Αφηρημένο

Ανθρώπινο φωσφατιδυλαιθανολαμίνη-δεσμευτική πρωτεΐνη 4 (hPEBP4) είναι ένα νέο αντι-απόπτωση μόριο που συνδέεται με την αντίσταση των όγκων σε αποπτωτικό παράγοντες. Εδώ προσπαθήσαμε να διερευνήσουμε το ρόλο της hPEBP4 στην ραδιοαντοχή του καρκίνου του ορθού. ανάλυση Η ανοσοϊστοχημεία έδειξε hPEBP4 εκφράστηκε σε 27/33 του ορθού δειγμάτων καρκίνου, αλλά μόνο σε 2/33 των γειτονικών φυσιολογικού βλεννογόνου. Αποσιώπηση της έκφρασης του hPEBP4 με siRNA μείωσε σημαντικά την κλωνογόνο επιβίωση και ενίσχυσε την απόπτωση των καρκινικών κυττάρων του ορθού επί ακτινοβολία. Αντ ‘αυτού, αναγκάζεται υπερέκφραση hPEBP4 προώθησε την επιβίωσή του και μείωσε την απόπτωση. κηλίδα Western έδειξε hPEBP4 θα μπορούσε να αυξήσει την ενεργοποίηση Akt προκαλείται από την ακτινοβολία, για την οποία απαιτείται αντιδραστικό δείγμα οξυγόνου (ROS). Η επίδραση ραδιοαντοχή της hPEBP4 αντιστράφηκε μετά δόθηκε LY-294002 για να αναστέλλουν την ενεργοποίηση Akt ή αντιοξειδωτικό για την κατάργηση της παραγωγής ROS. Επιβεβαιώσαμε επίσης ότι η επίδραση του hPEBP4 in vivo με γυμνά ποντίκια. Έτσι συμπεράναμε ότι hPEBP4, ειδικά που εκφράζεται σε καρκινικά κύτταρα του ορθού, συνδέεται με ραδιοαντοχή του καρκίνου του ορθού, υπονοώντας ότι η διαμόρφωση του hPEBP4 μπορεί να έχει σημαντικές θεραπευτικές συνέπειες στην ακτινοθεραπεία του καρκίνου του ορθού

Παράθεση:. Qiu J, Yang G , Lin Α, Shen Ζ, Wang D, Ding L (2014) Ανθρώπινα φωσφατιδυλαιθανολαμίνη-Binding Protein 4 Προώθησε την ραδιοαντοχή Ανθρωπίνων καρκίνου του ορθού με την ενεργοποίηση της Akt σε ROS-εξαρτημένων Way. PLoS ONE 9 (3): e90062. doi: 10.1371 /journal.pone.0090062

Επιμέλεια: Salvatore V. Pizzo, του Πανεπιστημίου Duke Medical Center, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 6 του Αυγούστου 2013? Αποδεκτές: 28 Ιαν 2014? Δημοσιεύθηκε: 3 Μαρτίου 2014

Copyright: © 2014 Qiu et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε οικονομικά από το Εθνικό Ταμείο Φυσικών Επιστημών της Κίνας (αριθμός έργου 81.101.876), το Ταμείο Ιατροφαρμακευτικής Περίθαλψης Ερευνών του Υπουργείου Υγείας Zhejiang Provincial (αριθμός έργου 2011RCA035), και το Ταμείο Φυσικών Επιστημών της επαρχίας Zhejiang (αριθμός έργου Y2110782) και του Ιατρικού ταμείο έρευνας του τμήματος τεχνολογίας της επιστήμης της επαρχίας Zhejiang (αριθμός έργου 2012C33SA100045). Οι παραπάνω χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

εισαγωγή

καρκίνος του παχέος εντέρου είναι ένας από τους πιο επικρατούν καρκίνων σε όλο τον κόσμο. Εκτιμάται ότι υπάρχουν περίπου 1,2 εκατομμύρια άνδρες και γυναίκες που ζουν στις Ηνωμένες Πολιτείες με μια προηγούμενη διάγνωση του καρκίνου του παχέος εντέρου, και ένα επιπλέον 143.460 θα διαγνωστεί το 2013 [1]. Μεταξύ αυτών των ασθενών, οι τοπικές προχωρημένο καρκίνο του ορθού λογαριασμούς για ένα μεγάλο μέρος τους. Σήμερα η θεραπεία προεγχειρητική chemoradiation έχει γίνει ένα αναπόσπαστο συστατικό στη θεραπεία για τα τοπικά προχωρημένο καρκίνο του ορθού, η οποία πιστεύεται ότι είναι σε θέση να μειώσει τον κίνδυνο της τοπικής υποτροπής και αυξάνουν την πιθανότητα σφιγκτήρα συντηρητικών χειρουργική [2]. Δυστυχώς, δεν είναι όλοι οι καρκίνοι του ορθού είναι ευαίσθητα στο ακτινοθεραπεία. Για παράδειγμα, εκτιμάται ότι μόνο περίπου 20% των ασθενών επιτευχθεί πλήρης παθολογική αποκρίσεις σε προεγχειρητική ακτινοθεραπεία [3]. Έτσι, η εμβάθυνση της κατανόησης της radioresistace μπορεί να μας βοηθήσει να επιλέξετε ασθενείς ακτινοευαίσθητα καρκίνο του ορθού για να λάβετε προεγχειρητική ακτινοθεραπεία, αποφύγετε την καθυστέρηση της χειρουργικής επέμβασης για τους ασθενείς ραδιοαντοχή και ακόμη ξεπεραστεί ραδιοαντοχή με νέες ακτινοευαίσθητα στρατηγικές.

hPEBP4 είναι ένα νέο μέλος της οικογένεια PEBP [4]. Υπερεκφράζουν σε ένα ευρύ φάσμα συμπαγών όγκων συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του μαστού, καρκίνου των ωοθηκών και του καρκίνου του προστάτη, hPEBP4 έχει αποδειχθεί ότι αναστέλλει την απόπτωση των καρκινικών κυττάρων με τη ρύθμιση της αποδόμησης των αποπτωτικών μορίων, όπως Bcl-2 /Bcl-Χ και Caspase-3 [ ,,,0],5] – [8]. Θεωρώντας ότι η διαφυγή της απόπτωσης είναι ένα από τα χαρακτηριστικά των ανθρώπινων καρκίνων [9] και ακτινοθεραπεία επαγόμενη κυτταροτοξικότητα διαμεσολαβείται, σε μεγάλο βαθμό, από την επαγωγή της απόπτωσης σε καρκινικά κύτταρα [10], [11], μπορούμε εικάζουν ότι hPEBP4 δύναται συμμετέχουν στην αντίσταση του καρκίνου του ορθού σε προεγχειρητική ακτινοθεραπεία. Στην πραγματικότητα, η πρόσφατη μελέτη μας έχει δείξει hPEBP4 ήταν ανεξάρτητη προγνωστική βιοδείκτη για την αντιμετώπιση του καρκίνου του ορθού σε προεγχειρητική ακτινοθεραπεία, γεγονός που υποδηλώνει ότι έως και ρύθμισης hPEBP4 θα μπορούσε να είναι ένας πιθανός μηχανισμός με τον οποίο το ορθό τα καρκινικά κύτταρα να αποφύγει τις καταστροφικές επιδράσεις της ακτινοβολίας [12]. Ωστόσο, δεν υπάρχει ακόμη άμεση πειραματική απόδειξη για το ρόλο της hPEBP4 στην redioresistance του καρκίνου του ορθού μέχρι στιγμής.

Στην παρούσα μελέτη, εξετάσαμε την κατάσταση έκφρασης του hPEBP4 στην ορθού δείγματα καρκίνου και τον παρακείμενο φυσιολογικό βλεννογόνο καθώς και με ανοσοϊστοχημεία διερευνηθεί αν hPEBP4 έχει ένα ρόλο στην ραδιοαντοχή ανθρώπινων καρκινικών κυττάρων του ορθού. Τα στοιχεία μας δείχνουν hPEBP4 ήταν σχετικά εκφράζεται σε ορθού καρκινικούς ιστούς και συμμετείχε την radioresisitance του καρκίνου του ορθού, η οποία ήταν Akt και ROS εξαρτάται. Η μελέτη μας υποδηλώνει ότι η φαρμακολογική ή γενετική διαφοροποίηση των hPEBP4 μπορεί να έχει σημαντικές θεραπευτικές συνέπειες για τη βελτίωση της θεραπευτική επίδραση της προεγχειρητικής ακτινοθεραπείας για τον καρκίνο του ορθού.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθική Δήλωση

Όλα τα ζώα έχουν εκτραφεί με χρήση πρωτοκόλλων που είχε εγκριθεί από την Επιτροπή Φροντίδας ζώων και χρήση Νοσοκομείο Τρίτο Λαϊκού της Hangzhou, Κίνα, σύμφωνα με τις σχετικές εθνικές και διεθνείς κατευθυντήριες γραμμές και την Επιτροπή Φροντίδας και Χρήσης ζώων επίσης εγκρίνει τη μελέτη για να πραγματοποιήσει. Γραπτή συγκατάθεση από τον δότη λήφθηκε για τη χρήση ανθρώπινων ιστών σε αυτή την έρευνα, η οποία επίσης εγκρίθηκε από την Επιτροπή Ηθικής του νοσοκομείου του Τρίτου Λαϊκού της Hangzhou.

Αντιδραστήρια και Cell Culture

Lipofectamine αντιδραστήριο και DCF-DA ήταν από την Invitrogen (Carlsbad, CA). Αντισώματα ειδικά για φωσφο-Akt (Ser473) και ολική Akt ήταν από τη Cell Signaling Technology (Beverly, ΜΑ). Τα 3-κινάσης ΡΙ, LY-294002 ελήφθη από την Calbiochem. Ν-ακετυλο-Lcysteine ​​(NAC) αντιοξειδωτικό (Sigma) χρησιμοποιήθηκε για να αναστέλλουν την παραγωγή ROS. Όλα τα ανθρώπινα ορθοκολικού καρκίνου κύτταρα αγοράστηκαν από την American Type Culture Collection (Manassas, VA) και διατηρήθηκαν σε μέσο DMEM (Gibco, USA) συμπληρωμένο με 10% (ν /ν) ορό εμβρύου μόσχου, 4,5 g /λίτρο D-γλυκόζη, ασήμαντος αμινοξέα (100 μΜ το καθένα), 100 μονάδες /ml πενικιλίνη, 100 μg /ml στρεπτομυκίνη, και 2 mM γλουταμίνη στους 37 ° C σε ατμόσφαιρα 5% CO2.

Ανοσοϊστοχημεία Ανάλυση hPEBP4 Έκφραση σε Ανθρώπινα ορθού Καρκίνος

Όλα τα παθολογικά επιβεβαιωμένο ανθρώπινο ορθού και των παρακείμενων ιστών καρκίνου ελήφθησαν από ριζικά εκτομή δείγματα όγκου με ενημερωμένη συγκατάθεση από τον κάθε ασθενή στο Τμήμα παχέος Χειρουργικής, Νοσοκομείο Τρίτον Λαϊκού της Hangzhou, Κίνα. Τα δείγματα σταθεροποιήθηκαν με φορμαλίνη, ενσωματωμένα σε παραφίνη, και ανοσοχρώση με αντι-αντίσωμα hPEBP4 [4] χρησιμοποιώντας αβιδίνης-βιοτίνης υπεροξειδάσης μέθοδο (Cybrdi, Xi’an, Shanxi, Κίνα). Η ανοσοαντιδραστικότητα αξιολογήθηκε με βάση το ποσοστό των θετικών-βαμμένων κυττάρων. Η ένταση ορίζεται ως 0 όταν δεν καρκινικά κύτταρα κηλίδα (αρνητικό), 1 όταν το 10-20% των κυττάρων λεκέ (ασθενής χρώση), 2 όταν 20-50% των κυττάρων λεκέ (μέτρια χρώση), και 3 όταν περισσότερο από το 50% κυττάρων λεκέ (ισχυρή χρώση). Για στατιστικές αναλύσεις, οι ιστοί πετυχαίνοντας 2 και 3 συνενώθηκαν ως οριστική θετική και ιστούς βαθμολόγησης 0 και 1 χαρακτηρίστηκαν ως αρνητικά.

διαμόλυνσης κυττάρων

Ο φορέας έκφρασης hPEBP4 κατασκευάστηκαν όπως περιγράφεται προηγουμένως [4] διαμολύνθηκε σε κύτταρα SW480 χρησιμοποιώντας αντιδραστήριο Lipofectamine με pcDNA3.1 /Myc-His (-) Β ως ένα ψευδο ελέγχου. 48 ώρες μετά την επιμόλυνση, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε διαλογή υπό 0,8 mg /ml G418 (Merck, Darmstadt, Γερμανία) για τρεις εβδομάδες.

Ατομικά G418-ανθεκτικές αποικίες υποκλωνοποιήθηκαν ως SW480 /hPEBP4 και SW480 /Mock. Η έκφραση hPEBP4 προσδιορίστηκε με RT-PCR και ανάλυση κηλίδας Western.

hPEBP4 Παρεμβολή RNA Δοκιμασία

Για σταθερή αποσιώπηση της έκφρασης hPEBP4 στον ανθρώπινο καρκίνο του ορθού HRT-18 κύτταρα, τα κύτταρα επιμολύνθηκαν με ο hPEBP4-siRNA ή Neo πλασμιδίου χρησιμοποιώντας αντιδραστήριο Lipofectamine όπως περιγράφηκε προηγουμένως [5]. 48 ώρες μετά την επιμόλυνση, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε διαλογή υπό 0,6 mg /ml G418 για 25 ημέρες. Μεμονωμένα ανθεκτικές στο G418 αποικίες υποκλωνοποιήθηκαν ως HRT-18 /Mock και HRT-18 /hPEBP4-siRNA, και αποσιώπηση αποτέλεσμα hPEBP4 προσδιορίστηκε με RT-PCR και ανάλυση κηλίδας Western.

RT-PCR Για hPEBP4

RNA συλλέχθηκε με ΤΚΙζοΙ (Invitrogen) και cDNA συνετέθη με 1 μg του ολικού RNA χρησιμοποιώντας σύνθεση πρώτου κλώνου cDNA kit-ReverTra Ace-α (Toyobo) στους 42 και 99 ° C για 20 και 5 λεπτά, αντιστοίχως. αντίδραση PCR πραγματοποιήθηκε σε έναν όγκο αντίδρασης 10 μΐ το οποίο αποτελείτο από ένα αρχικό στάδιο μετουσίωσης στους 95 ° C για 30 δευτερόλεπτα και μετά την ενίσχυση από 30 κύκλους στους 95 ° C για 5 δευτερόλεπτα, 56 ° C για 30 sec. Εναρκτήρες ειδικοί για hPEBP4 ήταν 5′-GGGTTGGACAATGAGGCTG-3 ‘(νοηματικό) και 5′-TGTGCTTGGGCTCGCTGGC-3’ (antisense).

Προσδιορισμός απόπτωσης

Τα κύτταρα πλύθηκαν, επαναιωρήθηκαν σε ρυθμιστικό διάλυμα χρώσης , και χρωματίστηκαν με αννεξίνη V /PI απόπτωση (Invitrogen) ή R123 (R-302, Molecular Probes) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Βιτρώ κύτταρα αναλύθηκαν με φθορισμό ενεργοποιούμενη διαλογή κυττάρων (FACScalibur, Becton Dickinson, Mountain View, CA) .Experiments επαναλήφθηκαν τρεις φορές.

Western Blot Ανάλυση

BCA Protein σετ αντιδραστηρίων προσδιορισμού ( Pierce) χρησιμοποιήθηκε για τη μέτρηση συγκέντρωσης πρωτεΐνης. Δείγματα που περιέχουν ίσες ποσότητες πρωτεΐνης διαχωρίστηκαν με 12% SDS-PAGE και μεταφέρθηκαν σε μεμβράνες νιτροκυτταρίνης Protran. Τα στυπώματα ανιχνεύθηκαν με τα υποδεικνυόμενα αντισώματα με συζευγμένο με υπεροξειδάση αντισώματα κατάλληλα χρένο ως δευτερεύοντα αντισώματα (Cell Signaling Technology). SuperSignal West Femto μέγιστη ευαισθησία υπόστρωμα (Pierce) χρησιμοποιήθηκε για την οπτικοποίηση χημειοφωταύγειας πρωτεϊνών [5].

Δοκιμασία Επιβίωσης Κλωνογόνος

Εκθετικά αναπτυσσόμενα ορθού καρκινικών κυττάρων σε καλλιέργεια μονοστοιβάδας είχαν ακτινοβοληθεί σε 100-mm Petri πιάτα χρησιμοποιώντας ένα 250-kVp ακτίνων Χ (0.61 Gy /min) με ενιαία έκθεση σε ακτινοβολία. Μετά από έκθεση σε ιοντίζουσα ακτινοβολία, τα κύτταρα συλλέχθηκαν για ανάλυση κλωνογόνο επιβίωση. Επιβίωση μετά την έκθεση σε ακτινοβολία ορίστηκε ως η ικανότητα των κυττάρων να διατηρήσουν κλωνογόνο ικανότητα τους και να σχηματίζουν αποικίες. Εν συντομία, μετά την έκθεση σε ακτινοβολία, τα κύτταρα θρυψινοποιήθηκαν, μετρήθηκαν και σπάρθηκε για σχηματισμό αποικιών σε 100-mm τρυβλία Petri σε 500-1000 κύτταρα /τρυβλίο. Μετά από επώαση διαστήματα των 21 ημερών, οι αποικίες κηλιδώνονται με κρύσταλλο ιώδες και μετρώνται με το χέρι. Αποικίες που αποτελούνται από περισσότερα από 50 κύτταρα βαθμολογήθηκαν, και τρία αντίγραφα τρυβλία μετρήθηκαν για κάθε επεξεργασία. Τα πειράματα διεξήχθησαν τουλάχιστον 3 φορές για όλα τα σημεία δεδομένων. Τα πειραματικά αποτελέσματα διορθώθηκαν για τις επιπτώσεις που προκαλούνται από την μη ακτινοβολημένα ελέγχου. Τα πειράματα επαναλήφθηκαν τρεις φορές.

Caspase Activation Assay

HRT /Mock και HRT /κυττάρων siRNA απλώθηκαν σε πλάκες 96 φρεατίων (10,000 κύτταρα ανά φρεάτιο) και ακτινοβολημένα (8 Gy). Μετά από 24 ώρες επώασης, η ενεργοποίηση των κυτταρικών κασπασών 3/7 μετρήθηκε με fluorescencebased δοκιμασία (Αρο-ΕΝΑ Ομογενή Caspase-3/7 Assay? Promega). Έξι φρεάτια ανά συνθήκη θεραπείας χρησιμοποιήθηκαν για να ληφθεί μέσος όρος σημάτων φθορισμού και ομαλοποιήθηκε ως προς ψευδο-κατεργασμένα κύτταρα HRT ελέγχου.

Μέτρηση της ROS

Για την ανάλυση περιεχομένου ROS, ακατέργαστα και IR-αγωγή (8 Gy ) προσκολλημένα ορθού καρκινικά κύτταρα πρώτα δοκιμάστηκαν γιά βιωσιμότητα με αποκλεισμό trypan blue χρωστικής και επωάζονται με 4 μΜ DCF-DA για 45 λεπτά στους 37 ° C.Then τα κύτταρα αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής όπως περιγράφηκε προηγουμένως [13]. Τα πειράματα διεξήχθησαν τουλάχιστον 3 φορές για όλα τα σημεία δεδομένων.

In vivo μελέτες ακτινοβολία

Άντρας αθυμικών ηυ /ηυ (4 εβδομάδων) αγοράστηκαν από το Πειραματικό Κέντρο Ζώων της Σαγκάης και τέθηκαν χρησιμοποιώντας πρωτόκολλα που είχε εγκριθεί από την Επιτροπή Φροντίδας και Χρήσης Θεσμικών ζώων. 48 ποντίκια χωρίστηκαν τυχαία σε τέσσερις ομάδες. Ποντικοί έλαβαν υποδόρια ένεση με 2 × 10

6 HRT-18 /Mock και HRT-18 /siRNA κυττάρων στο δεξί πέλμα του ποδιού αντίστοιχα. Όταν οι όγκοι ήταν περίπου 0,5-0,8 cm στη μακρύτερη διάμετρο, τα ποντίκια ακτινοβολήθηκαν με 2 Gy πηγή Cs-ακτινοβολίας κάθε τρεις ημέρες για τρεις φορές όπως περιγράφηκε προηγουμένως [14]. Οι όγκοι παρακολουθήθηκαν και μετρήθηκαν με τον τύπο V = (a × b

2) /2 κάθε τρεις ημέρες. Παρατήρηση έκλεισε μία φορά ο μέσος όγκος του όγκου της κάθε ομάδας έφτασε περίπου 2,0 εκατοστά

3. Όλα τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε εκτομή 33 ημέρες μετά την έκθεση σε ακτινοβολία και όγκου καμπύλη μέγεθος χρόνου, καθώς και την απόπτωση των καρκινικών ιστών αναλύθηκε.

TUNEL Δοκιμασία

Οι όγκοι που ελήφθη σταθεροποιήθηκαν σε 10% φορμαλίνη και εγκλείστηκαν σε παραφίνη μετά ποντίκια αποκόπηκαν. Μετά αποπαραφίνωση, τα δείγματα όγκων απογυμνώθηκαν πρωτεΐνης με επώαση με 20 mg /ml πρωτεϊνάση Κ (Sigma Chemical) για 15 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. χρώση TUNEL εκτελέστηκε χρησιμοποιώντας ένα απόπτωση σε κιτ ανίχνευσης situ (Roche) σύμφωνα με τα πρωτόκολλα του κατασκευαστή. Οι πυρήνες βάφτηκαν με 4 ‘, 6-διαμιδινο-2-φαινυλινδόλης (DAPI? Μπλε φθορισμός), και TUNEL-θετικά κύτταρα έγιναν ορατά με πράσινο φθορισμό. Περισσότερα από 200 ϋΑΡΙ-θετικά κύτταρα εξετάστηκαν σε 5 τυχαία πεδία κάθε ομάδα, και TUNEL θετικά κύτταρα μετρήθηκαν για να υπολογιστεί η επί τόπου απόπτωση.

Στατιστική Ανάλυση

Τα δεδομένα εκφράζονται ως μέση τιμές ± SD. Η στατιστική σημασία των διαφορών μεταξύ των ομάδων ελέγχθηκε με δοκιμή Student ή μονόδρομη ANOVA. Διαφορά της έντασης έκφρασης hPEBP4 μεταξύ ανθρώπινου ορθού καρκινικούς ιστούς και των παρακείμενων κανονική πρωκτική ιστούς αναλύθηκε με τη χρήση της δοκιμής chi-square Pearson. Μια ρ-τιμή μικρότερη από 0.05 θεωρήθηκε σημαντική.

Αποτελέσματα

αυξημένη έκφραση της hPEBP4 στα ανθρώπινα ορθού

Για να διευκρινιστεί η μορφή έκφρασης του hPEBP4, εξετάσαμε πρώτα η έκφραση της hPEBP4 τόσο σε ανθρώπινο ορθού καρκινικούς ιστούς και φυσιολογικά δίπλα του ορθού ιστών με εκτομή δείγματα μετά από ριζική χειρουργική επέμβαση, χρησιμοποιώντας ανοσοϊστοχημική ανάλυση. έκφραση hPEBP4 ήταν παρούσα σε ένα πολύ υψηλό ποσοστό του ορθού ιστού καρκίνου (78,8%, 26/33), σε σύγκριση με τα πολύ χαμηλά ποσοστά στα συμφωνημένα κανονική του ορθού ιστών (6,1%, 2/33? p & lt? 0.001, Πίνακας 1, Σχήμα 1Α , Β). Τα δεδομένα αποδεικνύουν την προτιμησιακή πρότυπο έκφρασης του hPEBP4 σε ανθρώπινους καρκινικούς ιστούς του ορθού. Για να μελετηθεί η λειτουργία του hPEBP4 σε απόκριση προς ακτινοβολία του ανθρώπινου καρκίνου του ορθού, εξετάστηκαν η έκφραση hPEBP4 σε δύο παχέος μοντέλα των καρκινικών κυττάρων, δείχνοντας hPEBP4 έντονα εκφράζεται σε HRT-18 κύτταρα, αλλά πολύ μέτρια εκφράζονται σε κύτταρα SW480 (Εικ 1C) .

Α, Β

έκφραση hPEBP4 στον ανθρώπινο καρκίνο του ορθού και των παρακείμενων κανονική του ορθού ιστών με ανοσοϊστοχημεία (× 200)?

C

έκφραση hPEBP4 του ανθρώπινου ορθού καρκινικές κυτταρικές σειρές που μετράται με κηλίδα western.

Η

hPEBP4 Προωθείται Κλωνογόνος επιβίωση των κυττάρων του καρκίνου του ορθού σε απάντηση στην ακτινοβολία

Για να εξεταστεί ο ρόλος της hPEBP4 στην ραδιοαντοχή του καρκίνου του ορθού, ιδρύσαμε το πρώτο σταθερό επιμολύνσεις να χτυπήσει κάτω την έκφραση hPEBP4 και υπερεκφράζουν hPEBP4 στην HRT-18 και SW480 κύτταρα αντίστοιχα. Η αποτελεσματικότητα της υπερέκφραση ή τη σιωπή του hPEBP4 επιβεβαιώθηκε με RT-PCR (Εικόνα 2Α). Στη συνέχεια πραγματοποιήσαμε προσδιορισμούς σχηματισμού αποικίας στις δύο κυτταρικές γραμμές για να εκτιμηθεί η επίδραση της hPEBP4 στην επιβίωση των κυττάρων μετά την ακτινοβολία. Βρήκαμε ότι η κλωνογονική επιβίωση του HRT-18 κύτταρα σε απόκριση της ακτινοβολίας ήταν σημαντικά μειωμένη μετά hPEBP4 σίγησε, ενώ η υπερέκφραση του hPEBP4 ενίσχυσε όπως φαίνεται στο SW480 κύτταρα (Σχήμα 2Β, C). Για να επιβεβαιώσετε το αποτέλεσμα ραδιοαντοχή της hPEBP4, επαναλάβαμε παραπάνω πειράματα με ΗΤ-29 και κύτταρα Lovo ως γονίδιο νοκ ντάουν και τα μοντέλα υπερέκφραση αντίστοιχα (Σχήμα 2D). Βρήκαμε ότι η κλωνογονική επιβίωση των κυττάρων ΗΤ-29 ήταν σημαντικά μειωμένη μετά hPEBP4 σίγησε, ενώ η υπερέκφραση του hPEBP4 ενίσχυσε την επιβίωση των κυττάρων Lovo μετά την ακτινοβολία (Σχήμα 2Ε).

Α,

RT-PCR για να επιβεβαιωθεί η σταθερή υπερέκφραση της hPEBP4 στα κύτταρα SW480 και τη σιωπή των hPEBP4 στην HRT-18 κύτταρα?

B, C,

επίδραση της hPEBP4 στην clogenical επιβίωση της HRT-18 και SW480 κύτταρα?

D

, κηλίδος Western για να επιβεβαιωθεί η σταθερή σιωπή του hPEBP4 σε ΗΤ-29 κυττάρων και υπερέκφραση του hPEBP4 στα κύτταρα Lovo?

E

, αποτέλεσμα της hPEBP4 στην clogenical επιβίωση των ΗΤ-29 και κύτταρα Lovo από hPEBP4 σιωπή και υπερέκφραση αντίστοιχα. *, P & lt?. 0.05

Η

hPEBP4 συμμετείχε στην Αντίσταση της ακτινοβολίας που προκαλείται απόπτωση του ορθού καρκινικά κύτταρα

Όπως φαίνεται στο Σχ. 3

A

, SW480 /mock κύτταρα ήταν ευαίσθητα στην ακτινοβολία απόπτωση. Ωστόσο, τα κύτταρα SW480 /hPEBP4 υπερεκφράζουν hPEBP4 ήταν σχετικά ανθεκτικές στην επαγόμενη από ακτινοβολία απόπτωση, υποδεικνύοντας ότι hPEBP4 προσδίδει την αντίσταση ακτινοβολίας στον καρκίνο του ορθού. Κατά συνέπεια μετά hPEBP4 σίγησε, HRT-18 κύτταρα έγιναν πιο ευαίσθητα στην ακτινοβολία απόπτωση σε σχέση με τους HRT-18 mock κύτταρα /(Σχ. 3

B

). Η παραπάνω δράση των hPEBP4 επίσης επαναλήφθηκε σε άλλο knockdown και υπερέκφραση πείραμα με κύτταρα ΗΤ-29 και Lovo ως μοντέλα (Σχ. 3C), επιβεβαιώνοντας περαιτέρω την επίδραση της hPEBP4 επί αντίσταση ακτινοβολίας σε πρωκτικές καρκινικά κύτταρα. hPEBP4 ίσως αναστέλλουν προκαλούμενη από ακτινοβολία απόπτωση περιορίζοντας την ενεργοποίηση των caspase3 και 7 (Σχ. 3D). Λαμβάνοντας υπόψη ότι μετά την ενεργοποίηση της κασπάσης καταρράκτη, η ειδική πρωτεολυτική διάσπαση της πρωτεΐνης PARP είναι ένα σημαντικό γεγονός για την εμφάνιση της απόπτωσης, η επίδραση της hPEBP4 επί PARP εξετάστηκε μετά την ακτινοβόληση. Με hPEBP4 σίγασης που συνδυάζονται με ακτινοβολία, μια προφανής υποβάθμιση των 116 kDa PARP σε μια πρωτεΐνη κατακερματισμό 85 kDa παρατηρήθηκε σε σύγκριση με ακτινοβολία μόνο (Σχήμα 3 Ε), επιβεβαιώνοντας ότι hPEBP4 αναστέλλει την προκαλούμενη από ακτινοβολία απόπτωση ορθού καρκινικών κυττάρων, που αντιπροσωπεύεται από την ενεργοποίηση του κασπάσης-3 και πρωτεολυτική διάσπαση PARP

Α,

αντιπροσωπευτικό αποτέλεσμα του FCM για να δείξει την επίδραση της hPEBP4 στην ακτινοβολία επαγόμενη απόπτωση κυττάρων SW480.?

B,

αντιπροσωπευτικό αποτέλεσμα του FCM για να δείξει την επίδραση της hPEBP4 στην ακτινοβολία απόπτωση που επάγεται από HRT-18 κύτταρα? C, Ιστόγραμμα για να συνοψίσω το αποτέλεσμα της hPEBP4 στην ακτινοβολία που προκαλείται απόπτωση HRT-18 (hPEBP4-siRNA), ΗΤ-29 (hPEBP4-siRNA), SW480 (hPEBP4 υπερέκφραση) και τα κύτταρα Lovo (hPEBP4 υπερέκφραση)?

D,

επίδραση του hPEBP4 στην ακτινοβολία επαγόμενη capase3 /7 ενεργοποίηση του καρκίνου του ορθού HRT-18 κυττάρων?

E,

επίδραση του hPEBP4 στην ακτινοβολία επαγόμενη PARP cleavge του καρκίνου του ορθού HRT-18 κύτταρα. *, P & lt? 0,05? ** P & lt?. 0.01

Η

hPEBP4 μεσολάβηση Ακτινοβολία-αντίσταση των κυττάρων του καρκίνου του ορθού Ήταν Akt και ROS Εξαρτημένων

Akt ενεργοποίησης έχει αποδειχθεί ότι εμπλέκεται σε ραδιοαντοχή πολλών όγκων [15] – [17]. Έτσι διερευνηθεί ο ρόλος της Akt σε αντίσταση hPEBP4 μεσολάβηση στην ακτινοβολία απόπτωση. Πρώτον, εξετάσαμε την Akt ενεργοποίηση μετά την ακτινοβολία. Βρήκαμε Akt δραματικά ενεργοποιείται μετά την ακτινοβολία στην πρωκτική καρκινικά κύτταρα που προωθείται από hPEBP4 (Σχήμα 4Α). Για να καθοριστεί εάν hPEBP4 μεσολάβηση ραδιοαντοχή απαιτεί ενεργοποίηση Akt, μπορούμε στη συνέχεια προ-επωάστηκε ορθού καρκινικά κύτταρα με 20 μΜ LY-294002 για 1 ώρα, και υποβλήθηκε σε επεξεργασία των κυττάρων με ακτινοβολία. Βρήκαμε ότι LY-294002 αντιστραφεί σχεδόν το ανασταλτικό αποτέλεσμα hPEBP4 στην ακτινοβολία απόπτωση τόσο σε HRT-18 και τα κύτταρα SW480 (Εικ. 4Β). Δεδομένου ότι η παραγωγή των δραστικών ειδών οξυγόνου (ROS), έχει αναφερθεί ότι παίζει ένα σημαντικό ρόλο στην προκαλούμενη από ακτινοβολία απόπτωση των καρκινικών κυττάρων [18], αξιολογήθηκε επίσης το αποτέλεσμα της hPEBP4 στην κατάσταση ενδοκυτταρική οξειδοαναγωγική. Όπως φαίνεται στην ανάλυση κυτταρομετρίας ροής με DCFH-DA, hPEBP4 είχε μόνος καμία επίδραση στην κατάσταση ενδοκυτταρική οξειδοαναγωγική. Ωστόσο, η έκθεση σε ακτινοβολία προκάλεσε σημαντική αύξηση στη συσσώρευση ενδοκυτταρικών υπεροξειδίων σε πρωκτικές καρκινικά κύτταρα. Αλλά δεν υπήρξε καμία σημαντική αλλαγή για το επίπεδο της ενδοκυτταρικής υπεροξειδίων στο ορθού καρκινικά κύτταρα μετά hPEBP4 σίγησε ή υπερεκφράζεται (Fig4 C, D). Ακόμη και έτσι, η ταυτόχρονη χρήση του αντιοξειδωτικού NAC (προεπεξεργασία για 4 ώρες σε συγκέντρωση 5 mM) με ακτινοβολία σχεδόν ανέστρεψε την επίδραση της hPEBP4 στην ακτινοβολία απόπτωση που επάγεται από το ορθό καρκινικών κυττάρων (Σχήμα 4Ε). Είναι ενδιαφέρον ότι, η ταυτόχρονη χρήση της NAC και η ακτινοβολία ανέστειλε επίσης τη ρύθμιση της Akt από hPEBP4 (Σχήμα 4F), η οποία πρότεινε ότι ROS απαιτείται από hPEBP4 να διαμορφώσουν Akt στο πλαίσιο της ακτινοβολίας που προκαλείται από αποπτωτικά γεγονότα. Στο σύνολό τους, αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι hPEBP4 προώθησε την ραδιοαντοχή του ορθού καρκινικά κύτταρα δρώντας στη μέση των ROS και Akt μονοπατιού σήμα, το οποίο μπορεί να ενεργοποιήσει περαιτέρω κασπάσες να προκαλέσει απόπτωση.

Α,

κηλίδος Western για να δείξει την επίδραση της hPEBP4 στην ενεργοποίηση της Akt μετά από ακτινοβόληση με HRT-18 και SW480 κύτταρα καρκίνου του ορθού?

Β,

χρώσης αννεξίνη V /PI για να δείξει ενεργοποίηση Akt ήταν απαραίτητη στην επίδραση ραδιοαντοχή της hPEBP4 στο HTR-18 και SW480 κύτταρα από hPEBP4 σιωπή και υπερέκφραση αντίστοιχα?

C

, Εκπρόσωπος ROS χρώση αποτέλεσμα να δείξει hPEBP4 δεν είχε καμία επίδραση στην ενδοκυτταρική επίπεδο των ROS στην HRT-18 του ορθού καρκινικά κύτταρα?

D

, ιστόγραμμα για να δείξει hPEBP4 δεν είχε καμία επίδραση στην ενδοκυτταρική επίπεδο του ROS στα δύο κύτταρα HRT-18 και καρκίνο του ορθού SW480 από hPEBP4 σιωπή και υπερέκφραση αντίστοιχα?

E

, Αποτέλεσμα της αννεξίνης χρώση V /PI να δείξει ROS ήταν απαραίτητη στην επίδραση ραδιοαντοχή της hPEBP4? .

F

, Εκπρόσωπος αποτέλεσμα κηλίδα western για να δείξει ROS ήταν απαραίτητη στην ενεργοποίηση της Akt από hPEBP4 μετά την ακτινοβόληση με HRT-18 ως μοντέλο μελέτης *, P & lt?. 0.05

Η

hPEBP4 Συμμετέχει το ραδιοαντοχή του ορθού σε vivo

για να καθοριστεί εάν hPEBP4 μπορεί επίσης να μεσολαβούν την ραδιοαντοχή του καρκίνου του παχέος εντέρου σε βιολογικό περιβάλλον, εξετάσαμε την επίδραση της ακτινοβολίας μόνο, hPEBP4 σιγήσει μόνος, ή σε συνδυασμό για την αύξηση του υποδόριου HRT-18 ξενομοσχεύματος ορθού όγκων σε γυμνούς ποντικούς (Σχήμα 5Α). Από τη δέκατη πέμπτη ημέρα, ο όγκος του όγκου στην ομάδα συνδυασμένης θεραπείας ήταν σημαντικά χαμηλότερη από ότι στην ακτινοβολία μόνο ομάδα. καθυστέρηση ανάπτυξης μετά τη συνδυασμένη θεραπεία ήταν περισσότερο από εκείνη που προκαλείται από οποιαδήποτε από τις άλλες θεραπείες (Σχήμα 5Β). Αντιπροσωπευτικές εικόνες του όγκου του όγκου κατά τη δέκατη πέμπτη ημέρα που απεικονίζεται στο Σχ 5C. Παρατηρήσαμε επίσης την απόπτωση των καρκινικών κυττάρων in situ, η οποία ανέφερε ότι υπήρξε μια δραματική υψηλότερο δείκτη απόπτωσης σε HRT /ομάδα hPEBP4-RNAi από ό, τι στην HRT /Mock ομάδα (Σχήμα 5D, E).

Α,

διάγραμμα ροής των in vivo πειραμάτων?

B,

καμπύλη ανάπτυξης για την επίδραση της hPEBP4 επί του μεταμοσχευμένου ορθού όγκου ανθρώπινου in vivo μετά την ακτινοβόληση?

C,

αντιπροσωπευτική εικόνα του μεταμοσχευμένου ορθού όγκο στο πέλμα των γυμνών ποντικών για κάθε ομάδα 15 ημέρες μετά την ακτινοβολία?

D,

αντιπροσωπευτική εικόνα TUNEL για να δείξει την in situ apopatosis των μεταμοσχευμένων όγκων του ορθού, για κάθε ομάδα μετά τα ποντίκια θυσιάστηκαν?

E

, In vivo περίληψη απόπτωση μετά από ακτινοβόληση για κάθε ποντίκια gourp.

Η

Συζήτηση

Ο σκοπός της παρούσας μελέτης ήταν να προσδιοριστεί η επίδραση της hPEBP4 για το ραδιοευαισθησία του καρκίνου του παχέος εντέρου. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι hPEBP4 ενισχύει την ραδιοαντοχή του καρκίνου του παχέος εντέρου κύτταρα in vitro και in vivo, η οποία διαμεσολαβείται από την προώθηση της ROS-εξαρτώμενη ενεργοποίηση της Akt.

Η προεγχειρητική ακτινοθεραπεία έχει γίνει ένα τυπικό μέρος της συνολικής θεραπείας της τοπικά προχωρημένο καρκίνο του ορθού. Ωστόσο, πολλοί ασθενείς από καρκίνο του ορθού είναι στην πραγματικότητα ανθεκτικοί σε ακτινοθεραπεία λόγω ετερογένεια του καρκίνου του ορθού σε απόκριση ακτινοβολία. Για αυτούς τους ασθενείς, η προεγχειρητική ακτινοθεραπεία καθυστερεί όχι μόνο την άμεση επέμβαση της χειρουργικής επέμβασης αλλά επίσης μπορεί να προκαλέσει σοβαρές τοξικότητες, όπως διαρροή αναστομωτική, λοίμωξη περινέου τραύματος, και να επηρεάσουν αρνητικά τη λειτουργία σφιγκτήρα του πρωκτού μετά την επέμβαση σφιγκτήρα συντηρητικών [19], [20]. Έτσι εξερεύνηση του μηχανισμού της ραδιοαντοχή του καρκίνου του ορθού είναι πολύ σημαντικό να βελτιωθεί η αποτελεσματικότητα της θεραπείας. Έχει αποδειχθεί ότι η ακτινοβολία απόπτωση είναι ένας σημαντικός μηχανισμός της ραδιοευαισθησία σε ένα πάνελ καρκινικών κυττάρων, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του παχέος [21], [22]. Έτσι, ένας παράγοντας που είναι σε θέση να ενισχύσει την προκαλούμενη από ακτινοβολία απόπτωση των καρκινικών κυττάρων μπορεί να έχει τη δυνατότητα να αναπτυχθεί σε ένα παράγοντα ραδιοευαισθητοποίησης. hPEBP4 είναι ένα νέο μέλος της οικογένειας πρωτεϊνών phosphatidylethanolaminebinding, τα οποία προσδιορίζονται από ανθρώπινο μυελό των οστών στρωματικά κύτταρα [4]. Η υπερέκφραση του hPEBP4 σε μαστού, του προστάτη και των ωοθηκών έχει αποδειχθεί ότι αναστέλλει την απόπτωση των καρκινικών κυττάρων [4] – [8]. Έτσι το ερώτημα εάν hPEBP4 παίζουν ένα ρόλο στην απόκριση του καρκίνου του ορθού στην ακτινοθεραπεία. Στην πραγματικότητα σε μια πρόσφατη εργασία, απέδειξαν ότι η έκφραση hPEBP4 σε βιοψίας προεπεξεργασίας δείγμα ως ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας της απόκρισης σε προεγχειρητική ακτινοθεραπεία σε ασθενείς με καρκίνο του ορθού και βρήκαμε μια δραματική αύξηση της έκφρασης hPEBP4 σε πρωκτικές καρκινικούς ιστούς μετά προεγχειρητικά ακτινοθεραπεία comprared με το δείγμα βιοψίας κατά τη διάρκεια της κολονοσκόπησης εξέτασης, προτείνοντας ότι hPEBP4 θα μπορούσαν να παίξουν ένα ρόλο στην ραδιοαντοχή του καρκίνου του ορθού, αν και μια άμεση σύνδεση μεταξύ hPEBP4 και ραδιοαντοχή δεν είχε προβλεφθεί κατά τον χρόνο [12]. Τώρα με την παρούσα εργασία, χαρακτηρίσαμε τη σχετικά ειδική έκφραση της hPEBP4 στην ορθού σε σύγκριση με το γειτονικό φυσιολογικό ορθού ιστών και εφόσον η άμεση πειραματική απόδειξη για την επίδραση ραδιοαντοχή της hPEBP4 στον καρκίνο του ορθού. Έχουμε περιέγραψε επίσης το υποκείμενο μηχανισμό αυτής της επίδρασης, η οποία θα πρέπει να συγκλίνουν στο ROS-Akt μονοπατιού σήμα. Ωστόσο, εμείς δεν γνωρίζουμε την ακριβή εκδήλωση σήμα προς τα κάτω των ROS, μέσω του οποίου hPEBP4 ενεργοποιημένη Akt για την προώθηση της ραδιοαντοχή του ορθού σπουδαιότητας. Για ακτινοβολία χαμηλής γραμμικής μεταφοράς ενέργειας, που χρησιμοποιείται πιο συχνά στην ακτινοθεραπεία του καρκίνου του ορθού στις μέρες μας, το οξυγόνο και τα παράγωγά της, όπως οι ελεύθερες ρίζες και τα αντιδραστικά είδη οξυγόνου (ROS) είναι πολύ σημαντική για τη θανάτωση των κυττάρων όγκου και όχι μια άμεση επίθεση στο DNA από ραδιενεργές ακτίνες [23]. Αλλά ο ρόλος των ROS στην ακτινοθεραπεία του όγκου είναι λίγο περίπλοκο. Από τη μια πλευρά ROS είναι κρίσιμη μεσολαβητές της ιονίζουσας ακτινοβολίας που προκαλείται από την καταστροφή των κυττάρων, και σε ένα άλλο χέρι ROS μπορεί να παρέχει τα καρκινικά κύτταρα με πλεονέκτημα επιβίωσης πάνω από την κανονική τους ομολόγους υπό ακραίες συνθήκες. Στην πραγματικότητα ROS είναι σημαντικά ενδοκυτταρικά μόρια σηματοδοτήσεως που ρυθμίζουν την ισορροπία μεταξύ επιβίωσης και κυτταρικού θανάτου [18], [24] – [26]. ΑΚΤ φάνηκε να είναι ένας κρίσιμος παράγοντας στην ραδιοαντοχή με ρύθμιση της απόπτωσης, την κυτταρική ανάπτυξη, την πρόσληψη και χρήση της γλυκόζης, και την πρωτεϊνική σύνθεση όπως bcl-2 μέλη της οικογένειας, Caspase-3/9 FKHRL1, η απελευθέρωση του κυτοχρώματος c από τα μιτοχόνδρια [27 ] – [30]. Στιχομυθία μεταξύ των ROS και Akt σηματοδοτικό μονοπάτι έχει αποδειχθεί ότι υπάρχουν σε πολλά καρκινικά κύτταρα. Ιονίζουσα ακτινοβολία στο φάσμα της θεραπευτικής δόσης μπορεί να προκαλέσει μια αναστρέψιμη μιτοχονδριακό μετάβαση διαπερατότητα και την τόνωση μια παροδική κυτταρική γενιά των ROS, το οποίο μπορεί στη συνέχεια να λειτουργήσει ως δεύτεροι αγγελιοφόροι στη μεταγωγή σήματος [31] – [32]. παρούσα μελέτη μας έδειξε ότι η ενεργοποίηση του Akt από hPEBP4 σε πρωκτικές καρκινικά κύτταρα σε ακτινοβολία καταργήθηκε μετά αντιοξειδωτικό δόθηκε για την αναστολή της παραγωγής των ROS, αλλά hPEBP4 δεν είχε καμία επίδραση στην ενδοκυτταρική επίπεδο του ROS, γεγονός που υποδηλώνει ότι hPEBP4 προάγει ειδικά την ενεργοποίηση του ΑΚΤ από ROS μετά την ακτινοβόληση στην πρωκτική καρκινικά κύτταρα. Στην πραγματικότητα, τόσο η επιβίωση και αποπτωτικό αποτέλεσμα μπορεί επίσης να υφίστανται για την οδό Akt σήματος μετά ενεργοποιούνται από ROS [33] – [36]. Με βάση τα δεδομένα που λάβαμε από τη μελέτη αυτή, πιστεύουμε ότι hPEBP4 μπορεί να αντιπροσωπεύει ένα μόριο σήμα επιβίωσης με ενεργοποίηση ROS-Akt μονοπάτι σήματος στο πλαίσιο της ακτινοθεραπείας του καρκίνου του ορθού. Συγκεκριμένα υπερεκφράζεται σε καρκινικά κύτταρα, hPEBP4 βοηθά τα καρκινικά κύτταρα να αντιστέκονται μονόπλευρη προκαλούμενη από ακτινοβολία θανάτωση από την επιλεκτική ενίσχυση του σήματος επιβίωσης κατάντη του ROS μετά την ακτινοθεραπεία. Μπορούμε να κάνουμε ακόμη ένα τολμηρό εικασίες ότι η Src κινάση μπορεί να είναι το ενδιάμεσο ικρίωμα για την αλληλεπίδραση μεταξύ hPEBP4, ROS και Akt, καθώς έχουμε την προϋπόθεση ότι η άμεση απόδειξη της σύνδεσης μεταξύ hPEBP4 και Src σε άλλη εργασία με καρκινικά κύτταρα του μαστού και Src είχε αποδειχθεί να απαιτείται η ενεργοποίηση της Akt από ROS στο παρελθόν [32], [37].

Εν ολίγοις, είναι η πρώτη έκθεση που υποδηλώνει ένα ρόλο της hPEBP4 στην ραδιοαντοχή του καρκίνου του ορθού και εμείς επίσης προκαταρκτικά παρακολουθούνται από ο μοριακός μηχανισμός αυτής της επίδρασης. Πλέον η προγνωστική αξία της hPEBP4 στο ραδιοαντοχή του καρκίνου του ορθού με κλινικά δείγματα όγκων σε πρόσφατη έκθεση μας [12], πιστεύουμε hPEBP4 μπορεί να είναι ένας πιθανός στόχος για την ενίσχυση της ευαισθησίας της ακτινοθεραπείας για καρκίνο του ορθού. Χρειάζεται περαιτέρω εργασία για να αποδειχθεί η αποτελεσματικότητα της hPEBP4-στοχευμένη θεραπεία για την προώθηση της ακτινοθεραπείας σε ζωικά μοντέλα καρκίνου του ορθού και αποκαλύπτουν το μαύρο κουτί της εκδήλωσης σήματος μεταξύ των ROS και Akt, στην οποία hPEBP4 ενσωματώνει να παίξει το ρόλο της.

Ευχαριστίες

Σας ευχαριστούμε καθηγητής Wang Fan για τις χρήσιμες συζητήσεις του και Μις Γιου για την υποστήριξή της στο πρόγραμμα εργασίας.