Αφηρημένο

Για προχωρημένους καρκίνους του ανθρώπου θυρεοειδούς πυκνά διεισδύσει με μακροφάγα που σχετίζονται με όγκους (ΤΑΜ) και αυτό συσχετίζεται με μία φτωχή πρόγνωση. Χρησιμοποιήσαμε

BRAF

επαγόμενη θηλώδους καρκίνου του θυρεοειδούς (PTC) μοντέλα του ποντικιού για να εξετάσει το ρόλο της ΤΑΜ σε εξέλιξη PTC. Μετά την ενεργοποίηση όρους του

BRAF

V600E

στο μυϊκό thyroids υπάρχει αυξημένη έκφραση των χημειοπροσελκυστικά TAM

CSF-1

και

CCL-2

. Αυτό ακολουθείται από την ανάπτυξη των PTCs που πυκνά διεισδύσει με ΤΑΜ που εκφράζουν

CSF-1R

και

CCR2

. Η στόχευση κυττάρων CCR2 εκφράζουν κατά τη διάρκεια της BRAF-επαγωγής μειωμένη πυκνότητα TAM και μειωμένη ανάπτυξη PTC. Η στρατηγική αυτή προκάλεσε επίσης μικρότερους όγκους, μείωση του πολλαπλασιασμού και αποκατέστησε μια αρχιτεκτονική του θυρεοειδούς ωοθυλακίων σε καθιερωμένες PTCs. Σε PTCs από ποντίκια που στερούνταν CSF-1 ή ότι έλαβε ένα c-FMS /CSF-1R αναστολέα της κινάσης, TAM την πρόσληψη και την εξέλιξη της PTC ήταν μειωμένη, ανακεφαλαιώνοντας τις επιπτώσεις της στόχευση κυττάρων CCR2 εκφράζουν. Τα στοιχεία μας δείχνουν ότι ΤΑΜ είναι φιλο-ογκογόνο στην προηγμένη PTCs και ότι μπορούν να απευθύνονται φαρμακολογικά, η οποία δυνητικά μπορεί να είναι χρήσιμο για τους ασθενείς με προχωρημένους καρκίνους του θυρεοειδούς

Παράθεση:. Ryder Μ, Gild Μ, Hohl TM, Pamer Ε, Knauf J, Ghossein R, et al. (2013) Γενετική και φαρμακολογική στόχευση της CSF-1 /CSF-1R Αναστέλλει σχετίζονται με τον όγκο μακροφάγα και μειώνει BRAF-Induced καρκίνο του θυρεοειδούς Εξέλιξη. PLoS ONE 8 (1): e54302. doi: 10.1371 /journal.pone.0054302

Συντάκτης: Marian Ludgate, Πανεπιστήμιο του Cardiff, Ηνωμένο Βασίλειο

Ελήφθη: 26 Σεπτεμβρίου, 2012? Αποδεκτές: 10, Δεκεμβρίου του 2012? Δημοσιεύθηκε: 23 Ιαν 2013

Copyright: © 2013 Ryder et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο έχει χρηματοδοτηθεί, εν μέρει, από την K08 CA133183 και ανάθεσης American Thyroid Association THANC (MR), K08 AI071998 (TMH), RO1 CA50706 και R01 CA72597 (ΚΠΑ), το Ίδρυμα Lefkovsky Οικογένεια και το ταμείο Byrne. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

όγκων που σχετίζονται με τα μακροφάγα (ΤΑΜ) έχουν την ικανότητα να παρεμποδίζουν (τύπου M1) ή να προωθήσουν (τύπου Μ2) ογκογένεση [1]. Η παρατήρηση ότι μια αυξημένη πυκνότητα του ΤΑΜ συσχετίζεται με κακή κλινική έκβαση στην πλειονότητα των ανθρώπινων καρκίνων υποδηλώνει ΤΑΜ είναι προ-ογκογόνο [2] – [5]. Επιπλέον, η γονιδιακή υπογραφές από το στρώμα των ανθρώπινων καρκίνων του μαστού που προέρχονται από ασθενείς με κακή έκβαση είναι ανεξάρτητοι προγνωστικοί δείκτες και περιέχουν διάφορα εντόνως εκφρασμένα ΤΑΜ-συναφή γονίδια [6]. Άμεση απόδειξη του ρόλου του ΤΑΜ στην ογκογένεση παρατηρείται σε μοντέλα ποντικών με καρκίνο του μαστού στις οποίες παράγοντας διέγερσης αποικίας-1 (CSF-1) εξαρτώμενο ΤΑΜ πρόσληψη απαιτείται για την έναρξη του όγκου μέσω της διέγερσης της αγγειογένεσης του όγκου [7]. Σε μεταστατικές θέσεις, CCR2

+ φλεγμονώδη μακροφάγα (Μφ) να διευκολύνει την εξαγγείωση των κυττάρων του καρκίνου του μαστού, σπορά και την ανάπτυξη [8].

μοντέλα πολλαπλών σταδίων ποντικού της ογκογένεσης είναι ιδανικά για να διερευνήσει το λειτουργικό ρόλο των στρωματικών κυττάρων κατά την έναρξη και την εξέλιξη του όγκου. Το καλύτερο που χαρακτηρίζεται από αυτά είναι το καρκίνωμα των κυττάρων των νησιδίων RIP1-Tag [9] και το αντιγόνο πολυώματος μέση T (PyMT) μοντέλα καρκίνου του μαστού [10]. Αυτά έχουν παράσχει πολύτιμες πληροφορίες, αν και αναμφισβήτητα δεν είναι γενετικά ακριβή επανεκθέσεων των οδηγών της ογκογένεσης σε αυτούς τους τύπους κυττάρων. Οι ογκογόνων μεταλλάξεων του

BRAF

είναι οι πιο κοινές γενετικές εκδηλώσεις σε μελανώματα [11] και θηλώδες καρκίνων του θυρεοειδούς (PTC) [12], [13], και πιστεύεται ότι εμπλέκονται σε πρώιμα στάδια της ανάπτυξης του όγκου, όπως απαντούν σε καλοηθών σπίλων [14] και μικροθηλωματώδης καρκίνων του θυρεοειδούς [15], αντίστοιχα.

BRAF

μεταλλάξεις είναι επίσης πολύ διαδεδομένη στις προηγμένες μορφές του καρκίνου του θυρεοειδούς [16], και συνδέονται με μεγαλύτερη θνησιμότητα [17]. Είναι ενδιαφέρον ότι, μια αυξημένη πυκνότητα του ΤΑΜ συσχετίζεται με μεταστάσεις στους λεμφαδένες σε PTCs [18] και διεισδυτική νόσο και μειωμένη επιβίωση σε πτωχά διαφοροποιημένο καρκίνους του θυρεοειδούς (PDTC) [4]. Πράγματι, ΤΑΜ περιλαμβάνουν τουλάχιστον το 50% του όγκου του όγκου των περισσότερων καρκίνων του θυρεοειδούς αναπλαστικό (ATC), εξαιρετικά λοιμογόνο μορφή της νόσου που είναι σχεδόν πάντοτε θανατηφόρα [4], [19], [20].

γενετικά μοντέλα Αρκετές ποντικού

BRAF

επαγόμενη καρκίνο έχουν αναπτυχθεί, είτε με την ενεργοποίηση του λανθάνοντος ενδογενές μεταλλαγμένο αλληλόμορφα [21], [22] ή μέσω του θυρεοειδούς-ειδική υπερέκφραση [23]. Όλα δείχνουν υψηλή διεισδυτικότητα του καρκίνου του θυρεοειδούς, καθώς και την εξέλιξη σε φτωχά διαφοροποιημένοι όγκοι. Επιπλέον, η ενεργοποίηση εξαρτάται από BRAF σε ποντικού θυρεοειδείς επάγει PTC που αντιστράφηκε πλήρως με de-επαγωγή του BRAF [24].

Σε αυτή τη μελέτη, δείχνουμε ότι η ενεργοποίηση του ογκογόνου BRAF σε θυρεοειδείς αποτελέσματα ποντικού σε αυξημένη έκφραση των χημειοελκυστικών CSF-1 και CCL2 και ότι αυτό σχετίζεται με μια ταχεία και ισχυρή πρόσληψη TAMs που εκφράζουν τους συγγενείς υποδοχείς

CSF-1R

και

CCR2

, αντίστοιχα. Επιλεκτικά στόχευση κυττάρων CCR2 εκφράζουν CSF-1 ή κατά την ενεργοποίηση BRAF μείωσε σημαντικά την πυκνότητα TAM και μειωμένη ανάπτυξη και την εξέλιξη PTC. Η εξάντληση των ΤΑΜ κατά την πρώιμη ανάπτυξη PTC εξασθενημένη επέκταση στρωματικά του σχετίζονται με τον καρκίνο μυοϊνοβλάστες (CAFS). Σε εγκατεστημένος PTCs, οι όγκοι αναπτύσσονται ψηλός κυττάρων και κακώς διαχωριζόμενες εστίες, τα οποία είναι ιστολογικά χαρακτηριστικά που είναι χαρακτηριστικά των προηγμένων ανθρώπινων καρκίνων του θυρεοειδούς. Η στόχευση κυττάρων CCR2 εκφράζουν σε ποντίκια με προηγμένες PTCs οδήγησε σε μειωμένη πυκνότητα TAM καθώς και μικρότερες, πιο διαφοροποιημένη καρκίνων του θυρεοειδούς με λιγότερες εστίες ψηλά κυττάρων και κακώς διαχωριζόμενες περιοχές. Φαρμακολογική στόχευση του BRAF επαγόμενης PTCs με έναν εκλεκτικό αναστολέα της κινάσης c-FMS /CSF-1R ανακεφαλαιώνει τις επιδράσεις της στόχευση κυττάρων CCR2 εκφράζουν. Αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι θεραπευτικές στρατηγικές που στοχεύουν ΤΑΜ μπορεί να είναι ευεργετική σε αυτή τη νόσο, και ίσως να ενισχύσει την αποτελεσματικότητα των αναστολέων κινάσης που κατευθύνονται έναντι των κυτταρικών αυτόνομων ογκογόνο οδηγούς της νόσου.

Υλικά και Μέθοδοι

Ποντίκι μοντέλα

Το παρακάτω δύο μοντέλα

BRAF

επαγόμενη από καρκίνο του θυρεοειδούς χρησιμοποιήθηκαν σε αυτή τη μελέτη:

1) Tg-rtTA /ίείΟ-BRAF

V600E

ποντίκια εκφράζουν ογκογόνο BRAF

V600E σε κύτταρα του θυρεοειδούς σε ένα ϋΟΧ-εξαρτώμενο τρόπο, και διατηρήθηκαν μέσα σε έναν FVB /N φόντο [24]. 2)

Tg-Braf

διαγονιδιακά ποντίκια εκφράζουν το ανθρώπινο ογκοπρωτεΐνη υπό τον έλεγχο του γονιδίου υποκινητή θυροσφαιρίνης βοός [23].

CCR2-DTR

και

CCR2-GFP

ποντίκια εκφράζουν το DTR ή πράσινη φθορίζουσα πρωτεΐνη (GFP), αντίστοιχα, υπό τον έλεγχο του μονοκυττάρων /MO-ειδικά

CCR2

γονίδιο υποκινητή, και διατηρήθηκαν σε ένα φόντο C57 /B6 [25].

CSF-1

– /- ποντίκια

(Jackson Lab, Bar Harbor, ΜΕ) έχουν έλλειψη κυκλοφορούντων και ιστού μονοκύτταρα /Μφ [26], [27]. Όλες οι διαδικασίες κτηνοτροφία και πειραματικές εγκρίθηκαν από τη Φροντίδα των Ζώων και Χρήση Επιτροπής Memorial Sloan-Kettering Cancer Κέντρο Θεσμικών.

Η εξάντληση των ΤΑΜ στο Braf που προκαλείται από μοντέλα ποντικών καρκίνου του θυρεοειδούς

μακροφάγων εξάντληση στην μυελού των οστών (ΒΜ), το αίμα, σπλήνα και περιτοναϊκή κοιλότητα εξετάστηκε σε

CCR2-DTR

ποντίκια μετά τη θεραπεία με τοξίνη της διφθερίτιδας (DT) 20 ng /g (List Biologicals, Campbell, CA) ενδοπεριτοναϊκώς (ip) σε εναλλασσόμενες ημέρες για 7 ημέρες. Είκοσι τέσσερις ώρες μετά την τελευταία δόση του DT, τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε ευθανασία με CO

2 εισπνοή και ιστών δείγματα που λήφθηκαν για κυτταρομετρία ροής ή /και ανοσοϊστοχημεία (IHC) όπως περιγράφεται παρακάτω.

Για να αξιολογηθούν οι επιπτώσεις της ΤΑΜ στην ανάπτυξη PTC,

Tg-rtTA /ίείΟ-Braf /CCR2-DTR

ποντικοί τράφηκαν ϋΟΧ-εμποτισμένο Chow (2500 ppm? Harlan-Teklad) για 7 ημέρες με ή χωρίς DT ip σε εναλλασσόμενες ημέρες ξεκινώντας από την ημέρα 0. Την ημέρα 7 (24 ώρες μετά την τελευταία δόση της DT), τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε ευθανασία με CO

2 εισπνοή και θυρεοειδείς εξάγεται για IHC. Για να εξεταστεί ο ρόλος των ΤΑΜ σε καθιερωμένες BRAF επαγόμενη καρκίνων του θυρεοειδούς που αντιμετωπίζονται

Tg-Braf /CCR2-DTR

ποντικούς σε περίπου 6 και 12 εβδομάδων, με ή χωρίς DT σε εναλλασσόμενες ημέρες για 10 ημέρες. Τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε ευθανασία και θυρεοειδείς εκχυλίζεται 24 ώρες μετά την τελευταία δόση του DT για κυτταρομετρία ροής και ανοσοϊστοχημεία.

FACS Ανάλυση

Τα συγκεντρωμένα θυρεοειδείς συλλέχθηκαν μετά ενδοκαρδιακή διαπότιση PBS να καταστρέφουν τα κυκλοφορούντα λευκοκύτταρα. Thyroids τεμαχίστηκαν σε μικρά τεμάχια που ακολουθείται από ενζυματική πέψη σε απλά εναιωρήματα κυττάρου με κολλαγενάση τύπου 2 (Worthington, Lakewood, NJ) και δισπάση (Invitrogen, Carlsbad, CA) για 90 λεπτά εντός ενός δονούμενου επωαστήρα στους 37 ° C. Δείγματα στη συνέχεια πλύθηκαν τρεις φορές με παγωμένο μέσο συμπληρωμένο με 10% FBS που ακολουθείται από ανασύσταση σε ρυθμιστικό FACS (PSB /1% BSA). Τα δείγματα αποκλείστηκαν με ποντίκι Seroblock FcR (Abd Serotec, Raleigh, NC) για 10 λεπτά επί πάγου που ακολουθείται από επώαση 30 λεπτών με τα ακόλουθα φθορισμό συζευγμένα αντισώματα: CD45: PerCP Cy5.5, CD11b: APC, Gr-1: FITC, Ly6C: FITC, Ly6G: FITC (Βϋ Pharmingen, San Diego, CA) & amp? F4 /80: FITC (Abd Serotec). Ενιαία κυτταρικά εναιωρήματα του ΒΜ αναρρόφησης, τα δείγματα αίματος που είχαν καθαριστεί από τα ερυθρά αιμοσφαίρια και η περιτοναϊκή πλύσεις μπλοκαρίστηκαν και σημάνθηκαν όπως παραπάνω. Η συλλογή δεδομένων λήφθηκαν χρησιμοποιώντας το FACS Caliber κυτταρόμετρο ροής διαμέσου του πυρήνα και ανάλυση δεδομένων MKSCC ροής πραγματοποιήθηκε με τη χρήση FlowJo 7.2.5 λογισμικού.

ΤΑΜ από θυρεοειδή καρκίνους του

ΤΡΟ-Cre /LSL-Braf

ποντίκια, τα οποία εκφράζουν ενδογενή επίπεδα της BRAF

V600E [21], ήταν ταξινομημένο με CD11b:. APC από θυρεοειδή παρασκευάσματα απλού κυττάρου όπως περιγράφεται παραπάνω

ανοσοφθορισμού /ανοσοϊστοχημεία (IHC)

για ανοσοφθορισμό σειριακές τομές ελήφθησαν από φρέσκο ​​κατεψυγμένο, ΟΚΤ-ενσωματωμένο thyroids ή /και σπλήνες. Θυρεοειδής 5 μΜ τμήματα από τα επίπεδα τουλάχιστον 3-4, κάθε -150 μm πέρα, ελήφθησαν. Τα πλακίδια ξηράνθηκαν στον αέρα, μονιμοποιήθηκαν με παγωμένη ακετόνη για 30 λεπτά, επανα-ξηραίνονται και στη συνέχεια τοποθετήθηκαν σε PBS. Οι τομές αποκλείσθηκαν με DakoCytomation μπλοκ πρωτεΐνη χωρίς ορό (Dako, Carpinteria, CA) για 30 λεπτά ακολουθούμενη από ΡΝΒ αντιδραστήριο δέσμευσης (Perkin Elmer, Waltham, ΜΑ) για 60 λεπτά. Το ακόλουθο πρωτεύον ποντικού, χρησιμοποιήθηκαν μη συζευγμένα αντισώματα: CD11b, CD68 και αSMA που ακολουθείται από επώαση με δευτερογενή αντισώματα είτε Alexa-Fluor 488 ή Alexa-564. Οι τομές απεικονίστηκαν σε όρθια μικροσκόπιο Zeiss Axio2Imaging στην Εγκατάσταση MSKCC Μοριακής Κυτταρολογίας Core.

Για IHC, thyroids μονιμοποιήθηκαν διάρκεια της νύχτας στους 4 ° C με φρέσκια 4% παραφορμαλδεϋδη χρησιμοποιώντας συνεχή περιστροφή. Οι ιστοί πλύθηκαν με 2 κύκλους των 30 min PBS επωάσεις και κατόπιν τοποθετήθηκαν σε 70% αιθανόλη. Οι ιστοί υποβλήθηκαν σε επεξεργασία σε παραφίνη-ενσωματωμένες μπλοκ που ακολουθείται από αύξοντα τομής. Μετά αποπαραφίνωση, H & amp? Ε και immunostains πραγματοποιήθηκαν είτε με το χέρι (Εργαστήριο Συγκριτικής Παθολογίας) ή αυτοματοποιημένος (Μοριακή Κυτταρολογίας Πυρήνας Facility) χρησιμοποιώντας έναν επεξεργαστή Discovery ΧΤ (Ventana Medical Systems). Χρησιμοποιήθηκαν τα ακόλουθα αντισώματα: Κί67 (VP-Κ451, Vector Laboratories), pERK (# 9101, Cell Signaling Technology), Mac-2 (# CL8942B, Cedarlane), άλφα λείου μυός ακτίνη (αSMA) (# M0851, Dako) και IBA-1 (cat # 019-19741, Wako). δοκιμασία TUNEL διεξήχθη όπως περιγράφεται προηγουμένως [24]. Εικόνες ψηφιοποιήθηκαν με Mirax Σάρωση από Carl Zeiss (Γερμανία). Ποσοτικοποίηση των Ki67, TUNEL και χρώση Iba-1 πραγματοποιήθηκε στο Μηχανισμό Μοριακής Κυτταρολογίας πυρήνα χρησιμοποιώντας ολόκληρο το θυρεοειδή ψηφιοποιημένες εικόνες και λογισμικού Metamorph. Το εργαλείο κατώφλι χρώμα Metamorph χρησιμοποιήθηκε για τον εντοπισμό του σήματος DAB και αυτά τα όρια εφαρμόστηκαν κατά τρόπο αυτόματο-παρτίδα σε όλα τα δείγματα για κάθε αντίσωμα. Μια θετική περιοχή% υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας ένα υπολογιστικό φύλλο Excel και να σχεδιάζεται χρησιμοποιώντας GraphPad Prism 5.0.

Ποσοτική PCR πραγματικού χρόνου

Το RNA που εξάγεται από flash κατεψυγμένα thyroids και ταξινομημένο ΤΑΜ χρησιμοποιώντας το κιτ RNA PrepEase (USB Corporation, Cleveland, ΟΗ) και cDNA δημιουργήθηκε χρησιμοποιώντας SuperScriptIII και τυχαίων εξαμερών (Invitrogen). Ποσοτική-PCR έγινε χρησιμοποιώντας τους εκκινητές που περιλαμβάνονται στο συμπληρωματικό πίνακα 1.

Η θεραπεία των ποντικιών με GW2580, ένα c-FMS /ΚΠΣ 1-R αναστολέας της κινάσης

Tg-rtTA /ίείΟ -Braf

ποντικοί μεταξύ 6-8 εβδομάδων υποβλήθηκαν σε αγωγή με ϋΟΧ στο νερό, σε 5 mg ml-1 με 5% γλυκόζη για 7 ημέρες ταυτόχρονα είτε με όχημα ή GW2580 (PLX6134) εμποτισμένο τροφή (που παρέχεται από Plexxikon, Inc ). Thyroids συλλέχθηκαν την ημέρα 7 για IHC όπως περιγράφεται παραπάνω.

Στατιστικές Αναλύσεις

Όλες οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση GraphPad Prism έκδοση 5.00 για Windows, GraphPad Software, San Diego California USA, www.graphpad .com. Οι στατιστικές αναλύσεις που παράγονται χρησιμοποιώντας αταίριαστο δύο tailed t-τεστ του μέσου και τυπικές αποκλίσεις.

Αποτελέσματα

Υπό όρους ενεργοποίησης του BRAF σε thyroids του ενήλικα ποντίκια προκαλεί PTCs που είναι πυκνοκατοικημένες με ΤΑΜ και CAFS

Χρησιμοποιήσαμε ένα μοντέλο ποντικού της ενεργοποίησης ογκογόνων BRAF DOX επαγόμενο στα κύτταρα των ωοθυλακίων του θυρεοειδούς,

Tg-rtTA /ίείΟ-BRAF

V600E

[24], για τη μέτρηση της TAM προσλήψεων και χαρακτηρίζουν TAM φαινότυπο στο BRAF επαγόμενη PTCs. Σε περίπτωση απουσίας του DOX, του θυρεοειδούς ιστός έχει μια κανονική ιστολογία, και υπάρχουν μερικά κάτοικος ιστός Μφ, όπως προσδιορίζεται με FACS με F4 /80 (Εικ. 1Α). Επτά ημέρες μετά την επαγωγή BRAF με DOX, ποντικοί αναπτύσσουν PTCs που είναι επεμβατικές και έχουν υψηλό μιτωτικό δείκτη [24]. Αυτό συνοδεύεται από μια ισχυρή πρόσληψη ΤΑΜ. Όπως φαίνεται στο Σχ. 1Β, περίπου το 50% του πληθυσμού των κυττάρων από PTCs της ΔΟΞ που προκαλείται ποντικούς αποτελείται από CD45

+ λευκοκύτταρα. Η πλειοψηφία από αυτούς είναι F4 /80

+, CD11b

+ ΤΑΜ (Εικ. 1C, D, E). Οι ΤΑΜ σχηματίζουν ένα πυκνό δίκτυο που περιβάλλει φωλιές των κυττάρων του θυρεοειδούς των ωοθυλακίων (Εικ. 1 F, Ι), καθώς και εντός της κάψουλας θυρεοειδούς (δεν φαίνεται). Διαπλεκόμενα στενά με ΤΑΜ εντός του στρώματος του όγκου είναι ένα πυκνό πληθυσμό CAFS (Εικ. 1 G, H). Αυτά είναι διακριτές από ΤΑΜ, όπως φαίνεται στο Σχήμα 1Θ με διπλή ανοσοφθορισμό ετικέτα με αντισώματα προς CD11b και αSMA.

FACS ανάλυση του θυρεοειδούς ιστού από Τ

g-rtTA /ίείΟ-BRAF

V600E

ποντίκια, απουσία (Α) ή παρουσία του DOX (Β-Ε). Α, thyroids άγριου τύπου έχουν χαμηλή αφθονία κάτοικος ιστού μακροφάγα, όπως μετράται με αντι-F4 /80. Επτά ημέρες μετά DOX, ~ 50% των κυττάρων είναι CD45

+ λευκοκύτταρα (Β), τα οποία είναι F4 /80 + και CD11b + (C-D). Οι περισσότεροι ΤΑΜ συν-express F4 /80 και CD11b (Ε). αναλύσεις FACS έγιναν σε ομαδοποιήθηκαν άγριου τύπου (χωρίς DOX: n = 6) και DOX-επαγώμενη (n = 4) thyroids. ΣΤ) IHC λεκέ αντιπροσωπευτικών κατεψυγμένων τμήμα της DOX που προκαλείται θυρεοειδικού ιστού με αντι-CD68

+ (κόκκινο λεκέ) και DAPI (μπλε) δείχνει πυκνή χρώση του ΤΑΜ γύρω του θυρεοειδούς ωοθυλακίων κυττάρων φωλιές (αστερίσκο). G) IHC με αντι-αSMA + (καφέ κηλίδα) δείχνει την ισχυρή χρώση (βέλη) μεταξύ φωλιές των καρκινικών κυττάρων (αστερίσκο). Η) Η ανοσοφθορίζουσα κηλίδωση με βιμεντίνη (πράσινο) είναι παρόμοια με εκείνη του αSMA (G, Ι), σύμφωνα με ένα πυκνό διαμέρισμα στρωματικά CAF. Ι) Διπλή σήμανση ανοσοφθορισμού με αντι-CD11b (κόκκινο) και αντι-αSMA (πράσινο) δεν έδειξαν συν-εντοπισμό, συνεπής με την παρουσία δύο διαφορετικών κυτταρικών τύπων (ΤΑΜ και CAFS, αντίστοιχα). F, H) Τα τμήματα συν-βαμμένα με DAPI (F, H: 20 × μεγέθυνση? G: 10 × μεγέθυνση)

Η

Αποτελέσματα ενεργοποίηση BRAF σε μια ραγδαία αύξηση στην έκφραση των προ-ογκογόνο. /M2 τύπου Μφ χημειοπροσελκυστικά

CSF-1 /CSF-1R και CCL2 (MCP-1) /CCR2 σηματοδότησης στο στήθος του ποντικού και του παγκρέατος νευροενδοκρινείς επάγει την πρόσληψη TAM και ένα προ-ογκογόνο M2-φαινότυπο [28] , [29]. Μία εβδομάδα μετά την επαγωγή DOX στο

Tg-rtTA /ίείΟ-BRAF

V600E

ποντίκια, υπήρχε ένα 250 και & gt? 20,000-φορές αύξηση σε ποσοστό

CSF-1

και

c-fms /CSF-1R

mRNA, αντίστοιχα (Εικ. 2). Η τεράστια αύξηση των

CSF-1R

έκφραση πιθανόν αντανακλά την άφθονη πρόσληψη TAM, αφού δείχνουν ότι τα κύτταρα PTC BRAF που προκαλείται ποντικού δεν εκφράζουν αυτόν τον υποδοχέα (Εικ. S1). Η έκφραση του

CCL2

και του υποδοχέα του

CCR2

αυξήθηκε επίσης, αλλά σε μικρότερο βαθμό (~ 4 φορές) (Εικ. 2). Η αυξημένη έκφραση των δύο χημειοκινών αυξήθηκε στον πληθυσμό των κυττάρων μη ΤΑΜ, αποτελείται κυρίως από θυρεοειδή θυλακιώδη κύτταρα (Σχ. S1). Αυτό είναι σύμφωνο με προηγούμενες μελέτες που δείχνουν ότι BRAF επάγει την έκφραση του Μο χημειοελκυστικά σε κύτταρα PCCL3, μια κυτταρική γραμμή θυρεοειδή θυλακιώδη αρουραίου [30]. Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι μετά την ενεργοποίηση BRAF, θυρεοκύτταρα ρητή CSF-1 και CCL2, η οποία συνδέεται με την πρόσληψη του ΤΑΜ εκφράζουν τους αντίστοιχους υποδοχείς τους.

Ποσοτική RT-PCR για τους υποδεικνυόμενους χημειοελκτικά και των αντίστοιχων υποδοχέων τους σε εκχυλίσματα ιστού του θυρεοειδούς από την T

g-rtTA /ίείΟ-BRAF

V600E

ποντίκια χωρίς (χωρίς ΔΟΞ) ή 7 ημέρες μετά DOX. επίπεδα έκφρασης κανονικοποιούνται στο

β-ακτίνης

. Οι ράβδοι αντιπροσωπεύουν το μέσο όρο + SD από θυρεοειδείς καμία DOX (n = 4) και (η = 7) ποντικούς DOX επαγόμενη 7-ημερών. *** P & lt?. 0.001

Η

Η επιλεκτική εξάντληση των ΤΑΜ σε PTCs της Tg-rtTA /ίείΟ-BRAF

V600E ποντίκια βλάπτει την έναρξη PTC και επιβραδύνει την επέκταση στρωματικά του CAFS

προκειμένου να εξετάσει το λειτουργικό ρόλο της ΤΑΜ στην ανάπτυξη PTC, περάσαμε

Tg-rtTA /ίείΟ-BRAF

V600E

με

CCR2-DTR

ποντίκια, τα οποία εκφράζουν τον υποδοχέα τοξίνης της διφθερίτιδας (DTR) υπό τον έλεγχο του

CCR2

γονίδιο υποκινητή [31]. που προέρχονται από μονοκύτταρα (BMDM) πρόδρομοι του μυελού των οστών απαιτεί CCR2 σηματοδότησης για έξοδο από το μυελό [31]. Περιφερική μακροφάγα δεν εκφράζουν CCR2, εκτός κατά τη διάρκεια διακριτές φλεγμονώδεις καταστάσεις [32], [33]. Όπως φαίνεται στο Σχ. S2A-Β, η ΒΜ και το αίμα του

CCR2-DTR

ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με DT για μία εβδομάδα είχαν μια μείωση στην Ly6C + προδρόμους μονοκυττάρων (Σχ. S2A), καθώς και σε CD11b

+ και F4 /80

+ κυκλοφορούντα μονοκύτταρα (Εικ. S2B). Resident περιτοναϊκή και σπληνική Μφ (Σχ. S2C, G) παρουσίασαν επίσης μια πλήρη και /ή μερική μείωση στην πυκνότητα Μφ (Σχ. S2E, Η), αντίστοιχα. Αυτό συνοδεύτηκε από μια αλλαγή στην + myelomonocytes πρόδρομοι Gr-1 από το ΒΜ (Σχ. S2A) και την κυκλοφορία (Εικ. S2B) σε περιφερικές θέσεις (Εικ. S2F).

επόμενο αντιμετωπίζονται

Tg -rtTA /ίείΟ-BRAF

V600E /CCR2-DTR

ποντικών με DOX για 7 ημέρες και με DT με ένεση ΙΡ κατά τις ημέρες 0, 3 και 6. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 3Α, αυτό είχε ως αποτέλεσμα μια σχεδόν πλήρη εξάντληση του ΤΑΜ στο στρώμα του όγκου. Ιστολογικά, αυτό συνοδεύεται από μείωση της μάζας του όγκου με μερική τουλάχιστον αποκατάσταση της αρχιτεκτονικής του θυρεοειδούς των ωοθυλακίων (Σχ. 3Β). Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων όπως μετράται με Ki67 χρώσης σημαντικά μειωμένη, η οποία ήταν πιο εμφανής στην περι-ογκική και περι-θυλακιώδη διαμερισμάτων στρωματικών (Σχ. 3C). Από CAFS και ΤΑΜ είναι οι κύριοι τύποι κυττάρων εντός του στρώματος, υποθέτουμε ότι η μείωση στον πολλαπλασιασμό αντανακλά κυρίως επίδραση στην ΤΑΜ ή /και CAFS. Πράγματι, όπως φαίνεται στο Σχήμα 3D και Ε, με την απουσία του ΤΑΜ, παρατηρήσαμε μια δραματική μείωση αSMA θετική χρώση στην κάψουλα του όγκου, καθώς και εντός του θυρεοειδούς μεταξύ των φωλιών του ωοθυλακίου κυττάρων. Η θεραπεία με DT δεν επηρέασε την ενεργοποίηση ΜΑΡΚ BRAF επαγόμενη, όπως προσδιορίζεται με IHC με φωσφο-ΕΚΚ (Εικ. S3). Επαναλάβαμε αυτές τις μελέτες χρησιμοποιώντας ένα δεύτερο μοντέλο του όρους εξάντληση ΤΑΜ (

CD11b-DTR

). Παρατηρήσαμε μια μείωση

+ CAFS ΤΑΜ και αSMA μετά τη θεραπεία του

Tg-rtTA /ίείΟ-BRAF

V600E /CD11b-DTR

ποντίκια με DOX για 7 ημέρες + DT, όπως περιγράφεται παραπάνω ( τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Ως εκ τούτου, η εξάντληση Μφ κατά τη διάρκεια της BRAF που προκαλείται αποτέλεσμα την έναρξη του όγκου σε μια βαθιά ανάπλαση του στρώματος του όγκου, που χαρακτηρίζεται από την εξάντληση των CAFS.

Εκπρόσωπος τμήματα από Τ

g-rtTA /ίείΟ-BRAF

V600E /CCR2-DTR

ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με DOX για 7 ημέρες με ή χωρίς ενδοπεριτοναϊκή DT κάθε άλλη μέρα: Α) IHC με αντι-Mac-2 δείχνει πυκνό καφέ χρώση εντός του στρώματος που περιβάλλει θυλακιώδη κύτταρα καρκίνου του θυρεοειδούς σε PTCs ελέγχου (

αριστερά

) που είναι σημαντικά εξασθενημένο σε ποντίκια DT-αγωγή (

δεξιά

). Β) PTCs από ποντίκια DT-θεραπεία είναι μικρότερα και έχουν μια πιο διατηρημένα ωοθυλακίων αρχιτεκτονική. Γ) IHC με Κί67 εμφανίζει μειωμένη πολλαπλασιασμού των κυττάρων, κυρίως εντός του στρώματος, του PTCs από ποντικούς DT-θεραπεία. D, E) IHC με αSMA έδειξε μειωμένη θετικότητα στην κάψουλα του όγκου και intertumoral στρώμα. Ε) Μεγαλύτερη μεγέθυνση (40 ×) δείχνει σημαντική λέπτυνση της κάψουλας του όγκου και της εξάντλησης των αSMA θετικών κυττάρων στο μεταξύ όγκων χώρους των ποντικών DT-θεραπεία. ΣΤ) Μπαρ γράφημα που απεικονίζει αλλαγές σε Mac-2, αSMA και Ki67 σε ελέγχου (n = 5) vs DT-αγωγή (η = 6) ποντικούς. *** P & lt? 0.001, * ρ & lt?. 0.01

Η

PTCs των ποντικών Tg-Braf είναι σε μεγάλο βαθμό μολυσμένο από φλεγμονώδη, Μ2 πολωμένο ΤΑΜ

Είμαστε δίπλα μετατραπεί σε ένα μοντέλο ποντικού της εγκατεστημένος PTC, να διερευνηθεί ο ρόλος των ΤΑΜ στη συντήρηση και την εξέλιξη του όγκου. Οι

Tg

–

Braf

μοντέλο ποντικού ανακεφαλαιώνει στενά προηγμένη ανθρώπινη μετάλλαξη BRAF PTCs, το γεγονός ότι τα καρκινικά κύτταρα εμφανίζουν χαρακτηριστικά ψηλό κυττάρων [23], και την πρόοδο στην PDTC [23], [34 ]. Όπως φαίνεται στο Σχ. S4, CD68

+ (Σχ. S4A), F4 /80

+ (Σχ. S4B) και CD11b

+ (Εικ. S4C) ΤΑΜ περιβάλλουν και σε μεγάλο βαθμό διεισδύσει PTCs της ηλικίας 6-12 εβδομάδων

Τ

G-

Braf

ποντίκια. Για να προσδιορίσετε αν CCR2

+ ΤΑΜ συμβάλει σε αυτό τον πληθυσμό κυττάρων, δημιουργήσαμε

Tg-Braf /CCR2-GFP

ποντίκια. Σε άγριου τύπου

CCR2-GFP

ποντίκια, υπάρχουν λίγες CCR2-GFP

+ κάτοικος Μφ (Εικ. S4D), ενώ στο

Tg-Braf /CCR2-GFP

ζώα, περίπου 20% του συνολικού πληθυσμού κυττάρων αποτελείται από CCR2-GFP

+ ΤΑΜ που συν-εκφράζουν CD45

+ (Εικ. S4 E, F).

Είμαστε δίπλα προσδιορίζεται ο φαινότυπος της ΤΑΜ που λαμβάνεται από καθιερωμένες ποντικού PTCs (8 έως 15 εβδομάδες ηλικίας) συγκρίνοντας τα επίπεδα του mRNA του Μ1 Μ2 vs-συναφή γονίδια σε σύγκριση με ποντικού BMDM (Εικ. S4G). Εμπλουτισμός ΤΑΜ διαλέγεται από εναιωρήματα απλού κυττάρου PTC επιβεβαιώθηκε με υψηλή έκφραση του

CSF-1R

, η οποία ήταν συγκρίσιμη με εκείνη του BMDMs. Έκφραση των Μ2 που σχετίζονται με τα γονίδια

CCR2

,

arginase1

,

CCL22 και IL-10

ήταν υψηλότερη σε σύγκριση με το ΤΑΜ BMDMs. Αντιθέτως, οι Μ1-ειδικούς δείκτες

IL-12

και

ROS

δεν ήταν σημαντικά διαφορετικό μεταξύ αυτών των κυτταρικών πληθυσμών (Εικ. S4G).

Επιλεκτικά καταστρέφουν ΤΑΜ κατά τη διάρκεια προχωρημένα στάδια της PTC προκαλεί υποχώρηση του όγκου: τα στοιχεία μας δείχνουν ότι οι ποντικού PTCs διεισδύσει από Μ2 πολωμένο ΤΑΜ

επόμενο δημιουργείται

Tg-Braf /CCR2-DTR

ποντίκια για να εξετάσει κατά πόσον είναι ΤΑΜ απαιτούνται για τη συντήρηση του όγκου . Η αγωγή των ποντικών με DT για 10 ημέρες οδήγησε σε 4-8 φορές εξάντληση των ΤΑΜ (Σχ. 4Α, Β, C, D, E, F). Υπήρξε μια μικρή ταυτόχρονη αύξηση της Gr1

+, Ly6G

+ κυττάρων, σύμφωνα με τα ουδετερόφιλα που διηθούν όγκο (ΑΦΜ) (Εικ. 4D, E, F). Η εξάντληση ΤΑΜ σχετίστηκε με μείωση -50% του βάρους του όγκου (18 +/- 3 vs. 33 +/- 7 mg στην DT vs ελέγχου, ρ = 0.0002, Σχ. 5Α, Β). Αυτό συσχετίστηκε με μείωση κατά 30% σε Ki67 χρώσης (0.54% /mm

2 έναντι 0,77% /mm

2 στην DT vs ελέγχου? Ρ = 0,04) (Εικ 5C, F.), Και ένα 4 φορές σε αύξηση των TUNEL + κύτταρα (Σχ. 5 D, F), κατά κύριο λόγο σε περιοχές μολυσμένο από ΤΑΜ. Αν και η συνολική πυκνότητα των αιμοφόρων αγγείων ήταν χαμηλότερη στην ΤΑΜ-εξαντλημένο PTCs σύγκριση με τους μάρτυρες PTCs (Σχ. 5Ε), αυτό δεν ήταν στατιστικά σημαντική όταν διορθώνεται για την περιοχή του όγκου. Σύνθετη PTCs στάδιο σε ποντίκια ελέγχου είχαν περίοπτη θηλώδες δομές με πολλές εστίες ψηλά κύτταρα (Εικ. S5A) και PDTC εστίες (Εικ. S5B). Θεραπεία των 6-12 εβδομάδων Tg-

Braf

/

CCR2-DTR

ποντίκια με DT για 10 ημέρες είχαν ως αποτέλεσμα του θυρεοειδούς με ένα κυρίαρχο ωοθυλακίων αρχιτεκτονική που αποτελείται από κολλοειδή που περιέχουν θύλακες, με λιγότερες ψηλά κύτταρα και PDTC φωλιές των όγκων (Σχ. S5c, D).

Αντιπροσωπευτικά IHC με Iba-1 σε PTCs ελέγχου (Α) και DT-αγωγή (Β) ποντίκια. Γ) Ποσοτικοποίηση των Iba-1 θετικά χρώση κυττάρων από τα τμήματα του θυρεοειδούς του ελέγχου και της DT-ποντίκια με αγωγή με τη χρήση του λογισμικού Metamorph. D, E) FACS ανάλυση με αντι-CD11b και αντι-Gr-1 επί αιωρήματα κυττάρων που απομονώνονται από θυρεοειδείς ελέγχου (D) και DT-αγωγή ποντικούς. Σε περίπτωση απουσίας της DT (D) υπάρχουν άφθονα CD11b + Gr1- ΤΑΜ (επάνω αριστερά τεταρτημόριο). Μετά από μία εβδομάδα DT (Ε), ΤΑΜ είναι βαθιά εξαντληθεί με μια μικρή αύξηση των ουδετερόφιλων CD11b + Gr1 +. ΣΤ) Εκπρόσωπος ανάλυση από τα δεδομένα FACS για τις υποδεικνυόμενες δείκτες των ΤΑΜ και ουδετερόφιλα πριν και μετά τη θεραπεία DT.

Η

Α) Βάρος thyroids του ελέγχου και της DT που έλαβαν

Tg-Braf /Ccr2- DTR

ποντίκια μετά από 10 ημέρες θεραπείας με ενδοπεριτοναϊκή DT σε εναλλασσόμενες ημέρες. * P & lt? 0,01. Β-Γ) Εκπρόσωπος τμήματα με τα υποδεικνυόμενα λεκέδες. ΣΤ) Ποσοτικοποίηση των Κί67 και TUNEL θετική χρώση χρησιμοποιώντας Metamorph ανάλυση των δεδομένων. Κί67 p & lt? 0,04? ΤΟΥΝΕΛ p & lt?. 0.01

Η

CSF-1 /CSF-1R σηματοδότηση είναι απαραίτητη για την πρόσληψη TAM και μπορεί να έχουν ως στόχο φαρμακολογικά να βλάψει την έναρξη PTC

επόμενο διερευνηθεί εάν CSF-1 είναι που απαιτούνται για την πρόσληψη TAM δημιουργώντας

Tg-Braf /CSF-1

– /-

ποντίκια.

CSF-1

– /- ποντίκια έχουν

έχουν περιγραφεί προηγουμένως (36? 37) και έχουν φυσιολογική θυρεοειδούς ιστολογία. PTCs από

Tg-Braf /CSF-1

– /+

ποντίκια πυκνά διεισδύσει με ΤΑΜ (Σχήμα 6Β, αριστερό πάνελ.). Τέσσερα από τα 5

Tg-Braf /CSF-1

– /- ποντίκια

παρουσίασαν μια σημαντική μείωση στις ΤΑΜ στις PTCs (Σχήμα 6Β δεξιά πάνελ.), Η οποία συνδέεται με μείωση στο βάρος του όγκου (Σχ. 6Α), και συνοδεύτηκε από γενικευμένη διατήρηση του ωοθυλακίου αρχιτεκτονική (Σχ. 6C, δεξί πάνελ). πυκνότητα ΤΑΜ δεν εξαντλήθηκε στον θυρεοειδή ενός

Tg-Braf /CSF-1

– /-

ποντίκι, που επέδειξε ένα βάρος όγκου (Σχήμα 6Α.) και ιστολογική φαινότυπο συγκρίσιμη με εκείνη του ελέγχου PTCs (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Τα στοιχεία αυτά δείχνουν μια σημαντική ρόλο του CSF-1 σηματοδότηση στις προσλήψεις ΤΑΜ σε αυτό το μοντέλο, αν και σε λίγες περιπτώσεις εναλλακτικών σημάτων μπορεί να παρακάμψει την απαίτηση CSF-1 για την πρόσληψη ΤΑΜ.

Α) το βάρος του θυρεοειδούς του

Tg-Braf /CSF-1

+/-

(έλεγχος) και

Tg-Braf /CSF-1

– /-

(

CSF-1

null) ποντίκια σε 6-12 εβδομάδες της ηλικίας. B, C) Εκπρόσωπος τομές χρωματίστηκαν με αντι-Mac-2 (Β) και Η /Ε (C) εξάντληση δείχνουν TAM και διατήρηση των ωοθυλακίων αρχιτεκτονικής στην PTCs του

CSF-1

null ποντίκια.

Για να καθοριστεί αν η πρόσληψη ή /και ενεργοποίηση των ΤΑΜ θα μπορούσε να μπλοκαριστεί φαρμακολογικά, θα τροφοδοτείται DOX που προκαλείται

Tg-rtTA /ίείΟ-Braf

ποντίκια με εμποτισμένες τροφή που περιέχει GW2580, ένα c-FMS /CSF-1R αναστολέας της τυροσινικής κινάσης (38) για 7 ημέρες. Dox επαγόμενη GW2580 αγωγή ποντικοί είχαν PTCs με μείωση ~62% σε ΤΑΜ (Σχ. 7Β, F) το οποίο συνδέεται με μια σημαντική μείωση του βάρους του θυρεοειδούς (έναντι 0,0163 +/- 0,0014 όχημα 0,0126 +/- 0,0026 GW2580, ρ = 0.029? Εικ. 7Α) και μια πιο διαφοροποιημένη αρχιτεκτονική του θυρεοειδούς των ωοθυλακίων (σχήμα 7Α).. Στρωματικά CAFS, όπως μετράται από αSMA, μειώθηκαν ~77% σε ποντίκια που έλαβαν GW2580 σύγκριση με τους ελέγχους (Σχ. 7C, F). πολλαπλασιασμός του όγκου μειώθηκε κατά 31% σε GW2580 επεξεργασμένου PTCs και αυτή η μείωση ήταν περισσότερο εμφανής εντός του διαμερίσματος στρωματικών (Σχ. 7Β, F). Αυτές οι παρατηρήσεις ανακεφαλαιώνει τις επιπτώσεις των γενετικά καταστρέφουν ΤΑΜ (Εικ. 3), την ενίσχυση της στοιχεία που αποδεικνύουν ότι ΤΑΜ διευκόλυνση της εξέλιξης του καρκίνου του θυρεοειδούς και ότι ΤΑΜ είναι έγκυρη στόχος για τους ασθενείς με προχωρημένη νόσο.

Α-Δ) Εκπρόσωπος τμήματα του θυρεοειδούς για τις υποδεικνυόμενες λεκέδες από 7 ημέρα ϋΟΧ επαγόμενη

Tg-rtTA /ίείΟ-Braf

ποντικούς που υπέστησαν αγωγή είτε με έκδοχο (n = 4) ή GW2580-εμποτισμένο chow (n = 4): α) H /Ε? Β) Iba-1? Γ) αSMA? Δ) Κί67. Ε) Θυρεοειδούς βάρη του ϋΟΧ-επαγόμενης, όχημα εναντίον ποντίκια GW2580-αγωγή (* ρ = 0.02). ΣΤ) Ο ποσοτικός προσδιορισμός για τις υποδεικνυόμενες λεκέδες? * P & lt? 0.001, ** p & lt?. 0.01

Η

Συζήτηση

Τα μακροφάγα είναι εξαιρετικά ευέλικτο και έχουν την ικανότητα να διαφοροποιούνται σε κύτταρα Kupffer, οστεοκλάστες ή /και πνευμονοκύτταρα σε ιστούς που κατοικούν ή σε φλεγμονώδεις υποτύπους MO στην μικροβιακές λοιμώξεις (τύπος Μ1) ή μετά από τραυματισμό ιστού (τύπος Μ2). ΤΑΜ μεσολαβήσει μια απόκριση του ξενιστή στην ογκογόνο διαδικασία, και μπορεί να προκαλέσει ανοσία κατά του όγκου (Μ1 τύπου ΤΑΜ) ή, παραδόξως, να ενισχυθεί η ογκογένεση (Μ2 τύπου ΤΑΜ) [35]. Οι περισσότεροι συσχετικός δεδομένα από ανθρώπινους καρκίνους υποδεικνύουν ότι ΤΑΜ είναι protumorigenic, συμπεριλαμβανομένων του καρκίνου του θυρεοειδούς [2] – [5]. Σε PyMT καρκίνους που προκαλούνται μαστού, ΤΑΜ διευκολύνουν όγκου αγγειογένεση και πνεύμονα μεταστάσεις αλλά δεν έχουν καμία επίδραση στην πρωτογενή ανάπτυξη του όγκου [28]. Σε RIP1-Tag που προκαλείται από νευροενδοκρινείς όγκους του παγκρέατος (ΡΝΕΤ), CSF-1 εξαρτάται ΤΑΜ διευκολυνθεί η μετάβαση από υπερπλασίας αγγειογενετική νησίδες σε ΡΝΕΤ, αλλά δεν έχουν καμία επίδραση στην μετέπειτα φαινότυπο όγκου [29]. Στο μεταλλαγμένο μοντέλα εντερική πολυποδίαση APC, CSF-1-εξαρτώμενη ΤΑΜ την προώθηση της ανάπτυξης πολυπόδων. Ωστόσο, ο ρόλος τους στην κακοήθη μετασχηματισμό δεν θα μπορούσε να αξιολογηθεί σε αυτό το μοντέλο της καλοήθους νόσου [36]. Λαμβάνοντας υπόψη ότι οι μελέτες ενοχοποιούν ΤΑΜ ως υποκινητές των όγκων, η σοβαρά δυσμορφίας φαινότυπο του

CSF-1

χτυπήσει το ποντίκι που χρησιμοποιούνται σε αυτές τις μελέτες, καθώς και το γεγονός ότι αυτό το μοντέλο δεν επιτρέπει ΤΑΜ να εξαντληθεί κατά τη διάρκεια καθορισμένα στάδια της ανάπτυξης του όγκου , περιορίζουν τα συμπεράσματα που μπορούν να εξαχθούν από αυτά τα πειράματα. Επιπλέον, επειδή μπορεί να επάγει ογκογονίδια διακριτά φλεγμονώδη σήματα που επηρεάζουν διαφορικά τον φαινότυπο των ΤΑΜ, τα μοντέλα που προκαλείται από τον καρκίνο ογκοπρωτεΐνες είναι γνωστό ότι εμπλέκονται στην παθογένεση της νόσου μπορεί πιο πιστά ανακεφαλαιώνουν τη λειτουργία του ΤΑΜ στον ανθρώπινο καρκίνο.

ογκογόνος

BRAF

επαγόμενη καρκίνων του θυρεοειδούς είναι ιδανικά για τη μελέτη της βιολογίας του ΤΑΜ σε εξέλιξης του καρκίνου επειδή 1) ανθρώπινα θυρεοειδούς καρκίνο εξέλιξη σε PDTCs και ενεργοποιημένα Τ-λεμφοκύτταρα συνοδεύεται από αυξημένη διείσδυση του ΤΑΜ που περιλαμβάνει σχεδόν ~ 50% του όγκου του όγκου σε ενεργοποιημένα Τ-λεμφοκύτταρα [4], [19]? 2)

BRAF

προάγει την εξέλιξη των ανθρώπινων WDPTCs να PDTCs και ενεργοποιημένα Τ-λεμφοκύτταρα [16] και 3) ενεργοποίηση της οδού BRAF-ΜΑΡΚ in vitro σε κύτταρα του θυρεοειδούς επάγει την έκφραση του ΤΑΜ χημειοελκυστικών [30]. Σε αυτή τη μελέτη χρησιμοποιήθηκαν μοντέλα ποντικών BRAF επαγόμενης PTCs /PDTCs να εξετασθεί ο ρόλος του ΤΑΜ στην πρόοδο του καρκίνου του θυρεοειδούς. Εξαρτάται από την ενεργοποίηση του BRAF σε ποντικού thyroids συνδέεται με μια σημαντική αύξηση στις μεγάλες χημειοπροσελκυστικά TAM,

CSF-1

και

CCL2

. Αυτό συνοδεύεται από μια πυκνή διήθηση των ΤΑΜ και την ανάπτυξη των PTCs /PDTCs με μια σύντομη λανθάνουσα [24]. Να εξετάσει κατά πόσον υπάρχει αιτιώδης σχέση μεταξύ της TAM διείσδυση και ανάπτυξη PTC, είμαστε υπό όρους απεμπλουτισμένου CCR2-εξαρτώμενη ΤΑΜ κατά την επαγωγή BRAF χρησιμοποιώντας ένα

CCR2-DTR

προσέγγιση. Η διακίνηση των μονοκυττάρων από το μυελό μέσα στην κυκλοφορία και τους ιστούς απαιτεί σηματοδότησης μέσω του CCL2 /μονοπάτι CCR2 και μονοκύτταρα έλλειψη έκφρασης CCR2 παγιδευτεί στο BM [31]. Μόλις στην κυκλοφορία ή /και ιστών, η έκφραση του CCR2 στα μονοκύτταρα /MO ρυθμίζεται προς τα κάτω κατά τη διάρκεια καταστάσεων που στηρίζεται αλλά παραμένει ρυθμίζεται αυξητικά κατά τη διάρκεια της φλεγμονής [31].