Αφηρημένο

Παιδιατρική γλοιοβλαστώματα (pGBM), αν και σπάνια, είναι μια από τις κύριες αιτίες της καρκινογόνες θανάτων που σχετίζονται με τα παιδιά, με όγκους ουσιαστικά πυρίμαχο στις υπάρχουσες θεραπείες. Εδώ, περιγράφουμε τη χρήση των συμβατικών και προηγμένων

in vivo

απεικόνισης μαγνητικού συντονισμού (MRI) τεχνικές για να αξιολογήσει ένα μυθιστόρημα ορθοτοπική ξενομοσχεύματος ποντικού pGBM (IC-3752GBM ασθενών που προέρχονται από τον πολιτισμό) μοντέλο, και να παρακολουθεί τις επιπτώσεις της ο αντικαρκινικός παράγοντας OKN-007 ως ένας αναστολέας της ανάπτυξης του όγκου pGBM. δεδομένων υποστήριξης ανοσοϊστοχημείας παρουσιάζεται επίσης για τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων και τη σηματοδότηση της ανάπτυξης του όγκου. OKN-007 βρέθηκε να μειώνει σημαντικά τους όγκους όγκου (

ρ

& lt? 0,05) και την αύξηση της επιβίωσης των ζώων (

ρ

& lt? 0,05) σε όλους τους ποντικούς OKN-007 σε σύγκριση με το μη επεξεργασμένο ζώα . Σε ένα διαδραστικό ομάδα ζώων που έλαβαν θεραπεία, OKN-007 ήταν σε θέση να μειώσει σημαντικά τους όγκους των όγκων (p & lt? 0,0001), αυξάνει την επιβίωση (p & lt? 0.001), και την αύξηση της διάχυσης (

σ

& lt? 0,01) και τα ποσοστά αιμάτωσης (

σ

& lt? 0,05). OKN-007 μεταβολισμός επίσης σημαντικά μειωμένη λιπιδίων του όγκου σε απόκριση ζώα [(Lip1.3 και Lip0.9) -για-κρεατίνη αναλογία (

ρ

& lt? 0,05)], καθώς επίσης και να μειώσει σημαντικά τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων του όγκου (

σ

& lt? 0,05) και η μικροαγγειακή πυκνότητα (

σ

& lt? 0,05). Επιπλέον, σε σχέση με την οδό PDGFRα, OKN-007 ήταν σε θέση να μειώσει σημαντικά την SULF2 (

ρ

& lt? 0,05) και PDGFR-

α

(υποδοχέας αυξητικού παράγοντα που προέρχεται από αιμοπετάλια

-α

) (

σ

& lt? 0,05) immunoexpression, και να αυξήσει σημαντικά την έκφραση ντεκορίνης (

σ

& lt? 0,05) σε απόκριση ποντίκια. Αυτή η μελέτη δείχνει ότι OKN-007 μπορεί να είναι ένας αποτελεσματικός παράγοντας κατά του καρκίνου για ορισμένους ασθενείς με pGBMs με αναστολή του πολλαπλασιασμού των κυττάρων και την αγγειογένεση, πιθανώς μέσω του PDGFR

α

μονοπάτι, και θα μπορούσε να θεωρηθεί ως επιπρόσθετη θεραπεία για παιδιατρική ασθενείς με όγκο στον εγκέφαλο

Παράθεση:. Coutinho de Souza P, Mallory S, Smith Ν, Saunders D, Li XN, McNall-Knapp RY, et al. (2015) Αναστολή της Παιδιατρικής γλοιοβλάστωμα ανάπτυξης όγκου από το Αντικαρκινικό Agent OKN-007 σε ορθοτοπική Ξενομοσχεύματα ποντίκι. PLoS ONE 10 (8): e0134276. doi: 10.1371 /journal.pone.0134276

Επιμέλεια: Marta M. Alonso, Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο της Ναβάρα, Ισπανία

Ελήφθη: 6 του Μάρτη του 2015? Αποδεκτές: 8 του Ιουλίου του 2015? Δημοσιεύθηκε: 6, Αυγ 2015

Copyright: © 2015 Coutinho de Souza et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του χαρτιού

Χρηματοδότηση:. η εργασία αυτή χρηματοδοτήθηκε από το Εθνικό Ινστιτούτο Υγείας (P20 GM103639, KMF) https://nih.gov/, Πολιτειακό Πανεπιστήμιο της Οκλαχόμα (AE-1 – 50060? PCS) http : //go.okstate.edu/, Musella Ίδρυμα (αριθμός Νο? RAT) https://www.virtualtrials.com/musella.cfm, και παιδικής Ηλικίας Brain Tumor Foundation (αριθμός Νο? RAT) http: //www .childhoodbraintumor.org /

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

υψηλής ποιότητας γλοιώματα (HGG) αντιπροσωπεύουν ένα από τα πιο κοινά. του κεντρικού νευρικού συστήματος (ΚΝΣ) όγκους μεταξύ των ενηλίκων. Αυτό έρχεται σε αντίθεση σημαντικά για τον παιδικό πληθυσμό, όπου HGGs περιλαμβάνει μόνο περίπου το 8-12% όλων των πρωτοπαθών όγκων του ΚΝΣ [1]. Οι όγκοι αυτοί έχουν χαρακτηριστεί από την Παγκόσμια Οργάνωση Υγείας (ΠΟΥ), είτε ως κατηγορίας ΙΙΙ ή IV που σημαίνει ότι είναι πολύ κακοήθεις όγκους με ιδιαίτερα χαρακτηριστικά, όπως υπερκυτταρικότητα, πυρηνική ατυπία και υψηλή μιτωτική δραστηριότητα, με ή χωρίς τον πολλαπλασιασμό μικροαγγειακή και νέκρωση [2]. Οι πιο συχνές παιδιατρικές HGGs περιλαμβάνουν αναπλαστικό αστροκύτωμα (WHO βαθμού ΙΙΙ) και γλοιοβλάστωμα (GBM? WHO βαθμού IV). Παιδιατρική γλοιοβλάστωμα (pGBM) είναι μία από τις κύριες αιτίες των θανάτων που σχετίζονται με τον καρκίνο στα παιδιά [3], με διάμεση συνολική επιβίωση για τους ασθενείς 11 μήνες [4]. Παρά τις βελτιώσεις στη νευροχειρουργική, την ακτινοθεραπεία και τη χημειοθεραπεία, η έκβαση για τα παιδιά με παιδιατρική HGG παραμένει φτωχή [5]. Δεν έχουν αποτελεσματική χημειοθεραπευτικά σχήματα έχουν προσδιοριστεί για οποιαδήποτε παιδιατρική HGG ακόμη [5]. Επιπλέον, τα νέα μοριακά στοχευμένες παράγοντες έχουν δείξει μικρή αποτελεσματικότητα σε κλινικές δοκιμές πρώιμη φάση [6-8], τονίζοντας την ανάγκη για νέες θεραπευτικές προσεγγίσεις.

Επίσης, η βελτίωση της

in vitro

και

in vivo

μοντέλα για παιδιατρική HGGs είναι επίσης αναγκαία. κυτταρικές γραμμές όγκου και ζωικά μοντέλα προέρχονται από όγκους του ΚΝΣ αποτελούν απαραίτητα εργαλεία για τη μελέτη της βιολογίας της ασθένειας, να κατανοήσει τους μηχανισμούς της ανθεκτικότητας στη θεραπεία, και για τη διεξαγωγή προκλινικές θεραπευτικές δοκιμές. Υπάρχει πλήθος πληροφοριών σχετικά με ζωικά μοντέλα ενηλίκων HGG [9-11], συμπεριλαμβανομένων χημικά που προκαλείται, γενετικά τροποποιημένα ποντίκια, και τα μοντέλα ξενομοσχεύματος [9]. Ωστόσο, μέχρι σήμερα μόνο λίγα παιδιατρικά μοντέλα GBM έχουν συσταθεί ή /και χαρακτηρίζεται [12-14]

Έχουμε δείξει ότι ο αντικαρκινικός παράγοντας OKN-007 (Οκλαχόμα νιτρονικές-007?. Δινάτριο 4- [(τριτ-βουτυλο-ιμινο) μεθυλ] βενζολο-1,3-δισουλφονικού Ν-οξείδιο ή disufenton) είναι πολύ αποτελεσματικό κατά των ενήλικων γλοιώματα σε προκλινικά μοντέλα [11,15,16], και επί του παρόντος υποβάλλεται σε κλινικές εκτίμηση δοκιμή ως νέο ερευνητικό φάρμακο για επαναλαμβανόμενες ενηλίκων γλοιοβλαστώματα. OKN-007 είναι ένα μικρό μόριο που μπορεί να διασχίζουν το φράγμα αίματος-εγκεφάλου και έχει αντιφλεγμονώδεις, αντιοξειδωτικές και προαποπτωτική ιδιότητες [17,18]. Σε ένα ορθοτοπικό μοντέλο γλοιώματος F98 αρουραίου και ανθρώπινου μοντέλο ξενομοσχεύματος U87 σε αθυμικούς αρουραίους, OKN-007 αύξησε σημαντικά την επιβίωση των επεξεργασμένων έναντι μη επεξεργασμένου αρουραίους [16]. Οι όγκοι των όγκων σε δύο από αυτά τα μοντέλα ήταν σημαντικά μειωμένη σε θεραπεία σε σύγκριση με τα μη επεξεργασμένα ζώα βασίζονται σε απεικόνιση μαγνητικού συντονισμού (MRI) αξιολόγηση [16]. Ανοσοϊστοχημεία (IHC) αξιολόγηση των κοινώς μελετηθεί καρκινικών δεικτών για τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό ή διαφοροποίηση, υποξία, η αγγειογένεση, και την απόπτωση έδειξαν ότι OKN-007 ήταν σε θέση να μειώσει σημαντικά τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων (μεταφορέα γλυκόζης 1 (Glut-1) και ο δείκτης κυτταρικού πολλαπλασιασμού, ΜΙΒ -1) αλλά όχι του κυττάρου διαφοροποίηση (ανθρακικό ανυδράσης IX), μειώνουν την αγγειογένεση (πυκνότητα μικροαγγείων (MVD? μετράται ως επίπεδα του ενδοθηλιακού δείκτη, CD-31), αλλά όχι το αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF)), να μειώσει υποξία (υποξία διεγέρσιμο παράγοντα 1 α (HIF-1α)), και την αύξηση της απόπτωσης (διασπασμένη κασπάση 3) σε σύγκριση με μη κατεργασμένους μάρτυρες [16]. OKN-007 που προκαλείται από μειώσεις στην Glut-1 και HIF-1α επίπεδα φάνηκε να είναι παρόμοια και στα δύο μοντέλα F98 και U87 γλοίωμα, ενώ αυξημένη απόπτωση φάνηκε να είναι πιο αυξημένα στα γλοιώματα F98 σύγκριση με τους όγκους U87 [16]. Καταλήξαμε στο συμπέρασμα ότι OKN-007 έχει την ικανότητα να προκαλεί γλοίωμα οπισθοδρόμηση σε επιθετική μοντέλα τρωκτικών όγκων (F98 και U87), καθώς και σε μέτρια γλοιώματα (C6) [11,15,16]. Υποστήριξη για την αντικαρκινική δράση του OKN-007 μέσω της οδού TGFβ1 αναφέρθηκε πρόσφατα από Zheng

κ.ά.

. (2013), όπου βρήκαν ότι OKN-007 διαμεσολαβεί αντικαρκινική επίδραση στα κύτταρα HCC (Huh7) μέσω της καταστολής της TGFβ1 /SMAD2 και Hedgehog σηματοδότησης /GLI1 αναστέλλοντας σουλφατάση 2 (SULF2) ενζυμική δραστηριότητα [19].

PDGFR

α

είναι ο πιο συχνός στόχος της εστίασης της ενίσχυσης σε παιδιατρικούς HGGs [20-23]. Σωματικές μεταλλάξεις του PDGFR

α

έχουν επίσης αναφερθεί πρόσφατα σε παιδιατρικούς HGGs [22-24]. Είναι επίσης γνωστό ότι η έκφραση του γονιδίου SULF2 συσχετίζεται με PDGFR

α

έκφραση [25]. Ομοίως με SULF2, ντεκορίνη συνδέεται επίσης με την οδό PDGFRα [26]. Δεδομένου ότι στο παρελθόν αποδείχθηκε ότι OKN-007 θα μπορούσε να επηρεάσει SULF2 δραστηριότητα, σκεφτήκαμε ότι ίσως αυτός ο παράγοντας θα μπορούσε να είναι αποτελεσματικό κατά των παιδιατρικών HGGs.

MRI έχει χρησιμοποιηθεί σε προκλινικές [12] και της κλινικής [27-32] μελέτες να διαγνώσει και να προβλέψει τα αποτελέσματα της θεραπείας για παιδιατρική GBMs. Οι τεχνικές που χρησιμοποιούνται πιο συχνά περιλαμβάνουν

in vivo

1 φασματοσκοπία μαγνητικού συντονισμού (

1-MRS) [33-35], διάχυση-weighted imaging (DWI) [36], και της αρτηριακής επισήμανση γύρισμα αιμάτωσης (ASL) [37].

1 Η-MRS έχει χρησιμοποιηθεί σε έρευνες και κλινικές ρυθμίσεις για τη μέτρηση των επιπέδων μεταβολίτη στον εγκέφαλο, και είναι κατάλληλη για να εκτελέσει τη διάγνωση, χαρακτηρισμό, και εκτίμηση της ανταπόκρισης του όγκου στη θεραπεία [38]. DWI μπορεί ποιοτικά και ποσοτικά αξιολογεί μοριακής κίνησης με βάση την οργάνωση του ιστού μικροδομές χαρακτηρίζοντας κινητικότητα νερό [39], και μπορεί να παρέχει μια πιο πλήρη αξιολόγηση των κυτταρικών και μεταβολικών πληροφορίες για τα ανθρώπινα καρκίνο του εγκεφάλου [40]. ASL επιτρέπει την αξιολόγηση της μέτρησης της ροής του αίματος όγκου [41], η οποία βοηθά στον χαρακτηρισμό του βαθμού του όγκου [37] και η απόκριση στη θεραπεία του καρκίνου [42].

Εδώ περιγράφουμε τον χαρακτηρισμό MRI ενός νέου ορθοτοπική ξενομόσχευμα παιδιατρική ποντίκι HGG (IC-3752GBM ασθενών που προέρχονται από πρωτογενή καλλιέργεια) μοντέλο και τα αποτελέσματα της OKN-007 να αναστέλλει

in vivo

παιδιατρική γλοιοβλαστώματος IC-3752GBM ανάπτυξη του όγκου με τη χρήση συμβατικών (μορφολογική απεικόνιση) και προηγμένες τεχνικές MRI (

1-MRS, DWI, και ASL). Ανοσοϊστοχημική χρώση χρησιμοποιήθηκε επίσης για την αξιολόγηση των επιπέδων των πρωτεϊνών που σχετίζονται με όγκους και να εκτιμήσει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων του όγκου. Για το καλύτερο της γνώσης μας, η παρούσα μελέτη είναι η πρώτη αναφορά της μαγνητικής τομογραφίας χαρακτηρισμός ενός ορθοτοπικό μοντέλο ποντικού ξενομοσχεύματος pGBM, και η αξιολόγηση του αντικαρκινικού παράγοντα, OKN-007, σε ένα μοντέλο pGBM.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθική Δήλωση

Όλα τα πειράματα της παρούσας μελέτης πραγματοποιήθηκαν μετά από ένα ανθρώπινο πρωτόκολλο που εγκρίθηκε από το Διοικητικό συμβούλιο Institutional Review (IRB) στο Baylor College of Medicine, καθώς και ένα πρωτόκολλο ζώων εγκρίθηκε από την Επιτροπή Θεσμικών Ζωικά Φροντίδα και Χρήση (IACUC) του Baylor College of Medicine και το IACUC του Ιδρύματος Ιατρικής Έρευνας της Οκλαχόμα. Για τα δείγματα ανθρώπινου ιστού, η οποία υπεγράφη ενημερωμένη συγκατάθεση λήφθηκε από όλους τους ασθενείς ή οι νόμιμοι κηδεμόνες τους πριν να δοκιμάσετε εξαγοράς.

δείγμα όγκου του εγκεφάλου

Ένα φρέσκο ​​δείγμα όγκου (3752GBM), από 5 ετών , παλιά γυναικεία οποίοι υποβλήθηκαν σε κρανιοτομή στο Νοσοκομείο του Τέξας Παιδική, λήφθηκε σε ένα εργαστήριο κρυοστάτη με ενυπόγραφη συγκατάθεση κατόπιν Institutional Review Board-εγκεκριμένο πρωτόκολλο (Η-4844). Τελική παθολογική διάγνωση ήταν σύμφωνη με τα παιδιατρικά γλοιοβλάστωμα (pGBM) [43]. Το δείγμα του όγκου ήταν άμεσα εμφυτευθεί στο δεξί εγκεφαλικό φλοιό των ποντικών immunedeficient (Baylor College of Medicine IACUC # AN-4548). κύτταρα ξενομόσχευμα όγκου που συλλέγονται από τα ποντίκια δότη περάστηκαν σε άτριχα ποντίκια με έξι επακόλουθων εμφυτεύσεων όπως περιγράφηκε προηγουμένως [43,44].

Ενδοκρανιακή μοντέλο όγκου στον εγκέφαλο ποντικού

Η διόδου παιδιατρική πολιτισμό γλοιοβλάστωμα IC- 3752GBM εμφυτεύθηκε ενδοεγκεφαλικά σε αθυμικούς γυμνούς ποντικούς (η = 24) (OMRF IACUC πρωτόκολλα # 13-51 και # 13-53). Οι επικεφαλής των αναισθητοποιημένων ποντικών ακινητοποιήθηκαν (στερεοταξικό μονάδα? Kopf Instruments, Tujunga, CA), και με άσηπτες τεχνικές, μια τρύπα αγριάδα 1 mm τρυπήθηκε στο mm πρόσθια κρανίο 1 και 2 mm πλαγίως του βρέγματος στην αριστερή ή τη δεξιά πλευρά . Ένας 20 μι αεροστεγή σύριγγα Hamilton χρησιμοποιήθηκε για την ένεση 5-10 × 10

6 κύτταρα IC-3752GBM /mL εναιωρήθηκε σε 4 μι σε μέσα κυτταρικής καλλιέργειας με 1.0% αγαρόζη σε δεξιά ή αριστερά μετωπιαίο λοβό σε βάθος 1,5 mm σε σχέση με την επιφάνεια της σκληρής μήνιγγας σε ένα στερεοταξικό μονάδα. Αναλγησία (Buprenex, ενδοπεριτοναϊκή ένεση) χρησιμοποιήθηκε ακολουθώντας τη διαδικασία εμφύτευσης κύτταρο για την ανακούφιση του πόνου κατά την ανάκτηση. Οι κυτταρικές γραμμές διατηρήθηκαν και επεκτάθηκαν αμέσως πριν τον εμβολιασμό. Μετά την έγχυση, το δέρμα κλείστηκε με χειρουργικά ράμματα. Τα ζώα χωρίστηκαν σε δύο ομάδες: OKN-007-αγωγή (n = 12) και χωρίς αγωγή (n = 12) ομάδες. Και οι δύο ομάδες στρωματοποιήθηκαν για να εξασφαλιστεί ότι τα μεγέθη του όγκου ήταν παρόμοια πριν από την αγωγή ξεκίνησε στην ομάδα αγωγής. Ο IC-3752GBM κύρια καλλιέργεια δεν διήλθε πάνω από έξι φορές σε ποντίκια.

OKN-007 θεραπεία

OKN-007 (Ryss Laboratories, Union City, CA) χορηγήθηκε σε ποντίκια με πόσιμο νερό τους σε συγκέντρωση 150 mg /kg /ημέρα (0,20% w /v για ένα ποντίκι 20 g). Η θεραπεία ξεκίνησε όταν οι όγκοι των όγκων μεταξύ 10 και 15 mm

3, και χορηγήθηκε συνεχώς μέχρι το τέλος της μελέτης. Οι ποντικοί που έλαβαν κανονικό πόσιμο νερό χρησιμοποιήθηκαν ως δείγματα αναφοράς άνευ αγωγής. Η ποσότητα του OKN-007 που καταναλώνεται από κάθε ποντικό, τα οποία στεγάζονταν σε ξεχωριστά κλουβιά, προσδιορίστηκε με ζύγιση μπουκάλια νερού κάθε μέρα. Καμία σημαντική απόκλιση παρατηρήθηκε στον όγκο του υγρού πρόσληψη της ένωσης σε αυτά τα ποντίκια. Η μέση πρόσληψη OKN-007 ήταν περίπου 130-150 mg /kg /ημέρα για όλους τους ποντικούς. Για το σύνολο της μελέτης, η θεραπευτική ανταπόκριση στο OKN-007 αξιολογήθηκε είτε ως απόκριση (OKN-007-R) ή μη απόκρισης (OKN-007-NR). Η θνησιμότητα καταγράφηκε καθημερινά κατά τη διάρκεια της περιόδου της μελέτης για να υπολογιστεί το ποσοστό επιβίωσης όλων των ζώων. Όλα τα ζώα ευθανασία (CO

2 ασφυξία) όταν πληρούνται τα κριτήρια του φορτίου του όγκου (όγκοι ≥ 150 mm

3) ή /και έδειξαν σημάδια της ασθένειας, η απώλεια βάρους, η κακή κατάσταση του σώματος, πορφυρία, υποενεργητικότητα, ανησυχία, επιθετικότητα, αταξία, ρηχή, γρήγορη και /ή δυσκολία στην αναπνοή, καχεξία, η αποτυχία να ανταποκριθούν σε ερεθίσματα, έλλειψη περιέργεια, φώνηση, επιληπτικές κρίσεις, κυρτή στάση και αναστατωμένα γούνα). Τα ζώα παρακολουθούνται δύο φορές την ημέρα.

τεχνικές μαγνητικού συντονισμού

Μορφολογικά απεικόνισης.

Γυμνοί ποντικοί αναισθητοποιούνται και τοποθετούνται σε ένα στερεοταξικό λίκνο. Ένα 30-εκατοστών οριζόντια διάτρηση Bruker Biospin μαγνήτη λειτουργούν σε 7 Τέσλα (Τ? Bruker BioSpin GmbH, Καρλσρούη, Γερμανία), χρησιμοποιήθηκε με μία βαθμίδα S116, ώστε να εκτελούν όλα τα πειράματα MRI. Μια EPI (echo επίπεδη απεικόνιση) πομποδέκτη

σπείρας 1 50W, με εσωτερική διάμετρο 38,0 χιλιοστά χρησιμοποιήθηκε για τη μετάδοση και ανίχνευση σήματος. Πολλαπλών φέτα, πολλαπλή ηχώ (MSME) απεικόνισης (FOV = 2,50 x 2,50 εκατοστά

2, TR = 2000 ms, ΤΕ = 17,5 ή 58,2 ms, μήτρα = 192, κατά μέσο όρο = 2, φέτες = 16, πάχος τομής = 1 mm) χρησιμοποιήθηκε για τον υπολογισμό όγκων του όγκου και να επιθεωρεί μορφολογία του όγκου. Πολλαπλών φέτα γύρισμα echo Τ

1-σταθμισμένη εικόνες (TR = 1000.0 ms, ΤΕ = 14 ms, FOV = 2,50 × 2,50 εκατοστά

2, μέσοι όροι = 2, φέτες = 16, το μέγεθος της μήτρας = 256 × 256) ήταν επίσης, πραγματοποιούνται και απέκτησε πριν και 15 λεπτά μετά την ενδοφλέβια έγχυση σκιαγραφικού μέσου (Gd-DTPA, Magnevist, Bayer Inc., Wayne, NY, USA? 0,4 mmol /kg).

1-MR Φασματοσκοπία.

1-MRS αποκτήθηκε χρησιμοποιώντας μια πρέσα (Point επιλυθεί φασματοσκοπία) ακολουθία με ΤΕ 24,0 ms, ένα TR του 2500.0 ms, 512 μέσους όρους, και ένα φασματικό πλάτος 4006 Hz. Ένα μη-κατέστειλε φάσμα MR αποκτήθηκε πριν από την εφαρμογή διόρθωσης δινορευμάτων για τη μεγιστοποίηση της έντασης του σήματος και να μειώσει τις linewidths αιχμής. Νερού κατεστάλη με ατμό (παλμούς μεταβλητής συχνότητας ραδιοκυμάτων και βελτιστοποιημένη καθυστερήσεις χαλάρωση) σύστημα καταστολής. Σε όλες τις περιπτώσεις, το πλάτος κορυφής (πλήρες εύρος του μέγιστου ημίσεως) της κορυφής του νερού ήταν μικρότερη από 30 Hz εξής εντοπισμένη υποστηρίξεως, η οποία διεξήχθη με τη χρήση πρώτου και του δεύτερου προσαρμογές διαταγή με Fastmap. Ένα κυβικό voxel του 2,0 χ 2,0 χ 2,0 mm

3 ήταν τοποθετημένο είτε του όγκου ή ετερόπλευρο φυσιολογικό εγκεφαλικό ιστό, μεγιστοποιώντας παράλληλα την ποσότητα του ιστού του όγκου που υπάρχουν στο voxel ανά πάσα στιγμή.

Για να αναλυθεί τα δεδομένα MRS, ένα in-house πρόγραμμα Mathematica χρησιμοποιήθηκε (έκδοση 6.0, Wolfram Research, Champaign, IL, USA). Τα φάσματα κλιμακωθεί σε ppm από βαθμονόμηση έναντι της κορυφής του νερού (4,78 ppm). Οι μείζονες κορυφές εγκέφαλος μεταβολικές ταυτοποιήθηκαν ως: Ν-ακετυλοασπαρτικού (ΝΑΑ) στους 2,02 ppm, χολίνη (CHO) στα 3.22 ppm, κρεατίνη (CRE) σε 3,02 ppm, και κινητής λιπίδια σε 1,3 ppm (Lip1.3) για την ομάδα μεθυλενίου (-CH

2-) και 0,9 ppm (Lip0.9) για την ομάδα του μεθυλίου (-CH

3) στον ιστό του όγκου. Οι μετρήσεις των εμβαδών των κορυφών των μεταβολιτών χρησιμοποιήθηκαν για τον υπολογισμό των ακόλουθων δεικτών: ΝΑΑ όγκου σε όγκο Cho (ΝΑΑ

t /Cho

t), του όγκου Cho στο ετερόπλευρο (φυσιολογικός ιστός) CRE (Cho

t /Cre

n), όγκου Cho σε όγκο ΝΑΑ (Cho

t /ΝΑΑ

t), Lip0.9 όγκου στο ετερόπλευρο CRE (Lip0.9

t /Cre

n), και Lip1.3 όγκου στο ετερόπλευρο Cre (Lip1.3

t /Cre

n).

Diffusion-weighted imaging.

Μια στεφανιαία αξονική ακολουθία DWI multi-φέτα που καλύπτει η ολόκληρου του όγκου διεξήχθη χρησιμοποιώντας μια ακολουθία ηχώ επίπεδη απεικόνισης που βασίζονται σε παλμό με τις ακόλουθες παραμέτρους: TR = 4000 ms, ΤΕ = 51,1 ms, το μέγεθος της μήτρας = 128 × 128, πάχος τομής = 1 χιλιοστό, διάρκειας κλίση διάχυσης = 4 ms, διαχωρισμό κλίσης διάχυσης = 14 ms. Πέντε εικόνες ελήφθησαν με διαφορετικές λέπια κλίση, με αποτέλεσμα τιμές b 100, 200, 500, 700, και 850 s /mm

-2. χάρτες ADC δημιουργήθηκαν για όλες τις τομές στις οποίες παρατηρήθηκε η όγκου. Ο φαινόμενος συντελεστής διάχυσης (ADC) τιμές ελήφθησαν με την κατάρτιση ενός ενιαίου ROI ελεύθερο μήκος των συνόρων του όγκου κανονικοποιημένης ως προς το ετερόπλευρο φυσιολογικό εγκέφαλο.

Αρτηριακή αιμάτωση spin-επισήμανση.

Χάρτες

αιμάτωσης ήταν που λαμβάνεται σε μία μόνο αξονική φέτα του εγκεφάλου που βρίσκεται στο σημείο του άξονα Rostro-ουραίου όπου ο όγκος είχε τη μεγαλύτερη διατομή. Η γεωμετρία απεικόνισης ήταν ένα 25,6 × 25,6 mm

2 πεδίου-of-view (FOV) 2 mm σε πάχος, με μία μόνο βολή ηχώ-επίπεδη κωδικοποίηση πάνω από ένα πλέγμα 64 × 64. Ένας χρόνος ηχούς (ΤΕ) των 13,5 ms, χρόνος επανάληψης (TR) των 18 s, και ένα χρόνο αναστροφής (TIR) ​​του 26,0 ms χρησιμοποιήθηκαν, και οι εικόνες δεν υποβλήθηκαν στην ώρα κατά μέσο όρο. Για να αποκτήσετε αντίθεση αιμάτωσης, χρησιμοποιήθηκε το σύστημα ανάκτησης αντιστροφή εναλλασσόμενη ροή. Εν συντομία, εικόνες ανάκαμψη αντιστροφή αποκτήθηκαν χρησιμοποιώντας μια φέτα-επιλεκτική αναστροφή της ίδιας γεωμετρίας όπως η φέτα απεικόνισης ή ένα μη επιλεκτικό αντιστροφή φέτα ομόκεντρο με τη φέτα απεικόνισης με ένα περιθώριο πακέτο φέτα 5,0 mm. Για κάθε τύπο αντιστροφής, 22 εικόνες αποκτήθηκαν με χρόνους αναστροφής ομοιόμορφα κατανεμημένες από 26,0 ms σε 8,426.0 ms (με προσαύξηση 400 ms ανάμεσα σε κάθε TIR). CBV τιμές (εγκεφαλική ροή αίματος) ελήφθησαν με την κατάρτιση ενός ενιαίου ROI ελεύθερο μήκος των συνόρων του όγκου ρυθμίζεται σύμφωνα με την ετερόπλευρη φυσιολογικό εγκέφαλο να αποκτήσουν κανονικοποιημένες τιμές σχετικής CBF (rCBF). τιμές CBF αρνητική ASL ήταν υποτίθεται ότι είναι μηδέν [45].

Gross και μικροσκοπική ιστολογία

Οι νεκροψίες πραγματοποιήθηκαν σε όλα τα ποντίκια. Η έκταση της όγκου κατά την νεκροψία αξιολογήθηκε με μικτό και μικροσκοπική εξέταση του εγκεφάλου για κάθε ζώο από τα μη κατεργασμένα και OKN-007-αγωγή ομάδες. Οι εγκεφαλικοί ιστοί σταθεροποιήθηκαν σε 10% φορμαλίνη ρυθμισμένη με φωσφορικό, ενσωματωμένο σε παραφίνη, τεμαχίσθηκαν σειριακά σε 4 μm, και βάφτηκαν με αιματοξυλίνη εωσίνη (Η &? Ε). για ιστολογική εξέταση

Ανοσοϊστοχημεία

Ανοσοϊστοχημική χρώση πραγματοποιήθηκε με τη χρήση ενός αυτοματοποιημένου ανοσοκηλιδωτή (Leica, Bond-ΙΙΙ, Leica, Buffalo Grove, IL) με τα ακόλουθα πρωτογενή πολύκλωνα αντισώματα: προέρχεται από αιμοπετάλια άλφα υποδοχέα αυξητικού παράγοντα (

α

PDGFR) (αραίωση 1: 1000 , κουνελιού πολυκλωνικό, κλώνος ab61219, Abcam), ντεκορίνη (αραίωση 1: 500, κουνελιού πολυκλωνικό, κλώνος LS-B 8,177 /45 156), LSBIO διάρκεια ζωής Biosciences), θειική ηπαράνη σουλφατάση SULF2 (αραίωση 1: 100, κουνελιού πολυκλωνικό, κλώνος AV49338, Sigma Aldrich), και CD31 (αραίωση 1:25, κουνελιού πολυκλωνικό, κλώνος ab28364, Abcam, Ki-67 (1: 100 αραίωση, πολυκλωνικά κουνελιού, κλώνος PA5-19462, Thermo Fisher Scientific, IL). Όλα τα αντισώματα αρχικά βελτιστοποιηθεί για ιστούς ελέγχου και θετικούς και αρνητικούς μάρτυρες υποβλήθηκαν σε επεξεργασία παράλληλα με τα τμήματα ιστών.

IHC Scoring

Όλα τα IHCs αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το Σύστημα Aperio ScanScope Image Analysis (Aperio, Vista, CA). PDGFR

α

, SULF2 και ντεκορίνη IHCs αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας ένα Θετική αλγόριθμο Pixel Count με τον θεατή Aperio ImageScope. Μόνο περιοχές που περιέχουν ιστό του όγκου αναλύθηκαν για την έκφραση IHC. Περιοχές χωρίς ιστό του όγκου και των περιοχών με νέκρωση ή σημαντικών αντικειμένων (π.χ. αναδίπλωση ιστού) ήταν απενεργοποιημένη και αποκλείστηκαν από την ανάλυση. Ο αριθμός των θετικών εικονοστοιχεία από περιοχές ενδιαφέροντος (ROI που) με υψηλή έκφραση διαιρέθηκαν με τον συνολικό αριθμό των pixels (αρνητικών και θετικών) στην αναλύθηκε περιοχή, και πολλαπλασιάζεται με το 100, για να αντλούν το ποσοστό των θετικών pixel.

μικροαγγειακή πυκνότητα (MVD, τον αριθμό των σκαφών ανά mm

2) και μέση περιοχή του σκάφους (MVA, Αγγειακή περιοχή /2 + αυλού περιοχή), χρησιμοποιώντας CD31 ως δείκτης, προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας έναν αλγόριθμο ανάλυσης μικροαγγείων Aperio. Τρία αντιπροσωπευτικά μη επικαλυπτόμενες περιοχές ενδιαφέροντος (ROI που) για τα δείγματα όγκων επιλέχθηκαν τυχαία, και η MVD και MVA ήταν ποσοτικά για κάθε ζώο τόσο από μη επεξεργασμένο και OKN-007-ομάδων.

Μια Aperio ScanScope Ανάλυση Εικόνας Σύστημα χρησιμοποιήθηκε επίσης για τον προσδιορισμό του δείκτη επισήμανσης ΚΙ-67 (Ki-67 LI). Τρεις ROIs με τον υψηλότερο αριθμό σημασμένων πυρήνων προσδιορίστηκαν σε κάθε περίπτωση. Ki-67 LI προσδιορίστηκε μετρώντας 1000 κύτταρα και εκφράζουν αυτό, καθώς ο αριθμός των επισημασμένων κυττάρων ανά 1000 κύτταρα [46] για κάθε ζώο τόσο από μη επεξεργασμένο και OKN-007-αγωγή ομάδες. Σημασμένα κύτταρα πλησίον ή εντός νεκρωτικές περιοχές ήταν επίσης εξαιρούνται, ενώ μετρώντας το Ki-67 LI. Τα μέσα και οι τυπικές αποκλίσεις των Ki-67 LI προσδιορίστηκαν για κάθε ομάδα.

Στατιστική Ανάλυση

Οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση Graph Pad Prism 6 (GraphPad Prism 6 Software, San Diego, CA, ΗΠΑ). Όλες τις φωτογραφίες

σ

τιμές & lt? 0,05 θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές. Οι όγκοι των όγκων, οι αναλογίες μήκους κορυφή μεταβολίτη [(ΝΑΑ

t /Cho

t), (Cho

t /Cre

n), (Cho

t /ΝΑΑ

t), (Lip0.9

t /Cre

n), και (Lip1.3

t /Cre

n)], κανονικοποιημένη ADC, rCBF, Ki-67 LI, και immunoexpression των PDGFR

α

, SULF2 και ντεκορίνη αναφέρθηκαν ως μέσοι όροι ± τυπικές αποκλίσεις. Για την στατιστική ανάλυση, χρησιμοποιήθηκαν Student t-τεστ (ανεξάρτητο-δείγματα, δύο-tailed t-test) για την αξιολόγηση των διαφορών μεταξύ των μέσων των κανονικών, χωρίς θεραπεία, και OKN-007 θεραπεία παιδιατρικών ποντίκια γλοιώματος IC-3752GBM. Kaplan-Meier καμπύλες επιβίωσης και Log-rank (πεζούλι-COX) τεστ χρησιμοποιήθηκαν για να συγκρίνουν τους χρόνους επιβίωσης μεταξύ των ανεπεξέργαστων και OKN-007 ομάδες που έλαβαν.

Αποτελέσματα

Η μακροσκοπική, ιστολογικά, ανοσοϊστοχημική και MRI χαρακτηριστικά του μυθιστορήματος ορθοτοπική ξενομόσχευμα παιδιατρική γλοιοβλάστωμα (pGBM) μοντέλο IC-3752GBM και οι επιπτώσεις της OKN-007 να αναστέλλει IC-3752GBM ανάπτυξη του πολιτισμού όγκου που περιγράφονται στην παρούσα έκθεση.

Gross και μικροσκοπικά χαρακτηριστικά της το μοντέλο IC-3752GBM pGBM παρουσιάζονται στο Σχήμα 1Α-1Ε. Μακροσκοπικά οι όγκοι χαρακτηρίσθηκαν ως κιτρινωπό γκρι, κακώς οριοθετημένες μάζα, με πολυεστιακή περιοχές νέκρωσης και αιμορραγία. Η ιστολογική εξέταση αποκάλυψε κακώς οριοθετημένες, μη ενσωματωμένη διηθούντα νεόπλασμα με σημαντική ατυπία κυττάρων, υψηλό δείκτη μιτωτική και πολυεστιακή περιοχές νέκρωσης και αιμορραγία.

σταθερό (ΑΒ) Φορμόλης IC3752 pGBM ιστών, χαρακτηρίζεται ως ένα κιτρινωπό γκρι και ανεπαρκώς οριοθετημένη μάζα , με πολυεστιακή περιοχές νέκρωσης και αιμορραγία. (CE) Η ιστολογική εξέταση αποκάλυψε κακώς οριοθετημένων, μη εγκαψιδιωμένο, και επεμβατική νεοπλάσματα (Ε) που χαρακτηρίζεται από έντονη ατυπία κυττάρων, έναν υψηλό μιτωτικό δείκτη (μαύρα βέλη) (C), και πολυεστιακή περιοχές νέκρωσης (αστερίσκοι) και αιμορραγία (συν) ( ΡΕ). T = Tumor, Β = φυσιολογικό εγκέφαλο. Κλίμακα ράβδου = 200 μm (C-D). Κλίμακα ράβδου = 400 μm (Ε).

Η

Η επιβίωση των ζώων εκτιμήθηκε με σύγκριση OKN-007 ζώα υπό αγωγή με μη επεξεργασμένα ζώα (Σχήμα 2). Συνολικά, OKN-007 βρέθηκε να αυξάνει σημαντικά την επιβίωση των ζώων (ρ & lt? 0,0223) (μέση επιβίωση 25,5 ημέρες) σε σύγκριση με ποντικούς χωρίς θεραπεία που φέρουν όγκο (μέση επιβίωση 19,5 ημέρες). Οι συνολικές OKN-007-επεξεργασία δεδομένων επιβίωσης φαίνεται να απεικονίζουν δύο ομάδες ανταπόκριση στη θεραπεία. Για παράδειγμα, βρέθηκε ότι έξι ζώα ανταποκρίθηκαν στην θεραπεία OKN-007 και έδειξαν σημαντικά μεγαλύτερους χρόνους επιβίωσης (

σ

= 0.0002) (μέση επιβίωση των 33 ημερών) σε σύγκριση με μη επεξεργασμένα ζώα (n = 12) . Αντίθετα, άλλα έξι ποντίκια pGBM δεν φαίνεται να ανταποκρίνονται στη θεραπεία OKN-007, και δεν έδειξε στατιστικά σημαντική διαφορά (

σ

= 0,3392) σε σύγκριση με την ομάδα χωρίς αγωγή. Το μη-απόκρισης OKN-007-ποντικούς που υπέστησαν αγωγή φάνηκε να έχει μια μέση επιβίωση (19 ημέρες) που ήταν παρόμοια με την μέση επιβίωση για τους ποντικούς άνευ αγωγής που φέρει τον όγκο.

Υπήρξε μια σημαντική αύξηση στο ποσοστό επιβίωσης για όλα τα OKN-007-αγωγή ποντικών (n = 12) (

ρ

& lt? 0,05) σε σύγκριση με τα μη θεραπευμένα ποντίκια που φέρουν όγκο (n = 12). Με βάση τις διάφορες πληθυσμιακές ομάδες απάντηση, η ομάδα OKN-007-αγωγή διαιρείται περαιτέρω σε (μη-απόκρισης) ομάδες OKN-007-R (αποκρίνεται) και OKN-007-NR. OKN-007-R ποντίκια (η = 6) έδειξαν σημαντικά μεγαλύτερους χρόνους επιβίωσης (

ρ

& lt? 0.001) σε σύγκριση με τα ζώα UT (n = 12). Αντίθετα, OKN-007-NR ποντίκια (n = 6) δεν έδειξε στατιστικά σημαντική διαφορά (

σ

& gt? 0,05) σε σύγκριση με την ομάδα UT

Η

Για να υπολογίσετε το σύνολο του όγκου. όγκου σε κάποια ζώα, MSME Τ

1-σταθμισμένη εικόνες έγιναν και που αποκτήθηκαν πριν (Σχήμα 3Α) και 15 λεπτά μετά (Σχήμα 3Β) ενδοφλέβια έγχυση σκιαγραφικού μέσου (Gd-DTPA, Magnevist, Bayer Inc., Wayne, Νέα Υόρκη, ΗΠΑ). Σχήμα 3Ε δείχνει τα ποσοτικά μέση όγκων του όγκου IC-3752GBM υπολογίζεται από τις εικόνες MR. Η συνολική ομάδα OKN-007-αγωγή βρέθηκε να μειώνει σημαντικά τους όγκους του όγκου (ρ = 0,0289) σε σύγκριση με τα μη επεξεργασμένα ποντίκια (Σχήμα 3Ε). Με βάση τα δεδομένα επιβίωσης η οποία έδειξε να ανταποκρίνεται και δεν αποκρίνονται ομάδες θεραπείας OKN-007, ο όγκος του όγκου ήταν επίσης χωρισμένη από την άποψη της ανταπόκρισης στη θεραπεία. Έξι ζώα βρέθηκαν να ανταποκρίνονται σε θεραπεία OKN-007 [OKN-007- (R)] και έδειξαν σημαντικά μικρότερους όγκους (

ρ

& lt? 0.001) (Σχήμα 3D) σε σύγκριση με μη επεξεργασμένα ζώα (n = 12 ) (Σχ 3C). Διαπιστώθηκε επίσης ότι έξι ποντίκια pGBM διαπιστώθηκε ότι δεν ανταποκρίνεται [OKN-007- (NR)] στη θεραπεία OKN-007 (με βάση από τα δεδομένα επιβίωσης των ζώων), έδειξαν στατιστικά σημαντική διαφορά (

σ

= 0.7857), όταν σε σύγκριση με την ομάδα άνευ αγωγής.

Αντιπροσωπευτικά Τ1 μορφολογικές εικόνες πριν (Α) και μετά παράγοντα αντίθεσης (Gd-DTPA) ένεση (Β) σε pGBM φέρουν ποντίκια παρουσιάζονται. (Α) Πριν από τη χορήγηση Αντίθετα ο όγκος εμφανίστηκε ως ήπια υπερτονισμένων μάζα και ήταν δύσκολο να οριοθετήσει. (Β) Δεκαπέντε λεπτά μετά την έγχυση σκιαγραφικού το IC3752 pGBM αποδεικνύει ενίσχυση, οριοθετούν τον όγκο (κίτρινη διακεκομμένη γραμμή). Εκπρόσωπος Τ2 εικόνες MR των UT (C) και OKN-007 (D) που έλαβαν θεραπεία IC 3752 εγκεφάλους pGBM φέρει το ποντίκι. (Ε) Η ποσοτική ιστόγραμμα για όλους τους ποντικούς δείχνει ότι όλοι οι OKN-007-αγωγή ποντικών (n = 12) είχαν μια σημαντικά μειωμένη όγκος του όγκου (ρ & lt? 0,05) σε σύγκριση με UT ποντικών (η = 12). Έξι ζώα ανταποκρίθηκαν στην θεραπεία OKN-007 [OKN-007 (R)] και έδειξαν σημαντικά μικρότερους όγκους (

ρ

& lt? 0,0001) σε σύγκριση με τα ζώα UT (n = 12). Ωστόσο, άλλα έξι ποντίκια pGBM δεν φαίνεται να ανταποκρίνεται [OKN-007 (NR)] στη θεραπεία OKN-007, και δεν υπήρχε στατιστικά σημαντική διαφορά μεταξύ της ομάδας OKN-007 (NR) UT και. Οι τιμές παρουσιάζονται ως μέσο ± SD. Ομάδα συγκρίσεις: (1) UT vs. OKN-007 (σύνολο)? (2) UT εναντίον OKN-007 (R)? και (3) OKN-007 (R) vs OKN-007 (NR).

Η

Για όλες τις άλλες έρευνες, OKN-007- (R) και OKN-007- (NR) θεραπεία ομάδες ήταν σε σύγκριση με τα ποντίκια χωρίς αγωγή που φέρουν όγκο, καθώς δεν είναι όλα τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε εκτιμήσεις

1 η-MRS, DWI, αιμάτωσης απεικόνισης ή IHC.

τιμές 1Η-MRS ελήφθησαν σε φυσιολογικούς αθυμικά γυμνά ποντίκια (η = 7), και χωρίς θεραπεία (η = 6) και OKN-007-αγωγή (η = 8) ποντικούς που φέρουν IC-3752GBM γλοιώματα. Το Σχήμα 4 δείχνει τις περιοχές όπου η ενιαία 8 χιλιοστά

3 voxel για

1Η-MR φασματοσκοπία τοποθετήθηκε στους εγκεφάλους των φυσιολογικών ποντικών (Σχήμα 4Α) και ποντικούς που φέρουν γλοιώματα IC-3752GBM (Σχήμα 4Β). Σχήμα 4C δείχνει ότι η μη θεραπευμένα ποντίκια IC-3752GBM pGBM έδειξαν σημαντικά χαμηλότερη ΝΑΑ

t /Cho

t (

σ

= 0,0001) και μεγαλύτερο Cho

t /Cre

n (

σ

= 0,0325), Cho

t /ΝΑΑ

t (

σ

= 0,0075), Lip0.9

t /Cre

n (em

σ

= 0,0363) και Lip1.3

t /Cre

n (

σ

= 0,0009) δείκτες σε σύγκριση με το φυσιολογικό θύμο αδένα του εγκεφάλου του ποντικιού. Η Lip1.3

t /Cre

n (

σ

= 0,0395), Lip0.9

t /Cre

n (

σ

= 0.0257) , Cho

t /ΝΑΑ

t (

σ

= 0,0167), και Cho

t /Cre

n (

σ

= 0,0254) αναλογίες ήταν σημαντικά χαμηλότερη στην ομάδα OKN-007- (R) από ό, τι χωρίς θεραπεία pGBM στο τέλος φάση της εξέλιξης του όγκου. Η ομάδα (R) OKN-007- παρουσίασαν σημαντικά υψηλότερη ΝΑΑ

t /Cho

t (

σ

= 0,0492) λόγο από ό, τι το μη επεξεργασμένο pGBM. Δεν υπήρχε σημαντική διαφορά μεταξύ του Cho

t /Cre

n (

σ

= 0.498), ΝΑΑ

t /Cho

τ (p = 0,6912), Cho

t /ΝΑΑ

t (

σ

= 0,4231), και Lip0.9

t /Cre

n (

σ

= 0,6205) αναλογίες του κανονικού ποντικιού εγκεφάλου σε σύγκριση με την ομάδα OKN-007- (R). Η ομάδα (R) OKN-007- παρουσίασαν σημαντικά υψηλότερη Lip1.3

t /Cre

n (

σ

= 0,0047) λόγο από τον φυσιολογικό εγκέφαλο ποντικού. Δεν υπήρχε σημαντική διαφορά μεταξύ της ΝΑΑ

t /Cho

t (

σ

= 0,2071), Cho

t /Cre

n (p = 0,7101), Cho

t /ΝΑΑ

t (

σ

= 0,5362), Lip0.9

t /Cre

n (

σ

= 0,7277) και Lip1.3

t /Cre

n (

σ

= 0,5163) αναλογίες της χωρίς θεραπεία ομάδα σε σύγκριση με το-007- OKN ομάδα (NR).

Εκπρόσωπος θέσεις του 2 x 2x 2 mm3 voxels χρησιμοποιείται για την εκτέλεση 1Η-MRS σε φυσιολογικό εγκέφαλο ποντικού (Α) και IC3752 pGBM ποντίκια που φέρουν όγκο (Β). (C) Τα μη επεξεργασμένα ποντίκια IC3752 pGBM εμφάνισαν σημαντικά μικρότερο ποσοστό ΜΑΕΕ /Chot και υψηλότερα Chot /Cren (

σ

= 0,0325), Chot /ΜΑΕΕ, Lip0.9t /Cren και Lip1.3t /Cren αναλογίες όταν σε σύγκριση με τις κανονικές θύμο αδένα εγκεφάλους ποντικών. Η Lip1.3t /Cren, Lip0.9 t /Cren, Chot /αναλογίες ΜΑΕΕ, και Chot /Cren ήταν σημαντικά χαμηλότερες στην ομάδα OKN-007- (R) σε σύγκριση με μη επεξεργασμένα pGBM στην τελική φάση της εξέλιξης του όγκου. Η ομάδα (R) OKN-007- παρουσίασαν σημαντικά υψηλότερη αναλογία ΜΑΕΕ /Chot από το μη επεξεργασμένο pGBM. Δεν υπήρχε σημαντική διαφορά μεταξύ του Chot /Cren, ΜΑΕΕ /Chot, Chot /ΜΑΕΕ, και οι αναλογίες Lip0.9t /Cren για τις κανονικές εγκεφάλους ποντικών σε σύγκριση με την ομάδα OKN-007- (R). Η ομάδα (R) OKN-007- έδειξαν σημαντικά υψηλότερη αναλογία Lip1.3t /Cren από το φυσιολογικό εγκέφαλο ποντικού. Δεν υπήρχε σημαντική διαφορά μεταξύ της ΜΑΕΕ /Chot, Chot /Cren, Chot /ΜΑΕΕ, Lip0.9t /Cren και αναλογίες Lip1.3t /Cren για το μη επεξεργασμένο σε σύγκριση με τα OKN-007- (NR) ομάδες. Οι αστερίσκοι υποδεικνύουν στατιστικώς σημαντική διαφορά (*

σ

& lt? 0,05? *** P & lt? 0,01? *** P & lt? 0.001? **** P & lt? 0,0001). συγκρίσεις ομάδα: (1) Κανονική εναντίον UT? (2) UT εναντίον OKN-007 (R)? (3) OKN-007 (R) vs OKN-007 (NR)? (4) Η κανονική εναντίον OKN-007 (R)? (5) UT εναντίον OKN-007 (NR)? και (6) Κανονική εναντίον OKN-007 (NR).

Η

Στη μελέτη μας, με τη χρήση της DWI, το μη επεξεργασμένο ομάδα έδειξε σημαντικά υψηλότερη (

σ

= 0,0060) (1.161 ± 0,04538, n = 11) κανονικοποιημένες τιμές ADC στις περιοχές του όγκου σε σύγκριση με τις κανονικές εγκεφάλους ποντικών (1.003 ± 0,009358, n = 6) (Σχήμα 5Α-5G). Η ομάδα OKN-007-R αγωγή είχαν σημαντικά υψηλότερα κανονικοποιημένες τιμές ADC (1.296 ± 0,04141, η = 7) σε σύγκριση με την ομάδα άνευ αγωγής (ρ = 0,0432) ή τις κανονικές εγκεφάλους ποντικών (

σ

= 0,0003).