Αφηρημένο

Ο καρκίνος των ωοθηκών είναι η πιο θανατηφόρα από τις γυναικολογικές παθήσεις και την πέμπτη αιτία θανάτου από καρκίνο μεταξύ των αμερικανικών γυναικών. Αυτό οφείλεται κυρίως στην έλλειψη προγνωστικά εργαλεία ικανά να ανιχνεύουν πρώιμα στάδια του καρκίνου των ωοθηκών και του υψηλού ποσοστού της αντίστασης στις τρέχουσες χημειοθεραπευτικές αγωγές. Σε αυτό το σενάριο, το συνολικό ποσοστό επιβίωσης 5 ετών για ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών διαγιγνώσκονται σε προχωρημένο στάδιο είναι μικρότερη από 25%. Ανωμαλίες που συνδέονται με το κακοήθη φαινότυπο και τους μηχανισμούς της εξέλιξης του όγκου δεν είναι σαφώς κατανοητοί.

In vitro

μελέτες είναι απαραίτητες, αλλά έχουν παρεμποδίζεται λόγω των περιορισμών που συνοδεύεται με τη χρήση των κυτταρικών σειρών καρκίνου των ωοθηκών και την ετερογένεια του πληθυσμού των ωοθηκών κυττάρων που προέρχονται από υγρά ασκίτη. Σε αυτή τη μελέτη παρουσιάζουμε μία απλή, γρήγορη και επαναλήψιμη μέθοδο για την απομόνωση και τον χαρακτηρισμό των ωοθηκών καρκινικά κύτταρα από στερεά ιστό όγκου και δείχνουν ότι ενζυματική πέψη επί 30 λεπτά με τα αποτελέσματα δισπάση II με τον πιο αποτελεσματικό ανάκτηση βιώσιμων επιθηλιακού καρκίνου των ωοθηκών (EOC) κύτταρα. Τα παρασκευάσματα κυττάρου που προκύπτει καρκίνου (ΕΓΚ) καταδεικνύουν μια σημαντική απόδοση, τα υψηλά επίπεδα της βιωσιμότητας και ινοβλαστών-free. Αναπτύσσονται για έως και έξι διόδους και να διατηρούν την ικανότητα να σχηματίζουν σφαιροειδή-όπως δομές σε αγαρόζη. Επιπλέον, μπορούν να γενετικά τροποποιημένα και να χρησιμοποιηθεί για τη διαλογή φαρμάκων, καθιστώντας έτσι τους ιδιαίτερα κατάλληλο για τους μεταγενέστερους εφαρμογές. Αξίζει να σημειωθεί ότι, η απομόνωση των ωοθηκών καρκινικά κύτταρα από στερεά δείγματα χρήση αυτής της μεθόδου έχει το πλεονέκτημα ότι επιτρέπει την απομόνωση των καρκινικών κυττάρων από τα πρώτα στάδια του καρκίνου των ωοθηκών, καθώς και λήψη κυττάρων από καθορισμένες είτε πρωτοταγή ή /και μεταστατικές θέσεις καρκίνου των ωοθηκών. Έτσι, αυτά τα κύτταρα είναι ιδιαίτερα κατάλληλο για τις έρευνες με στόχο την κατανόηση του καρκίνου των ωοθηκών

Παράθεση:. Sueblinvong Τ, Ghebre R, Iizuka Υ, Pambuccian SE, Isaksson Vogel R, Skubitz APN, et al. (2012) Ίδρυση, Χαρακτηρισμός και μεταγενέστεροι εφαρμογή του πρωτογενούς καρκίνου των ωοθηκών κύτταρα που προέρχονται από συμπαγείς όγκους. PLoS ONE 7 (11): e50519. doi: 10.1371 /journal.pone.0050519

Επιμέλεια: Elad Katz, του Πανεπιστημίου του Εδιμβούργου, Ηνωμένο Βασίλειο

Ελήφθη: 23 Απρ, 2012? Αποδεκτές: 22η Οκτωβρίου του 2012? Δημοσιεύθηκε: 30 Νοεμβρίου, 2012

Copyright: © 2012 Sueblinvong et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από την OC093424 Υπουργείο άμυνας καρκίνου των ωοθηκών Πρόγραμμα Έρευνας (OCRP) σε MB και APNS και από τον Randy ξυριστική μηχανή Cancer Research και το κοινοτικό Ταμείο για την ΜΒ. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν ανταγωνιστικά συμφέροντα υπάρχουν

Εισαγωγή

μορφολογικές και μοριακές γενετικές μελέτες έχουν αποδείξει ότι ο καρκίνος των ωοθηκών είναι μια ετερογενής νόσος που περιλαμβάνει έναν αριθμό διαφορετικών histotypes συμπεριλαμβανομένων των υψηλής ποιότητας ορώδες καρκίνωμα [1]. Η τρέχουσα αγωγή της χημειοθεραπείας για τον καρκίνο των ωοθηκών αποτελείται από ταξάνης και θεραπεία με βάση την πλατίνα. Ενώ & gt? 80% των ασθενών με νόσο πρώιμο στάδιο δείχνουν μια επιβίωση 5 έτος, η θεραπεία έχει περιορισμένη αποτελεσματικότητα έναντι επιθηλιακού καρκίνου των ωοθηκών σε προχωρημένο στάδιο (EOC). Η έλλειψη αποτελεσματικών διαγνωστικά και προγνωστικά εργαλεία για τον καρκίνο των ωοθηκών καθιστά αυτό το συγκεκριμένο καρκίνο εξαιρετικά δύσκολο να διαχειριστεί και οι περισσότεροι ασθενείς αναπτύσσουν ανθεκτικά χημειοθεραπεία όγκων και υποτροπή [2], [3], [4], [5], [6]. Μεγάλο μέρος της σημερινές μας γνώσεις του ανθρώπινου καρκίνου των ωοθηκών έχει αποκαλυφθεί μέσω της χρήσης των καθιερωμένων αθανατοποιημένων κυττάρων των ωοθηκών επιφάνεια επιθηλιακών (IOSEs), κυτταρικές σειρές καρκίνου των ωοθηκών και πρωτογενή καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών που προέρχεται από ασκητικό ρευστά [7], [8]. Η χρήση των IOSEs και κυτταρικών σειρών καρκίνου των ωοθηκών έχει προφανή πλεονεκτήματα συμπεριλαμβανομένης της υψηλής πολλαπλασιαστική τους ικανότητα και να παραταθεί η διάρκεια ζωής. Δυστυχώς, τόσο οι γενετικές και φαινοτυπικές μεταβολές που συνδέονται με την εκτεταμένη

in vitro

περάσματα και την ετερογένεια που προκύπτει από πρωτογενή καρκίνο κυττάρων των ωοθηκών από ασκητικά υγρά αυτά ένα λιγότερο από το ιδανικό μοντέλο για μελέτες του καρκίνου των ωοθηκών κάνει. Έτσι, η ικανότητα για την απομόνωση και καλλιέργεια φρέσκο ​​EOC κύτταρα από στερεά δείγματα καρκίνου των ωοθηκών παρέχει ένα μοναδικό πρότυπο για μελέτες νέων θεραπευτικών προσεγγίσεων για τη θεραπεία του καρκίνου των ωοθηκών.

Η

Διάφορες μέθοδοι έχουν περιγραφεί για την κύρια καλλιέργεια του είτε ανθρώπινη επιφάνεια των ωοθηκών επιθηλιακής (ΟΣΕ) κύτταρα από φυσιολογικές ωοθήκες ή EOC κύτταρα που απομονώνονται από το ρευστό ασκίτη των ασθενών με καρκίνο [9], [10], [11], [12], [13], [14], [15] . Ωστόσο, η αύξηση των κακοηθών κυττάρων από συμπαγείς όγκους υπήρξε προβληματική λόγω των στρωματικών κυττάρων ή των ινοβλαστών υπερανάπτυξη, λίγο έως καθόλου ανάπτυξη κακοηθών κυττάρων, ή πρόωρη απώλεια της πολλαπλασιαστική ικανότητα σε καλλιέργεια. Ενώ υπάρχουν αρκετές επιλογές για τη δημιουργία ενός κυττάρου εναιωρήματα από συμπαγείς όγκους μέσω μηχανικών μέσων ή ενζυματικής διάσπασης, κανείς δεν έχει αντιμετωπιστεί ποια τεχνική αποδίδει την πιο αξιόπιστη αποτέλεσμα [16], [17], [18]. Σε αυτή τη μελέτη, περιγράφουμε για πρώτη φορά μια συστηματική σύγκριση μεταξύ μηχανική διάσπαση και ενζυματική πέψη είτε με κολλαγονάση Α, υαλουρονιδάση ή δισπάση II για διάφορα χρονικό διάστημα από 30 έως 120 λεπτά για την απομόνωση των κυττάρων ΕΓΚ από συμπαγείς όγκους καρκίνου των ωοθηκών. Αναφέρουμε ότι η ενζυματική πέψη για 30 λεπτά με τα αποτελέσματα δισπάση II στην πιο αποτελεσματική ανάκτηση των βιώσιμων ΕΓΚ κύτταρα και ότι η παρατεταμένη έκθεση σε ενζυματική πέψη συνοδεύεται με σημαντική μείωση στην ανάκτηση των βιώσιμων κυττάρων.

Οι καλλιέργειες κυττάρων ΕΓΚ είναι ινοβλαστών-free, όπως εκτιμήθηκαν από EpCAM χρώσης με το MOC-31 και Ber-EP4 mAbs, και αυξήθηκε εκθετικά μέχρι και έξι διόδους πριν senesced και πέθανε. Σημαντικά, οι καλλιέργειες EOC διατηρούνται κάποια από τα φαινοτυπικά χαρακτηριστικά των όγκων από το οποίο προέρχονται, συμπεριλαμβανομένης της ικανότητας να σχηματίσουν σφαιροειδή δομές σαν σε υποστρώματα άγαρ. Τέλος, οι καλλιέργειες EOC ήταν κατάλληλα για τους μεταγενέστερους εφαρμογές όπως ήταν ιδιαίτερα ευαίσθητοι σε γενετική χειραγώγηση μέσω λεντοικής μόλυνσης και χρήσιμα σε δοκιμές διαλογής φαρμάκων.

Α. Μέση ± τυπική απόκλιση του συνολικού αριθμού των βιώσιμων κυττάρων ανά 500 mg ιστού που προέρχεται από κάθε συνθήκη αμέσως μετά τη θεραπεία (δηλ καλλιέργειες προ-προσκόλληση) και στη συνέχεια και πάλι μετά από 7-10 ημέρες πρόσφυσης σε καλλιέργεια ιστού (δηλ προσκολλημένες καλλιέργειες). B. Ποσοστό της κυτταρικής βιωσιμότητας για κάθε κατάσταση που εκφράζεται ως ποσοστό των καλλιεργειών προ-προσκόλληση σε προσκολλημένες καλλιέργειες. Ελαχίστου τετραγώνου μέσα (προσαρμοσμένο για αντίγραφα εντός του ασθενούς) από οκτώ ανεξάρτητα πειράματα και τα διαστήματα εμπιστοσύνης 95% παρουσιάζονται.

Η

Υλικά και Μέθοδοι

Υλικά