Αφηρημένο

Στόχος

Η απορρύθμιση της FOXM1 έχει τεκμηριωθεί σε διάφορες καρκίνους. Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να αξιολογηθεί ο ρόλος της FOXM1 στην ογκογένεση με καρκίνο των ωοθηκών και την αντοχή paclitaxel.

Πειραματικός Σχεδιασμός

Η έκφραση της FOXM1 εξετάστηκε σε 119 κλινικά δείγματα από ανοσοϊστοχημεία και συσχετίζεται με κλινικοπαθολογοανατομικές παραμέτρους . Επιδράσεις της FOXM1 νοκ ντάουν για τη μετανάστευση των ωοθηκών καρκινικών κυττάρων, την εισβολή και την μιτωτική καταστροφή μελετήθηκαν επίσης. qPCR και το chip-qPCR χρησιμοποιήθηκαν για τη δημιουργία KIF2C ως νέου γονιδίου-στόχου FOXM1 εμπλέκεται σε χημειοαντίσταση.

Αποτελέσματα

Υψηλή έκφραση της πυρηνικής FOXM1 στον καρκίνο των ωοθηκών δείγματα ασθενών ήταν σημαντικά σχετίζεται με προχωρημένα στάδια (

P

= 0.035), μικρότερη συνολική (

P

= 0,019) και ελεύθερη νόσου (

P

= 0,014) επιβίωση. Η πολυπαραγοντική ανάλυση επιβεβαίωσε την έκφραση FOXM1 ως ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας για τον καρκίνο των ωοθηκών. FOXM1 knockdown αναστέλλει σημαντικά τη μετανάστευση και την εισβολή των καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών και ενισχυμένη paclitaxel μεσολάβηση κυτταρικό θάνατο και μιτωτική καταστροφή σε ρ53-ανεξάρτητο τρόπο. ανάλυση Βιοπληροφορική πρότεινε μια σειρά πιθανών στόχων μεταγραφή του FOXM1. Ένας από τους πιθανούς στόχους, KIF2C, εμφάνισαν παρόμοιο μοτίβο έκφρασης για να FOXM1 σε νόσο ευαίσθητη και στη χημειοθεραπεία κύτταρα σε απόκριση προς την αγωγή με πακλιταξέλη. FOXM1 θα μπορούσαν να ανιχνευθούν στο υποστηρικτής της KIF2C και FOXM1 φίμωσης σημαντικά κάτω-ρυθμίζονται KIF2C.

Συμπέρασμα

Τα ευρήματά μας υποδηλώνουν ότι FOXM1 σχετίζεται με κακή έκβαση των ασθενών και συμβάλλει στην αντίσταση πακλιταξέλη μπλοκάροντας μιτωτικής καταστροφή. KIF2C ταυτοποιείται ως νέου μεταγραφικού στόχου FOXM1 που μπορεί να εμπλέκονται στην απόκτηση του χημειοαντίσταση. FOXM1 θα πρέπει να διερευνηθεί περαιτέρω ως πιθανή προγνωστικός δείκτης και θεραπευτικός στόχος για τον καρκίνο των ωοθηκών

Παράθεση:. Zhao F, Siu MKY, Jiang L, Tam KF, Ngan HYS, Le XF, et al. (2014) Η υπερέκφραση του Forkhead Box πρωτεΐνης Μ1 (FOXM1) σε καρκίνο των ωοθηκών συσχετίζεται με κακή επιβίωση των ασθενών και συμβάλλει στην πακλιταξέλη Αντίσταση. PLoS ONE 9 (11): e113478. doi: 10.1371 /journal.pone.0113478

Συντάκτης: Vladimir V. Kalinichenko, Ιατρικό Κέντρο Νοσοκομείο Σινσινάτι των παιδιών, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 24 Φεβ 2014? Αποδεκτές: 28 Οκτώβρη του 2014? Δημοσιεύθηκε: 20 Νοέμβρη του 2014

Copyright: © 2014 Zhao et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Fung Zhao είναι αποδέκτης μιας κοινής studentship HKU-ICL. Ana Gomes είναι ένας μεταδιδακτορικός υπότροφος υποστηρίζεται από Cancer Research UK. Laura Bella υποστηρίζεται από μια υποτροφία από την εκστρατεία του Καρκίνου του Μαστού. Pasarat Khongkow υποστηρίζεται από υποτροφίες από το Royal Thai Αυτοδιοίκησης. το έργο του Eric Lam υποστηρίζεται από επιχορηγήσεις από τον Καρκίνο του Μαστού Εκστρατεία και Cancer Research UK. έργο Annie Cheung υποστηρίζεται με τη χρηματοδότηση από το Συμβούλιο Κονδυλίων Έρευνας του Χονγκ Κονγκ. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος των ωοθηκών είναι η πιο θανατηφόρα γυναικολογικό καρκίνο σε όλο τον κόσμο, όπως οι περισσότεροι ασθενείς, όταν διαγνωσθεί, παρουσιάζονται με προχωρημένη νόσο [1]. Παρά το γεγονός ότι η βελτίωση στην μέση επιβίωση έχει παρατηρηθεί τις τελευταίες δεκαετίες, η υποτροπή και θνησιμότητας παραμένουν σε υψηλά επίπεδα οφείλεται εν μέρει στην απόκτηση χημειοαντίσταση [2]. Ένας συνδυασμός πακλιταξέλης και καρβοπλατίνη έχει ευρέως χρησιμοποιηθεί ως χημειοθεραπεία πρώτης γραμμής για τους ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών. Η πακλιταξέλη δρα ειδικά κατά τη φάση G2-M του κυτταρικού κύκλου μέσω επαγωγής ανώμαλη ατράκτους και διατάραξη της δυναμικής των μικροσωληνίσκων, εμποδίζοντας έτσι την εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου. Παρά την αρχική αποτελεσματικότητά της ως θεραπευτικό του καρκίνου παράγοντα, στις περισσότερες περιπτώσεις, οι ασθενείς τελικά να γίνει ευαίσθητος στην πακλιταξέλη χημειοθεραπεία με βάση και υποτροπής. Επομένως, είναι ζωτικής σημασίας για την ταυτοποίηση νέων προγνωστικών δεικτών και θεραπευτικών στόχων, ιδιαίτερα γονίδια που σχετίζονται με μετάσταση και η αντίσταση των ναρκωτικών.

Forkhead box (FOX) πρωτεΐνες ανήκουν σε μια υπεροικογένεια εξελικτικά συντηρημένη μεταγραφικούς παράγοντες υπεύθυνοι για την χωροχρονική πρόστιμο -tuning μιας ευρείας ρεπερτόριο μεταγραφικών προγραμμάτων που απαιτούνται για την κανονική ομοιόσταση και ανάπτυξη [3]. Μεταξύ των οποίων, forkhead πρωτεΐνη κουτί Μ1 (FOXM1) συμμετέχει σε ένα ευρύ φάσμα των βιολογικών διεργασιών που συμπεριλαμβάνουν τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, στην εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου, κυτταρική διαφοροποίηση, την επισκευή βλάβης του DNA, την ομοιόσταση των ιστών, την αγγειογένεση και την απόπτωση [4], [5]. Επομένως, δεν προκαλεί έκπληξη το γεγονός ότι η απορρύθμιση του FOXM1 θα μπορούσε να οδηγήσει σε σοβαρές παθολογικές καταστάσεις, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου. Πράγματι, FOXM1 υπερέκφραση έχει τεκμηριωθεί σε καρκίνους του πνεύμονα, του μαστού, του ήπατος, του προστάτη και του παχέος εντέρου, κλπ υποδηλώνοντας ότι FOXM1 έχει έναν βασικό ρόλο στην ογκογένεση [3], [6]. Πρόσφατα, έχει δειχθεί ότι απορυθμισμένη έκφραση FOXM1 μπορεί να προσδώσει αντίσταση σε χημειοθεραπευτικά φάρμακα, όπως η σισπλατίνη και επιρουβικίνη, προστατεύοντας τα κύτταρα από βλάβη του DNA που προκαλείται από τον κυτταρικό θάνατο, και την διατάραξη της μιτωτικής οδοφράγματος [7] – [9].

σε αυτή τη μελέτη, διερευνήσαμε την μορφή έκφρασης του FOXM1 στον καρκίνο των ωοθηκών. Οι επιδράσεις της έκφρασης FOXM1 για τη μετανάστευση των καρκινικών κυττάρων, εισβολή και αντίσταση πακλιταξέλη μελετήθηκαν επίσης σε μια προσπάθεια να αξιολογήσει FOXM1 ως πιθανή μοριακή προγνωστικός δείκτης και θεραπευτικός στόχος για τον καρκίνο των ωοθηκών. Περαιτέρω αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν για τον εντοπισμό KIF2C ως μεταγραφικός στόχος μυθιστόρημα FOXM1 που θα μπορούσαν να εμπλέκονται στην απόκτηση χημειοαντίσταση.

Υλικά και Μέθοδοι

Κλινικά δείγματα και κυτταρικές σειρές

Αρχειακή ενσωματωμένα σε παραφίνη κομμάτια ιστού από το έτος 1987-2004 ανακτήθηκαν από το Τμήμα Παθολογίας, Νοσοκομείο Queen Mary, Πανεπιστήμιο του Χονγκ Κονγκ. Τα δείγματα που περιλαμβάνονται 2 καλοήθεις cystadenomas, 2 οριακά όγκους, 94 πρωτογενή καρκινώματα και 21 μεταστατικές εστίες καρκίνου (σε συνδέσμου, του εντέρου, των λεμφαδένων και ορογόνο της μήτρας). Όλοι οι ασθενείς με καρκίνωμα υποβλήθηκαν σε χειρουργική επέμβαση που ακολουθείται από την κλασική χημειοθεραπεία πρώτης γραμμής συμπεριλαμβανομένης της πλατίνας /paclitaxel. Η περίοδος παρακολούθησης κυμαινόταν από 5 έως 209 μήνες (διάμεση τιμή 63 μήνες). Η χρήση αυτών των δειγμάτων εγκρίθηκε από το Ethical Review Board Θεσμική. Κάθε δείγμα ασθενής αξιολογήθηκε από παθολόγους και εξασφάλισε να περιέχουν περισσότερο από 70% των κυττάρων του όγκου.

Ο καρκίνος των ωοθηκών κυτταρικές σειρές SKOV-3 και OVCAR-3 αγοράστηκαν από την American Type Culture Collection (Manassas, VA, USA). κύτταρα SKOV3-TR ήταν ένα γενναιόδωρο δώρο από τον Δρ Lawrence XF Le (Division of Cancer Medicine, University of Texas M.D. Anderson Κέντρο Καρκίνου, Χιούστον, Τέξας, ΗΠΑ) [10]. PEO1 και PEO1-TaxR έχουν αναπτυχθεί πρόσφατα κυτταρικές σειρές και έχουν επικυρωθεί στην εγκατάσταση Cancer Research UK. Η χρήση των PEO1 και PEO1-TaxR αντί του SKOV-3 και SKOV3-TR για μερικά πειράματα προσφέρει επιπλέον μέσο για να εξασφαλιστεί ότι ανθεκτικά μηχανισμοί που προσδιορίζονται στην SKOV-3 και SKOV3-TR είναι κοινές σε όλες πακλιταξέλη ανθεκτικά καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών και όχι μοναδική για SKOV-3 και SKOV3-TR. Είναι σημαντικό, τόσο PEO1 και PEO1-TaxR διατηρούνται σε χαμηλότερα περάσματα για να αποφευχθεί παρασύρει στην αντίσταση και την απόκτηση δευτερεύουσας μεταλλάξεων [10] [11]. OVCAR-3 καλλιεργήθηκε σε 1:01 Μέσο 199 (Invitrogen, CA, USA): MCDB105 (Sigma, ΜΟ, USA) συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου βοός (FBS) και 100 μονάδες /ml πενικιλλίνη-στρεπτομυκίνη (Invitrogen). SKOV3, SKOV3-TR, PEO1 και PEO1-TaxR καλλιεργήθηκαν σε RPMI1640 (Sigma) συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου βοός (FBS) και 100 μονάδες /ml πενικιλλίνη-στρεπτομυκίνη (Invitrogen). PEO1-TaxR συμπληρώθηκε με 50 ηΜ paclitaxel. Όλες οι κυτταρικές γραμμές διατηρήθηκαν στους 37 ° C σε υγροποιημένο επωαστή με 5% CO

2. μέσο καλλιέργειας κυττάρων άλλαζε κάθε 3 έως 5 ημέρες, ανάλογα με την κυτταρική πυκνότητα. Για τη συνήθη διέλευση, όταν τα κύτταρα έφθασαν 85% έως 90% συρροή, που χωρίστηκαν σε αναλογία 1:04.

Ανοσοϊστοχημεία

Η ανοσοϊστοχημεία πραγματοποιήθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [12], [13 ]. Εν συντομία, τομές παραφίνης μονιμοποιηθεί με φορμαλίνη επωάστηκαν με αντι-FOXM1 αντίσωμα (NBP1-30961, 1:40 Novus Biologicals, CO, USA) σε θερμοκρασία δωματίου όλη τη νύκτα και χρωματίστηκαν χρησιμοποιώντας EnVision + διττό σύστημα σύνδεσης (K4061? Dako, CA, USA) . Το αντιγόνο ανάκτηση πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας ρυθμιστικό EDTA, ρΗ 8.0, σε μια χύτρα ταχύτητας για 30 λεπτά. Όλα τα τμήματα αξιολογήθηκαν από δύο ανεξάρτητους ερευνητές. Η ανοσοαντιδραστικότητα του αντισώματος FOXM1, την ένταση των χρωματισμένων κυττάρων και τα ποσοστά τους μετρήθηκαν ως προς την ένταση και το ποσοστό βαθμολογιών αντίστοιχα. Το ποσοστό βαθμολογίας κυμαίνεται από 0 έως 4: 0 = & lt? 5% θετικά χρωματισμένων κυττάρων, 1 = 5-25% θετικά χρωματισμένων κυττάρων, 2 = 26-60% θετικά χρωματισμένων κυττάρων, 3 = 61-85% των θετικά χρωματισμένα κύτταρα, και 4 = 86-100% θετικά χρωματισμένων κυττάρων. Ανοσοϊστοχημική (IHC) σκορ (0-16) υπολογίστηκε πολλαπλασιάζοντας το σκορ ένταση (0-4) και το ποσοστό σκορ (0-4), με μέγιστη βαθμολογία των 16 [12], [13]. FOXM1 πυρηνικά και κυτταροπλασματικά ανοσοαντιδραστικότητες βαθμολογήθηκαν χωριστά.

κηλίδος Western

Τα κύτταρα συλλέχθηκαν με ρυθμιστικό διάλυμα λύσης [0.125 Μ Tris, ρΗ 6,8 στους 22 ° C που περιέχει 1% ΝΡ-40 (ν /ν ), 2 mM αιθυλενοδιαμινοτετραοξικό οξύ (EDTA), 2 mM Ν-αιθυλμηλεϊμιδίου, 2 mM φαινυλομεθανοσουλφονυλο φθοριδίου (PMSF), 1 mM ορθοβαναδικό νάτριο και 0.1 μm okadate νάτριο] και φυγοκεντρήθηκε στους 4 ° C για 10 λεπτά. Η συγκέντρωση πρωτεΐνης προσδιορίστηκε με (DC) δοκιμασία πρωτεΐνης συμβατό με το απορρυπαντικό (Bio-Rad). Είκοσι μικρογραμμάρια πρωτείνης διαχωρίστηκαν με ηλεκτροφόρηση δωδεκύλ θειικού νατρίου-πολυακρυλαμιδίου (SDS-PAGE), μεταφέρθηκαν σε μεμβράνη διφθοριούχου πολυβινυλιδενίου και υβριδίστηκε με τους ακόλουθους αντι-σώματα: anti-FOXM1 (sc-502, Santa Cruz Biotechnology, CA, USA) , αντι-κασπάση 9 (9502, Cell Signaling Technology, ΜΑ, USA), αντι-KIF2C (WH0011004M1, Sigma), αντι-Caspase 7 (9492, Cell Signaling) και αντι-β-τουμπουλίνης (sc-9104, Santa Cruz Biotechnology ).

Ποσοτική PCR πραγματικού χρόνου

ποσοτική πραγματικού χρόνου PCR (qPCR) εκτελέστηκε με τη χρησιμοποίηση ρεύματος SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems) και αναλύθηκε με ABI7900 Σύστημα ανίχνευσης αλληλουχίας (Applied Biosystems ). L19 (RPL 19), μια μη ρυθμιζόμενη ριβοσωμικού γονιδίου καθαριότητας χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικός έλεγχος για ομαλοποίηση χρησιμοποιώντας το δέλτα δέλτα μέθοδο Ct. Οι ακόλουθοι εκκινητές χρησιμοποιήθηκαν:

KIF2C Forward 5 ‘προς 3’: CATGATTGCCACGATCTCAC

KIF2C Αντίστροφη 5 ‘προς 3’: CGTTAGAGCAGGCTTCCATC

L19 Forward 5 ‘προς 3’: GCGGAAGGGTACAGCCAAT

L19 Αντίστροφη 5 ‘προς 3’: GCAGCCGGCGCAAA

Παροδική νοκ ντάουν της FOXM1

ON-TARGET Πλέον Ανθρώπινο FOXM1 siRNA και μη στόχευση siRNAs Ελέγχου (Thermo Scientific, CO , USA) χρησιμοποιήθηκαν για παροδικές αποσιώπηση των FOXM1 χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο επιμόλυνσης Oligofectamine (Invitrogen) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.

In Vitro

τη μετανάστευση και την εισβολή δοκιμασίες

In Vitro

προσδιορισμούς μετανάστευσης και εισβολής διεξήχθησαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [12], [13]. Εν συντομία, 1,25 × 10

5 κύτταρα τοποθετήθηκαν στο επάνω διαμέρισμα του θαλάμου Transwell (Corning Life Sciences, ΜΑ, USA). Για τις δοκιμασίες μετανάστευσης, τα κύτταρα αφέθηκαν να μεταναστεύσουν μέσω μιας μεμβράνης ζελατίνης με λεπτό υμένιο. Για τις δοκιμασίες εισβολή, τα κύτταρα αφέθηκαν να εισβάλλουν μέσω μιας μεμβράνης Matrigel με λεπτό υμένιο. Μετά από 24 ώρες, τα κύτταρα επί της άνω πλευράς της μεμβράνης απομακρύνθηκαν και τα μετεγκατεστημένα ή εισέβαλαν κύτταρα σταθεροποιήθηκαν, χρωματίστηκαν και μετρήθηκαν.

TdT μεσολάβηση τέλος επισήμανση dUTP nick (TUNEL) δοκιμασίας και η αξιολόγηση των μιτωτικό δείκτη καταστροφή

Μετά FOXM1 knockdown για 48 ώρες και αγωγή με πακλιταξέλη (50 ηΜ) για 24 ώρες, δοκιμασία TUNEL διεξήχθη χρησιμοποιώντας Ιη Situ Death Detection Kit (Roche Biochemical, ΙΝ, USA) ακολουθώντας το πρωτόκολλο του κατασκευαστή [14]. Αποπτωτικών και μιτωτικά σχήματα καταστροφή αξιολογήθηκαν υπό μικροσκόπιο φθορισμού. Μιτωτικά σχήματα καταστροφή παρατηρήθηκαν από μορφολογικές αλλαγές σε πυρήνες (χρώση DAPI) [10]. Περισσότερα από 1000 βιώσιμων κυττάρων σε κάθε πείραμα εξετάστηκαν και ο μιτωτικός δείκτης καταστροφή αξιολογήθηκε ως ποσοστά των κυττάρων που μετρήθηκαν. Κάθε δοκιμασία διεξήχθη εις τριπλούν.

κυτταρικού κύκλου ανάλυση

Η ανάλυση κυτταρικού κύκλου εκτελέσθηκε με βαφή ιωδιούχου προπιδίου, όπως περιγράφεται προηγουμένως [15]. Εν συντομία, οι δύο προσκολλημένα και εναιώρημα κύτταρα συλλέχθηκαν και χρωματίστηκαν με ιωδιούχο προπίδιο (1 mg /mL) σε παρουσία άνευ ϋΝάσης RNase για ανάλυση κυτταρομετρίας ροής. προφίλ κυτταρικού κύκλου αναλύθηκε χρησιμοποιώντας το λογισμικό ΟβΙΙ Diva (Becton Dickinson UK Ltd.).

χρωματίνης Ανοσοκαταβύθιση

40 μΙ Dynabeads Πρωτεΐνης Α (10002D, Invitrogen) πλύθηκε με 200 μΙ TSE Ι ρυθμιστικού τρεις φορές και αραιώνεται με 40 μΙ TSE Ι ρυθμιστικού. Αντι-FOXM1 (sc502, Santa Cruz Biotechnology) (4 μα) και ελέγχου κουνελιού IgG (X0903, ϋΑΚΟ) (4 μα) πρώτα χωριστά αραιώνονται σε Ρυθμιστικό D, που αναμιγνύεται με αραιωμένο Dynabeads και στη συνέχεια περιστρέφεται ο /η στους 4 ° C. PEO1 και PEO1-TaxR κύτταρα σε 90% συρροή σε 100 mm δίσκου καλλιέργειας συνδέθηκαν σταυροειδώς με 1% φορμαλδεΰδη για 10 λεπτά, ξεπλύθηκαν με παγωμένο PBS και επωάστηκαν με 2.5 Μ γλυκίνη για 5 λεπτά. Τα κύτταρα στη συνέχεια συλλέχθηκαν με 2 ml ρυθμιστικού διάλυσης. Μετά από μια διαδοχική πλύση με PBS, Ρυθμιστικό Ι και II Buffer, κυτταρικό ίζημα επαναιωρήθηκε σε 300 μΐ ρυθμιστικού Λύσης και υποβλήθηκε σε κατεργασία υπερήχων κάτω από βελτιστοποιημένες συνθήκες (20 λεπτά με 30 s για 30 s και εκτός). Το υπερκείμενο αραιώθηκε τότε σε 300 μΙ ρυθμιστικού D από τα οποία 100 μΙ ελήφθη ως έλεγχος INPUT. 200 μΐ κυτταρολύματος αναμίχθηκαν με παρασκευασμένα Dynabeads και περιστρέφεται ο /η στους 4 ° C. Μετά από μια διαδοχική πλύση με TSE I, II TSE, Ρυθμιστικό III και ρυθμιστικό διάλυμα ΤΕ, 100 μΙ ρυθμιστικού διαλύματος έκλουσης προστέθηκε στα Dynabeads και το μίγμα περιστράφηκε σε θερμοκρασία δωματίου για 1 ώρα. Εκλούεται δείγμα συλλέχθηκε σε eppendorf και οι Dynabeads επανα-εκλούεται με άλλα 100 μΙ ρυθμιστικού διαλύματος έκλουσης. 200 μΙ δείγματος απο-διασταυρώνεται με επώαση στους 65 ° C Ο /Ν. PCR Purification Kit (Qiagen) χρησιμοποιήθηκε στη συνέχεια για τον καθαρισμό του DNA. Ποσοτική PCR πραγματικού χρόνου πραγματοποιήθηκε με τους ακόλουθους εκκινητές: KIF2C (Forward 5 ‘προς 3’: GCCAAGTCTCCAACTTGCTC? Αντίστροφα 5 ‘προς 3’: TTCCCAACCATCTTCCTACG)

τσιπ qPCR δεδομένα κανονικοποιήθηκε προς έλεγχο IgG και απεικονίζονται. ως είσοδο τοις εκατό. Σύνθεση των ρυθμιστικών ήταν παρατίθενται στον Πίνακα 1.

Η

Η στατιστική ανάλυση

Η στατιστική ανάλυση έγινε με το στατιστικό πακέτο για τις Κοινωνικές Επιστήμες έκδοση 19.0 για Windows (IBM). Σύγκριση μεταξύ δύο ομάδων μη-παραμετρικών στοιχείων πραγματοποιήθηκε με Mann-Whitney

U

-test. Πιθανότητα επιβίωσης αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας την προσέγγιση Kaplan-Meier. Η πολυπαραγοντική ανάλυση των προγνωστικών παραγόντων πραγματοποιήθηκε με τη χρήση μοντέλου παλινδρόμησης Cox.

P

-τιμές των & lt? 0,05 θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές

Αποτελέσματα

FOXM1 υπερέκφραση συσχετίζεται με κακή επιβίωση

Η έκφραση της πυρηνικής FOXM1. σε ωοθηκών καλοήθεις και οριακά όγκων καθώς και διηθητικού καρκίνου αξιολογήθηκε με ανοσοϊστοχημεία. Ωοθηκών εμφανίζεται ισχυρότερη χρώση των πυρηνικών FOXM1 από καλοήθεις και οριακά όγκους. Ωστόσο, δεν υπήρξε σημαντική διαφορά στην έκφραση FOXM1 μεταξύ πρωτογενών καρκινωμάτων και μεταστατικές εστίες τους (

P

= 0.6). Υψηλότερη έκφραση της πυρηνικής FOXM1 συσχετίστηκε σημαντικά με προχωρημένα στάδια του καρκίνου των ωοθηκών (

P

= 0.035) (Εικ. 1Α). Αν και δεν φθάνει στατιστική σημασία, FOXM1 υπερέκφραση εμφανίζεται μια τάση που σχετίζονται με ορώδες ιστολογικό τύπο (

P

= 0,142), καρκίνους υψηλής ποιότητας (κακή διαφοροποίηση) (

P

= 0.235) και χημειοαντίσταση (

P

= 0,282) (Πίνακας 2). Προκειμένου να μελετηθεί η συσχέτιση της έκφρασης FOXM1 με αποτέλεσμα οι ασθενείς, οι ασθενείς ταξινομήθηκαν σε δύο ομάδες χρησιμοποιώντας το σημείο αποκοπής της βαθμολογίας IHC & gt? 0. Όπως φαίνεται στο συνολικό οικόπεδο επιβίωσης Kaplan-Meier (Εικ. 1Β), οι ασθενείς με αρνητική χρώση FOXM1 είχαν σημαντικά μεγαλύτερη συνολική (

P

= 0,019) και την επιβίωση ελεύθερη νόσου (

P

= 0,014) από εκείνες με θετική έκφραση FOXM1. Η πολυπαραγοντική ανάλυση έδειξε εξέλιξη υψηλή έκφραση του FOXM1, προχωρημένα στάδια του καρκίνου και κακή ιστολογική διαφοροποίηση (υψηλής ποιότητας) βρέθηκαν να είναι ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες για σύντομη συνολική επιβίωση (95% CI, 0,906 έως 5,754, HR 2.283,

P

= 0,08? 95% CI, 0,953 έως 5,963, HR 2.384,

P

= 0,06? 95% CI, 2,137 έως 40,638, HR 9.318,

P

= 0,003, αντίστοιχα) και ασθένειες επιβίωση χωρίς εξέλιξη (95% CI, 1,025 έως 6,631, HR 2.607,

P

= 0,04? 95% CI, 1,039 έως 6,555, HR 2,61,

P

= 0,04? 95% CI, 1.821 -35.091, HR 7.993,

P

= 0,006, αντίστοιχα). Είναι ενδιαφέρον ότι, κυτταροπλασματική χρώση FOXM1 ανιχνεύθηκε επίσης εκτός από πυρηνική έκφραση, αλλά καμία στατιστικά σημαντική συσχέτιση με κλινικοπαθολογικών παραμέτρων παρατηρήθηκε (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα).

Α, Αντιπροσωπευτικές εικόνες της ανοσοαντιδραστικότητας των πυρηνικών FOXM1 σε (Ι) καλοήθη κυσταδένωμα, (II) οριακά όγκου, (III) στάδιο Ι διηθητικό καρκίνο, (IV) το στάδιο II διηθητικό καρκίνο, (V) στάδιο III διηθητικό καρκίνο και (VI) το στάδιο IV διηθητικό καρκίνο. Μεγεθύνσεις X400. Ένθετα: Περιφέρειες με υψηλότερες μεγεθύνσεις από χρώση των πυρηνικών FOXM1. Β, Αθροιστική συνολική και ελεύθερη νόσου επιβίωση οικόπεδα χρησιμοποιώντας την προσέγγιση Kaplan-Meier.

Η

Παροδική νοκ ντάουν της FOXM1 αναστέλλει SKOV-3 κυτταρική μετανάστευση και την εισβολή

επόμενο μελετηθεί ο ρόλος του FOXM1 σε εξέλιξης του καρκίνου των ωοθηκών.

In Vitro

Transwell προσδιορισμοί χρησιμοποιούνται για να μελετηθούν τα αποτελέσματα της παροδικής σίγηση του FOXM1 για τον καρκίνο κυτταρική κινητικότητα και την εισβολή των ωοθηκών. Σημαντικά μειωμένη μετανάστευση και εισβολή (

P

& lt? 0,05) παρατηρήθηκε σε SKOV-3 κύτταρα επιμολυσμένα με ON-TARGET Πλέον Ανθρώπινο FOXM1 siRNA (siFOXM1) σε σύγκριση με κύτταρα επιμολυσμένα με έλεγχο siRNA (siControl), υποδεικνύοντας ότι knockdown του FOXM1 ήταν ικανή να αναστέλλει τη μετανάστευση και την εισβολή των κυττάρων SKOV3 (Εικ. 2).

A. Εκπρόσωπος εικόνες που δείχνουν κύτταρα μετανάστευσαν (μεμβράνης επικαλυμμένες με ζελατίνη) ή εισέβαλε (matrigel επικαλυμμένο με μεμβράνη) μετά από 24 ώρες. Β Εκπρόσωπος Western Blot ανάλυση που αποδεικνύει την αποτελεσματικότητα της FOXM1 παροδική νοκ ντάουν στον SKOV-3. C. Γραφική αναπαράσταση της μετανάστευσης (αριστερό πάνελ) και εισβολή (δεξιός πίνακας) τα αποτελέσματα ως φορές μεταβολής μετανάστευσαν και εισέβαλαν κυττάρων σε σχέση με τον έλεγχο, αντίστοιχα, σε πέντε τομείς φρεατίων εις τριπλούν από τρία ανεξάρτητα πειράματα? * P & lt? 0,05, σημαντικό? Mann-Whitney

U

-τεστ.

Η

θεραπεία πακλιταξέλη ρυθμίζει αρνητικά την έκφραση των FOXM1 στο SKOV-3, αλλά όχι στην πακλιταξέλη ανθεκτικά SKOV3-TR

ενόψει της χρώσης δείχνει IHC που αυξημένη έκφραση FOXM1 σχετίζεται με κακή πρόγνωση και έτσι χημειοαντίσταση, ένα ζευγάρι των καθιερωμένων ωοθηκών κυτταρική σειρά καρκίνου ευαίσθητα και ανθεκτικά στην πακλιταξέλη, δηλαδή SKOV-3 και SKOV3-TR αντίστοιχα, χρησιμοποιήθηκαν για να μελετηθεί η επίδραση της αγωγή με πακλιταξέλη για την έκφραση της FOXM1. Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με πακλιταξέλη (100 ηΜ) και συλλέχθηκαν σε διάφορα χρονικά σημεία 0, 8, 16, 24, 48 και 72 ώρες. Περιέργως, ανοσοκηλίδωση έδειξε έκφραση FOXM1 να μειωθεί σε 48 ώρες και 72 ώρες σε SKOV-3. Ωστόσο, η έκφραση FOXM1 παρέμεινε σχετικά σταθερή σε υψηλά επίπεδα σε SKOV3-TR μετά την αγωγή με πακλιταξέλη (Εικ. 3), γεγονός που υποδηλώνει ένα ρόλο του FOXM1 στη διαμεσολάβηση αντίσταση paclitaxel σε καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών. Αξίζει να σημειωθεί ότι, εκεί επίσης φαίνεται να είναι μόνο οριακές αυξήσεις στην έκφραση της διασπασμένης κασπάσης-9 και κασπάση-7 και στις δύο SKOV-3 και SKOV3-TR μετά την αγωγή με πακλιταξέλη, υποδηλώνοντας ότι η απόπτωση μπορεί να μην είναι ο κυρίαρχος μηχανισμός της επαγωγής κυτταρικού θανάτου σε αυτά κύτταρα καρκινώματος ωοθήκης.

Η πακλιταξέλη ευαίσθητος ανθεκτικά SKOV3-TR καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών SKOV-3 και υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 100 ηΜ paclitaxel και συλλέχθηκαν στους χρόνους που δείχνονται για ανάλυση στυπώματος Western. αγωγή με πακλιταξέλη κάτω ρυθμισμένη έκφραση FOXM1 κατά χρονικά σημεία 48 ώρες και 72 ώρες σε SKOV-3 αλλά όχι σε SKOV3-TR όπως δείχνεται με ανοσοκηλίδωση. Δεν υπήρχαν επίσης εμφανείς μεταβολές στη διασπασμένη κασπάση-9 και κασπάση-7 έκφραση.

Η

Παροδική αποσιώπηση του FOXM1 ενισχύει σημαντικά paclitaxel μεσολάβηση μιτωτική καταστροφή

προηγουμένως έδειξαν ότι η πακλιταξέλη σκοτώνει ωοθηκών καρκινικά κύτταρα κατά κύριο λόγο με διέγερση μιτωτική καταστροφή και όχι απόπτωση στα κύτταρα [10]. Για να διευκρινιστεί ο πιθανός ρόλος των FOXM1 σε χημειοαντίσταση καρκίνο των ωοθηκών, SKOV-3 και OVCAR3 κυτταρικές γραμμές καρκίνου των ωοθηκών υποβλήθηκαν σε αγωγή με πακλιταξέλη για 24 ώρες μετά την εξάντληση FOXM1 με siRNA, χρωματίστηκαν με ϋΑΡΙ και εξετάστηκαν με μικροσκοπία φθορισμού. Το αποτέλεσμα έδειξε υπήρξε αυξημένος αριθμός πολλαπλών εμπύρηνων κυττάρων (βέλος) σε καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών με FOXM1 knockdown (

P

= 0,03 και 0,01, αντίστοιχα) (Σχ. 4), γεγονός που υποδηλώνει μείωση FOXM1 σημαντικά ενισχυμένη paclitaxel μεσολάβηση καταστροφή μιτωτική τόσο SKOV-3 και OVCAR3. Είναι αξιοσημείωτο ότι η απόπτωση ήταν μόλις ανιχνεύσιμη σε αυτά τα κύτταρα πακλιταξέλη φάρμακο. Αυτό πιθανώς οφείλεται στο γεγονός ότι τόσο SKOV-3 και OVCAR3 λιμάνι δυσλειτουργική p53, και λειτουργική ρ53 απαιτείται για την πακλιταξέλη επαγόμενη απόπτωση σε καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών.

SKOV-3 και OVCAR3 κύτταρα επιμολυσμένα με είτε siRNA πισίνες κατά FOXM1 ή ομάδες siRNA ελέγχου υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με πακλιταξέλη (100 ηΜ) και χρωματίστηκαν με ϋΑΡΙ. Α Αντιπροσωπευτικά αποτελέσματα χρώσης έδειξαν δείχνει ότι παροδική FOXM1 νοκ ντάουν σημαντικά ενισχυμένη paclitaxel που προκαλείται από μιτωτική καταστροφή (βέλος) σε SKOV-3 και OVCAR3 κύτταρα αντίστοιχα (Άνω πάνελ). Β Γραφήματα αντιπροσωπεύουν τα αποτελέσματα από τρία ανεξάρτητα πειράματα, που δείχνουν το ποσοστό των κυττάρων που υφίστανται μιτωτικών καταστροφή, * Ρ & lt? 0,05, σημαντικά? Mann-Whitney

U

-τεστ.

Η

FOXM1 νοκ ντάουν προκαλεί μέτριες αυξήσεις στη συσσώρευση των G2 /νεκρά κύτταρα Μ και μετά την αγωγή με πακλιταξέλη στην ανθεκτική κυτταρική γραμμή SKOV3-TR

η ανάλυση κυτταρικού κύκλου στη συνέχεια διεξήχθη για τη διαλεύκανση του ρόλου των FOXM1 σε paclitaxel μεσολάβηση κυτταρικό θάνατο. Για το σκοπό αυτό, SKOV-3 και SKOV3-TR κύτταρα επιμολύνθηκαν παροδικά με τον έλεγχο και την FOXM1 siRNA για 48 ώρες και καλλιεργούνται παρουσία ή απουσία θεραπείας paclitaxel (100 ηΜ) για 48 ώρες. Τα προκύπτοντα κύτταρα συλλέχθηκαν, υπέστησαν χρώση με ιωδιούχο προπίδιο και υποβλήθηκαν σε ανάλυση κυτταρομετρίας ροής. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η πακλιταξέλη που επάγεται σημαντικά επίπεδα κυτταρικού θανάτου (πληθυσμός υπο-G1) σε SKOV-3 κύτταρα επιμολυσμένα με είτε FOXM1 ή να ελέγχουν πισίνα siRNA (Σχ. 5Α, άνω πάνελ). Αύξηση του αριθμού των κυττάρων συσσωρευμένων με υπο-G1 περιεχόμενα DNA σε SKOV3-TR με FOXM1 knockdown (8,1%) (Σχ. 5Α, άνω πάνελ) σε σύγκριση με SKOV3-TR επιμολυσμένα με έλεγχο siRNA (4,2%) (Σχ. 5Α, άνω πάνελ ), γεγονός που υποδηλώνει FOXM1 συμβάλλει στην αντίσταση paclitaxel σε καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών και ότι η FOXM1 σίγηση μπορεί να ενισχύσει paclitaxel μεσολάβηση κυτταρικό θάνατο. Κατά την αγωγή με πακλιταξέλη, μια μέτρια αύξηση σε κύτταρα αποκλεισμένα σε G2 /M φάση παρατηρήθηκε επίσης σε SKOV3-TR σε επεξεργασία με siRNA κατά FOXM1 σε σύγκριση με τον έλεγχο, γεγονός που υποδηλώνει FOXM1 σίγηση μπορεί να ενισχύσει paclitaxel μεσολάβηση κυτταρικό θάνατο μέσω μιτωτικής καταστροφής (Σχ. 5Α, κάτω πάνελ? Σχ. 5Β). Η εξάντληση των FOXM1 στα ευαίσθητα κύτταρα SKOV-3 δεν έχει κανένα αποτέλεσμα πρόσθετο σε αγωγή με πακλιταξέλη. Αυτό είναι πιθανό να οφείλεται στο γεγονός ότι οι λειτουργίες πακλιταξέλη μέσω ρύθμισης προς τα κάτω της έκφρασης FOXM1 όπως προέκυψε από την ανάλυση Western blot (βλέπε Εικ. 3).

Α. Η ανάλυση κυτταρομετρίας ροής εκτελέσθηκε ακολουθώντας χρώση ιωδιούχου προπιδίου για κύτταρα κατεργασμένα με πακλιταξέλη (100 ηΜ) ή παρέμειναν χωρίς θεραπεία μετά από επιμόλυνση με πισίνες siRNA κατά FOXM1 ή ελέγχουν πισίνες siRNA SKOV-3 και-TR SKOV-3. Αντιπροσωπευτικά δεδομένα δείχνονται υποδεικνύοντας ότι FOXM1 σίγηση είναι ικανό να αυξάνει τον αριθμό των νεκρών κυττάρων και των κυττάρων μπλοκαριστεί στη φάση G2 /M του κυτταρικού κύκλου σε SKOV-3-TR σε σύγκριση με κύτταρα που έλαβαν θεραπεία με έλεγχο siRNA. Β Bar διαγράμματα των διαφορετικών φάσεων του κυτταρικού κύκλου σε SKOV-3 και SKOV3-TR που έλαβαν θεραπεία με πακλιταξέλη μετά την επιμόλυνση με τον έλεγχο ή siRNA εναντίον FOXM1. Τα αποτελέσματα αντιπροσωπεύουν δεδομένα από δύο ανεξάρτητα πειράματα.

Η

KIF2C αναγνωρίζεται ως νέο μεταγραφικό στόχο FOXM1 που μπορεί να εμπλέκεται στην απόκτηση του χημειοαντίσταση

ανάλυση Βιοπληροφορική αποκάλυψε KIF2C, ένα μέλος της KIF υπεροικογένεια πρωτεϊνών, ως δυνητικό γονίδιο στόχο του FOXM1 με συναίνεση forkhead χώρων που βρίσκονται ανοδικά της θέσης έναρξης της μεταγραφής (Εικ. 6D) σύνδεση. Χρησιμοποιώντας ένα ζεύγος πακλιταξέλης-ευαίσθητα (PEO1) και ανθεκτικών (PEO1-TaxR) κυτταρική γραμμή ωοθηκών καρκίνο, αγωγή με πακλιταξέλη κάτω ρυθμισμένη η έκφραση του KIF2C στις 48 ώρες και 72 ώρες σε PEO1. Ωστόσο, η έκφραση KIF2C παρέμεινε σχετικά σταθερή σε PEO1-TaxR κατά την κατεργασία paclitaxel (Σχ. 6Α), προτείνοντας ένα ρόλο στη μεσολάβηση KIF2C αντίσταση paclitaxel σε καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών. Περιέργως, οι εκφράσεις του FOXM1 άλλαξε σε ένα παρόμοιο μοτίβο (Σχ. 6Α). Ποσοτική PCR πραγματικού χρόνου (qPCR) στη συνέχεια χρησιμοποιήθηκε για να μελετηθεί η επίδραση παροδικών σίγασης του FOXM1 στο επίπεδο μεταγραφής του KIF2C. FOXM1 knockdown είχε σαν αποτέλεσμα σημαντικά κάτω ρυθμισμένα εκφράσεις mRNA του KIF2C στις δύο κυτταρικές σειρές (Ρ & lt? 0,05) (Σχ 6Β.). Χρωματίνης ανοσοκαταβύθιση-qPCR (τσιπ qPCR) έδειξε περαιτέρω FOXM1 ήταν ικανό να δεσμεύεται με την περιοχή υποκινητή του KIF2C (Ρ & lt? 0,05). (Εικ. 6C), υπονοώντας KIF2C θα μπορούσε να χρησιμεύσει ως νέου μεταγραφικού στόχου FOXM1

Α, αγωγή με πακλιταξέλη (50 ηΜ) κάτω ρυθμισμένα FOXM1 και KIF2C εκφράσεις στις 48 ώρες και 72 ώρες σε PEO1 αλλά όχι σε PEO1-TaxR. Β, FOXM1 νοκ ντάουν μείωσε σημαντικά το επίπεδο μεταγραφής του KIF2C στην PEO1 και PEO1-TaxR. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν τριπλούν από τρία πειράματα. * P = 0,04, *** P = 0.0003. siControl: Μη-ειδικό έλεγχο. siFOXM1: FOXM1 νοκ ντάουν. C, Chip-qPCR έδειξε FOXM1 τραβήξει σημαντικά προς τα κάτω περιοχή KIF2C προαγωγό σε PEO1 και PEO1-TaxR σε σύγκριση με τον αρνητικό έλεγχο IgG. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν τριπλούν από τρία πειράματα. * Ρ = 0.04, *** Ρ = 0,0001. D, σχηματικό διάγραμμα που απεικονίζει τις θέσεις των forkhead στοιχείου απόκρισης (FHRE) και την θέση πρόσδεσης των εκκινητών που χρησιμοποιούνται σε τσιπ qPCR ανοδικά της θέσης έναρξης της μεταγραφής του KIF2C.

Η

Συζήτηση

αυτή η μελέτη, δείχνουμε ότι η υψηλή έκφραση της πυρηνικής FOXM1 είναι συσχετίστηκε σημαντικά με το στάδιο, μικρότερη συνολική επιβίωση και ελεύθερη νόσου επιβίωση των ασθενών με καρκίνο των ωοθηκών. Η πολυπαραγοντική ανάλυση δείχνει ότι η έκφραση FOXM1 θα μπορούσε να χρησιμεύσει ως ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας. Επιπλέον, παροδική εξάντληση FOXM1 είναι ικανή να αναστέλλει τη μετανάστευση των καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών. Τα ευρήματα αυτά υποδηλώνουν ότι FOXM1 μπορεί να έχει καθοριστικό ρόλο στην ωοθηκών καρκινογένεση και την εξέλιξη και μπορεί να προβλέψει το αποτέλεσμα των ασθενών.

Αν και σύνδεσης FOXM1 με υψηλού βαθμού καρκινώματα των ωοθηκών έχει αναφερθεί [16], αν FOXM1 συμμετέχει στην εξαγορά της αντίσταση πακλιταξέλη παραμένει απροσδιόριστη. Πράγματι, απορρυθμισμένη έκφραση FOXM1 έχει δειχθεί ότι προσδίδουν αντίσταση σε χημειοθεραπευτικά φάρμακα όπως σισπλατίνη και επιρουβικίνη [8], [9]. Εν όψει της ανοσοϊστοχημικής εύρημα υποδηλώνει συσχέτιση μεταξύ FOXM1 και χημειοαντίσταση, ένα ζεύγος εγκατεστημένος paclitaxel ευαίσθητη και ανθεκτικών κυτταρικών γραμμών, SKOV-3 και SKOV3-TR [10], χρησιμοποιήθηκαν για να μελετηθεί η επίδραση της πακλιταξέλης επί FOXM1. Είναι ενδιαφέρον ότι, η αγωγή με πακλιταξέλη είχε ως αποτέλεσμα μειορύθμιση FOXM1 σε SKOV-3 αλλά όχι στην ανθεκτική κυτταρική γραμμή SKOV3-TR, υποδηλώνοντας ένα ρόλο στη μεσολάβηση FOXM1 αντίσταση paclitaxel σε καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών. μελέτη Ανοσοφθορισμός έδειξε περαιτέρω παροδική FOXM1 knockdown θα μπορούσε να ενισχύσει την πακλιταξέλη μεσολάβηση κυτταρικό θάνατο σε δύο κυτταρικές γραμμές καρκίνου των ωοθηκών, SKOV-3 (διαγράφονται p53) [17] και OVCAR3 (μεταλλαγμένο ρ53) [18]. Δεν αποτελεί έκπληξη το ότι τα αποπτωτικά κύτταρα ήσαν ελάχιστα ανιχνεύσιμη καθώς και οι δύο κυτταρικές σειρές λιμάνι δυσλειτουργική ρ53. Πρόσφατα, προτάθηκε ότι η επαγωγή του ρ53-ανεξάρτητη απόπτωση λαμβάνει χώρα μέσω της ενεργοποίησης της κασπάσης-9 [19]. Ωστόσο, ανοσοκηλίδωση αποκάλυψε κασπάση-9 δεν ενεργοποιήθηκε κατά την επεξεργασία paclitaxel σε SKOV-3 και κύτταρα SKOV-3-TR, υποδεικνύοντας ότι το paclitaxel και FOXM1 φίμωσης αποτέλεσμα κυτταρικό θάνατο κυρίως μέσω της ενίσχυσης της μιτωτικής καταστροφή αντί απόπτωσης σε καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών, η οποία συνήθως έχουν δυσλειτουργική πορεία p53. Αυτό είναι συνεπές με προηγούμενα ευρήματα σχετικά με πακλιταξέλη στον καρκίνο του μαστού [20].

Η μιτωτική καταστροφή μπορεί να θεωρηθεί ως ένας τύπος κυτταρικού θανάτου που συμβαίνουν κατά τη διάρκεια της μίτωσης ή προκύπτουν από μιτωτική αποτυχία [21]. Δύο μηχανισμοί έχουν προταθεί ως κρίσιμης σημασίας για μιτωτική καταστροφή, δηλαδή το G2 /M και μιτωτικής ατράκτου σημεία ελέγχου [22]. Για την G2 /M σημείο ελέγχου, την αδρανοποίηση των γονιδίων, όπως

p53

,

p21

Cip1

και

14-3-3Sigma

έχουν αναφερθεί ότι προκαλούν DNA βλάβη που προκαλείται από μιτωτική καταστροφή [23], [24]. ανάλυση κυτταρομετρίας ροής πραγματοποιήθηκε στη μελέτη μας προτείνεται FOXM1 νοκ ντάουν στην χημειοθεραπεία του καρκίνου των ωοθηκών κυτταρικής σειράς SKOV3-TR θα μπορούσε να προκαλέσει κυτταρικό θάνατο. αγωγή με πακλιταξέλη και ανάλυση ανοσοφθορισμού προτείνεται περαιτέρω FOXM1 σίγηση θα μπορούσε να ενισχύσει πακλιταξέλη μεσολάβηση μιτωτική καταστροφή σε ρ53-ανεξάρτητη και κασπάση-9-ανεξάρτητο τρόπο. Οριοθέτηση του υποκείμενου μηχανισμού με τον οποίο FOXM1 μεσολαβεί αντίσταση πακλιταξέλη θα ρίξει φως σε νέες προσεγγίσεις της θεραπείας.

Μετακίνηση κινε υπεροικογένεια πρωτεϊνών (KIFS) παίζουν καθοριστικό ρόλο στην ενδοκυτταρική μεταφορά οργανιδίων και τη συντήρηση του άξονα συναρμολόγησης κατά τη διάρκεια της μίτωσης και της μείωσης [ ,,,0],25]. Όντας η ίδρυση και καλύτερα χαρακτηρίζεται μέλος της οικογένειας κινεσίνης-13, KIF2C /MCAK είναι ζωτικής σημασίας για τη διασφάλιση της πιστούς διαχωρισμό των χρωμοσωμάτων στη μίτωση και για τη διασφάλιση της χρωμοσωμικής σταθερότητας [26]. Δεν αποτελεί έκπληξη, up-κανονισμούς KIF2C έχουν τεκμηριωθεί σε πολλαπλούς ανθρώπινους καρκίνους και KIF2C έχει προταθεί ότι παίζει σημαντικό ρόλο στην καρκινογένεση [27], [28]. Στην παρούσα μελέτη, ανάλυση ανοσοκηλίδωσης έδειξε έκφραση KIF2C σε PEO1 μεταβληθεί σε ένα παρόμοιο μοτίβο όπως έκφραση FOXM1, εμφανίζοντας μια ρύθμιση προς τα κάτω σε 48 ώρες και 72 ώρες μετά την αγωγή με πακλιταξέλη. Αντίθετα, η έκφραση KIF2C παρέμεινε σχετικά σταθερή σε PEO1-TaxR, εμπλέκοντας KIF2C θα μπορούσε να συμμετέχει στην ανάπτυξη της αντίστασης paclitaxel στον καρκίνο των ωοθηκών. Αυτό το εύρημα είναι συνεπές με πρόσφατη αναφορά καταδεικνύει απώλεια KIF2C θα μπορούσε να αυξήσει την ευαισθησία των ωοθηκών κινεζικού χάμστερ (CHO) με την πακλιταξέλη [29]. Επιπλέον, KIF2C ταυτοποιήθηκε ως μεταγραφικός στόχος μυθιστόρημα FOXM1 που θα μπορούσε να διαδραματίσει κεντρικό ρόλο στη διαμεσολάβηση αντίσταση πακλιταξέλη σε καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών.

Εν κατακλείδι, η υπερέκφραση του FOXM1 βρέθηκε να συσχετίζεται με την επιβίωση φτωχών ασθενών και να paclitaxel μεσολάβηση μιτωτική καταστροφή των καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών.