Αφηρημένο

Growing γενετικής και μοριακής βιολογίας στοιχεία δείχνουν ότι η διαταραχή της ισορροπίας μεταξύ Έκκριση Frizzled-σχετική Πρωτεΐνη-1 ( SFRP1) και β-κατενίνης παίζει σημαντικό ρόλο στην έναρξη και την ανάπτυξη πολλαπλών μορφών καρκίνου. Ο σκοπός της παρούσας μελέτης ήταν να εξετάσει κατά πόσον η έκφραση του SFRP1 και β-κατενίνης συσχετίζεται με τις κλινικές-παθολογικές χαρακτηριστικά των ασθενών με καρκίνο του προστάτη (PCA), και να αξιολογήσει το δυναμικό ρόλο τους ως προβλεπτική και προγνωστική βιολογικών δεικτών. Σε αυτή τη μελέτη, συμπεριλήφθηκαν συνολικά 61 ασθενείς με προστάτη και 10 ασθενείς με καλοήθη υπερπλασία του προστάτη, και δείξαμε ότι η έκφραση της SFRP1 και β-κατενίνης συσχετίζεται με το σκορ, ποσοστό επιβίωσης Gleason και απόκρισης για ενδοκρινική θεραπεία του προστάτη. Τα ποσοστά επιβίωσης των ασθενών προστάτη με χαμηλή έκφραση SFRP1 (P = 0,016) ή υψηλή έκφραση της β-κατενίνης (P = 0.004) ήταν σημαντικά φτωχότερη. Μια αρνητική συσχέτιση (r = -0,275, P = 0,032) μεταξύ SFRP1 και β-κατενίνης παρατηρήθηκε από Chi-square test. Η πολυπαραγοντική ανάλυση έδειξε ότι SFRP1 (αναλογία κινδύνου, 0,429? Διαστήματα εμπιστοσύνης 95%, 0,227 έως 0,812? P = 0,009), μπορεί να χρησιμεύσει ως ένα ανεξάρτητο προγνωστικό και προγνωστικό παράγοντα για την PCA. Δείξαμε επίσης ότι τα επίπεδα της πρωτεΐνης και του mRNA της SFRP1 στην εξαρτώμενη από ανδρογόνο κυτταρική γραμμή προστάτη LNCaP ήταν σημαντικά υψηλότερες από εκείνες των ανδρογόνων-ανεξάρτητες κυτταρικές σειρές προστάτη DU145 και PC3. Ωστόσο, το επίπεδο της πρωτεΐνης του β-κατενίνης σε κύτταρα LNCaP ήταν σημαντικά χαμηλότερη από ότι σε DU145 και PC3 κύτταρα, και καμία σημαντική διαφορά του επιπέδου mRNA β-κατενίνης παρατηρήθηκε σε LNCaP, DU145 και τα κύτταρα PC3. Όξινο θειώδες αλληλουχίας δοκιμασία PCR αποκάλυψε σημαντικά χαμηλότερο επίπεδο της μεθυλίωσης του

SFRP1

προαγωγό σε κύτταρα LNCaP από εκείνο στο DU145 και PC3 κύτταρα. Στο σύνολό τους, τα ευρήματα αυτά υποδηλώνουν ότι SFRP1, η οποία έκφραση συσχετίζεται αντιστρόφως με εκείνη της β-κατενίνης, είναι μια ευνοϊκή πρόληψης και πρόγνωσης βιοδεικτών

Παράθεση:. Zheng L, Sun D, ​​Fan W, Zhang Ζ, Li Q Ο Jiang T (2015) Διαγνωστική Αξία της SFRP1 ως Ευνοϊκές πρόληψης και πρόγνωσης βιοδεικτών σε ασθενείς με καρκίνο του προστάτη. PLoS ONE 10 (2): e0118276. doi: 10.1371 /journal.pone.0118276

Ακαδημαϊκό Συντάκτης: Craig Ν Robson, Βόρεια Ινστιτούτο για την Έρευνα του Καρκίνου, ΗΝΩΜΕΝΟ ΒΑΣΙΛΕΙΟ

Ελήφθη: 2 Αυγ, 2014? Αποδεκτές: 12η Ιανουαρίου, 2015? Δημοσιεύθηκε: 26 Φεβρουαρίου, 2015

Copyright: © 2015 Zheng et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. η εργασία αυτή χρηματοδοτήθηκε από επιχορηγήσεις (21272032 σε TJ) από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (https://www.nsfc.gov.cn/publish /portal1 /). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του προστάτη (PCA) είναι μια κοινή κακοήθη όγκο του ουροποιητικού συστήματος, η οποία είναι η έκτη κύρια αιτία θανάτου που σχετίζονται με τον καρκίνο στους άνδρες [1-3], σοβαρά επηρεάζει την ποιότητα της ζωής του ασθενούς. Οικογενειακό ιστορικό της νόσου, την εθνικότητα και η προχωρημένη ηλικία αναγνωρίζονται ως τους σημαντικότερους παράγοντες που οδηγούν προστάτη, ενώ λεπτομερής παθογένεση αυτής της ασθένειας είναι ακόμη ασαφές [4]. Επί του παρόντος, η ριζική χειρουργική εκτομή, ακτινοβολία και ορμονική θεραπεία χρησιμοποιούνται ως θεραπείες του προστάτη [5-8]. Ωστόσο, αυτή η ασθένεια είναι συνήθως θανατηφόρος για τους περισσότερους ασθενείς διαγιγνώσκονται σε προχωρημένα στάδια. Ως εκ τούτου, είναι πολύ σημαντικό να προσδιοριστούν πολύτιμη έξυπνη και προγνωστική βιολογικών δεικτών για την έγκαιρη διάγνωση, και να αποσαφηνίσει την παθογένεια του προστάτη.

Οι Wnt πρωτεΐνες που εκκρίνονται γλυκοζυλιωμένη και λιπιδίων τροποποιημένες πρωτεΐνες πλούσιες σε κυστεΐνη, που παίζουν σημαντικό ρόλο σε πολλές κυτταρικές διαδικασίες, συμπεριλαμβανομένων των κυτταρική διαφοροποίηση, τον πολλαπλασιασμό, τη μετανάστευση, τη δραστηριότητα των συνάψεων και την εμβρυϊκή ανάπτυξη [9-14]. Αυτές οι πρωτεΐνες ασκούν τις φυσιολογικές λειτουργίες τους μέσω του μονοπατιού σηματοδότησης Wnt. Οι πρωτεΐνες Wnt προσδένονται στους υποδοχείς επτά διαμεμβράνης (7-Tm) του frizzled οικογένειας, και στη συνέχεια ενεργοποιούν μία σύνθετη αλληλουχία σηματοδότησης, τελικά να οδηγήσει στην ενεργοποίηση των κατάντη γονιδίων στόχων, όπως

c-myc, c-Jun, φιμπρονεκτίνης

και

κυκλίνης D1

[15,16]. β-κατενίνη είναι ένα σημαντικό συστατικό του μονοπατιού σηματοδότησης Wnt, των οποίων η αλλαγμένη εντοπισμός έχει αναγνωριστεί ως ένας δείκτης της ενεργοποίησης οδού σηματοδότησης Wnt [16]. Σε περίπτωση απουσίας του συμπλοκοποιητού Wnt, κυτταροπλασματικής β-κατενίνης αποικοδομείται από το σύμπλοκο καταστροφή β-κατενίνης που αποτελείται από πρωτεΐνη ικριώματος αξίνης, καζεΐνης κινάσης 1 (CK1), αδενωματώδη πολυποδίαση coli (APC) και γλυκογόνο συνθάσης κινάσης 3 (GSK3), μέσω της ουβικιτίνης -proteasome μονοπάτι. Ωστόσο, με την παρουσία του συνδέτη Wnt, Wnt συνδετήρας συνδέεται προς τον υποδοχέα του, με αποτέλεσμα την αναστολή του συμπλόκου καταστροφή β-κατενίνης. Στη συνέχεια, οι μη φωσφορυλιωμένη μόρια β-κατενίνη συσσωρεύεται στο κυτταρόπλασμα, ένα μέρος του οποίου εισέρχεται στον πυρήνα και ασκούν τη λειτουργία τους ως συν-ενεργοποιητή παραγόντων LEF /TCF μεταγραφή, τελικά να οδηγήσει στην ενεργοποίηση του Wnt έκφραση γονιδίων στόχων [9]. Επί του παρόντος, όλο και περισσότερα στοιχεία δείχνουν ότι η απορρύθμιση του μονοπατιού σηματοδότησης Wnt συνδέεται στενά με προστάτη ογκογένεση σε ενήλικες [17-20].

Εκκρίνεται κατσαρωμένα που σχετίζονται με πρωτεΐνη-1 (SFRP1), επίσης γνωστή ως SARP-2, απομονώθηκε για πρώτη φορά από ανθρώπινα κύτταρα οστεοβλαστών, το οποίο ανήκει στην οικογένεια εκκρινόμενη γλυκοπρωτεΐνη SFRP. Είναι φιλοξενεί δύο διακριτές δομικές περιοχές, δηλαδή νετρίνης τομέα και τον τομέα του ΕΑΠ. CRD περιοχή είναι ομόλογο με τα frizzled υποδοχείς [16,21]. Οι μελέτες δείχνουν ότι SFRP1 είναι ένας ανταγωνιστής του μονοπατιού σηματοδότησης Wnt, και μπορεί να συνδεθεί με Wnt πρωτεΐνες μέσω της περιοχής CRD του με ανταγωνιστικό τρόπο με την διαμεμβρανική κατσαρωμένα υποδοχέα, με αποτέλεσμα την αναστολή της οδού σηματοδότησης Wnt [22-25]. SFRP1 απαιτείται για την ανάπτυξη του προστάτη, και ασκεί το ρόλο της ως παρακρινείς διαμορφωτή στρωματικά-to-επιθηλιακά των επιθηλιακών ανάπτυξη, διακλάδωση μορφογένεση, και την έκφραση των επιθηλιακών γονίδιο [26]. Αναγνωρίζεται επίσης ως υποψήφια μεσολαβητής στρωματικών-to-επιθηλιακών σηματοδότηση σε PCa [27]. Η αδρανοποίηση του SFRP1 έχει αναφερθεί λόγω της υψηλής μεθυλίωσης του

SFRP1

γονίδιο υποκινητή σε μια ποικιλία κακοηθειών συμπεριλαμβανομένων προστάτη [28-35]. Επιπλέον, SFRP1 αναστέλλει την μεταγραφική δραστικότητα του υποδοχέα ανδρογόνων (AR) και τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων εξαρτώμενων από ανδρογόνα LNCaP [36]. Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να εξετάσει το ρόλο των SFRP1 και της έκφρασης της β-κατενίνης στην ανθρώπινη παθογένεση του προστάτη.

Στην έκθεση αυτή, δείξαμε ότι υπήρχε μια αρνητική συσχέτιση μεταξύ SFRP1 και β-κατενίνης σε ανθρώπινους ιστούς προστάτη αξιολογώντας την κλινική-παθολογική χαρακτηριστικά. Η πολυπαραγοντική ανάλυση έδειξε ότι SFRP1 μπορεί να χρησιμεύσει ως ένα ανεξάρτητο προγνωστικό και προγνωστικό παράγοντα για την PCA. Τα επίπεδα της πρωτεΐνης και του mRNA της SFRP1 στην εξαρτώμενη από ανδρογόνο κυτταρική γραμμή προστάτη LNCaP ήταν σημαντικά υψηλότερες από εκείνες των ανδρογόνων-ανεξάρτητες κυτταρικές σειρές προστάτη DU145 και PC3. Ωστόσο, το επίπεδο της πρωτεΐνης του β-κατενίνης σε κύτταρα LNCaP ήταν σημαντικά χαμηλότερη από ότι σε DU145 και PC3 κύτταρα, και καμία σημαντική διαφορά του επιπέδου mRNA β-κατενίνης παρατηρήθηκε σε LNCaP, DU145 και τα κύτταρα PC3. Δείξαμε επίσης ότι το επίπεδο μεθυλίωσης του

SFRP1

υποκινητή ήταν σημαντικά χαμηλότερη στα κύτταρα LNCaP από εκείνο στο DU145 και PC3 κύτταρα. Στο σύνολό τους, τα δεδομένα μας πρότεινε ότι SFRP1 είναι πιθανό να είναι μια ευνοϊκή προβλεπτική και προγνωστική βιοδεικτών.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθική Δήλωση

Αυτή η μελέτη στην οποία συμμετείχαν τα ανθρώπινα συμμετέχοντες εγκρίθηκε από η επιτροπή δεοντολογίας της Dalian Medical University. Γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από όλους τους συμμετέχοντες του ανθρώπου. Όλη η έρευνα διεξήχθη σύμφωνα με τις αρχές που διατυπώνονται στη Διακήρυξη του Ελσίνκι.

Cell Culture και το πείραμα Αντιδραστήρια

κυτταρικές σειρές ανθρώπινου προστάτη LNCaP, DU 145 και PC3 ελήφθησαν από την κυτταρική τράπεζα του Σαγκάη υποκατάστημα της κινεζικής Ακαδημίας Επιστημών. LNCaP κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 μέσο συμπληρωμένο με 10% εμβρυϊκό βόειο ορό (Gibco, USA), 100 μg /ml πενικιλλίνη και 100 μg /ml στρεπτομυκίνη. κύτταρα DU145 καλλιεργήθηκαν σε τροποποιημένο μέσο Dulbecco Eagle (ϋΜΕΜ) συμπληρωμένο με 10% εμβρυϊκό βόειο ορό (Gibco, USA), 100 μg /ml πενικιλλίνη και 100 μg /ml στρεπτομυκίνη. PC3 κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε DMEM /F12 συμπληρωμένο με 10% εμβρυϊκό βόειο ορό (Gibco, USA), 100 μg /ml πενικιλλίνη και 100 μg /ml στρεπτομυκίνη. Όλα τα κύτταρα επωάστηκαν στους 37 ° C σε υγροποιημένο επωαστή με 5% CO

2.

κουνελιού μονοκλωνικό αντι-SFRP1 (ab126613) και ποντικού μονοκλωνικού αντι-β-κατενίνης (ab22656) ελήφθησαν από Abcam (Cambridge, UK). Mouse μονοκλωνικό αντι-β-ακτίνης (C4) (sc-47778), κατσίκα αντι-ποντικού IgG και κατσίκας αντι-κουνελιού IgG ελήφθησαν από την Santa Cruz Biotech (CA, USA). μίγμα αναστολέα πρωτεάσης αγοράστηκε από την Roche Applied Science (Basel, Ελβετία). 5Aza ελήφθη από την Sigma (Santa Clara, USA). SMARTpool siRNAs (Έλεγχος και β-κατενίνης) με τέσσερις επιμέρους siRNA που στοχεύει ένα μόνο γονίδιο ελήφθησαν από Θέρμο (ΗΠΑ).

δείγματα προστάτη ιστού για ανοσοϊστοχημική

δοκιμασία

Ένα σύνολο των 71 δειγμάτων που ελήφθησαν από First Affiliated Νοσοκομείο Dalian Medical University, Liaoning, η Κίνα 2002-2008, συμπεριλαμβανομένων των 61 δειγμάτων από ασθενείς που είχαν παθολογικά ή κυτταρολογικά επαληθεύεται αδενοκαρκίνωμα του προστάτη και 10 της καλοήθους υπερπλασίας του προστάτη δείγματα. Όλα τα δείγματα προστάτη από ασθενείς με ηλικίες που κυμαίνονται από 44 να 84 (μέση ηλικία 72 ετών). Οι βαθμοί του όγκου καταγράφηκαν ως αποτέλεσμα Gleason & gt? 7 (34 δείγματα), και Gleason score≤7 (27 δείγματα). Σύμφωνα με το σύστημα κόμβο μετάσταση όγκου (TNM) που αναπτύχθηκε από την αμερικανική μεικτής επιτροπής για τον Καρκίνο (AJCC), όλοι οι ασθενείς συμμετείχαν σε αυτή την έρευνα ήταν σε Τ

3 /Τ

4 /N

x-1 M

0 στάδιο. Καλοήθης προστατική υπερπλασία δείγματα ελήφθησαν από ασθενείς για τη θεραπεία ασθενειών μη-όγκου, με ηλικίες που κυμαίνονται από 48 να 81, (μέση ηλικία 71,8 έτη). Όλοι οι ασθενείς παρακολουθήθηκαν μέχρι το Δεκέμβριο του 2013. Ο χρόνος επιβίωσης κυμαινόταν από 3 έως 60 μήνες, με διάμεσο χρόνο των 38 μηνών. Κατά τη διάρκεια αυτής της περιόδου, 38 ασθενείς πέθαναν λόγω υποτροπής του καρκίνου

Τα κριτήρια αξιολόγησης της απόκρισης για ενδοκρινική θεραπεία:. (1) Η αποτελεσματική ορμονική θεραπεία. Μετά την ενδοκρινική θεραπεία (φάρμακα ή χειρουργικό ευνουχισμό), επιστρέφει το επίπεδο PSA στο φυσιολογικό και & lt? 2 ng /ml μέσα σε τρία χρόνια. Δεν υπάρχουν νέες μεταστατικές βλάβες εμφανίζονται στα οστά μέσα από CT, MRI ή σάρωση ECT? (2) Αναποτελεσματική ενδοκρινική θεραπεία. Μετά την ενδοκρινική θεραπεία, το επίπεδο του PSA δεν μειώνει, ή παροδικά μειώνει και στη συνέχεια αυξάνεται. επιδεινώνει Disease, και νέες μεταστατικές βλάβες εμφανίζονται σε οστό σε δύο χρόνια.

Ανοσοϊστοχημική Δοκιμασία

Όλα τα δείγματα αναλύθηκαν με ανοσοϊστοχημεία. Τα δείγματα αποκόπηκαν από τη λειτουργία σταθεροποιήθηκαν σε 10% ρυθμισμένη φορμαλίνη για 24 ώρες, και στη συνέχεια οι σταθερές ιστοί εγκλείστηκαν σε παραφίνη. Τέσσερις μικρόμετρα τμήματα των διαδοχικών δειγμάτων εγκλεισμένοι σε παραφίνη κόπηκαν για ανοσοϊστοχημική ανάλυση με τη βοήθεια ενός κιτ Histostain-Plus (Invitrogen, Camarilo, CA). Όλες οι τομές αποπαραφινώθηκαν με ξυλόλιο και επανυδατώθηκαν με διαβαθμισμένη διάλυμα αιθανόλης. H

2O

2 (3%) χρησιμοποιήθηκε για τη σβέση των ενδογενών υπεροξειδασών των δειγμάτων, και στη συνέχεια, οι τομές επωάστηκαν σε αποκλεισμό ορό για 10 λεπτά στους 37 ° C. Οι τομές στη συνέχεια χρωματίστηκαν με διάλυμα κιτρικού οξέος (ρΗ 6.0) που περιέχει είτε αντι-SFRP1 ή αντι-β-κατενίνης σε αραίωση 1: 100 όλη την νύκτα στους 4 ° C. Οι τομές στη συνέχεια επωάστηκαν με βιοτινυλιωμένο κατσίκα ανοσοσφαιρίνη αντι-κουνελιού σε μια αραίωση 1: 200 για 10 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου, και στη συνέχεια επωάστηκαν με αβιδίνη-βιοτίνη-Υπεροξειδάσης για 10 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Τέλος, οι τομές επωάστηκαν με DAB (διαμινοβενζιδίνη) που χρησιμοποιείται ως χρωμογόνο.

SFRP1-θετικών περιπτώσεων χρώση παρουσίασαν διαυγές καφέ κίτρινους κόκκους σε κυτόπλασμα. β-κατενίνης-θετικών κρουσμάτων χρώση παρουσίασαν σαφή καφέ κίτρινο κόκκους στο cytomembrane και πυρήνα. Βαθμολόγηση της χρώσης έγινε σύμφωνα με τα ακόλουθα κριτήρια: (1) Η βαθμολογία βασίζεται σε ένταση χρώσης. 0, δεν χρώση κύτταρο? 1, κύτταρα με απαλό κίτρινο? 2, τα κύτταρα με ανοιχτό καφέ? 3, κύτταρα με καφέ. (2) Η βαθμολόγηση με βάση το ποσοστό των θετικών κυττάρων. Τα δείγματα παρατηρήθηκαν κάτω από υψηλή μεγέθυνση ισχύος (400 Χ). Επελέγησαν 10 τυχαία πεδία, και 100 κύτταρα ανά πεδίο μετρήθηκαν. 0, & lt? 25% χρώση των κυττάρων? 1, 25% -50% χρώση των κυττάρων? 2, 51% -75% χρώση των κυττάρων? 3, & gt? 75% χρώση των κυττάρων. Στο σύνολό τους, (1) + (2) & gt?. 3 αναγνωρίστηκε ως θετικά δείγματα, ενώ (1) + (2) ≤3 αναγνωρίστηκε ως αρνητικά δείγματα

Δυτική Δοκιμασία Blot

LNCaP, DU145 και PC3 κύτταρα σε επεξεργασία με ή χωρίς 5Aza (αναστολέας μεθυλίωσης του DNA) συλλέχθηκαν και λύθηκαν σε ψυχρό ρυθμιστικό διάλυμα (50 mM Tris-HCl, ρΗ 8.0, 150 mM NaCl, 1% Nonidet Ρ-40, 0.5% δεοξυχολικό νάτριο, και μίγμα αναστολέα πρωτεάσης). Μετά από φυγοκέντρηση σε 12,000 rpm για 10 λεπτά στους 4 ° C, τα δείγματα του υπερκειμένου υποβλήθηκαν σε SDS-PAGE. Στη συνέχεια, οι ζώνες πρωτεϊνών σε γέλη μεταφέρθηκαν σε πολυ βινυλιδένιο φθορίδιο (PVDF) (Millipore), και ανιχνεύθηκαν με πρωτογενές αντίσωμα ενδεικνυόμενη διάρκεια της νύχτας στους 4 ° C. Στη συνέχεια, η μεμβράνη PVDF επωάστηκε με το κατάλληλο δευτερογενές αντίσωμα για 4 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου. Τα αποτελέσματα αναλύθηκαν με ανίχνευση χημειοφωταύγειας. Τα δεδομένα ποσοτικά με σάρωση των κατάλληλων ζωνών ενδιαφέροντος και παρίσταται ως σχετική πυκνότητα της κλίμακας του γκρι. Το πείραμα επαναλήφθηκε τρεις φορές.

Ποσοτική RT-PCR Δοκιμασία

Το συνολικό RNA από κάθε κυτταρική σειρά (LNCaP, DU145 και PC3) εκχυλίζεται χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο RNAiso Plus (Takara, Dalian, Κίνα) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Αντίστροφη μεταγραφή πραγματοποιήθηκε με τη βοήθεια ενός κιτ αντίστροφης μεταγραφής (Takara, Dalian, Κίνα). Real-time PCR πραγματοποιήθηκε με τον LightCycler Real-Time PCR System (Roche Diagnostics, Basel, Switzerland). Οι ακόλουθοι εκκινητές σχεδιάζονται από Primer Premier 5.0 χρησιμοποιήθηκαν: 5′-CCCGAGATGCTTAAGTGTGACAA-3 ‘(νοηματικό) και 5′-ACTCGCTGGCACAGAGATGTTC-3’ (antisense) για

SFRP1

? 5′-AGAAAAGCGGCTGTTAG-3 ‘(νοηματικό) και 5′-ATACAGGACTTGGGAGGT-3’ (antisense) για

β-κατενίνης

? 5′-CAGGTCATCACTATCGGCAA-3 ‘(νοηματικό) και 5′-CAAAGAAAGGGTGTAAAACGC-3’ (antisense) για

β-ακτίνης

. Τα δείγματα που περιείχαν cDNA, το κατάλληλο ζεύγος εκκινητών και ο μέγιστα SYBR Green qPCR Master Mix (Thermo) υποβλήθηκαν στην ακόλουθη αντίδραση: αρχικό στάδιο μετουσίωσης 95 ° C για 10 λεπτά? και 40 κύκλους των 95 ° C για 30 s, 55 ° C για 15 s, και 72 ° C για 20 s. Το 2

– △△ CT μέθοδος χρησιμοποιήθηκε για την ανάλυση των δεδομένων. Τα επίπεδα mRNA της

SFRP1

και

β-κατενίνης

ομαλοποιήθηκαν σε

β-ακτίνη

, η οποία χρησίμευσε ως ενδογενή έλεγχο.

Bisulfite αλληλουχίας Δοκιμασία PCR (BSP)

DNA από κάθε κυτταρική σειρά (LNCaP, DU145 και PC3) εκχυλίζεται χρησιμοποιώντας ένα κιτ καθαρισμού DNA (Tiangen, Πεκίνο, Κίνα) σύμφωνα με τις συστάσεις του κατασκευαστή. Το απομονωμένο DNA υποβλήθηκε σε επεξεργασία με όξινο θειώδες νάτριο χρησιμοποιώντας το κιτ CpGenome Τροποποίηση Fast DNA (Millipore) σύμφωνα με τις συστάσεις του κατασκευαστή. Το DNA υποβλήθηκε σε επεξεργασία με όξινο θειώδες νάτριο ενισχύθηκε με ένα GeneAmp 9600 PCR System (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Οι ακόλουθοι εκκινητές σχεδιάζονται από Primer Premier 5.0 χρησιμοποιήθηκαν: 5′-GGTTAAGGTAGGAGTATTATTTGAGGT-3 ‘(νοηματικό) και 5′-AACCTAAATCATACTTACAAACCCAT-3’ (antisense) για CpG νησίδα 1 του

SFRP1

προαγωγός? 5′-TTGTTTTTTAAGGGGTGTTGAGT-3 ‘(με νόημα) και 5′-TACCACAAACTTCCAAAAACCTC-3’ (αντιπληροφοριακό) για το νησί CpG 2 του

SFRP1

υποκινητή. Διεξήχθησαν οι ακόλουθες συνθήκες αντίδρασης: 10 κύκλοι των 95 ° C για 5 λεπτά, 95 ° C για 30 s, 60 ° C-50 ° C για 45 s (αρχίζοντας στους 60 ° C για τον πρώτο κύκλο, αλλά με τη θερμοκρασία να μειώνεται κατά 1 ° C για κάθε επόμενο κύκλο), και 72 ° C για 45 s? 33 κύκλοι των 95 ° C για 30 s, 50 ° C για 45 s, και 72 ° C για 45 s? και 60 ° C για 30 λεπτά. Τα προϊόντα PCR καθαρίστηκαν χρησιμοποιώντας κιτ καθαρισμού DNA (Tiangen, Beijing, Κίνα), και κλωνοποιήθηκαν σε φορέα PMD-19T (Takara, 6013). Μετά το μετασχηματισμό, 10 θετικοί κλώνοι του κάθε BSP δείγμα επιλέχθηκαν για αλληλούχιση χρησιμοποιώντας αναλυτή 3730xl DNA (Applied Biosystems).

Στατιστική Ανάλυση

Μια Chi-square (

χ

2) δοκιμή χρησιμοποιήθηκε για να διευκρινιστεί η συσχέτιση μεταξύ SFRP1 και της έκφρασης της β-κατενίνης και κλινικο-παθολογικών χαρακτηριστικών σε ιστούς προστάτη από 71 ασθενείς. ποσοστά επιβίωσης των ασθενών αναλύθηκαν με τη μέθοδο Kaplan-Meier. Spearman rank συσχέτιση πραγματοποιήθηκε για να αξιολογηθεί η σχέση μεταξύ SFRP1 και της έκφρασης β-κατενίνης. Τα δεδομένα εκφράζονται ως μέσοι ± SDS. Οι διαφορές μεταξύ των μέσων τιμών αναλύθηκαν με ANOVA που ακολουθείται από πολλαπλές δοκιμές σύγκριση Student-Neuman-Keuls και αναλύει bi-παραλλαγή σχέση. Η στατιστική σημαντικότητα θεωρήθηκε σε

P

& lt?. 0.05 επίπεδο

Αποτελέσματα

Η έκφραση της SFRP1 και β-κατενίνης συσχετίζεται με την κλινική-παθολογική χαρακτηριστικά του ανθρώπινου προστάτη

η ανώμαλη έκφραση των SFRP1 και β-κατενίνης διαδραματίζει σημαντικό ρόλο στην ανάπτυξη μιας σειράς καρκίνων, όπως ο καρκίνος των χοληφόρων οδών, καρκίνωμα βλεννοεπιδερμοειδής, του φλοιού των επινεφριδίων όγκων και του καρκίνου του τραχήλου [16,37-39]. Ωστόσο, ο ρόλος του SFRP1 και β-κατενίνης σε PCa δεν έχει διευκρινιστεί. Για να διερευνήσουν το ρόλο τους στη ΣΕΣ, εξετάσαμε αν η έκφραση της SFRP1 και β-κατενίνης συσχετίζεται με την κλινική-παθολογική χαρακτηριστικά μεταξύ των δειγμάτων 61 ΣΕΣΣ με την

χ

2 τεστ. Παρατηρήθηκαν στατιστικά σημαντικές διαφορές στο σκορ Gleason, ποσοστό επιβίωσης και ανταπόκρισης για την ορμονική θεραπεία για τις δύο πρωτεΐνες, ενώ δεν παρατηρήθηκε στατιστικά σημαντική διαφορά δεν παρατηρήθηκε στην ηλικία, μετάσταση πριν από τη χειρουργική επέμβαση και το επίπεδο PSA (Πίνακας 1). Στο σύνολό τους, αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η SFRP1 έκφρασης και της β-κατενίνης συσχετίζεται με το σκορ, ποσοστό επιβίωσης Gleason και απόκρισης για ενδοκρινική θεραπεία των ασθενών με προστάτη, ενώ δεν συσχετίζεται με την ηλικία, μετάσταση πριν από τη χειρουργική επέμβαση και το επίπεδο PSA.

Η επίδραση της έκφρασης SFRP1 στο ποσοστό επιβίωσης σε ασθενείς με προστάτη

για να καθοριστεί περαιτέρω η σχέση μεταξύ της έκφρασης SFRP1 /β-κατενίνης και τη συνολική επιβίωση σε προστάτη, καμπύλες επιβίωσης συντάχθηκαν από τον Kaplan-Meier μέθοδος. Τα αποτελέσματα αποκάλυψαν ότι οι ασθενείς SFRP1 αρνητικούς έδειξαν σημαντικά φτωχότερη συνολικό ποσοστό επιβίωσης σε σχέση με ασθενείς SFRP1-θετικό (Ρ = 0.016, Σχ. 1Α). Αντίθετα, β-κατενίνης θετικούς ασθενείς έδειξαν σημαντικά φτωχότερη συνολικό ποσοστό επιβίωσης από τους ασθενείς β-κατενίνης αρνητικό (Ρ = 0.004, Σχ. 1Β). Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η αρνητική έκφραση SFRP1 και θετική έκφραση της β-κατενίνης που πλήττονται σοβαρά το συνολικό ποσοστό επιβίωσης των ασθενών με προστάτη.

Α, η σχέση της έκφρασης SFRP1 με τη συνολική επιβίωση σε ασθενείς με προστάτη (P = 0,016). Β, Η σχέση της έκφρασης της β-κατενίνης με τη συνολική επιβίωση σε ασθενείς με προστάτη (P = 0,004).

Η

Για να αξιολογηθεί η συμβολή των κλινικών παθολογικών χαρακτηριστικών όπως το δυναμικό προβλεπτική και προγνωστική βιολογικών δεικτών, αναλύσαμε 6 κλινικές-παθολογικές μεταβλητές στους 61 ασθενείς προστάτη από πολυπαραγοντική ανάλυση. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 2, μόνο η έκφραση SFRP1 ήταν στατιστικά σημαντικός παράγοντας (Ρ = 0,009), και θα μπορούσε να χαρακτηριστεί ως μια ανεξάρτητη προγνωστική και προγνωστικός δείκτης, υποδεικνύοντας ότι η έκφραση SFRP1 μπορεί να χρησιμεύσει ως η καλύτερη προβλεπτική και προγνωστική βιοδείκτης του ποσοστού επιβίωσης σε PCa μεταξύ αυτές οι μεταβλητές.

η

η έκφραση της SFRP1 και β-κατενίνης συσχετίζεται αρνητικά με προστάτη

Για να προσδιοριστεί η συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης /β-κατενίνης SFRP1 και την εμφάνιση του προστάτη, η έκφραση της πρωτεΐνης του SFRP1 και β-κατενίνης σε καλοήθη δείγματα όγκων υπερπλασία του προστάτη και του προστάτη συγκρίθηκαν με ανοσοϊστοχημεία (Εικ. 2). Ένα σύνολο 71 δειγμάτων ιστών (10 καλοήθη προστατική hyperpslasia και 61 όγκους του προστάτη) αναλύθηκαν. Σύμφωνα με τα κριτήρια αξιολόγησης, 8 (80%) από τα 10 δείγματα με καλοήθη υπερπλασία ταξινομήθηκαν ως θετικά για έκφραση SFRP1 και 2 (20%) είχαν ταξινομηθεί ως αρνητικό, ενώ σε δείγματα όγκων, η έκφραση SFRP1 μειώθηκε σημαντικά με 36 (59% ) θετικά και 25 (41%) αρνητικά. Αντίθετα, σε καλοήθη δείγματα υπερπλασία του προστάτη, 9 (90%) είχαν ταξινομηθεί ως αρνητικά για έκφραση β-κατενίνης και 1 (10%) ταξινομήθηκε ως θετική έκφραση, ενώ η έκφραση β-κατενίνης αυξήθηκε σημαντικά με 29 (47,5%) θετικών και 32 (52,5%) αρνητικά σε δείγματα όγκων (Πίνακας 3). Για να αποδειχθεί η εξειδίκευση του αντισώματος β-κατενίνης, siRNA knockdown πείραμα διεξήχθη χρησιμοποιώντας κύτταρα PC3. Η ενδογενής έκφραση β-κατενίνης μειώθηκε κατά 86% σε κύτταρα PC3 επιμολυσμένα με πισίνα siβ-κατενίνης σε σύγκριση με κύτταρα επιμολυσμένα με PC3 siControl (S1 Εικ). Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η έκφραση SFRP1 μειώθηκε, ενώ η έκφραση β-κατενίνης ήταν αυξημένη σε PCa.

Α, Αντιπροσωπευτικά αποτελέσματα δείχνουν την ανοσοϊστοχημική χρώση SFRP1 και β-κατενίνης σε ένα τμήμα του ανθρώπινου καλοήθους προστατικής υπερπλασίας ιστούς. Στο αριστερό πάνελ, τα βέλη δείχνουν ότι ο εντοπισμός των SFRP1 ομοιόμορφα κατανεμημένα στο κυτταρόπλασμα. Στο δεξιό πάνελ, τα βέλη δείχνουν ότι η εντόπιση της β-κατενίνης ήταν μεμβράνη κυρίως κυττάρου. Β, Ο ανοσοϊστοχημική χρώση SFRP1 και β-κατενίνης σε ένα τμήμα ανθρώπινων ιστών καρκίνου του προστάτη (SFRP1 αρνητικά και β-κατενίνης θετικό). Στο δεξιό πάνελ, τα βέλη δείχνουν ότι η β-κατενίνη εντοπίζεται κυρίως στα δύο κυτταρόπλασμα και στον πυρήνα. C, Η ανοσοϊστοχημική χρώση SFRP1 και β-κατενίνης σε ένα τμήμα ανθρώπινων ιστών καρκίνου του προστάτη (SFRP1 θετική και β-κατενίνης αρνητικό). Στο αριστερό πάνελ, τα βέλη δείχνουν ότι ο εντοπισμός της SFRP1 ήταν κυρίως στο κυτταρόπλασμα.

Η

Για να εξεταστεί η σχέση μεταξύ SFRP1 και β-κατενίνης σε ιστούς προστάτη, τα επίπεδα της πρωτεΐνης του SFRP1 και β-κατενίνης σε δείγματα όγκου προστάτη αναλύθηκαν με chi-square τεστ. Σύμφωνα με τα κριτήρια αξιολόγησης μας, 36 δείγματα προσδιορίστηκαν ως έκφραση SFRP1-θετικά, και 25 ταυτοποιήθηκαν ως SFRP1-αρνητική έκφραση στα δείγματα 61 της ΣΕΣΣ. 23 (63,9%) των SFRP1-θετικά δείγματα έδειξαν αρνητική έκφραση της β-κατενίνης, ενώ μόνο 9 δείγματα (36%) παρουσίασαν αρνητική έκφραση της β-κατενίνης σε SFRP1-αρνητικά δείγματα (Πίνακας 4). Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι υπήρχε μια αρνητική συσχέτιση μεταξύ SFRP1 και β-κατενίνης στον προστάτη (r = -0,275, P = 0,032).

Η

Για να προσδιορίσετε περαιτέρω την αλλαγή της SFRP1 και της έκφρασης της β-κατενίνης σε εξετάστηκαν διαφορετικές κυτταρικές σειρές προστάτη, η πρωτεΐνη και τα επίπεδα mRNA του SFRP1 και β-κατενίνης σε LNCaP, DU145 και PC3 κύτταρα σε επεξεργασία με ή χωρίς 5Aza. Μεταξύ αυτών, LNCaP είναι ένα ανδρογόνο-εξαρτώμενη κυτταρική γραμμή ανθρώπινου καρκίνου του προστάτη, ενώ DU145 και PC3 είναι ανδρογόνο-ανεξάρτητες κυτταρικές γραμμές ανθρώπινου καρκίνου του προστάτη, τα οποία είναι πιο υψηλά κακοήθη από τα κύτταρα LNCaP. Με την κακοήθη βαθμός αυξάνεται σταδιακά, τα επίπεδα πρωτεΐνης και mRNA των SFRP1 στα κύτταρα προστάτη σε επεξεργασία χωρίς 5Aza μειώθηκε σημαντικά, ενώ και οι δύο πρωτεΐνες και τα επίπεδα mRNA του SFRP1 ήταν πάνω ρυθμισμένα στα κύτταρα προστάτη σε επεξεργασία με 5Aza (σχήμα 3Α & amp?. 3Β) . Ωστόσο, το επίπεδο της πρωτεΐνης του β-κατενίνης αυξήθηκε σημαντικά στα κύτταρα προστάτη σε επεξεργασία χωρίς 5Aza, και ρυθμισμένα προς τα κάτω στα κύτταρα προστάτη σε επεξεργασία με 5Aza (Σχ. 3C). Δεν παρατηρήθηκε σημαντική διαφορά του επιπέδου mRNA β-κατενίνης παρατηρήθηκε σε LNCaP, DU145 και PC3 κύτταρα (Σχ. 3D). Στο σύνολό τους, αυτά τα αποτελέσματα επιβεβαίωσαν ότι υπήρξε μια αντίστροφη συσχέτιση μεταξύ SFRP1 και της έκφρασης της β-κατενίνης σε κυτταρικές σειρές προστάτη, το οποίο είναι σύμφωνο με τα δεδομένα που λαμβάνονται από δείγματα καρκινικού ιστού.

Α, LNCaP, DU145 και τα κύτταρα PC3 υποβάλλεται σε επεξεργασία με ή χωρίς 5Aza συλλέχθηκαν και στη συνέχεια υποβλήθηκαν σε ανάλυση κηλίδος Western με αντι-SFRP1 αντίσωμα. Β, LNCaP, DU145 και PC3 κύτταρα κατεργάζονται με ή χωρίς 5Aza συλλέχθηκαν και στη συνέχεια υποβλήθηκαν σε ποσοτική ανάλυση RT-PCR. Η

SFRP1

επίπεδο του mRNA των κυττάρων LNCaP ορίστηκε σε 1. C, LNCaP, DU145 και συλλέχθηκαν τα κύτταρα PC3 σε επεξεργασία με ή χωρίς 5Aza και στη συνέχεια υποβλήθηκαν σε ανάλυση κηλίδος Western με αντίσωμα αντι-β-κατενίνης. D, LNCaP, DU145 και PC3 κύτταρα κατεργάζονται με ή χωρίς 5Aza συλλέχθηκαν και στη συνέχεια υποβλήθηκαν σε ποσοτική ανάλυση RT-PCR. Η

β-κατενίνης επίπεδο

mRNA των κυττάρων LNCaP ορίστηκε στο 1. Όλα τα πειράματα επαναλήφθηκαν τουλάχιστον τρεις φορές. Τα στοιχεία που παρουσιάζονται στα γραφήματα είναι τα μέσα ± SDs τριών πειραμάτων. *,

P

& lt? 0,05. ns, δεν είναι σημαντική. Το πλήρους μήκους κηλίδα του Σχ. 3Α παρουσιάζεται στο S2 Εικ.

Η

Οι αλλαγές του

SFRP-1

γονίδιο μεθυλίωσης σε κυτταρικές σειρές προστάτη

Η μεθυλίωση του

SFRP1

γονίδιο υποκινητής έχει αναφερθεί ότι οδηγεί σε προς τα κάτω ρύθμιση πρωτεΐνης SFRP1 και τα επίπεδα mRNA, και να παίζουν σημαντικούς ρόλους στην έναρξη και την ανάπτυξη των όγκων. Δεδομένου ότι τα επίπεδα της πρωτεΐνης και του mRNA του SFRP1 μειώθηκε σημαντικά με την αύξηση του βαθμού κακοήθειας, και 5Aza, έναν αναστολέα μεθυλίωσης DNA, επάνω ρυθμισμένη τόσο πρωτεΐνη και τα επίπεδα mRNA του SFRP1 σε κυτταρικές γραμμές PCa, έχουμε σκεφτεί ότι SFRP1 σίγηση ήταν πιθανό να επάγεται από

SFRP1

γονίδιο μεθυλίωσης. Για να διερευνηθεί αυτή η πιθανότητα, η μεθυλίωση του

SFRP1

γονίδιο υποκινητή σε LNCaP, DU145 και PC3 κύτταρα σε επεξεργασία με ή χωρίς 5Aza εξετάσθηκε με ανίχνευση BSP. Μεθυλίωση εμφανίζεται συνήθως σε περιοχές προαγωγού CpG-πλούσια, που ονομάζεται νησί CpG με το μέγεθος του νησιού & gt? 100, GC% & gt? 50, Παρατηρ /Exp & gt? 0,6. ανάλυση βιοπληροφορικής έδειξε ότι 2 CpG νησίδες μπορεί να μεθυλιώνεται (4Α Εικ., μπλε χρώματος περιοχές)

SFRP1

γονίδιο υποκινητή. δοκιμασία BSP έδειξαν ότι και οι δύο νησιά CpG στο

SFRP-1

υποκινητή μεθυλιώνονται σε LNCaP, DU145 και τα κύτταρα PC3. Τα ποσοστά μεθυλίωση των CpG νησίδων 1 και 2 σε κύτταρα LNCaP αγωγή χωρίς 5Aza ήταν 32,5% και 2,7% αντίστοιχα, ενώ τα δύο από τα ποσοστά μεθυλίωσης μειώθηκε στο 9,3% και 1,1% μετά από θεραπεία 5Aza (Εικ. 4Β). Σε κύτταρα DU145, τα ποσοστά μεθυλίωσης των CpG νησίδων 1 και 2 μειώθηκε από 36,7% και 85,6% σε 12,6% και 47,9%, αντίστοιχα, μετά από θεραπεία 5Aza (Εικ. 4C). Σε κύτταρα PC3, τα δύο από τα ποσοστά μεθυλίωσης μειώθηκε από 85% και 71% έως 38,3% και 44,1% μετά από θεραπεία 5Aza (Εικ. 4D). Αυτά τα αποτελέσματα αντιστοιχούσαν με τα δεδομένα που ελήφθησαν από την ανάλυση κηλίδος Western (σχήμα 3Α & amp?. 3Β), γεγονός που υποδηλώνει ότι η ρύθμιση προς τα κάτω της πρωτεΐνης και τα επίπεδα mRNA του SFRP1 προκλήθηκε με

SFRP1

γονίδιο μεθυλίωσης με την αύξηση του βαθμού κακοήθειας του κυτταρικές σειρές προστάτη

Α Σχηματικό διάγραμμα της περιοχής του υποκινητή SFRP-1 (μπλε-χρωματιστές περιοχές: CpG νησίδων).. CpG νησί 1 ήταν από 1454 bp σε 1613 bp. νησί CpG 2 ήταν από 1831 bp σε 2257 bp. Β-D, μεθυλίωση των CpG νησίδα 1 (αριστερό πάνελ) και CpG νησίδα 2 (δεξί πάνελ) σε LNCaP, DU145 και τα κύτταρα PC3, αντίστοιχα υποβάλλεται σε επεξεργασία με ή χωρίς 5Aza. Κάθε κύκλος αντιπροσωπεύει μια μεθυλιωμένη (μαύρο) ή μη μεθυλιωμένα (λευκό) CpG δινουκλεοτίδιο. Κάθε γραμμή αντιπροσωπεύει ένα διαφορετικό κλώνο.

Η

Συζήτηση

προστάτη είναι η πιο συχνά διαγιγνώσκεται καρκίνος του μη δέρματος σε άνδρες με αυξημένη συχνότητα εμφάνισης κάθε χρόνο [40-42]. Τα παθολογικά χαρακτηριστικά του προστάτη είναι εξαιρετικά πολύπλοκη [43]. Όγκων σε πολλούς ασθενείς με προστάτη είναι μια νωχελικός μορφή, τα οποία δεν έχουν καμία επίδραση στην επιβίωση των ασθενών και εκτρέφονται συχνά υπό την εποπτεία και όχι άμεση θεραπεία, ενώ ένα μικρό ποσοστό των όγκων ανήκουν στην ταχύτατα εξελισσόμενη κακοήθεις όγκους, τα οποία απειλούν σοβαρά τη ζωή των ασθενών [44,45]. Επιπλέον, λόγω των φυσιολογικών και ανατομικά χαρακτηριστικά του προστάτη, είναι δύσκολο να παρατηρηθούν εμφανή τα πρώτα συμπτώματα των ασθενών, που οδηγεί σε ένα μεγάλο αριθμό των ασθενών που διαγιγνώσκονται σε προχωρημένο στάδιο [46]. Ως εκ τούτου, είναι σημαντικό να βελτιωθεί η έγκαιρη διάγνωση του προστάτη μέσα από τον προσδιορισμό προβλεπτική και προγνωστική βιολογικών δεικτών. Στην παρούσα μελέτη, δείξαμε ότι η Wnt ανταγωνιστής SFRP1 ήταν μια ευνοϊκή προβλεπτική και προγνωστική βιοδεικτών και η έκφρασή του ήταν αντιστρόφως ανάλογη με την έκφραση β-κατενίνης.

Wnt σηματοδοτικό μονοπάτι παίζει σημαντικό ρόλο σε πολλές κυτταρικές διεργασίες, όπως κυτταρική διαφοροποίηση, ο πολλαπλασιασμός και η μετανάστευση, και η απορρύθμιση του συσχετίζεται με αρκετές ασθένειες συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου [47]. Η /β-κατενίνης μονοπάτι σηματοδότησης Wnt είναι ασυνήθιστα ενεργοποιείται σε ένα ευρύ φάσμα κακοηθειών του ανθρώπου [48-54]. Αυτή η ανώμαλη ενεργοποίηση συμβάλλει στην ογκογένεση με up-ρύθμιση της έκφρασης των διαφόρων κατάντη γονιδίων στόχων, όπως

MDR-1, Livin, κυκλίνη D1

και

c-Myc

[15,55]. β-κατενίνη είναι ένα βασικό συστατικό του μονοπατιού σηματοδότησης Wnt, και αλλοιωμένη εντοπισμός της αναγνωρίζεται ως ένας δείκτης της ενεργοποίησης της οδού. Τα δεδομένα από την ανοσοϊστοχημική χρώση έδειξε ότι β-κατενίνης εντοπισμό σε καλοήθη δείγματα ανθρώπινου υπερπλασία του προστάτη ήταν κυρίως εντοπισμένη στην κυτταρική μεμβράνη με τα επίπεδα έκφρασης χαμηλής πρωτεΐνης (σχήμα 2Α δεξί πάνελ).? Ωστόσο, σε ανθρώπινα δείγματα PCa, β-κατενίνης εντοπισμένη κυρίως στο κυτταρόπλασμα και τον πυρήνα με υψηλότερο ποσό έκφραση πρωτεΐνης σε σύγκριση με εκείνη σε καλοήθη προστατική υπερπλασία δείγματα (Σχ. 2Β δεξιό πλαίσιο). Έχει αναφερθεί ότι β-κατενίνης αλληλεπιδρά με AR και ενισχύει την ανδρογόνων που διεγείρεται μεταγραφική δραστικότητα του AR, υποδηλώνοντας ότι ο ρόλος του β-κατενίνης στην καρκινογένεση προστάτη δεν μπορεί να περιορίζεται σε μεταγραφική ενεργοποίηση του TCF /LEF [56]. Σε αυτή τη μελέτη, δείξαμε ότι η έκφραση β-κατενίνης ήταν θετικό σε 47,5% των δειγμάτων προστάτη, ενώ μόνο το 10% (1/10) θετική έκφραση παρατηρήθηκε σε καλοήθη υπερπλασία του προστάτη δείγματα (Πίνακας 2). Η θετική έκφραση της β-κατενίνης στον προστάτη επίσης συσχετίστηκε σημαντικά με σκορ Gleason, ποσοστό επιβίωσης και απόκρισης για ορμονική θεραπεία (Πίνακας 1). Δείξαμε ότι οι ασθενείς του προστάτη με θετική έκφραση της β-κατενίνης είχαν σημαντικά φτωχότερη συνολικό ποσοστό επιβίωσης (Εικ. 1Β). Επιπλέον, η έκφραση της β-κατενίνης σημαντικά πάνω ρυθμισμένα με την αύξηση του βαθμού κακοήθειας (Σχ. 3C). Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι η έκφραση του β-κατενίνης είναι στενά συνδεδεμένη με χειρότερη πρόγνωση, και ότι ανώμαλη ενεργοποίηση του μονοπατιού σηματοδότησης Wnt συμβάλλει στην ανάπτυξη του προστάτη.

SFRP1 ασκεί τη λειτουργία του στο μονοπάτι σηματοδότησης Wnt ως γνωστός ανταγωνιστής του frizzled υποδοχέα, και έχει προταθεί να είναι ένας καταστολέας όγκων σε αρκετούς ανθρώπινους καρκίνους [57,58]. Τα δεδομένα από την ανοσοϊστοχημική χρώση έδειξε ότι ο εντοπισμός των SFRP1 ομοιόμορφα κατανεμημένα στο κυτταρόπλασμα (Εικ. 2Α αριστερό πλαίσιο), σύμφωνα με την έκφραση της σε πολλές άλλους ιστούς [34,59]. Ωστόσο, SFRP1 εντοπισμός είναι κυρίως κυτταροπλασματική περιπυρηνικών σε καρκίνους των χοληφόρων οδών και της ουροδόχου κύστης [16,60]. Η διαφορά στην κατανομή των SFRP1 μπορεί να οφείλεται σε ιστο-ειδική έκφραση.