Αφηρημένο

Πρόσφατα στοιχεία έδειχναν ότι ο καρκίνος του προστάτη βλαστικά /προγονικά κύτταρα (CSC) είναι υπεύθυνοι για την έναρξη του καρκίνου, καθώς και την εξέλιξη της νόσου. Δυστυχώς, συμβατικές θεραπείες είναι αποτελεσματικές μόνο σε στόχευση των πιο διαφοροποιημένα καρκινικά κύτταρα και τα ανταλλακτικά του ΚΕΠ. Εδώ, αναφέρουμε ότι το PSP, ένα ενεργό συστατικό που εξάγεται από το μανιτάρι Τουρκία ουρά (επίσης γνωστή ως

Coriolus versicolor

), είναι αποτελεσματική στη στόχευση ΚΕΠ προστάτη. Βρήκαμε ότι η θεραπεία του καρκίνου του προστάτη κυτταρική γραμμή PC-3 με PSP οδήγησε στην προς τα κάτω ρύθμιση των δεικτών CSC (CD133 και CD44) σε έναν χρόνο και δοσο-εξαρτώμενο τρόπο. Εν τω μεταξύ, η θεραπεία PSP όχι μόνο κατέστειλε την ικανότητα του PC-3 κύτταρα να σχηματίσουν prostaspheres υπό συνθήκες μη-προσκολλημένα πολιτισμό, αλλά ανέστειλε επίσης ογκογενετικότητας τους

in vivo

, περαιτέρω αποδεικνύοντας ότι το PSP μπορεί να καταστείλει προστάτη ιδιότητες CSC. Για να διερευνηθεί αν το αποτέλεσμα αντι-CSC του PSP μπορεί να οδηγήσει σε χημειοπρόληψη του καρκίνου του προστάτη, διαγονιδιακά ποντίκια (TgMAP) που αναπτύσσουν αυθόρμητα όγκους του προστάτη από του στόματος τρέφονται με PSP για 20 εβδομάδες. Ενώ το 100% των ποντικών που τρέφονται μόνο με νερό ανέπτυξαν όγκους του προστάτη κατά το τέλος του πειράματος, δεν παρατηρήθηκαν όγκοι θα μπορούσαν να βρεθούν σε οποιοδήποτε από τα ποντίκια που τρέφονταν με PSP, υποδηλώνοντας ότι η θεραπεία PSP μπορεί να αναστείλει εντελώς το σχηματισμό όγκων του προστάτη. Τα αποτελέσματά μας όχι μόνο έδειξαν την ενδιαφέρουσα αντι-CSC επίδραση του PSP, αλλά και αποκάλυψε, για πρώτη φορά, το εκπληκτικό χημειοπροληπτική ιδιότητα του στόματος κατανάλωση PSP κατά του καρκίνου του προστάτη

Παράθεση:. Luk SU, Lee TK-W , Liu J, Lee DT-W, Chiu ΥΤ, Ma S, et al. (2011) Χημειοαποτρεπτική Επίδραση του PSP μέσω της στόχευσης του καρκίνου του προστάτη Stem Cell-Like πληθυσμού. PLoS ONE 6 (5): e19804. doi: 10.1371 /journal.pone.0019804

Επιμέλεια: Kelvin Yuen Kwong Chan, Τσαν Yuk Νοσοκομείο, Νοσοκομείο Αρχής, η Κίνα

Ελήφθη: 23 Δεκ 2010? Αποδεκτές: 16η Απριλίου, 2011? Δημοσιεύθηκε: 16 του Μάη 2011

Copyright: © 2011 Luk et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αντιπρόεδρος καγκελάριος έρευνα Fellowship. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του προστάτη (PCA) είναι η πιο κοινή ανδρική κακοήθεια στις δυτικές χώρες και αντιπροσωπεύει μια σημαντική επιβάρυνση της νόσου στον κόσμο. Όταν διαγνωστεί σε προχωρημένο στάδιο, όπου η χειρουργική επέμβαση δεν είναι πλέον εφικτή, η μόνη πρώτη γραμμή διαθέσιμη θεραπεία είναι ορμονοθεραπεία. Δυστυχώς, η πλειοψηφία των ασθενών προστάτη τελικά υποτροπιάζουν και να αναπτύξουν ορμονοάντοχο προστάτη (HRPC), ένα μοιραίο και τελικό στάδιο θεωρούνται ανίατες [1].

Χημειοπροφύλαξη είναι η ιδανική στρατηγική για μάχεται τον καρκίνο του προστάτη, και μια σειρά από χημειοθεραπευτικούς παράγοντες ή φυσικά συμπληρώματα διατροφής αυτές δοκιμάζονται σήμερα για τη δυνατότητά τους να αναστέλλουν την ανάπτυξη καρκίνου του προστάτη. Για παράδειγμα, η φιναστερίδη, ένας 5-άλφα αναγωγάσης συγκεκριμένο αναστολέα, έχει αποδειχθεί ότι μειώνει την επίπτωση του καρκίνου του προστάτη κατά 25% σε μια κλινική δοκιμή [2]. Ομοίως, dutasteride, ένα ανάλογο του finasteride, αναφέρθηκε επίσης ότι αναστέλλει σημαντικά την ανάπτυξη του καρκίνου του προστάτη [3]. Παρά την υποσχόμενη αποτέλεσμα, οι παρενέργειες που σχετίζονται με τη φιναστερίδη θεραπεία παραμένει το κύριο μέλημα για να μπορεί να χρησιμοποιηθεί ευρέως για τη χημειοπρόληψη του προστάτη. Ως εκ τούτου, βιοενεργές ενώσεις τρόφιμα όπως επιγαλλοκατεχίνη-3-γαλλικό ή ρεσβερατρόλη [4], [5], [6] αντιπροσωπεύει μια ελκυστική εναλλακτική λύση για τη χημειοπρόληψη του καρκίνου του προστάτη, κυρίως λόγω της σχετικά χαμηλής τοξικότητάς τους. Δυστυχώς, οι περισσότερες από τις προηγούμενες μελέτες έχουν παραχθεί αμφίβολα αποτελέσματα όσον αφορά χημειοπροληπτικές δυναμικό τους.

Πρόσφατα εντοπισμό του καρκίνου του προστάτη βλαστικά κύτταρα (ΚΕΠ) [7], έδωσε μια νέα εικόνα για την καρκινογένεση του προστάτη. Η ικανότητα των καρκινικών βλαστικών κυττάρων για αυτο-ανανέωση και διαφοροποιούνται σε χύδην καρκινικά κύτταρα υπέδειξε ότι μπορεί να είναι η προέλευση του καρκίνου του προστάτη [7]. Επιπλέον, η εξαιρετικά ανθεκτικό φύση αυτών των ΚΕΠ σε διαφορετικές χημειοθεραπείες πρότεινε ότι ΚΕΠ μπορεί επίσης να συμβάλει στην αποτυχία της θεραπείας και της νόσου υποτροπής [8]. Είναι ενδιαφέρον ότι, ένας αριθμός βιοδραστικών ενώσεων των τροφίμων έχουν πρόσφατα δειχθεί ότι έχει αντι-CSC αποτέλεσμα. Για παράδειγμα, αναφέρθηκε πρόσφατα ότι η γάμμα-τοκοτριενόλη εξάγεται από φοινικέλαιο αναστέλλει prostasphere ικανότητα σχηματισμού και ογκογονικότητα των κυττάρων καρκίνου του προστάτη [9], υποδηλώνοντας ότι η γάμμα-τοκοτριενόλη είναι αποτελεσματική στην καταστολή του προστάτη ιδιότητες CSC. Επιπλέον, ένα τριτερπενίου που εξάγονται από τα φρούτα βρέθηκε επίσης ότι αναστέλλει την ικανότητα αυτο-ανανέωσης των ΚΕΠ ήπατος και ευαισθητοποίηση του ήπατος όγκου σε σισπλατίνη θεραπεία [10]. Τα ευρήματα αυτά υπογραμμίζουν το δυναμικό των βιοδραστικών ενώσεων των τροφίμων ως παράγοντας στόχευσης CSC είτε για την πρόληψη ή για τη θεραπεία του καρκίνου του προστάτη.

Εδώ, αποδείξαμε ότι η polysaccharopeptide (PSP) που εξάγεται από την ουρά Τουρκία (γνωστή ως

Coriolus versicolor

ή Yun-Zhi) στοχεύει ΚΕΠ του προστάτη in vitro και καταστέλλει το σχηματισμό όγκων in vivo. Θεραπεία του καρκίνου του προστάτη κυτταρικής γραμμής PC-3 με PSP οδήγησε στην προς τα κάτω ρύθμιση των δεικτών CSC (CD133 και CD44) σε έναν χρόνο και δοσο-εξαρτώμενο τρόπο. Εν τω μεταξύ, ο σχηματισμός prostasphere, μια σημαντική ιδιότητα του ΚΕΠ του προστάτη, είχε κατασταλεί πλήρως σε PC-3 κύτταρα σε παρουσία PSP. Επιπλέον, PSP προεπεξεργασία κατέστειλε σημαντικά την έναρξη του όγκου του PC-3 κύτταρα σε ανοσοκατεσταλμένους ποντικούς, υποδηλώνοντας ότι το PSP καταστέλλει την ογκογονικότητα των κυττάρων PC-3. Το πιο σημαντικό, από του στόματος διατροφή των διαγονιδιακών ποντικών (TgMAP) που αναπτύσσουν αυθόρμητα όγκου του προστάτη με PSP βρέθηκε να αναστέλλει εντελώς το σχηματισμό όγκων του προστάτη. Τα ευρήματά μας υποστηρίζουν ότι το PSP μπορεί να είναι ένας ισχυρός παράγοντας χημειοπροληπτικές κατά του καρκίνου του προστάτη, πιθανόν μέσω της στόχευσης του προστάτη CSC πληθυσμού.

Αποτελέσματα

Επιπτώσεις του PSP στο έκφρασης δείκτη CSC

PSP έχει δείξει στο παρελθόν ότι διαθέτει αντικαρκινικές ιδιότητες [11], [12], [13], αν και οι υποκείμενοι μηχανισμοί παραμένουν ασαφείς. Για να δοκιμαστεί εάν η αντικαρκινική επίδραση του PSP είναι μέσω στόχευσης των ιδιοτήτων CSC, ερευνήσαμε πρώτα εάν η θεραπεία PSP επηρεάζει την έκφραση του προστάτη δεικτών CSC σε PC-3 κυτταρική γραμμή, η οποία έχει αναφερθεί ότι περιέχουν ΚΕΠ. PC-3 κύτταρα επεξεργάστηκαν με 250 και 500 μg /ml του PSP για είτε 48 ή 72 ώρες, και η έκφραση των δεικτών CSC όπως CD133 ή CD44 εξετάστηκε με κηλίδωση Western. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 1Β, η έκφραση της πρωτεΐνης του CD133 ήταν σημαντικά ρυθμισμένη προς τα κάτω μετά την επεξεργασία PSP σε έναν χρόνο και δοσο-εξαρτώμενο τρόπο. Προς τα κάτω ρύθμιση του CD44 παρατηρήθηκε επίσης μετά τη θεραπεία PSP, αν και η επίδραση ήταν λιγότερο προφανής. Ωστόσο, η εξέταση του επιπέδου mRNA τόσο CD133 και CD44 αποκάλυψε ότι η προς τα κάτω ρύθμιση και των δύο πρωτεϊνών από το PSP δεν οφείλεται στην αναστολή της μεταγραφής του γονιδίου (δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Παρ ‘όλα αυτά, αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι το PSP μπορεί να είναι αποτελεσματική σε στόχευση των υποθετικών ΚΕΠ του προστάτη.

Α) Western στύπωμα της προστάτη CSC Σημάδια CD44 και CD133 σε κύτταρα PC-3 μετά την αγωγή PSP. Σημειώστε ότι το PSP σημαντικά ρυθμίζει προς τα κάτω τόσο βλαστικών δείκτες κυττάρου σε ένα δόση και το χρόνο-εξαρτώμενο τρόπο. Β) Βιωσιμότητα κύτταρα PC-3 μετά την αγωγή με 5, 25, 125, 250 και 500 μg /ml του PSP για 48 ή 72 ώρες μετρήθηκε με δοκιμασία ΜΤΤ. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως μέση τιμή ± s.d. Γ) Ανάλυση κυτταρομετρίας ροής της PC-3 κύτταρα μετά την αγωγή με 250 μg /ml του PSP για 72 ώρες. Σημειώστε ότι δεν παρατηρήθηκε σημαντική διαφορά στην κατανομή του κυτταρικού κύκλου. Δ) κηλίδωση Western αποτελέσματα για αποπτωτική δείκτες (αριστερό πάνελ) και βλαστικών κυττάρων πρωτεΐνες συντήρησης (δεξί πάνελ) σε κύτταρα PC-3 μετά την αγωγή PSP. Σημειώστε ότι δεν ανιχνεύθηκαν αλλαγές στην Bax και Bcl-2 ή διάσπαση της PARP.

Η

Για να ελέγξετε αν η ρύθμιση προς τα κάτω της έκφρασης δείκτη CSC από το PSP οφείλεται σε μείωση της βιωσιμότητας των κυττάρων, PC- 3 κύτταρα κατεργασμένα με PSP σε διαφορετικές δοσολογίες (0, 5, 25, 125, 250 και 500 μg /ml) για 24, 48 ή 72 ώρες εξετάστηκαν με τη δοκιμασία ΜΤΤ. Είναι ενδιαφέρον, 48 ώρες της θεραπείας PSP δεν είχε κανένα παρατηρήσιμο επιδράσεις στη βιωσιμότητα των κυττάρων, ακόμη και αν οι ίδιες θεραπείες βρέθηκε να καταστέλλουν σημαντικά την έκφραση των δεικτών CSC (Εικόνα 1Β & amp? 1C). Εν τω μεταξύ, η θεραπεία PSP απέτυχε επίσης να επάγει διακοπή του κυτταρικού κύκλου ή απόπτωση, όπως αποδεικνύεται από την έλλειψη του πληθυσμού υπο-G1 στην επίλυση της ανάλυση κυτταρομετρίας ροής (Σχήμα 1 D). Αυτό επιβεβαιώθηκε περαιτέρω με εξέταση της απόπτωσης που σχετίζεται με πρωτεΐνες (δηλ Bax, Bcl-2 και διασπασμένη PARP) (Σχήμα 1 Ε). Ωστόσο, ο /β-κατενίνης μονοπάτι Akt, η οποία είναι υπεύθυνη για τον εμπλουτισμό του CSCs στον καρκίνο του μαστού, ανεστάλη δραστικά με κατεργασία PSP. Όπως φαίνεται στην Εικόνα 1D, η ενεργοποίηση του ΑΚΤ με φωσφορυλίωση στη Ser 473 αναστάλθηκε από PSP και στις δύο δόσεις, η οποία συνοδεύτηκε από την πλήρη εξαφάνιση της έκφρασης β-κατενίνης (Σχήμα 1 Ε).

PSP αναστέλλει prostasphere σχηματισμό του προστάτη καρκινικά κύτταρα κάτω από συνθήκες μη-προσκολλημένα καλλιέργεια

Η ικανότητα σχηματισμού prostaspheres σε μη-προσκολλημένα καλλιέργειας είναι ένα από τα χαρακτηριστικά του ΚΕΠ προστάτη [14], [15], [16]. Για να επιβεβαιωθεί ότι η θεραπεία PSP μπορεί να αναστείλει προστάτη ιδιότητες CSC, prostasphere σχηματισμός PC-3 μελετήθηκε με την παρουσία ή απουσία του PSP. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 2Α, η καλλιέργεια και των δύο κυττάρων PC-3 και DU145 για 14 ημέρες κάτω από μη-προσκολλημένα συνθήκες αποτελέσματα σχηματισμό prostaspheres, επιβεβαιώνοντας περαιτέρω την παρουσία ενός στελέχους που μοιάζει πληθυσμός εντός αμφότερες τις κυτταρικές σειρές. Εντυπωσιακά, προσθήκη του PSP εντός του μέσου ανέστειλε δραστικά prostasphere σχηματισμός στις δύο κυτταρικές σειρές. Ειδικότερα, δεν prostaspheres βρέθηκε σε δύο κυτταρικές σειρές με την παρουσία 500 mg /ml του PSP, υποδηλώνοντας ότι η θεραπεία PSP εξαλειφθεί σημαντικά τα ΚΕΠ του προστάτη. Για να αποδειχθεί περαιτέρω ότι η PSP είναι αποτελεσματική στην αναστολή του σχηματισμού prostasphere, πρωταρχικός prostaspheres με εμπλουτισμένο πληθυσμό CSC διαχωρίστηκαν και επανα-εμβολιάστηκαν σε μη προσκολλημένα συνθήκες καλλιέργειας για να επιτρέψει το σχηματισμό δευτερογενών prostaspheres. Συνεπής με το αποτέλεσμα από την δοκιμασία πρωτογενή σχηματισμό σφαιροειδές, θεραπείες PSP καταστέλλουν σημαντικά τον αριθμό των prostaspheres βρέθηκαν σε κάθε κυτταρική σειρά, αν και η υψηλότερη δόση του PSP (500 mg /ml) ήταν σε θέση να εξαλείψει πλήρως όλες τις δευτερογενείς prostaspheres. Παρ ‘όλα αυτά, τα αποτελέσματα αυτά υποδηλώνουν ότι το PSP είναι αποτελεσματική στην καταστολή των ιδιοτήτων CSC των κυττάρων καρκίνου του προστάτη.

Α) δοκιμασία σχηματισμού σφαιροειδές διεξήχθη με PC-3 και τα κύτταρα Du145. Διακόσια κύτταρα σπάρθηκαν πάνω σε προ-επικαλυμμένες πλάκες polyHEMA και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με 500 μg /mL του PSP ή οχήματος για 14 ημέρες. Ο αριθμός των prostaspheres σχηματίστηκε μετρήθηκε, και το αποτέλεσμα παρουσιάστηκε ως η μέση τιμή ± s.d. Σημειώστε ότι η θεραπεία γ-Τ3 καταστέλλει αποτελεσματικά την ικανότητα σφαιροειδή σχηματισμό PC-3 κύτταρα. Εικόνα των prostaspheres συνελήφθη κάτω από το μικροσκόπιο. Σημειώστε ότι δεν prostaspheres μπορεί να βρεθεί σε κύτταρα επεξεργασμένα με 500 μg /mL του PSP. (Β) PSP ανέστειλε το σχηματισμό δευτερογενών prostaspheres. Πρωτοβάθμια prostaspheres διαχωρίστηκαν και επανα-εμβολιάστηκαν σε polyHEMA προ-επικαλυμμένη πλάκα. PSP προστέθηκε 24 ώρες μετά την επίστρωση. Σημειώστε ότι prostasphere σχηματισμός αναστάλθηκε κατά περισσότερο από 70% και 90% με την παρουσία 250 μg /mL και 500 μg /mL του PSP αντίστοιχα. *

P

& lt? 0.001, **

P

& lt?. 0.0001,

t

τεστ

Η

PSP μειώνει σημαντικά την καρκινογένεση από προστάτη καρκινικά κύτταρα

in vivo

η

από CSC είναι υπεύθυνη για την έναρξη του καρκίνου, είναι δυνατόν ότι η θεραπεία με PSP μπορεί να αναστείλει την ικανότητα σχηματισμού όγκου από PC-3 κύτταρα in vivo. Για να ελεγχθεί αυτή η υπόθεση, πρέπει πρώτα κατεργάζεται PC-3 κύτταρα που εκφράζουν σταθερά τον λουσιφεράσης πρωτεΐνης (PC-3-Luc) με PSP για 72 ώρες πριν από αυτούς εγχέεται ορθοτοπικά στα SCID ποντίκια. Όπως εξετάστηκε με απεικόνιση βιοφωταύγειας, όλα τα ποντίκια που ενέθηκαν με όχημα-προ-επεξεργασμένο PC-3-Luc κύτταρα σχημάτισαν όγκους δύο εβδομάδες μετά την εμφύτευση (Σχήμα 3Α). Περιέργως, τρία από τα οκτώ ποντίκια που είχαν εμβολιαστεί με το PSP προεπεξεργασία PC-3-Luc κύτταρα απέτυχαν να αναπτύξουν όγκους, ακόμη και σε εβδομάδες τέσσερις μετά την εμφύτευση (Σχήμα 3Α & amp? Β). Η έλλειψη των όγκων στην ομάδα PSP-προ-επεξεργασμένο επιβεβαιώθηκε περαιτέρω με εξέταση των αδένων του προστάτη ποντικού στο τέλος του πειράματος (Σχήμα 3C). Λαμβανόμενα μαζί, τα αποτελέσματά μας πρότεινε ότι το PSP ήταν αποτελεσματική στη μείωση της ογκογόνο δυναμικό των κυττάρων καρκίνου του προστάτη, η οποία είναι ένα ουσιώδες χαρακτηριστικό της ΚΕΠ.

Α) βιο-φωσφορισμού εικόνες ποντικών SCID ορθοτοπικά ένεση με PC-3-Luc κύτταρα για δύο εβδομάδες. SCID ποντίκια στην άνω σειρά εγχύθηκαν με αγωγή με όχημα PC-3-Ιυο κύτταρα, ενώ οι ποντικοί στην κάτω σειρά εγχύθηκαν με PSP-αγωγή PC-3-Luc κύτταρα. Β) Πίνακας συνοψίζει τα ποσοστά των ποντικών αναπτυσσόμενων ανιχνεύσιμους όγκους την εβδομάδα 2. Περίπου το 40% των ποντικών στο PSP προεπεξεργασία ομάδα δεν σχηματίζει ανιχνεύσιμη όγκους, ενώ σχηματισμό όγκων 100% βρέθηκε στην ομάδα ελέγχου (ρ = 0.07). Γ) Επιλεγμένα

ex vivo

εικόνες του προστάτη και από τις δύο ομάδες. Σημειώστε ότι στο PSP-ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με το σήμα αρνητικής λουσιφεράση, καμία ορατή όγκου βρέθηκαν στον ιστό προστάτη.

Η

Στοματική χορήγηση PSP αποτυγχάνει να αναστείλει προστατική ενδοεπιθηλιακή νεοπλασία (ΡΙΝ) ανάπτυξη σε ποντικούς TgMAP

Η επίδραση του PSP στο προστάτη ΚΕΠ υποστηρίζει την υπόθεση ότι μπορεί να έχει μια επίδραση χημειοπροληπτικές κατά του καρκίνου του προστάτη. Για να ελεγχθεί αυτή η υπόθεση, έχουμε απασχολούνται ένα διαγονιδιακό μοντέλο ποντικού που αναπτύσσεται αυθόρμητα αδενοκαρκίνωμα του προστάτη (TgMAP) [17], [18]. Τα ποντίκια TgMAP αναπτύσσουν PIN μεταξύ 16-20 εβδομάδων και την πρόοδο στο αδενοκαρκίνωμα του προστάτη μετά την εβδομάδα 24 (Εικόνα 4Α). Επειδή PIN θεωρείται ως η προ-κακοήθη βλάβη και ο πιο σημαντικός παράγοντας κινδύνου του καρκίνου του προστάτη [19], δοκιμάσαμε πρώτα εάν διοίκηση PSP επηρεάζονται ανάπτυξης PIN σε ποντίκια TgMAP. Πέντε ποντικοί TgMAP (ηλικίας 14-εβδομάδων, τουλάχιστον 2 εβδομάδες πριν από την ανάπτυξη PIN) τράφηκαν με 200 mg /kg του PSP για 4 εβδομάδες. Τέσσερα ποντίκια της ίδιας ηλικίας τράφηκαν με νερό μόνο για την ίδια χρονική περίοδο. Όλοι οι ποντικοί θυσιάστηκαν στις παλιές 20 εβδομάδων και προστάτη ιστών συλλέχθηκαν και τεμαχίστηκαν για ιστολογία. Όπως φαίνεται στην Εικόνα 4Β & amp? C, δεν παρατηρήθηκαν διαφορές μεταξύ του ελέγχου και PSP-ποντίκια με αγωγή TgMAP σχετικά με την ανατομία και την ιστολογία του αδένα του προστάτη. Σε χαμηλή μεγέθυνση ισχύος, τομές ιστών και από τις δύο ομάδες διατηρούνται αδενικές δομές, και σε υψηλή ισχύ, PIN ήταν ανιχνεύσιμη τόσο στον έλεγχο όσο και PSP-αγωγή ποντικούς. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι 4 εβδομάδες κατανάλωσης PSP δεν ήταν σε θέση να σταματήσει την ανάπτυξη του PIN.

Α) Χρονικό πλαίσιο του PIN και την ανάπτυξη του προστάτη σε ποντίκια TgMAP και το χρονοδιάγραμμα της θεραπείας PSP. Δεκατέσσερις εβδομάδων ποντικών ηλικίας TgMAP υποβλήθηκαν σε αγωγή με 200 mg /kg του PSP από του στόματος καθετηριασμό σίτιση για 4 εβδομάδες και θυσιάζονται κατά τον χρόνο PIN ανέπτυξε (ηλικίας 20 εβδομάδων). Ο πίνακας συνοψίζει τα αποτελέσματα της εξέτασης ιστολογία του προστάτη από τον φορέα και PSP-ποντίκια με αγωγή TgMAP. Γ) Εκπρόσωπος φωτογραφίες του αιματοξυλίνη & amp? Εοσίνη χρώση των προστατικών ιστών από τους ποντικούς TgMAP. Σημειώστε ότι και οι δύο τους ελέγχους και τους PSP-ποντίκια με αγωγή TgMAP αναπτύχθηκε προστατική ενδοεπιθηλιακή νεοπλασία (ΡΙΝ), όπως υποδεικνύεται από τα βέλη.

Η

Η παράταση της κατανάλωσης PSP αναστέλλει την ανάπτυξη του καρκίνου του προστάτη σε ποντίκια TgMAP

η αποτυχία να αναστέλλουν το σχηματισμό PIN από επεξεργασία PSP μπορεί να οφείλεται σε ανεπαρκή δόση ή διάρκεια της θεραπείας. Ως εκ τούτου, ελέγχεται εάν μια υψηλότερη δόση και μεγαλύτερη χρονική κατανάλωση PSP μπορεί να επηρεάσει το σχηματισμό όγκων του προστάτη με τη χρήση του ίδιου μοντέλου. Πέντε TgMAP ποντίκια (ηλικίας 8 εβδομάδων) τράφηκαν με 300 mg /kg του PSP για συνολικά 20 εβδομάδες (Σχήμα 5Α). Τέσσερα ποντίκια στην ίδια ηλικία και πάλι τροφοδοτείται με νερό μόνο για την ίδια χρονική περίοδο. Όλοι οι ποντικοί θυσιάστηκαν στις παλιές 28 εβδομάδες όταν σχηματίστηκαν οι όγκοι του προστάτη, με προστάτη ιστών συλλέγονται και τομές για ιστολογική εξέταση. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 5Β, οι όγκοι βρέθηκαν σε διαφορετικά τμήματα του αδένα του προστάτη από το σύνολο των ποντικών που είχαν τραφεί μόνο με νερό. Παραδόξως, η εξέταση του συνόλου του τμήματος προστάτη αποκάλυψε ότι κανένα από τα ποντίκια που τρέφονταν με PSP γυμνά οποιουσδήποτε όγκους του προστάτη (Σχήμα 5C), υποδεικνύοντας ότι η θεραπεία PSP ανέστειλε πλήρως το σχηματισμό όγκου του προστάτη στα ποντίκια TgMAP. Εν τω μεταξύ, ενώ τρία από τα PSP-τρέφονται τα ποντίκια βρέθηκαν να έχουν PIN, τα άλλα δύο ποντίκια βρέθηκαν να έχουν εντελώς φυσιολογικό προστάτη (Σχήμα 5D). Επιπλέον, σύμφωνα με την χαμηλή τοξικότητα του PSP, μακροπρόθεσμη κατανάλωση φαίνεται να έχουν καμία παρενέργεια επί των ποντικών, όπως κρίνεται από τις μεταβολές του σωματικού βάρους και φυσικά σημάδια (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα) (Σχήμα 5Ε). Τα ευρήματα αυτά υποδεικνύουν έντονα ότι η στοματική πρόσληψη του PSP μπορεί να είναι ένας ασφαλής και αποτελεσματικός παράγοντας χημειοπροληπτικές κατά του καρκίνου του προστάτη.

Α) Περιγραφή του χρονοδιαγράμματος για τη θεραπεία PSP. Ηλικίας οκτώ εβδομάδων ποντικοί TgMAP υποβλήθηκαν σε αγωγή με 300 mg /kg του PSP από του στόματος καθετηριασμό σίτιση για 20 εβδομάδες και θυσιάζονται στην ηλικία των 28 εβδομάδων. B & amp? Γ) Εκπρόσωπος φωτογραφίες του αιματοξυλίνη & amp? Εοσίνη χρώση των ιστών του προστάτη από το όχημα και PSP-ποντίκια με αγωγή TgMAP. Σημειώστε ότι οι όγκοι βρέθηκαν σε όλα τα ποντίκια που υποβλήθηκαν σε αγωγή με μόνο όχημα, αλλά ήταν απούσες σε όλες τους ποντικούς PSP-θεραπεία. Δ) Ο πίνακας συνοψίζει τα αποτελέσματα της εξέτασης ιστολογία των ιστών του προστάτη από το όχημα και PSP-ποντίκια με αγωγή TgMAP. * P & lt? 0,05 σε σύγκριση με τον έλεγχο της θεραπείας με την ακριβή δοκιμή του Fisher. Ε) μέσο σωματικό βάρος των ποντικών κατά τη διάρκεια της θεραπείας PSP.

Η

Συζήτηση

PSP έχει προηγουμένως αποδειχθεί ότι επάγουν απόπτωση και αναστέλλουν την ανάπτυξη ενός ευρέος φάσματος των καρκινικών κυττάρων η οποία περιλαμβάνει του μαστού [20], [21], [22], το ήπαρ [23] και του καρκίνου του προστάτη [24], αν και οι μηχανισμοί που βρίσκονται πίσω αντικαρκινικές επιδράσεις της παραμένουν ελάχιστα κατανοητή. Εδώ, δείξαμε για πρώτη φορά ότι το PSP έχει αντι-CSC αποτελέσματα, όπως αποδεικνύεται από την ρύθμιση προς τα κάτω των δεικτών CSC και την καταστολή του σχηματισμού prostasphere και όγκου.

προστάτη ΚΕΠ προσδιορίστηκαν αρχικά από Collins et al. το 2005 χρησιμοποιώντας CD44 + /alpha2beta1hi /CD133 + ως δείκτες κυτταρικής επιφάνειας [25]. Χρησιμοποιώντας παρόμοιες προσεγγίσεις, ΚΕΠ έχουν επίσης ταυτοποιηθεί σε κυτταρικές σειρές καρκίνου του προστάτη όπως LNCaP [26], DU145 [26], [27] και PC-3 [28], [29]. Αυτά τα ΚΕΠ προστάτη όχι μόνο εκφράζουν υψηλά επίπεδα CD133 και CD44, αλλά είναι επίσης εξαιρετικά ογκογόνα σε σύγκριση με τον πληθυσμό μη-CSC. Το γεγονός ότι το PSP μπορεί να καταστείλει σημαντικά την έκφραση και των δύο CD133 και CD44, καθώς και η ογκογονικότητα των PC-3 κύτταρα, δείχνει σαφώς την αποτελεσματικότητα του PSP στη στόχευση ΚΕΠ προστάτη. Όπως αποδεικνύεται από Hsieh et al [24], PSP είναι αποτελεσματικό στην επαγωγή της απόπτωσης και αναστολή του κυτταρικού πολλαπλασιασμού σε κύτταρα LNCaP. Ωστόσο, η επίδρασή του ήταν πολύ λιγότερο εμφανής σε ανδρογόνο ανεξάρτητες κυτταρικές σειρές καρκίνου του προστάτη όπως PC-3. Αυτό είναι πράγματι σύμφωνη με τα ευρήματα μας, η οποία έδειξε ότι το PSP μπορεί να καταστείλει τις ιδιότητες CSC χωρίς να προκαλεί οποιαδήποτε ανιχνεύσιμη διακοπή του κυτταρικού κύκλου ή απόπτωση. Παρ ‘όλα αυτά, το εύρημα ότι και οι δύο Akt φωσφορυλίωση και έκφραση β-κατενίνης ήταν επίσης κάτω-ρυθμίζονται από PSP (Σχήμα 1Ε) υποδηλώνει ότι το PSP μπορεί να δρουν με απενεργοποίηση του μονοπάτι /Akt /β-κατενίνης ΡΤΕΝ να αναστέλλουν CSC ανανέωση. Αυτό ταυτοποιήθηκε πρόσφατα μονοπάτι συντήρηση βλαστικών κυττάρων δείχθηκε να διαδραματίζουν βασικό ρόλο στη ρύθμιση του προστάτη και του μαστού πληθυσμών βλαστικών κυττάρων [16], [30]. Η ανώμαλη ενεργοποίηση του /β-κατενίνης μονοπάτι Akt μέσω του knockdown του ΡΤΕΝ βρέθηκε να εμπλουτίσει τον μαστικό πληθυσμός των βλαστικών κυττάρων, οδηγώντας στην επαγωγή των υπερπλαστικών αλλοιώσεων στον ποντικό [30]. Ομοίως, knockdown του ΡΤΕΝ σε καρκινικά κύτταρα του προστάτη βρέθηκε επίσης να ενισχύσει prostasphere ικανότητα σχηματισμού και ογκογονικότητα των κυττάρων [16]. Ως εκ τούτου, η απώλεια του «βλαστική ικανότητα» των ΚΕΠ του προστάτη μετά από θεραπεία PSP μπορεί να οφείλεται σε ρύθμιση προς τα κάτω του μονοπατιού ΡΤΕΝ /AKT /β-κατενίνης.

Ένα από τα βασικά ιδιότητες των βλαστικών κυττάρων είναι η ικανότητά τους για να σχηματίσει σφαίρες σε μη προσκολλημένα, συνθήκες χωρίς ορό [31]. Πράγματι, αναλύσεις σχηματισμό σφαιροειδές έχουν πρόσφατα χρησιμοποιηθεί για τον εντοπισμό και να εμπλουτίσουν τις υποθετικές ΚΕΠ [16], [32], [33], [34]. Σε συμφωνία με προηγούμενες μελέτες, και οι δύο κυτταρικές σειρές καρκίνου του προστάτη PC-3 και DU145 ήταν σε θέση να σχηματίσει prostaspheres σε μη προσκολλημένα καλλιέργεια [16], υποδηλώνοντας την παρουσία ΚΕΠ εντός αυτών των κυτταρικών σειρών. Αυτές οι πρωτογενείς prostaspheres, τα οποία είναι ανθεκτικά σε χημειοθεραπευτικά φάρμακα [9], είναι πολύ ευαίσθητα σε θεραπεία PSP (Σχήμα 2Α). Επιπλέον, οι δευτερογενείς prostaspheres σημαντικά ανέστειλε με δοσο-εξαρτώμενο τρόπο (Σχήμα 2Β), υποστηρίζοντας ότι η PSP είναι αποτελεσματική στην εξάλειψη ΚΕΠ προστάτη

in vitro

.

Προστάτη ΚΕΠ πιστεύεται ότι είναι προέλευση του όγκου του προστάτη, οι οποίες έχουν την ικανότητα να αυτο-ανανέωση και διαφοροποιούνται σε χύδην όγκου [35]. Το γεγονός ότι η PSP προεπεξεργασίας μπορεί αναστέλλουν σημαντικά την ογκογονικότητα των PC-3 κύτταρα (Σχήμα 3) υπογραμμίζει όχι μόνο την αντι-CSC επίδραση του PSP, αλλά επίσης δείχνει ότι το PSP μπορεί να έχει χημειοπροληπτική επιδράσεις κατά του καρκίνου του προστάτη. Ελέγξαμε αυτή την υπόθεση, χρησιμοποιώντας ένα πρόσφατα αναπτύχθηκε διαγονιδιακό μοντέλο ποντικού καρκίνου του προστάτη (TgMAP) [17], [18]. Η σταδιακή ανάπτυξη του όγκου του προστάτη (από χαμηλή PIN βαθμό προς το ακαθάριστο όγκου) στο TgMAP ποντίκι ιδιαίτερα μιμείται την παθογένεση του ανθρώπινου καρκίνου του προστάτη, αν και μπορεί να μην αντικατοπτρίζουν πλήρως την πολύπλοκη φύση της καρκινογένεσης του προστάτη. Παρ ‘όλα αυτά, μας επέτρεψε να αναπτύξουμε ένα βέλτιστο PSP δοσολογία θεραπείας και το χρονικό πλαίσιο. Ενώ τεσσάρων εβδομάδων από του στόματος κατανάλωση PSP στα 200 mg /kg απέτυχαν να παράγουν διαφορές στην ανάπτυξη PIN, πλήρης αναστολή του σχηματισμού του όγκου του προστάτη επιτεύχθηκε μετά από 20 εβδομάδες του στόματος PSP σίτιση στα 300 mg /kg. Εν τω μεταξύ, η καταστολή του σχηματισμού PIN από το PSP πρότεινε, επίσης, ότι η χημειοπροληπτική επίδραση του PSP μπορεί να οφείλεται σε καταστολή από την έναρξη του όγκου σε πρώιμο στάδιο. Η εξαιρετικά χαμηλή τοξικότητα και το πολύ ισχυρός αντι-CSC ΔΑΜ PSP περαιτέρω αξιολόγηση του chemopreventive αποτέλεσμα σε ανθρώπινες κλινικές δοκιμές.

Συνοπτικά, έχουμε επιδείξει, για πρώτη φορά, ότι η θεραπεία με PSP όχι μόνο αναστέλλει ιδιότητες CSC, αλλά και καταστέλλει αποτελεσματικά το σχηματισμό όγκων του προστάτη. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι το PSP μπορεί να είναι ένας αποτελεσματικός παράγοντας για χημειοπροφύλαξη του καρκίνου του προστάτη.

Υλικά και Μέθοδοι

Polysaccharopeptide (PSP)

PSP εξάγεται από Yun-Zhi παρασχέθηκε ευγενώς από τον Wonder Φυτική Health Products, Ltd. Η σκόνη PSP διαλύθηκε σε αυτόκλειστο νερό Milli Q σε συγκέντρωση 30 mg /ml με ανάμιξη σε έναν περιστροφέα στους 4 ° C όλη τη νύκτα. Το διάλυμα PSP φυλάχθηκε στους 4 ° C. Για τη μελέτη κυτταρικής καλλιέργειας, απόθεμα PSP αποστειρώθηκε με διήθηση 0,2 μm πριν από την χρήση. Στη μελέτη ζώο, PSP τροφοδοτήθηκε κατευθείαν σε ποντικούς.

Κυτταρικές σειρές και συνθήκες καλλιέργειας

Ο καρκίνος του προστάτη κυτταρικές γραμμές PC-3 και DU145 (ATCC, Rockville, MD) διατηρήθηκαν σε RPMI 1640 μέσο (Invitrogen, Carlsbad, CA) συμπληρωμένο με 1% (w /v) πενικιλλίνη-στρεπτομυκίνη (Invitrogen, Carlsbad, CA) και 5% εμβρυϊκό βόειο ορό (Invitrogen, Carlsbad, CA). Όλες οι κυτταρικές σειρές διατηρήθηκαν στους 37 ° C σε ένα 5%

2 περιβάλλοντος CO. Λουσιφεράσης που εκφράζουν PC-3 κυτταρική γραμμή δημιουργήθηκε σε προηγούμενη μελέτη μας.

TgMAP μοντέλο όγκου του προστάτη

TgMAP C57 /BL6 ποντίκια την εβδομάδα 8 και 14 χορηγήθηκαν με PSP στα 200 mg /kg για 4 εβδομάδες (η = 5) ή 300 mg /kg για 20 εβδομάδες (n = 5), αντιστοίχως από του στόματος καθετηριασμό τροφοδοσία (5 ημέρες την εβδομάδα). Η ομάδα ελέγχου τράφηκαν με νερό μόνο για την ίδια χρονική περίοδο. Οι ποντικοί θυσιάστηκαν (στην ηλικία των 20 εβδομάδων για την ομάδα θεραπείας των 200 mg /kg και 28 εβδομάδες για τους /Kg ομάδα αγωγής 300 mg) και του προστάτη ιστοί συλλέχθηκαν, σταθεροποιήθηκαν σε 10% φορμαλίνη και εγκλείστηκαν σε παραφίνη. Το σύνολο του προστάτη τεμαχίστηκε σε τομές πάχους 4 μm και ένα στα πέντε διαδοχικές τομές βάφτηκε με Η &? Ε. ιστολογική εξέταση διεξήχθη από τον Dr. K.W. Chan (παθολόγος, HKU). Στατιστική διαφορά προσδιορίστηκε με την ακριβή δοκιμή του Fisher και θεωρήθηκε ως σημαντικό αν p & lt? 0,05. ηθική των ζώων εγκρίθηκε από την επιτροπή για την χρήση ζώντων ζώων για τη διδασκαλία και την έρευνα (CULATR) με την έγκριση όχι. του 1694-1608. Όλες οι διαδικασίες χειρισμού των ζώων διεξήχθησαν σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές της Επιτροπής σχετικά με τη χρήση των ζώντων ζώων στη διδασκαλία και την έρευνα (CULATR), το Πανεπιστήμιο του Χονγκ Κονγκ.

σφαιροειδές δοκιμασία σχηματισμού

Η δοκιμασία σχηματισμού σφαιροειδές τροποποιήθηκε από προηγουμένως αναφερθεί πρωτοκόλλου [36]. Εν συντομία, κύτταρα προστάτη (200 κύτταρα ανά γραμμή) σπάρθηκαν σε 12 φρεατίων πολυΗΕΜΑ (Sigma) -επικαλυμμένα πλακών. Τα κύτταρα αναπτύχθηκαν σε ϋΜΕΜ μέσο /F12 (Invitrogen, Carlsbad, CA) για 14 ημέρες συμπληρωμένο με 4 μg /mL ινσουλίνη (Sigma), Β27 (Invitrogen), 20 ng /ml EGF (Sigma), και 20 ng /ml βασικό FGF (Invitrogen) με PSP στα 250 μg /mL και 500 μg /mL. Για σειριακή διέλευση του πρωτογενούς σφαιρών, οι πρωτογενείς σφαίρες υπέστησαν επεξεργασία με PSP για τις παραπάνω δόσεις για 72 ώρες και στη συνέχεια συλλέγονται, διαχωρίστηκαν με θρυψίνη, και επαναιωρήθηκαν σε μέσο DMEM /F12 με τα παραπάνω συμπληρώματα. Κάθε πείραμα επαναλήφθηκε εις τριπλούν, και κάθε σημείο δεδομένων αντιπροσωπεύει τη μέση και τυπική απόκλιση σε. Στατιστική διαφορά προσδιορίστηκε με Μαθητή

t-test

και θεωρήθηκε ως σημαντικό αν p & lt?. 0.05

Η βιωσιμότητα των κυττάρων δοκιμασία

Η βιωσιμότητα των κυττάρων κατά την αγωγή PSP μετρήθηκε με ένα 3 – (4,5-διμεθυλ θειαζολ-2-υλ) -2,5-διφαινυλ τετραζόλιο βρωμίδιο (ΜΤΤ) όπως περιγράφηκε προηγουμένως [37]. Εν συντομία, τα κύτταρα σπάρθηκαν σε πλάκες 96-φρεατίων και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με διαφορετικές συγκεντρώσεις του PSP για τον υποδεικνυόμενο χρόνο. Στο τέλος της θεραπείας, ΜΤΤ (Sigma, St. Louis, ΜΟ) προστέθηκε σε κάθε φρεάτιο, και τα φρεάτια επωάστηκαν για 4 ώρες σε RT. DMSO προστέθηκε στη συνέχεια σε κάθε φρεάτιο για να διαλυθούν οι κρύσταλλοι φορμαζάνης. Η πλάκα επωάστηκε για περαιτέρω 5 λεπτά σε RT, και η οπτική πυκνότητα (OD) μετρήθηκε σε μήκος κύματος 570 nm σε Labsystem Multiscan αναγνώστη μικροπλάκας (Merck Eurolab, Dietikon, Ελβετία). Όλα τα μεμονωμένα φρεάτια αναλύθηκαν εις τριπλούν. Το ποσοστό της κυτταρικής βιωσιμότητας παρουσιάστηκε ως ο λόγος OD μεταξύ των επεξεργασμένων και μη επεξεργασμένων κυττάρων στις δεικνυόμενες συγκεντρώσεις.

έχουν Western Blotting

Λεπτομερείς πειραματικές διαδικασίες έχουν περιγραφεί προηγουμένως [37]. Εν συντομία, τα κύτταρα λύθηκαν με ρυθμιστικό RIPA (50 mM Tris-HCl ρΗ 8,0, 150 mM NaCl, 0,5% δεσοξυχολικό οξύ, 1% ΝΡ-40, 0.1% SDS) με αναστολείς πρωτεάσης (1 mg /ml απροτινίνης, 1 mg /ml λευπεπτίνη, 1 mM PMSF) και οι συγκεντρώσεις πρωτεΐνης προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας ένα D

C Protein Assay Kit (Bio-Rad, Hercules, CA). Οι πρωτεΐνες διαχωρίστηκαν σε SDS-πήκτωμα πολυακρυλαμιδίου με ηλεκτροφόρηση και στη συνέχεια μεταφέρθηκαν πάνω σε μεμβράνη Hybond-P PVDF (Amersham Biosciences, Piscataway, NJ). Οι μεμβράνες μπλοκαρίστηκαν με 10% μη λιπαρό ξηρό γάλα σε ΤΒδ-Τ ή 3% άπαχο ξηρό γάλα σε TBS και επωάστηκαν με πρωτεύοντα αντισώματα σε θερμοκρασία δωματίου κατά Akt (Ser 473), Bcl-2, σηματοδότηση PARP (Cell, Technology Inc, Beverly, ΜΑ), CD133 (Miltenyi Biotec, Auburn, CA), CD44, β-κατενίνης και β-ακτίνης (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου. Μετά από πλύσιμο με TBS-T, η μεμβράνη επωάστηκε με IgG δευτερογενή αντισώματα είτε αντι-ποντικού ή αντι-κουνελιού, και τα σήματα απεικονίστηκαν χρησιμοποιώντας το ECL συν κηλίδωση Western σύστημα (Amersham, Piscataway, NJ).

ανάλυση

τα κύτταρα κυτταρικού κύκλου σταθεροποιήθηκαν με 1 ml παγωμένης αιθανόλης 70% στους 4 ° C. Μετά τη σταθεροποίηση, τα κυτταρικά ιζήματα συλλέχθηκαν με φυγοκέντρηση, επαναιωρήθηκαν με 500 μΐ PBS, και στη συνέχεια επωάστηκαν στους 4 ° C την ημέρα πριν από την εκτέλεση κυτταρομετρία ροής. Την επόμενη ημέρα, τα κύτταρα βάφτηκαν με ιωδιούχο προπίδιο (50 μg /ml) και RNase (1 μg /ml) για 30 λεπτά. Η ανάλυση κυτταρικού κύκλου εκτελέσθηκε με κυτταρομετρία ροής αναλυτή προφίλ ΕΠΗ και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό ModFit LT2.0 (Coulter, Miami, FL).

ορθοτοπική εμφύτευση του PC-3-Luc κύτταρα

Το ορθοτοπικό μοντέλο καθιερώθηκε με διαδικασίες που περιγράφηκαν προηγουμένως [38]. Εν συντομία, οκτώ εβδομάδων CB-17 ποντίκια SCID αναισθητοποιήθηκαν και τοποθετήθηκαν κάτω από ένα ανατομικό μικροσκόπιο. Μια τομή κατά τη μέση γραμμή της κοιλίας έγινε, εκθέτοντας τον προστάτη ραχιαία στη βάση της κύστης. Ίσες ποσότητες των βιώσιμων PC3-Luc κύτταρα (2.5 × 10

4) με ή χωρίς προηγούμενη επεξεργασία PSP εγχύθηκαν στην ραχιαία προστάτες των ποντικών. Τα όργανα αντικαταστάθηκαν, και η κοιλία έκλεισε. ανάπτυξη του όγκου παρακολουθήθηκε με μέτρηση της βιοφωταύγειας σήμα κάθε δύο εβδομάδες για έξι εβδομάδες μετά την εμφύτευση του όγκου. Οι ποντικοί θυσιάστηκαν στο τέλος του πειράματος και του προστάτη ιστοί συλλέχθηκαν για φυσική εξέταση. Στατιστική διαφορά προσδιορίστηκε από δύο-ουρά

t-test

και θεωρήθηκε σημαντική αν p & lt? 0,05. Όλες οι χειρουργικές και ζωικών διαδικασίες χειρισμού διεξήχθησαν σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές της Επιτροπής σχετικά με τη χρήση των ζώντων ζώων στη διδασκαλία και την έρευνα (CULATR), το Πανεπιστήμιο του Χονγκ Κονγκ.