Αφηρημένο

Παιδιατρική καρκίνος είναι μια σχετικά σπάνια και ετερογενή ομάδα αιματολογικών και μη αιματολογικών κακοηθειών που απαιτούν πολλαπλές διαδικασίες για τη διαγνωστική εξέταση και την ταξινόμησή του. Μέχρι τώρα, κυτταρομετρία ροής (FC) δεν έχει εφαρμοστεί συστηματικά με τη διαγνωστική επεξεργασία των εν λόγω κακοηθειών, ιδιαίτερα για συμπαγείς όγκους. Εδώ θα αξιολογούνται μια ομάδα FC δεικτών για τη διαγνωστική εξέταση των παιδιατρικών καρκίνου και περαιτέρω ταξινόμηση των παιδιατρικών στερεών όγκων. Η προτεινόμενη στρατηγική αποσκοπεί στη διαφορική διάγνωση μεταξύ των όγκων

vs

. αντιδραστικά δείγματα, και αιματολογικές

vs

. μη-αιματολογικές κακοήθειες, και η υποδιαίρεση των συμπαγών όγκων. Συνολικά, 52 δείγματα από 40 ασθενείς ύποπτη ότι περιέχει καρκινικά κύτταρα αναλύθηκαν με FC παράλληλα με τις συμβατικές διαγνωστικές διαδικασίες. Το συνολικό ποσοστό αντιστοιχία μεταξύ των δύο προσεγγίσεων ήταν 96% (50/52 διαγνωστικά δείγματα), με 100% συμφωνία για όλα τα αντιδραστικά /φλεγμονώδη και μη διείσδυση δείγματα, καθώς και για εκείνες που αντιστοιχούν στην συμπαγείς όγκους (n = 35), με μόνο δύο ψευδώς αρνητικών περιπτώσεων που διαγιγνώσκονται με λέμφωμα Hodgkin και αναπλαστικού λεμφώματος, αντίστοιχα. Επιπλέον, σαφής διάκριση μεταξύ των δειγμάτων διεισδύσει αιμοποιητικών

vs.

Μη αιμοποιητικά κύτταρα του όγκου συστηματικά επιτευχθεί. Διακριτούς υποτύπους των συμπαγών όγκων έδειξαν διαφορετικά προφίλ πρωτεϊνικής έκφρασης, επιτρέποντας τη διαφορική διάγνωση της νευροβλάστωμα (CD56

hi /GD2

+ /CD81

hi), πρωτόγονες όγκους νευροεξωδερμικής (CD271

hi /CD99

+), Wilms όγκους (& gt? πληθυσμό 1 κυττάρου), ραβδομυοσάρκωμα (

nuMYOD1

+ /

numyogenin

+), καρκινώματα (CD45

– /EpCAM

+) , οι όγκοι των γεννητικών κυττάρων (CD56

+ /CD45

– /NG2

+ /CD10

+) και τελικά επίσης hemangiopericytomas (CD45

– /CD34

+). Εν ολίγοις, τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι multiparameter FC παρέχει γρήγορη και χρήσιμα συμπληρωματικά στοιχεία για να ρουτίνα ιστοπαθολογική εξέταση για τη διαγνωστική εξέταση και ταξινόμηση των παιδιατρικών καρκίνου

Παράθεση:. Ferreira-Facio CS, Μιλίτο C, Botafogo V, Fontana Μ, Thiago LS, Ολιβέιρα E, et al. (2013) Συμβολή της Multiparameter κυτταρομετρίας ροής ανοσοφαινοτυπική στην διαγνωστικών ελέγχων και Ταξινόμησης του Καρκίνου Παιδιατρικής. PLoS ONE 8 (3): e55534. doi: 10.1371 /journal.pone.0055534

Επιμέλεια: Syed A. Αζίζ, Health Canada, Καναδάς

Ελήφθη: 20η Σεπτεμβρίου 2012? Αποδεκτές: 27, Δεκεμβρίου του 2012? Δημοσιεύθηκε: 5 Μαρτίου, 2013

Copyright: © 2013 Ferreira-Facio et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο έχει υποστηριχθεί εν μέρει από τις ακόλουθες ενισχύσεις: ΕΟ υποστηρίχθηκε εν μέρει από επιχορήγηση από CNPq- Βραζιλίας Εθνικό Συμβούλιο Έρευνας (Μπραζίλια, Βραζιλία). MF υποστηρίχθηκε εν μέρει από μια επιχορήγηση από FAPERJ- Ίδρυμα Ερευνών και Μελετών υποστήριξη του Ρίο ντε Τζανέιρο, (Ρίο ντε Τζανέιρο, Βραζιλία) και τώρα υποστηρίζεται εν μέρει από μια επιχορήγηση από CAPES /Ministério da Educação (Μπραζίλια, Βραζιλία). VB υποστηρίχθηκε εν μέρει από FAPERJ- Ίδρυμα Ερευνών και Μελετών υποστήριξη του Ρίο ντε Τζανέιρο, (Ρίο ντε Τζανέιρο, Βραζιλία). ΟΚΕ υποστηρίχθηκε εν μέρει από επιχορήγηση από CNPq- Βραζιλίας Εθνικό Συμβούλιο Έρευνας (Μπραζίλια, Βραζιλία) και FAPERJ- Ίδρυμα Ερευνών και Μελετών υποστήριξη του Ρίο ντε Τζανέιρο, (Ρίο ντε Τζανέιρο, Βραζιλία). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου. Καμία πρόσθετη εξωτερική χρηματοδότηση που έλαβε για την παρούσα μελέτη

Αντικρουόμενα συμφέροντα: Οι συγγραφείς δηλώνουν ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Περισσότερα από 200.000 παιδιατρικούς ασθενείς (& lt? 15.. οι ετών) διαγνώστηκε με καρκίνο κάθε χρόνο [1]. Παρά καρκίνος είναι η πρώτη αιτία θανάτου από ασθένειες που σχετίζονται με τα παιδιά στις περισσότερες χώρες [2], μεμονωμένα αποτελέσματα εξαρτώνται σε μεγάλο βαθμό από την ταχεία όγκου διάγνωση, ταξινόμηση και στάσης, για την κατάλληλη επιλογή θεραπείας και μεγιστοποιούνται τα ποσοστά ίασης [3]. Δεδομένου ότι ένα σημαντικό ποσοστό των παιδιατρικών όγκων στερούνται μορφολογικά στοιχεία της διαφοροποίησης και της ιστολογικής προέλευσης, μια μπαταρία του ανοσοκυτταροχημικές δεικτών και in situ υβριδοποίηση, υπερδομικές και διαγνωστικές διαδικασίες μοριακής, τυπικά απαιτούνται για τη διαγνωστική ταξινόμηση της νόσου [3] – [7].

για αρκετές δεκαετίες, κυτταρομετρία ροής πολλαπλών παραμέτρων (MFC) ανοσοφαινότυπου έχει αποδειχθεί ότι είναι απαραίτητη για την ταχεία διάγνωση, ταξινόμηση και την παρακολούθηση της θεραπείας των περισσότερων αιματολογικών κακοηθειών, συμπεριλαμβανομένης της παιδιατρικής λευχαιμίες και λεμφώματα. Αντίθετα, παραμένει ένα εργαλείο έρευνας για τα παιδιατρικά συμπαγείς όγκους [8] – [15]. Τέτοια περιορισμένη χρήση του MFC στη διάγνωση των παιδιατρικών στερεών όγκων πιθανώς σχετίζεται με την ανάγκη για εναιωρήματα μονών κυττάρων και τη διαθεσιμότητα των σχετικά περιορισμένο πάνελ αξιόπιστων και επικυρωμένων δείκτες, μεταξύ άλλων παραγόντων [16] – [18]. Έτσι, η χρήση της κυτταρομετρίας ροής σε παιδιατρικούς συμπαγείς όγκους έχει σχεδόν περιορίζεται στην αξιολόγηση του περιεχομένου του DNA των κυττάρων του όγκου σε δύο δοκίμια εγκλεισμένο σε παραφίνη και κατεψυγμένου ιστού, σε συνδυασμό ή όχι με ταυτόχρονη χρώση για μία ή λίγες φαινοτυπικών δεικτών [19] – [24]. Κατά συνέπεια, ενώ οι ανοσοφαινοτυπικές μελέτες εφαρμόζονται συνήθως στις περισσότερες παιδιατρική λεμφώματα για τη διαφορική διάγνωση μεταξύ Β- και προδρόμων Τ-κυττάρων λεμφοβλαστικής λεμφώματα και λέμφωμα Burkitt 25-28, λίγες μελέτες έχουν αναφερθεί μέχρι τώρα, στην οποία MFC συστηματικά εφαρμόζεται στην μελέτη των φαινοτυπικών χαρακτηριστικών των παιδιατρικών στερεών όγκων [29] – [31]. Επιπλέον, τα λίγα που αναφέρθηκαν μελέτες έχουν εστιάσει κυρίως στην περιγραφική ανάλυση των προτύπων χρώσης για έναν ή λίγους δείκτες, συνήθως σε ένα ενιαίο διαγνωστικό υπότυπο της νόσου.

Παρ ‘όλα τα παραπάνω, προκαταρκτικές μελέτες έχουν δείξει ότι η νευροενδοκρινείς όγκοι εμφανίζουν ένα CD45

– /CD56

+ φαινότυπο [32] – [35]? με τη σειρά του, καρκινικά κύτταρα από νευροβλάστωμα συνεκφράζουν GD2 [35], ενώ πρωτόγονες όγκους νευροεξωδερμικής (ΡΝΕΤ) συνεκφράζουν CD57 και CD99, καθώς και CD56 [31], [34], [36] – [38], και τα κύτταρα ραβδομυοσαρκώματος του όγκου είναι μυογενίνη

+ [31], [39] – [41]. Παρά το γεγονός αυτό, η εξειδίκευση αυτών των φαινοτύπων μεταξύ των διακριτούς υποτύπους του παιδιατρικού συμπαγών όγκων παραμένει να αποδειχθεί, και καμία μελέτη δεν έχει αναφερθεί μέχρι τώρα, με την οποία μια ολοκληρωμένη ομάδα δεικτών που αποσκοπούν στην διαγνωστική εξέταση, διαφορική διάγνωση και την ταξινόμηση των διακριτών τύπων παιδιατρικούς όγκους, έχει προταθεί και αξιολογηθεί.

Εδώ θα αξιολογηθεί ένα νέο ολοκληρωμένο πίνακα MFC των δεικτών για τη διαγνωστική εξέταση των παιδιατρικών καρκίνου και τη σωστή τοποθέτηση των παιδιατρικών στερεών όγκων σε συγκεκριμένες νοσολογικές οντότητες.

υλικά και Μέθοδοι

ασθενείς και δείγματα

Ένα σύνολο από 52 δείγματα από 40 ασθενείς με ύποπτες των παιδιατρικών καρκίνου -21 άνδρες (52,5%) και 19 γυναίκες (47,5%) – συλλέχθηκαν μεταξύ Νοέμβριος 2009 και τον Δεκέμβριο του 2011, σε τρία διαφορετικά κέντρα: Instituto de Puericultura e pediatria Martagão Gesteira /Universidade Federal do Rio de Janeiro (IPPMG /UFRJ) και το Νοσοκομείο Servidores κάνει Estado (HSE), τόσο από το Ρίο ντε Τζανέιρο (Βραζιλία), και το Νοσοκομείο de Clínicas /Universidade Federal κάνει Παρανά (HC /UFPR) στην Curitiba (Βραζιλία). Η μέση ηλικία των ασθενών ήταν 5 έτη (εύρος: 1-14 έτη). Τα περισσότερα δείγματα (48/52? 92,3%) αναλύθηκαν κατά τη διάγνωση

Σε όλες τις περιπτώσεις, η τελική διάγνωση και ταξινόμηση ιδρύθηκε με βάση μορφολογικά και ανοσοϊστοχημικές αναλύσεις πραγματοποιούνται σε εργαστήριο αναφοράς, μετά από τον Παγκόσμιο Οργανισμό Υγείας (WHO. ) τα κριτήρια [42] – [44] Τριάντα ένας ασθενείς (78%) είχαν καρκίνο, 17 από τους οποίους (55%) έδειξαν μεταστατική νόσο? τα υπόλοιπα 9 παιδιά (23%) είχαν φλεγμονώδεις /αντιδραστική ασθένειες. Σύμφωνα με ιστοπαθολογική /ανοσοϊστοχημική διάγνωση, 11 ασθενείς (12 δείγματα) είχε νευροβλάστωμα, 3 (4 δείγματα) είχε ραβδομυοσάρκωμα, 2 (2 δείγματα) ένα πρωτόγονο νευροεξωδερμικής νεοπλασίας (ΡΝΕΤ), 8 (9 δείγματα) είχαν λέμφωμα, 2 (2 δείγματα) Wilms όγκων, 2 (3 δείγματα) όγκους γεννητικών κυττάρων, και ένας ασθενής είχε ένα επινεφριδίων καρκίνωμα, το ένα ρινοφαρυγγικό καρκίνωμα, και ένας ένας hemangioperycitoma? τα άλλα 17 δείγματα αντιστοιχούσαν σε 9 αντιδραστικά δείγματα και 8 δείγματα από ασθενείς με νεοπλασματικές ασθένειες, οι οποίες δεν έδειξαν διήθηση του όγκου. Η συγκεκριμένη καταγωγή των δειγμάτων περιγράφεται λεπτομερώς στον πίνακα S1.

Δήλωση Ηθικής

Η μελέτη εγκρίθηκε από την επιτροπή δεοντολογίας των νοσοκομείων IPPMG και HSE και τα δείγματα ελήφθησαν μετά από ενημερωμένη συγκατάθεση δόθηκε από τα παιδιά και τους γονείς τους ή τους κηδεμόνες, σύμφωνα με το πρωτόκολλο Διακήρυξη του Ελσίνκι. Οι γονείς /κηδεμόνες παρέχεται γραπτή συγκατάθεση τους να συμμετάσχουν σε αυτή τη μελέτη και αυτή η γραπτή συγκατάθεση εγκρίθηκε από τις τοπικές επιτροπές δεοντολογίας.

Προετοιμασία των δειγμάτων ιστού και των σωματικών υγρών

Τα δείγματα ιστών δωρεάν από το λίπος και νεκρωτικό ιστό (μέσο βάρος: 144 mg? φάσμα: & lt? 3 έως 3.600 mg) συλλέχθηκαν κατά τη χειρουργική μονάδα. Αυτοί αξιολογήθηκαν απ ‘ευθείας από έναν έμπειρο παθολόγο, και χωρίζεται σε δύο συνεχόμενα μπλοκ. Ένα τετράγωνο σταθεροποιήθηκε σε φορμαλίνη, ενσωματωμένο σε παραφίνη και υποβάλλονται σε επεξεργασία για τη συνήθη ιστοπαθολογική, ενώ το άλλο τοποθετήθηκε σε ψυχρό (4 ° C) με φωσφορικό ρυθμιστικό αλατούχο διάλυμα (PBS? ΡΗ = 7.4) για περαιτέρω αναλύσεις κυτταρομετρίας ροής. Το αργότερα δείγμα ζυγίστηκε, τοποθετήθηκε σε ένα τρυβλίο Petri με PBS που περιέχει 1% αλβουμίνη βόειου ορού (BSA? Calbiochem, La Jolla, CA), κόβονται σε μικρά τεμάχια (2-4 mm) με μια λεπίδα νυστεριού και μηχανικά αναλυτικών με δύο αποστειρωμένα βελόνες? Στη συνέχεια, αυτό διηθήθηκε μέσω ενός στείρου σύριγγα Filcon (100 μm μέγεθος πόρων) για την εξάλειψη συσσωματώματα κυττάρων και συντριμμάτων, φυγοκεντρήθηκε (10 λεπτά στα 540 g) και επαναιωρήθηκαν σε PBS που περιείχε 1% BSA σε τελική συγκέντρωση 10

6 κύτταρα /mL. Στη συνέχεια, το δείγμα αμέσως χρώση για MFC ανοσοφαινότυπου. μυελού των οστών (ΒΜ) και άλλα δείγματα σωματικού υγρού βάφτηκαν είτε απευθείας είτε μετά από ένα στάδιο φυγοκέντρισης (π.χ. ούρα), όπως περιγράφεται παρακάτω.

Multiparameter Κυτταρομετρία Ροής ανοσοφαινοτυπική Μελέτες

Κάθε δείγμα κηλιδώθηκε με οι ακόλουθοι συνδυασμοί μονοκλωνικών αντισωμάτων συζευγμένο με ένα φθοριόχρωμα (MAbs) – ισοθειοκυανική φλουορεσκεΐνη (FITC) /φυκοερυθρίνη (ΡΕ) /ΡΕ-cyanin7 (PECy7) /peridinin πρωτεΐνη-Cy5.5 χλωροφύλλη (PerCP-Cy5.5) /αλλοφυκοκυανίνη (APC) /APC-Hilite7 (APC-H7) /Pacific blue (PacB) /Ειρηνικού πορτοκαλί (Paco) – αφιερωμένο στην ταυτόχρονη ταυτοποίηση των καρκινικών κυττάρων και τη φυσιολογική /αντιδραστική Β- και Τ-λεμφοκύτταρα, μονοκύτταρα και ουδετερόφιλα: i) κυτταροπλασματική (Cy) MPO /

CyCD79a /CD19 /CD34 /CD7 μεμβράνης /επιφάνειας (Sm) CD3 /

CyCD3 /CD45 [45]? ii) ανοσοσφαιρίνης μεμβράνης CD8-επιφάνειας (

SmIg) λ /CD56-sIgκ /- /CD19 + CD4 /CD3 /- /CD20 /CD45 (πίνακας προσανατολισμού στον Πίνακα S2). Όποτε ύποπτα κύτταρα όγκου ανιχνεύθηκαν μετά τη στρατηγική gating που απεικονίζεται στο σχήμα 1, περαιτέρω φαινοτυπική χαρακτηρισμό των εν λόγω ύποπτων κυττάρων όγκου πραγματοποιήθηκε με ξεχωριστές πλάκες χαρακτηρισμό ανάλογα με τη φύση των κυττάρων: μη αιμοποιητικά vs Β vs T vs άλλα αιμοποιητικά κύτταρα (Πίνακας S2). Χρώση των κυττάρων από στερεά ιστούς ή BM, περιφερικό αίμα (ΡΒ) και άλλα σωματικά υγρά διεξήχθη όπως περιγράφηκε προηγουμένως λεπτομερώς [46], [47]. Εν συντομία, τα δείγματα (50 μΐ ανά σωλήνα) επωάστηκαν για 15 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου στο σκοτάδι, υπό την παρουσία 3-20 μl από καθένα από τα προαναφερθέντα μονοκλωνικά αντισώματα (MAb), σύμφωνα με τις συστάσεις των κατασκευαστών. Κατόπιν, 2 ml διαλύματος λύσεως FACS (Becton Dickinson) αραιώνονται 1:10 (ν /ν) προστέθηκε σε αποσταγμένο νερό, και τα δείγματα επωάστηκαν για άλλα 10 λεπτά υπό τις ίδιες συνθήκες όπως αυτές που αναφέρθηκαν παραπάνω, προκειμένου να λυθούν μη -nucleated ερυθρά κύτταρα. Στη συνέχεια, τα κύτταρα φυγοκεντρήθηκαν (5 λεπτά στα 540 g) και το κυτταρικό σφαιρίδιο πλύθηκε δύο φορές με 4 ml PBS. Τέλος, τα κύτταρα επαναιωρήθηκαν σε 0.5 ml PBS. Για την αξιολόγηση των κυτταροπλασματικών (Cy) ή πυρηνικά (ηυ) αντιγόνα, τα κύτταρα μονιμοποιήθηκαν, αμέσως μετά επωάστηκαν με το mAb κατευθύνεται έναντι δεικτών κυτταρικής επιφάνειας της μεμβράνης (βλέπε παραπάνω)? τότε, ήταν διαπερατά και υπέστησαν χρώση με mAb που κατευθύνεται κατά των κυτταροπλασματικής και /ή πυρηνικά αντιγόνα, χρησιμοποιώντας την Fix & amp? Κιτ αντιδραστηρίων Perm (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA), αυστηρά σύμφωνα με τις συστάσεις του κατασκευαστή. Για μη συζευγμένο MAb, μετά από επώαση με τους ειδικούς MAbs, ένα στάδιο πλύσεως ακολουθείται από ένα δεύτερο στάδιο επώασης με ένα FITC-συζευγμένο αντιδραστήριο IgG αντι-ποντικού (Cytognos SL, Salamanca, Ισπανία), διεξήχθη (15 λεπτά) στο σκοτάδι. Για να επιβεβαιωθεί η ειδικότητα των σημάνσειε, ένας αρνητικός έλεγχος με μη σημασμένο δείγμα συστηματικά λειτουργούν παράλληλα. Βιτρώ κύτταρα αποκτήθηκαν σε χαμηλή ταχύτητα σε μια ροή FACSCanto II κυτταρομετρίας -Becton /Dickinson Biosciences (BD), Σαν Χοσέ, Καλιφόρνια, ΗΠΑ, – με τη χρήση του λογισμικού FACSDiVa (BD). Όλα εκτός από δύο δείγματα, υποβλήθηκαν σε επεξεργασία εντός των πρώτων 4 ώρες μετά την επέμβαση. Για την ανάλυση των δεδομένων, χρησιμοποιήθηκε το λογισμικό πρόγραμμα INFINICYT ™ (Cytognos SL). έκφραση αντιγόνου χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό των διαφορετικών τύπων κυττάρων που υπάρχουν στο δείγμα και σε κάθε πληθυσμό κυττάρου που προσδιορίζονται ταξινομήθηκε ως αρνητική (-), dim θετικό (+ lo), το ενδιάμεσο θετικό (+) και ισχυρώς θετικά (+ hi) με τη χρήση αυθαίρετων σχετική γραμμική μέση ένταση φθορισμού (MFI) τιμές 10

0-10

2, 10

2-10

3, 10

3-10

4, & gt? 10

4, αντίστοιχα, ανάλογα με τις τιμές των ΝΧΙ που παρατηρήθηκαν vs επίπεδα κατά την έναρξη αυτοφθορισμό βρέθηκε στο σωλήνα ελέγχου? έκφραση αντιγόνου για ένα δεδομένο δείκτη περιγράφηκε ως ετερογενής, όταν μεταβλητά επίπεδα έκφρασης ανιχνεύθηκαν για το εν λόγω δείκτη μέσα σε έναν πληθυσμό κυττάρων.

Στον πίνακα Α, ένα που απεικονίζει παράδειγμα της στρατηγικής περίφραξη και διμεταβλητή συνδυασμούς διάγραμμα σημείων που χρησιμοποιείται για η ταυτοποίηση των καρκινικών κυττάρων CD45-, CD45-κύτταρα υπολειμματικό στρωματικών (π.χ. ενδοθηλιακά κύτταρα και mesenquimal κύτταρα) και διηθητικά αιμοποιητικών κυττάρων (π.χ. ουδετερόφιλα, κύτταρα Β και Τ) παρουσιάζεται. Με τη σειρά του, σε πάνελ Β έως Ι ο ανοσοφαινοτυπικές προφίλ των καρκινικών κυττάρων CD45-από νευροβλάστωμα (πάνελ Β και Η), ένα ΡΝΕΤ (πλαίσια C και Ι) και ένα rhabdomyossarcoma (πάνελ D και J) όγκο δείχνονται μαζί με αντιπροσωπευτικές εικόνες των histophathological και ανοσοϊστοχημικές προφίλ των ίδιων όγκων χρωματίστηκαν με αιματοξιλίνη & amp? ηωσίνη συν cromogranin (νευροβλάστωμα κύτταρα στον πίνακα Ε), CD99 (ΡΝΕΤ κύτταρα στον πίνακα ΣΤ) και

(nu) μυογενίνη (rhabdomyossarcoma κύτταρα στον πίνακα Ζ).

Η

Ο αποκλεισμός των μη βιώσιμων όγκων κύτταρα βασίστηκε σε χαμηλότερα προς τα εμπρός τους (FSC) και πλευρική (SSC) φως χαρακτηριστικά σκέδασης? διάμεσος βιωσιμότητα κυττάρου των δειγμάτων ιστού ήταν 75%. Σε 19/33 (57,5%) των δειγμάτων συμπαγούς ιστού, παράλληλα χρώση με ιωδιούχο προπίδιο (ΡΙ, Sigma, St Louis, ΜΟ, USA) διεξήχθη για να αξιολογηθεί η βιωσιμότητα των κυττάρων, & gt? 90% των νεκρών κυττάρων ΡΙ-χρώση συστηματικά αντιστοιχεί με τα γεγονότα που είχαν εξαιρεθεί ως μη βιώσιμα κύτταρα στην FSC /SSC πύλη

η ιστολογική και ανοσοϊστοχημική αναλύσεις

Histophatological εξέταση πραγματοποιήθηκε σε αιματοξυλίνη /ηωσίνη (η & amp? Ε). τομών ιστού ( 3 μm). Σε όλα τα δείγματα, όπου η διείσδυση του όγκου ήταν ύποπτα ή /και να ανιχνευθούν, τομές ιστού επίσης χρωματίστηκαν με συμβατικές ανοσοϊστοχημεία για το CD99, πυρηνική

(nu) MYOD1,

(nu) μυογενίνη, συναπτοφυσίνη, χρωμογρανίνη, NSE, LCA, CD20, CD19, Ki67 και CD10 δείκτες. Βιτρώ διαφάνειες εκτιμήθηκαν ανεξάρτητα από δύο έμπειρους παθολόγους. Για ΒΜ, ΡΒ και δείγματα ούρων, έγινε συμβατική κυτταρολογική ανάλυση.

Στατιστικές Μέθοδοι

Για να διαπιστωθεί η στατιστική σημαντικότητα των διαφορών που παρατηρούνται μεταξύ των ομάδων, χρησιμοποιήθηκε το Mann-Whitney U ( συνεχείς μεταβλητές? πρόγραμμα λογισμικού SPSS, έκδοση 18.0, SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Ο αριθμός των αληθώς θετικών (ΤΡ? Δείγματα με την παρουσία ενός πληθυσμού κυττάρου όγκου όπως ανιχνεύεται από τα δύο συμβατικές διαγνωστικές τεχνικές και κυτταρομετρία ροής), αλήθεια-αρνητικό (ΤΝ? Δείγματα χωρίς πληθυσμό καρκινικών κυττάρων όπως μετράται με συμβατικές προσεγγίσεις και κυτταρομετρία ροής) , ψευδώς θετικό (FP? δείγματα με την παρουσία ενός πληθυσμού κυττάρων του όγκου με κυτταρομετρία ροής δεν ανιχνεύονται από τις μεθόδους αναφοράς) και ψευδή αρνητικά περιπτώσεις (FN? δείγματα με μη ανιχνεύσιμες κύτταρα όγκου με κυτταρομετρία ροής, αλλά θετική με τις προσεγγίσεις αναφοράς), ήταν υπολογιστεί. Η ευαισθησία και η ειδικότητα ορίστηκαν ως TP /TP + FN και TN /TN + FP αντίστοιχα, ενώ το θετικό (PPV) και αρνητική προγνωστική αξία (NPV) υπολογίστηκαν ως TP /TP + FP και TN /TN + FN, αντίστοιχα.

Αποτελέσματα

Διαφορική διάγνωση μεταξύ Reactive /μη διείσδυση και όγκων /διεισδύσει δείγματα

με βάση τον πίνακα ελέγχου (πίνακας 1 στον πίνακα S2), 9/52 δείγματα (17 %) αντιστοιχούσε σε αντιδραστικά δείγματα? άλλα 8 (15%) δείγματα που λαμβάνονται από ασθενείς με καρκίνο με σκοπό την σταδιοποίηση της νόσου ή παρακολούθηση, ήταν επίσης αρνητικά για κακοήθεια. Όλα τα άλλα δείγματα (η = 35? 68%) έδειξαν διήθηση από κύτταρα όγκου. Το συνολικό ποσοστό αντιστοιχίας μεταξύ MFC και συμβατικών ιστοπαθολογικές, ανοσοϊστοχημικές ή /και κυτταρολογική διαγνωστικές διαδικασίες ήταν 96% (50/52 δείγματα). Πιο αναλυτικά, επιτεύχθηκε συμφωνία 100% για τις 17 αντιδραστικά /φλεγμονώδη και μη διείσδυση δείγματα, ενώ ένα ποσοστό αντιστοιχίας 94% (33/35 δείγματα) επιτεύχθηκε με MFC για διεισδύσει δείγματα όγκων. Τα δύο δείγματα όγκων που ταξινομούνται λανθασμένα από το MFC αντιστοιχούσαν σε δείγματα μολυσμένο από ανάστημα και τα κύτταρα του λεμφώματος και ένα αναπλαστικό λέμφωμα, αντίστοιχα. Όλα τα δείγματα μολυσμένο από συμπαγείς όγκους και Β- ή λεμφώματα Τ-κυττάρων έχουν αναγνωριστεί σωστά (Πίνακας 1). Ως εκ τούτου, η συνολική απόδοση του 96% (100% ειδικότητα και 94% ευαισθησία) επετεύχθη (PPV 100% και NPV 90%). Η κυτταρική σύνθεση των δύο αντιδραστικών /φλεγμονώδη και άλλα μη διείσδυση δείγματα παρουσιάζεται στον Πίνακα S3, ενώ η κατανομή των στρωματικών κυττάρων (φλεγμονώδης, ενδοθηλιακά και ινοβλάστες /μεσεγχυματικά κύτταρα) σε 14/26 δείγματα που περιείχαν μη αιμοποιητικά συμπαγών όγκων έχει δειχθεί στον πίνακα S4.

η

Προσδιορισμός του λεμφώματος

Versus

μη αιμοποιητικά κύτταρα όγκου

Ένα σύνολο 35 δειγμάτων (από 31 ασθενείς) περιείχε τα καρκινικά κύτταρα με βάση την πάνελ διαλογής (πίνακας 1 στον πίνακα S2) και οι πλάκες χαρακτηρισμού (πάνελ 2 έως 5 στον πίνακα S2). Από αυτούς, 9 αντιστοιχούσε σε κακοήθη αιμοποιητικά κύτταρα και 26 σε μη αιμοποιητικά συμπαγείς όγκους. Στις δύο ψευδώς αρνητικά περιπτώσεις λεμφώματος, ένα πλούσιο πολυκλωνικό διήθημα λεμφοκυττάρων παρατηρήθηκε με MFC, χωρίς σαφώς καθορισμένο πληθυσμό καρκινικών κυττάρων. Με τη σειρά του, όλες τις περιπτώσεις λεμφώματος Β-κυττάρου (5/5) μπορούσαν να διακριθούν εύκολα από παιδιατρικούς συμπαγείς όγκους με πάνελ διαλογής 1 (Πίνακας S2) με την έκφραση των δεικτών Β-κυττάρων (CD19

+, cyCD79a

+ , CD22

+) σε συνδυασμό με CD45

+ lo ή CD45

+, ενώ οι δείκτες αυτοί ήταν συστηματικά απόντες σε όλες τις 26 παιδιατρικούς συμπαγείς όγκους. Με τον πίνακα χαρακτηρισμό Β-κυττάρων (πίνακας 3 του πίνακα S2) τρία δείγματα λεμφώματος Β-κυττάρων έδειξε μεμβράνη επιφάνειας

(Sm) Ig περιορισμό της ελαφριάς αλυσίδας (2 περιπτώσεις

SmIgλ

+ και ένα

SmIgκ

+) μαζί με ένα Tdt

+, CD20

+ hi, CD38

+ hi, CD10

+ hi, cyBcl2

– ανοσοφαινότυπο που είναι ιδιαίτερα χαρακτηριστικό της παιδικής ηλικίας λέμφωμα Burkitt, εκτός για έκφραση TdT. Τα άλλα δύο όγκους Β-κυττάρων παρουσιάζονται με ένα CD45

+ lo, CD19

+, CD20

-, CD22

+, CD10

-, CD38

+, CD58

+, CD81

+, CD9

+

SmIg

–

CyIgμ

– φαινότυπο συμβατό με πρόδρομο Β-κυττάρων οξεία λεμφοβλαστική λέμφωμα (BCP-ALL) τόσο από MFC και ιστοπαθολογία. Με τη σειρά του, 2 δείγματα λεμφώματος Τ-κυττάρων θα μπορούσε να διακριθεί εύκολα από τα δύο παιδιατρικών στερεών όγκων και λεμφωμάτων Β-κυττάρου με τον πίνακα ελέγχου (πίνακας 1 στον Πίνακα S2) με βάση CD45 τους

+ lo,

SmCD3

+ lo και

CyCD3

+ φαινότυπο? Επιπλέον, αυτά τα κύτταρα παρουσίασαν επίσης CD4

+, CD8

-, CD1a

+, CD99

+, CD2

+, CD5

+, CD27

+, CD71

+ και CD81

+ προφίλ φαινοτυπικά, λείπει CD7

-, CD117

– και των δεικτών Β-κυττάρων μία φορά τα κατάλληλα πάνελ ελέγχου και χαρακτηρισμού (πίνακες 1 και 4 του πίνακα S2, αντίστοιχα) ήταν μεταχειρισμένος. Όλα τα 26 μη αιμοποιητικά συμπαγείς όγκους που αναλύθηκαν ήταν αρνητικά για όλους Β και Τ-κυττάρων ειδικών αντιγόνων διερευνήθηκε με τον πίνακα ελέγχου (πίνακας 1 στον Πίνακα S2), και ήταν CD45

-. Είκοσι δύο από αυτές αργότερα περιπτώσεις (84%) εξέφρασε CD56

+, μαζί με μεταβλητό μοτίβα έκφρασης των άλλων δεικτών που σχετίζονται με διαφορετικές μη αιματοποιητικούς ιστούς που περιλήφθηκαν στον πίνακα χαρακτηρισμός για συμπαγείς όγκους (Πίνακας 2 Πίνακας S2) όπως περιγράφεται παρακάτω

ανοσοφαινοτυπική Χαρακτηρισμός των μη αιμοποιητικά κύτταρα όγκου

Σχεδόν οι μισοί από τους μη-αιμοποιητικών όγκων αντιστοιχούσε στο νευροβλάστωμα. (12/26? 46%). Έδειξαν ένα ομοιόμορφο πληθυσμό CD45

-, CD56

+, CD9

+, CD81

hi, GD2

+ καρκινικά κύτταρα με ετερογενή έκφραση του CD57

– /+ και CD58

+ /++? CD90 ήταν θετική σε όλες εκτός από μία όγκου, ενώ CD271 μερικώς εκφράζεται σε ένα μόνο όγκου (Πίνακας 2). Είναι ενδιαφέρον ότι η μόνη γαγγλιονευροβλάστωμα όγκου που αναλύθηκαν έδειξαν δύο σαφώς διαφορετικούς πληθυσμούς κυττάρων όγκου: 39% είχαν ανοσοφαινότυπο ταυτόσημη με εκείνη των άλλων νευροβλαστωμάτων, ενώ τα υπόλοιπα κύτταρα (61%) εμφανίζονται υψηλότερα σκέδαση φωτός (FSC και SSC) και μεγαλύτερη έκφραση του CD56, CD81 και CD57. Κανένας από τους άλλους δείκτες που εξετάστηκαν (π.χ. CD99, CD38, CD19, CD20,

CyCD79a, CD34,

numyogenin,

nuMYOD1) εκφράστηκε από κύτταρα νευροβλάστωμα. Από όλους τους όγκους, νευροβλάστωμα ήταν το μόνο GD2

+ hi νεοπλασία, την ίδια στιγμή έδειξε επίσης υψηλότερα επίπεδα CD56 ανά κύτταρο (Πίνακας 2? Σχήματα 1 και 2). Παρά το γεγονός ότι ΡΝΕΤ όγκοι εμφάνισαν φαινότυπο που έμοιαζε με εκείνη του νευροβλάστωμα (CD45

-, CD56

hi, CD90

+, CD9

+, CD81

+

nuMYOD1

– ,

numyogenin

– εν απουσία Β-, Τ- και μυελοειδή σχετιζόμενη δείκτες), ήταν αρνητικά για GD2, εκτός από ένα με χαμηλή έκφραση σε ένα μικρό πληθυσμό όγκου 48%, και έδειξε ισχυρότερη έκφραση του CD99

hi και CD271

hi (Πίνακας 2? σχήματα 1 και 2)

Πίνακας Α:. χάρτης θερμότητας συνοψίζει την ένταση και το μοτίβο της έκφρασης διαφορετικών δεικτών σε ξεχωριστή διαγνωστική υποτύπους των παιδιατρικών στερεών όγκων με βάση την μέση ένταση φθορισμού ανά /κύτταρο επίπεδο. Πίνακας Β: Σύγκριση του μέσου φθορισμού έκφραση ένταση των επιμέρους δεικτών ανά /κύτταρο σε διαφορετικούς υποτύπους ΠΟΥ παιδιατρικών στερεών όγκων. Κουτιά εκτείνονται από την εικοστού πέμπτου με εβδομηκοστή πέμπτη εκατοστημόρια, οι γραμμές στη μέση αντιπροσωπεύουν μέσες τιμές, ενώ οριζόντιες γραμμές αντιστοιχούν στα διαστήματα εμπιστοσύνης 95%.

Η

Με βάση τις ίδιες διαλογή και το χαρακτηρισμό πάνελ (πάνελ 1 και 2 στον πίνακα S2, αντίστοιχα), οι τέσσερις ραβδομυοσάρκωμα (RMS) έδειξε ένα συγκεκριμένο

nuMYOD1

hi,

numyogenin

hi φαινότυπο. Επιπλέον, περιπτώσεις RMS ήταν επίσης CD45

-, CD56

+ lo, CD90

+ και CD57

-? δύο εξέφρασαν CD81

+, CD9

+ και CD58

+ και ένα ήταν μερικώς θετικό για CD99 (40% των καρκινικών κυττάρων), ένα φαινοτυπική πρότυπο το οποίο ήταν ειδικό για αυτόν τον υπότυπο του όγκου (Πίνακας 2? σχήματα 1 και 2)

Τα υπόλοιπα 8 δείγματα όγκων αντιστοιχούσε στο 5 διακριτούς υποτύπους όγκου (Wilms όγκου, 2 περιπτώσεις?. όγκων γεννητικών κυττάρων, 3? επινεφριδίων καρκίνωμα, καρκίνωμα του ρινοφάρυγγα και αιμαγγειοπερικύττωμα, μία περίπτωση η κάθε μία). Ισχυρή EpCAM έκφραση ήταν περιορισμένη στις δύο καρκινώματα, ενώ τα κύτταρα αιμαγγειοπερικύττωμα ήταν η μόνη εμφάνιση CD34

+ hi έκφραση? Αμφότερες οι ομάδες των όγκων στερούνταν συστηματικά CD45, Β- και δεικτών Τ-κυττάρων (Πίνακας 2? σχήματα 1 και 2). Με τη σειρά τους, όλοι οι όγκοι των γεννητικών κυττάρων παρουσιάζονται με μια ξεχωριστή CD45

-, CD56

+, CD10

+, CD38

-, CD19

-, CD22

-, NG2

+ φαινοτύπου, εκτός από τα CD10 και NG2 τα οποία ήταν αρνητικά σε 1/3 περιπτώσεις (Πίνακας 2 και Σχήμα 2). Αντίθετα, οι δύο Wilms όγκων έδειξαν δύο σαφώς διακριτές (συνυπάρχοντα) των καρκινικών κυττάρων πληθυσμών με κοινή CD56

+ και CD58

+, CD45

-, CD99

-, GD2

–

nuMYOD1

–

numyogenin

-, CD10

– και NG2

– φαινότυπο, αλλά διακριτή αντιδραστικότητα (αρνητική σε σχέση με θετική έκφραση) για CD90, EpCAM και CD57 (Πίνακας 2? Αριθμητικά 1 και 2).

Συνολικά, αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι διακριτές παιδιατρική υπότυποι του όγκου συσχετίστηκαν με μοναδικό και συγκεκριμένο φαινοτύπους.

NuMYOD1 και

έκφραση numyogenin περιορίστηκε σε RMS (Σχήμα 1J? Σχήμα 2), CD99 εκφράστηκε σε σημαντικά υψηλότερα επίπεδα σε ΡΝΕΤ και έναν υποπληθυσμό (εμβρύου) RMS (Σχήμα 1Θ? Σχήμα 2), ενώ έντονη αντίδραση για GD2 ήταν ειδική για το νευροβλάστωμα (Σχήμα 1? Σχήμα 2), και ένα CD34

hi CD45

– φαινότυπος περιορίζεται στην περίπτωση αιμαγγειοπερικύττωμα μελετήθηκαν (Σχήμα 2). Άλλοι λιγότερο συγκεκριμένων δεικτών, όπως CD56, CD9, CD57, CD81, CD99 συνέβαλε επίσης σε μερικές διαφορικές διαγνώσεις, π.χ. η διάκριση μεταξύ νευροβλάστωμα και RMS (CD56, CD57, CD81) και μεταξύ ΡΝΕΤ και δύο RMS (CD9) και νευροβλαστώματος (CD99, CD56, CD81 και CD57) (Σχήμα 1Θ-J? Σχήμα 2)

Συζήτηση.

καρκίνος του Παιδιατρικού προέρχεται κυρίως από νωρίς λεμφικών πρόδρομες ουσίες και τα μεσεγχυματικά και νευροεξωδερματικά πρόδρομοι εμβρυϊκά, η οποία μπορεί να παρουσιάζουν παρόμοια μορφολογικά και ιστοπαθολογικές πρότυπα [3], [5] – [7]. Κατά συνέπεια, η διάγνωση των περισσότερων παιδιατρικών όγκων συχνά απαιτεί περαιτέρω χαρακτηρισμό των νεοπλασματικών κυττάρων σε π.χ. immunophenotypical /ανοσοκυτταροχημικού λόγους. Με τη σειρά του, ταχεία διάγνωση τέτοιων περιπτώσεων είναι ζωτικής σημασίας, δεδομένου ότι επηρεάζει άμεσα τη διαδικασία λήψης αποφάσεων της θεραπείας και την έκβαση των ασθενών [2], [3]. Ως εκ τούτου, η διαθεσιμότητα των γρήγορες τεχνικές για τον έλεγχο ακριβώς για το καρκινικό κύτταρο γενεαλογίας και να καθορίσει τις σχετικές διαφορική διάγνωση, είναι ως επί το πλείστον ευπρόσδεκτη.

Μέχρι τώρα, λίγες μελέτες έχουν αναφερθεί τα οποία αξιολογεί τη χρησιμότητα της MFC ανοσοφαινοτυποποίηση για το διαγνωστικό έλεγχο και υποδιαίρεση των παιδιατρικών στερεών όγκων [11] – [13], [27] – [28], [31], [35] – [39], [41], [48] – [51] Αξίζει να σημειωθεί, ένα σχετικά χαμηλό (59%) το ποσοστό αντιστοιχίας μεταξύ ανοσοφαινοτυποποίηση λεπτή βελόνα αναρρόφηση δειγμάτων με κυτταρομετρία ροής και τα συμβατικά κυτταρολογικές αναλύσεις έχει αναφερθεί, λόγω των χαμηλών κυτταροβρίθεια του δείγματος [36]. Είναι ενδιαφέρον, εδώ λαμβάνεται αρκετά βιώσιμων κυττάρων σε κάθε δείγμα αναλύθηκε με τη χρήση μηχανικών διαδικασιών επιμερισμού του προσφάτως ληφθέντος και επεξεργασμένα δείγματα, υποστηρίζοντας την ιδέα ότι η μηχανική αποσυσσωμάτωση κρατά έκφραση αντιγόνου μαζί με ένα αποδεκτό κυτταρική βιωσιμότητα [16] – [18], [52 ].

Αξίζει να σημειωθεί ότι κανένα από τα δείγματα που ταξινομούνται ως αντιδραστική /φλεγμονωδών από κυτταρολογική /ιστοπαθολογικές κριτήρια ήταν κακοί, όπως ο καρκίνος του MFC. Με τη σειρά του, όλα τα δείγματα όγκων, αλλά δύο μάλλον ασυνήθιστο δείγματα λεμφώματος, είχαν αναγνωρισθεί ως περιέχοντα όγκου με MFC. Οι δύο ψευδώς αρνητικά περιπτώσεις παρατηρείται μπορεί να οφείλεται στην έλλειψη ειδικών δεικτών για Reed-Stenberg και αναπλαστικά κύτταρα λεμφώματος (π.χ. CD30) στο πάνελ διαλογής μας (πίνακας 1 στον Πίνακα S2) και η σχετικά χαμηλή συχνότητα ή /και η βιωσιμότητα των κυττάρων αυτών σε εναιωρήματα μονών κυττάρων. Υποψήφιοι συμπερίληψη πρόσθετων δεικτών (π.χ. CD30) στον πίνακα ελέγχου για την ταυτοποίηση αυτών των κυττάρων μπορεί δυνητικά να ξεπεραστεί αυτός ο περιορισμός [53], [54].

Σε παιδιατρικούς ασθενείς, MFC έχει εφαρμοστεί κυρίως με τη μελέτη του ΡΒ και ΒΜ δείγματα από ασθενείς με ύποπτα ότι πάσχουν από οξεία λευχαιμία. Παρ ‘όλα αυτά, οι πρώτες μελέτες σε ασθενείς με νευροβλάστωμα ήδη έδειξε BM διείσδυση του CD45

– /CD56

+ καρκινικά κύτταρα, ελλείψει των πρωτεϊνών που δηλώνει αιμοποιητικών δέσμευση [29], [33]. Λόγω της σχετικά υψηλής συχνότητας μεταστατικών εμπλοκή ΒΜ σε νευροβλάστωμα, αυτή είναι μακράν η μη αιμοποιητικά παιδιατρική όγκου κυρίως μελετηθεί από MFC. Πράγματι, ο φαινότυπος των κυττάρων νευροβλαστώματος έχει επαναλαμβανόμενες αξιολογήθηκε σε μονές ή πολύχρωμα (3- ή 4-χρώμα) συνενώσεις αντισώματος τόσο στο ΒΜ και δείγματα ιστού του όγκου [35], [48] – [51], [55]. Ωστόσο, οι περισσότερες από αυτές τις μελέτες είχαν ως στόχο την αξιολόγηση της ελάχιστης υπολειμματικής νόσου επίπεδα στο μυελό των οστών των ασθενών νευροβλάστωμα, χωρίς να εξερευνήσετε τη χρησιμότητα του ανοσοφαινότυπου για τη διαγνωστική εξέταση και διαφορική διάγνωση της νευροβλάστωμα

vs.

Άλλων παιδιατρικών όγκων, όπως γίνεται εδώ

Από όλους τους δείκτες αξιολογήθηκαν μέχρι τώρα σε παιδιατρικούς συμπαγείς όγκους, CD56 (NCAM) έχει πιο συχνά διερευνηθεί [31] – [34].. Είναι ενδιαφέρον, CD56 εκφράζεται από τα περισσότερα παιδιατρικά συμπαγείς όγκους [37] – [39], [51], όπως διαπιστώθηκε, επίσης, σε περιπτώσεις μας. Ωστόσο, η ποσότητα της έκφρασης CD56 ποικίλει σε μεγάλο βαθμό μεταξύ των διαφόρων υποτύπων του όγκου. Νευροβλαστώματος και ΡΝΕΤ ήταν εκείνων των όγκων που εμφανίζονται τα υψηλότερα επίπεδα CD56, υποστηρίζοντας την χρησιμότητα του CD56 τόσο σε διακρίσεις μη αιμοποιητικά εναντίον νεοπλασμάτων αιμοποιητικών [31], [34], και για τη διαφορική διάγνωση μεταξύ διακριτούς υποτύπους του CD45

– μη αιμοποιητικά παιδιατρική συμπαγείς όγκους. Ομοίως, πολλές μελέτες έχουν εκτιμήσει τη χρησιμότητα των CD81 και CD9 (μαζί με CD45

– και CD56

+), για τη διάκριση μεταξύ των κυττάρων νευροβλαστώματος και αιμοποιητικά κύτταρα ΒΜ, για τους σκοπούς της στάσης [13], [48] – [49], [55], χωρίς να επεκτείνει την ανάλυση αυτή σε άλλους υποτύπους των παιδιατρικών στερεών όγκων. Μεταξύ των περιπτώσεων μας, CD81 και CD9 έδειξε μια μεταβλητή και ετερογενή σχήμα έκφρασης με περιορισμένη χρησιμότητα ως μεμονωμένα δείκτες, στη διαφορική διάγνωση μεταξύ νευροβλαστώματος και άλλων παιδιατρικών όγκων. Ωστόσο, όταν συνδυάζεται με άλλα μόρια, CD81 συνέβαλαν στην διάκριση του νευροβλαστώματος και ΡΝΕΤ. Παρά το γεγονός αυτό, GD2 και CD271 ήταν οι δύο πιο χρήσιμοι δείκτες για τη διαφοροποίηση μεταξύ νευροβλάστωμα (GD2

+ hi CD271

– /lo) και PNET (GD2

– /lo CD271

+ hi). Συνολικά, τα αποτελέσματα αυτά υποστηρίζουν την ιδέα ότι CD271

hi έκφραση προσδιορίζονται ΡΝΕΤ μπορεί να σχετίζεται με την κυτταρική προέλευση μεσεγχυματικών βλαστικών αυτών των όγκων [56]. Είναι ενδιαφέρον ότι, στο μοναδικό νευροβλαστώματος ασθενή που εμφάνισε CD271

– /+ lo καρκινικά κύτταρα, η έκφραση CD271 περιορίστηκε στην πρωτογενή όγκο, ενώ οι αρνητικές σε μεταστατικά κύτταρα ΒΜ? αυτό θα μπορούσε δυνητικά να οφείλεται σε διαφορετικό βαθμό ωρίμανσης των καρκινικών κυττάρων στις δύο τοποθεσίες, απουσία CD271 που σχετίζεται με ένα πιο ανώριμα και επιθετική συμπεριφορά όγκου [57] – [58]. Αξίζει να σημειωθεί, CD99 ήταν επίσης εντόνως εκφρασμένο σε ΡΝΕΤ, ενώ τυπικά αρνητικά στα άλλα καρκινώματα, γεγονός που υποδηλώνει ότι εκτός από την CD271, CD99 μπορεί επίσης να συνεισφέρει στη διάγνωση της ΡΝΕΤ.

Λίγες ανοσοφαινοτυπικές μελέτες MFC της ενεργού έχουν έχουν αναφερθεί μέχρι τώρα. Σύμφωνα με τις παρατηρήσεις μας, όπως μελέτες έδειξαν ότι RMS κύτταρα εμφανίζουν συνήθως ένα CD45

-, CD56

+, CD90

+

numyogenin

+ φαινότυπο με μεταβλητή έκφραση του CD57, δεσμίνη, vimentin και CD99 [31], [36], [39], [41].