Αφηρημένο

Η αναστολή της καρκινογένεσης μπορεί να είναι συνέπεια εξασθένησης του οξειδωτικού στρες μέσω ενεργοποίησης του αντιοξειδωτικού αμυντικού συστήματος, την αποκατάσταση και τη σταθεροποίηση των πρωτεϊνών ογκοκατασταλτικών μαζί με διαμόρφωση των φλεγμονωδών μεσολαβητών. Προηγουμένως έχουμε οριοθετείται σημαντικό ρόλο της κουρκουμίνης κατά τη διάρκεια μακροχρόνιας επίδρασης του στη ρύθμιση της γλυκολυτικής οδού και της αγγειογένεσης, η οποία με τη σειρά του οδηγεί σε πρόληψη του καρκίνου μέσω της διαφοροποίησης του στρες ενεργοποιημένων γονιδίων. Παρούσα μελέτη σχεδιάστηκε για να διερευνήσει μακροπρόθεσμη επίδραση της κουρκουμίνης στη ρύθμιση του Nrf2 μεσολάβηση ενζύμων αντιοξειδωτικό φάσης-ΙΙ, ογκοκατασταλτικό ρ53 και φλεγμονή υπό οξειδωτικές μικροπεριβάλλον του όγκου στο ήπαρ του λέμφωμα Τ-κυττάρων ποντικών που φέρουν. Αναστολή της Nrf2 σηματοδότηση που παρατηρείται κατά τη διάρκεια της εξέλιξης λεμφώματος, είχε ως αποτέλεσμα τα κάτω ρύθμιση της φάσης ΙΙ ενζύμων αντιοξειδωτικό, ρ53 καθώς και την ενεργοποίηση των φλεγμονωδών σημάτων. Η κουρκουμίνη ενισχύεται σημαντική αύξηση στην ενεργοποίηση Nrf2. Θα αποκατασταθεί δραστηριότητα των ενζύμων αντιοξειδωτική φάσης-ΙΙ, όπως GST, GR, NQO1, και το επίπεδο ρ53 ογκοκατασταλτικό. Επιπλέον, η κουρκουμίνη διαμορφωμένο φλεγμονή μέσω προς τα πάνω ρύθμιση του ΤΟΡ-β και αμοιβαία ρύθμιση της iNOS και COX2. Η μελέτη δείχνει ότι κατά τη διάρκεια μακροπρόθεσμη επίδραση, η κουρκουμίνη οδηγεί στην πρόληψη του καρκίνου με την πρόκληση αντιοξειδωτικά ένζυμα φάσης-ΙΙ μέσω ενεργοποίησης της Nrf2 σηματοδότησης, την αποκατάσταση των ογκοκατασταλτικών p53 και διαμόρφωση των φλεγμονωδών μεσολαβητών, όπως iNOS και COX2 στο ήπαρ των ποντικών λεμφώματος που φέρουν.

Παράθεση: Das L, Vinayak Μ (2015) μακροπρόθεσμη επίδραση της κουρκουμίνης στην αποκατάσταση των όγκων ρ53 και φάσης ΙΙ αντιοξειδωτικών ενζύμων μέσω ενεργοποίησης της Nrf2 σηματοδότηση και διαμόρφωση των Φλεγμονή στο Πρόληψης του Καρκίνου. PLoS ONE 10 (4): e0124000. doi: 10.1371 /journal.pone.0124000

Ακαδημαϊκό Επιμέλεια: Gautam Sethi, Yong Loo Lin Ιατρική Σχολή, Εθνικό Πανεπιστήμιο της Σιγκαπούρης, Σιγκαπούρη

Ελήφθη: 3 Δεκέμβρη 2014? Αποδεκτές: 24, Φεβ 2015? Δημοσιεύθηκε: 10 Απριλίου του 2015

Copyright: © 2015 Das, Vinayak. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. το έργο χρηματοδοτήθηκε από το Τμήμα Επιστήμης και Τεχνολογίας (Grant Νο-SR /S0 /AS-97/2007), η κυβέρνηση της Ινδίας σε MV. Ο χρηματοδότης δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

παράγοντα Ε2 συνδέονται πυρηνικού παράγοντα 2 (Nrf2) είναι ένας κρίσιμος παράγοντας μεταγραφής που συνδέεται προς την περιοχή προαγωγού ενός αριθμού γονιδίων που κωδικοποιούν φάσης II αντιοξειδωτικά ένζυμα [1]. Nrf2 συσχετίζεται με ρουτίνα διαδικασία αποτοξίνωσης και αυξημένη έκφραση του έχει περιγραφεί στο μυϊκό ήπαρ, το έντερο, τον πνεύμονα και το νεφρό. Υπάρχει μεγάλη ομοιότητα μεταξύ αλληλουχίας Nrf2 πρόσδεσης (συναινετική αλληλουχία ΝΡ-Ε2) και του στοιχείου αντιοξειδωτικό απόκρισης (ARE), οι οποίες ρυθμίζουν στοιχεία στην περιοχή υποκινητή των ενζύμων αντιοξειδωτικό φάσης-ΙΙ, όπως GST και NQO1. GST έχει προστατευτικό ρόλο ενάντια οξειδωτικές διαδικασίες και παίζει κρίσιμο ρόλο στην αποτοξίνωση των διαφόρων ξενοβιοτικών σε κακοήθη κύτταρα ή ιστούς. GST παρουσιάζει επίσης διάφορες μη καταλυτικές λειτουργίες όπως η ενδοκυτταρική μεταφορά από ένα ευρύ φάσμα υδρόφοβων συνδετήρων και διαμόρφωση του μονοπατιού μεταγωγής σήματος που οδηγεί στην απομόνωση της καρκινογόνα [2]. NQO 1 είναι μια κυτοσολική φλαβοπρωτεϊνη, που εκφράζεται ιδιοσυστατικά σε ένα ευρύ φάσμα από ιστούς θηλαστικών και κυτταρικές σειρές. Καταλύει μείωση δύο ηλεκτρονίων των διαφόρων περιβαλλοντικών ηλεκτρόφιλης ρύπους και ενδογενών ενώσεων, εμποδίζει την παραγωγή των ROS, περισυλλέγει ρίζες οξυγόνου και ως εκ τούτου παρουσιάζει έναν άμεσο ρόλο στην προστασία έναντι του οξειδωτικού στρες. NQO1 ρυθμίζει σταθερότητα της ρ53 σε απόκριση προς οξειδωτικό στρες [3]. Όγκου ρ53 περιορίζει τα ανώμαλα κύτταρα με επαγωγή της διακοπής της ανάπτυξης /ενεργοποίηση της απόπτωσης. p53 δείχνει επίσης αντιοξειδωτική ιδιότητα που προστατεύει το γονιδίωμα από οξείδωση με ROS, η οποία είναι μια σημαντική αιτία της βλάβης του DNA και γενετική αστάθεια που οδηγεί σε ογκογόνο μετασχηματισμό [4, 5]. Nrf2 είναι κρίσιμη για τη διατήρηση της γλουταθειόνης (GSH) οξειδοαναγωγική κατάσταση μέσω μεταγραφικής ρύθμισης του GR [6]. GSH είναι ένα κυρίαρχο ενδοκυτταρική θειόλη περιέχει αντιοξειδωτικές στο ήπαρ. Παρουσιάζει ευέλικτες λειτουργίες όπως ρύθμιση της γονιδιακής έκφρασης, την απόπτωση και αντιοξειδωτική άμυνα προς διαμόρφωση του κυτταρικού πολλαπλασιασμού. Οι ρ53 ανεπάρκεια καρκινικά κύτταρα αναφερθεί ότι παρουσιάζουν μειωμένη επαγωγή των γονιδίων στόχων Nrf2 σε σύγκριση με καλά κύτταρα ρ53, υποδηλώνοντας σημαντικό ρόλο της ρ53 στην ενεργοποίηση του Nrf2 σε καρκινικά κύτταρα [7].

Αγρίου τύπου ρ53 και ΤΟΡ β είναι βασικά καταστολείς όγκων που ρυθμίζουν μια σειρά κυτταρικών αποκρίσεων. ρ53 αλληλεπιδρά φυσικά με Smads και συν-συγχρονισμένα επάγει μεταγραφή ενός αριθμού σημαντικών γονιδίων καταστολής όγκων [8]. ΤΟΡ-β δρα ως αντι παράγοντα πολλαπλασιασμού σε πρώιμα στάδια του καρκίνου και ρυθμίζει τον κυτταρικό κύκλο μέσω κατάντη γονιδίων στόχων που εμπλέκονται στην οδήγηση κυτταρικό πολλαπλασιασμό [9, 10]. Είναι επάγει απόπτωση σε ανθρώπινα κύτταρα λεμφώματος και καταστέλλει τη φλεγμονή [11, 12, 13]. Προώθηση της φλεγμονής ρυθμίζεται από COX2 μέσω σύνθεσης της PGE2 σε διάφορους ιστούς. Έκφραση COX2 καθώς και η παραγωγή PGE2 ρυθμίζεται από ΤΟΡ-β1 [14, 15, 16]. COX2 συχνά συν-εκφράζονται με iNOS και οι δύο εμπλέκονται στην πρόοδο του καρκίνου με τη ρύθμιση του πολλαπλασιασμού, της απόπτωσης και της αγγειογένεσης κλπ iNOS διαδραματίζει κεντρικό ρόλο στη διαμεσολάβηση της φλεγμονής μέσω μονοξειδίου του αζώτου (ΝΟ) βιοσύνθεσης, η οποία με τη σειρά της ρυθμίζει την έκφραση της COX2 και τη σύνθεση PGE2 σε φλεγμονώδη κατάσταση [17]. Μέτρια αύξηση του επιπέδου της έκφρασης iNOS προάγει την ανάπτυξη του όγκου, ενώ περαιτέρω αύξηση του επιπέδου αναφέρεται ότι είναι κυτταροτοξική για τα κύτταρα του όγκου, έτσι iNOS δείχνει διπλό ρόλο κατά την ανάπτυξη του όγκου [18]. Ήπατος αναφερθεί ότι κατέχουν μια ιδιαίτερη ιδιότητα όπου τα καρκινικά κύτταρα επάγουν ενδογενή καμία απελευθέρωση μέσω προς τα πάνω ρύθμιση του iNOS, που οδηγεί σε θανάτωση του ημιτονοειδούς κυττάρου όγκου και μειωμένη ηπατική μετάσταση [19]. Όντας ένα σημαντικό μεταβολικό και αποτοξίνωση των οργάνων του σώματος, το συκώτι αναλαμβάνει ενεργό ρόλο στο σύστημα αντι οξειδωτικό άμυνας και επηρεάζεται σε μεγάλο βαθμό σε προχωρημένο καρκίνο. Μετάσταση και κακοήθεια έχει επιβεβαιωθεί προηγουμένως στο ήπαρ του λεμφώματος ρουλεμάν Ντάλτον (DL) ποντίκια [20].

Η χρήση του ολικού εκχυλίσματος βοτάνων πηγή ή ένα μόνο απομονωμένο συστατικό ή ένα μεταβολίτη ενός απομονωμένου συστατικού, για την επίτευξη επιθυμητά οφέλη για την υγεία έχει αποτελέσει θέμα της τα τελευταία χρόνια. Η κουρκουμίνη, μια πολυφαινολική φυτοχημικό αναφέρεται ότι αναστέλλει χημικά επαγόμενη καρκινογένεση σε πολλαπλές θέσεις οργάνων σε διάφορα ζωικά μοντέλα. Ταχεία μεταβολισμό και απέκκριση είναι σημαντικοί παράγοντες της χαμηλής βιοδιαθεσιμότητας της κουρκουμίνης σε επίπεδα ιστού, ανεξάρτητα από την οδό χορήγησης, αν και οι μεταβολίτες της κουρκουμίνης παραμένουν για μεγαλύτερο χρονικό διάστημα σε διαφορετικούς ιστούς. Ωστόσο, η μακροχρόνια επίδραση της κουρκουμίνης, μετά την απόσυρση της διοίκησης είναι ακόμη να αναφερθεί. Δεν είναι σαφές κατά πόσον αντι-καρκινογόνο δράση της κουρκουμίνης οφείλεται στην σωρευτική επίδραση των μεταβολιτών της ή οφείλονται στην ίδια κουρκουμίνη. Περαιτέρω, αποδεικνύεται ότι η κατανάλωση ολόκληρο ή μερικώς καθαρισμένα εκχυλίσματα τροφίμων είναι περισσότερο επωφελής άνω μονής απομονώνονται συστατικά λόγω της ύπαρξης του συνεργιστικές αλληλεπιδράσεις μεταξύ των φυτοχημικών σε ολόκληρα τα τρόφιμα [20, 21]. Νωρίτερα έχουμε αναφέρει ότι αντικαρκινική δράση της κουρκουμίνης κατά τη διάρκεια μακροχρόνιας δράση της ρυθμίζεται μέσω της ρύθμισης της γλυκολυτικής οδού και της αγγειογένεσης, ως αποτέλεσμα της συνεπεία διαφοροποίησης των ενεργοποιημένων γονιδίων στρες [20]. Παρούσα μελέτη σχεδιάστηκε για να διερευνήσει μακροπρόθεσμη επίδραση της κουρκουμίνης στη ρύθμιση της Nrf2 μεσολάβηση αντιοξειδωτικά ένζυμα φάσης ΙΙ, ογκοκατασταλτικό ρ53 και φλεγμονή κάτω μικροπεριβάλλον οξειδωτικό όγκου σε μεταστατική ηπατική λεμφώματος ποντικών που φέρουν Ντάλτον.

Υλικά και Μέθοδοι

χημικά

Όλα τα χημικά ήταν αναλυτικής και της μοριακής βιολογίας βαθμού, καθώς και ενδοτοξίνη δωρεάν, και χρησιμοποιείται χωρίς περαιτέρω καθαρισμό. Η κουρκουμίνη, αντιδραστήρια για την απομόνωση RNA, Taq πολυμεράση, PMSF, μεναδιόνη, Sephadex G50 και συζευγμένο αντίσωμα HRP αντι-β ακτίνης αγοράστηκαν από την Sigma Aldrich. Ανάστροφης μεταγραφάσης, ριβονουκλεάση αναστολέα, τυχαίων εκκινητών (εξαμερών), 100 bp Plus σκάλα του DNA και το ένζυμο Klenow από Fermentase Life Science και TURBO DNA-Free

TM Kit I αγοράστηκαν από την Ambion. Gene ειδικούς εκκινητές για RT-PCR συντέθηκαν από Metabion. p53 αντίσωμα αντι-ποντικού από Imgenix, αντι-ποντικού iNOS και COX2 αντισώματος από αντι-κουνελιού δευτερογενές αντίσωμα Cayman και HRP συζευγμένο κατσίκας από Bangalore Genie. Ραδιοσημανθεί α

32Ρ-dCTP από το Διοικητικό Συμβούλιο της ακτινοβολίας και ισοτόπων Τεχνολογίας (BRIT) και ECL (Super Kit σήμα) αγοράστηκε από την Pierce Biotechnology HYSEL India Pvt. Ε.Π.Ε.

Ζώα και επαγωγή Τ-κυτταρικό λέμφωμα (Λέμφωμα Ντάλτον)

Ποντίκια (

Mus musculus

, στέλεχος AKR) εκτράφηκαν και διατηρήθηκαν υπό τυπικές εργαστηριακές συνθήκες με την κατάλληλη ανθρώπινη φροντίδας, σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές της θεσμικής επιτροπής δεοντολογίας των ζώων, στους 25 ± 2 ° C κάτω από 12 ώρες φως /12 ώρες σκοτάδι πρόγραμμα και παρέχεται με τις ζωοτροφές πρότυπο ποντίκια, το πόσιμο νερό

κατά βούληση

. Όλα τα πειράματα σε ζώα πραγματοποιήθηκαν με την έγκριση της επιτροπής δεοντολογίας Θεσμικών ζώων, Banaras Hindu University. Υγιή αρσενικά ποντίκια ενηλίκων (30 ± 2 g, 16-20 εβδομάδων) χρησιμοποιήθηκαν στην πειραματική εργασία. κύτταρα ασκίτη λεμφώματος Ντάλτον μεταμοσχεύθηκαν σε ενήλικα αρσενικά ποντίκια μέσω σειριακής μεταμόσχευση ενδοπεριτοναϊκή (ε.π.), όπως περιγράφηκε προηγουμένως [20]. κύτταρα ασκίτη λεμφώματος Ντάλτον ήταν προικισμένος από τον καθηγητή Ajit Sodhi, Σχολή Βιοτεχνολογίας, Banaras Hindu University, Βαρανάσι, Ινδία. λέμφωμα Dalton είναι ένα μεταφυτεύσιμων μη-Hodgkin ποντικού Τ-κυττάρου λέμφωμα, προέρχεται από το θύμο αδένα της DBA /2 ποντίκι στο Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου, Bethesda, MD, το 1947. [22].

Ανάπτυξη της ΝΔ ήταν επιβεβαιώνεται από κοιλιακή διόγκωση και την αύξηση του σωματικού βάρους, η οποία ήταν ορατές με σαφήνεια στις 10-11 ημέρες μετά τη μεταμόσχευση και τα ποντίκια DL επιβίωσε για 20 ± 2 ημέρες. Η ανάπτυξη του λεμφώματος Ντάλτον δεν παρουσίασαν καμία σημαντική μεταβολή στο σωματικό βάρος και ασκίτη συσσώρευση υγρού κατά τη διάρκεια των πρώτων 7-9 ημερών, αρχής γενομένης από την επόμενη ημέρα της μεταμόσχευσης DL (S1 Σχήμα). Ετσι πρώτα 7-9 ημέρες μπορεί να συγκριθεί με τη φάση καθυστέρησης /προπαρασκευαστική φάση του σιγμοειδούς καμπύλης για την αύξηση του πληθυσμού ασκίτη κυττάρων. Ως εκ τούτου, το χρονοδιάγραμμα της θεραπείας κουρκουμίνη σε DL ποντίκια επιλέχθηκε αναλόγως για 9 ημέρες, αρχής γενομένης από την επόμενη ημέρα της μεταμόσχευσης DL και ποντίκια θυσιάστηκαν κατά την ημέρα 18 της μεταμόσχευσης μετά DL (πριν από ποντίκια DL πεθαίνει φυσικά) για να πάρετε τη μακροπρόθεσμη επίδραση της κουρκουμίνης. Αν η κουρκουμίνη παρέχεται μέσω ενδοφλεβίως /ε.π., και μεταβολίζεται σε dihydrocurcumin, τετραϋδροκουρκουμίνη, hexahydrocurcumin και hexahydrocurcuminol. Η κουρκουμίνη αναμένεται να μεταβολίζεται πλήρως με τους μεταβολίτες της κατά 9 τελευταίες ημέρες μετά τη θεραπεία. Ως εκ τούτου, το αποτέλεσμα δεν θα πρέπει να οφείλεται στην άμεση επίδραση της κουρκουμίνης αλλά μπορεί να οφείλεται σε μεταβολίτες της κουρκουμίνης [20].

Πρόγραμμα αγωγής κουρκουμίνης σε ποντικούς DL και συλλογή ιστών

Έξι ομάδες του ποντικοί ελήφθησαν με 6 ποντίκια σε κάθε ομάδα (n = 6) και η κουρκουμίνη θεραπεία για DL ποντίκια είχε προγραμματιστεί, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [20]. Όλοι οι ποντικοί θυσιάστηκαν κατά την ημέρα 18 της μεταμόσχευσης των υστέρων DL (για να αποφευχθεί σηπτική κατάσταση πριν ποντίκια DL πεθαίνουν λόγω όγκου) με τρόπο ανώδυνο ευθανασία (αυχενική εξάρθρωση μετά αναισθητοποιημένους? Ποντίκια εκτέθηκαν σε αιθέρα παρουσιάζονται σε γάζα βαμβακιού μέσα σε ένα μικρό θάλαμο και συγκέντρωση αιθέρα ήταν περίπου 80 μΐ /λίτρο όγκου του δοχείου). Ήπαρ αποκόπηκε αμέσως μετά τη θυσία και πλύθηκε με παγωμένο φυσιολογικό ορό και ιστό από κάθε ομάδα (n = 6) συνενώθηκε και ψιλοκομμένο ασηπτικώς σε 4 ° C για το μέσο όρο αποτέλεσμα. Ο ιστός χρησιμοποιείται αμέσως ή διατηρημένα στους -80 ° C για περαιτέρω μελέτη.

δοκιμασία μετατόπισης ηλεκτροφορητικής κινητικότητας (EMSA)

Πυρηνική πρωτεΐνη εκχυλίστηκε και συγγένεια δέσμευσης σε αλληλουχίες Nrf2 προσδιορίστηκε με ηλεκτροφορητική κινητικότητα δοκιμασία μετατόπισης (EMSA) όπως περιγράφηκε προηγουμένως [23, 24, 25]. Καθαρισμένα συνθετικούς ολιγονουκλεοτιδικούς ανιχνευτές που αντιστοιχούν σε NF E2-συναινετική αλληλουχία (5′-νόημα TGGGGAACCTGTGCTGAGTCA-3 ‘, αντινόημα 5′-CTCCAGTGACTCAGCACAGGTTCC-3′ ή ARE-συναινετική αλληλουχία (5’-νόημα AGTCACAGTGACTCAGCAGAAT-3 ‘, αντινόημα 5’-AGATTCTGCTGAGTCACTGTGA -3 ‘) ανοπτήθηκαν, επισημασμένα με [α-32Ρ] CTP με τη χρήση Klenow ενζύμου. Τιτλοποίηση για την ειδικότητα και συγγένεια δέσμευσης των συνθεμένο ολιγονουκλεοτίδιο που αντιστοιχεί σε στοιχείο πρόσδεσης και NFE2 προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας μη επισημασμένα ανιχνευτή τέλος ως ειδικό ανταγωνιστή και το πολυ-dI /dC ως μη ειδική ανταγωνιστής αντίστοιχα. Η ένταση του συγκροτήματος στο αυτοραδιόγραμμα φωτογραφήθηκε και αναλύθηκε με πυκνομετρική σάρωση χρησιμοποιώντας την Alpha Image Analyser System (Άλφα Innotech, San Leandro, CA, USA).

απομόνωση RNA και RT-PCR

απομόνωση RNA, σύνθεση cDNA και ενίσχυση έγιναν όπως περιγράφηκε προηγουμένως γονίδια [20, 23, 24, 25]. η έκφραση του Nrf2, ισοένζυμα της GST, GR, NQO 1, ρ53, TGF-β1, iNOS και COX2 μελετήθηκαν με ημι-ποσοτική RT-PCR χρησιμοποιώντας συντεθεί cDNA. Τα κατάλληλα ζεύγη εκκινητών (S1 Πίνακα) χρησιμοποιήθηκαν για αντιδράσεις PCR με τη χρήση θερμικού κύκλου (Applied Biosystem). ένταση της ζώνης των ενισχυμένων προϊόντων οπτικοποιήθηκε, φωτογραφήθηκαν και αναλύθηκαν με τη χρήση Gel Doc System (η Alpha Innotech

ΕΚ) και οι τιμές ομαλοποιήθηκαν με β-ακτίνης ως εσωτερικός έλεγχος.

δοκιμασία τζελ Δραστηριότητα

δραστηριότητα του GR και NQO1 καθώς δραστηριότητα και ισοένζυμο πρότυπα της GST μετρήθηκε με το χρώση δραστηριότητα τζελ. Μη μετουσίωση ανάλυση PAGE των αντιοξειδωτικών ενζύμων προτιμώνται έναντι ανοσοανίχνευση, επειδή η αλλαγή στη δραστικότητα του ενζύμου σχετίζεται με μεταβολικές αλλαγές και η μέθοδος χρησιμοποιεί ειδικότητα υποστρώματος με βάση την ανίχνευση μόνο ενεργό μέρος των ενζύμων στο ίδιο πήκτωμα. Θεωρείται ιδιαίτερα σημαντική για τη συσχέτιση μια αλλαγή στο επίπεδο ενός συγκεκριμένου ισοενζύμου με εκείνη των μεταβολικών αλλαγών σε κυτταρικό επίπεδο [20].

Η γλουταθειόνη-S-τρανσφεράσης (GST).

Η δραστηριότητα γέλη διεξήχθη με PAGE μη μετουσιώσεως, όπως στη μέθοδο του Ricci et al. με μικρή τροποποίηση [26]. Ίση ποσότητα πρωτεΐνης από κάθε δείγμα διαχωρίστηκαν με 10% PAGE μη μετουσιώσεως στους 4 ° C. Gel επωάστηκε σε 100 mM ρυθμιστικού φωσφορικού καλίου (ρΗ 6.5) που περιέχει 4.5mm GSH, 1 mM CDNB και 1 mM ΝΒΤ σε 37 ° C για 10-15 λεπτά υπό ήπια ανάδευση. Στη συνέχεια, γέλη πλύθηκε με νερό και μεταφέρθηκε σε ένα διάλυμα 100 mM Tris-Cl (ρΗ 9.6) που περιέχει 3mM PMS για 3-5 λεπτά και φωτίζονται με φως μέχρι την εμφάνιση του μπλε formazen συγκρότημα ζώνες πάνω στο πήκτωμα. Η ένταση των ζωνών των διαφόρων ισοενζύμων έγιναν ορατές, φωτογραφήθηκαν και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας Gel Doc System (η Alpha Innotech

ΕΚ).

γλουταθειόνη αναγωγάσης (GR).

Η χρώση δραστηριότητα GR διεξήχθη σύμφωνα με την μέθοδο του Hou et al. [27]. Ίση ποσότητα πρωτεΐνης από κάθε δείγμα διαχωρίστηκαν με 8% PAGE μη μετουσιώσεως στους 4 ° C. Μετά την πλήρη ηλεκτροφόρηση, πηκτή μουσκεύτηκε σε 50 mM Tris-Cl (ρΗ 7.9) που περιέχει 4 mM GSSG, 1.5 mM NADPH και 2 mM ϋΤΝΒ επί 30 λεπτά σε RT, ξεπλύθηκε με 50 mM Tris-Cl (ρΗ 7,9) και μεταφέρθηκαν έως 1,2 mM NBT και 1.6 mM PMS. δραστηριότητα GR αρνητικά χρώση στο σκοτάδι για 10-15 λεπτά σε RT με ήπια ανακίνηση και στη συνέχεια εκτίθενται σε φως μέχρι την εμφάνιση των διαυγών ζωνών ζώνη δραστηριότητας GR. Η γέλη πλύθηκε με νερό για αποχρωματισμού και η μπάντα της έντασης οπτικοποιήθηκε, φωτογραφήθηκαν και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας Gel Doc System (η Alpha Innotech

ΕΚ)

NAD (P) H:.. Κινίνη οξειδοαναγωγάση (NQO1)

-gel χρώση δραστικότητα του NQO 1 διεξήχθη όπως περιγράφεται από τους Wrobel et al. [28]. Ίση ποσότητα πρωτεΐνης από κάθε δείγμα διαχωρίστηκαν με 10% PAGE μη μετουσιώσεως στους 4 ° C. Μετά την ηλεκτροφόρηση, πήγμα κηλιδώνεται σε 50 mM Tris-Cl (ρΗ 7,5), 0,3 mg /ml ΜΤΤ, 1 mM NADH και 30 μΜ menadione με ήπια περιδίνηση σε σκούρο χρώμα μέχρι αναπτύσσει (10-15 λεπτά) στις περιοχές που έχουν NQO1 δραστηριότητα. Η αντίδραση διακόπηκε με μεταφορά του σε μια γέλη (ν /ν) διάλυμα 5% οξικού οξέος. ένταση μπάντα οπτικοποιήθηκε, φωτογραφήθηκαν και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας Gel Doc System (η Alpha Innotech

ΕΚ).

Εκτίμηση της κατάστασης οξειδοαναγωγής

Σύνολο γλουταθειόνη και μειωμένη γλουταθειόνη προσδιορίστηκαν ως συνολική σουλφυδρυλίου (Τ- SH) το περιεχόμενο και μη-πρωτεϊνών σουλφυδρυλίου (NP-SH) περιεχομένου, αντίστοιχα, χρησιμοποιώντας συντελεστή μοριακής απορρόφησης των 13100 Μ

-1 εκατοστά

-1, και εκφράστηκαν σε μικρο moles ανά mg πρωτεΐνης [29]. οξειδοαναγωγική κατάσταση υπολογίστηκε ως ο λόγος της NP-SH με περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη-δεσμεύεται σουλφυδρυλ (P-SH).

κηλίδωση Western

ίση ποσότητα πρωτεΐνης από κάθε δείγμα χωρίστηκε σε 10% SDS -PAGE και μεταφέρθηκαν σε μεμβράνη PVDF όλη τη νύκτα στους 4 ° C. Η μεμβράνη μπλοκαρίστηκε σε 5% άπαχο γάλα σε PBS (ρΗ 7.4) για 2 ώρες σε RT. Blot επωάστηκε όλη τη νύκτα στους 4 ° C με ρ53 αντι-ποντικού κουνελιού (1: 500 αραίωση, Imgenix) ή κουνέλι iNOS αντι-ποντικού (1: 200 αραίωση, Cayman) ή COX2 αντι-ποντικού κουνελιού (αραίωση 1: 500, Cayman) σε 1% BSA και 0,05% Tween-20 σε PBS (ρΗ 7.4). Blot πλύθηκε και επωάστηκε με IgG HRP-συζευγμένο αντίσωμα κατσίκας αντι-κουνελιού (αραίωση 1: 2500, Bangalore Genei) σε PBS (ρΗ 7.4) που περιέχει 1% BSA και 0,05% Tween-20 για 2 ώρες σε RT. Ανοσοαντιδραστικές πρωτεΐνες ανιχνεύθηκαν με ECL σούπερ σετ σήματος (Pierce Biotechnology) σε φιλμ ακτίνων-Χ. τιμές πυκνότητας Band ομαλοποιήθηκαν με β-ακτίνη

μονοξείδιο του αζώτου (NO) Δοκιμασία

ΟΧΙ επίπεδο στο ήπαρ εκτιμήθηκε με τη χρήση του αντιδραστηρίου Griess.? 100 μΙ ομογενοποιήματος ήπατος αναμίχθηκε με 100 μΐ αντιδραστηρίου Griess (0.1% διυδροχλωρική ναφθυλαιθυλενοδιαμίνη, και 1% σουλφανιλαμίδιο σε 5% φωσφορικό οξύ), επωάστηκαν για 10 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου και η απορρόφηση μετρήθηκε στα 540 nm με μια συσκευή ανάγνωσης πλάκας (ECL ELISA reader) . Η συγκέντρωση του ΝΟ προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας πρότυπη καμπύλη, που δημιουργείται από τη λήψη γνωστές ποσότητες νιτρώδους νατρίου και οι τιμές εκφράζονται σε όρους μg ισοδυναμίας των NaNO2 /mg πρωτεΐνης

Στατιστική ανάλυση

Η στατιστική ανάλυση ήταν εκτελούνται από το λογισμικό SPSS χρησιμοποιώντας μονόδρομη ANOVA που ακολουθείται από δοκιμή Tucky του. Οι τιμές εκφράστηκαν ως μέση ± S.E.M. που λαμβάνονται από τρία διαφορετικά σύνολα πειραμάτων, ρ & lt?. 0.05 λήφθηκε ως στατιστικά σημαντική (95% διάστημα εμπιστοσύνης) σε σύγκριση με N ομάδα (#) και ομάδα DL + DMSO (*)

Αποτελέσματα

Επίδραση της κουρκουμίνης επί της σύνδεσης του Nrf2 με ARE συναινετική αλληλουχία

Ειδικότητα και συγγένεια δέσμευσης συνθεμένο ολιγονουκλεοτίδιο που αντιστοιχεί σε αντιοξειδωτικό στοιχείο απόκρισης (ARE συναινετική αλληλουχία) ελέγχθηκε. Τιτλοδότηση με μη σημασμένο ανιχνευτή (κρύο καθετήρα) ως ειδικό ανταγωνιστή και με μη ειδικό ανταγωνιστή (πολυ-δι /DC) επιβεβαίωσε την ειδικότητα και συγγένεια αντίστοιχα [Σχήμα 1Α και 1Β]. Η ένταση του ειδικού συμπλόκου DNA-πρωτεΐνης (Are-Nrf2) που ελήφθη στο DL και DL + DMSO ποντικούς ήταν περίπου 60% και 56% των φυσιολογικών ποντικών, αντίστοιχα. Σημαντική ενεργοποίηση και πυρηνική μετατόπιση της Nrf2 προκλήθηκε με αγωγή κουρκουμίνη έως 148%, 164% και 143% του DL + DMSO ποντικών με 50, 100 και 150 mg κουρκουμίνη /kg σωματικού βάρους, αντιστοίχως [σχήμα 1 (C)].

Η επίδραση της κουρκουμίνης στη δραστηριότητα πρόσδεσης DNA της Nrf2 με ΕΙΝΑΙ συναινετικές αλληλουχίες. (Α) Τιτλοποίηση με μη σημασμένο ανιχνευτή ως συγκεκριμένου ανταγωνιστή. (Β) Η τιτλοδότηση με πολυ-δι /DC ως μη ειδική ανταγωνιστή. (C) Αυτοραδιογράφημα που δείχνει Nrf2-είναι πολύπλοκα (D) πυκνομετρική σάρωση των Nrf2-είναι πολύπλοκες. Ήπαρ και των έξι ζώα κάθε ομάδα ομαδοποιήθηκαν ξεχωριστά και χρησιμοποιήθηκαν για εκχύλιση των πυρηνικών πρωτεϊνών. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση τιμή ± S.E.M. # Και * υποδηλώνει σημαντική διαφορά σε σύγκριση με το Ν και της ομάδας DL + DMSO, αντίστοιχα. Cur είναι η κουρκουμίνη και BW είναι το σωματικό βάρος. Ν, DL, DL + DMSO, DLT50, DLT100 και DLT150 παριστά φυσιολογικό, λέμφωμα έδρανο Dalton, λέμφωμα Ντάλτον φέρουν ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με DMSO και Dalton λέμφωμα φέρουν ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με 50, 100 και 150 mg κουρκουμίνη /kg σωματικού βάρους διαλυμένη σε DMSO, αντίστοιχα.

η

η επίδραση της κουρκουμίνης στην πρόσδεση του Nrf2 με συναινετική αλληλουχία NF-E2

Τιτλοποίηση με μη σημασμένο ανιχνευτή ως ειδικό ανταγωνιστή και πολυ-δι /dC ως μη συγκεκριμένου ανταγωνιστή επιβεβαίωσε την ειδικότητα και συγγένεια αντίστοιχα [Σχ 2Α και 2Β]. Η ένταση του ειδικού συμπλόκου DNA-πρωτεΐνης (ΝΡ-Ε2 με Nrf2) σε DL και DL + DMSO ποντικούς ήταν περίπου 32% και 70% των φυσιολογικών ποντικών, αντίστοιχα. Η ένταση του συγκροτήματος βρέθηκε να επάγεται σημαντικά με 100 mg κουρκουμίνη /kg σωματικού βάρους η οποία ήταν περίπου έως 144% των ποντικών DL + DMSO [σχήμα 2 (C)].

Επίδραση της κουρκουμίνης στο DNA δεσμευτική δραστηριότητα της Nrf2 με συναινετικές αλληλουχίες NFE2. (Α) Τιτλοποίηση με μη σημασμένο ανιχνευτή ως συγκεκριμένου ανταγωνιστή. (Β) Η τιτλοδότηση με πολυ-δι /DC ως μη ειδική ανταγωνιστή. (Γ) Αυτοραδιογράφημα που δείχνει Nrf2-NFE2 σύμπλοκο (D) πυκνομετρική σάρωση του συμπλόκου Nrf2-NFE2. Ήπαρ και των έξι ζώων κάθε ομάδας συνενώθηκε χωριστά και χρησιμοποιήθηκε για την εκχύλιση των πυρηνικών πρωτεϊνών. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση τιμή ± S.E.M. # Και * υποδηλώνει σημαντική διαφορά σε σύγκριση με το Ν και της ομάδας DL + DMSO, αντίστοιχα. Cur είναι η κουρκουμίνη και BW είναι το σωματικό βάρος. Ν, DL, DL + DMSO, DLT50, DLT100 και DLT150 παριστά φυσιολογικό, λέμφωμα έδρανο Dalton, λέμφωμα Ντάλτον φέρουν ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με DMSO και Dalton λέμφωμα φέρουν ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με 50, 100 και 150 mg κουρκουμίνη /kg σωματικού βάρους διαλυμένη σε DMSO, αντίστοιχα.

Η

Η επίδραση της κουρκουμίνης στην έκφραση της Nrf2 mRNA

Η έκφραση της Nrf2 ήταν κάτω ρυθμίζονται στο DL και DL + DMSO ποντίκια μέχρι περίπου 63% και 73% των φυσιολογικών ποντικών, αντίστοιχα, τα οποία ήταν σημαντικά μέχρι ρυθμίζονται προς κανονικό επίπεδο με τη θεραπεία κουρκουμίνη. Η έκφραση της Nrf2 ήταν 107%, 127% και 108% του DL + DMSO με 50, 100 και 150 mg κουρκουμίνη /kg σωματικού βάρους αντίστοιχα [Εικόνα 3].

Η επίδραση της κουρκουμίνης στην έκφραση του mRNA της Nrf2. (Α) RT-PCR του Nrf2 και β-ακτίνης. (Β) πυκνομετρική σάρωση του Nrf2 μετά από κανονικοποίηση με β-ακτίνη. Ήπαρ και των έξι ζώα κάθε ομάδα ομαδοποιήθηκαν ξεχωριστά και χρησιμοποιήθηκαν για την εκχύλιση του ολικού RNA. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση τιμή ± S.E.M. # Και * υποδηλώνει σημαντική διαφορά σε σύγκριση με το Ν και της ομάδας DL + DMSO, αντίστοιχα. Cur είναι η κουρκουμίνη και BW είναι το σωματικό βάρος. Ν, DL, DL + DMSO, DLT50, DLT100 και DLT150 παριστά φυσιολογικό, λέμφωμα έδρανο Dalton, λέμφωμα Ντάλτον φέρουν ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με DMSO και Dalton λέμφωμα φέρουν ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με 50, 100 και 150 mg κουρκουμίνη /kg σωματικού βάρους διαλυμένη σε DMSO, αντίστοιχα.

Η

Επίδραση της κουρκουμίνης στην έκφραση mRNA και ενζυματική δραστικότητα της GST ισοενζύμων

Η έκφραση και η δραστικότητα του πέντε ισοενζύμων της GST δηλαδή GSTA, ΟδΤΜ, ΠΣΕΠ, GSTt και GSTo παρατηρήθηκαν σε ποντίκι ήπαρ, όπου βρίσκεται GSTA να είναι το πιο άφθονο ισοένζυμο. Σε σύγκριση με τα φυσιολογικά ποντίκια, η έκφραση της GSTA, ΟδΤΜ, ΠΣΕΠ, GSTt και GSTo ήταν κάτω ρυθμίζεται περίπου μέχρι το 30%, 71%, 80%, 50% και 71% αντίστοιχα σε ποντίκια DL και περίπου 35%, 61%, 82% , 68%, και 76% αντίστοιχα σε ποντίκια DL + DMSO. θεραπεία κουρκουμίνη επαγόμενη έκφραση του πέντε ισοενζύμων με 50, 100 και 150 mg κουρκουμίνη /kg σωματικού βάρους σε σύγκριση με την DL + DMSO, η οποία ήταν ως ακολούθως-GSTA: 137%, 180%, 150%? ΟδΤΜ: 117%, 110%, 125%? ΠΣΕΠ: 113%, 107%, 108%? GSTt: 102%, 122%, 115%? GSTo:. 107%, 108% και 102% αντίστοιχα [Σχήμα 4 (Α)]

Η επίδραση της κουρκουμίνης στην έκφραση & amp? ενζυματική δραστικότητα ισοενζύμων GST (Α) RT-PCR ισοενζύμων GST και β-ακτίνης (Β) πυκνομετρική σάρωση των GST ισοενζύμων μετά από κανονικοποίηση με β-ακτίνη. (Γ) Ειδική χρώση δείχνει δραστικότητα ισοενζύμων της GST. (D) πυκνομετρική σάρωση της ζώνης δραστηριότητας ισοενζύμων της GST. Ήπαρ και των έξι ζώων κάθε ομάδας συνενώθηκε χωριστά και χρησιμοποιήθηκε για την εκχύλιση του ολικού RNA και πρωτεϊνών. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση τιμή ± S.E.M. # Και * υποδηλώνει σημαντική διαφορά σε σύγκριση με το Ν και της ομάδας DL + DMSO, αντίστοιχα. Cur είναι η κουρκουμίνη και BW είναι το σωματικό βάρος. Ν, DL, DL + DMSO, DLT50, DLT100 και DLT150 παριστά φυσιολογικό, λέμφωμα έδρανο Dalton, λέμφωμα Ντάλτον φέρουν ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με DMSO και Dalton λέμφωμα φέρουν ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με 50, 100 και 150 mg κουρκουμίνη /kg σωματικού βάρους διαλυμένη σε DMSO, αντίστοιχα.

η

Οι δραστηριότητες των πέντε ισοένζυμα της GST όπως GSTA, ΟδΤΜ, ΠΣΕΠ, GSTt και GSTo δεν ακολούθησε παρόμοια πορεία παραλλαγή με εκείνη της έκφρασης. Η δραστηριότητα της GSTA, ΟδΤΜ και ΠΣΕΠ μειώθηκε σε DL και DL + DMSO ποντίκια, όπου ως GSTt και GSTo ισοένζυμα έδειξε επαγόμενη δραστικότητα σε DL και DL + DMSO ποντίκια σε σύγκριση με τα φυσιολογικά ποντίκια. Η μείωση της δραστικότητας του GSTA: 46%, 41%? ΟδΤΜ: 59%, 67% και ΠΣΕΠ: 35%, 21% DL και DL + DMSO ποντίκια αντίστοιχα, σε σύγκριση με τα φυσιολογικά ποντίκια. Ωστόσο, GSTt και ισοένζυμα GSTo έδειξαν επαγόμενη δραστικότητα μέχρι 172% και 123% στην περίπτωση των GSTt και 145% και 126% στην περίπτωση των GSTo αντίστοιχα σε DL και DL + DMSO ποντίκια σε σύγκριση με τα φυσιολογικά ποντίκια. Η κουρκουμίνη διαμορφωμένο δραστηριότητα των ισοενζύμων της GST προς το φυσιολογικό επίπεδο. GSTA, ΟδΤΜ και ΠΣΕΠ διεγέρθηκαν διαφορικά με διαφορετικές δόσεις της θεραπείας κουρκουμίνης. Όλες οι δόσεις της κουρκουμίνης αυξημένα τη δραστηριότητα των GSTA και ΠΣΕΠ. GSTA ανυψώθηκε μέχρι περίπου το 132%, 155%, 143% και ΠΣΕΠ μέχρι περίπου το 247%, 366%, 420% των ποντικών DL + DMSO με 50, 100 και 150 mg κουρκουμίνη /kg σωματικού βάρους, αντίστοιχα. Πάντως, η δραστικότητα του ΟδΤΜ διεγέρθηκε σημαντικά μέχρι 156%, 106% με 100 και 150 mg κουρκουμίνη /kg σωματικού βάρους, αντιστοίχως. Μείωση της δραστηριότητας της GSTt ήταν μέχρι περίπου 94%, 81% με 50 και 100 mg κουρκουμίνη /kg σωματικού βάρους, αντίστοιχα, και GSTo μέχρι περίπου 75% με 50 mg κουρκουμίνη /kg σωματικού βάρους σε σύγκριση με τα ποντίκια DL + DMSO [Σχήμα 4 (C)] .

Επίδραση της κουρκουμίνης στην έκφραση mRNA και ενζυματική δραστικότητα του GR

Η έκφραση του GR στο ήπαρ του DL και DL + DMSO ποντικών κάτω ρυθμίζονται μέχρι περίπου 58% και 72% των φυσιολογικών ποντικών αντίστοιχα. θεραπεία κουρκουμίνη επαγόμενη έκφραση του GR σε ένα δοσοεξαρτώμενο τρόπο. Μέχρι ρύθμιση της έκφρασης του GR με κουρκουμίνη είναι περίπου 118%, 129%, 134% των ποντικών DL + DMSO με 50, 100 και 150 mg κουρκουμίνη /kg σωματικού βάρους αντίστοιχα [σχήμα 5Α και 5Β]. Η δραστικότητα του GR βρέθηκε να μειώνεται σε DL και DL + DMSO ποντίκια μέχρι περίπου 69% και 70% των φυσιολογικών ποντικών. Θεραπεία της κουρκουμίνης αυξημένα σημαντικά τη δραστηριότητα του GR μέχρι περίπου το 126%, 136%, 109% της ΝΔ + DMSO ποντίκια με 50, 100 και 150 mg κουρκουμίνη /kg σωματικού βάρους αντίστοιχα [σχήμα 5C και 5D].

Εφέ της κουρκουμίνης στην έκφραση & amp? ενζυματική δραστικότητα του GR (Α) RT-PCR του GR και β-ακτίνης (Β) πυκνομετρική σάρωση του GR μετά από κανονικοποίηση με β-ακτίνη. (Γ) Ειδική χρώση δείχνει δραστηριότητα της ΓΡ. (D) πυκνομετρική σάρωση της ζώνης δραστηριότητας της ΓΡ. Ήπαρ και των έξι ζώων κάθε ομάδας συνενώθηκε χωριστά και χρησιμοποιήθηκε για την εκχύλιση του ολικού RNA και πρωτεϊνών. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση τιμή ± S.E.M. # Και * υποδηλώνει σημαντική διαφορά σε σύγκριση με το Ν και της ομάδας DL + DMSO, αντίστοιχα. Cur είναι η κουρκουμίνη και BW είναι το σωματικό βάρος. Ν, DL, DL + DMSO, DLT50, DLT100 και DLT150 παριστά φυσιολογικό, λέμφωμα έδρανο Dalton, λέμφωμα Ντάλτον φέρουν ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με DMSO και Dalton λέμφωμα φέρουν ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με 50, 100 και 150 mg κουρκουμίνη /kg σωματικού βάρους διαλυμένη σε DMSO, αντίστοιχα.

η

Redox κατάσταση

οξειδοαναγωγική κατάσταση στο ήπαρ των ποντικών λεμφώματος φέρουν μετρήθηκε όσον αφορά τη μείωση σε σχέση με οξειδωμένη μορφή της γλουταθειόνης (NP-SH /P-SH), όπως οξειδοαναγωγική κατάσταση είναι επίσης, ένας σημαντικός δείκτης του οξειδωτικού στρες. Η κατάσταση παρατηρήθηκε να είναι 51% και 58% των φυσιολογικών ποντικών σε DL και DL + DMSO ποντίκια αντίστοιχα. Όλες οι τρεις δόσεις αυξημένα οξειδοαναγωγική κατάσταση σημαντικά, η οποία ήταν μέχρι περίπου 131%, 159% και 124% των ποντικών DL + DMSO με 50, 100 και 150 mg κουρκουμίνη /kg σωματικού βάρους αντίστοιχα [Εικόνα 6].

Εφέ της κουρκουμίνης για την κατάσταση της κυτταρικής οξειδοαναγωγής από την άποψη της NP-SH /P-SH. Ήπαρ και των έξι ζώων κάθε ομάδας συνενώθηκε χωριστά και χρησιμοποιήθηκε για την εκχύλιση του συνόλου των πρωτεϊνών. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση τιμή ± S.E.M. # Και * υποδηλώνει σημαντική διαφορά σε σύγκριση με το Ν και της ομάδας DL + DMSO, αντίστοιχα. Cur είναι η κουρκουμίνη και BW είναι το σωματικό βάρος. Ν, DL, DL + DMSO, DLT50, DLT100 και DLT150 παριστά φυσιολογικό, λέμφωμα έδρανο Dalton, λέμφωμα Ντάλτον φέρουν ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με DMSO και Dalton λέμφωμα φέρουν ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με 50, 100 και 150 mg κουρκουμίνη /kg σωματικού βάρους διαλυμένη σε DMSO, αντίστοιχα.

Η

Η επίδραση της κουρκουμίνης στην έκφραση mRNA και ενζυματική δραστηριότητα του NQO1

ποντίκια που φέρουν Λέμφωμα έδειξε μειωμένη έκφραση της φάσης ΙΙ αντιοξειδωτικού ενζύμου NQO1. Η έκφραση ρυθμίζεται προς τα κάτω σε DL και DL + DMSO ποντίκια μέχρι περίπου 66% και 77% της κανονικής ποντίκια. θεραπεία κουρκουμίνη σημαντικά τη ρυθμισμένη έκφραση προς τα φυσιολογικά επίπεδα (95% της κανονικής) με τη δόση των 100 mg κουρκουμίνη /kg σωματικού βάρους. Η αυξημένη έκφραση του NQO1 με κουρκουμίνη ήταν περίπου 104% και 123% των ποντικών DL + DMSO με 50 και 100 mg κουρκουμίνη /kg σωματικού βάρους, αντιστοίχως [Σχ 7Α και 7Β]. Η δραστικότητα του NQO 1, παρατηρήθηκε με προσδιορισμό γέλη δραστηριότητα ακολουθεί το πρότυπο παραλλαγή της έκφρασης του. Βρέθηκε να μειωθεί σε DL και DL + DMSO ποντίκια μέχρι περίπου 52% και 51% των φυσιολογικών ποντικών, αντίστοιχα. θεραπεία κουρκουμίνη με 100 και 150 mg /kg σωματικού βάρους αυξημένα τη δραστηριότητα του NQO1 σημαντικά, η οποία ήταν περίπου μέχρι 134% και 115% του DL + DMSO ποντίκια αντίστοιχα [Σχήμα 7γ και 7δ].

Η επίδραση της κουρκουμίνης σε mRNA έκφρασης & amp? ενζυματική δραστικότητα του NQO1 (Α) RT-PCR του NQO1 και β-ακτίνης (Β) πυκνομετρική σάρωση του NQO1 mRNA μετά από κανονικοποίηση με β-ακτίνη. (Γ) Ειδική χρώση δείχνει δραστηριότητα του NQO1. (D) πυκνομετρική σάρωση της ζώνης δραστηριότητας του NQO1. Ήπαρ και των έξι ζώων κάθε ομάδας συνενώθηκε χωριστά και χρησιμοποιήθηκε για την εκχύλιση του ολικού RNA και πρωτεϊνών. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση τιμή ± S.E.M. # Και * υποδηλώνει σημαντική διαφορά σε σύγκριση με το Ν και της ομάδας DL + DMSO, αντίστοιχα. Cur είναι η κουρκουμίνη και BW είναι το σωματικό βάρος. Ν, DL, DL + DMSO, DLT50, DLT100 και DLT150 παριστά φυσιολογικό, λέμφωμα έδρανο Dalton, λέμφωμα Ντάλτον φέρουν ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με DMSO και Dalton λέμφωμα φέρουν ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με 50, 100 και 150 mg κουρκουμίνη /kg σωματικού βάρους διαλυμένη σε DMSO, αντίστοιχα.

Η

Η επίδραση της κουρκουμίνης στην έκφραση του mRNA και το επίπεδο της πρωτεΐνης του p53

Το p53 είναι μια ασταθής πρωτεΐνη, διασπάται γρήγορα κάτω από το οξειδωτικό στρες. Η έκφραση του mRNA του Trp53 (ρ53 γονίδιο) βρέθηκε να ρυθμίζεται προς τα κάτω σε DL και DL + DMSO ποντίκια μέχρι περίπου 43% και 40% των φυσιολογικών ποντικών. Όλες οι τρεις δόσεις της κουρκουμίνης επαγόμενη έκφραση του Trp53 σημαντικά. Η δημιουργία ρύθμιση της έκφρασης Trp53 ήταν περίπου μέχρι 200%, 240% και 223% των ποντικών DL + DMSO με 50, 100 και 150 mg κουρκουμίνη /kg σωματικού βάρους αντίστοιχα [Σχήμα 8Α και 8Β]. Το επίπεδο της πρωτεΐνης καταστολής όγκου p53 ακολουθεί παρόμοιο πρότυπο μεταβολής της έκφρασης του. επίπεδο πρωτεΐνης μειώθηκε σε περίπτωση DL και DL + DMSO ποντίκια μέχρι περίπου 47% και 50% των φυσιολογικών ποντικών, αντίστοιχα.