Αφηρημένο

βλαστικές μεταλλάξεις στο

BRCA1

και

BRCA2

γονίδια συμβάλλουν σε περίπου 18% των κληρονομικών καρκίνων των ωοθηκών που παρέχουν κατ ‘εκτίμηση κινδύνου ζωής από 15% έως 50%. Μια μεταβλητή συχνότητα εμφάνισης μεταλλάξεων έχει αναφερθεί για αυτά τα γονίδια σε περιπτώσεις καρκίνου των ωοθηκών από διαφορετικούς πληθυσμούς. Στην Ελλάδα, έξι μεταλλάξεις στο

BRCA1

αντιπροσωπεύουν το 63% του συνόλου των μεταλλάξεων ανιχνεύθηκε σε δύο

BRCA1

και

BRCA2

γονίδια. Αυτή η μελέτη είχε ως στόχο να προσδιορίσει τον επιπολασμό της

BRCA1

μεταλλάξεις σε μια ελληνική ομάδα των 106 οικογενή ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών που είχαν ισχυρό οικογενειακό ιστορικό ή metachronous καρκίνου του μαστού και 592 σποραδικές περιπτώσεις καρκίνου των ωοθηκών. Όλα τα 698 ασθενείς υποβλήθηκαν σε διαλογή ως προς τις έξι επαναλαμβανόμενες Ελληνικά μεταλλάξεις (συμπεριλαμβανομένων μεταλλάξεων ιδρυτής c.5266dupC, p.G1738R και τις τρεις μεγάλες διαγραφές του εξονίου 20, εξώνια 23-24 και το εξόνιο 24). Σε οικογενείς περιπτώσεις, η

BRCA1

γονίδιο συνεπώς διαλογή για τα εξώνια 5, 11, 12, 20, 21, 22, 23, 24. Μια δηλητηριώδη

BRCA1

μετάλλαξη βρέθηκε σε 43/106 (40,6%) των οικογενειακών περιπτώσεων καρκίνου και 27/592 (4,6%) των σποραδικών περιπτώσεων. Η παραλλαγή του αγνώστου p.V1833M κλινική σημασία ταυτοποιήθηκε σε 9/698 ασθενείς (1,3%). Η πλειοψηφία των

BRCA1

φορείς (71,2%) παρουσίασε μια υψηλής ποιότητας ορώδες φαινότυπο. Ο εντοπισμός μιας μετάλλαξης στο

BRCA1

γονιδίων μεταξύ του μαστού ή /και των οικογενειών καρκίνου των ωοθηκών είναι σημαντική, καθώς επιτρέπει φορείς να λάβουν προληπτικά μέτρα. Όλοι οι ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών με ορώδες φαινότυπο θα πρέπει να θεωρείται για γενετικό έλεγχο. Περαιτέρω μελέτες δικαιολογείται να καθοριστεί η συχνότητα των μεταλλάξεων στο υπόλοιπο του

BRCA1

γονίδιο, το

BRCA2

γονίδιο, και άλλα νέα γονίδια προδιάθεσης για καρκίνο του μαστού και των ωοθηκών.

Παράθεση: Σταυροπούλου AV, Fostira F, ΠΕΡΤΕΣΗ Μ, Tsitlaidou Μ, Βουτσινά GE, Τριανταφυλλίδου O, et al. (2013) Η επικράτηση του

BRCA1

Μεταλλάξεις στο οικογενειακό και σποραδικές ελληνικές περιπτώσεις καρκίνου των ωοθηκών. PLoS ONE 8 (3): e58182. doi: 10.1371 /journal.pone.0058182

Επιμέλεια: Paolo Peterlongo, IFOM, Fondazione Istituto di FIRC Oncologia Molecolare, Ιταλία

Ελήφθη: 26 Νοεμβρίου 2012? Αποδεκτές: 31ης Γενάρη 2013? Δημοσιεύθηκε: 11 Μαρτίου 2013

Copyright: © 2013 Σταυροπούλου et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Οι συγγραφείς δεν έχουν καμία υποστήριξη ή χρηματοδότηση για να αναφέρετε

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ο καρκίνος των ωοθηκών είναι ένα από τα υψηλότερα θνησιμότητας βαθμολογία κακοήθειες. , μια πτυχή που αποδίδεται κατά κύριο λόγο στην προχωρημένο στάδιο κατά τη διάγνωση. Παρά το γεγονός ότι έχουν νέα γονίδια προδιάθεσης έχουν εντοπιστεί τα τελευταία χρόνια, οι σημαντικοί παίκτες για την ευαισθησία του καρκίνου των ωοθηκών είναι ακόμα το γνωστό

BRCA1

και

BRCA2

γονίδια. Φορείς των κληρονομικών μεταλλάξεων στο

BRCA1

και

BRCA2

γονιδίων αντιμετωπίζουν ισόβιο κίνδυνο καρκίνου των ωοθηκών από 35-60% (μέση ηλικία διάγνωσης 50 χρόνια) και 12-25% (μέσος όρος ηλικίας των διάγνωση των 60 ετών), αντίστοιχα, και επίσης αυξημένο κίνδυνο σάλπιγγας και περιτοναϊκή καρκινώματα [1] – [3].

BRCA1

και

BRCA2-

συνδέονται κακοήθειες των ωοθηκών έχουν μια ξεχωριστή κλινικό φαινότυπο, η πλειοψηφία των οποίων είναι υψηλής ποιότητας ορώδες, προχωρημένο καρκίνωμα σταδίου [4], ενώ γενικά να συνδέεται με τη συνολική επιβίωση πλέον [5], [6]. Επιπλέον, η

Κατάσταση BRCA1 /2

μετάλλαξη ενός ασθενή με καρκίνο των ωοθηκών μπορεί να είναι μια σημαντική πτυχή σε σχέση με την απόφαση της χημειοθεραπείας?

BRCA1 /2

φορείς εμφανίζουν αυξημένη ευαισθησία σε θεραπεία με βάση την πλατίνα [6], [7], καθώς και για την πολυ-ΑΟΡ-ριβόζη αναστολείς πολυμεράσης [8].

κληρονομικό καρκίνο των ωοθηκών μπορεί επίσης να εμφανιστεί στα πλαίσια του συνδρόμου Lynch, η οποία προκαλείται από κληρονομούμενες μεταλλάξεις βλαστικής γραμμής εντός των γονιδίων MMR. Το σωρευτικό κίνδυνο καρκίνου των ωοθηκών σε MMR φορείς μετάλλαξης υπολογίζεται σε 10%, ενώ ιστολογικά αυτοί οι όγκοι είναι του υποτύπου ενδομητριοειδές στις περισσότερες περιπτώσεις [9].

κληρονομικό καρκίνο των ωοθηκών είναι πιθανόν να υποτιμηθεί, δεδομένου ότι πρόσφατες μελέτες τονίζουν νέα γονίδια ευαισθησίας (

RAD51C, RAD51D, PALB2

) που μπορεί να προδιαθέτουν για καρκίνο των ωοθηκών, αλλά η ακριβής συχνότητα τους είναι ακόμα υπό έρευνα [10] – [13]. Up-to τεχνολογίες ημερομηνία αλληλουχίας που παρέχουν την ευκαιρία να δοκιμάσουν μαζικά πολλαπλές στοχευμένες γονίδια έχουν ήδη εφαρμοστεί στη γενετική του καρκίνου των ωοθηκών. Το πιο ενδιαφέρον είναι το τεστ βασίζεται στην Broca τσιπ, μια ιδιαίτερα ευαίσθητη ομάδα γονιδίων καταστολής 21 του όγκου, η οποία δοκιμάζεται 360 περιπτώσεις καρκίνου των ωοθηκών και προσδιορίζονται με επιτυχία επιβλαβείς μεταλλάξεις σε 12 γνωστά γονίδια ευαισθησίας των ωοθηκών, με σημαντικό ποσοστό αντιπροσωπεύεται από

BRCA1

και

BRCA2

μεταλλάξεις [13]

Η επικράτηση του

BRCA1

και

BRCA2

μεταλλάξεις σε ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών ποικίλλει μεταξύ των πληθυσμών.? μια αρκετά διεξοδική μελέτη πληθυσμού στην Βόρεια Αμερική καταδεικνύει μια συχνότητα 13-15% του βλαστικής σειράς

BRCA1 /2

μεταλλάξεις σε σποραδικές περιπτώσεις ωοθηκών [14], [15]. Η επικράτηση των μεταλλάξεων μπορεί να αυξηθεί μέχρι και 30-40% σε πληθυσμούς όπως οι Ασκενάζι Εβραίοι, όπου μια σειρά από μεταλλάξεις ιδρυτή είναι εμφανής [16].

Αν και το ελληνικό πληθυσμό χαρακτηρίζεται από γενετική ετερογένεια, εκτεταμένη μας 15 -year έρευνα σχετικά με κληρονομικό καρκίνο μαστού /ωοθηκών ανέδειξε την ύπαρξη 6 μεταλλάξεις επαναλαμβανόμενες συμπεριλαμβανομένων τεσσάρων ιδρυτής (c.5266dupC, p.G1738R, delex20, delex24) αντιπροσωπεύοντας το 63% του συνόλου των μεταλλάξεων που προσδιορίζονται στο

BRCA1 /2

γονίδια και το 73% των μεταλλάξεων που προσδιορίζονται στο

BRCA1

μόνο [17] – [21]. Αυτή η διπολική έργο επικεντρώνεται στην επικράτηση του

BRCA1

μεταλλάξεις μεταξύ 106 οικογενειακό και 592 σποραδικές ελληνικές περιπτώσεις καρκίνου των ωοθηκών με την ταυτόχρονη συσχέτιση των κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά του όγκου.

Υλικά και Μέθοδοι

ασθενής ομάδα μελέτης

Η ομάδα μελέτης αποτελούνταν από ασθενείς με επιθηλιακό καρκίνο των ωοθηκών που είχαν προσληφθεί από διάφορα νοσοκομεία σε όλη την Ελλάδα σε συνεργασία με την Ελληνική Συνεργαζόμενη Ογκολογική ομάδα (HeCOG) μεταξύ των ετών 2000 και 2012. Αντίστοιχη δημογραφικά, κλινικοπαθολογοανατομικές δεδομένα ήταν εγγραφεί για την πλειοψηφία των ασθενών που προσλαμβάνονται στο πλαίσιο των κλινικών υπηρεσιών σε HeCOG-συμβεβλημένα νοσοκομεία. Δείγματα από 698 ασθενείς συνολικά, που επιλέγεται με βάση τη διάγνωση του καρκίνου των ωοθηκών, αναλύθηκαν για μεταλλάξεις σε

BRCA1

. Οι 698 ασθενείς ταξινομήθηκαν ως: (α) Οικογενή περιπτώσεις: 106 ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών με τουλάχιστον μία συγγενής πρώτου βαθμού παρουσιάζονται με είτε μαστού ή /και ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών ή του καρκίνου παρουσιάζονται με καρκίνο του μαστού και των ωοθηκών. 53/106 (50%) ασθενείς είχαν τόσο του μαστού και καρκίνο των ωοθηκών, 29 εκ των οποίων είχαν οικογενειακό ιστορικό και 24 χωρίς οικογενειακό ιστορικό. Η μέση ηλικία διάγνωσης ήταν 49 χρόνων, που κυμαίνονται 24 έως 72 ετών, και (β) σποραδικές περιπτώσεις: 592 περιπτώσεις καρκίνου των ωοθηκών είχαν συμπεριληφθεί με βάση τη διάγνωση του καρκίνου του μόνο των ωοθηκών και δεν είχαν οικογενειακό ιστορικό. Η μέση ηλικία διάγνωσης ήταν 59,1 χρόνια, που κυμαίνονται 17-82 ετών.

Όλοι οι ασθενείς είχαν υπογράψει ένα έντυπο συγκατάθεσης που επιτρέπει τη χρήση του βιολογικού υλικού τους για ερευνητικούς σκοπούς και την έρευνα νοσοκόμα εξήγησε το σκοπό της μελέτη για να τους? η πιθανότητα αυξημένου κινδύνου καρκίνου των ωοθηκών (και ενδεχομένως άλλους καρκίνους) σε μέλη της οικογένειας εξηγήθηκαν λεπτομερώς. Οι ασθενείς που δώρισε 10 ml αίματος για γενετική ανάλυση καθώς και συμπλήρωσαν ένα ερωτηματολόγιο που περιέχει λεπτομέρειες σχετικά με άλλες μορφές καρκίνου σε μέλη της οικογένειας. Σε περιπτώσεις όπου εντοπίστηκε μια μετάλλαξη, η διάγνωση και η οικογενειακή ιστορία επιβεβαιώθηκε και ανάλυση διαχωρισμού εκτελέστηκε. Επιπλέον, η οικογένεια συγγενείς του φορείς μετάλλαξης ενημερώθηκαν σε εξειδικευμένες συμβουλευτικές συνεδρίες και αν συναινέσει στη γενετική ανάλυση, που ελέγχθηκαν για τη συγκεκριμένη μετάλλαξη. έκθεση ιστολογία, όπου αυτά είναι διαθέσιμα, δόθηκε από το νοσοκομείο καταγωγής, από την οποία παρέχονται πληροφορίες σχετικά με τον τύπο του όγκου, την ταξινόμηση και σταδιοποίηση εκχυλίζεται. Η μελέτη εγκρίθηκε από τις Βιοηθικής Επιτροπές του IRB του Νοσοκομείο Παπαγεωργίου της Θεσσαλονίκης και το ΕΚΕΦΕ «Δημόκριτος».

Μετάλλαξη Ανάλυση

Σύνολο γονιδιακό DNA απομονώθηκε από λεμφοκύτταρα περιφερικού αίματος μετά τη διαδικασία εκχύλισης άλατος . DNA ποσοτικοποίηση εκτιμήθηκε με απορρόφηση υν χρησιμοποιώντας ένα Nanodrop ™ ND-1000 φασματοφωτόμετρο (Thermo Fisher Scientific, MA, USA).

BRCA1

(NM_007294.3) διαλογής μετάλλαξη βασίστηκε σε ένα ιεραρχικό πρωτόκολλο πληθυσμό ειδικά περιγράφηκε προηγουμένως (18), με στόχο να μειωθεί ο χρόνος και το κόστος που εμπλέκονται. Δύο διαφορετικά πειραματικά πρωτόκολλα σχεδιάστηκαν: Για σποραδικές περιπτώσεις, διαλογή έγινε μόνο για τις έξι πιο κοινές

BRCA1

μεταλλάξεις εντοπίστηκαν στον ελληνικό πληθυσμό. Το εξόνιο 20 του

BRCA1

γονιδίου (που περιλαμβάνει τις μεταλλάξεις ιδρυτής: p.G1738R & amp? C.5266dupC και η περιοδική μετάλλαξη p.R1751X) αναλύθηκε με άμεση αλληλούχιση, ενώ οι τρεις Έλληνες ιδρυτής γονιδιωματικής αναδιατάξεις που περιλαμβάνουν τα εξώνια 20 , 23 και 24 αξιολογήθηκαν από τρεις επιμέρους διαγνωστικά PCRs [20] (ΠΕΡΤΕΣΗ et al., στο παρασκεύασμα). Επιπρόσθετα, σε οικογενείς περιπτώσεις έγινε πλήρης αλληλούχιση των εξονίων 5, 11, 12, 20, 21, 22, 23, 24 (τα οποία καλύπτουν το 70% της αλληλουχίας κωδικοποίησης του γονιδίου). Οι περιοχές αυτές περιέχουν όλες τις

BRCA1

μεταλλάξεις που είχαν διαπιστωθεί στον ελληνικό πληθυσμό. Όλες οι ενισχύσεις PCR διεξήχθησαν σε ένα Veriti 96 φρεατίων Thermal Cycler (Applied Biosystems, Foster City, CA). καθαρισμός του προϊόντος PCR εκτελέστηκε χρησιμοποιώντας ενα κενό σύστημα καθαρισμού υπερδιήθησης, όπου τα δείγματα PCR μεταφέρονται σε μία πλάκα φίλτρου με μια ρητίνη μεμβράνη που συγκρατεί τα προϊόντα PCR απαλλαγμένα από μη ενσωματωμένα νουκλεοτίδια και εκκινητές (Macherey-Nagel, Düren, Germany). Οι αντιδράσεις προσδιορισμού αλληλουχίας πραγματοποιήθηκαν με χρήση του v.3.1 BigDye Terminator Cycle Sequencing kit (Applied Biosystems, Foster City, CA) και τα προϊόντα της PCR υποβλήθηκαν σε ηλεκτροφόρηση σε ΑΒΙ Prism® 3130xl Genetic Analyzer. Οι αλληλουχίες που λήφθηκαν ευθυγραμμισμένες, χρησιμοποιώντας λογισμικό Sequencher® PC (γονίδιο κωδικοποιεί, USA), με αλληλουχίες αναφοράς από Genbank (NG_005905.2) και εξετάστηκαν για την παρουσία μεταλλάξεων. Μετά την αναγνώριση μετάλλαξης, μια ανεξάρτητη δείγμα αίματος από τον ασθενή και η μετάλλαξη επιβεβαιώθηκε με αμφίδρομη ανάλυση αλληλουχίας. Επιπλέον στατιστική ανάλυση έγινε χρησιμοποιώντας το τεστ chi-square

Real-Time PCR (αλληλόμορφων Διακρίσεων)

αλληλόμορφο διάκριση της c.5497G & gt?. Α (p.V1833M) παραλλαγή στο σποραδικές κοόρτη εκτελέστηκε με δοκιμασία TaqMan® χρησιμοποιώντας ένα Mx3000P ™ PCR πραγματικού χρόνου System (Stratagene, USA) και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας την ανάλυση τελικού σημείου διάκριση αλληλόμορφων με τα δεδομένα που συλλέγονται στο τέλος της διαδικασίας PCR. Κάθε αντίδραση περιελάμβανε ένα ζεύγος εκκινητών χρησιμοποιείται για να ενισχύσει το προϊόν 106 bp και δύο φθορίζοντες ανιχνευτές, επισημάνθηκαν με δύο φασματικά διακριτές χρωστικές, ήτοι FAM (G) και Hex (Α), επιτρέποντας γονοτυπική των δύο δυνατών παραλλαγών στο single-νουκλεοτιδίου πολυμορφισμός ( SNP) θέση σε μια αλληλουχία εκμαγείου στόχου. Η ΚΑΠΑ PROBE FAST Οικουμενική qPCR κιτ κύριο μίγμα (KapaBiosystems) χρησιμοποιήθηκε, που περιέχει όλα τα συστατικά εκτός από εκκινητές και ανιχνευτές. χρωστική αναφοράς ROX προστέθηκε επιπλέον σε κάθε μείγμα αντίδρασης. Διεξήχθη ενίσχυση PCR σε μία αντίδραση 20 μΐ χρησιμοποιώντας 50 ng γενωμικού DNA, και ένα πρωτόκολλο fast-2-βήμα ποδηλασία με τους ακόλουθους όρους: ενεργοποίηση του ενζύμου στους 95 ° C για 3 λεπτά, και 40 κύκλους μετουσίωσης στους 95 ° C για 3 sec και ανασύνδεσης /επέκτασης στους 60 ° C για 15 sec. Ανάλυση μετα-τρέξιμο προσδιορίζεται είτε ένα κανονικό ομοζυγώτη (δείγματα που έχουν και τα δύο αλληλόμορφα κανονική) ή ετεροζυγώτες (δείγματα που έχουν φυσιολογικό αλληλόμορφο καθώς και το

BRCA1

αλληλική παραλλαγή c.5497G & gt? Α). Η τιμή Ct ενός αλληλο-ειδικό ανιχνευτή αναδεικνύει την παρουσία της εξεταζόμενης SNP. Ετεροζυγωτά επιβεβαιώθηκε με άμεση αλληλούχιση του DNA. Κατώφλι φθορισμού (που χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό των τιμών Ct) ρυθμίστηκε από την έναρξη διορθωμένη κανονικοποιημένο φθορισμό (DRN). Ανιχνευτή και εκκινητή ακολουθίες που χρησιμοποιούνται είναι διαθέσιμα από τους συγγραφείς κατόπιν αιτήματος.

Αποτελέσματα

106 οικογενειακό και 592 σποραδικά κρούσματα καρκίνου των ωοθηκών αναλύθηκαν για να προσδιοριστεί η συχνότητα των έξι πιο κοινές μεταλλάξεις του

BRCA1

γονιδίου στον ελληνικό πληθυσμό, δηλαδή c.5266dupC, p.Gly1738Arg, p.Arg1751X, διαγραφή εξόνιο 20 (c.5256_5277 + 3179del3200), απαλοιφή του εξωνίου 24 (c.5468-285_5592 + 4019del4429_insCACAG) και διαγραφή και των δύο εξωνίων 23 και 24 (g.169527_180579del11052). Λαμβάνοντας υπόψη την επικράτηση μετάλλαξη μόνο των παραπάνω έξι επαναλαμβανόμενες μεταλλάξεις, υπάρχει μια σημαντική διαφορά μεταξύ της οικογενούς (25,5%, 27/106) και σποραδικές περιπτώσεις (4,4%, 26/592) (p-value & lt? 0,0001). Οικογενείς περιπτώσεις υποβλήθηκαν σε περαιτέρω διαλογή για μεταλλάξεις σε όλες τις

BRCA1

εξώνια όπου μια μετάλλαξη στο παρελθόν ήταν που προσδιορίζονται στον ελληνικό πληθυσμό (εξόνια 5, 11, 12, 20, 21, 22, 23, 24), την αύξηση της επικράτησης μετάλλαξη στο Αυτή η ομάδα με 40,6% (43/106). Όλες οι μεταλλάξεις που βρέθηκαν, μαζί με την ηλικία των μεταφορέων έναρξης και ιστολογία, φαίνονται στον Πίνακα 1 για οικογενείς περιπτώσεις και στον Πίνακα 2 για σποραδικές περιπτώσεις. Είναι ενδιαφέρον, μια εξαιρετικά σπάνια παραλλαγή του αγνώστου κλινικής σημασίας (VU για),

BRCA1

p.V1833M (rs80357268), βρέθηκε σε 9 ασθενείς (1,3%) από το 698 στο σύνολο. Επικράτηση στην σποραδική ομάδα, διαλογή με PCR πραγματικού χρόνου, ήταν 0,85% (5/592), ενώ 3,7% (4/106) στην οικογενή ομάδα, διαλογή με άμεση αλληλούχιση του εξονίου 24 (Πίνακας 3). Είναι ενδιαφέρον ότι, όλοι οι ασθενείς οικογενούς που διεξάγεται αυτή την ειδική παραλλαγή είχε οικογενειακό ιστορικό καρκίνου του μαστού ή /και του καρκίνου των ωοθηκών. Η ανάλυση διαχωρισμού γίνεται σε μία από τις οικογένειες που παρουσιάζουν θετικό αποτέλεσμα έδειξε ότι η παραλλαγή p.V1833M συν-διαχωρίζονται με τη νόσο, υποδεικνύοντας μια πιθανή επιβλαβή επίδραση (Εικ. 1). Μια ευρεία διασταυρωμένης επικύρωσης, με βάση βιοχημικές και με βάση τα κύτταρα μεταγραφική δοκιμασία, των παραλλαγών εσφαλμένου νοήματος ΒΑΟΤ τόνισε τη σοβαρή αναδίπλωση ελάττωμα και η μειωμένη επίδραση στην μεταγραφή της παραλλαγής p.V1833M [22]. Λόγω της έλλειψης αυτής της παραλλαγής δεν υπάρχουν άλλα στοιχεία διαχωρισμού βρέθηκαν στην βιβλιογραφία, ωστόσο όλα τα διαθέσιμα

in vitro

και

in silico

δεδομένων αξιολόγησης συμφωνήσουν την κατάταξή της ως επιβλαβή [23] – [25 ]. Επιπλέον, δεν συχνότητα αλληλίου παρατηρήθηκε σε dbSNP. Στην παρούσα μελέτη, οι φορείς αυτής της παραλλαγής που δεν περιλαμβάνονται στα αποτελέσματα μας ως θετικά για μετάλλαξη, όπως αισθανόμαστε είναι πιο σταθερή κλινικά και λειτουργικά δεδομένα που απαιτούνται για να επιβεβαιώνεται η παθογένεια του.

ροζ κύκλοι δείχνουν τις γυναίκες με καρκίνο των ωοθηκών . Το σύμβολο συν δεικνύει την παρουσία της παραλλαγής με την αναφερόμενη πρόσωπο, ενώ το αρνητικό πρόσημο υποδηλώνει την απουσία της παραλλαγής. OVCA = καρκίνο των ωοθηκών.

Η

Η

Η ηλικία της διανομής εμφάνιση στο

BRCA1

φορείς σε σύγκριση με το συνολικό οικογενείς περιπτώσεις, καθώς και για το

BRCA1

μεταφορέων σε σχέση με τις συνολικές σποραδικές περιπτώσεις φαίνεται στο Σχ. 2. Η μέση ηλικία έναρξης στο

BRCA1

φορείς στην οικογενειακή ομάδα ήταν 48,5 χρόνια, ενώ στο σύνολο της ομάδας ήταν 49 χρόνων, με μια σειρά από 24-72 ετών. Στην σποραδικές ομάδα, μέση ηλικία έναρξης της νόσου ήταν 54,2 χρόνια για τους μεταφορείς και 59,1 χρόνια στη συνολική ομάδα, με μια σειρά από 17-82 ετών. Μεταξύ των 106 οικογενή ασθενείς που εξετάστηκαν, 53 έχουν αναπτυχθεί τόσο του μαστού και καρκίνο των ωοθηκών (50%). Από τους 29 ασθενείς που ανέπτυξαν τόσο του μαστού και του καρκίνου των ωοθηκών και είχαν οικογενειακό ιστορικό 14/29 (48,3%) πραγματοποιείται μια

BRCA1

μετάλλαξη, ενώ από εκείνους που δεν είχαν σαφή οικογενειακό ιστορικό 11/24 (45,8%) πραγματοποιείται μια

BRCA1

μετάλλαξη. Ωστόσο, δεν υπάρχει σημαντική διαφορά μεταξύ των δύο ομάδων (p-value 0.8593). Επίσης, η πλειοψηφία της οικογενούς (72,6%) και σποραδικές (64,6%) ομάδες που αποτελείται από το ορώδες τύπο των ωοθηκικών καρκινωμάτων. Συσχέτιση μεταξύ των μεταφορέων και του συνόλου των ομάδων και των δύο οικογενή και σποραδικά κρούσματα έδειξε ότι, σύμφωνα με άλλες μελέτες οι περισσότεροι από το

BRCA1

φορείς ήταν της ορώδες τύπου και δεν υπάρχει στατιστικά σημαντική διαφορά μεταξύ των δύο ομάδων (ρ αξίας 0,1022). Υδαρής ιστολογία παρουσιάζονται στο 78,8% του οικογενούς

φορείς BRCA1

(Πίνακας 4) και στο 61,5% των

BRCA1

μεταφορέων σε σποραδικές ομάδα (Πίνακας 5).

Α) Ηλικία κατανομής εμφάνισης μεταξύ των συνολικά 106 οικογενούς ασθενών με καρκίνο των ωοθηκών και 41 ασθενείς με

BRCA1

μετάλλαξη. Β) Ηλικία διανομής εκδήλωση μεταξύ 492/592 σποραδικών ασθενών και 27/27 ασθενείς με

BRCA1

μετάλλαξη.

Η

Η

Συζήτηση

σε αυτή τη μελέτη έχουμε καθιερώσει την επικράτηση του

BRCA1

μεταλλάξεις σε μια ομάδα 698 ασθενών Έλληνες καρκίνο των ωοθηκών, 106 εκ των οποίων ήταν οικογενείς περιπτώσεις και 592 προφανώς σποραδικές. Ταυτοποιήσαμε 70 παθογόνες μεταλλάξεις σε όλα (10%), 43 στην οικογενή κοόρτη (40,6%) και 27 στην σποραδική κοόρτη (4,6%). Για τις γνώσεις μας, αυτή είναι η πρώτη τέτοια μελέτη στον ελληνικό πληθυσμό. Μια σειρά από παρόμοιες μελέτες σε άλλους πληθυσμούς έχουν δημοσιευτεί, δίνοντας επικράτηση για

BRCA1

μεταλλάξεις σε ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών 8 με 11%. Παραλλαγή μπορεί να οφείλεται σε διάφορους λόγους, κυρίως πειραματικό σχεδιασμό και πληθυσμούς με διαφορετικούς βαθμούς γενετική ετερογένεια. Μια καναδική μελέτη του 1342 περιπτώσεις καρκίνου των ωοθηκών αποκάλυψε μια συνδυασμένη συχνότητα μετάλλαξης του 13,3% και των δύο

BRCA1

και

BRCA2,

8% των οποίων ήταν

BRCA1

[14]. Σε μια άλλη μελέτη το 11,5% του συνόλου των ωοθηκών περιπτώσεων καρκίνου στην Κολομβία αποδοθούν σε ένα μόνο

μετάλλαξης BRCA1

ιδρυτή, ενώ το 15,6% της συνολικής ομάδα ήταν θετική για μεταλλάξεις είτε στο

BRCA1

ή

BRCA2

[26]. 5,8% από μια σειρά βασισμένη στον πληθυσμό των ωοθηκών περιπτώσεων καρκίνου στη Δανία βρέθηκαν επίσης να είναι θετική για

BRCA1 /2

μεταλλάξεις [27]. 209 γυναίκες στην περιοχή Tampa Bay με διηθητικό καρκίνωμα των ωοθηκών, το 15,3% είχε μεταλλάξεις στο

BRCA1

ή

BRCA2,

εκ των οποίων 9,5% οφειλόταν σε

BRCA1

μεταλλάξεις [ ,,,0],15]. Παρομοίως, σε μια πρόσφατη μελέτη της Αυστραλίας, 8,8% (88/1001) των ασθενών με καρκίνο των ωοθηκών που εξετάστηκαν είχαν μια

BRCA1

μετάλλαξη [28]. Σε μια πολωνική μελέτη,

BRCA1

ή

BRCA2

μεταλλάξεις βλαστική βρέθηκαν στο 13,9% των διαδοχικών ασθενών με καρκίνο των ωοθηκών, εκ των οποίων το 11% οφειλόταν σε

BRCA1

[29] . Σε μια σουηδική μελέτη, 13/161 (8%) των ασθενών που βρέθηκαν να φέρουν μια

BRCA1

ή

BRCA2

μετάλλαξη, με 12/13 περιπτώσεις είναι

BRCA1

Θετικοί [30]

Τέλος, δύο μελέτες πρωτοπόρος χρησιμοποιώντας τεχνικές αλληλούχισης επόμενης γενιάς [13], [31] ανέφεραν τον επιπολασμό 18% στο

BRCA1 & amp.? BRCA2

(11,3% για το

BRCA1

) μεταλλάξεις σε ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών, ενώ ο καρκίνος Γονιδιώματος Atlas (TCGA) Δίκτυο Έρευνας ανέφεραν 14% (8,5% για το

BRCA1

) [32] .

Η συχνότητα του 10% για το

BRCA1

μεταλλάξεις που βρέθηκαν στην παρούσα μελέτη σε όλους τους ασθενείς εξετάστηκαν, ανεξάρτητα από το οικογενειακό ιστορικό, είναι συνεπής με προηγούμενες παρατηρήσεις σε άλλους πληθυσμούς. Λαμβάνοντας υπόψη το γεγονός ότι δεν είναι ολόκληρη η

BRCA1

γονίδιο προβλήθηκε, το ποσοστό αυτό είναι πιθανώς μια υποτίμηση της πραγματικής συχνότητας σε ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών στον πληθυσμό μας. Εκτιμούμε ότι η πραγματική συχνότητα μπορεί να είναι έως 20% υψηλότερες, όπως στο 85% των κοόρτης μας (592/698 ασθενείς) διαλογής περιλάμβανε μόνο την ελληνική ιδρυτή ή επαναλαμβανόμενες μεταλλάξεις, που αντιπροσωπεύουν το 73% του συνόλου

BRCA1

μεταλλάξεις παρατηρήθηκαν σε αυτό τον πληθυσμό [17] – [21]. Με βάση αυτό το σχήμα, υποστηρίζουμε τη σύσταση τουλάχιστον

BRCA1

δοκιμές για όλους τους ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών, ανεξάρτητα από το οικογενειακό ιστορικό και την ηλικία της διάγνωσης.

Το κυρίως υψηλός επιπολασμός του

BRCA1

μεταλλάξεις στην οικογενή ομάδα ασθενών μας (40,6%) τοποθετεί τους ασθενείς σε αυτή την κατηγορία (προσωπική ιστορία του καρκίνου των ωοθηκών και τουλάχιστον ένα μέλος της οικογένειας με καρκίνο του μαστού ή /και ωοθηκών, συμπεριλαμβανομένων των προσωπικών ιστορικό καρκίνου του μαστού) σε υψηλού κινδύνου ρύθμιση, κάνοντας έλεγχο για

BRCA1

μεταλλάξεις υποχρεωτική. Προηγούμενες μελέτες είναι συνεπείς με αυτή την παρατήρηση και τη σύσταση, την υποβολή εκθέσεων

BRCA1

επικράτηση μετάλλαξη σε ασθενείς με κληρονομικό καρκίνο των ωοθηκών 24-66% [33]. Σύμφωνα με άλλες μελέτες, η ηλικία έναρξης της νόσου δεν είχε συμπεριληφθεί στην κριτήριά μας για την επιλογή των ασθενών οικογενή καρκίνο των ωοθηκών. . Walsh

et al

[13] έχουν δείξει ότι & gt?. 35% των φορέων της προδιάθεσης αλληλόμορφο για τον καρκίνο των ωοθηκών είναι άνω των 60 ετών κατά τη διάγνωση

Αυτή η μελέτη έδειξε επίσης ότι η πιο κοινή φαινότυπο

BRCA1

-associated ωοθηκών καρκινώματα είναι υψηλής ποιότητας ορώδες ιστολογία και προχωρημένο στάδιο της νόσου. Άλλοι ιστολογικών τύπων παρατηρήθηκαν επίσης στο

BRCA1

φορείς, το δεύτερο πιο κοινό είναι το είδος ενδομητριοειδές, αλλά υπήρχαν επίσης σαφές κυττάρων, αδενοκαρκινώματα, αδιαφοροποίητο καρκίνωμα και άλλα είδη (Πίνακες 4,5). Πρόσφατες ιστοπαθολογικές μελέτες σχετικά με πρώιμες βλάβες στάδιο του καρκίνου των ωοθηκών σε

BRCA1

ή

BRCA2

φορείς έχουν προτείνει ότι η κύρια προέλευση των υψηλής ποιότητας ορώδες καρκίνο των ωοθηκών είναι η σάλπιγγα, που εμπλέκουν και τα δύο γονίδια ως βασικά παίκτες στη διαφοροποίηση σάλπιγγα [34] – [39]. Στη μελέτη μας, το 61,5% των

BRCA1

φορείς των σποραδικές περιπτώσεις και 78,8% των οικογενειακών υποθέσεων είχε ορώδες ιστολογία. Περαιτέρω μελέτες επί της ιστολογίας του ωοθηκικού υποτύπων καρκίνου και τα μοριακά γεγονότα που ελέγχουν την έναρξη και την πρόοδο των καρκίνων ορώδες δικαιολογείται από έναν αριθμό ερευνητικών ομάδων.

Σήμερα, ο γενετικός έλεγχος προσφέρεται κυρίως σε ασθενείς με πρώιμη έναρξη του μαστού /καρκίνο των ωοθηκών (& lt? 45 ετών) ή όταν ένα ισχυρό οικογενειακό ιστορικό είναι παρούσα, και περιλαμβάνει κυρίως την ανάλυση των

BRCA1

και

BRCA2

γονίδια. Οι κλινικές στρατηγικές παρέμβασης που προσφέρονται στους μεταφορείς που θα μειώσουν δραματικά τον κίνδυνο καρκίνου των ωοθηκών [33]. Το πιο αποτελεσματικό προληπτικό μέτρο σήμερα για τον καρκίνο των ωοθηκών σωλήνα και σάλπιγγα, είναι σαλπιγγοωοθηκεκτομή από την ηλικία των 40 ετών και μετά την ολοκλήρωση του παιδιού που φέρει. Δυστυχώς, η επιτήρηση του καρκίνου των ωοθηκών δεν έχει ακόμη αποδειχθεί αποτελεσματική [40].

Στη μελέτη μας, το 48,3% των οικογενειακών ασθενείς με καρκίνο μαστού /ωοθηκών που φέρουν

BRCA1

μετάλλαξη έχουν οικογενειακό ιστορικό . Επιπλέον, 45,8% των ασθενών του μαστού /ωοθηκών με κληρονομική

BRCA1

και

BRCA2

μεταλλάξεις δεν έχουν σαφή οικογενειακό ιστορικό οφείλεται σε μια μικρή οικογενειακή δομή, υπεροχή των ανδρών στην οικογένεια και /ή πατρική κληρονομιά, την έγκριση ή μη βιολογικό πατέρα.

BRCA1

και

BRCA2

φορείς μετάλλαξης σε αυτές τις οικογένειες είναι στο ίδιο επίπεδο κινδύνου για καρκίνο του μαστού και των ωοθηκών, όπως οι γυναίκες από οικογένειες υψηλού συχνότητα. Προς το παρόν, οι γυναίκες από τέτοιες οικογένειες χρησιμοποιούν σπάνια γενετική υπηρεσιών. Δεν υπάρχει σημαντική διαφορά μεταξύ του ποσοστού των

BRCA1

φορείς μετάλλαξης σε ασθενείς με καρκίνο του μαστού /ωοθηκών και εκείνων που δεν έχουν οικογενειακό ιστορικό. Αυτό υποστηρίζει περαιτέρω ό, τι έχει επισημανθεί από όλες τις πρόσφατες μελέτες επιπολασμού μετάλλαξη, συμπεριλαμβανομένης της παρούσας, ότι όλες οι γυναίκες με ωοθηκών, σάλπιγγα, ή περιτοναϊκή καρκίνωμα πρέπει να υποβάλλονται σε ολοκληρωμένη γενετικό έλεγχο, ανεξάρτητα από την ηλικία ή το οικογενειακό ιστορικό. Ωστόσο, η στρατηγική διαλογής που χρησιμοποιείται μέχρι τώρα, δοκιμάζοντας ένα γονίδιο σε έναν χρόνο είναι δαπανηρή, επίπονη και χρονοβόρα. Αναλύοντας πρώτα τα συνηθέστερα μεταλλαγμένες περιοχές σε κάθε πληθυσμό, παρέχει έναν πληθυσμό-ειδικό, οικονομικά αποδοτικό τρόπο για τον έλεγχο ασθενών κληρονομικό καρκίνο μαστού /ωοθηκών για μεταλλάξεις σε γονίδια προδιάθεσης. Η μελέτη αυτή προσφέρει ένα γρήγορο πρωτόκολλο, για τον έλεγχο όλων των ασθενών με καρκίνο των ωοθηκών στην Ελλάδα για μεταλλάξεις στο

BRCA1

γονίδιο. Μαζικά παράλληλη αλληλουχίας χρησιμοποιείται τώρα για να ακολουθία πολλά γονίδια ταυτόχρονα με χαμηλό κόστος.

Έχει τώρα προέκυψε ότι οι περισσότεροι ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών μεταφέρουν τον καρκίνο-μεταλλάξεις προδιαθέσεως και περισσότερα γονίδια από ό, τι εκτιμάται στο παρελθόν. Πρόσφατες μελέτες που χρησιμοποιούν τεχνολογίες αλληλουχίας επόμενης γενιάς έχουν εντοπίσει πάνω από 12 διεισδυτικότητα νέα γονίδια χαμηλής-μέσης ευαισθησίας που μπορεί να προδιαθέτουν για καρκίνο των ωοθηκών, αλλά η ακριβής συχνότητα τους είναι ακόμα υπό έρευνα [13]. Έτσι, κληρονόμησε μαστού /ωοθηκών καρκίνος είναι γενετικά πολύ ετερογενές σε σχέση με τα δύο γενετικούς τόπους και αλληλόμορφα εμπλέκονται.

Επιπλέον, παρά τις μεταλλάξεις στον καρκίνο γονίδια προδιάθεσης υπάρχουν επίσης μια σειρά από άλλες μοριακές ανωμαλίες που προκαλούν καρκίνο των ωοθηκών. Είναι κρίσιμης σημασίας να εντοπίσει αυτές τις εκτροπές που θα οδηγήσει στην ανάπτυξη νέων θεραπευτικών στρατηγικών. Το έργο Cancer Genome Atlas ανέλυσε 489 υψηλής ποιότητας ορώδες αδενοκαρκινώματα των ωοθηκών για γονιδιωματική και Γενετικής μεταβολές [32] και προσδιόρισε τρεις υποτύπους microRNA, τέσσερις υπότυποι μεθυλίωση προαγωγού, τέσσερα καρκίνος μεταγραφική υποτύπους των ωοθηκών, και ένα μεταγραφικό υπογραφή που σχετίζεται με διάρκεια επιβίωσης. Σε αντίθεση με άλλους ιστολογικούς τύπους καρκίνου των ωοθηκών, το 96% των υψηλής ποιότητας ορώδης δείγματα (HGS) -OvCa είχε ΤΡ53 μεταλλάξεις που οδηγούν σε FOXM1 υπερέκφραση και 22% των όγκων είχε βλαστικής γραμμής ή σωματικές μεταλλάξεις εις

BRCA1

και

BRCA2.

Αυτή η μελέτη έδειξε επίσης ότι

BRCA1

και

BRCA2

μεταλλάξεις είχε θετική επίδραση στην επιβίωση, ενώ BRCA1 επιγενετικώς σιγήσει περιπτώσεις έχουν χειρότερη έκβαση.

Αναγνώριση άτομα με μεταλλάξεις στα γονίδια του μαστού /ωοθηκών επιδεκτικότητα καρκίνου είναι κλινικά σημαντικές ως

έχουν BRCA1 /2

φορείς έχουν δειχθεί ότι έχουν αυξημένη ευαισθησία στη νέα πολυ-ΑϋΡ-ριβόζης (PARP) αναστολείς [41], [42] . Εκφράζεται η ελπίδα ότι αυτή η νέα θεραπεία θα ωφελήσει και τις δύο οικογενή και σποραδικά καρκινώματα των ωοθηκών ή του μαστού που στερούνται

BRCA1 /2

έκφρασης. Επιπλέον,

BRCA1 /2

φορείς είναι επίσης πιο ευαίσθητα σε πλατίνη χημειοθεραπείας με βάση [43], [44]. Αρκετές μελέτες έχουν δείξει επίσης βελτιωμένα αποτελέσματα επιβίωσης σε φορείς έναντι των μη-φορέων [5], [45], [46].

Με την πρόοδο και την ταχύτητα των στρατηγικών ανίχνευσης μετάλλαξης σήμερα, αναμένεται ότι περισσότερο τον καρκίνο των ωοθηκών θα πρέπει να αποφεύγονται περιπτώσεις όπως κληρονομική καρκίνοι θα προσδιοριστεί πριν από την έναρξη της νόσου και θα χρησιμοποιηθεί προληπτικά μέτρα.

Ευχαριστίες

Είμαστε υπόχρεοι στους ασθενείς και τις οικογένειές τους. Θα θέλαμε να ευχαριστήσουμε την κα Μαρία Malliota, Επιστημονικός Συνεργάτης, (Τμήμα Ιατρικής Ογκολογίας, νοσοκομείο «Παπαγεωργίου», Αριστοτέλειο Πανεπιστήμιο Θεσσαλονίκης Ιατρική Σχολή, Θεσσαλονίκη, Μακεδονία, Ελλάδα) για τη βοήθειά της με τη συλλογή δειγμάτων αίματος, η κα Eneida Jaupaj για τη βοήθειά της με την εκχύλιση του DNA. Μπορούμε επίσης να ευχαριστήσω την κα Ζωή Αλεξοπούλου και Γιώργος Κουβατσέας για να κάνει την στατιστική ανάλυση.