Αφηρημένο

Η ανοσοθεραπεία προσεγγίσεις χρησιμοποιώντας οδοφράγματος αποκλεισμό, μόνη ή σε συνδυασμό με τον εμβολιασμό αντιγόνο όγκου, ή θετούς κυττάρων μεταφορά, αναδύονται ως υποσχόμενες προσεγγίσεις για τη θεραπεία του μη μικροκυτταρικού καρκίνου του πνεύμονα (NSCLC). Κατά την προετοιμασία για την επερχόμενη συνδυασμένες προσεγγίσεις ανοσοθεραπείας στον NSCLC, εδώ, αξιολογήσαμε αυθόρμητες ανοσολογικές αποκρίσεις προς XAGE-1b, ένα ειδικό όγκου αντιγόνο της ομάδας Καρκίνος όρχεων Antigen που έχει προηγουμένως αναφερθεί ότι είναι αυθόρμητα ανοσογόνος στο ιαπωνικό πληθυσμό, σε μια ομάδα των Καυκάσιων ασθενών με NSCLC. Βρήκαμε αυθόρμητες αποκρίσεις ορολογική να XAGE-1b στο 9% των ασθενών. Σημαντικά, αυτές οι αποκρίσεις ήταν περιορισμένες σε αυτά, και αντιπροσώπευε το 13% του, οι ασθενείς με όγκους αδενοκαρκίνωμα, η πιο συχνή ιστολογική υποτύπου, για τις οποίες προσεγγίσεις ανοσοθεραπείας είναι υπό ανάπτυξη. Χρησιμοποιώντας μια σειρά από επικαλυπτόμενα πεπτίδια που εκτείνονται σε ολόκληρη την πρωτεΐνη XAGE-1β, και προς υποστήριξη των ορολογικών δεδομένων, διαπιστώσαμε σημαντικές XAGE-1b ειδικά CD4

+ Τ κυτταρικών αποκρίσεων σε όλους τους οροθετικούς ασθενείς XAGE-1b και εντοπίστηκαν αρκετές CD4

+ επίτοπων Τ κυττάρων. Συνολικά, τα αποτελέσματα μας υποστηρίζουν τη σημασία του αντιγόνου XAGE-1b σε ασθενείς Καυκάσιους NSCLC με αδενοκαρκίνωμα, καθώς και την εφαρμογή των μελλοντικών ανοσοθεραπεία αξιοποιώντας την υψηλή ανοσογονικότητα του αντιγόνου σε αυτόν τον πληθυσμό ασθενών

Παράθεση:. Saito Κ, Nakayama Ε, Valmori D (2016) του ανοσοποιητικού απαντήσεις στην Καρκίνος Όρχεων αντιγόνου XAGE-1β σε μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα Καυκάσιοι ασθενείς. PLoS ONE 11 (3): e0150623. doi: 10.1371 /journal.pone.0150623

Επιμέλεια: Takuma Κάτω, Mie Πανεπιστημίου Graduate School of Medicine, Ιαπωνία

Ελήφθη: 11 Δεκ 2015? Αποδεκτές: 17 Φλεβάρη του 2016? Δημοσιεύθηκε: 3 Μάρτη του 2016

Copyright: © 2016 Saito et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Όλη η δεδομένα είναι εντός του χαρτιού

Χρηματοδότηση:. η μελέτη αυτή υποστηρίζεται από το Ludwig Institute for Cancer Research (ΗΠΑ), το Ερευνητικό Ινστιτούτο Καρκίνου (ΗΠΑ), Ligue contre le Καρκίνο (Γαλλία) και Labex IGO (Γαλλία) . Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του πνεύμονα είναι η κύρια αιτία θνησιμότητας σχετίζονται με τον καρκίνο σε όλο τον κόσμο, με μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC) που αντιπροσωπεύουν περίπου το 85% όλων των περιπτώσεων καρκίνου του πνεύμονα [1]. Παρά τις πρόσφατες βελτιώσεις στα θεραπευτικές στρατηγικές, NSCLC αποτελεί ως εκ τούτου ένα από τα σημαντικότερα προβλήματα δημόσιας υγείας. Στην πλειονότητα των περιπτώσεων, τα συμπτώματα εμφανίζονται συνήθως σε προχωρημένο στάδιο της νόσου, τους μεταστατικούς ή τοπικά προχωρημένο στάδια, καθιστώντας έτσι τη θεραπεία δύσκολη [2]. Μετά την αρχική διάγνωση, ακριβής σταδιοποίηση είναι κρίσιμη για τον καθορισμό της κατάλληλης θεραπείας. Χειρουργική εκτομή του όγκου εξακολουθεί να είναι το πρότυπο της περίθαλψης, αλλά, δυστυχώς, δεν είναι εφαρμόσιμη και μπορεί να θεωρηθεί μια σταθερή και επιτυχημένη επιλογή για θεραπεία, μόνο σε ασθενείς με χειρουργικά εξαιρέσιμων όγκων και είναι σε θέση να ανεχθεί την εκτομή. Ωστόσο, περίπου 70% των ασθενών με καρκίνο του πνεύμονα παρόν με τοπικά προχωρημένο ή μεταστατική νόσο κατά τον χρόνο της διάγνωσης [2]. Για αυτούς τους ασθενείς, η θεραπεία πρώτης γραμμής είναι με βάση την πλατίνα χημειοθεραπεία, η οποία έχει αποδειχθεί ότι είναι ευεργετική για την ανακούφιση και αντιπροσωπεύει το επίπεδο της περίθαλψης. Η ακτινοθεραπεία χρησιμοποιείται επίσης συχνά ως θεραπεία πρώτης γραμμής για NSCLC και τη διοίκηση της ταυτόχρονης χημειοθεραπείας και ακτινοβολίας ενδείκνυται για το στάδιο ΙΙΙ καρκίνο του πνεύμονα [2]. Ωστόσο, ακόμη και με αυτές τις θεραπείες, τα συνολικά ποσοστά επιβίωσης σε ασθενείς με NSCLC είναι ακόμη δραματικά χαμηλά, με μέσο ποσοστό 5-ετή επιβίωση του 17% σε ασθενείς με πρώιμη νόσο και 4% σε ασθενείς με μεταστατική νόσο [3]. Ως εκ τούτου, υπάρχει επείγουσα ανάγκη για την ανάπτυξη νέων θεραπευτικών στρατηγικών για την επαγωγή πιο αποτελεσματικές κλινικές αποκρίσεις και να παρατείνει την συνολική επιβίωση σε αυτόν τον πληθυσμό ασθενών. Κατά την τελευταία δεκαετία, νέες γνώσεις στον τομέα της βιολογίας του καρκίνου έχει ανοίξει νέες πιθανές θεραπευτικές προσεγγίσεις, συμπεριλαμβανομένων στοχευμένων θεραπειών και η ανοσοθεραπεία. Στοχευμένες θεραπείες, όπως αυτές που χρησιμοποιούν αναστολείς της αγγειογένεσης, επιδερμικό αναστολείς υποδοχέα αυξητικού παράγοντα (EGFRi) ή αναστολείς κινάσης τυροσίνης (ΤΚΙ) μπορούν να συνδυαστούν με τις κύριες μορφές θεραπείας σε ασθενείς που εμφανίζουν συγκεκριμένες μεταλλάξεις [4-6]. Ωστόσο, η αναλογία των ασθενών που εκφράζουν αυτές τις μεταλλάξεις είναι σχετικά μικρό (για παράδειγμα, μόνο το 10-15% του NSCLC φιλοξενούν μεταλλάξεων EGFR). Επιπλέον, οι κλινικές επιδράσεις αυτών των θεραπειών δεν είναι συχνά μακράς διαρκείας, λόγω της ανάπτυξης ανθεκτικότητας [7,8].

Από την άλλη πλευρά, ανοσοθεραπευτικές στρατηγικές έχουν τη δυνατότητα να ενισχύσει την ανοσολογική αντίδραση του ασθενούς, για να προκαλέσει σταθερή κλινικές αποκρίσεις και να επεκτείνει την επιβίωση [1]. Οι αναδυόμενες ανοσοθεραπευτικές στρατηγικές είναι εκείνα που χρησιμοποιούν ειδικά αντισώματα οδοφράγματος αποκλεισμό, που έχουν δείξει κλινική αποτελεσματικότητα σε υπο-ομάδα ασθενών. Πρόσφατα στοιχεία δείχνουν ότι αυτοί οι ασθενείς αποκριτών είναι εκείνες που φιλοξενούν αυθόρμητες ανοσολογικές αποκρίσεις προς το αυτόλογο όγκο. Άλλες ανοσολογικές στρατηγικές NSCLC περιλαμβάνουν εμβολιασμό καρκίνος προσεγγίσεις χρησιμοποιώντας καρκινικά αντιγόνα /όρχεων (CTA) [1,9], πρωτεΐνες που κωδικοποιούνται από γονίδια που εκφράζονται κανονικά σε γεννητικά κύτταρα στους όρχεις και του εμβρύου ωοθήκη και, σε ορισμένες περιπτώσεις, σε πλακούντα τροφοβλάστες, σιγήσει σε φυσιολογικούς ενήλικους ιστούς, αλλά με παρεκκλίνοντα εκ νέου εκφράζεται σε διάφορους τύπους καρκίνου [10,11]. CTA εκφράζονται σε μεγάλο βαθμό σε καρκίνους διαφόρων ιστολογικών υποτύπων, είναι συχνά ιδιαίτερα ανοσογόνες και συνεπώς θεωρούνται μεταξύ των πλέον ελκυστικοί στόχοι για την ανάπτυξη εμβολίων κατά του καρκίνου [11]. Εμβόλια καρκίνου ως μονοθεραπεία είναι επί του παρόντος υπό αξιολόγηση σε NSCLC και θα μπορούσε να είναι αποτελεσματική σε ασθενείς με ελάχιστη υπολειμματική νόσο [9]. Παρά τις πρώτες κλινικές δοκιμές εφαρμογή αυτού του είδους η στρατηγική δεν έχουν εκπληρώσει τις κλινικές καταληκτικό σημείο τους [12], ο συνδυασμός εμβολιασμού με οδοφράγματος θεραπείες αποκλεισμό είναι πολύ ελπιδοφόρα [1]. Ωστόσο, η χρήση αυτών των στρατηγικών απαιτεί τον προσδιορισμό των αντιγόνων όγκου ειδικών εκφράζεται από ένα σημαντικό κλάσμα του NSCLC, καθώς και τα χαρακτηριστικά των όγκων που τις εκφράζουν. Διάφορες CTA έχει αποδειχθεί ότι εκφράζονται σε NSCLC. XAGE-1b κωδικοποιείται από το γονίδιο XAGE-1, που βρίσκεται στην περιοχή Xp11.22 του Χ χρωμοσώματος [13,14]. Τέσσερις παραλλαγές μεταγραφής, XAGE-1α έως δ, έχουν εντοπιστεί [14-16]. Ένα μεταγράφημα εκφράζεται σε όγκους, XAGE-1b, κωδικοποιεί ένα 81 αμινοξέων της πρωτεΐνης [14,17]. XAGE-1b αναφέρθηκε για να είναι η επικρατέστερη μεταγραφή εκφράζεται σε NSCLC. έκφραση XAGE-1b παρατηρήθηκε στο 45% των αδενοκαρκινωμάτων του Ιάπωνες ασθενείς [18]. XAGE-1b έχει δειχθεί ότι επάγουν αντιδράσεις αντισωμάτων και κυττάρων Τ στον NSCLC ασθενείς ιαπωνικά. Η συχνότητα απόκρισης αντισώματος αναφέρθηκε να είναι υψηλότερη σε ασθενείς αδενοκαρκίνωμα (14%) από ό, τι σε ασθενείς SCC (2%) [19]. Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να επεκτείνει αυτά τα ευρήματα στον Καυκάσιο πληθυσμό, για να αξιολογήσει τις δυνατότητες του XAGE-1b με βάση ανοσοθεραπείας σε Καυκάσιους.

Υλικά και Μέθοδοι

Ασθενείς δείγματα και τον καθαρισμό των κυττάρων

μονοπύρηνα κύτταρα περιφερικού αίματος (PBMC) δείγματα συλλέχθηκαν από μια ομάδα 141 ασθενών με NSCLC (Institut de Cancérologie de l’Ouest (ICO), Saint-Herblain, Γαλλία), μετά την έγκριση από το Διοικητικό συμβούλιο Institutional Review του ICO. PBMC από ελήφθησαν 60 υγιείς δότες από το Etablissement Français du Sang (EFS) Pays de la Loire, μετά την έγκριση από το Διοικητικό Συμβούλιο Institutional Review του Etablissement Français du Sang Pays de la Loire (Νάντη, Γαλλία). Ένα υπογεγραμμένο έντυπο συγκατάθεσης ελήφθη από όλους τους χορηγούς που συμμετέχουν στη μελέτη. Η ομάδα περιελάμβανε 91 αδενοκαρκινώματα, 40 ακανθοκυτταρικό καρκίνωμα (SCC) και 10 όγκους NSCLC άλλων υποτύπων. PBMC απομονώθηκαν με φυγοκέντρηση βαθμίδωσης πυκνότητας. CD4

+ και CD8

+ Τ κύτταρα εμπλουτίστηκαν από PBMC από μαγνητικό διαχωρισμό κυττάρου χρησιμοποιώντας μικροσφαιρίδια (MACS Τεχνολογία διαχωρισμού κυττάρων, Miltenyi Biotec).

Οι πρωτεΐνες και τα πεπτίδια

Η σειρά 17 16-μερές XAGE-1b επικαλυπτόμενα πεπτίδια (ΟΛΠ, Πίνακας 1) συντέθηκαν σε ένα Multiple Peptide Synthesizer, AMS422, ABINED στο Πανεπιστήμιο Okayama. Η ανασυνδυασμένη πρωτεΐνη ΝΥ-ΕδΟ-1 παρήχθη σε

Escherichia coli

όπως περιγράφηκε προηγουμένως [20]. Η XAGE-1b (GAGED2a) πρωτεΐνη (μακρά 81 αμινοξέων) συντέθηκε χρησιμοποιώντας συσκευή σύνθεσης πεπτιδίου με GL Biochemistry.

Η

In vitro διέγερση των CD4

+ και CD8

+ Τ κύτταρα

Καθαρισμένα CD4

+ και CD8

+ Τ κύτταρα διεγέρθηκαν με ακτινοβολημένα αυτόλογα κύτταρα παρουσίασης αντιγόνου (APC) παρουσία ενός μίγματος 17 16-μερή αλληλοκαλυπτόμενα πεπτίδια (ΟΛΠ, 2 μΜ ) (Πίνακας 1) που εκτείνονται σε ολόκληρη την αλληλουχία αμινοξέων της πρωτεΐνης XAGE-1b, rhIL-2 (50 IU /ml) και rhIL-7 (10 ng /ml). Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε τρυβλία καλλιέργειας 96 φρεατίων στους 37 ° C (CO

2 5%) σε Τροποποιημένο κατά Iscove το Dulbecco Μέσο (IMDM, Gibco) συμπληρωμένο με 8% θερμικά απενεργοποιημένο ανθρώπινο ορό (HS), GlutaMAX (Gibco), HEPES (Gibco), μη απαραίτητα αμινοξέα (ΜΕΜ ΝΕΑΑ, Gibco), κιπροφλοξακίνη και πενικιλλίνη /στρεπτομυκίνη.

χρώση κυτταροκινών Η ενδοκυτταρική (ICS)

Μετά από

in vitro

διέγερση , CD4

+ και CD8

+ Τ κύτταρα καλλιεργήθηκαν για 14 ημέρες και στη συνέχεια αξιολογούνται για XAGE-1b ειδικές αποκρίσεις των Τ-κυττάρων. Οι καλλιέργειες συλλέχθηκαν και διεγείρονται παρουσία ή απουσία του πεπτιδίου πισίνα XAGE-1b (2 μΜ) και δοκιμάστηκαν σε μια τυποποιημένη 4hr χρώση ενδοκυτταρικής κυτοκίνης (ICS), χρησιμοποιώντας φθορίζον-συζευγμένο κυτοκίνη ειδικά αντισώματα αCD4 (BD Biosciences), αCD8 (BD Biosciences), αIL-17Α (eBioscience) και αΙΡΝ-γ (BD Biosciences). Το προφίλ έκφρασης κυτοκινών στη συνέχεια αξιολογήθηκε με κυτταρομετρία ροής (FACSAria II, BD Biosciences).

προσδιορισμό σύλληψης IFN-γ και η δημιουργία των CD4

+ και CD8

+ Τ κυτταρικών κλώνων

CD4

+ και CD8

+ Τ συνελέγησαν και διεγείρονται παρουσία ή απουσία πεπτιδίου πισίνα XAGE-1b (2 μΜ). Διεγερμένα δείγματα επωάστηκαν με ένα δι-ειδικό CD45 και ΙΡΝ-γ αντίσωμα (αντιδραστήριο αλιευμάτων IFN-γ, Miltenyi Biotec) και επωάστηκαν για 5 λεπτά σε πάγο. Τα κύτταρα στη συνέχεια τοποθετήθηκαν σε μια αργή συσκευή περιστρεφόμενη (Miltenyi Biotec) για 45 λεπτά στους 37 ° C, για να επιτρέψει την έκκριση κυτοκινών. Μετά την περίοδο αυτή, τα κύτταρα πλύθηκαν σε ψυχρό ρυθμιστικό διάλυμα και επωάστηκαν με το APC-συζευγμένο αντιδραστήριο ανίχνευσης IFN-γ (Miltenyi Biotec), για 15 λεπτά σε πάγο, με την παρουσία του αCD4 (FITC-συζευγμένο) κυτοκίνης-ειδικό αντίσωμα. Τα κύτταρα περαιτέρω πλύθηκαν με ψυχρό ρυθμιστικό διάλυμα και αναλύθηκαν με FACS. CD4

+ Τ κύτταρα που εκκρίνεται ΙΡΝ-γ ειδικά σε απόκριση στο πεπτίδιο πισίνα XAGE-1b ταξινομήθηκαν με κυτταρομετρία ροής των κυττάρων, χρησιμοποιώντας ένα FACSAria II. Το απομονωμένο CD4

+ ΙΡΝ-γ Τ κύτταρα που παράγουν κλωνοποιήθηκαν υπό συνθήκες περιοριστικής αραίωσης, σε πλάκες 96 φρεατίων, με διέγερση με φυτοαιμαγλουτινίνη (ΡΗΑ-L, 1 μg /ml) παρουσία ακτινοβολημένων αλλογενών PBMC και EBV κυτταρικό γραμμές (EBV-HV, EBV-LAZ) και rhIL-2 (150 IU /ml). CD4

+ Τ κυτταρικών κλώνων διατηρήθηκαν σε IMDM συμπληρωμένο με 8% HS με την εκ νέου διέγερση κάθε 2-3 εβδομάδες.

Αξιολόγηση της ορολογικές ανταποκρίσεις

Ορολογικές αποκρίσεις εκτιμήθηκαν με ELISA, χρησιμοποιώντας πλάκες 96 φρεατίων επικαλυμμένες με την πρωτεΐνη XAGE-1b (2 μg /ml) ή την πρωτεΐνη ΝΥ-ΕδΟ-1 (1 μg /ml) όλη τη νύκτα στους 4 ° C. Οι οροί αξιολογήθηκαν σε μια σειρά από αραιώσεις από 1/100 έως 1 /100.000. Οι τίτλοι αντισωμάτων υπολογίστηκαν ως η αραίωση ορού που αντιστοιχεί στο 50% της μέγιστης απόκρισης οπτικής πυκνότητας.

Αξιολόγηση της παραγωγής ΙΡΝ-γ με ELISA

Για την εκτίμηση της παραγωγής αντιγόνου ειδική ΙΡΝ-γ, XAGE- 1β ειδικές κλώνοι διεγείρονται παρουσία ή εν απουσία της πισίνας πεπτιδίου (50 × 10

3 ανά φρεάτιο, σε 96 φρεατίων πλάκες καλλιέργειας με στρογγυλό πυθμένα). IFN-γ μετρήθηκε με ELISA σε υπερκείμενα 24 ώρες καλλιέργειας, χρησιμοποιώντας πλάκες επίπεδου πυθμένα των 96 φρεατίων Nunc Maxisorp. Για τη δοκιμασία λεπτή εξειδίκευση, κύτταρα (50 χ 10

3 ανά φρεάτιο) διεγέρθηκαν με την παρουσία ή απουσία XAGE-1b απλά πεπτίδια (300 μΜ), και η συγκέντρωση της ΙΡΝ-γ μετρήθηκε όπως παραπάνω. Για τα πειράματα αποκλεισμού αντισώματος, αDP (1 μg /ml), αDQ (1 μg /ml), αDR (1 μg /ml) και αDR52b (ασκίτης, αραίωση 1:10) αντισώματα προστέθηκαν στην καλλιέργεια δοκιμασίας. Οι περιοριστικές αλληλόμορφα HLA-DR παρομοίως αξιολογήθηκε με ΙΡΝ-γ ELISA, με χρήση μοριακά ορίζεται APC. LDR1, ευγενική προσφορά από τον Dr. Hassan M. Zarour (Πανεπιστήμιο του Pittsburgh, ΗΠΑ), διατηρήθηκαν σε πλήρες μέσο RPMI και ελέγχθηκαν για έκφραση HLA-DR. EBV149 και EBV156, (ιός Epstein-Barr μετασχηματισμένων λεμφοβλαστοειδών κυτταρικών γραμμών) προήλθαν από ασθενείς που εκφράζουν HLA-DRB1 * 13.

Αποτελέσματα

ορολογική ανταπόκριση στη XAGE-1b και ΝΥ-ΕδΟ-1 σε ασθενείς με ΜΜΚΠ

Θα προβληθεί μια ομάδα από 141 ασθενείς με NSCLC για ορολογικές ανταποκρίσεις σε XAGE-1b και NY-ESO-1, όπως εσωτερικού ελέγχου, με ELISA. Τα αποτελέσματα του ελέγχου συνοψίζονται στο Σχ 1. Θα εκτιμηθεί πρώτα η ορούς από ασθενείς μαζί με εκείνα των 60 υγιών δοτών σε αραίωση 1: 100. Διαπιστώσαμε σημαντική απαντήσεις ορολογική να XAGE-1b σε 12 ασθενείς (Εικόνα 1Α). Αντίθετα, οι αποκρίσεις αντισώματος σε NY-ESO-1 ανιχνεύθηκαν σε 9 ασθενείς. Στη συνέχεια αξιολογείται η ορούς από τους οροθετικούς ασθενείς 12 XAGE-1b σε μια καμπύλη τιτλοδότησης και υπολογίζεται ο τίτλος αντισώματος, που ορίζεται ως η αραίωση ορού που δίνει 50% της μέγιστης απόκρισης. Οι τίτλοι που ελήφθησαν ήταν μεταβλητή μεταξύ των οροθετικών ασθενών και κυμαινόταν από 1: 250 έως 1:. 40000 (Σχήμα 1Β)

(Α) Περίληψη της ELISA για τα 141 ασθενείς με NSCLC και 60 υγιείς δότες (HD). Η οπτική πυκνότητα (OD) cut-off μεταξύ ανταποκρίθηκαν και μη-ανταποκρινόμενοι προσδιορίστηκε ως η μέση OD που λαμβάνεται με τους ορούς από τα 60 HD + 5 τυπικές αποκλίσεις (SD) (διακεκομμένη γραμμή). (Β) Οι οροί τιτλοδότηση από τους οροθετικούς ασθενείς 12 XAGE-1b και από 1 HD διεξήχθη σε ένα εύρος αραιώσεων, από 1/100 έως 1 /100.000. Οι τίτλοι αντισωμάτων προσδιορίσθηκαν ως η αραίωση του ορού που αντιστοιχεί στο 50% της μέγιστης απόκρισης OD.

Η

Στην ομάδα, 91 όγκοι ήταν αδενοκαρκινώματα, 40 ήταν καρκινώματα πλακωδών κυττάρων (SCC) και 10 ανήκαν σε άλλους υποτύπους . XAGE-1b οροθετικούς ασθενείς βρέθηκαν αποκλειστικά στην υποομάδα αδενοκαρκίνωμα, και αντιπροσώπευε το 13% της υποομάδας (Πίνακας 2). Σε αντίθεση, NY-ESO-1 οροθετικούς ασθενείς ανήκαν κυρίως στην υποομάδα SCC, και αντιπροσώπευε το 13% της υποομάδας ενώ μόνο 3% των ασθενών αδενοκαρκινώματος είχαν σημαντικές ορολογικές αποκρίσεις προς NY-ESO-1 (Πίνακας 2). Έτσι, επιβεβαιώθηκε ότι XAGE-1b είναι αυθόρμητα ανοσογόνος σε NSCLC, ως επί το πλείστον σε αδενοκαρκινώματα, και αποδεικνύεται ότι αυτό συμβαίνει όχι μόνο στο ιαπωνικό πληθυσμό όπως περιγράφηκε προηγουμένως, αλλά επίσης και σε Καυκάσιους. Η συσχέτιση μεταξύ των ορολογικών απαντήσεις σε XAGE-1b και αδενοκαρκίνωμα ιστολογική υπότυπο ήταν στατιστικά σημαντική (ακριβής δοκιμασία του Fisher, P = 0.0176). Σε αντίθεση, τα ευρήματά μας υποδεικνύουν ότι οι απαντήσεις αντισώματος σε NY-ESO-1 είναι πιο συχνές σε ασθενείς SCC, με δεδομένα κοντά, αλλά δεν έχει ακόμη φθάσει στατιστική σημασία (ακριβής δοκιμασία του Fisher, P = 0.0563). Αυτά τα αποτελέσματα είναι σύμφωνα με προηγουμένως δημοσιευμένα στοιχεία ότι η οροθετικότητα των NY-ESO-1 παρατηρήθηκε στο 29% και το 15% των ασθενών SCC και το αδενοκαρκίνωμα, αντίστοιχα [21].

Η

Αξιολόγηση της XAGE-1b -εξειδικευμένης CD4

+ και CD8

+ Τ κυτταρικές αποκρίσεις

Με βάση τα αποτελέσματα της ορολογικό έλεγχο, αξιολογήσαμε τους ασθενείς ανταπόκρισης 12 αντισώματος για CD4

+ και CD8

+ κύτταρο αποκρίσεις Τ να XAGE-1β. Για το σκοπό αυτό, μπορούμε εμπλουτισμένο CD4

+ και CD8

+ Τ κύτταρα από PBMC από τους ασθενείς με μαγνητική διαλογή κυττάρων και τους διεγείρονται παρουσία μιας ομάδας 17 16-μερή επικαλυπτόμενων πεπτιδίων, που καλύπτουν το πλήρες 81 αμινο αλληλουχίας αμινοξέων της πρωτεΐνης XAGE-1b (Πίνακας 1) και τους καλλιεργήθηκαν για 14 ημέρες παρουσία ακτινοβολημένων αυτόλογων APC, rhIL-2 και rhIL-7. Στο τέλος της περιόδου καλλιέργειας, εμείς διεγερμένα δείγματα των καλλιεργειών που προέρχονται από κάθε ασθενή υπό την απουσία ή παρουσία του πεπτιδίου πισίνα XAGE-1b και αξιολογούνται αποκρισιμότητα σε XAGE-1b σε μια πρότυπη δοκιμασία χρώσης κυτοκίνης 4hr ενδοκυτταρικά, χρησιμοποιώντας αντισώματα ειδικό για ΙΡΝ-γ και IL-17. Αναλύσαμε τα δείγματα με κυτταρομετρία ροής (σχήμα 2Α και 2C) και συγκρίθηκε το ποσοστό της ΙΡΝ-γ που παράγουν τα κύτταρα που λαμβάνονται για κάθε καλλιέργεια σε σχέση με το δικό του βασικής γραμμής απόκριση (απουσία των πεπτιδίων) για να επιβεβαιώσει την αντιγονο-ειδική απόκριση. CD4

αποκρίσεις + Τ κυττάρων θεωρήθηκαν σημαντικές όταν η αναλογία του CD4

+ Τ κύτταρα που παράγουν ΙΡΝ-γ παρουσία της πισίνας πεπτιδίου ήταν τουλάχιστον 3 φορές υψηλότερη από εκείνη που παρατηρήθηκε κατά την έναρξη. Με βάση αυτά τα κριτήρια, ανιχνεύσαμε σημαντικές CD4

+ Τ κυτταρικές αποκρίσεις προς XAGE-1b σε όλους τους οροθετικούς ασθενείς (Σχήμα 2Β), σε αντίθεση, μόνο στην περίπτωση του 1 ασθενή, εντοπίσαμε μια XAGE-1b ειδικών CD8

+ απόκριση των Τ κυττάρων (Σχήμα 2D). Ωστόσο, απέτυχε να ανιχνεύσει ειδικά την παραγωγή της IL-17 σε απάντηση XAGE-1b για οποιαδήποτε από τις κουλτούρες.

(A, C) Η παρουσία της XAGE-1b ειδικά CD4

+ (Α) και CD8

+ (C) αποκρίσεων Τ κυττάρου αξιολογήθηκε σε πεπτίδιο πισίνα διεγερμένες καλλιέργειες με χρώση ενδοκυτταρικής κυτοκίνης, με κυτοκίνη ειδικά αντισώματα αΙΡΝ-γ και αIL-17, μετά από διέγερση με την απουσία ή την παρουσία του πεπτιδίου XAGE-1b πισίνα. Τα ποσοστά των κυττάρων που παράγουν ΙΡΝ-γ που φαίνεται στο άνω αριστερό τεταρτημόριο του κάθε κουκκίδα παράσταση που δείχνει την αυξημένη παραγωγή ΙΡΝ-γ σε διεγερμένα πεπτίδιο δείγματα. Τα δεδομένα που παρουσιάζονται είναι ένα παράδειγμα ενός CD4

+ και CD8

+ Τ κυττάρων αποκριτών ασθενή. (Β, D) Περίληψη του CD4

+ και CD8 είναι

αποκρίσεις + Τ κυττάρων εμφανίζονται για όλα τα 12 οροθετικούς ασθενείς. Όπως φαίνεται στο (Β), τα CD4

+ απαντήσεις ανιχνευθεί για όλα τα οροθετικούς ασθενείς, ενώ ένας σημαντικός CD8

+ ανταπόκριση εντοπίστηκε μόνο σε 1 ασθενή, NA703 (D). Τιμές τουλάχιστον 3 φορές υψηλότερες από την αρχική τιμή (χωρίς πεπτίδιο) θεωρήθηκαν σημαντικές.

Η

Δημιουργία CD4

+ Τ κυτταρικών κλώνων, αξιολόγηση των δραστικών πεπτιδίων και τον περιορισμό HLA

Απομονώσαμε XAGE-1b αντιδραστικά CD4

+ Τ κύτταρα από έναν από τους οροθετικούς ασθενείς XAGE-1b, NA555, εμπλουτίζοντας το κλάσμα των κυττάρων που εκκρίνεται ΙΡΝ-γ ειδικά σε απόκριση στο πεπτίδιο πισίνα XAGE-1b, με Miltenyi δοκιμασία σύλληψης ΙΡΝ-γ (Σχήμα 3Α). Για την απόκτηση ειδικών κλώνων, καλλιεργήσαμε των απομονωμένων κυττάρων υπό συνθήκες περιοριστικής αραίωσης, επεκτάθηκε τους και στη συνέχεια να τους αξιολογείται με την απουσία ή παρουσία της πισίνας πεπτιδίου XAGE-1b (Σχήμα 3Β). Πήραμε 14 XAGE-1b ειδικά CD4

+ Τ κυτταρικών κλώνων, ότι χαρακτηρίζεται για την εξαιρετική εξειδίκευση τους με την αξιολόγηση δραστικότητα έναντι των 17 επικαλυπτόμενες μόνο πεπτίδια που συνθέτουν την πισίνα πεπτίδιο XAGE-1β. Αρχικά εξετάστηκαν τα απλά πεπτίδια σε υποομάδες των 3 πεπτιδίων το καθένα και προσδιορίζεται ότι τα αντιδραστικά πεπτίδια εντοπίστηκαν στα πρώτα 2 υποομάδες συμπεριλαμβανομένων πεπτιδίων C1-C3 και C4-C6 (Πίνακας 1). Στη συνέχεια αξιολόγησε την απάντηση στα μονά πεπτίδια που περιλαμβάνονται σε αυτές τις περιοχές. Σχήμα 3C (αριστερό πάνελ) δείχνει ένα παράδειγμα αυτής της ανάλυσης για μία XAGE-1b αντιδραστικά CD4

+ κλώνο Τ-κυττάρων (κλώνος A8C7) που αναγνωρίζονται πεπτίδιο C3. Μια περίληψη του προστίμου εκτίμηση ιδιαιτερότητα του 14 CD4

+ κλώνοι των Τ-κυττάρων παρουσιάζεται στο Σχ 3C (δεξί πάνελ). 10/14 κλώνοι ήταν αντιδραστικά με το πεπτίδιο C3, 1 κλώνος αναγνωρίζεται πεπτίδια C3 και C4, 1 κλώνος αναγνωρίζεται πεπτίδιο C4, και 2 κλώνοι αναγνωρίζονται πεπτιδίου C5. Συνολικά, βρήκαμε 4 διαφορετικά πρόστιμο ιδιαιτερότητες. Με βάση αυτή την αντιδραστικότητα, προσδιορίσαμε το MHC κατηγορίας II μόρια που περιορίζουν την αναγνώριση του αντιγόνου απλών κλώνων αντιπροσωπευτικά των 4 λεπτές εξειδικεύσεις. Για το σκοπό αυτό, αξιολογήσαμε αναγνώριση του αντιγόνου με την παρουσία του αDP, αDQ, αDR και αDR52b ειδικά αντισώματα, στο πλαίσιο ενός προσδιορισμού έκκριση IFN-γ, όπου κάθε κλώνος δοκιμάσθηκε με την παρουσία ή απουσία του δραστικού πεπτιδίου. Το σχήμα 4Α δείχνει ένα παράδειγμα μιας δοκιμασίας περιορισμού MHC κατηγορίας II εκτελούνται με το CD4 Τ-κυττάρων κλώνου B2F8, η οποία αναγνώρισε πεπτίδιο C3. Όπως φαίνεται, διαπιστώσαμε ότι η αναγνώριση του αντιγόνου από τον κλώνο αναστάλθηκε ειδικά με το αντίσωμα αDR, ενώ δεν παρατηρήθηκε αναστολή ανιχνεύθηκε με αντισώματα αDP και αDQ αποκλεισμού, υποδεικνύοντας ότι αυτός ο κλώνος περιοριζόταν από το HLA-DR. Παρόμοια αποτελέσματα ελήφθησαν για τα άλλα κλώνους. Στη συνέχεια, με στόχο τον προσδιορισμό των περιορισμό αλληλόμορφο HLA-DR. HLA-DR μοριακή τυποποίηση αποκάλυψε ότι NA555 εξέφρασε την DRB1 * 01 και DRB1 * 13 αλληλόμορφα. Για να καθοριστεί ποια από αυτά τα μόρια ήταν το περιορισμό αλληλόμορφο, προκαλέσαμε τις CD4

Τ-κυττάρων + κλώνων στην παρουσία κυττάρων LDR1 (ινοβλάστες ποντικού επιμολυσμένα με HLA-DR1) ή EBV-μετασχηματισμένα Β-κυτταρικές γραμμές (EBV 149, EBV 156) που εκφράζει το αλληλόμορφο DR13. Έχουμε προ-επωάστηκαν APC με τα αντιδραστικά πεπτίδια και αξιολογείται η ικανότητά τους να παρουσιάσουν το αντίστοιχο πεπτίδιο XAGE-1b με τους κλώνους Τ-κυττάρων CD4. Οι αποκρίσεις προσδιορίστηκαν με μέτρηση της ποσότητας της ΙΡΝ-γ σε υπερκείμενα καλλιέργειας 24 ωρών, με ELISA. Για όλους τους κλώνους, ανιχνεύσαμε αναγνώριση πεπτιδίου στην παρουσία των ΕΒν κυτταρικές σειρές Β (EBV 149, EBV 156) που εκφράζει DRB1 * 13, αλλά όχι με την παρουσία των κυττάρων LDR1 (Σχήμα 4Β).

(Α ) XAGE-1b ειδικά CD4

+ Τ κύτταρα απομονώθηκαν με προσδιορισμό σύλληψης ΙΡΝ-γ. Οι αριθμοί που αναφέρονται στην άνω δεξιά περιοχή του διαγράμματα στιγμών δείχνουν τα ποσοστά ΙΡΝ-γ κύτταρα που παράγουν μεταξύ των CD4

+ Τ κύτταρα, μετά από διέγερση με την απουσία ή παρουσία της πισίνας πεπτιδίου. κύτταρα που παράγουν-γ IFN ταξινομήθηκαν και κλωνοποιήθηκαν υπό συνθήκες περιοριστικής αραίωσης. Ελήφθησαν και διαλογή για να αξιολογηθεί αντιδραστικότητα σε XAGE-1β (Β) CD4

+ Τ-κυτταρικούς κλώνους. Οι κλώνοι διεγείρονται παρουσία ή η απουσία της πισίνας πεπτιδίου και ειδικότητα στην XAGE-1b προσδιορίστηκε με ELISA. Οι αποκρίσεις θεωρήθηκαν σημαντικές όταν η ποσότητα της ΙΡΝ-γ ανιχνεύθηκε σε παρουσία πεπτιδίου ήταν τουλάχιστον 3 φορές υψηλότερη από εκείνη που ανιχνεύεται με την απουσία του πεπτιδίου. (Γ) Δείγματα των XAGE-1b ειδικά CD4

+ Τ-κυττάρων κλώνοι διεγείρονται σε απουσία ή παρουσία της ομάδας πεπτιδίου ή μεμονωμένων απλών πεπτιδίων και η ποσότητα της ΙΡΝ-γ μετρήθηκε σε υπερκείμενα καλλιέργειας 24 ωρών από ELISA. (D) Δραστικότητα να XAGE-1b μόνο πεπτιδίων εκτιμήθηκε σε 14 κλώνοι και ταυτοποιήθηκαν 4 πρόστιμο ιδιαιτερότητες.

Η

(Α) Αναγνώριση του περιορισμού μορίων MHC II. Το αριστερό πάνελ δείχνει ένα παράδειγμα ενός κλώνου δοκιμασίας περιορισμός HLA-ΙΙ, B2F8. αναγνώριση πεπτιδίων εκτιμήθηκε με ELISA, επώαση XAGE-1b ειδικά CD4

+ Τ-κυτταρικών κλώνων που εμφανίζουν κάθε ένα από τα 4 λεπτές ιδιαιτερότητες είτε απουσία ή παρουσία του αDP, αDQ, αDR και αDR52b ειδικά αντισώματα. αναγνώριση πεπτιδίων περιορίζεται από το HLA-DR σε όλες τις περιπτώσεις, όπως συνοψίζεται στο B. Το HLA-DR που περιορίζουν αλληλόμορφο ταυτοποιήθηκε με επώαση XAGE-1b ειδικά CD4

Τ-κυττάρων + κλώνοι με διαφορετικά APC συμπεριλαμβανομένων μη επιμολυσμένα (3Τ3) ή DR1 επιμολυσμένα ινοβλαστών ποντικού (LDR1) και DR13 εκφράζουν ΕΒν κυτταρικές σειρές (EBV149, EBV 156). Κάθε APC ήταν προ-επωάστηκαν με τα αντιδραστικά πεπτίδια και το περιορισμό αλληλόμορφο προσδιορίστηκε με εκτίμηση της ικανότητας τους να παρουσιάζουν τα πεπτίδια στον αντίστοιχο CD4

κλώνους + Τ-κυττάρων. αναγνώριση πεπτιδίων εκτιμήθηκε με μέτρηση της έκκρισης ΙΡΝ-γ σε υπερκείμενα καλλιέργειας, με την παρουσία του κάθε APC. Όπως συνοψίζεται, βρήκαμε ότι η αναγνώριση πεπτίδιο περιορίζεται από HLA-DR13 σε όλες τις περιπτώσεις.

Η

Συζήτηση

Στην παρούσα μελέτη, ερευνήσαμε αυθόρμητες αποκρίσεις αντισωμάτων και Τ κυττάρων στο ΤΚΑ XAGE -1β σε μία ομάδα από 141 ασθενείς του Καυκάσου NSCLC. Τα ευρήματά μας δείχνουν ότι οι ορολογικές ανταποκρίσεις σε XAGE-1β περιορίζεται σε μεγάλο βαθμό σε αδενοκαρκινώματα όπως αυτές βρίσκονται σε περίπου 13% από αυτούς, αλλά δεν ανιχνεύονται σε SCC. Λαμβάνοντας υπόψη ότι XAGE-1b έχει αναφερθεί ότι εκφράζεται σε περίπου 45% των αδενοκαρκινωμάτων [18] (αλλά μόνο το 7% των SCC), ορολογικές αποκρίσεις φαίνονται μάλλον συχνή σε αυτή την ομάδα ασθενών, να βρεθεί σε περίπου το ένα τρίτο από αυτούς . Αυτά τα αποτελέσματα είναι σύμφωνα με προηγουμένως δημοσιευμένα δεδομένα στον ιαπωνικό πληθυσμό, αναφορά ορολογικές αποκρίσεις σε XAGE-1b σε 14% των αδενοκαρκινωμάτων αλλά μόνο στο 2% των ασθενών SCC [19]. Τα δεδομένα μας δείχνουν επίσης ότι ορολογικές αποκρίσεις σε NY-ESO-1 είναι αντί πιο συχνές σε SCC από ό, τι αδενοκαρκίνωμα, όπως αυτές βρίσκονται στο 13% των SCC, αλλά μόνο στο 3% των αδενοκαρκινωμάτων από Καυκάσιους. Και πάλι αυτό είναι σύμφωνο με τα αποτελέσματα από προηγούμενες μελέτες που έχουν αναφερθεί πιο συχνές αυθόρμητες ορολογικές ανταποκρίσεις σε NY-ESO-1 σε SCC από ό, τι σε αδενοκαρκίνωμα [21]. Παρόμοια με NY-ESO-1, έχουμε αναφερθεί πρόσφατα ότι τα αντιγόνα MAGE-A, τα οποία ανήκουν επίσης στην ομάδα CTA, αναφέρθηκαν πιο συχνά εκφράζονται σε SCC, σε σύγκριση με αδενοκαρκίνωμα [22]. Μαζί, τα ευρήματά μας επιβεβαιώνουν XAGE-1b ανοσογονικότητα σε αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα, τονίζοντας τη σημασία αυτής της CTA ως μια πολλά υποσχόμενη στόχος για ανοσοθεραπεία κατά αυτόν τον υπότυπο του όγκου.

Στη μελέτη μας, διαπιστώσαμε σημαντικές XAGE-1β-ειδικά CD4

+ Τ κυτταρικές αποκρίσεις σε όλους τους οροθετικούς ασθενείς, και πάλι σύμφωνα με τα προηγούμενα δεδομένα στην ιαπωνική πληθυσμού [19]. Ιδρύσαμε κλωνικοί πληθυσμοί από ένα υψηλό ανταπόκρισης, προσδιορίστηκε ότι η αντιδραστικότητα των κλώνων ήταν προς αλληλουχίες τοποθετημένες στα πεπτίδια C3-C5, οι οποίες αντιστοιχούν στην περιοχή 9-32 αμινοξέων της πρωτεΐνης, και προσδιόρισε 4 πρόστιμο ιδιαιτερότητες της αναγνώρισης αντιγόνου. Έχουμε αποδείξει ότι, για όλες τις λεπτές ιδιαιτερότητες, η αναγνώριση πεπτίδιο περιορίζεται από HLA-DR. Με την αξιολόγηση παρουσίαση αντιγόνου χρησιμοποιώντας APC που μοιράζονται ενιαίο αλληλόμορφα HLA-DR με εκείνα του ασθενούς, διαπιστώσαμε ότι αναγνώριση αντιγόνου από τους κλώνους περιορίστηκε από το DRB1 * 13 αλληλόμορφο. Αξίζει να σημειωθεί ότι, ενώ άλλα XAGE-1b MHC τάξης έχουν II επιτόπων περιορίζεται από άλλα αλληλόμορφα έχουν αναφερθεί [19,23,24], DRB1 * 13 περιορίζεται επιτόπου που περιγράφονται εδώ δεν έχει αναφερθεί προηγουμένως.

Μερικά από τα αποτελέσματά μας έρχονται σε αντίθεση με αυτά που αναφέρονται στη βιβλιογραφία [19,25]. Από τη μία πλευρά, και οι δύο στη μελέτη μας και σε προηγούμενες μελέτες στην βιβλιογραφία [19] XAGE-1b ειδικά CD4

+ Τ κύτταρα αποκρίσεις ανιχνεύθηκαν σε όλες σχεδόν τις οροθετικούς ασθενείς NSCLC XAGE-1β. Ωστόσο, σε αντίθεση με τα αποτελέσματα μιας μελέτης αναφέρθηκε πρόσφατα [25] στη μελέτη μας, XAGE-1b ειδικά CD4

+ Τ κύτταρα που παράγονται ΙΡΝ-γ αλλά όχι της IL-17, και ως εκ τούτου εμφάνισαν μια σαφή προφίλ Th1. Επιπλέον, εντοπίσαμε ένα σημαντικό CD8

+ Τ κυτταρικής απόκρισης σε ένα μόνο από τους 12 οροθετικών ασθενών, η οποία είναι πολύ λιγότερο συχνή από τη συχνότητα του 6/9 οροθετικών ασθενών έχουν αναφερθεί στο παρελθόν στην ιαπωνική ομάδα [19]. Αυτή η διαφορά θα μπορούσε να εξηγηθεί τουλάχιστον εν μέρει από τις διαφορετικές μεθοδολογίες που χρησιμοποιήθηκαν και που μπορεί να διαφέρουν σημαντικά όσον αφορά την ευαισθησία και την ειδικότητα της ανίχνευσης. Πράγματι, ενώ εμείς αξιολογούνται CD8

+ Τ κυτταρικές αποκρίσεις σε 4 ώρες πρότυπο χρώσης ενδοκυτταρική κυτοκίνη (ICS) δοκιμασία, στην ιαπωνική μελέτη, CD8

+ Τ κυττάρων απαντήσεις σε XAGE-1b αξιολογήθηκαν από IFN-γ σύλληψη έκκριση δοκιμασίας [19]. Έτσι, είτε η συχνότητα των XAGE-1b ειδικά CD8

+ Τ κυτταρικών αποκρίσεων σε οροθετικούς ασθενείς έχει υποτιμηθεί στη μελέτη μας, λόγω της χαμηλότερης ευαισθησίας της μεθόδου που χρησιμοποιείται, ή υπερεκτιμηθεί στη μελέτη από Ohue Y et al. λόγω της χαμηλότερης εξειδίκευση του προσδιορισμού σύλληψης ΙΡΝ-γ, δύο υποθέσεις που δεν είναι αμοιβαία αποκλειστικές. Ωστόσο, υπέρ μιας υπερ-εκτίμηση του αριθμού των αληθινών XAGE-1b CD8

+ Τ κυτταρικές αποκρίσεις στην ιαπωνική μελέτη, είναι το γεγονός ότι οι ΙΡΝ-γ επίπεδα έκκρισης που λαμβάνονται σε αυτή τη μελέτη στα περισσότερα από τα CD8

+ Τ κυτταρικές καλλιέργειες κατά τη διέγερση με πεπτίδια XAGE-1b ήταν πολύ χαμηλή, κοντά στα επίπεδα υποβάθρου [19].

Εν κατακλείδι, συνολικά, τα αποτελέσματά μας υποστηρίζουν τη σημασία του αντιγόνου XAGE-1β σε Καυκάσιους ασθενείς με αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα και ενθαρρύνουν την εφαρμογή των μελλοντικών ανοσοθεραπεία αξιοποιώντας την υψηλή ανοσογονικό αυτού του αντιγόνου του πληθυσμού φετινή ασθενών.

Επιπλέον, αξίζει να σημειωθεί ότι, επειδή η έκφραση XAGE1b είναι γνωστό ότι ρυθμίζεται από μεθυλίωσης του DNA, αναστολείς μεθυλοτρανσφεράσης DNA θα μπορούσε να αυξήσει το δυναμικό πληθυσμό ασθενών είναι επιλέξιμα για XAGE-1b κατευθυνόμενη ανοσοθεραπείες, όπως αναφέρθηκε προηγουμένως στην περίπτωση του ΝΥ-ΕδΟ-1 [26]. Εξερευνώντας τη δυνατότητα αυτή θα μπορούσε να αποτελέσει αντικείμενο μελλοντικών μελετών.