Αφηρημένο

Ιστορικό

υποδοχέα επιδερμικού-τυροσίνης αναστολείς παράγοντα ανάπτυξης κινάσης (EGFR-TKIs) και αναστολείς (ALK) κινάσης αναπλαστικού λεμφώματος έχουν αλλάξει δραματικά τη στρατηγική της ιατρικής θεραπείας του καρκίνου του πνεύμονα. Οι ασθενείς θα πρέπει να ελέγχονται για την παρουσία της μετάλλαξης EGFR ή εχινοδερμάτων σχετίζεται με τους μικροσωληνίσκους πρωτεΐνη που μοιάζει με 4

(EML4

) –

ALK

γονίδιο σύντηξης πριν από τη χημειοθεραπεία για να προβλέψει την κλινική ανταπόκριση τους. Το ενσωματωμένο περιβάλλον τεστ ευαισθησίας των ναρκωτικών ηλεκτρική αφυδρογονάση αναστολή (SDI) δοκιμής και τζελ κολλαγόνου σταγονιδίων (CD-DST) είναι εγκατεστημένα

in vitro

τεστ ευαισθησίας των ναρκωτικών, το οποίο μπορεί να προβλέψει την ευαισθησία των ασθενών σε κυτταροτοξικά αντικαρκινικά φάρμακα. Εφαρμόσαμε

in vitro

τεστ ευαισθησίας φάρμακο για εγκυκλοπαιδικός πρόβλεψη της κλινικής απαντήσεις σε διαφορετικές μοριακές φάρμακα που στοχεύουν.

Μέθοδοι

Η ανάπτυξη ανασταλτικές επιδράσεις της erlotinib και crizotinib επιβεβαιώθηκαν για πνευμόνων κυτταρικές σειρές καρκίνου με τη βοήθεια SDI και CD-θερινής ώρας. Η ευαισθησία των 35 περιπτώσεων χειρουργική εκτομή καρκίνου του πνεύμονα στην erlotinib εξετάστηκε χρησιμοποιώντας SDI ή CD-DST, και σε σύγκριση με την κατάσταση μετάλλαξης του EGFR

Αποτελέσματα

HCC827 (Exon19: Ε746-A750 del). και τα κύτταρα H3122 (

EML4-ALK

) ανεστάλησαν από τις χαμηλότερες συγκεντρώσεις της erlotinib και crizotinib, αντίστοιχα από το Α549, τα κύτταρα Η460, και H1975 (L858R + Τ790Μ) ήταν. Η βιωσιμότητα της χειρουργικά ο καρκίνος του πνεύμονα ήταν 60,0 ± 9,8 και 86,8 ± 13,9% σε EGFR-μεταλλάκτες εναντίον άγρια ​​είδη στο SDI (p = 0,0003). Η βιωσιμότητα των κυττάρων ήταν 33,5 ± 21,2 και 79,0 ± 18,6% σε μεταλλάξεις του EGFR εναντίον περιπτώσεις άγριου τύπου (p = 0,026) σε CD-θερινής ώρας.

Συμπεράσματα

In vitro

ευαισθησία φαρμάκου αξιολογείται είτε SDI ή CD-DST σχετίζεται με την ιδιότητα του γονιδίου EGFR. Ως εκ τούτου, SDI και CD-DST μπορεί να είναι χρήσιμο προάγγελοι των πιθανών κλινικών απαντήσεις στα αντικαρκινικά φάρμακα μοριακών, cyclopedically

Παράθεση:. Miyazaki R, Anayama Τ, Hirohashi Κ, Okada Η, Kume Μ, Orihashi Κ (2016 )

In Vitro

Drug Ευαισθησία Δοκιμές σε Προβλέψτε απαντήσεις μοριακός στόχος για τα ναρκωτικά στην χειρουργικά καρκίνο του πνεύμονα. PLoS ONE 11 (4): e0152665. doi: 10.1371 /journal.pone.0152665

Επιμέλεια: Yiqun Γ Shellman, Πανεπιστήμιο του Κολοράντο, Ιατρική Σχολή, Ηνωμένες Πολιτείες |

Ελήφθη: 3 Νοεμβρίου του 2015? Αποδεκτές: 17 Μαρτίου 2016? Δημοσιεύθηκε: 12 Απρ, 2016

Copyright: © 2016 Miyazaki et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Υποστήριξη μας αρχείο πληροφοριών περιέχει το ελάχιστο σύνολο δεδομένων ανώνυμα απαραίτητο να αναπαράγουν τα ευρήματα της μελέτης μας

Χρηματοδότηση:. Η μελέτη χρηματοδοτήθηκε εξ ολοκλήρου από την απεριόριστη επίσημη ταμείου που προβλέπεται από Κότσι Ιατρική Σχολή, Πανεπιστήμιο Κότσι, Ιαπωνία, http: //www.kochi -ms.ac.jp/

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του πνεύμονα είναι η κύρια αιτία του καρκίνου που σχετίζονται με θνησιμότητα σε πολλές ανεπτυγμένες χώρες, ενώ αδενοκαρκίνωμα αντιπροσωπεύει το 70% των περιπτώσεων μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC). Σε Ιάπωνες ασθενείς, περίπου 50 και 5% των αδενοκαρκινωμάτων έχουν μια μετάλλαξη στον υποδοχέα του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGFR) [1] και εχινοδερμάτων σχετίζεται με τους μικροσωληνίσκους πρωτεΐνη που μοιάζει με 4-κινάσης αναπλαστικού λεμφώματος (

EML4-ALK

) γονίδιο σύντηξης, αντίστοιχα. Μοριακή αντικαρκινικά στόχος φάρμακα όπως αναστολείς κινάσης EGFR-τυροσίνη (ΤΚΙδ) και αναστολείς ALK έχουν αλλάξει δραματικά τη στρατηγική της κλινικής θεραπείας του καρκίνου.

Πιο EGFR μετάλλαξη-θετικούς καρκίνους του πνεύμονα είναι ευαίσθητα σε EGFR-ΤΚΙδ, τα οποία συμβάλλουν στην παράταση της επιβίωσης χωρίς εξέλιξη (PFS) και τη συνολική επιβίωση (OS) των ασθενών [1-4]. Ωστόσο, EGFR με θετικό στη μετάλλαξη περιπτώσεις δεν εμφανίζουν πάντα καλή κλινική ανταπόκριση στη θεραπεία EGFR ΤΚΙ. Περίπου το 30% των περιπτώσεων μετάλλαξης EGFR είναι ανθεκτικά σε EGFR-TKIs [3, 4]. Η μετάλλαξη του Kirsten σαρκώματος αρουραίου ιικού ογκογονιδίου ομόλογο (K-RAS) και Β-Raf (Β-RAF) σερίνη /θρεονίνη πρωτεΐνη κινάση ή το δεύτερο μεταλλάξεις όπως Τ790Μ είναι γνωστό ότι συσχετίζονται με αντοχή σε EGFR-ΤΚΙδ. [5] από την άλλη πλευρά, περίπου το 10% των περιπτώσεων φυσικού τύπου EGFR εμφανίζουν κλινικές αποκρίσεις με EGFR-TKIs [4]. Επιπλέον, EGFR-ΤΚΙδ είναι επίσης αποτελεσματικά σε περιπτώσεις πλακώδους καρκινώματος που συνήθως δεν εμφανίζουν το γονίδιο EGFR μετάλλαξη [6]. Ως εκ τούτου, υπάρχουν κάποιοι πληθυσμοί του EGFR-ΤΚΙ ανταποκρίθηκαν οι οποίοι δεν υποβάλλονται σε διαλογή για μεταλλάξεις του EGFR.

EML4-ALK

-θετικό καρκίνο του πνεύμονα είναι ένας πρωταρχικός κακοήθης όγκος του πνεύμονα που αποτελούνται από κύτταρα που με ένα χαρακτηριστική ανώμαλη διαμόρφωση του DNA, όπου ο

EML4

γονίδιο συντήκεται με το αναπλαστικού λεμφώματος κινάση (

ALK

) γονίδιο.

ALK

-inhibitors (crizotinib ή alectinib) είναι προς το παρόν διαθέσιμο για κλινική χρήση. Είναι κοινό να επιβεβαιώσει την παρουσία της

EML4-ALK

χρησιμοποιώντας ένα φθορισμού σε in situ υβριδισμού (FISH) ανάλυση, αλλά υψηλής ευαισθησίας ανοσοχρώση έχει εναλλακτικά χρησιμοποιηθεί για την προβολή της

EML4-ALK

. Ωστόσο, τα ψάρια και ανοσοχρώση δεν αφορούν κατ ‘ανάγκη το ποσοστό κλινική ανταπόκριση στο

ALK

αναστολείς στην πράξη [7-9]. θα πρέπει να απαιτείται η ανάπτυξη των μοριακών φαρμάκων στόχο για νέες μεταλλάξεις οδηγό να περιλαμβάνει τη διερεύνηση του υπεύθυνου γονιδίου μετάλλαξης. Σήμερα δεν υπάρχει καθιερωμένη μέθοδος για να προβλέψει πλήρως την επίδραση της μοριακής παραγόντων στόχευσης που δρουν σε διαφορετικά σημεία των διαφόρων οδών σηματοδότησης.

Υπάρχουν δοκιμές in vitro ευαισθησίας αντικαρκινικό φάρμακο, όπως το ηλεκτρικό αφυδρογονάση αναστολή (SDI) δοκιμή , η μέθοδος προσδιορισμού ιστοκαλλιέργεια ανταπόκριση των ναρκωτικών (HDRA), και σταγονιδίου τζελ κολλαγόνου ενσωματωμένο περιβάλλον τεστ ευαισθησίας των ναρκωτικών (CD-DST). Είναι ενδιαφέρον ότι η χημειοθεραπεία προκειμένου-καμαριέρας με αντικαρκινικά φάρμακα, τα οποία είχαν προβλεφθεί ως αποτελεσματικά, στην πραγματικότητα εμφάνισαν υψηλότερη κλινικές ανταποκρίσεις από τη συμβατική χημειοθεραπεία έκανε [10-12]. Επιπλέον, υπάρχει μια αναφορά που υποδηλώνει ότι η δοκιμή ευαισθησίας in vitro του φαρμάκου μπορεί να είναι χρήσιμη στην πρόβλεψη της επίδρασης επικουρική χημειοθεραπεία σε NSCLC. [13] Ωστόσο, δεν έχει υπάρξει καμία προηγούμενη έκθεση σχετικά με την κλινική εφαρμογή των δοκιμών in vitro ευαισθησία φαρμάκου για την πρόβλεψη των πιθανών επιπτώσεων της EGFR-TKIs ή

ALK

αναστολέων σε χειρουργικά δείγματα καρκινικού ιστού φρέσκα πνεύμονα. Ο σκοπός της παρούσας μελέτης ήταν να αναπτυχθεί μια in vitro καλλιέργεια με βάση δοκιμή ευαισθησίας φαρμάκου για την πρόβλεψη της ευαισθησίας του χειρουργικά καρκίνου του πνεύμονα σε πολλαπλά φάρμακα μοριακό στόχο.

Υλικά και Μέθοδοι

A. Επαλήθευση της ανασταλτικής επίδρασης των μοριακών φαρμάκων στόχου σε πνεύμονα καρκίνο κυτταρική σειρά

Οι βέλτιστες δόσεις της erlotinib και crizotinib (Funakoshi Co. Ltd, Tokyo, Japan) που χρησιμοποιούνται τόσο στο 3- (4,5-διμεθυλθειαζολ-2 -υλ) -5- (3-καρβοξυμεθοξυφαινυλ) -2- (4-σουλφοφαινυλ) -2Η-τετραζόλιο (MTS) δοκιμασίας και CD-DST τιτλοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας τα ακόλουθα αθανατοποιημένων κυτταρικών γραμμών καρκίνου πνεύμονα ανθρώπου: HCC827 (αδενοκαρκίνωμα, EGFR μετάλλαξη σε Exon19, Ε746-A750 διαγραφή), H1975 (αδενοκαρκίνωμα, μετάλλαξη του EGFR, εξόνιο 21 L858R + Τ790Μ), H3122 (αδενοκαρκίνωμα,

EML4-ALK

γονίδιο σύντηξης), Α549 (αδενοκαρκίνωμα), και Η460 (μεγάλο καρκίνωμα ). Α549, Η460, HCC827 και H1975 ελήφθησαν από την American Type Culture Collection (Manassas, Virginia USA). H3122 παρασχέθηκε ευγενώς από τον Dr. Pasi Α Janne του Harvard Medical School (Boston, MA, USA).

Α- (1) MTS δοκιμασία σε ανθρώπινες κυτταρικές σειρές καρκίνου του πνεύμονα.

Η καρκινικά κύτταρα μεταφέρθηκαν σε 96-φρεατίων πλάκες καλλιέργειας επίπεδου πυθμένα σε πυκνότητα 4,0 × 10

4 έως 6,0 × 10

4 κύτταρα /φρεάτιο με αυξανόμενες συγκεντρώσεις της erlotinib (0.002, 0.02, 0.2, 2.0, και 20 μΜ) και crizotinib (0,006, 0,06, 0,6, και 3 μΜ), και επωάστηκαν στους 37 ° C για 72 ώρες εκτέθηκαν σε 5% CO

2. Μετά την προσθήκη 20 μΐ κυτταρικού τίτλο (Promega Corporation, Madison, WI, USA) στο μέσο καλλιέργειας, τα καρκινικά κύτταρα επωάστηκαν για 90 λεπτά και η απορρόφηση μετρήθηκε στα 490 nm.

Α- (2) ανάλυση ανοσοστυπώματος.

ανάλυση ανοσοστυπώματος πραγματοποιήθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [14, 15] τα κύτταρα πλύθηκαν με PBS, συλλέχθηκαν και υπέστησαν λύση σε ρυθμιστικό RIPA (Nacalai Tesque inc., Kyoto, Japan) με φωσφατάση κοκτέιλ αναστολέα (Nacalai Tesque inc., Κιότο, Ιαπωνία). Για ανάλυση στυπώματος Western, 30μg από ολικά εκχυλίσματα αιωρήθηκαν σε 20 μΐ Ρυθμιστικού Διαλύματος Δείγματος Λύση με 2-ΜΕ για SDS-PAGE (Nacalai Tesque inc., Kyoto, Japan), υποβλήθηκαν ηλεκτροφορητικά διαχωρίστηκαν σε πηκτές πολυακρυλαμιδίου μετουσίωσης, transferd σε νιτροκυτταρίνη. Οι μεμβράνες αποκλείστηκαν με Blocking Μία ή Blocking One-P (Nacalai Tesque inc., Kyoto, Japan), και ανιχνεύθηκαν με μονοκλωνικά αντισώματα κουνελιού προς φωσφορυλιωμένο ανθρώπινο ALK (Y1604), προς το ALK, τον υποδοχέα φωσφορυλιωμένη EGF (Y1068), και να ο υποδοχέας EGF (Cell Signaling Technology, Beverly, ΜΑ, USA). Στη συνέχεια, οι μεμβράνες επωάστηκαν σε δευτερογενές αντίσωμα αντι-κουνελιού (Santa Cruz Biotechnology, Dallas, Texas, USA). Κάθε ζώνη σαρώθηκε από LAS -4000.mini (FUJIFILM, Tokyo, Japan).

Α- (3) CD-DST σε ανθρώπινες κυτταρικές σειρές καρκίνου του πνεύμονα.

Το CD-DST ήταν εκτελείται σύμφωνα με μια προηγουμένως αναφερθείσα μέθοδο [16]. Εν συντομία, οι κυτταρικές σειρές καρκίνου υποβλήθηκαν σε θεραπεία με ένα διάλυμα ενζύμου διασπορά κυττάρων (ΕΖ, Nitta Gelatin Inc., Osaka, Japan) για 2 ώρες. Στη συνέχεια, μόνο τα βιώσιμα κύτταρα που προσκολλήθηκαν στην πηκτή κολλαγόνου συλλέχθηκαν και εναιωρήθηκαν σε διάλυμα Ι κολλαγόνου ανακατασκευασμένη τύπου (Cellmatrix Τύπος CD, Nitta Gelatin Inc., Osaka, Japan) σε μια τελική πυκνότητα 1 × 10

5 κύτταρα /mL. Τρεις σταγόνες του μείγματος κολλαγόνου-κυττάρων (30 μL /σταγόνα) τοποθετήθηκαν σε κάθε φρεάτιο ενός πολλαπλών δίσκων 6 φρεατίων σε έναν δίσκο 60-mm, και αφέθηκε να πήξει στους 37 ° C σε επωαστήρα CO2 για 1 ώρα. Η τελική συγκέντρωση ήταν περίπου 3 × 10 σταγονίδιο γέλης

3 κύτταρα /κολλαγόνου. Το μέσο καλλιέργειας επιστρώθηκε σε κάθε φρεάτιο και η πλάκα επωάστηκε σε CO

2 επωαστήρα στους 37 ° C όλη τη νύκτα. Τρεις σταγονίδια κολλαγόνου τοποθετείται στο κάτω μέρος των πλακών 6 φρεατίων να επιτρέψει την καλλιέργεια σε ένα τρισδιάστατο (3-D) περιβάλλον, και επωάστηκαν για 7 ημέρες σε μέσο χωρίς ορό με την παρουσία των ίδιων περιοχές συγκέντρωσης της erlotinib και crizotinib που χρησιμοποιείται στη δοκιμασία MTS. Στη συνέχεια, τα κύτταρα μονιμοποιήθηκαν με 10% ρυθμισμένη φορμαλίνη-(Nacalai Tesque inc., Kyoto, Japan), και χρωματίστηκαν με ουδέτερο ερυθρό (Kurabo, Osaka, Japan). Εικόνες των σταθερών κυττάρων συλλήφθηκαν με τη χρήση μικροσκοπίου φωτογραφίας. Οι εικόνες συμπεριλαμβανομένων τόσο των καρκινικών κυττάρων (βαθιά χρωματισμένο) και ινοβλαστών (ελαφρώς βάφονται) βάφτηκαν με ουδέτερο ερυθρό αποκτήθηκαν, επιλέχθηκαν ινοβλάστες και αποβάλλεται ως ένστολο ατράκτου κύτταρα με μικρού μεγέθους πυρήνες, τότε ο αριθμός των βιώσιμων καρκινικών κυττάρων ποσοστώθηκε χρησιμοποιώντας ειδικό λογισμικό (Primege, έκδοση 1.01, Nitta Gelatin Inc., Osaka, Ιαπωνία) [17, 18]. Η βιωσιμότητα των κυττάρων erlotinib ή crizotinib αγωγή συγκρίθηκε με εκείνη των μη επεξεργασμένων κυττάρων ελέγχου.

Β. Κλινική μελέτη χρησιμοποιώντας χειρουργικά δείγματα ιστών φρέσκα καρκίνο του πνεύμονα

Αυτή η μελέτη εγκρίθηκε από την επιτροπή δεοντολογίας του Κότσι Ιατρική Σχολή Νοσοκομείο (Ηθική κριτική Αριθμός έγκρισης: ERB-100866), και διεξήχθη από Ιούνιος 2013 – Αύγουστος 2014 . Τα όλοι οι συμμετέχοντες παρέχεται έγγραφη συγκατάθεση τους να συμμετάσχουν σε αυτή τη μελέτη, σύμφωνα με τη διαδικασία συναίνεσης. Τριάντα-πέντε ασθενείς με χειρουργικά χειρουργήσιμο ΜΜΚΠ (SDI και CD-DST, n = 23 και 12, αντίστοιχα) συμμετείχαν στην κλινική μελέτη. Μετά τη χειρουργική εκτομή, ένα μέρος των δειγμάτων νωπών καρκινικού ιστού, ελέγχονται των καρκινικών κυττάρων με επίχρισμα αφής κυτταρολογία, ελήφθησαν για τις in vitro δοκιμές ευαισθησίας φαρμάκου όπως περιγράφεται στα ακόλουθα τμήματα.

Β- (1) SDI πρόβλεψη η ευαισθησία στην erlotinib δείγματος κλινική καρκίνο του πνεύμονα ιστού.

το SDI είναι το πρωτόκολλο με βάση δοκιμασία MTS για χύδην φρέσκο ​​δείγμα ιστού συμπεριλαμβανομένων τόσο τα καρκινικά κύτταρα και μη καρκινικά κύτταρα [19, 20]. Εν συντομία, τα φρέσκα χειρουργικά δείγματα (10 χιλιοστόλιτρο κύβους: 1 ml) και αλεσμένα σε μια κόλλα, σε επεξεργασία με ένα ένζυμο διασπορά κύτταρο στους 37 ° C για 2-3 ώρες, φυγοκεντρήθηκαν, και στη συνέχεια το υπερκείμενο απομακρύνθηκε. Βιώσιμα καρκινικά κύτταρα πνεύμονα στη συνέχεια μεταφέρθηκαν σε πλάκες 96 φρεατίων σε πυκνότητα 1,0 × 10

6 κύτταρα /φρεάτιο και επωάστηκαν σε μέσο Eagle τροποποιημένο κατά Dulbecco (DMEM) που περιέχει εμβρυϊκό βόειο ορό (FBS) στους 37 ° C με 5% CO

2 για 72 ώρες. Τα κύτταρα εκτέθηκαν στην ίδια περιοχή συγκέντρωσης της erlotinib που χρησιμοποιείται στη δοκιμασία MTS. Στη συνέχεια, 20 μΙ κυτταρικού τίτλου προστέθηκαν σε κάθε φρεάτιο, και οι δίσκοι επωάστηκαν για 150 λεπτά που ακολουθείται από μέτρηση της απορρόφησης στα 490 nm για να προσδιοριστεί ποσοτικά η βιωσιμότητα των κυττάρων.

Β- (2) CD-DST πρόβλεψη της ευαισθησίας στην erlotinib δείγματος ιστού κλινική καρκίνο του πνεύμονα

Φρέσκα δείγματα ιστών (3 χιλιοστόλιτρο κύβους: 27 μΐ). που λαμβάνεται από το χειρουργικά ιστό του καρκίνου του πνεύμονα ήταν κιμά λεπτά χρησιμοποιώντας ένα νυστέρι και χωνεύεται σε ένα ένζυμο διασπορά των κυττάρων διάλυμα (ΕΖ, Nitta Gelatin Inc., Osaka, Japan) για 2 ώρες. Τα διεσπαρμένα κύτταρα πλύθηκαν δύο φορές, συλλέγονται με φυγοκέντρηση στα 2400 rpm για 3 λεπτά, διηθήθηκε μέσω ενός νάιλον 80 μm mesh για να ληφθεί περισσότερο από 1,0 × 10

5 κύτταρα, τα οποία επωάστηκαν σε επικαλυμμένα φιάλη γέλη κολλαγόνου (CG- φιάλη, Nitta Gelatin Inc., Osaka, Japan) σε μια CO

2 επωαστήρα στους 37 ° C για 24 ώρες. Τα ανακτηθέντα κύτταρα κατόπιν περικλείονται σε ένα σταγονίδιο κολλαγόνου για να καλλιεργηθούν σε ένα 3D περιβάλλον. Βιώσιμα καρκίνου του πνεύμονα κύτταρα στη συνέχεια επωάστηκαν με 0.2 μΜ της erlotinib (βέλτιστη δόση προσδιορίστηκε σε Α- (2)) για 7 ημέρες. Μέσα καλλιέργειας παρασκευασμένα (PCM) 2 χρησιμοποιήθηκε το τυπικό πρωτόκολλο για CD-θερινής ώρας. Ωστόσο, σημαντικά ευρήματα δεν ελήφθησαν χρησιμοποιώντας την προηγούμενη μέθοδο δοκιμής [21] και, ως εκ τούτου, pCM4 (Kurabo, Oosaka, Japan), ένα μέσο αυξητικό παράγοντα μειωμένη καλλιέργεια χρησιμοποιήθηκε στην παρούσα μελέτη.

Β- (3)

EGFR

ανάλυση γονιδιακής μετάλλαξης.

Θα προβληθεί για μετάλλαξη του EGFR χρησιμοποιώντας το πεπτίδιο μέθοδο νουκλεϊκών αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης οξύ-κλειδωμένη νουκλεϊκών οξέων (PNA-LNA PCR) σφιγκτήρα [22, 23] . Η λεπτομερής κατάσταση μετάλλαξης του γονιδίου του κάθε δείγματος επιβεβαιώθηκε με τη μέθοδο της άμεσης αλληλούχισης. μεταλλάξεις του EGFR στο εκχυλισμένο DNA εξετάστηκαν χρησιμοποιώντας την άμεση αλληλούχιση με βάση την PCR για εξώνια 19 και 21. Ο προσδιορισμός αλληλουχίας διεξήχθη με τη χρήση της χρωστικής τερματισμού μέθοδο προσδιορισμού αλληλουχίας κύκλου Applied Biosystems PRISM (Perkin-Elmer Corp., Foster City, CA, USA) με ένα ΑΒΙ PRISM 3100 Genetic Analyzer (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA).

C. Στατιστική ανάλυση

περιέγραψε την καμπύλη δόσης-απόκρισης των μοριακών φαρμάκων στόχευσης για κυτταρικές σειρές καρκίνου του πνεύμονα. Η συσχέτιση μεταξύ των σωματικών γονιδιακών μεταλλάξεων του

EGFR

στα καρκινικά κύτταρα και την ευαισθησία των ναρκωτικών στην erlotinib συγκρίθηκαν. Οι ασθενείς χωρίστηκαν σε δύο ομάδες: άγριου τύπου και μεταλλαγμένων ομάδες EGFR. Τα αποτελέσματα της δοκιμής ευαισθησίας φαρμάκου και των δύο ομάδων ήταν στατιστικά συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας U-test της Mann-Whitney. Εμείς refered με στατιστικά σημαντική η P & lt? 0,05. Η ιδανική τιμή αποκοπής της βιωσιμότητας των κυττάρων που ορίζεται για την πρόβλεψη των καρκινικών κυττάρων ως ευαίσθητα σε elrotinib προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας ένα χαρακτηριστικό λειτουργίας λήπτη (ROC) καμπύλη. Δόσης-απόκρισης και τις καμπύλες ROC κατασκευάστηκαν χρησιμοποιώντας το GraphPad Prism έκδοση 6.0 για Windows (GraphPad Software, San Diego, CA, USA).

Αποτελέσματα

Α. Ανασταλτικό αποτέλεσμα των μοριακών φαρμάκων στόχων σε πνεύμονα καρκινική κυτταρική γραμμή

Α- (1) Δοκιμασία MTS σε κυτταρικές σειρές καρκίνου του πνεύμονα.

Η βιωσιμότητα των καρκίνου του πνεύμονα κυτταρικές γραμμές μετά από έκθεση σε 2,0 μΜ erlotinib για 3 ημέρες ήταν 98.9 ± 9.3, 99.4 ± 10.7, 85.7 ± 10.7, και 31.9 ± 1.6 (%) για Η460, Α549, H1975, και HCC827, αντίστοιχα. Η ανάπτυξη του HCC827 (με

EGFR

μετάλλαξη, η ντελ E746_A750), αλλά όχι εκείνη των άλλων κυτταρικών σειρών χωρίς την μετάλλαξη ή με την

ου ανθεκτική μετάλλαξη (T790M) κυτταρική γραμμή 2 ανεστάλη σημαντικά μετά την έκθεση στην erlotinib (p = 0,030, σχ 1-α). Ομοίως, η βιωσιμότητα των κυτταρικών γραμμών μετά από έκθεση σε 0.60 μΜ crizotinib για 3 ημέρες ήταν 103,2 ± 5,67, 96,9 ± 8,05, και 35,8 ± 3,24% για Η460, Α549, και H3122, αντίστοιχα. H3122 (με

EML4-ALK

γονίδιο σύντηξης) εμφάνισαν σημαντική αναστολή της ανάπτυξης μετά από έκθεση σε crizotinib (Σχήμα 1-β)

(α) έκθεση στην erlotinib σε δοκιμασία MTS:. HCC827 (εξόνιο EGFR 19 διαγραφή) εμφάνισαν σημαντική αναστολή της ανάπτυξης, ενώ Α549 και Η460 (άγρια ​​EGFR) ή H1975 (EGFR αντίσταση Τ790Μ δεύτερη μετάλλαξη) δεν ήταν ευαίσθητα στην elrotinib. (Β) έκθεση σε crizotinib σε δοκιμασία MTS: H3122 (

EML4-ALK

σύντηξης) εμφάνισαν σημαντική αναστολή της ανάπτυξης, ενώ άλλα καρκινικά κύτταρα χωρίς ένα γονίδιο σύντηξης δεν ήταν ευαίσθητα στην crizotinib. (Γ) Έκφραση πρωτεΐνης EGFR και αναστολή της φωσφορυλίωσης με erlotinib σε κυτταρικές σειρές NSCLC σε ανάλυση κηλίδος Western: Η erlotinib ανέστειλε φωσφορυλίωση του EGFR (pEGFR) σε HCC827, αλλά δεν την αναστέλλει σε H1975. (Δ) Έκφραση του ALK και αναστολή της φωσφορυλίωσης με crizotinib σε κυτταρικές σειρές NSCLC σε ανάλυση κηλίδος Western: H3122 εκφράζεται ALK και crizotinib ανέστειλε φωσφορυλίωση των ALK (Palk). (Ε) Η έκθεση στην erlotinib σε CD-θερινής ώρας. (Στ) έκθεση σε crizotinib σε CD-θερινής ώρας. Σε σύγκριση με δοκιμασία MTS, CD-DST απαιτούνται χαμηλότερες δόσεις της erlotinib να παρουσιάζουν σημαντική διαφορά στην ανάπτυξη μεταξύ των κυτταρικών σειρών.

EGFR

, το γονίδιο του υποδοχέα του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα?

EML4-ALK

, εχινοδερμάτων 4-αναπλαστικού λεμφώματος γονίδιο της κινάσης πρωτεΐνης που μοιάζει με τους μικροσωληνίσκους που σχετίζονται.

Η

Α- (2) ανάλυση ανοσοαποτύπωσης.

Εξετάσαμε EGFR και έκφραση ΑΙΚ στα κύτταρα όγκου και το αποτέλεσμα της erlotinib και crizotinib επί της φωσφορυλίωσης του EGFR και ALK με κηλίδωση Western. Όλες οι κυτταρικές γραμμές εξέφρασαν EGFR. Η φωσφορυλίωση του EGFR κατεστάλη με erlotinib σε HCC827. Από την άλλη πλευρά, erlotinib δεν καταστέλλει την φωσφορυλίωση του EGFR σε H1975 κύτταρα (Σχ 1-c). κύτταρα H3122 εκφράζεται ALK, και η φωσφορυλίωση ALK καταστάλθηκε από crizotinib (Σχήμα 1-d).

Α- (3) CD-DST σε ανθρώπινες κυτταρικές σειρές καρκίνου του πνεύμονα.

Η κυτταρική βιωσιμότητα κάθε καρκίνου του πνεύμονα κυτταρική σειρά μετά από έκθεση σε 0,2 μΜ erlotinib για 7 ημέρες ήταν 87,1 ± 0,56, 72,2 ± 5,20, 55,8 ± 8,1, και 0,63 ± 0,19% για Η460, Α549, H1975, και HCC827 κυτταρικές γραμμές, αντίστοιχα (η = 3 το καθένα). HCC827 κυτταρική σειρά έδειξαν σημαντική αναστολή της ανάπτυξης μετά την έκθεση στην erlotinib (p = 0,028). Από την άλλη πλευρά, καμία επίδραση αναστολής αύξησης παρατηρήθηκε σε κυτταρικές σειρές EGFR φυσικού τύπου με την έκθεση σε 0,2 μΜ erlotinib (Σχήμα 1-e). Η βιωσιμότητα της κάθε καρκίνου του πνεύμονα κυτταρική σειρά μετά από έκθεση σε 0,6 μΜ crizotinib για 7 ημέρες ήταν 93,7 ± 3,13, 75,5 ± 7,43, και 20,1 ± 2,13% για Η460, Α549, και κυτταρικές σειρές H3122, αντίστοιχα (η = 3 κάθε φορά), και H3122 έδειξε σημαντική αναστολή της κυτταρικής ανάπτυξης μετά από έκθεση σε crizotinib (Σχήμα 1-f).

Β. Κλινική μελέτη

Συνολικά τριάντα πέντε (SDI: 23, CD-DST: 12) ασθενείς εντάχθηκαν σε αυτή τη μελέτη (Πίνακας 1). Τέσσερις από 24 περιπτώσεις (16,7%) στους άνδρες και επτά από 11 περιπτώσεις (63,6%) σε γυναίκες που εκφράζονται μετάλλαξη του EGFR. Με ιστολογική υπότυπο, 8 από 11 περιπτώσεις (72,7%) του θηλώδους αδενοκαρκίνωμα, 3 από 4 περιπτώσεις (75%) του BAC? βρογχοκυψελιδικών carcnoma εκφράζεται σε, και μία από τις 7 περιπτώσεις (14,3%) του αδενοκαρκινώματος αδενοκυψελών εξέφρασε μετάλλαξη του EGFR.

Η

Β- (1) SDI για κλινικό δείγμα.

Αξιολόγηση η επίδραση ανασταλτική ανάπτυξης της erlotinib με τη μέθοδο SDI αποκάλυψε ότι η βιωσιμότητα των καρκινικών κυττάρων μειώθηκε εξάρτηση από τη συγκέντρωση στο

EGFR

περιπτώσεις με θετικό στη μετάλλαξη αλλά σχεδόν στο

EGFR

-αρνητικοί περιπτώσεις ακόμη και σε υψηλές συγκέντρωση έως 20 mM (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα). Επιπλέον, μετά από έκθεση σε erlotinib 20 μΜ, η βιωσιμότητα του

EGFR

περιπτώσεις άγριου τύπου ήταν 86,3 ± 11,2%, ενώ αυτό των μεταλλάξεων ήταν σημαντικά χαμηλότερη σε 60,0 ± 9,8% (p = 0,0004, Σχήμα 2- α).

Διανομή χάρτη της βιωσιμότητας των κυττάρων αξιολογήθηκε σε χειρουργικά φρέσκο ​​ιστό καρκίνου του πνεύμονα με τη χρήση (α) SDI μετά από έκθεση σε 20 μΜ erlotinib, με μια υπόθεση χωρίς να

EGFR

μετάλλαξη καταστέλλεται από 20 μΜ erlotinib και (β) CD-DST μετά από έκθεση σε 0,2 μΜ της erlotinib. Η στατιστική σημαντικότητα παρατηρήθηκε στην βιωσιμότητα των κυττάρων μεταξύ των δύο ομάδων

EGFR

με θετικό στη μετάλλαξη και άγριου τύπου (p = 0,026).

Η

Β- (2) CD-DST για κλινικό δείγμα.

Μετά την έκθεση σε 0,2 μΜ erlotinib, η βιωσιμότητα των

EGFR

μεταλλάξεις και άγριου τύπων ήταν 33,5 ± 21,2 και 79,0 ± 18,6%, αντίστοιχα, και υπάρχει μια σημαντική διαφορά στο κελί βιωσιμότητας (ρ = 0,026, σχ 2-b). Τα αντιπροσωπευτικά αποτελέσματα CD-DST και των δύο

EGFR

τα μεταλλαγμένα και τα άγρια ​​περιπτώσεις τύπου που απεικονίζεται στο σχήμα 3. Τα δεδομένα της κατάστασης μετάλλαξης του EGFR και η κυτταρική βιωσιμότητα της κάθε κλινικής ασθενείς φαίνεται στον Πίνακα S1.

αποτελέσματα CD-DST δύο αντιπροσωπευτικές περιπτώσεις, με τα καρκινικά κύτταρα σε κάθε σταγονίδιο που καλλιεργήθηκαν με ή χωρίς 0,2 μΜ erlotinib για 7 ημέρες. Επάνω σειρά δείχνει φωτογραφίες των σταγονιδίων τζελ κολλαγόνου που περιέχουν καρκινικά κύτταρα, μεσαία γραμμή δείχνει σταγονίδια σαρώνονται χρησιμοποιώντας ειδικό σύστημα σάρωσης εικόνας και κάτω σειρά δείχνει σταγονίδια με εξαλειφθούν ινοβλάστες χρωματίζονται ασθενέστερη από ό, τι το σημείο αποκοπής. Θήκη με εξόνιο 19 del στο

EGFR

(αριστερά δύο στήλες) δείχνει τον αριθμό των καρκινικών κυττάρων μειώθηκαν στο 32,0% των μη επεξεργασμένων ελέγχου όταν εκτίθενται σε 0,2 μΜ erlotinib. Ασθενής με

EGFR

περίπτωση άγριου τύπου (δεξιά δύο στήλες) έδειξε% αύξηση 88,4 σε σύγκριση με τον έλεγχο.

Η

Η καμπύλη ROC κατασκευάστηκε για να προσδιοριστεί η τιμή αποκοπής για την πρόβλεψη η παρουσία του

EGFR

μεταλλάξεις από τον ρυθμό αναστολής της ανάπτυξης των δοκιμών in vitro ευαισθησία φαρμάκου [24]. Στη δοκιμή SDI, η περιοχή κάτω από την καμπύλη (AUC) για τη βιωσιμότητα των κυττάρων ήταν 0.958 (Εικόνα 4-α). Η αναλογία έδειξε τον καλύτερο συνδυασμό ευαισθησία και ειδικότητα για την πρόβλεψη της ευαισθησίας φαρμάκου σε τιμές & gt? 72,7% (93,3 και 100% ευαισθησία και ειδικότητα, αντίστοιχα). Στο CD-DST, η καμπύλη ROC έδειξε ότι η AUC ήταν 0.963 για την κυτταρική βιωσιμότητα (Σχήμα 4-Β), ενώ το καλύτερο συνδυασμό ευαισθησία και ειδικότητα για την πρόβλεψη της ευαισθησίας φαρμάκου ήταν κατά 55,9% (88,9 και 100% ευαισθησία και ειδικότητα, αντίστοιχα ).

(α) ROC καμπύλες για τη βιωσιμότητα των κυττάρων αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας SDI στην πρόβλεψη

EFGR

μετάλλαξη δείχνει AUC του 0.958. (Β) ROC καμπύλες για τη βιωσιμότητα των κυττάρων αξιολογήθηκε με τη χρήση κολλαγόνου σταγονίδιο γέλης ενσωματωμένα πολιτισμό τεστ ευαισθησίας των ναρκωτικών (CD-DST) στην πρόβλεψη

EGFR

μετάλλαξη. AUC ήταν 0.963.

Η

Προοπτικά, δύο ασθενείς με μετάλλαξη του EGFR πήρε υποτροπή της νόσου μετά την τρέχουσα μελέτη. Οι κυτταρικές βιωσιμότητες των καρκινικών κυττάρων που προέρχονται από αυτούς τους ασθενείς ήταν 55.6% και 31.4% με την έκθεση των erlotinib σε CD-θερινής ώρας. Η erlotinib παρουσίασαν τις εξαιρετικές κλινικές ανταποκρίσεις για αυτούς τους ασθενείς. Ο ένας ασθενής είχε τις διευρυμένη μεταστατικούς λεμφαδένες. Μετά από 8 μήνες θεραπείας erlotinib, το μεταστατικό λεμφαδένα συρρικνώθηκε από 10,5 mm έως 3,2 χιλιοστών και SUV (τυποποιημένο αξίας πρόσληψης) του 18F-FDG (18F-φθοροδεοξυγλυκόζης) μειώνονται 4,44 έως 0,69. Το αποτέλεσμα κρίθηκε ως CR (πλήρης απόκριση) ακτινολογικά (Σχήμα 5-α). Ο άλλος ασθενής είχε την υπεζωκοτική διάδοσης με την ανύψωση του CEA (καρκινοεμβρυϊκό αντιγόνο)? μία από τις ορολογικές καρκινικών δεικτών του καρκίνου του πνεύμονα. Ως αποτέλεσμα της θεραπείας erlotinib, η στάθμη του CEA μειωθεί από 146,0 να 25,6 (ng /ml) (Σχήμα 5-β). Η επίδραση των μοριακών φάρμακα που στοχεύουν σε ασθενείς με θετική ευαισθησία σε in-vitro δοκιμές drugsensitivity και αρνητικό γονίδιο alterlation είναι να αποκαλυφθεί.

(α) Περίπτωση # 1 είχε εκτεθεί 55,6% της κυτταρικής ανάπτυξης του καρκίνου με την έκθεση στην erlotinib σε CD-θερινής ώρας. Ο καρκίνος εξαπλωθεί στο medianstinal λεμφαδένα (κίτρινα βέλη). Μετά τη θεραπεία erlotinib, η μεσοθωρακίου λεμφαδένων συρρικνώθηκε από 10,5 mm έως 3,2 χιλιοστά σε μέγεθος, και SUV της FDG μειώθηκε 4,4 έως 0,69. (Β) Περίπτωση # 2 είχαν εκτεθεί 31,4% της κυτταρικής ανάπτυξης του καρκίνου με την έκθεση στην erlotinib σε CD-DST, ο ασθενής προκάλεσε το υπεζωκότα διάδοσης με το υψηλό επίπεδο του CEA. θεραπεία Η erlotinib είχε ως αποτέλεσμα τη μείωση του CEA από 146,0 να 25,6 (ng /ml). 18F-FDG: 18F-φθοροδεοξυγλυκόζης. PET: positoron τομογραφία εκπομπής. SUV: τυποποιημένη τιμή πρόσληψη. CEA:. Carciono-emboryonic αντιγόνο

Η

Συζήτηση

Στην παρούσα μελέτη, επιβεβαίωσε κατ ‘αρχάς ότι η erlotinib και crizotinib παρουσίασαν δοσοεξαρτώμενη αναστολή της ανάπτυξης των καλλιεργημένων κυττάρων καρκίνου του πνεύμονα. Η ανασταλτική δράση της erlotinib ήταν ισχυρότερη στον καρκίνο του πνεύμονα κυτταρικές γραμμές με

EGFR

μετάλλαξη ό, τι ήταν σε αυτούς χωρίς την μετάλλαξη. Ομοίως, crizotinib έδειξαν ισχυρότερη αναστολή του καρκίνου του πνεύμονα κυτταρικών σειρών με ένα επαναλαμβανόμενο γονίδιο σύντηξης μεταξύ

EML4

και

ALK

από ό, τι σε εκείνους που δεν έχουν το γονίδιο σύντηξης. Δεύτερον, αποδείξαμε ότι η ανασταλτική της ανάπτυξης δράση της erlotinib αξιολογούνται είτε από τον SDI ή CD-DST συσχετίστηκε σημαντικά με το

EGFR

κατάσταση μετάλλαξης στην κλινική μελέτη χρησιμοποιώντας τα χειρουργικά δείγματα καρκινικού ιστού των πνευμόνων. Κυτταρικής καλλιέργειας που βασίζεται σε in vitro δοκιμασίες ευαισθησίας φάρμακο μπορεί να είναι σε θέση να προβλέψει την ευαισθησία των καρκινικών κυττάρων σε διάφορα φάρμακα μοριακό στόχο υπό ανάπτυξη για μελλοντική κλινική εφαρμογή.

SDI εκτελείται σε κλινικά δείγματα έδειξαν αναστολή της ανάπτυξης σε ασθενείς με

EGFR

μετάλλαξη. Ωστόσο, SDI απαιτούνται υψηλότερες συγκεντρώσεις της erlotinib για την αναστολή του κυτταρικού πολλαπλασιασμού από λαμβάνονται συνήθως στο αίμα μετά τη χορήγηση του προτύπου του στόματος δόσεις [25]. Επιπλέον, η SDI απαιτούνται περισσότερες από έξι σειρές των 1,0 × 10

6 κύτταρα, ενώ το CD-DST απαιτείται λιγότερο από 1,0 × 10

5 κύτταρα για την εκτέλεση των εξετάσεων. Με λιγότερο ποσό της απαίτησης ιστού, CD-DST ελάχιστα επηρεάζει την παθολογική εξέταση.

Στο CD-DST, ερλοτινίμπη έδειξε επίδραση αναστολής της ανάπτυξης με μικρότερη συγκέντρωση από εκείνη της δοκιμασίας MTS. κυτταρική ανάπτυξη HCC827 κατεστάλη σχεδόν εξ ολοκλήρου από την έκθεση σε 0.01 μΜ erlotinib, ενώ εκείνη της Η460, Α549 και κύτταρα H1975 ήταν ελαφρώς καταστέλλεται μετά από έκθεση σε 0,2 μΜ, μετά το οποίο η αυξημένη συγκέντρωση-εξαρτώμενο τρόπο. Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι οι CD-DST ανιχνεύεται η διαφορά στις ανασταλτικά αποτελέσματα ανάπτυξης σε όλες τις περιπτώσεις σε συγκέντρωση erlotinib τόσο χαμηλά όσο 0.2 μΜ, η οποία είναι χαμηλότερη από τις συγκεντρώσεις στον ορό των ασθενών που χορηγούνται τακτικά 150 mg erlotinib ημερησίως [25].

ένα αμφισβητούμενο αποτέλεσμα αναφέρθηκε 0,35 μΜ gefitinib απέτυχε να αναστείλει την ανάπτυξη του όγκου σε ασθενείς που είναι θετικοί στη μετάλλαξη σε μια προηγούμενη μελέτη που διερεύνησε τη συσχέτιση του

EGFR

μετάλλαξη και ευαισθησία φαρμάκου χρησιμοποιώντας το CD- DST [21]. Η μελέτη μας χρησιμοποιήθηκε το μέσο καλλιέργειας pCM4 ελεύθερο ορού με μειωμένη αυξητικούς παράγοντες, αντί του συμβατικού PCM2, αυτό ίσως και ο λόγος αποτέλεσμα έκθεμα EGFR συσχέτιση μετάλλαξη μας με την ευαισθησία τους με επιτυχία. Όμως, η σύνθεση του pCM4 δεν απελευθερώνεται εξαιτίας των προστατευόμενων ευρεσιτεχνίας.

Η δοκιμασία ιστοκαλλιέργειας απόκριση φαρμάκου (HDRA), είναι ένα άλλο τεστ ευαισθησίας φαρμάκου που χρησιμοποιεί μια τρισδιάστατη πηκτή κολλαγόνου, και η καμπύλη δόσης-απόκρισης του gefitinib για ο καρκίνος του πνεύμονα έχει αναφερθεί χρησιμοποιώντας αυτή τη μέθοδο. Ωστόσο, η έρευνα δεν περιλαμβάνει τη συσχέτιση του

EGFR

μετάλλαξη και τα αποτελέσματα της gefitinib [26].

Στο μέλλον, οι νέες μοριακές ανωμαλίες μπορεί να γίνει εμφανής σε συνδυασμό με την αναμενόμενη ανάπτυξη των σχετικών μοριακών στοχευμένες φάρμακα για τη θεραπεία τους. Ως εκ τούτου, υπάρχει επείγουσα ανάγκη για την ανάπτυξη μεθόδων οι οποίες μπορούν ταυτόχρονα να προβλέψει τις κλινικές αποκρίσεις του κάθε φάρμακο που στοχεύει μοριακό σε λογικό κόστος. Οι πρόσφατες εξελίξεις στις τεχνικές γενετικής αναζήτηση επέτρεψαν την υποβολή των ολοκληρωμένων συστημάτων έκφρασης προφίλ γονιδιακής [27, 28]. Ωστόσο, τα συστήματα αυτά εξακολουθούν να είναι σπάνιες. Επιπλέον, για την πρόβλεψη της ευαισθησίας σε αναστολείς ALK,

EML4-ALK

πρέπει να ανιχνεύεται με FISH ή IHC αντί ανάλυση γονιδιακή μετάλλαξη [29, 30]. Είναι περίπλοκο να εκτελέσει τα διάφορα είδη του προσυμπτωματικού ελέγχου που απαιτούνται για την ανίχνευση του γονιδίου αλλαγές. Κυτταρικής καλλιέργειας που βασίζεται σε in-vitro δοκιμασίες ανάπτυξης έχει πλεονέκτημα επειδή εξετάζει τα ναρκωτικά σε ταυτόχρονα. Το CD-DST ιδιαίτερα, έχει το πλεονέκτημα ότι είναι ελαχιστοποίηση του όγκου του καρκινικού ιστού (3 χιλιοστά κύβο) στην αξιολόγηση των κλινικών δειγμάτων ιστού, σε σύγκριση με το SDI (10mm κύβους)

περιορισμούς Μελέτη:. Σε αυτό μελέτη, δείξαμε ότι η in vitro ευαισθησία φαρμάκου συσχετίστηκε σημαντικά στο

EGFR

κατάσταση μετάλλαξης. Ωστόσο, και τα δύο

EGFR

ανάλυση μετάλλαξης και δοκιμές in vitro ευαισθησία των ναρκωτικών είναι οι πιθανοί παράγοντες πρόβλεψης της κλινικής απαντήσεων στη θεραπεία του EGFR ΤΚΙ. Ως εκ τούτου, η ισχύς των παραγόντων πρόβλεψης θα πρέπει τελικά να αξιολογηθεί από τη διερεύνηση συσχέτισή τους με κλινικές ανταποκρίσεις, η οποία απαιτεί διευκρίνιση σε μελλοντικές έρευνες πρόγνωση σχετίζονται.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Πίνακα S1. Χαρακτηριστικά των κλινικών ασθενών

doi:. 10.1371 /journal.pone.0152665.s001

(PDF)

Ευχαριστίες

Οι συγγραφείς εκφράζουν την ευγνωμοσύνη αναγνωρίζουν Καθ Kazuhiko Nakagawa του Τμήματος ιατρική Ογκολογία, Κίνκι Πανεπιστήμιο ιατρική Σχολή Osaka-Sayama, η Ιαπωνία και ο Δρ Isamu Okamoto του Ινστιτούτου Ερευνών για τις ασθένειες του θώρακα, Graduate School of Medical Sciences, Πανεπιστήμιο Kyushu, Φουκουόκα, Ιαπωνία για την ευγενική παροχή των κυτταρικών σειρών καρκίνου του πνεύμονα. Οι συγγραφείς αναγνωρίζουν επίσης τον κ Τακεχίρο Tatenuma, η κα Mai Taguchi, και η κα Yoko Asakura για τεχνική βοήθεια τους in vitro δοκιμές ευαισθησίας των ναρκωτικών.