Αφηρημένο

Συνδυασμός ανοσοθεραπεία και η χημειοθεραπεία έχει δείξει υπόσχεση για τον καρκίνο. Η ιντερλευκίνη-7 (IL-7) μπορούν δυνητικά να ενισχύσει ανοσοαποκρίσεις εναντίον του όγκου, ενώ η οξαλιπλατίνη (ΟΧΡ), ένα φάρμακο με βάση την πλατίνα, μπορεί να προωθήσει ένα ευνοϊκό ανοσοποιητικό μικροπεριβάλλον και διεγείρουν αντικαρκινικές ανοσολογικές αποκρίσεις. Αξιολογήσαμε τη δράση κατά του όγκου της IL-7 που συνδυάζει OXP ενάντια σε ένα καρκίνωμα κόλου ποντικού in vitro και in vivo και μελέτησαν τον όγκο ανοσολογική μικροπεριβάλλον να διερευνηθεί αν η συνδυασμένη θεραπεία επηρεάζει τις τοπικές κυτταρικούς πληθυσμούς του ανοσοποιητικού. Αξιοποιώντας πνεύμονα και κοιλιά μοντέλα μετάστασης με εμβολιασμό CT26 καρκίνου του παχέος εντέρου ποντικών κύτταρα, αξιολογήσαμε την αποτελεσματικότητα κατά του όγκου του συνδυασμού IL-7 και OXP σε μοντέλα ποντικών. Ογκοάνοση μικροπεριβάλλον αξιολογήθηκε με ανάλυση κυτταρομετρίας ροής και ανοσοϊστοχημική χρώση. Η μελέτη μας έδειξε ότι η χορήγηση in vivo της IL-7 σε συνδυασμό με OXP ανέστειλε σημαντικά την ανάπτυξη των όγκων στον πνεύμονα και στην κοιλιά μετάσταση μοντέλα καρκίνου του παχέος εντέρου. IL-7 μόνη δεν είχε επίδραση στην ανάπτυξη του όγκου σε ποντικούς και IL-7 δεν μετέβαλε την ευαισθησία των κυττάρων προς OXP σε καλλιέργεια. Η αντικαρκινική επίδραση του συνδυασμού IL-7 και OXP συσχετίζεται με σημαντική αύξηση του αριθμού των ογκο-διηθητικά ενεργοποιημένα CD8 + Τ κύτταρα και αισθητή μείωση του αριθμού των ρυθμιστικών κυττάρων Τ (Treg) σε σπλήνα. Τα στοιχεία μας δείχνουν ότι OXP συν IL-7 θεραπεία αναστέλλει την ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων από ανοσοποίησης και όχι απευθείας κυτταροτοξικότητα. Τα ευρήματά μας δικαιολογούν την περαιτέρω αξιολόγηση του συνδυασμού IL-7 και χημειοθεραπεία ως νέο πειραματικό θεραπεία του καρκίνου

Παράθεση:. Gou HF, Huang J, Shi ΕΣ, Chen Xc, Wang YS (2014) χημειοθεραπείες-ανοσοθεραπεία με οξαλιπλατίνη και Η ιντερλευκίνη-7 Αναστέλλει καρκίνου του παχέος εντέρου μετάστασης σε ποντίκια. PLoS ONE 9 (1): e85789. doi: 10.1371 /journal.pone.0085789

Επιμέλεια: Fabrizio Mattei, Istituto Superiore di Sanità, Ιταλία

Ελήφθη: 16 Σεπτέμβρη του 2013? Αποδεκτές: 5 Δεκεμβρίου 2013? Δημοσιεύθηκε: 21 Ιανουαρίου, 2014

Copyright: © 2014 Gou et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Οι συγγραφείς δεν έχουν καμία υποστήριξη ή χρηματοδότηση για να αναφέρετε

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

η οξαλιπλατίνη (OXP), η οποία χρησιμοποιείται συνήθως στα. καρκίνο του παχέος εντέρου, έχει βρεθεί πρόσφατα να αυξηθεί η ανοσογονικότητα των καρκινικών κυττάρων και να επάγουν ανοσογόνο κυτταρικό θάνατο [1]. Επιπλέον, έχει βρεθεί ότι OXP μπορεί να ενισχύσει την ανοσολογική αντίδραση κατά όγκων μειώνοντας την κανονιστική /κατασταλτικά κύτταρα: ρυθμιστικά κύτταρα Τ (Treg) και μυελοειδή προερχόμενα κατασταλτικών κυττάρων (MDSCs) και την αύξηση της αναλογίας των κυτταροτοξικών CD8 + Τ λεμφοκύτταρα (κύτταρα τελεστές ) έναντι ανοσοκατασταλτικά κυτταρικών πληθυσμών στο μικροπεριβάλλον του όγκου [2], [3], [4].

η ιντερλευκίνη-7 (IL-7) είναι ένα από τα η ιντερλευκίνη-2 (IL-2)-σχετικών κυτοκινών ότι το μερίδιο και σήματος μέσω του γ-αλυσίδα για να επηρεάσουν τον πολλαπλασιασμό των Τ κυττάρων, την ανάπτυξη και την ομοιόσταση [5], [6], [7], [8]. IL-7 παράγεται από μια ποικιλία στρωματικών κυττάρων στον θύμο και μυελό των οστών, καθώς επίσης και από αγγειακά ενδοθηλιακά κύτταρα, εντερικό επιθήλιο, κερατινοκύτταρα, και θυλακιώδη δενδριτικά κύτταρα [9], [10]. IL-7 αντιπροσωπεύει μια πιθανή θεραπεία για την ενίσχυση των Τ-κυττάρων και ανασύσταση αποτελεσματικότητα του εμβολίου, καθώς έχει διακριτές δράσεις σε διαφορετικά υποσύνολα των Τ-κυττάρων [11]. IL-7 επίσης προάγει δραστικότητα αντιγόνου-ειδικών Τ κυττάρων κυτταρολυτικά [12], [13], [14]. IL-7 ήταν σταθερά τόσο αποτελεσματική όσο IL-2 για τη διατήρηση της Τ κύτταρα [13], [14]. Για παράδειγμα, έχει αποδειχθεί ότι οι κυτταρικές γραμμές όγκου επιμολυσμένα με το γονίδιο IL-7 μειωμένη Τ-κυττάρων που εξαρτάται ογκογονικότητα σε μοντέλα ποντικών [15], [16]. Ομοίως, η τοπική ή συστηματική χορήγηση IL-7 έχει αποτελέσματα κατά του όγκου με την ενίσχυση της ανοσολογικής απόκρισης ενάντια σε όγκους [17], [18], [19], [20], [21], ειδικά όταν συνδυάζεται με άλλες ανοσοποιητικές θεραπεία. Η ικανότητα να αυξάνεται ανοσοαπόκριση έναντι κακοηθειών της IL-7 έχει σημαντικές επιπτώσεις για την ανοσοθεραπεία στην θεραπεία των όγκων.

Ο συνδυασμός της χημειοθεραπείας με τροποποιητές της ανοσιακής απόκρισης, όπως η ιντερλευκίνη 2 (IL-2) ή ιντερφερόνη-α (ΙΡΝ-α), που αναφέρεται ως χημειο-ανοσοθεραπεία, έχει δείξει ελπιδοφόρα αντικαρκινική δραστικότητα σε μελάνωμα [22], [23]. Κυτταροτοξικοί χημειοθεραπευτικοί παράγοντες είχαν παραδοσιακά θεωρείται ότι έχει ανοσοκατασταλτικές παρενέργειες και να είναι επιζήμια για αντικαρκινικής ανοσίας λόγω της μη ειδικής κυτταροστατικά και κυτταροτοξικά αποτελέσματά τους. Ωστόσο, υπάρχει συσσώρευση στοιχεία που δείχνουν ότι, υπό ορισμένες συνθήκες κάποια από αυτούς τους παράγοντες μπορούν να επηρεάσουν τον όγκο ανοσολογική μικροπεριβάλλον και να τονωθεί η αντικαρκινική ανοσολογικές αποκρίσεις [3], [4], [24], [25], [26]. Είναι μια ορθολογική ανάπτυξη να συνδυάσει αυτά τα ανοσο-διεγερτικό κυτταροτοξικών χημειοθεραπευτικών παραγόντων με τροποποιητές της ανοσιακής απόκρισης.

Με βάση τα παραπάνω, έχουμε υπόθεση ότι ο συνδυασμός της IL-7 και OXP μπορεί να αυξήσει κατά του όγκου δραστικότητα τους μέσω επαγωγής της επέκταση των Τ κυττάρων και εμποδίζοντας την ανασταλτική οδών Τ κυττάρων στον όγκο ανοσο-μικροπεριβάλλον. Στη μελέτη μας, αξιολογήσαμε την αντικαρκινική δραστικότητα της IL-7 σε συνδυασμό με OXP εναντίον ενός καρκινώματος κόλου ποντικού in vitro και in vivo και εξέτασε τον όγκο ανοσολογική μικροπεριβάλλον να διερευνήσει κατά πόσον αυτή η συνδυασμένη θεραπεία επηρεάζει τους τοπικούς πληθυσμούς ανοσοκυττάρων. δείχνουν δεδομένα μας OXP συν IL-7 είναι σημαντικά πιο αποτελεσματικό από το IL-7 ή OXP μόνη της στην αναστολή της ανάπτυξης όγκου in vivo. Τα στοιχεία μας δείχνουν ότι OXP συν IL-7 θεραπεία αναστέλλει την ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων από ανοσοποίησης και όχι απευθείας κυτταροτοξικότητα.

Υλικά και Μέθοδοι

Η κυτταρική γραμμή

καρκινικών κυττάρων του παχέος εντέρου γραμμή CT26 ήταν που ελήφθη από την American Type Culture Collection (ATCC). Τα κύτταρα συνήθως καλλιεργούνται ως μονοστιβάδα σε 75-cm

2 φιάλες καλλιέργειας ιστού τετράγωνο σε μια υγροποιημένη ατμόσφαιρα που περιέχει 5% CO

2 στον αέρα. Το μέσο καλλιέργειας περιείχε RPMI 1640 (Life Technologies, Bedford, ΜΑ) συμπληρωμένο με 10% FBS, 100 U /ml πενικιλίνη. Η κυτταρική σειρά ήταν ελεύθερη μυκοπλάσματος.

Ογκογένεση μοντέλο

παθογόνων χωρίς θηλυκό BALB /c (ηλικίας 6-8 εβδομάδων) ποντίκια αγοράστηκαν από Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd, Πεκίνο. Το πρωτόκολλο εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας Ζώων του Πανεπιστημίου του Σιτσουάν. Όλα τα ζωικά πειράματα διεξήχθησαν κάτω από ειδικές συνθήκες άνευ παθογόνων σύμφωνα με τις οδηγίες του ιδρύματος.

Πριν από την in vivo έγχυση σε ποντικούς, τα καρκινικά κύτταρα στην εκθετική φάση ανάπτυξης συλλέχθηκαν, πλύθηκαν τρεις φορές με PBS, μετρήθηκαν, και αραιωμένο σε αυτό το διάλυμα πριν την in vivo έγχυση. Προκειμένου να δημιουργηθεί μια πνευμονική μετάσταση μοντέλο, ένα σύνολο 1 × 10

6 CT26 κύτταρα καρκίνου κόλου ενέθηκαν στην φλέβα ουράς συγγενών ποντικών BALB /c. Να καθιερώσει μια κοιλιακή μετάσταση μοντέλο, συνολικά 1 × 10

6 CT26 καρκίνου του παχέος εντέρου κύτταρα ενδοπεριτοναϊκή ένεση. Ποντίκια που έφεραν όγκο στη συνέχεια παρακολουθήθηκαν για ανάπτυξη και την εξέλιξη του όγκου

Την ημέρα 6 μετά τον εμβολιασμό του όγκου κάθε μοντέλο ήταν τυχαία σε 4 ομάδες με 8 ποντίκια σε κάθε ομάδα για περαιτέρω χορήγηση ως εξής: α. Ομάδα ελέγχου ( Φωσφορικό ρυθμιστικό διάλυμα, PBS), η ομάδα της IL-7, η ομάδα του OXP, και η ομάδα της IL-7 σε συνδυασμό με OXP. Στην κοιλιακή μοντέλο μετάστασης OXP δόθηκε ε.π. σε δόση 5 mg /kg κάθε 3 ημέρες για 12 ημέρες. Στο μοντέλο μετάστασης πνεύμονα, OXP δόθηκε ενδοφλεβίως σε δόση 5 mg /kg κάθε 3 ημέρες για 12 ημέρες. IL-7 (5 μg /ημέρα) χορηγήθηκε ί.ρ. ημερησίως για 12 ημέρες.

Τα ζώα υποβλήθηκαν σε ευθανασία την ημέρα 13 μετά την πρώτη θεραπεία. Μεταστατικών οζιδίων όγκου στα υποϋπεζωκοτική εντόπισή περιοχές των πνευμόνων μετρήθηκαν υπό ανατομικό μικροσκόπιο και σταθμίζονται. Σπορά οζίδια μεταστατικών όγκων στην κοιλιακή κοιλότητα μετρήθηκαν με γυμνά μάτια και σταθμίζονται.

Αντιδραστήρια

Η ανασυνδυασμένη ανθρώπινη IL-7 (IL-7) αγοράστηκε από τη Σαγκάη PrimeGene Bio-Tech Co., Ltd και αραιώνονται σε στείρο απεσταγμένο νερό. OXP αγοράστηκε από την Sanofi-Aventis (Γαλλία) και αραιώνονται σε αποστειρωμένο γλυκόζης. Φθορισμού συζευγμένα με κυτταρομετρία ροής αντισώματα αντι-ποντικού (Abs) CD4, CD8, CD69, CD11b, CD11c, Gr-1, και αντισώματα ισότυπο ελήφθησαν από BD Pharmingen. F4 /80 ελήφθη από BioLegend. Ποντίκι Ρυθμιστική Τ Kit κυττάρων χρώσης λήφθηκε από eBioscience. αντισώματα ανοσοϊστοχημεία ζεύγη για CD8 ποντικού αγοράστηκε από ABGENT. Ki-67 αγοράσθηκε από Novus Biologicals, και η απόπτωση Detection Kit αγοράστηκε από την (Promega Corp., Madison, WI).

3- (4, 5-διμεθυλθειαζολ-2-υλ) -2, 5- δοκιμασία διφαινυλοτετραζολίου (ΜΤΤ)

Το 3- (4, 5-διμεθυλθειαζολ-2-υλ) -2, βρωμιούχο δοκιμασία πλάκα 96 φρεατίων 5-διφαινυλοτετραζό-χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό των σχετικών ποσοτήτων των κυττάρων σε φρεάτια μετά έκθεση σε διάφορους παράγοντες. Τα κύτταρα CT26 απλώθηκαν σε 1,000cells /φρεάτιο σε πλάκες 96 φρεατίων, και στη συνέχεια επωάστηκαν για επιπλέον 24 ώρες. Πέντε πανομοιότυπα φρεάτια χρησιμοποιήθηκαν σε αυτές τις δοκιμασίες. Στη συνέχεια, οι διαφορετικές κλίσεις συγκέντρωση της IL-7 προστέθηκαν (25 ng /ml, 50 ng /ml, 75 ng /ml, 100 ng /ml) και ΟΧΡ (10 umol /l, 30 umol /l, 50 umol /l) σε φρεάτια και επωάστηκαν για 24 ώρες, 48 ώρες σε υγροποιημένη ατμόσφαιρα που περιέχει 5% CO

2 στους 37 ° C. Όλες οι αναλύσεις που περιλαμβάνονται κατάλληλους ελέγχους. Στο τέλος της επώασης, τα βιώσιμα κύτταρα ποσοτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας το 3- (4, 5-διμεθυλθειαζολ-2-υλ) -2, βρωμιούχο 5-διφαινυλτετραζόλιο (ΜΤΤ). Εν συντομία, 20 μΙ του διαλύματος αποθέματος ΜΤΤ (5 mg /ml) προστέθηκε σε κάθε φρεάτιο ενός προσδιορισμού. Μετά από 2 ώρες επώασης, το μέσο απομακρύνθηκε και η μετατροπή βαφή διαλυτοποιήθηκε με DMSO (150 UL /φρεάτιο). Η απορρόφηση του μετατρέπεται χρωστικής μετρήθηκε σε μήκος κύματος 540 nm. Η μετατροπή προς τον αριθμό κυττάρων βασίστηκε σε μία πρότυπη καμπύλη. Το ποσοστό της κυτταρικής επιβίωσης (ποσοστό επιβίωσης) υπολογίστηκε διαιρώντας την τιμή απορρόφησης του δείγματος αντιμετωπίζονται από εκείνη του χωρίς επεξεργασία ελέγχου σε κάθε ομάδα.

Ανάλυση κυτταρομετρίας ροής

Στα ενδεικνυόμενα χρονικά σημεία , οι όγκοι και οι σπλήνες συλλέχθηκαν από τους ποντικούς, κόβονται σε μικρά τεμάχια και μηχανικά διασκορπίζονται σε 3-5 ml κρύο μέσο RPMI. Τα κύτταρα όγκων υποβλήθηκαν σε πέψη σε 1 mg /mL της κολλαγενάσης IV (Sigma), 0,1 mg /mL του DNase (Sigma) σε RPMI 1640 στους 37 ° C για 1 ώρα. Τα σπληνικά κύτταρα εξαντλούνται από ερυθροκύτταρα με osmoticlysis και ρυθμίστηκε σε συγκέντρωση 1 × 10

5 κυττάρων σε 100 ul PBS. Μετά από αυτό, μονοκύτταρους εναιωρήματα καρκινικών κυττάρων και τα σπληνοκύτταρα χρωματίζονται για 30 λεπτά σε πάγο με 1 ug από τα ακόλουθα σημασμένα με φθοριοχρώμιο αντισωμάτων, CD4, CD8, CD69, CD11b, CD11c, F4 /80, ή συμφωνημένα αντισώματα isotypy ελέγχου και στη συνέχεια πλένονται μία φορά με PBS. Η ενδοκυτταρική χρώση για FoxP3 πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας κιτ χρώσης κυττάρων ρυθμιστικών Τ ποντικού, σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Τα κύτταρα που αποκτήθηκαν σε FACSCablibur κυτταρόμετρο ροής (BD Biosciences), και 10,000_20,000 περιφραγμένο γεγονότα συλλέχθηκαν. Τα συλλεχθέντα δεδομένα αναλύθηκαν με λογισμικό FlowJo 7.6. Στην ανάλυση κυτταρομετρίας, έχουμε δεδομένα πύλη χρησιμοποιώντας το FSC και SSC διμεταβλητή απεικόνιση, στη συνέχεια, να σχεδιάσετε μια περιοχή γύρω από το σύμπλεγμα των λεμφοκυττάρων και, στη συνέχεια, την πύλη το ιστόγραμμα φθορισμού σε αυτά. Η πύλη αυτή, στο FSC vs άποψη SSC, μετά την εγκατάσταση, στη συνέχεια εφαρμόζεται στην ανάλυση όλων των μετέπειτα δειγμάτων. Τρία ποντίκια από κάθε ομάδα θανατώθηκαν για να αξιολογηθεί η έκφραση δείκτη ανοσοκυττάρου CD.

Ανοσοϊστοχημική χρώση

Οι εκτομή όγκων μονιμοποιήθηκαν σε 10% φορμαλίνη εγκλείστηκαν σε παραφίνη και τεμαχίσθηκαν σε um πάχος 4. Τα τμήματα χρησιμοποιήθηκαν για ανάλυση της έκφρασης του CD8, και Ki-67 με χρώση ανοσοϊστοχημείας με σχετική μονοκλωνικό αντίσωμα. Δείγματα ανοσοχρωματίστηκαν με πρότυπες επισημασμένη στρεπταβιδίνη-βιοτίνη πρωτόκολλο. Εν συντομία, τμήματα 4 μm τοποθετήθηκαν σε σιλανοποιημένη διαφάνειες και αφέθηκε να ξηρανθεί όλη τη νύχτα στους 37 ° C. Μετά αποπαραφινώσεως και ανάκτηση αντιγόνου, τομές ιστών επωάστηκαν με αντίσωμα CD8 (1:250 αραίωση) και Ki-67 antinbody (1:200 αραίωση) στους 37 ° C για 1 ώρα και στη συνέχεια στους 4 ° C για όλη τη νύχτα. Οι τομές στη συνέχεια επωάστηκαν με βιοτινυλιωμένο αιγός ανοσοσφαιρίνη G (Zymed Laboratories Inc, USA) και στη συνέχεια επωάστηκαν με χρένο επισημασμένη στρεπταβιδίνη (Zymed Laboratories Inc, USA). 3, 3′-διαμινοβενζιδίνη χρησιμοποιήθηκε ως χρωμογόνο και αιματοξυλίνη ως αντιχρώσθηκαν. Τρία ποντίκια ανά ομάδα υποβλήθηκαν σε ανάλυση.

Αξιολόγηση των ανοσοϊστοχημική χρώση

Ο βαθμός CD8 + διήθηση παρατηρήθηκε σε περισσότερα από 10 ανεξάρτητα υψηλής ισχύος (Χ 200) μικροσκοπικά πεδία για κάθε δείγμα ιστού. Οι πέντε μικροσκοπικά πεδία με την πιο άφθονη διανομή επελέγησαν εντός του καρκινικού κυττάρου φωλιά. Ο μέσος αριθμός των CD8 + Τ κυττάρων μετρήθηκε σε πέντε μικροσκοπικά πεδία [27]. Προσδιορισμός της πολλαπλασιαστικής δραστηριότητας από Ki-67 imunohistochemistry διεξήχθη ποσοτικά μετρώντας ανοσοδραστικά κύτταρα του όγκου στις πιο έντονες περιοχές χρώσης. Σε κάθε δείγμα, ένα ελάχιστο των 1.000 κυττάρων όγκου βαθμολογήθηκαν στις μικροσκοπικές περιοχές που δείχνει τον υψηλότερο βαθμό ανοσοχρώση, και τα αποτελέσματα εκφράζονται ως το ποσοστό των θετικών κυττάρων [28].

Τερματικό δεοξυνουκλεοτιδυλοτρανσφεράσης dUTP nick τέλος επισήμανση (TUNEL) Δοκιμασία

Τα τμήματα, τα ίδια με εκείνα που χρησιμοποιούνται για την ανάλυση ανοσοχημείας, χρησιμοποιήθηκαν για in situ ανάλυση της απόπτωσης από TUNEL. Η χρώση TUNEL διεξήχθη με μια in situ κιτ ανίχνευσης αποπτωτικό κύτταρο ακολουθώντας το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Τα πλακίδια παρατηρήθηκαν κάτω από μικροσκόπιο φθορισμού της Olympus συνδέεται με μια φωτογραφική μηχανή συσκευή συζευγμένου φορτίου. Οι εικόνες που αποκτήθηκαν δυνάμει × 10 και × 40 στόχους με τη χρήση του Image-Pro λογισμικού. δείκτης αποπτωτικά προσδιορίστηκε με υπολογισμό του μέσου αριθμού των πυρήνων αποπτωτικών κυττάρων σε 5 υψηλής ισχύος μικροσκοπικά πεδία (× 400) που επιλέγεται από μια κεντρική περιοχή σε βιώσιμες περιοχές του όγκου, αποφεύγοντας περιοχές που περιέχουν νέκρωση [29].

Στατιστική Ανάλυση

PRISM έκδοση 5.0 (GraphPad Software) χρησιμοποιήθηκε για την κατάρτιση γραφήματα και στατιστική ανάλυση. Τα αποτελέσματα αναφέρονται ως μέσος όρος ± τυπικό σφάλμα (SE). Διπλή συγκρίσεις έγιναν με τη μη συζευγμένη Student

t

τεστ.

P

& lt? 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική

Αποτελέσματα

In vitro

επίδραση της OXP συν IL-7 στην ανάπτυξη των CT26. κύτταρα

για να καθοριστεί εάν η IL-7 επηρεάζει άμεσα την ανάπτυξη των κυττάρων CT26 ή ενισχύει την ευαισθησία τους σε OXP in vitro, την επίδραση της μόνη της IL-7 και IL-7 συν OXP επί κυττάρων CT26 προσδιορίστηκε σε καλλιέργεια . κύτταρα CT26 καλλιεργήθηκαν in vitro με IL-7 (25 ng /mL, 50 ng /mL, 75 ng /mL, 100 ng /mL) μόνη ή σε συνδυασμό με OXP σε τρεις συγκεντρώσεις από 10 μmol /mL έως 50 μmol /mL . Οι σχετικοί αριθμοί των βιώσιμων κυττάρων στη συνέχεια αξιολογήθηκαν 24, 48 ώρες αργότερα, αντίστοιχα. OXP προκάλεσε την αναμενόμενη εξαρτώμενη από την συγκέντρωση αναστολή της κυτταρικής ανάπτυξης. Ο ρυθμός της αύξησης των κυττάρων του όγκου δεν ήταν σημαντικά διαφορετική σε κάθε επίπεδο δόσης της IL-7 από εκείνες που παρατηρήθηκαν σε καλλιέργειες ελέγχου. Και η προσθήκη IL-7 δεν μετέβαλε σημαντικά την ανάπτυξη των κυττάρων CT26 ή την ευαισθησία τους σε ΟΧΡ (Εικ. 1).

κύτταρα CT26 καλλιεργήθηκαν in vitro με IL-7 (25 ng /ml, 50 ng /ml, 75 ng /mL, 100 ng /mL) μόνη ή σε συνδυασμό με OXP σε τρεις συγκεντρώσεις από 10 μmol /mL έως 50 μmol /ml και το σχετικό αριθμό των βιώσιμων κυττάρων αξιολογήθηκε 24, 48 ώρες αργότερα, αντίστοιχα. Κάθε ράβδος αντιπροσωπεύει το μέσο όρο ± S.E. (N = 5). ένα. OXP προκάλεσε την αναμενόμενη εξαρτώμενη από την συγκέντρωση αναστολή της κυτταρικής ανάπτυξης. σι. IL-7 μόνη δεν είχε καμία επίδραση στην κυτταρική ανάπτυξη CT26 in vitro. Ο ρυθμός της αύξησης των κυττάρων του όγκου δεν ήταν σημαντικά διαφορετική σε κάθε επίπεδο δόσης της IL-7 από εκείνες που παρατηρήθηκαν σε καλλιέργειες ελέγχου. γ και δ. Η προσθήκη IL-7 δεν μετέβαλε σημαντικά την ανάπτυξη των κυττάρων CT26 ή την ευαισθησία τους σε OXP.

Η

συνδυασμό με IL-7 αυξάνει την αντικαρκινική δράση του OXP in vivo

Για διερευνηθεί κατά πόσο η IL-7 μπορεί να ενισχύσει την αποτελεσματικότητα κατά του όγκου των OXP σε ποντικούς που φέρουν όγκο, δημιουργήθηκαν δύο μοντέλα. Ποντικού CT26 κύτταρα καρκίνου κόλου ενέθηκαν σε BALB /C ποντίκια ί.ν. να καθοριστεί το μοντέλο μετάστασης πνεύμονα και ε.π. να καθοριστεί το κοιλιακό μοντέλο μετάστασης. Οι ποντικοί έλαβαν τις ακόλουθες θεραπείες: PBS? IL-7 (5 μg /ένεση)? ΟΧΡ (5 mg /kg /ένεση)? και IL-7 (5 μg /ένεση) σε συνδυασμό με ΟΧΡ (5 mg /kg /ένεση), σύμφωνα με την προαναφερθείσα χρονοδιάγραμμα. Τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε ευθανασία την ημέρα 13 μετά την πρώτη θεραπεία.

Στο μοντέλο μετάστασης πνεύμονα, οι πνεύμονες αφαιρέθηκαν και ζυγίστηκαν. Ο συνολικός αριθμός των μεταστατικών οζιδίων του πνεύμονα στις υπο-υπεζωκότα περιοχές των πνευμόνων μετρήθηκαν στο πεδίο ανατομή. Τα αποτελέσματα εκφράστηκαν ως μέση ± S.E. Τα αποτελέσματα έδειξαν σαφώς ότι ο συνδυασμός της IL-7 και OXP επιτυγχάνει το καλύτερο θεραπευτικό αποτέλεσμα, όπως μετράται με αντικαρκινική δράση. Όπως φαίνεται στο Σχ. 2α (n = 3), IL-7, όταν χορηγείται σε συνδυασμό με OXP, είχε ένα μεγαλύτερο από 2,55 φορές, 1,73-πλάσια, 2,07 φορές μείωση στον αριθμό των μεταστατικών οζιδίων στο πνεύμονα σε σύγκριση με PBS, IL-7 και OXP ομάδες αντίστοιχα. Οι πνεύμονες σταθμίστηκαν. Παρατηρήθηκαν επίσης ανάλογες μειώσεις στο βάρος του πνεύμονα. Όπως φαίνεται στο Σχ. 2b, IL-7, όταν χορηγείται σε συνδυασμό με OXP, είχε ένα μεγαλύτερο από 1,88 φορές, 1,52-πλάσια, 1,82 φορές μείωση στα βάρη των πνευμόνων σε σύγκριση με PBS, IL-7 και ομάδες OXP αντίστοιχα. Η θεραπεία με IL-7 μόνη είχε ως αποτέλεσμα σημαντική μείωση στα βάρη των πνευμόνων και ένα μικρό, όχι στατιστικά μείωση του αριθμού των μεταστατικών οζιδίων στο πνεύμονα σε σύγκριση με PBS. Η χορήγηση της OXP μόνο του δεν παρέχει καμία επίδραση κατά του όγκου σε σύγκριση με PBS στο μοντέλο μετάστασης πνεύμονα.

Την ημέρα 6 μετά τον εμβολιασμό του όγκου κάθε μοντέλο ήταν τυχαία σε 4 ομάδες με 8 ποντίκια σε κάθε ομάδα για περαιτέρω χορήγηση ως ακολούθως: PBS, IL-7, OXP, IL-7 σε συνδυασμό με OXP. Μεταστατικών οζιδίων όγκου σε υπο-υπεζωκότα περιοχές των πνευμόνων μετρήθηκαν υπό μικροσκόπιο ανατομής. Τα μεταστατικά οζίδια όγκων στην κοιλιακή κοιλότητα μετρήθηκαν με γυμνά μάτια και σταθμίζονται. Τα αποτελέσματα εκφράστηκαν ως μέση ± S.E.

P

τιμές: *,

P

& lt? 0,05, **,

P

& lt? 0,01? ένα. Μεταστατικό όγκο οζίδια αριθμό στο μοντέλο μετάστασης πνεύμονα. σι. Βάρος των πνευμόνων σε μοντέλο μετάσταση στους πνεύμονες. ντο. Μεταστατικό όγκο οζίδια αριθμός στην κοιλιά μοντέλο μετάστασης. ρε. Βάρος όγκου οζίδια στην κοιλιά μοντέλο μετάστασης. Όλα a, b, c, d έδειξε IL-7, όταν χορηγείται σε συνδυασμό με OXP, αύξησε την αντικαρκινική δράση in vivo σε σύγκριση με PBS, IL-7 και ομάδες OXP αντίστοιχα.Η χορήγηση IL-7 μόνη κατέληξε σε μια σημαντική μείωση των βαρών των πνευμόνων και ένα μικρό, όχι στατιστικά μείωση στον τελικό όγκο του όγκου σε σύγκριση με PBS στο μοντέλο μετάστασης πνεύμονα. Η χορήγηση της OXP μόνο του δεν παρέχει καμία επίδραση κατά του όγκου σε σύγκριση με PBS στο μοντέλο μετάστασης πνεύμονα. Στην κοιλιακή μοντέλο εμφύτευσης, η χορήγηση του OXP μόνος είχε σαν αποτέλεσμα σημαντική μείωση στα βάρη οζιδίων όγκου και ένα μικρό, όχι στατιστικά μείωση του αριθμού των οζιδίων όγκου στην κοιλιακή κοιλότητα σε σύγκριση με PBS. Η χορήγηση IL-7 μόνο του δεν παρέχει καμία επίδραση κατά του όγκου σε σύγκριση με PBS στο κοιλιακό μοντέλο εμφύτευσης.

Η

στην κοιλιακή μοντέλο εμφύτευσης, ο όγκος στην κοιλιακή κοιλότητα αφαιρέθηκαν και ζυγίστηκαν, και οζίδια όγκου μετρήθηκαν και σταθμίζονται. IL-7, όταν χορηγείται σε συνδυασμό με OXP, αύξησε την αντικαρκινική δράση in vivo σε σύγκριση με PBS, IL-7 και ομάδες OXP αντίστοιχα (

P & lt?

0.001, η = 6~7). Η χορήγηση OXP μόνος είχε σαν αποτέλεσμα σημαντική μείωση στα βάρη οζιδίων όγκου και ένα μικρό, όχι στατιστικά μείωση του αριθμού των οζιδίων όγκου στην κοιλιακή κοιλότητα σε σύγκριση με PBS. Η χορήγηση IL-7 μόνο του δεν παρέχει καμία επίδραση κατά του όγκου σε σύγκριση με PBS στο κοιλιακό μοντέλο εμφύτευσης. (Σχ. 2γ, 2δ)

Συνδυασμός OXP με IL-7 ανέστειλε πολλαπλασιασμό και την απόπτωση που επάγεται σε ποντικούς όγκων του παχέος εντέρου

Αναλύσαμε τον αριθμό των πολλαπλασιαζόμενων κυττάρων χρησιμοποιώντας το δείκτη πολλαπλασιασμού Ki-67. Η συνδυασμένη θεραπεία με ΟΧΡ και IL-7 παρουσιάζονται λιγότερες Ki-67 θετικών κυττάρων, σε σύγκριση με IL-7 ή OXP μόνο και ελέγχου (

P

& lt? 0,05) (Εικ. 3). Επιπλέον, η δοκιμασία TUNEL έδειξε ότι η συνδυασμένη θεραπεία με ΟΧΡ και IL-7 αυξημένος σημαντικά την απόπτωση των καρκινικών κυττάρων (Εικ. 4). Η ομάδα που έλαβαν θεραπεία συνδυασμού έδειξε την υψηλότερη αποπτωτικό δείκτη (

P

& lt? 0,01). Αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι ο συνδυασμός του OXP με IL-7 μείωσε σημαντικά τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό και την απόπτωση που επάγεται

in vivo

.

Οι εκτομή όγκων της κάθε ομάδας αναλύθηκαν με ανοσοϊστοχημική χρώση για το δείκτη πολλαπλασιασμού Ki- 67. ένα. Οι αντιπροσωπευτικές πλάκες από κάθε ομάδα αγωγής φαίνονται. Αρχική μεγέθυνση, × 200. σι. Η πολλαπλασιαστική δραστηριότητα αξιολογήθηκε με χρώση Κί-67. Σε κάθε δείγμα, ένα ελάχιστο των 1.000 κυττάρων όγκου βαθμολογήθηκαν στις μικροσκοπικές περιοχές που δείχνει τον υψηλότερο βαθμό ανοσοχρώση, και τα αποτελέσματα εκφράζονται ως το ποσοστό των θετικών κυττάρων. Τα αποτελέσματα εκφράστηκαν ως μέση ± S.E. (N = 3).

P

τιμές: IL-7 + OXP σε σύγκριση με τις άλλες ομάδες θεραπείας, *,

P

& lt? 0,05, **,

P

& lt? 0,01. Η συνδυασμένη θεραπεία με ΟΧΡ και IL-7 παρουσιάζονται λιγότερες Ki-67 θετικών κυττάρων, σε σύγκριση με IL-7 ή OXP μόνο και ελέγχου.

Η

α. τομές παραφίνης χρωματίστηκαν με την ανάλυση TUNEL για την ανίχνευση αποπτωτικών κυττάρων winthin CT26 όγκου. Οι αντιπροσωπευτικές ενότητες από κάθε ομάδα που παρουσιάζονται. Αρχική μεγέθυνση, × 200. σι. δείκτης αποπτωτικά προσδιορίστηκε με την αξιολόγηση του μέσου αριθμού των πυρήνων αποπτωτικών κυττάρων σε 5 υψηλής ισχύος μικροσκοπικά πεδία. Η ομάδα της θεραπείας συνδυασμού έδειξε την υψηλότερη αποπτωτικό δείκτη. Δεδομένα που αντιπροσωπεύονται αποπτωτικές δείκτης εκφράστηκαν ως μέση ± S.E. (N = 3).

P

τιμές:. IL-7 + OXP σε σύγκριση με τις άλλες ομάδες θεραπείας, *,

P

& lt? 0,05, **,

P

& lt? 0,01

Συνδυασμός OXP με IL-7 επάγει σημαντική ενεργοποιημένων Τ κυττάρων εντός του όγκους

p> CD69

P

& lt? 0,05) (Σχ. 6). Παρόμοια αποτελέσματα παρατηρήθηκαν στην κοιλιακή μοντέλο εμφύτευση (Εικ. 6).

α. Στην ανάλυση κυτταρομετρίας, έχουμε δεδομένα πύλη χρησιμοποιώντας το FSC και SSC διμεταβλητή απεικόνιση, στη συνέχεια, να σχεδιάσετε μια περιοχή γύρω από το σύμπλεγμα των λεμφοκυττάρων και, στη συνέχεια, την πύλη το ιστόγραμμα φθορισμού σε αυτά. Η πύλη αυτή, στο FSC vs άποψη SSC, μετά την εγκατάσταση, στη συνέχεια εφαρμόζεται στην ανάλυση όλων των μετέπειτα δειγμάτων. Εκπρόσωπος κυτταρομετρία ροής της κάθε ομάδας παρουσιάστηκε. b.IL-7 σε συνδυασμό με OXP έχει αυξηθεί σημαντικά το CD8 + /CD69 + θετικά κύτταρα σε καρκινικά σε σύγκριση με ελέγχους PBS και IL-7 ή OXP μόνος μοντέλο πνεύμονα. Τα αποτελέσματα εκφράστηκαν ως μέση ± S.E. (N = 3).

P

τιμές:. IL-7 + OXP σε σύγκριση με τις άλλες ομάδες θεραπείας, *,

P

& lt? 0,05, **,

P

& lt? 0,01

α. Οι αντιπροσωπευτικές πλάκες της ανοσοϊστοχημική χρώση των CD8 κάθε ομάδα αγωγής φαίνονται. Αρχική μεγέθυνση, × 200. σι. Ο βαθμός CD8 + διήθηση παρατηρήθηκε σε περισσότερα από 10 ανεξάρτητα υψηλής ισχύος (Χ 200) μικροσκοπικά πεδία για κάθε δείγμα ιστού. Οι πέντε μικροσκοπικά πεδία με την πιο άφθονη διανομή επελέγησαν εντός του καρκινικού κυττάρου φωλιά. Ο μέσος αριθμός των CD8 + Τ κυττάρων μετρήθηκε σε πέντε μικροσκοπικά πεδία. Τα αποτελέσματα εκφράστηκαν ως μέση ± S.E. (N = 3).

P

τιμές:. IL-7 + OXP σε σύγκριση με τις άλλες ομάδες θεραπείας, *,

P

& lt? 0,05, **,

P

& lt? 0,01

Tumor σχετιζόμενη μακροφάγα και δενδριτικά κύτταρα (DCs) αποτελούν κύρια συστατικά του λευκοκυττάρων διεισδύουν σε συμπαγείς όγκους. Εξετάσαμε επίσης τον αριθμό των μακροφάγων σε όγκους με κυτταρομετρία ροής με F4 /80 αντίσωμα και CD11b αντίσωμα και ο αριθμός των ογκο-διηθητικά ώριμα δενδριτικά κύτταρα με CD11b αντίσωμα και αντίσωμα CD11c στο μοντέλο μετάστασης πνεύμονα. Ωστόσο, η IL-7 και OXP θεραπείες δεν είχε καμία επίδραση στον αριθμό των /80 + κύτταρα CD11b + F4 και DCs σε όγκους σε σύγκριση με εκείνες από IL-7 μόνο, ΟΧΡ και μόνο, και ποντίκια με PBS αγωγή στο μοντέλο μετάστασης πνεύμονα (Εικ. 7).

α. και b. Εκπρόσωπος κυτταρομετρία ροής της κάθε ομάδας παρουσιάστηκε. ντο. και δ. IL-7 σε συνδυασμό με OXP δεν είχε καμία επίδραση στον αριθμό των /80 + κύτταρα CD11b + F4 και DCs σε όγκους σε σύγκριση με εκείνες από IL-7 μόνο, ΟΧΡ και μόνο, και ποντίκια με PBS αγωγή στο μοντέλο μετάστασης πνεύμονα.

Συνδυασμός OXP με IL-7 μείωσε κύτταρα Treg στον σπλήνα

αξιολογηθεί κατά πόσο η IL-7 και OXP συνδυασμένη θεραπεία είχε επίπτωση επί των κυτταρικών πληθυσμών ανοσοκατασταλτικά. Οι σπλήνες από κάθε ομάδα ζώων συλλέχθηκαν και πληθυσμοί Treg (CD4 + FoxP3 + πληθυσμού) αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής. Στο μοντέλο μετάσταση στους πνεύμονες, βρήκαμε ότι ο συνδυασμός επεξεργασμένου CT26 κόλου ποντικών που φέρουν όγκο είχαν χαμηλότερο ποσοστό των κυττάρων Treg μεταξύ CD4 + Τ κυττάρων στη σπλήνα, σε σύγκριση με IL-7 μόνο, ΟΧΡ και μόνο, και τα ποντίκια ελέγχου (Εικ. 6 ) (

P

& lt? 0,05). Παρόμοια αποτελέσματα ελήφθησαν στην κοιλιακή μοντέλο εμφύτευσης (

P

& lt? 0,05). (Σχήμα 8)

α. Εκπρόσωπος κυτταρομετρία ροής της κάθε ομάδας παρουσιάστηκε. σι. IL-7 σε συνδυασμό με OXP έχει μειωθεί σημαντικά ο FoxP3 + πληθυσμό CD4 + Τ κύτταρα στη σπλήνα σε σύγκριση με ελέγχους PBS και IL-7 ή OXP μόνος τόσο πνευμόνων και κοιλιακό μοντέλα μετάστασης. Τα αποτελέσματα εκφράστηκαν ως μέση ± S.E. (N = 3). τιμές P:. IL-7 + OXP σε σύγκριση με τις άλλες ομάδες θεραπείας, *,

P

& lt? 0,05, **,

P

& lt? 0,01

Η

MDSCs είναι ετερογενείς πληθυσμοί κατασταλτικών κυττάρων ορίζεται φαινοτυπικά σε ποντικούς με τους συν-έκφραση του CD11b και Gr-1 [30], [31], [32]. Εξετάσαμε επίσης τον αριθμό των MDSCs στο σπλήνα στο μοντέλο μετάστασης πνεύμονα με κυτταρομετρία ροής με CD11b αντίσωμα και Gr-1 αντίσωμα εξετάζει την ικανότητα τους να καταστέλλουν Τ-κυττάρων ανοσοαποκρίσεων. IL-7 και OXP δεν μειώνεται σημαντικά τον αριθμό των MDSC σε σπλήνα σε σύγκριση με εκείνη της IL-7 μόνο του, μόνο του ή OXP ελέγχου στο μοντέλο μετάστασης πνεύμονα (Εικ. 9).

α. Εκπρόσωπος κυτταρομετρία ροής της κάθε ομάδας παρουσιάστηκε. σι. IL-7 και OXP δεν μειώνεται σημαντικά τον αριθμό των MDSC σε σπλήνα σε σύγκριση με εκείνη της IL-7 μόνο του, μόνο του ή OXP ελέγχου στο μοντέλο μετάστασης πνεύμονα.

Η

Συζήτηση

η αποτελεσματικότητα του OXP συν IL-7 θεραπεία κατά της εξαιρετικά επεμβατική μεταστατικό CT26 ποντίκι αδενοκαρκίνωμα του παχέος εντέρου αξιολογήθηκε με βάση το ποσοστό ανταπόκρισης στο πείραμά μας. Τα στοιχεία μας έδειξαν ότι όταν χορηγείται στην ίδια δοσολογία, OXP συν IL-7 είναι σημαντικά πιο αποτελεσματικό από το IL-7 ή OXP μόνη της στην αναστολή της ανάπτυξης του όγκου. Η μελέτη μας δείχνει ότι η OXP συν IL-7 θεραπεία συνδυασμού ανάπτυξης ανέστειλε σημαντικά όγκου σε μοντέλα ποντικών του καρκίνου του παχέος εντέρου.

Τα ευρήματά μας δείχνουν ότι η IL-7 μόνη δεν είχε επίδραση στην ανάπτυξη του όγκου σε ποντικούς και IL-7 έκανε δεν μεταβάλλουν την ευαισθησία των κυττάρων στην OXP στον πολιτισμό. Ως εκ τούτου, είναι απίθανο ότι η IL-7 έχει άμεση επίδραση επί του όγκου. Η κυτταρομετρία ροής στοιχεία δείχνουν ότι ο συνδυασμός του OXP με IL-7 επάγει σημαντική διείσδυση των ενεργοποιημένων Τ κυττάρων εντός των όγκων και είχαν χαμηλότερο ποσοστό των κυττάρων Treg στο σπλήνα. Αυτά τα δεδομένα πρότειναν ότι OXP συν IL-7 θεραπεία ανέστειλε την ανάπτυξη των κυττάρων του όγκου με ανοσορύθμιση και όχι απευθείας κυτταροτοξικότητα. Οι επιδράσεις κατά του όγκου του OXP συν IL-7 συνδέθηκαν με αυξημένα ποσοστά και τον αριθμό των ενεργοποιημένων CD8 + Τ κύτταρα. Υπήρχαν επίσης συνδέεται με παρεμποδίζεται ανάπτυξη των κυττάρων Treg.

IL-7 μπορεί ενδεχομένως να ενισχύσει ανοσοαποκρίσεις εναντίον του όγκου μέσω μιας ποικιλίας μηχανισμών [8]. Πολλές μελέτες έχουν δείξει ότι η IL-7 διαστέλλεται και διατηρεί τον ουσιαστικό Τ κύτταρα σε ποντικούς που φέρουν όγκο. Για παράδειγμα, η IL-7 μπορεί να ενισχύσει εμβόλιο μεσολάβηση ανοσία κατά του όγκου, με την προώθηση CD8 επέκταση [21]. Η αξιοσημείωτα αντικαρκινική δραστικότητα της χορήγησης της IL-7 /HGFb in vivo συσχετίζεται με μία σημαντική αύξηση στον αριθμό των καρκινικών κυττάρων που διηθούν CD4 + και CD8 + Τ [18]. IL-7 συνεργεί με IL-12 ή IL-21 για την ενίσχυση της ανοσίας κατά του όγκου, μέσω της αύξησης των κυτταροτοξικών Τ κυττάρων λειτουργία [33], [34]. Ενισχυμένη παραγωγή ενεργοποιημένων δενδριτικών κυττάρων από την IL-7 σε συνδυασμό με άλλους παράγοντες είναι ένας άλλος μηχανισμός μέσω του οποίου η IL-7 μπορεί να ενισχύσει κατά του όγκου ανοσοαπόκριση [18], [20]. Επιπλέον IL-7 μπορεί να ενισχύσει την ανοσία κατά του όγκου με ανταγωνισμό ανασταλτική δίκτυα: ευνοούν Th17 διαφοροποίηση, προς τα κάτω ρύθμιση αυξητικός παράγοντας μετασχηματισμού (TGF) -β παραγωγή, περιορίζοντας ΤΟΡ-β που σχετίζονται σηματοδότηση, και καθιστώντας τα κύτταρα τελεστές με τα κύτταρα πυρίμαχα Treg [21] , [35], [36], [37]. Η ικανότητα του ανοσοενισχυτικού IL-7 να ανταγωνίζεται την ανασταλτική δίκτυα σε κυτταρικό και μοριακό επίπεδο έχει σημαντικές επιπτώσεις για την ανοσοθεραπεία στην θεραπεία των όγκων.

Οι περισσότερες δραστηριότητες κατά του όγκου της IL-7 βρέθηκαν όταν συνδυάστηκε με άλλα θεραπευτικά τρόπους. αποτελεσματικότητα κατά του όγκου ήταν ονομαστικές όταν η IL-7 χρησιμοποιήθηκε μόνο του [16], [17], [18], [19], [20], [21], [35], [36], [38]. IL-7 μόνη έχει βρεθεί ότι δεν έχουν καμία επίδραση επί ξενομοσχευμάτων καρκινώματος ανθρώπινου κόλον [38]. χημειοθεραπευτικούς παράγοντες μπορεί να προκαλέσει ανοσία κατά των όγκων και τα ευρήματα αυτά δημιουργούν ευκαιρίες για την ενσωμάτωση ανοσοθεραπεία με χημειοθεραπεία. Η δραστικότητα κατά του όγκου του συνδυασμού IL-7 και η χημειοθεραπεία δεν έχει μελετηθεί. Έχει αναφερθεί ότι OXP μπορούν να προωθήσουν ένα ευνοϊκό ανοσοποιητικό μικροπεριβάλλον και να διεγείρουν αντικαρκινικές ανοσολογικές αποκρίσεις [3], [4]. Η έκθεση της Καλρετικουλίνης στην κυτταρική επιφάνεια και την απελευθέρωση της HMGB1 έχουν προταθεί ως βασικά στοιχεία των ανοσοδιεγερτικών ιδιοτήτων των OXP [1].

OXP μπορεί να ενισχύσει την ανοσολογική αντίδραση κατά όγκων με την ανατροπή της ισορροπίας μεταξύ τελεστή και ρυθμιστικών /κατασταλτικά κύτταρα υπέρ των κυττάρων τελεστή, όπως έχει περιγραφεί προηγουμένως για άλλα χημειοθεραπευτικά φάρμακα [2], [3]. Μια ευνοϊκή ισορροπία μεταξύ των Τ-τελεστή και Τ-κατασταλτικών κυττάρων έχει συσχετιστεί με βελτιωμένες ανοσοαποκρίσεις έναντι όγκων [2], [39]. Η έλλειψη αποτελεσματικότητας του OXP μόνος στο επιθετικό in vivo μοντέλα έχει περιγραφεί [3], [40].