

η οικογένεια πρωτεϊνών Ανθρωπίνων ANGPT-TIE αποτελείται από τρεις συνδέτες, ANGPT1, ANGPT2 και ANGPT4, καθώς και δύο υποδοχείς, ΤΙΕ1 και ΤΙΕ2. ANGPT1 είναι το πιο σημαντικό μεσολαβητής του VEGF-ανεξάρτητων προ-αγγειογενετική μονοπάτι σηματοδότησης, το οποίο ενεργοποιεί το κατάντη μονοπάτι ΡΙ3Κ /ΑΚΤ μέσω της αλληλεπίδρασης με την πρωτεΐνη ΤΙΕ2 [26], [27]. ANGPT2 αναστέλλει ANGPT1 δέσμευση στον υποδοχέα ΤΙΕ2 και αποτρέπει την ενεργοποίηση του [28]. Δυναμική ισορροπία και διαδοχική έκφραση του ANGPTs και VEGF απαιτείται για τη διατήρηση της αγγειογένεσης [29], [30]. Η αυξητική ρύθμιση του ANGPT1 έχει διερευνηθεί σε πολλούς καρκίνους, γεγονός που υποδηλώνει ότι ANGPT1 συσχετίζεται ισχυρά με κακοήθεια όγκων [25]. Ωστόσο, αρκετές μελέτες έχουν αναφέρει μία ανασταλτική επίδραση του ANGPT1 στην παθολογική αγγειακή διαστολή, υποδεικνύοντας ότι ANGPT1 μπορεί επίσης να λειτουργήσει ως καταστολέας όγκων σε αρκετούς καρκίνους, συμπεριλαμβανομένων CRC [31], [32], [33], [34]. Αυτά τα ευρήματα ήταν συμβατά με τις εκθέσεις των διαφόρων ανεξάρτητων μελετών που δείχνουν ότι η υψηλότερη αναλογία ANGPT2 /ANGTP1 συσχετίστηκε με κακή πρόγνωση των πολλών κακοηθειών, συμπεριλαμβανομένων CRC [25]. Αυτά τα ευρήματα υποδηλώνουν παράδοξη τις επιδράσεις της ANGPT1 σχετικά με τα χαρακτηριστικά του όγκου και την πρόγνωση μπορεί να είναι ειδική για τον καρκίνο και επίσης εξαρτάται από άλλα γονίδια που σχετίζονται με αγγειογένεση.

γενετικές παραλλαγές σε ANGPT γονίδια μπορεί να οδηγήσει σε αλλοιωμένη παραγωγή γονίδιο και να οδηγήσει σε ενεργοποίηση /αδρανοποίηση του γονιδίου. SNPs σε

ANGPT1

γονίδιο έχουν συσχετιστεί με τον κίνδυνο ασθενειών όπως οι αυτοάνοσες νόσοι, νεανική ιδιοπαθή αρθρίτιδα, και portopulmonary υπέρταση [35], [36]. Ωστόσο, μέχρι σήμερα, δεν έχει υπάρξει καμία μελέτη που ανέφερε μια ένωση του

ANGPT1

SNPs με τον κίνδυνο και την κλινική έκβαση των καρκίνων. Σε αυτή τη μελέτη, εντοπίσαμε ένα

ANGPT1

SNP, rs1954727, η οποία μπορεί να προβλέψει την συνολική επιβίωση των ασθενών με CRC μετά την επέμβαση. Αυτό SNP βρίσκεται στο 3 ‘UTR του

ANGPT1

γονίδιο. Λειτουργική SNPs σε αυτή την περιοχή μπορεί να επηρεάσει τη σταθερότητα αγγελιαφόρου RNA ή δεσμευτική microRNA. Μια αναζήτηση βιοπληροφορικής της βάσης δεδομένων PolymiRTS δεν εντόπισε οποιαδήποτε πιθανή θέση πρόσδεσης miRNA στην άμεση περιφέρειά του SNP [37]. Ωστόσο, μια περαιτέρω αναζήτηση οδήγησε στην ταυτοποίηση τεσσάρων SNPs στην 3’UTR του

ANGPT1

γονίδιο που βρίσκονται εντός υποθετικές miRNA περιοχές σύνδεσης (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα). Το πλησιέστερο SNP είναι περίπου 600 νουκλεοτίδια μακριά από το rs1954727. Λειτουργική χαρακτηρισμούς όπως PCR πραγματικού χρόνου που ακολουθείται από δοκιμασία λουσιφεράσης θα χρειαστούν για να καθοριστεί αν rs1954727 έχει καμία άμεση φυσιολογική επίδραση στο messenger RNA έκφραση του

ANGPT1

.

Σε στρωματοποιημένη ανάλυση, βρήκαμε το προστατευτική επίδραση που απορρέουν από rs1954727 ήταν περισσότερο εμφανής σε ασθενείς που λαμβάνουν χημειοθεραπεία (Πίνακας S1). Προηγούμενες μελέτες έχουν αναφέρει μια σημαντικά αυξημένη δραστικότητα κατά του όγκου κατά την από κοινού χρήση των ANGPT1 αντισώματος και χημειοθεραπείας στη θεραπεία στερεών όγκων, συμπεριλαμβανομένων CRC [38]. Αυτές οι γραμμές των αποδεικτικών στοιχείων μας οδήγησε να αξιολογηθεί περαιτέρω η ρυθμιστική δράση της χημειοθεραπείας στην επιβίωση των ασθενών με στρωματοποίηση από τους γονότυπους των rs1954727. Συνεπής με τη διαπίστωση ότι η παραλλαγή γονότυπους του rs1954727 ανατίθενται καλύτερη συνολική επιβίωση σε ασθενείς που έλαβαν χημειοθεραπεία, βρήκαμε τη βελτιωμένη επιβίωση που παρέχεται από τη χημειοθεραπεία παρέμεινε εμφανής σε ασθενείς με τον ετερόζυγο γονότυπο του rs1954727 (Πίνακας 4). Μπορούμε επίσης να σημειωθεί ότι σε ασθενείς με ομόζυγο γονότυπο παραλλαγή του rs1954727, η

P

τιμή δεν ήταν σημαντική (P = 0,297), αν και η βελτίωση της συνολικής επιβίωσης που απορρέουν από τη χημειοθεραπεία ήταν πολύ πιο σημαντικό (HR = 0,19). Αυτό μπορεί να οφείλεται σε μια ασταθή εκτίμηση που προκύπτει από τον μικρό αριθμό ασθενών σε αυτήν την ομάδα (μόνο 1 θάνατο σε ασθενείς χωρίς χημειοθεραπεία, Πίνακας 3) μελέτες .Future με μεγαλύτερο μέγεθος δείγματος απαιτούνται για να παρέχουν επαρκή στατιστική ισχύ για την ανάλυση των αλληλεπιδράσεων μεταξύ rs1954727 και τη χημειοθεραπεία στην επιβίωση των ασθενών.

υπάρχουν πολλές δυνάμεις σε αυτή τη μελέτη. Οι ασθενείς εντάχθηκαν από το Ξιάν και παρακείμενη περιοχή, μια περιοχή που είναι ιδιαίτερα ελκυστική για τη διεξαγωγή έρευνας με βάση τον πληθυσμό, λόγω της γεωγραφικής της σταθερότητας με χαμηλό ποσοστό κινητικότητας. Επίσης, οι ασθενείς που αναλύθηκαν σε αυτή τη μελέτη ήταν εξαιρετικά ομοιογενής, δεδομένου ότι όλοι οι ασθενείς είχαν αδενοκαρκίνωμα και χειρουργικά κατεργασία για να απομακρυνθούν οι πρωτογενείς όγκους. Επιπλέον, όλοι οι χημειοθεραπείες ξεκίνησαν εντός 2 μηνών από τη χειρουργική επέμβαση και σχεδόν το 80% των ασθενών που έλαβαν χημειοθεραπεία. Οι εξαιρετικά ομοιογενή χαρακτηριστικά των ασθενών και θεραπείες, καθώς και χαμηλό ρυθμό απώλειας των ασθενών κατά την παρακολούθηση, σε μεγάλο βαθμό μειωμένη τα συγκεχυμένα αποτελέσματα των ετερογενών θεραπευτικών λεπτομέρειες σε πολλές άλλες παρόμοιες μελέτες βιοδεικτών του CRC πρόγνωση. Οι περιορισμοί της μελέτης μας περιλαμβάνουν το θέμα γενίκευσης, επειδή η μελέτη μας περιορίστηκε σε Κινέζων Χαν. Περαιτέρω αξιολόγηση είναι απαραίτητη για να καθοριστεί αν τα ευρήματα αυτά μπορεί να γενικευθεί σε άλλες εθνοτικές ομάδες. Επιπλέον, το μικρό μέγεθος του δείγματος περιορίζεται η ισχύς ορισμένων στρωματοποιημένη αναλύσεις με μικρό μέγεθος δείγματος. Αναλύσαμε τη δύναμη μελέτη για την ανάλυση κύριο αποτέλεσμα, καθώς και την ανάλυση χημειοθεραπεία στρωματοποιημένη. Υπό την προϋπόθεση μιας πρόσθετης ύλης γενετικό μοντέλο (που χρησιμοποιείται στην ανάλυση της παρούσας μελέτης), με μονότονη δράση, μια MAF του 43,5% για το rs1954727, η μόνη σημαντική SNP που προσδιορίζονται στην παρούσα μελέτη, 23,0% του ποσοστού θανάτου μεταξύ του συνολικού πληθυσμού της μελέτης, η διάμεσος χρόνος έως τον θάνατο 15,2 μήνες σε ασθενείς θανόντος και ένα διάμεσο χρόνο παρακολούθησης 23,9 μήνες σε ασθενείς λογοκρίνονται, έχουμε περίπου 82% ισχύ για να ανιχνεύσει μια HR 0,6 (ετερόζυγο γονότυπο εναντίον ομόζυγο άγριου τύπου γονότυπο) και 0.4 (ομόζυγο γονότυπο παραλλαγή εναντίον άγριου τύπου γονότυπο). Η δύναμη είναι ελαφρώς υψηλότερο, αν χρησιμοποιείτε μια δοκιμαστική τάση. Όταν η ανάλυση περιορίζεται σε ασθενείς που υποβάλλονται σε χημειοθεραπεία, η δύναμη μας είναι περίπου 70% για την ανίχνευση των προαναφερθέντων μεγεθών αποτέλεσμα. Ωστόσο, η δύναμη μας είναι περιορισμένη, όταν η ανάλυση περιορίζεται στα 89 ασθενείς χωρίς χημειοθεραπεία ή κάποια άλλα μη σημαντική SNPs σε αυτή τη μελέτη που έχουν χαμηλή MAF, και τα αποτελέσματα αυτών των υπό κινούνται αναλύσεις είναι διερευνητικές και θα πρέπει να ερμηνεύονται με προσοχή . Παρ ‘όλα αυτά, η εγγραφή αυτού του πληθυσμού είναι ακόμη σε εξέλιξη με χαμηλό ρυθμό απώλειας της ασθενούς, η οποία θα μας επιτρέψει να λάβει υψηλότερη στατιστική ισχύ για την εις βάθος αναλύσεις στο μέλλον.

Εν κατακλείδι, το εύρημα μας δείχνει ότι ένα γενετικός πολυμορφισμός σε

ANGPT1

γονιδίου σχετίζεται με σημαντικά καλύτερη συνολική επιβίωση σε ασθενείς CRC μετά την επέμβαση. Οι μελλοντικές μελέτες με μεγαλύτερους πληθυσμούς που απαιτούνται για την επικύρωση αυτή τη διαπίστωση.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Πίνακα S1.

Σύλλογος rs1954727 στο ANGPT1with συνολική επιβίωση σε ασθενείς με CRC στρωματοποιημένη με βάση τα χαρακτηριστικά του ξενιστή.

doi: 10.1371 /journal.pone.0034758.s001

(DOC)

Ευχαριστίες

Ευχαριστούμε τον Δρ Μαρία Dennis και η κα Heidi Swan (Τμήμα Επιστήμης Πληθυσμού, Τμήμα Ιατρικής Ογκολογίας, Πανεπιστήμιο Τόμας Τζέφερσον) για την επιστημονική επιμέλεια.