Αφηρημένο

Ο στόχος αυτής της μελέτης είναι να καθοριστεί εάν οι ασθενείς με παρανεοπλασματική εκφύλιση της παρεγκεφαλίδας (ΣΑΠ) και του καρκίνου του πνεύμονα μικρών κυττάρων (SCLC) έχουν ένα συγκεκριμένο ρεπερτόριο αντισωμάτων, αν τα αντισώματα SOX1 (SOX1-ab) μπορεί να προβλέψει την παρουσία του SCLC, και εάν αντισώματα έναντι αντιγόνων επιφανείας του κυττάρου συμβαίνουν σε αυτό το σύνδρομο. Αντίσωμα ανάλυση έγινε χρησιμοποιώντας ανοσοϊστοχημεία σε εγκέφαλο αρουραίου, ανοσοστύπωμα με ανασυνδυασμένα αντιγόνα, διαλογή βιβλιοθηκών έκφρασης cDNA, και ανοσοσήμανση των ζωντανών νευρώνων σε 39 ασθενείς με τη ΣΑΠ και SCLC. VGCC-ab μετρήθηκαν με RIA, και SOX1-ab, Hu-ΑΒ, και ZIC4-αβ με ανοσοαποτύπωση. Lambert-Eaton myastenic σύνδρομο (LEMS) ήταν παρούσα σε 10 από 23 ασθενείς με ηλεκτροφυσιολογικές μελέτες. Τουλάχιστον ένα αντίσωμα ανιχνεύθηκε στο 72% των ασθενών. Οι επιμέρους συχνότητες ήταν: 49% SOX1-ab, 44% VGCC-ab, 31% Hu-ΑΒ, και 13% ZIC4-ab. SOX1-ab συνέβη στο 76% των ασθενών με VGCC-ab και το 27% εκείνων που δεν VGCC-ab (p = 0.0036). SOX1-ab δεν βρέθηκαν σε 39 ασθενείς με σποραδικές όψιμης έναρξης παρεγκεφαλιδική αταξία, 23 με παρεγκεφαλιδική αταξία και αντισώματα γλουταμινικό αποκαρβοξυλάση οξύ, και 73 με τη ΣΑΠ και καρκίνο είδη εκτός από μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (31 χωρίς onconeural αντισώματα, 25 με yo-ab, 17 με Tr-ab). Πέντε ασθενείς (13%) είχαν αντισώματα έναντι άγνωστων νευρωνικής κυτταρικής επιφάνειας αντιγόνα αλλά κανένα από αυτά δεν βελτιώνονται με ανοσοθεραπεία. Ένας ορός ανοσοαντέδρασαν κατά τον άξονα αρχικό τμήμα των νευρώνων και ενός άλλου ορού έναντι ELKS1, μία πρωτεΐνη εκφράζεται έντονα στην παρεγκεφαλίδα που αλληλεπιδρά με το beta4-υπομονάδα του VGCC. Εν κατακλείδι, το 72% των ασθενών με ΣΑΠ και SCLC είχαν ένα ή περισσότερα αντισώματα που υποδηλώνουν την παρουσία αυτού του όγκου. Σε αυτούς τους ασθενείς, VGCC-ab και SOX1-ab συμβεί σφιχτά συνδεδεμένα. SOX1-ab είναι προάγγελοι των SCLC σε ασθενείς αταξία με ειδικότητα 100% και ευαισθησία 49%. Σε αντίθεση με μεταιχμιακή εγκεφαλίτιδα με SCLC, αντισώματα έναντι αντιγόνων επιφανείας του κυττάρου εκτός από VGCC-ab, είναι σπάνιες και δεν προβλέπουν την ανταπόκριση στη θεραπεία

Παράθεση:. Sabater L, Höftberger R, Boronat Α, Saiz Α, Dalmau J, Graus F (2013) αντισώματος ρεπερτόριο σε παρανεοπλασματική εκφύλιση της παρεγκεφαλίδας και μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα. PLoS ONE 8 (3): e60438. doi: 10.1371 /journal.pone.0060438

Επιμέλεια: Μιχαήλ Platten, Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο της Χαϊδελβέργης, Γερμανία

Ελήφθη: 8 του Νοέμβρη του 2012? Αποδεκτές: 27 Φεβρουαρίου 2013? Δημοσιεύθηκε: 25 Μαρ 2013

Copyright: © 2013 Sabater et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη έχει υποστηριχθεί εν μέρει από Fondo de Investigaciones Sanitarias. Μαδρίτη. Ισπανία (#FIS PS09 /0193 FG), η Fonds zur Förderung der wissenschaftlichen Forschung, Αυστρία, J3230 Έργου (RH), και ΝΙΗ RO1NS077851, NCI RO1CA089054, Fondo de Investigaciones Sanitarias (FIS, 11/01780), και Fundació la Marató de TV3 (JD). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Δρ Dalmau έχει μια επιχορήγηση έρευνας από Euroimmun και εισπράττει δικαιώματα από διπλώματα ευρεσιτεχνίας για το χρήση των Ma2 και NMDAR ως εξετάσεις αυτοαντισωμάτων. Δεν έχει ανταγωνιστικά οικονομικά συμφέροντα, όπως η κυριότητα των μετοχών ή εταιρικών μεριδίων, αμειβόμενη απασχόληση ή συμβούλων, μελών διοικητικού συμβουλίου, τα ταξίδια επιδοτήσεις και αμοιβές για ομιλία ή συμμετοχή σε συνεδριάσεις, προϊόντα για την ανάπτυξη ή εμπορία προϊόντων ή δώρα κάθε είδους κ.λπ. Η σχέση του Ο Δρ Dalmau με την εταιρεία Euroimmun δεν μεταβάλλει τους συγγραφείς, η προσήλωση σε όλες τις PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών. Κανένας από τους άλλους συνεισφέροντες έχουν καμία σύγκρουση συμφερόντων.

Εισαγωγή

Το κύτταρο Purkinje είναι ένας από τους πιο κοινούς στόχους της ανοσολογικής απόκρισης ότι μερικοί ασθενείς με καρκίνο δημιουργήθηκαν κατά των αντιγόνων από κοινού με το όγκου και το νευρικό σύστημα [1]. Ο θάνατος του Purkinje κυττάρων οδηγεί σε μια ολο-παρεγκεφαλιδικό σύνδρομο που ονομάζεται παρανεοπλασματική εκφύλιση της παρεγκεφαλίδας (ΣΑΠ) [1]. καρκίνο του πνεύμονα μικρών κυττάρων (SCLC) είναι ένα από τα πιο κοινά όγκους που συνδέουν με τη ΣΑΠ [2]. Ενώ πολλοί ασθενείς (& gt? 80%) με άλλα παρανεοπλασματικά νευρολογικά σύνδρομα και αντισώματα SCLC λιμάνι Χου (Hu-ab), η συχνότητα του Hu-ab στο ΣΑΠ είναι χαμηλή (23%) [3]. Περίπου το 40% των ασθενών ΣΑΠ με ​​SCLC έχουν αντισώματα στην τάση διαύλων ασβεστίου (VGCC), και μερικά επίσης παρούσα κλινική ή νευροφυσιολογική απόδειξη της μυασθένειας Lambert-Eaton σύνδρομο (LEMS) [3]. Έως 60% των ασθενών με LEMS και SCLC έχουν SOX1-ab, μια ορολογική δείκτη του SCLC [4].

Λόγω της συχνής σύνδεσης των ΣΑΠ με ​​SCLC, και μερικές φορές με LEMS, εμείς αιτιολογημένη ότι ο καθορισμός των SOX1-ab θα μπορούσε επίσης να είναι χρήσιμο να προβλεφθεί κατά πόσον οι ασθενείς με υποψία PCD έχουν μια υποκείμενη SCLC. Επιπλέον, οι ασθενείς με μεταιχμιακή εγκεφαλίτιδα και μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα, αλλά χωρίς onconeural αντισώματα συχνά έχουν αντισώματα έναντι της νευρωνικής υποδοχείς στην επιφάνεια, αν αυτό το παράδειγμα ισχύει και για τη ΣΑΠ είναι άγνωστη [5].

Στην παρούσα μελέτη αναλύσαμε το ρεπερτόριο αντισωμάτων σε ένα σειρά ασθενών με ΣΑΠ και SCLC, εστιάζοντας στην συχνότητα των SOX1-αβ και την παρουσία νέων αντισωμάτων σε νευρωνική κυτταρική επιφάνεια αντιγόνα.

Μέθοδοι

ασθενείς

Έχουμε επιλέξει από τη βάση δεδομένων μας, οι ασθενείς με τη διάγνωση του ΣΑΠ και SCLC. Εμείς εξαιρούνται ρητώς οι ασθενείς που παρουσιάζονται με την αταξία, αλλά γρήγορα ανέπτυξε συμπτώματα πέρα ​​από παρεγκεφαλιδική δυσλειτουργία. Αυτοί οι ασθενείς θεωρήθηκαν ότι έχουν παρανεοπλασματική εγκεφαλομυελίτιδα, η οποία σε αντίθεση με ΣΑΠ συνδέει σχεδόν πάντα με τον Hu-ab [6]. Η νευρολογική ανικανότητα αξιολογήθηκε με την τροποποιημένη κλίμακα Rankin όπως περιγράφεται [6], [7]. Η κλινική πληροφορίες που ελήφθησαν από τις μορφές συμπληρωθεί από το αιτούν νευρολόγους και τηλεφωνικές συνεντεύξεις.

Πρότυπο πρωτόκολλο Εγκρίσεις, Εγγραφές, και συναινεί Ασθενής

ορού και ΕΝΥ δείγματα που χρησιμοποιήθηκαν στη μελέτη έχουν κατατεθεί στο συλλογή των βιολογικών δειγμάτων που ονομάζεται «neuroinmunología» καταχωρήθηκε στο βιοτράπεζα του Institut d ‘Pi Investigació Biomedica Αύγουστο i Sunyer (IDIBAPS), Βαρκελώνη, Ισπανία. Λαμβάνοντας υπόψη ότι πολλοί ασθενείς είχαν πεθάνει κατά τη στιγμή της μελέτης έγινε και η μελέτη είναι εντελώς ανώνυμα ώστε κανένα δείγμα δεν μπορεί να προσδιοριστεί σε ένα συγκεκριμένο ασθενή, έγινε δεκτό να παραιτηθεί από την ειδική γραπτή συγκατάθεση από τους ασθενείς ή το επόμενο του σογιού από την Comité ETIC d’investigació Clínica (CEIC) του Νοσοκομείου κλινική. διαδικασίες χειρισμού των ζώων είχαν εγκριθεί από την Τοπική Επιτροπή Δεοντολογίας (99/1 Πανεπιστήμιο της Βαρκελώνης) και την Generalitat de Catalunya (1094-1099), σύμφωνα με την οδηγία 86/609 /ΕΕ της Ευρωπαϊκής Επιτροπής. Η μελέτη, όπως εξήγησε εγκρίθηκε από την CEIC του Νοσοκομείου κλινική.

Ανίχνευση των αντι-νευρωνικών αντισωμάτων

ορού και ΕΝΥ, όταν είναι διαθέσιμα, αξιολογήθηκαν για την παρουσία onconeural (Hu, Yo, ri, CV2, amphiphysin, Ma2, Tr), αντι-neuropil (NMDAR, AMPAR, GABA

BR, CASPR2, LGI1, mGluR1 και mGluR5) ή πιθανή νέα αντισώματα με ανοσοϊστοχημεία σε κατεψυγμένα τμήματα παραφορμαλδεϋδης-διαχέονται ή μετα-σταθερό αρουραίος παρεγκεφαλίδα όπως αναφέρθηκε [8]. Onconeural θετικότητα αντίσωμα επιβεβαιώθηκε από εμπορικό ανοσοστύπωμα (Ravo Diagnostika GmbH, Freiburg, Γερμανία) και αντι-αντισώματα neuropil από δοκιμασία με βάση κύτταρο χρησιμοποιώντας ΗΕΚ293 κύτταρα επιμολυσμένα με τα κατάλληλα πλασμίδια, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [9]. Αντισώματα έναντι του β4 υπομονάδας και γ2 της VGCC ανιχνεύθηκαν με ανοσοφθορισμό σε κύτταρα ΗΕΚ293 επιμολυσμένα με τα πλασμίδια (MC201619 και SC312948? ΟηΟεηε, Rockville, Maryland, USA). Αντισώματα προς P /Q τύπου VGCC μετρήθηκαν με εμπορικό ραδιοανοσοδοκιμασία (DLD Diagnostica GMBH, Αμβούργο, Γερμανία). SOX1-ab και ZIC4-ab προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας φίλτρα νιτροκυτταρίνης με μικτές πλάκες φάγων (50% των πλακών από θετικούς κλώνους και 50% από το άσχετο κλώνοι). Φίλτρα κόπηκαν σε κομμάτια, το καθένα επωάζεται με ορούς διαφορετικούς ασθενούς (αραίωση 1:1000) και αναπτύχθηκε από μια τεχνική ανοσοϋπεροξειδάσης αβιδίνης-βιοτίνης όπως περιγράφεται [4].

Για να επιβεβαιωθεί η ειδικότητα της SOX1-ab στο διάγνωση του ΣΑΠ που σχετίζονται με SCLC, SOX1-ab αναλύθηκαν επίσης στον ορό 31 ασθενών με ΣΑΠ και διαφορετικούς τύπους καρκίνου, εκτός από SCLC, που δεν φιλοξενούν onconeural αντισώματα που θα μπορούσαν να επιβεβαιώσουν τη διάγνωση του ΣΑΠ, 25 με τη ΣΑΠ, του μαστού ή καρκίνο των ωοθηκών, και Yo-ab, 17 με τη ΣΑΠ, η νόσος του Hodgkin, και Tr-ab, 39 ασθενείς με σποραδικές όψιμης έναρξης παρεγκεφαλιδική αταξία, και 23 με παρεγκεφαλιδική αταξία και αντισώματα γλουταμινικό οξύ αποκαρβοξυλάση.

κουλτούρα Πρωτοβάθμια κυττάρων και in vivo ανοσοκυτταροχημεία

νευρώνες του ιππόκαμπου ελήφθησαν από έμβρυα αρουραίου Ε18 Wistar. Τα κύτταρα ενζυματικά και μηχανικά διασπάστηκαν και επαναιωρήθηκαν σε μέσο Neurobasal συμπληρωμένο με Β27 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) [9]. Κοκκώδη κυτταρικές καλλιέργειες παρασκευάστηκαν από παρεγκεφαλίδα αποκόπηκαν από 8-ημερών αρουραίους Wistar και επεξεργασία εξίσου νευρώνες του ιππόκαμπου, αλλά χρησιμοποιώντας Neurobasal-ένα μέσο που περιέχει 25 mM ΚΟΙ και συμπληρωμένο με Β27 [10]. Τα κύτταρα τοποθετήθηκαν σε πολυ-L-λυσίνη πλάκες προ-επικαλυμμένες Ρ24 και 10 μΜ κυτοσίνη β-ϋ-αραβινοφουρανοσίδη (Sigma-Aldrich, St. Louis, ΜΟ, USA) προστέθηκε στις καλλιέργειες 20 ώρες μετά την επίστρωση, για την πρόληψη της διάδοσης των μη νευρωνικά κύτταρα.

στα πειράματα ανοσοκυτταροχημεία, δείγματα (1:05 ​​αραίωση CSF και 1:200 αραίωση ορού) επωάστηκαν σε ζωντανά νευρώνες για 1 ώρα, στη συνέχεια μονιμοποιήθηκαν με 4% παραφορμαλδεΰδη και κατέστησαν διαπερατά με 0,3% Triton ΤΧ -100. Η χρώση με αντίσωμα αντι-ΜΑΡ2 πραγματοποιήθηκε προκειμένου να επιβεβαιώσει την νευρωνική εξειδίκευση των θετικών κυττάρων. Κατάλληλα φθορίζοντα δεύτερα αντισώματα εφαρμόστηκαν και οι καλυπτρίδες τοποθετήθηκαν με Vectashield με τοποθέτηση DAPI μέσα (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) και έγινε ορατό με μικροσκόπιο Axio Imager M2 ZEISS.

Διαλογή των βιβλιοθηκών έκφρασης cDNA

Uni-ΖΑΡ XR βιβλιοθήκες από την ανθρώπινη παρεγκεφαλίδα και ανθρώπινο εμβρυϊκό εγκέφαλο (Stratagene, La Jolla, CA) ανοσοδιαλογή με 10 ΣΑΠ SCLC ορούς (4 ασθενείς με SOX1-ab και VGCC-ΑΒ, 4 οροαρνητικής, 1 με VGCC- ab και 1 με SOX1-ab), χρησιμοποιώντας τεχνικές έχουν αναφερθεί στο παρελθόν [4]. Εν συντομία, ανοσοδιαλογή της βιβλιοθήκης cDNA με ορούς (αραίωση 1:1000) διεξήχθη για να φτάσει απομονωμένος θετικές πλάκες. κλώνοι φάγου υποκλωνοποιήθηκαν σε pBluescript πλασμίδιο χρησιμοποιώντας την in vivo πρωτόκολλο διάσωσης φάγου εκτομής (Stratagene, La Jolla, CA). Το πλασμιδιακό DNA καθαρίστηκε με τον Spin Miniprep QIAprep Kit (Qiagen, Santa Clarita, CA) και αλληλουχήθηκαν με την αλληλουχίας DNA ΑΒΙ 377 (Applied Biosystems, Foster City, CA) χρησιμοποιώντας το Big Dye τερματιστή έτοιμο μίγμα (Applied Biosystems). Θετικοί κλώνοι αλληλουχήθηκαν επί αμφοτέρων των κλώνων. Το πρόγραμμα BLAST ανθρώπινο γονιδίωμα (NCBI, ΝΙΗ, Bethesda, MD) χρησιμοποιήθηκε για να αναζητήσετε ομολογίες.

Στατιστική Ανάλυση

Η συσχέτιση μεταξύ SOX1-ab και VGCC-ab αναλύθηκαν σε απρόβλεπτα τραπέζι και η δίπτυχη επακριβή δοκιμή Fisher εφαρμόστηκε.

Αποτελέσματα

ασθενείς

Εντοπίσαμε 39 ασθενείς με ΣΑΠ και SCLC. Η διάμεση ηλικία των ασθενών ήταν 64 έτη (εύρος: 47 έως 85 ετών) και 34 ήταν άνδρες. ΣΑΠ συμφωνηθέντων πριν από την διάγνωση της SCLC σε 36 ασθενείς με μέσο χρόνο 2 μηνών (εύρος: 0,5 έως 42 μήνες). Κατά τη στιγμή της ΣΑΠ διάγνωσης 10 ασθενείς είχαν LEMS και 13 δεν (επιβεβαιώθηκε με τουλάχιστον κανονική δυναμικά ένωση μυϊκή δράση σε ηλεκτρομυογράφημα (EMG) μελέτες [11]). Το υπόλοιπο των 16 ασθενών που δεν αναφέρονται συμπτώματα LEMS, αλλά υπάρχουν μελέτες EMG έγιναν. Είκοσι επτά ασθενείς έλαβαν τουλάχιστον μία πλήρη σειρά μαθημάτων (ενδοφλέβια ανοσοσφαιρίνες ή στεροειδή, ή και τα δύο) ανοσοθεραπείας (6 ασθενείς), χημειοθεραπεία (14) ή και τα δύο (7). Καμία βελτίωση ή σταθεροποίηση με μέτρια-σοβαρή δυσλειτουργία της παρεγκεφαλίδας (βαθμολογία Rankin & gt? 3) εμφανίστηκε σε 13 από τους 21 ασθενείς (62%) που είχαν επαρκή παρακολούθηση. Τρεις ασθενείς βελτιώθηκαν και 5 παρέμειναν σταθερές με σκορ Rankin των 3 ή λιγότερο

VGCC και onconeural αντισώματα:. Σύνδεσης με αντισώματα SOX1

Εβδομήντα δύο τοις εκατό των ασθενών είχαν τουλάχιστον ένα από τα αναγράφεται αντισώματα. Οι επιμέρους συχνότητες των αντισωμάτων ήταν: 49% SOX1-ab, 44% VGCC-ab, 31% Hu-ΑΒ, και 13% ZIC4-ab. Είκοσι οκτώ οροί παρουσιάζονται τουλάχιστον ένα αντίσωμα, και 11 ήταν αρνητικό (Σχήμα 1). Υπήρξε μια σαφής συσχέτιση μεταξύ SOX1-ab και VGCC-ab. SOX1-ab βρέθηκαν στο 76.5% των ασθενών με VGCC-αβ αλλά μόνο 27,3% των ατόμων χωρίς VGCC-ab (Fisher exact test ρ = 0.0036) (Σχήμα 2). Θετική VGCC-ab βρέθηκαν σε 9 (90%) από τους 10 ασθενείς με LEMS και 7 (54%) της 13ης χωρίς κλινικά ή EMG ενδείξεις LEMS. Ομοίως, SOX1-ab ήταν παρόντα στο 80% των ασθενών με LEMS και το 38% των ατόμων χωρίς LEMS. Δεν συσχετίσεις παρατηρήθηκαν μεταξύ VGCC-ab ή SOX1-ab και Hu-ab. Κανένας από τους ασθενείς ήταν θετικοί για αντισώματα onconeural, εκτός από Hu, ή να παρουσιάζονται καλά χαρακτηρισμένο αντισώματα αντι-neuropil. SOX1-ab δεν ανιχνεύθηκαν στη σειρά ελέγχου 73 ασθενών με ΣΑΠ και διαφορετικούς τύπους καρκίνων, εκτός από SCLC, 32 ασθενείς με σποραδικές όψιμης έναρξης παρεγκεφαλιδική αταξία, και 23 με παρεγκεφαλιδική αταξία και αντισώματα γλουταμινικό οξύ αποκαρβοξυλάση.

Διανομή SOX1-, VGCC-, ανθρωπι- και ZIC4-ab στην ομάδα μας ασθενή. Κάθε σειρά αντιπροσωπεύει έναν ασθενή και όταν θετικό το κελί είναι γεμάτο χρώμα.

Η

Μπαρ γράφημα αναπαράσταση της συσχέτισης μεταξύ SOX1-ab και VGCC-ab. (Fisher exact test p = 0.0036).

Η

Αναγνώριση των νέων αντισωμάτων

Ένας ορός με SOX1-ab έδειξε επίσης ισχυρή ανοσολογική αντίδραση κατά του άξονα αρχικό τμήμα των νευρώνων στη ρουτίνα ανοσοϊστοχημικές μελέτες ( Σχήμα 3Α). Διαλογή βιβλιοθήκης έκφρασης cDNA ανθρώπινου παρεγκεφαλίδα με αυτό τον ορό απέτυχε να προσδιορίσει τον υποθετικό αντιγόνο. Ένα άλλο νέο αντίσωμα που εντοπίστηκαν κατά τη διαλογή των βιβλιοθηκών cDNA με έναν ορό με VGCC-ab. Η πρωτεΐνη-στόχο, που ονομάζεται ELKS1, είναι ιδιαίτερα άφθονη στην παρεγκεφαλίδα. Πραγματοποιήσαμε μια ειδική δοκιμασία διαλογής φάγων για τον εντοπισμό των ELKS1, αλλά δεν μπορέσαμε να βρούμε άλλους θετικούς ορούς. ΣΑΠ ορούς επίσης δεν έδειξε ανοσολογική αντίδραση με τα κύτταρα ΗΕΚ293 επιμολυσμένα με το β4 ή γ2 βοηθητικές υπομονάδες της VGCC. Πέντε ασθενείς (12,8%) είχαν αντισώματα έναντι αντιγόνων κυτταρικής επιφάνειας που εκφράζονται σε ζώντα, μη-διαπερατά νευρώνες του ιππόκαμπου (Εικόνα 3Β), αλλά μόνο 1 από τους αντιδρούν με παρεγκεφαλιδική κοκκώδες νευρώνες.

A. Αντισώματα έναντι ύψωμα των νευρώνων παρεγκεφαλίδας αρουραίου. Ανοσοϊστοχημεία σε οβελιαία τμήματα παρεγκεφαλίδα αρουραίου. Σημειώστε την έντονη άτυπα αντιδραστικότητα ενός ορού PCD SCLC κατά το ύψωμα νευράξονα των νευρώνων, κυρίως σε κύτταρα Purkinje. Πυρήνες είναι αντίθετα με αιματοξυλίνη. Β ανοσοφθορισμού σε ζωντανή νευρώνες του ιππόκαμπου. Νευρώνες του ιππόκαμπου επωάζονται με CSF 1/5 αραιωμένο ενός ασθενούς ΣΑΠ SCLC. Δραστικότητα του ασθενούς έναντι της μεμβράνης του νευρώνα φαίνεται σε πράσινο και ΜΑΡ2 χρώση σε κόκκινο για τη διασφάλιση της νευρωνικής γράμμωσης. Οι πυρήνες έχουν δει μπλε με DAPI. (Στόχος 100x πετρελαίου)

Η

Συζήτηση

Στην παρούσα μελέτη θελήσαμε να καθοριστεί εάν οι ασθενείς με ΣΑΠ και SCLC είχαν αντισώματα εκτός από VGCC-αβ που θα μπορούσε να εξηγήσει την παρεγκεφαλιδική αταξία ή τουλάχιστον για να βοηθήσει στη διάγνωση του ΣΑΠ. Το απομονωμένο προσδιορισμός του VGCC-ab σε έναν ασθενή με παρεγκεφαλιδική αταξία, με ή χωρίς LEMS επιβεβαιώνει σχεδόν πάντοτε παρανεοπλασματικό προέλευση επειδή η κλινική συσχέτιση του παρεγκεφαλιδική αταξία και LEMS πολύ σπάνια συμβαίνουν σε απουσία του καρκίνου [12], [13]. Επιπλέον, εάν η παρεγκεφαλιδική αταξία είναι παρανεοπλασματικό και ο ασθενής έχει VGCC-ab ο υποκείμενος όγκος είναι πάντα μια SCLC [14].

Για να ξεπεραστεί αυτός ο περιορισμός, αναλύσαμε την παρουσία SOX1-ab, ένα ορολογικό δείκτη του SCLC [15]. Στη σειρά των ΣΑΠ και SCLC βρήκαμε ότι SOX1-ab ήταν παρόντες σε όλες σχεδόν το 50% αυτών των ασθενών. Σε αντίθεση, SOX1-ab δεν βρέθηκαν στον ορό ασθενών με PCD και άλλους τύπους όγκων, με ή χωρίς onconeural αντισώματα και σε ασθενείς με εγκεφαλική αταξία χωρίς καρκίνο. Τα στοιχεία μας δείχνουν ότι SOX1-ab είναι καλοί προάγγελοι μιας υποκείμενης SCLC σε ασθενείς με παρεγκεφαλιδική αταξία. Η συχνότητα των SOX1-ab ήταν ακόμη υψηλότερο (76,5%) σε ασθενείς ΣΑΠ με ​​SCLC που είχαν επίσης VGCC-ab. Αυτή η συχνότητα είναι παρόμοιο με εκείνο που αναφέρθηκε σε ασθενείς με LEMS και SCLC (67%) [16]. Στο σύνολό τους, τα στοιχεία αυτά δείχνουν ότι σε ασθενείς με ΣΑΠ και SCLC, η συνύπαρξη των VGCC-ab και SOX1-ab συνδέεται στενά παρόλο που το 41% ​​των ασθενών ΣΑΠ με ​​VGCC-ab της τρέχουσας σειράς δεν έχουν LEMS.

Προηγούμενες μελέτες έδειξαν ότι όλοι οι ασθενείς με LEMS και SCLC που είχαν Hu-ab είχε επίσης SOX1-ab [16]. Ως εκ τούτου, πρόσθετες δοκιμές για Hu-ab δεν βελτιώσει τη διάγνωση της παρανεοπλασματικής LEMS [16]. Ωστόσο, το εύρημα της παρούσας μελέτης έχει διαφορετικές επιπτώσεις. Λαμβάνοντας υπόψη ότι η SOX1-ab, συνέβη στο 48,7% των ασθενών με ΣΑΠ, ένα επιπλέον 20% των ασθενών είχαν Hu-ab ή VGCC-ab. Συνολικά, συνδυάζοντας τη δοκιμή όλων των 3 αντισώματα (όλα τα εμπορικά διαθέσιμα) θα εντοπίσει σχεδόν το 70% των ασθενών με ΣΑΠ και SCLC. Μερικοί ασθενείς μπορεί να έχουν άλλες onconeural αντισώματα όπως ZIC4, CV2 ή amphiphysin και όλα, αλλά ZIC4 είναι συνήθως ελέγχονται με τις ίδιες εξαρτήσεις που χρησιμοποιούνται συνήθως για την ανίχνευση Hu-ab.

Εμείς δεν βρούμε άλλες δυνητικά χρήσιμων αντισωμάτων σε αυτή τη σειρά . Ο ορός του ένας ασθενής εμφάνισε αντιδραστικότητα με τον άξονα αρχικό τμήμα των μεγάλων νευρώνων. Αυτό το αντίσωμα είχε προηγουμένως αναφερθεί σε έναν ασθενή με εγκεφαλομυελίτιδα και SCLC που ανέπτυξε τις κατασχέσεις και σοβαρές αταξία βάδισης [17]. Έχουμε προηγουμένως ταυτοποιηθεί αυτή ανοσοαντιδραστικότητα σε έναν ασθενή με SCLC χωρίς νευρολογικά συμπτώματα που υποδηλώνουν το αντίσωμα μπορεί να είναι ένας δείκτης της υποκείμενης SCLC (αδημοσίευτο). Ένας άλλος ασθενής είχε ένα αντίσωμα έναντι ELKS1, μια πρωτεΐνη που εκφράζεται κυρίως σε κύτταρα Purkinje [18]. Αν και ELKS1 συν-ανοσοκαταβυθίσματα με την β4 υπομονάδα VGCC, δεν θα μπορούσαμε να εντοπίσει αντισώματα που αντιδρούν άμεσα με β4 ή γ2, τα οποία είναι VGCC υπομονάδες που είναι εντόνως εκφρασμένες σε παρεγκεφαλίδα [18], [19]. Η μελέτη μας δεν αποκλείει το ενδεχόμενο ότι οι οροί αυτών των ασθενών θα μπορούσαν να έχουν αντισώματα κατά άλλων υπομονάδων VGCC ή πρωτεΐνες που αλληλεπιδρούν. Για παράδειγμα, οροί από ασθενείς με μη παρανεοπλασματικές LEMS αντιδρά πιο συχνά με τον τομέα IV του alpha1A της VGCC σε σύγκριση με τους ασθενείς με LEMS και SCLC [20].

Η πρόσφατη ανακάλυψη αντισωμάτων έναντι αντιγόνων επιφανείας των νευρώνων έχει άλλαξε την έννοια ότι αντισώματα σε CNS παρανεοπλασματικά σύνδρομα είναι μόνο υποκατάστατων δεικτών του υποκείμενου όγκου. Ενώ σε ασθενείς με μεταιχμιακή εγκεφαλίτιδα και SCLC περίπου το 50% έχουν Hu-ab και το άλλο 50% έχει αντισώματα έναντι συναπτικών πρωτεϊνών (κυρίως GABA

υποδοχέα Β) [5], η μελέτη μας δείχνει ότι σε ασθενείς με ΣΑΠ και SCLC η εμφάνιση αντισωμάτων στο κελί επιφανειακές πρωτεΐνες εκτός από VGCC-ab, είναι σπάνια.

Η πρακτική συνέπεια της μελέτης μας είναι ότι σε ασθενείς με παρεγκεφαλιδική αταξία, SOX1-ab είναι καλοί προάγγελοι μιας συνδεδεμένης SCLC με ειδικότητα 100 % και ευαισθησία 49%. Επιπλέον, ο συνδυασμός των δοκιμών για SOX1-, VGCC-, και ο Hu-ab εντοπίζει σχεδόν το 70% των ασθενών με ΣΑΠ και SCLC. Δεδομένου ότι η ΣΑΠ αναπτύσσεται συνήθως πριν από τη διάγνωση του όγκου, αυτό το ρεπερτόριο των αντισωμάτων είναι χρήσιμο να αποδείξει ότι η παρεγκεφαλίδας σύνδρομο είναι παρανεοπλασματική, η υποκείμενη όγκος είναι SCLC, και η πιθανότητα της νευρολογικής αποκατάστασης είναι χαμηλή.

Ευχαριστίες

Οι συγγραφείς ευχαριστήσω Mercé Alba και η Εύα Caballero για την εξαιρετική τεχνική υποστήριξή τους. Οι συγγραφείς επίσης να ευχαριστήσω τον Δρ Xavier Xifró για την παροχή της παρεγκεφαλίδας κοκκώδη πρωτόκολλο κυτταρικής καλλιέργειας.