Abstract

CC-χημειοκίνης συνδέτη 18 (CCL18) εκφράζεται κυρίως από ενεργοποιημένα μακροφάγα, εναλλακτικά και DCs και παίζει σημαντικό ρόλο στην πνευμονική ίνωση, αρθρίτιδα και άλλες ασθένειες. Εδώ CCL18 μετρήθηκε στους ορούς των 31 υγιών εθελοντών και 170 ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα και συσχετίστηκαν με τα δεδομένα αυτά ιστολογία, το στάδιο του όγκου και κλινικές παραμέτρους. Η μέση στάθμη των ασθενών με καρκίνο μη μικρού πνεύμονα CCL18 ορού ήταν 150 (857) ng /ml έναντι 32 (61) ng /ml στην υγιή ομάδα ελέγχου. Οι ομάδες ασθενών διαφέρουν ανάλογα σημαντικά ιστολογία τους (αδενοκαρκίνωμα 143 (528) ng /ml έναντι ακανθοκυτταρικό καρκίνωμα 187 (857) ng /ml, ρ & lt? 0,02). Επιπλέον, βρήκαμε μια σημαντική διαφορά μεταξύ των ασθενών με χαμηλότερο έναντι υψηλότερες T-στάδιο (ρ & lt? 0.003). Χαρακτηριστικό λειτουργίας λήπτη (ROC) αναλύσεις αποκάλυψαν ένα σημείο αποκοπής 83 ng /ml (περιοχή κάτω από την καμπύλη (AUC): 0.968? Ρ & lt? 0.0001) για τη διάκριση μεταξύ υγιών μαρτύρων και ασθενών με καρκίνο του πνεύμονα μη-μικρού κυττάρου. ROC αναλύσεις σε διακρίσεις μεταξύ των ασθενών, οι οποίοι έχασαν τη ζωή τους εξαιτίας του θανάτου που σχετίζονται με τον καρκίνο και σε εκείνους που έχασαν τη ζωή τους για άλλους λόγους δεν οδηγεί σε ένα έγκυρο AUC. Για τη διαστρωμάτωση των ασθενών όγκου, σε οικόπεδο αξίας κριτήριο έγινε οδηγεί σε ένα σημείο της ίσης ευαισθησίας και ειδικότητας (54%) των 162 ng /ml. Οι ασθενείς με επίπεδο ορού CCL18 υψηλότερη από 160 ng /ml είχε ένα μέσο χρόνο επιβίωσης 623 ημερών. Αντίθετα, εκείνες σε ασθενείς με ένα επίπεδο βασικής γραμμής μεταξύ 83 ng /ml και 160 ng /ml ο μέσος χρόνος επιβίωσης ήταν 984 ημέρες (ρ & lt? 0.005). Επιβίωση-ανάλυση αποκάλυψε σε αδενοκαρκίνωμα μέση επιβίωση 1152 ημέρες στην ομάδα κάτω 83 ng /ml. Στην μεσαία ομάδα, ο μέσος χρόνος επιβίωσης ήταν 788 ημέρες και στην ομάδα με τα υψηλότερα επίπεδα ο μέσος χρόνος επιβίωσης ήταν 388 ημέρες (ρ & lt? 0.001). Αντίθετα, βρήκαμε καμία συσχέτιση μεταξύ της FEV1 και το επίπεδο CCL18 βάσης. Συμπερασματικά, σε ασθενείς που πάσχουν από αδενοκαρκίνωμα αυξημένα επίπεδα CCL18 ορού προβλέπουν μειωμένο χρόνο επιβίωσης

Παράθεση:. Plönes Τ, Krohn Α, Burger Μ, Veelken Η, Passlick Β, Müller-Quernheim J, et al. (2012) Επίπεδο ορού CC-χημειοκινών ρίζας 18 είναι αυξημένος σε ασθενείς με μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα και συσχετίζεται με την επιβίωση Χρόνος σε αδενοκαρκινώματα. PLoS ONE 7 (7): e41746. doi: 10.1371 /journal.pone.0041746

Επιμέλεια: Allen Βαζιριστάν, Πανεπιστήμιο του Κολοράντο School of Medicine, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 1, Φεβρουαρίου, 2012? Αποδεκτές: 25 του Ιούν, 2012? Δημοσιεύθηκε: 25, Ιουλ 2012

Copyright: © 2012 Plönes et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Το έργο έγινε με τειχών χρήματα χωρίς οποιαδήποτε πρόσθετη χρηματοδότηση. Δεν υπάρχουν τρέχουσες εξωτερικές πηγές χρηματοδότησης για τη μελέτη αυτή

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. TP, AK, MB, HV και η BP δηλώνουν δεν υπάρχει σύγκρουση συμφερόντων. JMQ και GZ αίτηση για δίπλωμα ευρεσιτεχνίας για CCL18 και CCL18R ως βιοδεικτών και στόχος της θεραπείας (πατέντα). Αυτό δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων σε όλες τις PLoS ONE πολιτικές σχετικά με την κοινοχρησία δεδομένων και υλικών. GZ είναι μέλος της συντακτικής επιτροπής PLoS Ακαδημαϊκό.

Εισαγωγή

καρκίνου

πνεύμονα είναι η κύρια αιτία θνησιμότητας από καρκίνο σχετίζονται και είναι ένα από τα πιο σημαντικά κακοήθη νεοπλάσματα, λόγω του υψηλού επιπολασμού της και αυξανόμενη συχνότητα [1]. Σχεδόν το 80% όλων των καρκίνων του πνεύμονα είναι η ιστολογική ορίζεται ως μη μικροκυτταρικό καρκίνο των κυττάρων του πνεύμονα (NSCLC). Παρά τα πλεονεκτήματα των νέων τεχνολογιών και την ανάπτυξη νέων φαρμάκων που συμβάλλουν σε μια πολύ νωρίτερα διάγνωση και μια πιο επαρκή θεραπεία, NSCLC παραμένει μια απειλητική για τη ζωή ασθένεια. Η συνολική επιβίωση 5 ετών για ασθενείς με ΜΜΚΠ εξακολουθεί να είναι χαμηλή, ακόμη και στα πρώιμα στάδια της νόσου, το ποσοστό υποτροπής είναι σχετικά υψηλή [2], [3]. Η κακή πρόγνωση οφείλεται στην πολύ επιθετική συμπεριφορά που εκφράζεται από ταχεία προοδευτική ανάπτυξη του όγκου και νωρίς μετάσταση. Αν και ο ακριβής μηχανισμός της καρκινογένεσης και της μετάστασης σε NSCLC είναι ακόμη άγνωστες, το μικροπεριβάλλον του όγκου φαίνεται να παίζει βασικό ρόλο στην ανάπτυξη αυτής της κακοήθους νόσου και τη διάδοση των κυττάρων του όγκου. Το μικροπεριβάλλον στερεών όγκων είναι ένα πολύπλοκο μίγμα κυτταρικών και μη κυτταρικών παραγόντων [4]. Ειδικά τα κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος που βρίσκεται στο περιβάλλον του όγκου και την χημειοκίνη-αλληλοπαρεμβολές προάγουν την ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων και την εξάπλωση τους [5]. Tumor διηθητικά μακροφάγα, τα οποία είναι επίσης γνωστά ως μακροφάγα που σχετίζονται με όγκους (ΤΑΜ) αποτελούν ένα από τα πιο σημαντικά υποομάδα των κυττάρων του ανοσοποιητικού συστήματος στο μικροπεριβάλλον του όγκου και αντιπροσωπεύουν έως και το 50% της μάζας του όγκου. Ορισμένες μελέτες δείχνουν μια σημαντική συσχέτιση μεταξύ του θετικού αριθμού των ΤΑΜ και χειρότερη πρόγνωση σε κακοήθεις νόσους [6]. Αρχικά μονοκύτταρα προσλαμβάνονται από το κυκλοφορούν αίμα στον ιστό και να διαφοροποιηθούν σε δύο φαινοτύπους Μ1 ή μακροφάγων Μ2. Η φαινότυπος Μ1 συνδέεται με προ-φλεγμονώδη μονοπάτια που χαρακτηρίζεται από την απελευθέρωση των προ-φλεγμονωδών κυτοκινών και αυξημένη μικροβιακή θανάτωση. Ο φαινότυπος Μ2 δείχνει ένα προ-αγγειογόνος, prometastatic και protumoral δραστικότητα και συνδέεται με την αναδιαμόρφωση των ιστών. ΤΑΜ είναι κυρίως Μ2-μακροφάγα, τα οποία εκκρίνουν ένα συγκεκριμένο μοτίβο χημειοκινών [6] – [8]. Χαρακτηρίζονται από την απελευθέρωση της IL-10, CCL17, CCL22, IL-1 ra, και CCL18 [9]. Το CC-χημοκίνης CCL18, προηγουμένως ονομάζεται «πνευμονική και ενεργοποίηση ρυθμιζόμενων χημειοκίνη» εκφράζεται ισχυρά σε ανθρώπινους πνεύμονες και λιγότερο σε άλλους ιστούς όπως το λεμφικό λεμφαδένες ή θύμου. CCL18, η οποία είναι συνεχώς παρούσα στον ορό υγιών ατόμων, δεν έχει αντίστοιχο σε τρωκτικά και επίπεδο ορού της αυξάνεται σε πολλές καλοήθεις και κακοήθεις ασθένειες όπως πνευμονική ίνωση, την ατοπική δερματίτιδα, τη νόσο του Gaucher, και λευχαιμία [10] – [13]. Μερικοί συγγραφείς αποδεικνύουν επίσης ότι το επίπεδο του CCL18 είναι αυξημένα σε σωματικά υγρά και ορό ασθενών με καρκίνο των ωοθηκών [14], [15]. Η εξέταση του ιστού του όγκου που βρίσκεται η προέλευση των CCL18 σε υποπληθυσμό των ΤΑΜ βασίζεται στο μπροστινό μέρος του όγκου [16]. Είναι ενδιαφέρον CCL18 παρουσιάζει κάποια ομοιότητα με ΤΟΡ-β, αλλά ο ρόλος του CCL18 στο περιβάλλον του όγκου του NSCLC είναι ακόμα άγνωστη. Πρόσφατα, Chang et al. έδειξαν ότι CCL18 παράγει ρυθμιστή Τ κύτταρα, τα οποία μπορούν να βοηθήσουν τα καρκινικά κύτταρα να ξεφύγουν από τον ανοσολογικής [17]. Ως εκ τούτου, ερευνήσαμε το επίπεδο των ασθενών με καρκίνο του πνεύμονα με καρκίνο του πνεύμονα μη-μικρών κυττάρων και τη συσχέτιση των CCL18 με κλινικές παραμέτρους του ορού.

Υλικά και Μέθοδοι

Χαρακτηριστικά του NSCLC ασθενείς υγιείς μάρτυρες

εκατόν εβδομήντα ασθενείς που διαγιγνώσκονται με NSCLC (UICC Στάδιο Ι στο Στάδιο IV, 6

η έκδοση) και μια ομάδα ελέγχου από 31 υγιείς εθελοντές περιλαμβάνονται σε αυτή τη μελέτη. Η μέση ηλικία των ασθενών ήταν 64 ± 10 ετών 125 άνδρες και 45 γυναίκες. Αδενοκαρκίνωμα διαγνώστηκε σε 70 ασθενείς, 54 ασθενείς παρουσιάζονται με πλακώδες καρκίνωμα και σε 46 περιπτώσεις η εξέταση παθολόγος περιγράφεται μια μικτή ιστολογία. Η σταδιοποίηση έγινε με βάση την παθολογική εξέταση, όπου είναι δυνατόν? σε άλλες περιπτώσεις έγινε κλινική σταδιοποίηση σε συνδυασμό με κυτταρολογική ή ιστολογική επιβεβαίωση της μετάστασης. Το μέγεθος του όγκου εκτιμήθηκε χρησιμοποιώντας τα στοιχεία που παρέχονται από τους παθολόγους. Σύμφωνα με την κατάταξη στάσης UICC (6

ου Edition) βρήκαμε 22 ασθενείς στο στάδιο ΙΑ, 19 στο στάδιο ΙΒ, 5 στο στάδιο IIB, 29 ΙΙΙΑ, 25 στην ΙΙΙΒ και 69 στο στάδιο IV. Σε μία περίπτωση, το στάδιο UICC δεν προσδιορίστηκε λόγω της ανεπαρκούς καταγραφές δεδομένων, η οποία περιγράφεται μόνο το κομβικό κατάσταση. Η ομάδα ελέγχου αποτελείτο από 23 άνδρες και 8 άρρενες με μέση ηλικία τα 54 ± 5 ​​έτη (Πίν. 1). ταξινόμηση των όγκων, σύμφωνα με την ιστολογία παρουσιάζεται στον Πίνακα 2.

Η

Όλες οι διαδικασίες για την εν επιγνώσει συναίνεση, τη συλλογή δεδομένων και την προστασία της ιδιωτικής ζωής έχουν εγκριθεί από τα διοικητικά συμβούλια ηθική του Ιατρικού Κέντρου του Πανεπιστημίου του Freiburg. Τα κλινικά δεδομένα προήλθαν από το ιατρικό αρχείο δεδομένων του Ιατρικού Κέντρου του Πανεπιστημίου του Freiburg. Δείγματα ορού από κάθε άτομο λήφθηκαν κατά το χρόνο της διάγνωσης κατά τη διάρκεια κλινικών ασκηθούν τους πριν ξεκινήσει οποιαδήποτε θεραπευτική αγωγή. Οι οροί αποθηκεύτηκαν στους -80 ° C μέχρι διεξήχθη ανάλυση. Η διάγνωση της NSCLC ήταν ιστολογικά ή κυτταρολογικά επιβεβαιωθεί. Ιστολογικός τύπος προσδιορίστηκε σύμφωνα με την ταξινόμηση του Παγκόσμιου Οργανισμού Υγείας. Όλες οι όγκοι ταξινομούνται σύμφωνα με τη διαδικασία ανασυγκρότησης 6η έκδοση UICC περιλαμβάνονται ακτινογραφία θώρακος, υπολογιστική τομογραφία, η FDG-PET /CT, βρογχοσκόπηση ή /και mediastinoscopy. Τεστ πνευμονικής λειτουργίας (ΕΑΑ) έχουν συνήθως εκτελείται με μια τυπική μεθοδολογία σε χρονικό σημείο πριν από τη θεραπεία. Η συνολική επιβίωση ήταν υπολογίζονται αρχίζοντας από την ημερομηνία της διάγνωσης. Όποτε είναι δυνατόν, τις βασικές πληροφορίες που ανακτώνται από ιατρικά αρχεία του Ιατρικού Κέντρου του Πανεπιστημίου του Freiburg, από γενικό γιατρό ή από συνεντεύξεις μέσω τηλεφώνου. επαφή διατομής για όλους τους ασθενείς που επιβιώνουν πραγματοποιήθηκε τον Απρίλιο του 2011.Mean παρακολούθηση του χρόνου ήταν 1.325 ημέρες.

Ανοσοσήμανση ορού CCL18

φλεβικό αίμα λήφθηκε δείγμα χρησιμοποιώντας μια διαδικασία ρουτίνας. Τα δείγματα αίματος αναπαύονται 20 λεπτά πριν από τη φυγοκέντρηση. Μετά από φυγοκέντρηση, τα δείγματα ορού καταψύχθηκαν στους -80 ° C και αποθηκεύεται. CCL18 ήταν ποσοτικά με τη χρήση Duoset ELISA Ανάπτυξη Συστήματος Kit (R & amp? D Systems Europe, Wiesbaden, Γερμανία). Το όριο ανίχνευσης για CCL18 ELISA ήταν 7 pg /ml. Όλα τα δείγματα μετρήθηκαν εις διπλούν. Για δείγματα εις διπλούν, έγιναν δεκτές οι συντελεστές ενδο-δοκιμασίας διακύμανσης 10% και συντελεστές διακύμανσης 20% μεταξύ δοκιμασία.

Η

Τα στατιστικά στοιχεία

Οι συγκεντρώσεις που δίνονται ως μέση τιμή (εύρος) και εμφανίζεται ως οικόπεδα κουτί. Η στατιστική ανάλυση πραγματοποιήθηκε με τη χρήση StatView 5.0 λογισμικό (SAS Institute, NC). Οι συγκρίσεις μεταξύ των ομάδων ασθενών έγιναν χρησιμοποιώντας ANOVA και Bonferroni-Dunn δοκιμής για πολλαπλές συγκρίσεις. Σε ενιαίο συγκρίσεις τιμές πιθανότητας θεωρήθηκαν σημαντικές εάν ήταν μικρότερη από 0,05. Σε πολλαπλές συγκρίσεις επίπεδα για p προσαρμόστηκαν για τον αριθμό των συγκρίσεων (Bonferroni). ROC ανάλυση και οικόπεδο αξίας κριτήριο πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση MedCalc έκδοση 11.6 (MedCalc Λογισμικό, Βέλγιο). Οι καμπύλες επιβίωσης διεξήχθησαν σύμφωνα με τη μέθοδο των Kaplan-Meier. Διαφορές στην επιβίωση αναλύθηκαν από δοκιμασία log-rank. ανάλυση Multivariante έγινε με τη χρήση του COX proportonal μοντέλο κίνδυνοι και οι συσχετίσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση Spearman Rank Correlation.

Αποτελέσματα

επίπεδα ορού της CCL18 σε ασθενείς με NSCLC και Συσχέτιση με κλινικά και παθολογικά Παράμετροι

Το μέσο επίπεδο των CCL18 στα δείγματα ορού από ασθενείς με καρκίνωμα (n = 170) ήταν 150 (857) ng /ml, η οποία ήταν σημαντικά υψηλότερη από ό, τι τα δείγματα ελέγχου (n = 31, 32 (61) ng /ml? p & lt? 0,0001). Υπήρχε μια σημαντική διαφορά από όλες τις ομάδες ασθενών σε σχέση με τους ελέγχους (ρ & lt? 0,0001? Εικ. 1). Το επίπεδο ορού CCL18 σε ασθενείς με καρκίνωμα των πλακωδών κυττάρων ήταν υψηλότερη από ό, τι σε ορούς από ασθενείς με αδενοκαρκίνωμα (187 (857) ng /ml, 143 (528) ng /ml? Αντίστοιχα? Ρ & lt? 0,02). επίπεδα CCL18 ορού αυξήθηκε βαθμιαία και σημαντικά με την πρόοδο του Τ-στάδιο (Εικ. 2). Σε σύγκριση με το επίπεδο στον ορό ελέγχους CCL18 ήταν σημαντικά υψηλότερη σε Τ-στάδιο 1 (119 (332) ng /ml, η = 39, ρ = 0.0002) και περισσότερο σε Τ-στάδιο 2 ασθενείς (150 (421) ng /ml, η = 61 p & lt? 0,0001). Συγκρίσεις μεταξύ των καρκινοπαθών ασθενών έδειξε ότι τα επίπεδα σε Τ-στάδιο 1 ήταν σημαντικά χαμηλότερα σε σύγκριση με τα Τ-σταδίου 3 (210 (374) ng /ml, η = 26, ρ & lt? 0.005) και Τ-στάδιο 4 (182 (845) ng /ml, η = 28, ρ = 0,002). επίπεδο CCL18 σε T-στάδιο 3 και 4 διέφερε επίσης σημαντικά με την ομάδα ελέγχου (p & lt? 0,0001). Για να βεβαιωθείτε ότι ορό συγκεντρώσεις CCL18 συσχετίζονται με το μέγεθος του όγκου που εκτιμάται όγκων του όγκου από τα παθολογικά στοιχεία και συσχετίζονται τον όγκο του όγκου με συγκεντρώσεις CCL18 ορό. Πράγματι, υπήρξε μια αδύναμη αλλά σημαντική συσχέτιση του μεγέθους του όγκου και CCL18 ορού (rho = 0.48, ρ & lt? 0,005? Εικ. S1). . Δεν υπήρχαν σημαντικές διαφορές στα επίπεδα CCL18 ορό μεταξύ των διαφόρων Ν-στάδια και Μ-στάδια (τα δεδομένα δεν φαίνονται)

Υπήρξε επίσης μια διαφορά μεταξύ των ασθενών με πλακώδες καρκίνωμα και το αδενοκαρκίνωμα (ρ & lt? 0,02). Ωστόσο, αυτό δεν ήταν σημαντική μετά από διόρθωση Bonferroni.

Η

Επιπλέον, υπήρχε μια σημαντική διαφορά μεταξύ των ομάδων ασθενών με χαμηλότερο σε σχέση με τις δύο υψηλότερες T-στάδια.

Η

μονοπαραγοντική ανάλυση δεν υπήρχε συσχέτιση μεταξύ του επιπέδου ορού CCL18 και την ηλικία, ούτε στον έλεγχο ούτε στις ομάδες ασθενών. Προσθέτοντας μια δεύτερη ομάδα ελέγχου από σημαντικά μικρότερη ηλικία (24 (18) ετών) βρήκαμε ένα αδύναμο αλλά σημαντική συσχέτιση της CCL18 με την ηλικία (rho = 0,45, p & lt? 0,0001). Ωστόσο, η διαφορά στη συγκέντρωση του ορού CCL18 μεταξύ αυτών των δύο ομάδες δεν έφθασαν σε σημαντικό επίπεδο (32 (62) ng /ml έναντι 45 (63) ng /ml? Δεν είναι σημαντικές? Εικ. S2). Δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές μεταξύ των αρσενικών και θηλυκών βρέθηκαν εντός των υποομάδων διερευνηθεί. Επιπλέον, πολυμεταβλητή ανάλυση των δεδομένων των ασθενών όγκου μας έδειξαν ότι CCL18 εξαρτάται από το στάδιο του όγκου, αλλά είναι ανεξάρτητη από την ηλικία, το φύλο και FEV1 (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Προσδιορισμός CCL18 επίπεδο ορού σημεία αποκοπής

Ο δέκτης λειτουργεί χαρακτηριστικό (ROC) αναλύσεις αποκάλυψαν ένα σημείο αποκοπής των 83 ng /ml (περιοχή κάτω από την καμπύλη (AUC):. 0.968? p & lt? 0,0001? Σχήμα 3). για τη διάκριση μεταξύ υγιών μαρτύρων και των ασθενών με NSCLC

ROC ανάλυση να διακρίνει μεταξύ συνδέονται με τον καρκίνο ή που σχετίζονται με το θάνατο μη-καρκίνου δεν οδηγεί σε ένα έγκυρο AUC. Έτσι, για να διαστρωμάτωση περαιτέρω τις ασθενείς με όγκο, ένα οικόπεδο αξία κριτήριο διεξήχθη οδηγεί σε ένα σημείο της ίσης ευαισθησίας και ειδικότητας (54%) του 162 ng /ml. Οι ασθενείς με NSCLC και επίπεδο CCL18 ορό υψηλότερο από 162 ng /ml είχε ένα μέσο χρόνο επιβίωσης 623 ημέρες, ενώ σε ασθενείς με NSCLC και ένα επίπεδο στον ορό μεταξύ 160 ng /ml και 80 ng /ml ο μέσος χρόνος επιβίωσης ήταν 984 ημέρες. Στην υποομάδα με ένα επίπεδο CCL18 ορό 80 ng /ml ή κάτω από το μέσο χρόνο επιβίωσης ήταν 841 ημέρες. (P & lt? 0,004? Εικ. 4).

χρόνος επιβίωσης διαφέρει σημαντικά με διαφορετικά επίπεδα CCL18 ορού (p & lt? 0.004).

Η

CCL18 επίπεδο ορού και της επιβίωσης από ιστολογικές υποομάδες

σε ασθενείς με αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα βρήκαμε ένα μέσο χρόνο επιβίωσης από 388 ημέρες στην ομάδα με το υψηλότερο επίπεδο CCL18. Στην ομάδα με το επίπεδο CCL18 μεταξύ 160 ng /ml και 80 ng /ml η μέση επιβίωση ήταν 788 ημέρες και στην ομάδα με επίπεδο CCL18 κάτω από 80 ng /ml η μέση επιβίωση ήταν 1152 ημέρες (ρ & lt? 0,002? Σχ. 5Α ). Σε αντίθεση βρήκαμε καμία σημαντική διαφορά σε όλες τις τρεις ομάδες, αν οι ασθενείς έπασχαν από καρκίνο του πνεύμονα με μικτή ιστολογία ή από καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων (Εικ. 5Β).

χρόνος επιβίωσης των ασθενών με διαφορετικά επίπεδα CCL18 ορού διαφέρει σημαντικά σε αδενοκαρκίνωμα ασθενών (p & lt? 0,002? Α). αλλά όχι σε ασθενείς με πλακώδες καρκίνωμα (Β, αριστερό πάνελ) και μικτές NSCLC (Β, δεξιός πίνακας)

Η

CCL18 επίπεδο ορού και FEV1

Για να αποκλείσει το ενδεχόμενο ότι οι παρατηρούμενες συσχετίσεις που προκαλούνται από ΧΑΠ που μπορεί να συνοδεύουν τη νόσο του καρκίνου σε ασθενείς μας συσχετίζεται επίσης τα επίπεδα CCL18 ορού με τον εκπνεόμενο όγκο σε 1 δευτερόλεπτο (FEV1) [18]. Ωστόσο, δεν διαπίστωσε σημαντικές διαφορές στον FEV1 σχετικά με ιστολογία (αδενοκαρκίνωμα: 84 (82)%? NSCLC 77 (69)%? Πλακώδες καρκίνωμα 76 (80)%, δεν είναι σημαντική, Σχ S3.) Ή το στάδιο T (T1:77 ( 78)%? Τ2: (79 (69)%? Τ3:. (. 72 (60)%? T4:87 (80)%, Σχήμα S4) Επιπλέον, δεν υπήρχε σημαντική συσχέτιση μεταξύ της παραμέτρου πνευμονικής λειτουργίας FEV1 και το επίπεδο CCL18 σε οποιαδήποτε ιστολογική υποομάδα (αδενοκαρκίνωμα: rho = -0,02? NSCLC rho = -0.3? πλακώδες καρκίνωμα rho = -0.12, όχι σημαντική)

Συζήτηση

η διείσδυση των μακροφάγων που σχετίζονται με όγκους. (ΤΑΜ) σε αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα σχετίζεται με κακή πρόγνωση [19]. Επιπλέον, έχει δειχθεί ότι CCL18 απελευθέρωση ΤΑΜ που μας έφεραν στην υπόθεση ότι CCL18 θα μπορούσε να χρησιμεύσει ως βιοδείκτης του ορού σε ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα [16]. Εμείς παρατήρησε ότι το μέσο επίπεδο των CCL18 σε ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα ορό είναι περισσότερο από τέσσερις φορές αυξημένη σε σύγκριση με υγιείς μάρτυρες. τα δεδομένα μας δείχνουν ότι το επίπεδο CCL18 ορού αυξήσεις που αντιστοιχούν στο Τ-στάδιο. Σε αντίθεση, Ν και Μ-στάδιο δεν συσχετίζονται με το επίπεδο CCL18 ορό. Είναι ενδιαφέρον ότι, τα επίπεδα στον ορό CCL18 διέφερε ανάλογα με τον ιστολογικό υπότυπο του καρκίνου του πνεύμονα. Οι ασθενείς που πάσχουν από πλακώδες καρκίνωμα αποκαλύπτεται μια ελαφρώς υψηλότερη μέση στάθμη CCL18 στον ορό σε σύγκριση με τους ασθενείς που πάσχουν από αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα, όμως, αυτό ήταν ήσσονος σημασίας.

CCL18 είναι ένα τυπικό προϊόν της εναλλακτικά ενεργοποιημένων μακροφάγων και είναι μια πιθανή δείκτη ΤΑΜ [20]. Ως εκ τούτου, υποθέσαμε ότι το επίπεδο του ορού CCL18 μπορεί να αντανακλά τον αριθμό των ΤΑΜ. Επειδή οι ΤΑΜ βρίσκονται εντός του όγκου, ο αριθμός τους θα πρέπει να αυξηθεί με τη μάζα του όγκου. Έτσι, αναλύσαμε τη συσχέτιση μεταξύ του επιπέδου CCL18 ορού και T-στάδιο ως υποκατάστατος δείκτης για το μέγεθος του όγκου. Αυτό ισχύει ιδίως στα χαμηλότερα T-στάδια και μάλιστα οι αυξήσεις επίπεδο CCL18 ορού με την αύξηση της T-στάδια από την T-στάδια 1 έως T-στάδια 3. Η κύρια διαφορά μεταξύ των Τ-φάσεις 3 και T-στάδια 4 στάδιο είναι η διείσδυση των σημαντικών μεσοθωρακίου δομές, αλλά δεν απηχούν κατ ‘ανάγκη την αύξηση του μεγέθους. Επομένως, δεν ήταν έκπληξη το γεγονός ότι δεν αξιοσημείωτη διαφορά βρέθηκε σε επίπεδο ορού CCL18 ασθενών με Τ-στάδια 3 και Τ-στάδια 4. Επιπλέον, βρήκαμε επίσης ένα αδύναμο αλλά σημαντική συσχέτιση του CCL18 ορού με τον όγκο του όγκου, υποδεικνύοντας ότι ορός CCL18 που το μέγεθος του όγκου είναι τουλάχιστον ένα συγκεντρώσεις ορού CCL18 καθοριστικός παράγοντας. Ωστόσο, υπάρχουν σοβαρά εμπόδια στην εκτίμηση του μεγέθους του όγκου. Κανονικά, οι όγκοι έχουν ακανόνιστο σχήμα και δεν υπάρχει πρότυπο μοντέλο σώματος (σφαίρα, κύλινδρο ή τετράγωνο) αντανακλούν το σχήμα πραγματικό όγκο. Έτσι, χρησιμοποιώντας τις διαστάσεις που εξάγονται από τις εκθέσεις των παθολόγων για τον υπολογισμό του όγκου των όγκων βασίζεται σε μια απλή, τακτική μοντέλο σώματος (μήκος Χ πλάτος Χ ύψος), οι αναφερόμενοι όγκοι είναι μόνο κατά προσέγγιση εκτιμήσεις των πραγματικών όγκων. Αυτό θα μπορούσε να εξηγήσει τη χαμηλή συσχέτιση μεταξύ του όγκου των όγκων και των επιπέδων CCL18 ορού.

Ν- και Μ- στάδια είναι υποκατάστατο δείκτες για αιματογενής και lymphogenous μετάσταση. Εμείς δεν θα μπορούσε να βρει μια συσχέτιση αυτών των παραμέτρων με τα επίπεδα CCL18 ορό που επίσης δεν είναι έκπληξη. Η συμμετοχή των λεμφαδένων του μεσοθωρακίου και ο σχηματισμός μετάστασης δεν μπορεί ή μόνο οριακά την αύξηση του αριθμού των ΤΑΜ σε ένα ανιχνεύσιμο τρόπο.

Το γεγονός ότι δεν βρήκαμε σημαντικές διαφορές όσον αφορά το επίπεδο ορού CCL18 στην ιστολογική υποομάδες ασθενών με καρκίνο του πνεύμονα μη-μικρού κυττάρου μπορεί να εξαρτάται από το μηχανισμό της επαγωγής CCL18. Παρά τη διαφορετική βιολογία του όγκου του πλακώδους και αδενοκαρκίνωμα φαίνεται να είναι ένα σύμφωνο πορεία της επαγωγής και στις δύο ιστολογική υποτύπους και η ισχύς για την προώθηση εναλλακτικών ενεργοποίηση των μακροφάγων και στη συνέχεια να επάγει απελευθέρωση CCL18 μπορεί να είναι μια γενική ιδιότητα των κακοηθών κυττάρων [21] εκεί. Επί του παρόντος, η φυσιολογική λειτουργία των CCL18 θεωρείται ότι επηρεάζει κυρίως χημειοταξία και παλιννόστησης των λευκοκυττάρων και τη ρύθμιση της ανοσολογικής απόκρισης [22]. Ωστόσο, πρόσφατα αποτελέσματα της ομάδας μας και άλλοι αποδεικνύουν ότι CCL18 εμπλέκεται επίσης στην επαγωγή της παραγωγής μήτρας από ινοβλάστες [23], [24]. Έτσι, CCL18 μπορεί επίσης να ασχολούνται με το σχηματισμό του στρώματος του όγκου.

ΤΑΜ έχουν ισχυρή προγνωστική αξία σε πολλούς κακοήθεις όγκους [6], [25], [26] καθώς διεγείρουν άμεσα την ανάπτυξη του όγκου, μετάσταση , και την αγγειογένεση μέσω απελευθέρωση διαφόρων παραγόντων ανάπτυξης, πρωτεάσες μήτρας και κυτοκίνες. Οι λειτουργίες προαγωγής του καρκίνου της ΤΑΜ περιλαμβάνουν επίσης την καταστολή της προσαρμοστικής ανοσίας από διάφορους μηχανισμούς που περιέχουν φτωχή ικανότητα παρουσίαση αντιγόνου και αναστολή του πολλαπλασιασμού των Τ κυττάρων [27], [28]. CCL18 είναι επίσης ικανό να παράγει προσαρμοστικές ρυθμιστικά Τ κύτταρα (Tregs) από CD4

+ CD25

– Τ κύτταρα μνήμης [17]. Tregs Τα φυσιολογικώς ασχολείται με τη συντήρηση του ανοσολογικού αυτο-ανοχή, αλλά αναστέλλουν επίσης αντικαρκινική δραστικότητα των Τ κυττάρων. Ένα μεγάλο μέρος των Tregs είναι παρόντα σε όγκους των ασθενών με διαφορετικές οντότητες και λεμφαδένες παροχέτευσης τους [9], [29], [30]. Είναι σημαντικό ότι ο αριθμός των Tregs σε όγκους ασθενών με καρκίνο του πνεύμονα, καρκίνο μαστού, γαστρικό καρκίνο και καρκίνο των ωοθηκών συσχετίζονται με κακή πρόγνωση και υποτροπή της νόσου [31] – [38]. Έτσι, CCL18 μπορεί να διαδραματίσει ένα ρόλο στην πρόσληψη και την επαγωγή των Tregs στο περιβάλλον του όγκου και στη συνέχεια προωθεί τη διαφυγή του όγκου από το ανοσοποιητικό επιτήρησης.

Πρόσφατα μπορούσε να αποδείξει ότι οι επιρροές CCL18 επιβίωση των ασθενών με ιδιοπαθή πνευμονική ίνωση (ΙΠΙ) [13]. Ως εκ τούτου, μπορούμε επίσης να ορίζονται τα σημεία αποκοπής και αναλύονται επιβίωσης σε ασθενείς με NSCLC. Εμείς στρωματοποιημένη τους ασθενείς χρησιμοποιώντας ένα οικόπεδο αξίας κριτήριο, το οποίο μας οδηγεί στην συγκέντρωση CCL18 των 162 ng /ml ως σημείο αποκοπής. αναλύσεις ROC μας αποκάλυψε ένα σημείο αποκοπής με πολύ υψηλή ειδικότητα και ευαισθησία. Σε αντίθεση, το σημείο αποκοπής ορίζεται από το οικόπεδο αξίας κριτήριο έχει μόνο μια περιορισμένη προγνωστική αξία, όπως αποδεικνύεται από την σχετικά χαμηλή ευαισθησία και ειδικότητα. Παρ ‘όλα αυτά, χρησιμοποιώντας αυτή την τιμή ως εργαλείο διαστρωμάτωσης βρήκαμε σημαντικές διαφορές όσον αφορά το μέσο χρόνο επιβίωσης των ασθενών με NSCLC. Ασθενείς με συγκέντρωση CCL18 160 ng /ml ή παραπάνω αποκαλύπτεται ένα μέσο χρόνο επιβίωσης που μειώθηκε κατά ένα τρίτο σε σχέση με τους ασθενείς με μια συγκέντρωση CCL18 μικρότερη από 160 ng /ml. Αυτή η επίδραση είναι πιο διακριτικό στην υποομάδα των ασθενών με αδενοκαρκίνωμα. Είναι ενδιαφέρον, Leung et al. Εκτιμάται έκφραση CCL18 στο γαστρικό αδενοκαρκίνωμα ιστό και διαπίστωσε συσχέτιση της έκφρασης του mRNA υψηλής CCL18 στον όγκο με παρατεταμένη συνολική επιβίωση [16]. Επιπλέον, οι συγγραφείς βρήκαν θετική συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης του mRNA CCL18 και δεικτών Τ κυττάρου εντός του ιστού. Αυτό είναι ενδιαφέρον, επειδή CCL18 περιγράφεται ως Τ-κυττάρων χημειοελκτικό [39]. Έτσι, η αυξημένη έκφραση του CCL18 εντός του όγκου προωθεί την εισροή των κυττάρων Τ εντός του όγκου και ως εκ τούτου θα μπορούσε να είναι προστατευτική. Αντιθέτως, υψηλά επίπεδα CCL18 στον ορό θα μπορούσαν να διατηρήσουν τα Τ κύτταρα μέσα στην περιφέρεια και αναστέλλει τη μετανάστευση τους εντός του όγκου.

Θα μπορούσε κανείς να υποστηρίξει ότι η συσχέτιση της καλής πρόγνωσης και χαμηλότερες συγκεντρώσεις CCL18 στον ορό είναι συμπτώσεις και όχι συνάφεια εξαρτήσεις επειδή Τ1 στάδια τα οποία συνδέονται με χαμηλότερα CCL18 ορού R0 εκτομή και κατά συνέπεια έχουν υψηλότερα ποσοστά επιβίωσης σε σχέση με άλλα στάδια. Ωστόσο, αν και T1 στάδια πλακώδες καρκίνωμα ή μικτά NSCLC είναι επίσης R0 εκτομή βρήκαμε μια συσχέτιση μεταξύ του επιπέδου CCL18 ορού και ο χρόνος επιβίωσης μόνο σε ασθενείς με αδενοκαρκίνωμα αλλά όχι σε πλακώδες καρκίνωμα ή αναμειγνύονται NSCLC. Ως εκ τούτου, η σύνδεση του χρόνου επιβίωσης και CCL18 ορό δεν εξαρτάται από διαφορετικές επιλογές θεραπείας σε αυτά τα διαφορετικά στάδια.

Πρόσφατα, Sin και συνεργάτες έδειξαν ότι CCL18 αυξάνεται σε χρόνια αποφρακτική πνευμονοπάθεια (ΧΑΠ) και ότι η αύξηση αυτή συνδέεται με αυξημένη συνολική θνησιμότητα στη ΧΑΠ [18]. Επειδή οι περισσότεροι από τους ασθενείς μας είναι καπνιστές η παρουσία της ΧΑΠ θα μπορούσε να είναι δυνατή. Ωστόσο, αν και σημαντική, η αύξηση των CCL18 αναφέρθηκε από Sin et al. είναι πολύ μικρότερη, όπως περιγράφεται εδώ. Επιπλέον, οι τιμές FEV1 στους ομάδες μας αποκαλύπτεται μια μεγάλη μεταβλητότητα αλλά δεν διέφερε σημαντικά μεταξύ των διαφόρων ιστολογικών ομάδων ή μεταξύ των Τ-στάδια. Το πιο σημαντικό, CCL18 δεν συσχετίζονται με FEV

1.

Παρά το γεγονός ότι οι έλεγχοι μας είναι σημαντικά μικρότερα των καρκινοπαθών ασθενών οι παρατηρούμενες διαφορές μεταξύ των ασθενών όγκου και των ελέγχων δεν βασίζονται αποκλειστικά στην ηλικία. Οι παρατηρούμενες διαφορές μεταξύ των διαφορετικών ηλικιακών ομάδων δοκιμάστηκαν δεν είναι σημαντικές και οι διάμεσοι των διαφορετικών ομάδες ελέγχου μας που βρίσκεται στην περιοχή δεδομένων των ελέγχων. Έτσι, αν και θα μπορούσε να υπάρχει μια επίδραση της ηλικίας σε επίπεδο ορού CCL18, οι παρατηρούμενες διαφορές μεταξύ των ελέγχων και των ασθενών όγκου δεν μπορεί να εξηγηθεί από τις διαφορετικές ηλικίες μέση αυτών των ομάδων.

Συμπεράσματα

CCL18 είναι ένας δείκτης των εναλλακτικά ενεργοποιημένων μακροφάγων και έχει, ως εκ τούτου σημαντικό αντίκτυπο στην ορχήστρα του «χημειοκινών cross-talk» στο μικροπεριβάλλον του καρκίνου του πνεύμονα μη-μικρού κυττάρου. Ειδικά στον καρκίνο του πνεύμονα είναι επείγουσας σημασίας να κατανοήσουμε πώς το στρώμα του όγκου επικοινωνεί με τα καρκινικά κύτταρα και το πώς οι χημειοκίνες και ανοσο-ικανών κυττάρων επηρεάζουν τη διαδικασία της ανάπτυξης του όγκου και της μετάστασης. Μια ειδική πτυχή της CCL18 είναι επίσης η ανοσο-ρυθμιστικό ρόλο και η επαγωγή των ρυθμιστικών Τ κυττάρων. Αυτό εμπλέκει ένα τεράστιο δυναμικό της CCL18 να δρα ως ένα ανοσοκατασταλτικό μέσο, ​​το οποίο παίζει σημαντικό ρόλο όχι μόνο στην κακοήθεια, αλλά και σε καλοήθη νόσο με αυτοάνοσες πτυχές. Περιορίζεται αυστηρά στα είδη πρωτευόντων και λείπει σε τρωκτικά, CCL18 δραπέτευσε μέχρι σήμερα η προσοχή των περισσότερων ερευνητών.

Η μελέτη μας διερευνώνται για πρώτη φορά το επίπεδο των CCL18 ορού σε ασθενείς με μη μικροκυτταρικό πνεύμονα Καρκίνος. Υπάρχει μια σημαντική αύξηση των επιπέδων ορού και CCL18 ανάλυση ROC καταδεικνύει ότι CCL18 μπορούσε να είναι μια άκρως προγνωστική δείκτης ορού για τη διαφοροποίηση μεταξύ των ασθενών όγκου και μη όγκου. Η συσχέτιση μεταξύ CCL18 ορό και το στάδιο του όγκου υποδηλώνει ότι CCL18 είναι ένας υποκατάστατος δείκτης για το μέγεθος του όγκου. CCL18 προβλέπουν επίσης τον χρόνο επιβίωσης σε ασθενείς με αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα. Η παρουσία αυξημένων επιπέδων υψηλά CCL18 του ορού σε ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα μη-μικρού κυττάρου μπορούσαμε να επισημάνουμε ένα σημαντικό ρόλο του CCL18 στο μικροπεριβάλλον του καρκίνου του πνεύμονα και θα μπορούσε να είναι ένας πιθανός στόχος στην θεραπεία του καρκίνου του πνεύμονα.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Εικόνα S1.

συγκέντρωση CCL18 στον ορό (ng /ml) συσχετίζεται με τον όγκο του όγκου (cm

3 ως λογάριθμος προς την βάση 10). (Rho = Spearman συντελεστής συσχέτισης βαθμού).

doi: 10.1371 /journal.pone.0041746.s001

(ΔΕΘ)

Εικόνα S2. επίπεδα

Median CCL18 σε δύο ομάδες ελέγχου των διαφορετικών ηλικιακών. Έλεγχοι κάτω των 45 ετών (μέση ηλικία 26 ± 4,5 έτη) αποκαλύπτουν υψηλότερα επίπεδα CCL18 ορού από τους ελέγχους με την ηλικία των 45 ετών ή μεγαλύτερη (μέση ηλικία 54 ± 4,9 έτη)? Ωστόσο, η διαφορά αυτή δεν ήταν στατιστικά σημαντική

doi:. 10.1371 /journal.pone.0041746.s002

(ΔΕΘ)

Εικόνα S3.

εκπνεόμενο όγκο σε ένα λεπτό (FEV1) σε ομάδες του ασθενούς. Και οι τρεις ομάδες αποκαλύπτουν μια μεγάλη διακύμανση των FEV1, ωστόσο, δεν υπάρχουν σημαντικές διαφορές στον FEV1 μεταξύ των κλάσεων

doi:. 10.1371 /journal.pone.0041746.s003

(ΔΕΘ)

Εικόνα S4.

εκπνεόμενο όγκο σε ένα λεπτό (FEV1) στα διάφορα στάδια Τ. Όλα τα στάδια αποκαλύπτουν μια μεγάλη διακύμανση των FEV1, ωστόσο, θα μπορούσε να παρατηρηθούν διαφορές μεταξύ Τ στάδια

doi:. 10.1371 /journal.pone.0041746.s004

(ΔΕΘ)

Ευχαριστίες

Οι συγγραφείς θα ήθελαν να ευχαριστήσω Όλγα Meyer για επιδέξιος τη βοήθειά τους στις μετρήσεις ELISA.