Abstract

Η απορύθμιση της miR-137 παίζει ζωτικό ρόλο στην ογκογένεση και την εξέλιξη των διαφόρων τύπων καρκίνου, αλλά ο ρόλος της στην πρόγνωση των ασθενών με καρκίνο του στομάχου παραμένει άγνωστη. Αυτή η μελέτη σχεδιάστηκε για να διερευνήσει την έκφραση και την προγνωστική σημασία του miR-137 σε ασθενείς με καρκίνο του στομάχου μετά από ριζική γαστρεκτομή. Ποσοτική PCR πραγματικού χρόνου (qRT-PCR) διεξήχθη για να αξιολογηθεί η έκφραση του miR-137 σε ανθρώπινο γαστρικό καρκίνο κυτταρικές σειρές και ιστούς σε ασθενείς με αδενοκαρκίνωμα στομάχου. Τα αποτελέσματα αξιολογήθηκαν για σύνδεση με κλινικούς παράγοντες και τη συνολική επιβίωση χρησιμοποιώντας ανάλυση Kaplan-Meier. Προγνωστικές τιμές του miR-137 έκφρασης και κλινικά αποτελέσματα αξιολογήθηκαν με ανάλυση παλινδρόμησης Cox. Τα αποτελέσματα επέδειξαν ότι το επίπεδο έκφρασης της miR-137 μειώθηκε σε ανθρώπινο γαστρικό καρκίνο κυτταρικές σειρές και ιστούς, και ρυθμισμένα προς τα κάτω την έκφραση του miR-137 συνδέθηκε με τη διαφοροποίηση των κυττάρων του όγκου, Ν στάδιο, και το στάδιο ΤΝΜ. Μειωμένη έκφραση miR-137 στο γαστρικό καρκινικούς ιστούς συσχετίστηκε θετικά με κακή συνολική επιβίωση των ασθενών με καρκίνο του στομάχου. Περαιτέρω πολυπαραγοντική ανάλυση Cox παλινδρόμησης πρότεινε ότι η έκφραση του miR-137 ήταν ένα ανεξάρτητο προγνωστικό δείκτη για τον καρκίνο του στομάχου, εκτός από το στάδιο TNM. Εφαρμόζοντας την προγνωστική αξία της έκφρασης miR-137 στο στάδιο TNM ομάδα ΙΙΙ έδειξε μια καλύτερη διαστρωμάτωση του κινδύνου για τη συνολική επιβίωση. Συμπερασματικά, τα αποτελέσματα ενίσχυσε τον κρίσιμο ρόλο για την κάτω-ρυθμίζονται miR-137 έκφρασης σε καρκίνο του στομάχου και πρότεινε ότι η έκφραση miR-137 θα μπορούσε να είναι ένας προγνωστικός δείκτης για την ασθένεια αυτή. Επιπλέον, αυτοί οι ασθενείς με σταδίου ΙΙΙ TNM καρκίνο του στομάχου και χαμηλή έκφραση του miR-137, μπορεί να χρειαστεί περισσότερο επιθετική μετεγχειρητική θεραπεία και στενότερη παρακολούθηση

Παράθεση:. Gu Q, Zhang J, Χου Η Tan Ye, Shi S, Nian Υ (2015) Κλινική σημασία of Mir-137 έκφρασης σε ασθενείς με γαστρικό Καρκίνο μετά από ριζική γαστρεκτομή. PLoS ONE 10 (11): e0142377. doi: 10.1371 /journal.pone.0142377

Επιμέλεια: Hiromu Suzuki, Σαπόρο Ιατρικό Πανεπιστήμιο, ΙΑΠΩΝΙΑ

Ελήφθη: 14 του Αύγ, 2015? Αποδεκτές: 21η Οκτωβρίου του 2015? Δημοσιεύθηκε: 6 Νοεμβρίου του 2015

Copyright: © 2015 Gu et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του χαρτιού

χρηματοδότηση:.. Οι συγγραφείς δεν έχουν καμία υποστήριξη ή χρηματοδότηση για να αναφέρετε

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

η Κίνα είναι μία από τις χώρες με την υψηλότερη συχνότητα εμφάνισης καρκίνου του στομάχου και αντιπροσωπεύει πάνω από το 40% όλων των νέων κρουσμάτων παγκοσμίως [1,2]. Παρά την επιθετική θεραπεία, η πρόγνωση του προχωρημένου γαστρικού καρκίνου στην Κίνα τείνει να είναι μελαγχολική [3,4]. Προς το παρόν, όγκου-node-μετάσταση (TNM) σύστημα σταδιοποίησης της Ένωσης για θέματα Διεθνούς Ελέγχου του Καρκίνου /αμερικανική μεικτής επιτροπής για τον Καρκίνο (UICC /AJCC) είναι ο πιο σημαντικός προγνωστικός παράγοντας για καρκίνο του στομάχου [5]. Ωστόσο, επειδή υπάρχει ετερογένεια σε μοριακό επίπεδο του γαστρικού καρκίνου, είναι ανεπαρκής για να στηρίζονται μόνο στη σκηνή TNM να προβλέψουμε την πρόγνωση του γαστρικού καρκίνου [6]. Ως εκ τούτου, ο προσδιορισμός των μοριακών δεικτών που είναι προγνωστικά γαστρικού επιθετικότητα του καρκίνου και πρόγνωση του ασθενούς ως συμπληρωματική προς το στάδιο TNM έχει τη δυνατότητα να βελτιώσει την ικανότητα να θεραπεύουν τους ασθενείς και θα μπορούσε να προσφέρει κλινικά σχετική γνώσεις που έχουν σημασία στη διαχείριση της νόσου. Επιπλέον, η επιλογή των ασθενών που θα μπορούσαν να επωφεληθούν μεγαλύτερη από τη θεραπεία ακρίβεια θεωρείται ως η καλύτερη μέθοδος για να μειώσει τα ποσοστά της θνησιμότητας του καρκίνου του στομάχου, εκτός από τη χειρουργική επέμβαση.

Τα microRNAs (miRNAs) είναι μικρά ενδογενή 19-25 νουκλεοτίδια μη-κωδικοποιητική RNAs που ρυθμίζουν γονιδιακή έκφραση των υστέρων μεταγραφικά μέσω ζευγαρώματος βάσης με την 3′-αμετάφραστη περιοχή (3′-UTR) του αγγελιοφόρων RNA στόχου (mRNAs), ότι οδηγεί σε αποικοδόμηση mRNA ή αναστολή της μετάφρασης [7]. Σε πολλούς ανθρώπινους καρκίνους, miRNAs μπορούν να λειτουργήσουν ως ογκογονίδια ή γονίδια καταστολής όγκου για την καταστολή της μετάφρασης ή διεγείρει αποικοδόμηση του mRNA, ανάλογα με τη φύση των στόχων τους [8]. Προηγουμένως μελέτες έδειξαν ότι η έκφραση του miR-137 είναι ρυθμισμένα προς τα κάτω και θεωρούνται ως προγνωστικός δείκτης σε διάφορους τύπους καρκίνου, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του πνεύμονα [9], ορθοκολικό καρκίνο [10], τον καρκίνο των ωοθηκών [11], του πολλαπλού μυελώματος [12] , γαστρεντερικών στρωματικών όγκων [13], γλοιοβλάστωμα [14], και πλακώδες καρκίνωμα της κεφαλής και του τραχήλου [15]. Αποδείχθηκε πρόσφατα ότι η έκφραση miR-137 ήταν σημαντικά μειωμένη σε γαστρικό καρκινικούς ιστούς, και η καταστολή ήταν ταυτόχρονα με τη σοβαρότητα των παθολογικών αλλαγών, γεγονός που υποδηλώνει τη δυνατότητα ογκοκατασταλτικό ρόλος του miR-137 σε γαστρικό καρκίνο [16]. Ωστόσο, μια εκτενής ανάλυση της έκφρασης του miR-137 στο συσχετίζονται με την πρόγνωση των ασθενών με καρκίνο του στομάχου δεν έχει πραγματοποιηθεί και αναμένει περαιτέρω διευκρίνιση.

Ο κύριος στόχος αυτής της έρευνας είναι να αξιολογήσει τη σχέση μεταξύ της έκφρασης του miR 137 και τη συνολική επιβίωση των ασθενών με καρκίνο του στομάχου, σε μια προσπάθεια να προσδιορίσει την προγνωστική σημασία της έκφρασης miR-137. Τα αποτελέσματα αυτής της μελέτης επιδεικνύουν ότι το επίπεδο έκφρασης της miR-137 ήταν κάτω ρύθμιση σε γαστρικό καρκίνο κύτταρα και τους ιστούς, και miR-137 έκφραση ήταν ένα ανεξάρτητο προγνωστικό δείκτη για τον καρκίνο του στομάχου.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθική δήλωση

Αυτή η μελέτη αναθεωρήθηκε και εγκρίθηκε από το Διοικητικό συμβούλιο Institutional Review του δεύτερου Ενταγμένο Νοσοκομείο Xi’an Jiaotong Πανεπιστήμιο και το Ενταγμένο Νοσοκομείο του Πανεπιστημίου Yan’an (επαρχία Shanxi, Κίνα). Όλοι οι συμμετέχοντες στη μελέτη, ή νόμιμο κηδεμόνα τους, υπό την προϋπόθεση ότι ενημέρωσε γραπτή συγκατάθεση πριν από την εγγραφή στη μελέτη.

Κυτταρική καλλιέργεια

Απαθανάτισε φυσιολογικό ανθρώπινο γαστρικό επιθηλιακών κυττάρων γραμμή GES-1 και πέντε ανθρώπινες κυτταρικές γραμμές γαστρικού καρκίνου, συμπεριλαμβανομένων ΜΚΝ-45, SGC7901, BGC-823, MGC-803, και AGS, ελήφθησαν απευθείας από τη Σαγκάη κυττάρων Τράπεζα της κινεζικής Ακαδημίας Επιστημών (Σαγκάη, Κίνα). Όλα αυτά τα κύτταρα συνήθως αναπτύσσονται και διατηρούνται σε RPMI-1640 (Gibco) μέσο καλλιέργειας συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου μόσχου (Invitrogen) στους 37 ° C σε υγροποιημένη κύτταρο επωαστήρα με ατμόσφαιρα 5% CO

2.

Κλινικά δείγματα

Φρέσκα γαστρικό αδενοκαρκίνωμα ιστών και των παρακείμενων φυσιολογικών ιστών συλλέχθηκαν από δύο ανεξάρτητα σύνολα που περιλαμβάνουν 154 ασθενείς με αδενοκαρκίνωμα στομάχου. Όλοι οι ασθενείς που συμμετείχαν σε αυτή τη μελέτη ήταν υποβλήθηκαν σε ριζική γαστρεκτομή (R0 εκτομή σύμφωνα με την UICC /AJCC και D2 λεμφαδενεκτομή). Δείγματα του συνόλου εκπαίδευσης (n = 67), λήφθηκαν μεταξύ του Ιανουαρίου 2005 και Δεκεμβρίου 2009, από το Δεύτερο Ενταγμένο Νοσοκομείο Xi’an Jiaotong University (επαρχία Shanxi, Κίνα), και δείγματα του συνόλου επικύρωσης (n = 87) ελήφθησαν μεταξύ Ιανουαρίου 2008 και τον Δεκέμβριο του 2010, από το Ενταγμένο Νοσοκομείο του Πανεπιστημίου Yan’an (επαρχία Shanxi, Κίνα). Τα δείγματα καταψύχθηκαν σε υγρό άζωτο μέχρι τη χρήση. Τα δείγματα επανεκτιμηθεί από δύο παθολόγους ανεξάρτητα, και το στάδιο του καρκίνου του στομάχου ταξινομείται σύμφωνα με το σύστημα ΤΝΜ στάδιο της UICC /AJCC [5]. Οι ασθενείς αποκλείστηκαν εάν είχαν προηγουμένως εκτεθεί σε οποιαδήποτε στοχευμένη θεραπεία, ακτινοθεραπεία, χημειοθεραπεία, ή /και τη θεραπεία επέμβαση για καρκίνο του στομάχου.

qRT-PCR

Το συνολικό RNA που περιέχει miRNA εξήχθη από καλλιεργημένα κύτταρα ή ιστούς χρησιμοποιώντας miRNeasy Mini Kit (Qiagen). cDNA συντέθηκε χρησιμοποιώντας miScript Reverse Transcription Kit (Qiagen) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Αντίστροφη μεταγραφή πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας 50 ng ολικού RNA με έναν εκκινητή ειδικό για miR-137, μαζί με το κιτ της αντίστροφης μεταγραφής SYBR Green microRNA. miRNAs ποσοτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία SYBR Green miRNA qRT-PCR σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή (Applied Biosystems). Η αντίδραση qRT-PCR διεξήχθη σε 7500 Fast σύστημα πραγματικού χρόνου (Applied Biosystems). Όλοι οι ποσοτικοί RT-PCR διεξήχθησαν εις τριπλούν. Τα δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας μία αυτοματοποιημένη γραμμή βάσης. Ο κύκλος κατωφλίου (Ct) ορίστηκε ως ο αριθμός κλασματικών κύκλος στον οποίο ο φθορισμός υπερέβη το συγκεκριμένο όριο. Τα δεδομένα που λαμβάνονται από το qRT-PCR αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας τη μέθοδο ΔΔCt (2

ΔΔCt). Οι εκκινητές PCR που χρησιμοποιήθηκαν σύνολα εδώ για miR-137 σχεδιάστηκε ως ακολούθως: miR-137 προς τα εμπρός εκκινητής: 5′-GCGCGC TTATTGCTTAAGAATAC-3 ‘, και αντίστροφος εκκινητής: 5′-GTGCAGGGTCCGAGGT-3’. U6 χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικός έλεγχος και ενισχύθηκε με πρόσθιο εκκινητή: 5′-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3 ‘και αντίστροφος εκκινητής: 5′-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3’.

Η στατιστική ανάλυση

Η στατιστική ανάλυση ήταν πραγματοποιήθηκε με τη χρήση GraphPad Prism 5 (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA, USA) και SPSS 19.0 (SPSS, Chicago, IL, USA). Η συνολική επιβίωση ορίστηκε ως ο χρόνος μεταξύ της πρώτης ημέρας της διάγνωσης και την ημερομηνία του θανάτου σχετίζονται με τον καρκίνο ή την τελευταία επίσκεψη παρακολούθησης. χ Pearson ‘s

2 ή ακριβές τεστ του Fisher χρησιμοποιήθηκε για την ανάλυση της σχέσης μεταξύ miR-137 έκφρασης και κλινικοπαθολογοανατομικές παράγοντες. Αθροιστικά ποσοστά επιβίωσης υπολογίστηκαν με τη μέθοδο Kaplan-Meier και οι διαφορές μεταξύ των υποομάδων εξετάστηκαν με τη δοκιμασία log-rank. Αριθμοί σε κίνδυνο υπολογίστηκαν για την έναρξη της κάθε χρονικής περιόδου. Η προγνωστική αξία της έκφρασης miR-137 προσδιορίστηκε με μονοπαραγοντική και πολυπαραγοντική ανάλυση. Όλες οι τιμές P ήταν δύο όψεων, και η P & lt? 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική

Αποτελέσματα

Η ανάλυση έκφρασης του miR-137 σε ανθρώπινα γαστρικά καρκινικά κύτταρα

Για. να διαπιστωθεί το επίπεδο έκφρασης του miR-137 σε ανθρώπινα γαστρικά καρκινικά κύτταρα, πρέπει πρώτα αξιολογηθεί miR-137 έκφραση με qRT-PCR σε αθανατοποιημένα φυσιολογικό ανθρώπινο γαστρικού επιθηλίου κυτταρική σειρά πέντε ανθρώπινες κυτταρικές γραμμές γαστρικού καρκίνου, συμπεριλαμβανομένων των ΜΚΝ-45 GES-1 και, SGC7901, BGC-823, MGC-803, και AGS. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 1Α, τα ανθρώπινα γαστρικά καρκινικά κύτταρα εξέφρασαν σημαντικά χαμηλότερα επίπεδα miR-137 από GES-1. Συλλογικά, οι παρατηρήσεις αυτές υποδηλώνουν ότι η έκφραση miR-137 μειώνεται σε γαστρικά καρκινικά κύτταρα σε σύγκριση με την κανονική αθανατοποιημένες γαστρικού επιθηλιακού κυττάρου του ανθρώπου, και μειωμένη miR-137 έκφραση μπορεί να σχετίζεται με την ογκογένεση του καρκίνου του στομάχου.

(Α ) ανάλυση qRT-PCR για miR-137 επίπεδα έκφρασης σε φυσιολογικό ανθρώπινο αθανατοποιημένα γαστρικού επιθηλίου κυτταρική σειρά πέντε ανθρώπινες κυτταρικές γραμμές γαστρικού καρκίνου (ΜΚΝ-45, SGC7901, BGC-823, MGC-803, και AGS) GES-1 και. (Β-Γ) Το ποσοστό των ασθενών με χαμηλή έκφραση του miR-137 αυξήθηκε συνοδεύεται με την εξέλιξη της νόσου από το στάδιο TNM Ι έως III σε σύνολο (Β) Εκπαίδευση (n = 67) και (Γ) σύνολο επικύρωσης (n = 87). * P & lt?. 0.05

Η

Σύλλογοι μεταξύ miR-137 έκφρασης και κλινικοπαθολογική παράγοντες

Τα επίπεδα έκφρασης του miR-137 περαιτέρω μετρήθηκαν για να αναλύσει τη σχέση τους με κλινικοπαθολογική παράγοντες. Οι ασθενείς χωρίστηκαν σε υψηλές και χαμηλές ομάδα έκφρασης σύμφωνα με την αναλογία της κανονικής /διάμεση επίπεδα έκφρασης καρκινικού ιστού τους miR-137 σύμφωνα με τα αποτελέσματα της qRT-PCR (cut-off αναλογία = 1,5). Και σύμφωνα με το κριτήριο, περίπου 56,72% (σύνολο Εκπαίδευση, 38, 67) και 49.43% (Επικύρωση που, 43, 87), οι όγκοι βαθμολογήθηκαν ως χαμηλή έκφραση του miR-137. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 1, η έκφραση του miR-137 ήταν σημαντικά σχετίζεται με τη διαφοροποίηση των κυττάρων του όγκου (Ρ = 0.009 και Ρ = 0.002, αντίστοιχα), Ν στάδιο (Ρ = 0,019 και Ρ & lt? 0.001, αντίστοιχα), και το στάδιο ΤΝΜ (Ρ = 0.007 και Ρ = 0.007, αντίστοιχα) στις δύο ανεξάρτητα σύνολα. Επιπλέον, στο σύνολο εκπαίδευσης, miR-137 έκφρασης επίσης σημαντικά που σχετίζονται με το στάδιο T (P = 0,002). Εκτός αυτού, το ποσοστό των ασθενών με χαμηλή έκφραση miR-137 αυξήθηκε συνοδεύεται με εξέλιξη της νόσου από το στάδιο TNM Ι έως III στις δύο ανεξάρτητα σύνολα (Σχήμα 1Β και 1Γ).

Η

προγνωστική αξία της miR-137 έκφραση σε ασθενείς με καρκίνο του στομάχου

για την περαιτέρω διερεύνηση της προγνωστικής αξίας του miR-137 έκφρασης σε ασθενείς με καρκίνο του στομάχου, συγκρίναμε τη συνολική επιβίωση, σύμφωνα με miR-137 έκφρασης, και ανάλυση Kaplan-Meier επιβίωσης εκτελέστηκε. Όπως φαίνεται στο σχήμα 2, οι ασθενείς με χαμηλή έκφραση miR-137 έδειξαν σημαντικά μικρότερη συνολική επιβίωση από εκείνα τα υψηλά αυτά τα δύο ανεξάρτητα σύνολα (Ρ & lt? 0.001 και Ρ & lt? 0.001, αντίστοιχα), η οποία έδειξε ένα ζωτικό αντίκτυπο των miR-137 έκφρασης κλινική έκβαση σε ασθενείς με καρκίνο του στομάχου. Επιπλέον, αναλύει μονοπαραγοντική για τη συνολική επιβίωση σε αυτή τη μελέτη εκτίθενται ότι η χαμηλή έκφραση του miR-137 είναι μια σημαντική αρνητική προγνωστική προγνωστικός παράγοντας για τους ασθενείς με καρκίνο του στομάχου στο σύνολο εκπαίδευσης (Αναλογία κινδύνου [HR], 6,30? 95% CI, 2,17 έως 18,27? P = 0.001) και σύνολο επικύρωσης (HR, 3,74? 95% CI, 1,81 – 7,73? P & lt? 0.001). Εκτός αυτού, η διαφοροποίηση κυττάρου όγκου (Ρ = 0.023 και Ρ = 0.048, αντίστοιχα), το Τ στάδιο (Ρ = 0.002 και Ρ = 0.012, αντίστοιχα), Ν στάδιο (Ρ = 0.004 και Ρ = 0.001, αντίστοιχα), το στάδιο ΤΝΜ (Ρ & lt? 0.001 και Ρ & lt? 0.001, αντίστοιχα) όλοι επηρεάζεται επίσης σημαντικά την επιβίωση του γαστρικού καρκίνου (Πίνακας 2). Επιπλέον, Cox αναλύσεις πολυμεταβλητή παλινδρόμηση πραγματοποιήθηκαν για την εξαγωγή εκτιμήσεων ανεξάρτητο παράγοντα κινδύνου που σχετίζονται με τη συνολική επιβίωση. Όπως φαίνεται στον παρακάτω πίνακα 3, το στάδιο TNM και miR-137 έκφρασης τόσο αναγνωρίζονται ως ανεξάρτητες και σημαντικές προγνωστικές παραμέτρους των δύο ανεξάρτητων συνόλων (σετ Εκπαίδευση: στάδιο TNM: HR, 12.83? 95% CI, 3,48 έως 47,30? P & lt? 0.001? miR-137 έκφρασης: HR, 6,80? 95% CI, 2,06 έως 22,48? P = 0,002? Επικύρωση που: ΤΝΜ στάδιο: HR, 5,21? 95% CI, 2,04 έως 13,31? P = 0,001? miR-137 έκφρασης: HR, 2,41? 95% CI, 1.13 – 5.11?. Ρ = 0,023, αντίστοιχα)

Kaplan-Meier ανάλυση της συνολικής επιβίωσης, σύμφωνα με miR-137 έκφρασης σε (Α) σετ Κατάρτισης (n = 67) και (Β) σύνολο επικύρωσης (n = 87). τιμή P υπολογίστηκε με δοκιμασία log-rank.

Η

Η

Στρωματοποιημένη ανάλυση σχετικά με ΤΝΜ στάδιο

Για να προσδιορίσετε αν το miR-137, η έκφραση θα μπορούσε να διαστρωμάτωση των ασθενών με διαφορετικό στάδιο TNM στρώμα, κάναμε στρωματοποιημένη ανάλυση των ασθενών με γαστρικό καρκίνο με το στάδιο TNM I + II και το στάδιο TNM III και αξιολόγησε την προγνωστική αξία του miR-137 έκφρασης σε δύο ανεξάρτητα σύνολα αντίστοιχα. Όπως αναφέρονται στον Πίνακα 4, μόνο οι ασθενείς με γαστρικό καρκίνο με το στάδιο TNM ΙΙΙ θα μπορούσε να στρωματοποιημένη κατά την έκφραση του miR-137 σημαντικά την πρόγνωση του ΙΙΙ ασθενείς με γαστρικό καρκίνο σταδίου TNM με υψηλή έκφραση του miR-137 ήταν σημαντικά καλύτερα από εκείνους με χαμηλή miR-137 έκφραση στα δύο ανεξάρτητα σύνολα (σετ Εκπαίδευση: P = 0,006, Επικύρωση που: P = 0,016, αντίστοιχα? Σχήμα 3)

Η

Kaplan-Meier ανάλυση της συνολικής επιβίωσης, σύμφωνα με miR-137 έκφρασης. (Α) σετ εκπαίδευσης, το στάδιο TNM I + II (n = 32), (Β) σετ εκπαίδευσης, το στάδιο TNM ΙΙΙ (n = 35), (C) σύνολο επικύρωσης, το στάδιο TNM I + II (n = 37), και (D) σύνολο επικύρωσης, ΤΝΜ στάδιο ΙΙΙ (n = 50). τιμή P υπολογίστηκε με δοκιμασία log-rank.

Η

Συζήτηση

Κίνα εξακολουθεί να είναι μία από τις χώρες με την υψηλότερη συχνότητα εμφάνισης του καρκίνου του στομάχου, αν και ότι σε πολλές βιομηχανικές χώρες έχει μειωθεί κατά τα τελευταία δεκαετίες, και προηγμένο στάδιο της νόσου που ήδη υπάρχουν στη συντριπτική πλειοψηφία των ασθενών [1,2,4]. Επί του παρόντος, TNM σύστημα σταδιοποίησης του UICC /AJCC είναι ο πιο σημαντικός προγνωστικός παράγοντας για γαστρικό καρκίνο [5]. Ωστόσο, επειδή υπάρχει ετερογένεια σε μοριακό επίπεδο του γαστρικού καρκίνου, είναι ανεπαρκής για να στηρίζονται μόνο στη σκηνή TNM να προβλέψουμε την πρόγνωση του καρκίνου του στομάχου [6,17]. Ως εκ τούτου, ο προσδιορισμός των μοριακών δεικτών που είναι προγνωστικά γαστρικού επιθετικότητα του καρκίνου και πρόγνωση του ασθενούς ως συμπληρωματική προς το στάδιο TNM έχει τη δυνατότητα να βελτιώσει την ικανότητα να διαχειρίζεται τους ασθενείς και θα μπορούσε να προσφέρει σημαντικά κλινικά σχετικές γνώσεις για τη θεραπεία της νόσου. Επιπλέον, η επιλογή τους ασθενείς οι οποίοι θα μπορούσαν να επωφεληθούν από τη θεραπεία μεγαλύτερη ακρίβεια και στοχευμένες θεραπείες έχει θεωρηθεί ως η καλύτερη μέθοδος για τη μείωση των ποσοστών θνησιμότητας του καρκίνου του στομάχου. Έρευνα σχετικά με τη σχέση μεταξύ των miRNAs και καρκίνο του στομάχου έχει αποκτήσει σταδιακά την προσοχή από τους ερευνητές στο γενικό πεδίο χειρουργική επέμβαση, και αυτή η έρευνα έχει γίνει ένα σημαντικό θέμα έρευνας τα τελευταία χρόνια [7]. Στην παρούσα μελέτη, αξιολογήσαμε το επίπεδο έκφρασης της miR-137 σε ανθρώπινο γαστρικό καρκίνο κυτταρικές γραμμές με ποσοτική πραγματικού χρόνου PCR, τα αποτελέσματα επέδειξαν ότι τα ανθρώπινα γαστρικά καρκινικά κύτταρα, συμπεριλαμβανομένων των ΜΚΝ-45, SGC7901, BGC-823, MGC- 803, και AGS, εξέφρασαν σημαντικά χαμηλότερα επίπεδα miR-137 από GES-1, το οποίο είναι ένα αθανατοποιημένο φυσιολογικό ανθρώπινο γαστρικού επιθηλίου κυτταρική γραμμή. Αυτό το αποτέλεσμα έδειξε ότι ανώμαλη έκφραση miR-137 μπορεί να σχετίζεται με την ογκογένεση του καρκίνου του στομάχου. Ωστόσο, διευκρινίζοντας τον υποκείμενο μηχανισμό της απορρύθμισης του miR-137 στο γαστρικό καρκίνο κύτταρα και τους ιστούς αναμένει περαιτέρω έρευνα.

Το ίδιο με τα άλλα miRNAs, έχει αναφερθεί ότι το miR-137 συσχετίζεται στενά με το σχηματισμό και την ανάπτυξη των ανθρώπινων καρκίνων [8,18]. Ως σημαντικά στοιχεία της γονιδιακής ρύθμισης, σε πολλά ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα, miR-137 θα μπορούσε να ρυθμίσει διαφορετικά γονίδια και να επηρεάζουν τις λειτουργίες τους σε πολλές κυτταρικές οδούς. Ο κυτταρικός πολλαπλασιασμός και η μετανάστευση του καρκίνου του μαστού θα μπορούσε να κατασταλεί με miR-137 με την καταστολή που σχετίζονται υποδοχέα οιστρογόνου α (Erra) [19]. Ενώ, σε καρκίνο του παχέος εντέρου κύτταρα, έκτοπη έκφραση miR-137 θα μπορούσε επίσης να διακοπή του κυτταρικού κύκλου, καταστέλλουν την ανάπτυξη των κυττάρων, και αναστέλλουν την κυτταρική διείσδυση μέσω στόχευσης πρωτεΐνη ελέγχου κυτταρικής διαίρεσης 42 ομόλογο (Cdc42) [20]. Πρόσφατα, Wu et al. έδειξε ότι η miR-137 έδρασε ως ογκοκατασταλτικό στην γαστρική καρκινικά κύτταρα με τη στόχευση ΑΚΤ2 και περαιτέρω επηρεάζει την Bad και GSK-3β, και δυνητικά εμπλέκονται στην ογκογένεση και τη μετάσταση του καρκίνου του στομάχου [16]. Zheng και συνεργάτες του απέδειξαν ότι η έκτοπη έκφραση του miR-137 ήταν επαρκής για να αναστέλλει την γαστρική πολλαπλασιασμού των καρκινικών κυττάρων [21]. Επιπλέον, Steponaitiene R et al. παρουσίασαν ότι το miR-137 μεθυλίωση είναι ένα συχνό συμβάν σε γαστρεντερικούς καρκίνους που συμβαίνει νωρίς το σταδιακό τρόπο κατά τη διάρκεια της γαστρικής καρκινογένεσης και αντιστρόφως συσχετίζεται με τις παγκόσμιες μεθυλίωση [22]. Οι ανωτέρω μελέτες επιβεβαίωσαν ότι miR-137 παίζει ένα ρόλο παρόμοιο με ογκοκατασταλτικού miRNAs. Ωστόσο, όλες αυτές οι έρευνες εκτελείται κυρίως στις κυτταρικές γραμμές γαστρικού καρκίνου, η σχέση μεταξύ του επιπέδου έκφρασης του miR-137 και των κλινικών χαρακτηριστικών παραγόντων των ασθενών με καρκίνο του στομάχου δεν έχει τεκμηριωθεί. Στην παρούσα έρευνα, αξιολογήσαμε τη συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης του miR-137 και την πρόγνωση των ασθενών με καρκίνο του στομάχου μετά από ριζική γαστρεκτομή, και βρήκαν ότι miR-137 έκφραση ήταν ένας ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας για τη συνολική επιβίωση των ασθενών αυτών εκτός από το στάδιο TNM , και η πρόγνωση των ασθενών με χαμηλή έκφραση miR-137 ήταν σημαντικά χειρότερες από εκείνες με υψηλό. Για τις γνώσεις μας, αυτή είναι η πρώτη μελέτη για τον εντοπισμό έκφραση του miR-137 ως ανεξάρτητος φτωχός προγνωστικός παράγοντας για τη συνολική επιβίωση των ασθενών με καρκίνο του στομάχου μετά από ριζική γαστρεκτομή. Με βάση αυτή την κατάσταση, εφαρμόζοντας την προγνωστική αξία της έκφρασης miR-137 στο στάδιο TNM ομάδα ΙΙΙ έδειξε μια καλύτερη διαστρωμάτωση του κινδύνου για τη συνολική επιβίωση σε ασθενείς με τελικού σταδίου καρκίνο του στομάχου. Ωστόσο, η πιθανή αλλαγή της κλινικής πρακτικής θα πρέπει να επικυρωθεί σε μια τυχαιοποιημένη ελεγχόμενη δοκιμή στο μέλλον.

Μέχρι σήμερα, δεδομένου ότι miRNAs αντιπροσωπεύουν μια αναδυόμενη hotspot της έρευνας για τον καρκίνο, υπάρχει ένα αυξανόμενο ενδιαφέρον σε σχέση με τις απαντήσεις miRNA σε περιβαλλοντικές εκθέσεις και τον τρόπο ζωής, συμπεριλαμβανομένης της κοινωνικής κατάστασης, οι συνθήκες διαβίωσης και συμπεριφορές στον τρόπο ζωής, όπως το κάπνισμα και η κατανάλωση αλκοόλ. Stánitz Ε et al. έδειξε ότι το miR-21 και miR-143 ήταν επάνω-ρυθμίζονται και miR-34a ήταν κάτω-ρυθμίζονται σε δείγματα γαστρικού καρκίνου στις δυτικές χώρες [23]. Υπό το πρίσμα αυτών των συνθηκών, αν miR-137 υποέκφραση παρατηρείται επίσης στο γαστρικό καρκίνο δείγματα ασθενών από δυτικές χώρες πρέπει να αξιολογηθεί στο μέλλον. Επιπλέον, γαστρικό καρκίνο του ίδιου ιστοπαθολογική εξέταση από τον πληθυσμό διαφορετική γεωγραφική περιοχή που θα μπορούσε να δείξει διαφορική miRNAs και πρότυπα έκφρασης της πρωτεΐνης, η οποία θα μπορούσε να προκύψει από την ύπαρξη διαφορετικών παραγόντων κινδύνου καρκινογένεσης.

Υπάρχουν διάφοροι περιορισμοί της παρούσας μελέτης. Κατ ‘αρχάς, η μελέτη αυτή περιορίζεται από την αναδρομική φύση της ανάλυσης και τις προκαταλήψεις επιλογής δεν μπορεί να εξαλειφθεί εντελώς, παρόλο που συνέλεξε τα στοιχεία από μια μελλοντικά διατηρείται βάση δεδομένων. Δεύτερον, υπήρχε ετερογένεια στα όρια που χρησιμοποιούνται για τον προσδιορισμό της αποκοπής της έκφρασης miR-137 σε αυτή την έρευνα. Οι μέσες τιμές ήταν η πιο σταθερά χρησιμοποιείται, έχουν αναφερθεί ωστόσο μια ποικιλία των κατώτατων ορίων. Τρίτον, δεν είναι συμπεριλαμβανομένων εκεί τα δεδομένα της επιβίωσης χωρίς νόσο σε αυτή τη μελέτη. Υπάρχουν πολλοί παράγοντες, όπως οι εξετάσεις παρακολούθησης και τη μετεγχειρητική θεραπεία, μπορεί να επηρεάσει την επιβίωση χωρίς ασθένεια. Και οι ελεύθερες δεδομένα επιβίωσης της νόσου θα πρέπει να συλλέγονται στις μελλοντικές έρευνες. Τέλος, ο αριθμός των ασθενών που συμπεριελήφθησαν στη μελέτη αυτή είναι σχετικά μικρή. Οι μεγάλες προοπτικές τυχαιοποιημένες ελεγχόμενες κλινικές μελέτες που απαιτούνται για τον προσδιορισμό της προγνωστικής αξίας του miR-137 έκφραση στους ασθενείς με καρκίνο του στομάχου.

Συνοπτικά, τα αποτελέσματα αυτής της μελέτης καταδεικνύουν ότι miR-137 είναι ένας πολλά υποσχόμενος δείκτης για την πρόβλεψη η συνολική επιβίωση των ασθενών με καρκίνο του στομάχου μετά από ριζική γαστρεκτομή. Επιπλέον, αυτά III ασθενείς με γαστρικό καρκίνο σταδίου TNM με χαμηλή έκφραση του miR-137, μπορεί να χρειαστεί περισσότερο επιθετική μετεγχειρητική θεραπεία και στενότερη παρακολούθηση.