You must be logged into post a comment.
Αφηρημένο
Αξιολόγηση
HER2
ενίσχυση γονιδίου είναι ένα βασικό συστατικό της θεραπευτικής λήψης αποφάσεων για προχωρημένο ή μεταστατικό καρκίνο του στομάχου. Μια απλή μέθοδος που μπορεί να εφαρμοστεί σε μικρές, σταθεροποιημένο με φορμαλίνη, τα δείγματα βιοψίας εγκλεισμένα σε παραφίνη είναι επιθυμητή ως συμπλήρωμα ή ως υποκατάστατο που χρησιμοποιείται σήμερα HER2 ανοσοϊστοχημεία και στα πρωτόκολλα υβριδισμού επί τόπου. Σε αυτή τη μελέτη, έχουμε αναπτύξει μια ψηφιακή μέθοδο PCR μικρορροϊκή με βάση για τον καθορισμό
HER2
και χρωμόσωμα 17 κεντρομεριδίου (CEP17) αντιγράψετε αριθμούς και εκτίμηση αναλογία περιεχόμενο όγκου (TCR). Η
αναλογία HER2
/CEP17 καθορίζεται από τρεις μεταβλητές-ΤΟΚ και απόλυτους αριθμούς αντίγραφο του
HER2
και CEP17-εξετάζοντας τα καρκινικά κύτταρα? μόνο η αναλογία των δύο τελευταίων μπορεί να ληφθεί με την ψηφιακή PCR χρησιμοποιώντας τους ολόκληρο δείγμα χωρίς καθαρισμό κυττάρων του όγκου. TCR καθορίστηκε με ημι-αυτόματη ανάλυση εικόνας. Έχουμε αναπτύξει μια Tumor διάγραμμα περιεχόμενο, το οποίο είναι ένα επίπεδο ορθογώνιες συντεταγμένες που αποτελείται από
Δεδομένα HER2
/CEP17 ψηφιακή PCR και TCR που σκιαγραφεί ενισχυμένο, μη ενισχυμένο, και διφορούμενα περιοχές. Με την εφαρμογή αυτής της μεθόδου, 44 κλινικά δείγματα βιοψίας γαστρικού καρκίνου του ταξινομήθηκαν ως ενισχύθηκαν (n = 13), μη-ενισχυμένο (n = 25), ή αμφίβολα (n = 6). Συγκριτικά, 11 δείγματα ήταν θετικά, 11 ήταν αρνητικά, και 22 ήταν διφορούμενο ανοσοϊστοχημεία. Έτσι, η νέα μέθοδος μας μείωσε τον αριθμό των αμφίβολων δειγμάτων από 22 έως 6, παρακάμπτοντας έτσι την ανάγκη για επιβεβαίωση με φθορισμό ή διπλής καθετήρα in situ υβριδισμού σε & lt? 30% των περιπτώσεων. ψηφιακή ανάλυση PCR όγκου περιεχομένου διάγραμμα με τη βοήθεια μπορεί επίσης να εφαρμοστεί σε διάφορες ιστοσελίδες με χειρουργικά ιστούς. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι η ανάλυση αυτή είναι μια χρήσιμη εναλλακτική λύση για HER2 ανοσοϊστοχημεία σε γαστρικών καρκίνων που μπορούν να χρησιμεύσουν ως βάση για την αυτόματη αξιολόγηση του
HER2
κατάσταση
Παράθεση:. Matsusaka K, Ishikawa S, Nakayama Α, Ushiku Τ, Nishimoto Α, Urabe Μ, et al. (2016) Περιεχόμενο του όγκου Διάγραμμα-Assisted
HER2 /
CEP17 Ψηφιακή PCR ανάλυση των γαστρικός καρκίνος δειγμάτων βιοψίας. PLoS ONE 11 (4): e0154430. doi: 10.1371 /journal.pone.0154430
Επιμέλεια: Yves St-Pierre, INRS, Καναδάς
Ελήφθη: 7 Νοέμ 2015? Αποδεκτές: 13 του Απριλίου 2016? Δημοσιεύθηκε: 27 Απριλίου 2016
Copyright: © 2016 Matsusaka et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται
Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Όλη η δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και
Χρηματοδότηση:. η εργασία αυτή έγινε ως μέρος του έργου βιοτράπεζας Ιαπωνία (https://www.src.riken.jp/english/project/person/), που υποστηρίχθηκε από το Υπουργείο Παιδείας, Πολιτισμού, Αθλητισμού, Επιστημών και Τεχνολογίας (https://www.mext.go.jp/english/), η Ιαπωνία Οργανισμός για την ιατρική έρευνα και την ανάπτυξη (http: //www.amed.go .jp /en /), και επιχορηγήσεις-in-ενισχύσεις για την Επιστημονική Έρευνα (KAKENHI) από την Ιαπωνία Εταιρείας για την Προώθηση της Επιστήμης (https://www.jsps.go.jp/english/e-grants/). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου
Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα
Εισαγωγή
γαστρικό καρκίνο είναι μία από τις πιο κοινές κακοήθεις όγκους και η τρίτη κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο που σχετίζονται με ολόκληρο τον κόσμο [1]. Προχωρημένες περιπτώσεις χωρίς λειτουργική παρέμβαση έχουν κακή πρόγνωση και απαιτεί διεπιστημονικές προσεγγίσεις θεραπείας. HER2 είναι ένα 185-kDa διαμεμβρανική γλυκοπρωτεΐνη που είναι μέλος της οικογένειας υποδοχέων του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα και λειτουργεί ως υποδοχέας κινάσης τυροσίνης [2, 3]. Σε φυσιολογικά κύτταρα, HER2 πρωτεΐνη δρα ως μετατροπέας σήματος κατά τη διάρκεια του κυτταρικού πολλαπλασιασμού ή της διαφοροποίησης [4]? ωστόσο, έχει ογκογόνο ιδιότητες όταν υπερεκφράζεται. Αυτό συνήθως προκαλείται από
HER2
γονιδιακή ενίσχυση, η οποία έχει αναφερθεί σε διάφορους τύπους κακοήθους όγκου [5], συμπεριλαμβανομένων του καρκίνου του μαστού [6, 7], των σιελογόνων αδένων αδενοκαρκινώματος [8], καρκίνο της ουροδόχου κύστεως [9] , και γαστρικού καρκίνου [10]. HER2-υπερεκφράζουν γαστρικών καρκίνων αντιπροσωπεύουν το 8% -31% όλων των περιπτώσεων [11-15]. Στην Trastuzumab για τον Καρκίνο Γαστρική δοκιμή, τραστουζουμάμπη (Roche Diagnostics, Basel, Switzerland) -Α ανθρωποποιημένο αντι-ΗΕΚ2 μονοκλωνικό αντίσωμα-αύξησε το ποσοστό επιβίωσης των ασθενών με HER2-θετικό γαστρικών καρκίνων όταν χορηγείται σε συνδυασμό με χημειοθεραπεία [16], και ήταν επίσης εγκριθεί για τη θεραπεία των καρκίνων του μαστού [17, 18]. Αξιολογώντας την κατάσταση του HER2 είναι, συνεπώς, μια σημαντική πτυχή του γαστρικού θεραπεία του καρκίνου.
Για τους ασθενείς με ανεγχείρητο γαστρικών καρκίνων, κατάσταση του HER2 πρέπει να εξεταστεί χρησιμοποιώντας ένα μικρό δείγμα βιοψίας. Όπως παρουσιάζεται στα τελευταία συστάσεις για τη δοκιμασία HER2 στον καρκίνο του μαστού από την Αμερικανική Εταιρεία Κλινικής Ογκολογίας (ASCO) /Κολέγιο Αμερικανών Παθολόγων (CAP), ανοσοϊστοχημεία (IHC) ή /και in situ υβριδισμού (ISH) είναι οι τυποποιημένες μεθόδους για την αξιολόγηση του HER2 καθεστώτος [19], αλλά το καθένα έχει τα όριά της. Για παράδειγμα, η αποτελεσματικότητα του HER2-IHC επηρεάζεται από διάφορους παράγοντες όπως η διαδικασία μονιμοποίηση φορμαλίνης, και το σύστημα βαθμολόγησης δεν είναι πάντα επαναλήψιμη ιδιαίτερα σε αμφίβολες περιπτώσεις, για τις οποίες ISH συνιστάται [19-25]. Στο φωτεινό πεδίο
HER2
ISH dual-ανιχνευτή (
HER2
-DISH),
HER2
και χρωμόσωμα 17 κεντρομεριδίου (CEP17) να αντιγράψετε αριθμούς μπορεί να ανιχνευθεί ως σήματα κάτω από το φως μικροσκόπιο για ολόκληρη την περιοχή του δείγματος. Ωστόσο, αν και η μέθοδος αυτή έχει ανώτερη ευαισθησία, είναι δαπανηρή και σχετικά χρονοβόρα
Σε αυτή τη μελέτη, εφαρμόσαμε την ψηφιακή τεχνολογία PCR Microfluidics-based. (BioMark? Fluidigm, Cambridge, UK) [26] για τον προσδιορισμό
HER2
/CEP17 αναλογία αριθμού αντιγράφων. Στην ψηφιακή PCR, πρότυπο DNA διαιρείται σε 770 κομμάτια σε θαλάμους αντίδραση νανολίτρου, με αναμενόμενη συγκέντρωση 0-1 μορίου ανά θάλαμο. Dual-έγχρωμο γονιδίων στόχων και αναφορά είναι ταυτόχρονα ενισχύθηκαν με PCR και τον αριθμό αντιγράφων τους υπολογίζεται μετρώντας τους θαλάμους με θετικά μηνύματα. Αυτή η εξαιρετικά ισχυρή μέθοδος επέτρεψε τη σύγκριση των
HER2
και αριθμούς αντίγραφο CEP17 χρησιμοποιώντας διαφορετικά σύνολα αστάρι. Ο στόχος αυτής της μελέτης ήταν να επιβεβαιώσει την εφικτότητα της ψηφιακής τεχνολογίας PCR για την ανάλυση των γαστρικών δείγματα βιοψίας καρκίνου. Ωστόσο, ένα πρόβλημα με αυτήν την προσέγγιση είναι ότι ο ιστός περιέχει συνήθως μη καρκινικά στρωματικά κύτταρα που παρεμβαίνουν με μοριακές αναλύσεις. Για να ξεπεραστεί αυτό το πρόβλημα, έχουμε αναπτύξει δισδιάστατο διάγραμμα διασποράς που αναφέρεται ως το Περιεχόμενο του όγκου (TC) διάγραμμα που διαθέτει δεδομένα σε ενισχυμένο, μη ενισχυμένο, και διφορούμενα κατηγορίες. Ο στόχος ήταν να αναπτυχθεί ένα αυτοματοποιημένο μέσο αξιολόγησης
HER2
κατάσταση, με TC διάγραμμα υποβοηθούμενη
HER2
/CEP17 ψηφιακή PCR ανάλυση χρησιμεύει ως το πρώτο βήμα.
Υλικά και μέθοδοι
Δήλωση Ηθικής
Αυτή η μελέτη εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας Θεσμικών Πανεπιστήμιο του Τόκιο. Κλινικά δείγματα με τη γραπτή συγκατάθεση συλλέχθηκαν σύμφωνα με το Πανεπιστήμιο του Τόκιο Θεσμικών κατευθυντήριες γραμμές για τη μελέτη ανθρώπινων ιστών.
κλινική γαστρικό δείγματα βιοψίας καρκίνου και χειρουργικά δείγματα
Συνολικά, 44 γαστρικό δείγματα βιοψίας καρκίνου από 32 ασθενείς υποβάλλονται σε επεξεργασία με συνήθη σταθεροποιημένο με φορμαλίνη εμπεδωθεί με παραφίνη (FFPE) ήταν διαθέσιμα για ανάλυση. Όλα τα δείγματα βιοψίας ελήφθησαν ενδοσκοπικά στο Τμήμα Ενδοσκόπησης και Ενδοσκοπική Χειρουργική. Τέσσερις χειρουργικά δείγματα, τα οποία αποκόπηκαν χειρουργικά στην Κλινική του γαστρεντερικού, αναλύθηκαν επίσης. Αυτά τα δείγματα σταθεροποιήθηκαν σε 10% ουδέτερη ρυθμισμένη φορμαλίνη. Όλες οι περιπτώσεις διαγνώστηκαν στο Τμήμα Παθολογίας του Πανεπιστημίου του Τόκιο Νοσοκομείου. Οι τομές κόβονται σε πάχος 4 μm με τη χρήση συμβατικών ιστολογικές τεχνικές? αυτά συλλέχθηκαν σε γυάλινες πλάκες και χρησιμοποιήθηκαν για αιματοξυλίνη-ηωσίνη (ΗΕ) χρώση, HER2-IHC, και
HER2
-DISH.
Ανοσοϊστοχημεία
Η ανοσοϊστοχημική χρώση πραγματοποιήθηκε επί FFPE ιστού χρησιμοποιώντας Ventana BenchMark XT (Roche Diagnostics) με το αντίσωμα 4D5 αντι-HER2. Χρώση μοτίβα ένταση και ανοσοαντιδραστικότητας μεμβράνη εκτιμήθηκαν χρησιμοποιώντας το σύστημα βαθμολόγησης Dako σύμφωνα με τις κατευθυντήριες ASCO /CAP [19]. Δεν χρώση μεμβράνη βαθμολογήθηκε με 0? αχνή ή μόλις αντιληπτή κηλίδωση /ελλιπή μεμβράνη βαθμολογήθηκε ως 1+? ελλιπείς ή /και αδύναμα μέτρια χρώση μεμβράνης /περιφερειακό βαθμολογήθηκε με 2+? και εντελώς και έντονα χρώση περιφερειακή μεμβράνη βαθμολογήθηκε με 3+.
HER2-
χρώση πιάτο και
αξιολόγηση
HER2
-DISH διεξήχθη σε FFPE ιστού με χρήση του κιτ DISH HER2 DNA (Roche Diagnostics) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή, και τα δείγματα αξιολογήθηκαν με οπτικό μικροσκόπιο.
HER2
σήματα εμφανίστηκε ως μαύρες κουκίδες ή ομάδες, και τα σήματα CEP17 εμφανίστηκε ως κόκκινες κουκκίδες. Είκοσι μη επικαλυπτόμενες πυρήνες καρκίνου βαθμολογήθηκαν για
HER2
και σήματα CEP17 και
HER2
ενίσχυση γονιδίου ταξινομήθηκε όπως συνιστάται από τις κατευθυντήριες γραμμές ASCO /CAP [19]? θετική, [
HER
2 /CEP17 αναλογία ≥ 2,0] και /ή [κατά μέσο όρο
HER
2 αντίγραφο αριθμός ≥ 6.0 σήματα /κύτταρο]? διφορούμενα, [
HER 2 /CEP17 αναλογία & lt? 2.0] και [κατά μέσο όρο
HER
2 αριθμού αντιγράφων ≥ 4,0 και & lt? 6.0 σήματα /κύτταρο]? αρνητική, [
HER 2 /CEP17 αναλογία & lt? 2.0] και [κατά μέσο όρο
HER
2 αριθμού αντιγράφων & lt? 4.0 σήματα /κύτταρο].
Παρασκευή DNA από FFPE κλινικό υλικό
Για την εξαγωγή DNA από δείγματα βιοψίας, 10 σειριακές τομές κόβονται σε πάχος 10 μm τοποθετήθηκαν σε μια γυάλινη επιφάνεια για HER2 -IHC και
HER2
-DISH. περιεχόμενο όγκου επιβεβαιώθηκε πριν και μετά την κοπή με χρώση των παρακείμενων διαφάνειες με HE. Δεδομένου ότι ένα ενιαίο μπλοκ παραφίνης συνήθως περιέχει πολλά κομμάτια του δείγματος βιοψίας, μεμονωμένα δείγματα απομονώθηκαν χρησιμοποιώντας έναν κόφτη γυαλί. Για την εξαγωγή DNA από χειρουργική εκτομή δείγματα, 5 σειριακές τομές από κάθε αντιπροσωπευτική ιστό μπλοκ κόπηκαν σε ένα πάχος 10 μm, τα οποία τοποθετήθηκαν επάνω σε ένα φύλλο κατασκευασμένο από πολυτετραφθοροαιθυλένιο (PTFE, Sanplatec, Osaka, Japan). Η μεμβράνη είναι χημική αντίσταση για το ξυλόλιο που βασίζονται αποπαραφινώσεως, και είναι εύκολα κόβεται σε κομμάτια. Στη μελέτη, τα διάφορα μέρη ήταν κλιπ έξω από τα φύλλα ανάλογα με το προφίλ του HER2. Γυαλί ή PTFE κομμάτια συναρμολογούνται σε 2,0 ml σωλήνα, και το DNA εκχυλίζεται με τη χρήση του QIAamp DNA FFPE Tissue Kit (Qiagen, Valencia, CA, USA).
HER2
εκτίμηση του αριθμού αντιγράφων από την ψηφιακή PCR
Primer σετ για την ενίσχυση
HER2
και CEP17 φαίνονται στον πίνακα 1. Κάθε εκκινητής σχεδιάστηκε έτσι ώστε τα PCR προϊόντα που ελήφθησαν ήταν αρκετά σύντομη (59 και 65 bp) για την εξάλειψη της επιρροή του κατακερματισμού του DNA κατά τη διαδικασία FFPE. Ψηφιακή PCR πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας ένα σύστημα ΕΡ1 με 48.770 digital array ολοκληρωμένο κύκλωμα ρευστού (Fluidigm). Κάθε chip περιείχε 48 πίνακες που κατανέμεται περαιτέρω σε 770 θαλάμους αντίδρασης. Ο αριθμός των θετικών σημάτων φθορισμού σε κάθε πάνελ χρησιμοποιήθηκε για την ποσοτικοποίηση διαφορετικές αλληλουχίες DNA. Το πρωτόκολλο έχει περιγραφεί αλλού [26]. Εν συντομία, 4 μΙ μείγματα αντίδρασης παρασκευάστηκαν για κάθε δοκιμασία που περιείχε 1 χ TaqMan γονιδιακής έκφρασης κύριο μείγμα, 1 × HER2-FAM και ανιχνευτές chr17cent-VIC TaqMan και 1 αντιδραστήριο φόρτωση × δείγματος (Fluidigm). Το μίγμα της αντίδρασης κατανέμεται ομοιόμορφα μέσα στους θαλάμους αντίδρασης 770 και ο ψηφιακός συστοιχία θερμο-εναλλάσσονται σε κυκλοποιητή ΕΡ1 Σύστημα FC1. Οι δύο περιοχές-στόχοι ανεξάρτητα ενισχύθηκαν και τα σήματα 6-καρβοξυφλουοροσκεϊνη και βαφή VIC στους θαλάμους καταγράφηκαν στο τέλος του κάθε κύκλου της PCR. Ο αριθμός των 6-καρβοξυ-θετικών (HER2) και VIC-θετικό (CEP17) θαλάμων σε κάθε πάνελ μετρήθηκε και
HER2
/CEP17 αναλογία αριθμού αντιγράφου υπολογίστηκε [27].
Η
Αξιολόγηση της αναλογίας περιεχομένου όγκου (TCR)
Σύνολο slide εικόνα των HE τμήματα, τα οποία ήταν εκείνες λίγο πριν από τις σειριακές τομές για την εκχύλιση του DNA, σαρώθηκε χρησιμοποιώντας NanoZoomer (Hamamatsu Photonics, Hamamatsu, Ιαπωνία). Τα δεδομένα εισήχθησαν Definiens ιστών Studio 2.0 (https://www.tissuestudio.com) για τον προσδιορισμό των TCR. Η επιλεγμένη περιοχή του χειρουργικά δείγματα σαρώθηκε χρησιμοποιώντας ένα μικροσκόπιο ΒΖ-710 (Keyence, Osaka, Japan). Τα δεδομένα εισήχθησαν Hybrid λογισμικού τηλέφωνα Count (BZ-H3C, Keyence). Τα δεδομένα που αναφέρονται λεπτομερώς τον αριθμό των κυττάρων σε εισαγόμενα εικόνες και να διακρίνονται καρκινικά από τα μη καρκινικά κύτταρα με βάση πυρήνα μεγέθους που δημιουργείται αυτόματα
Πειράματα για την ανάπτυξη των charts TC
Οι κυτταρικές σειρές.
Για πειράματα ελέγχου, ο καρκίνος του πνεύμονα Η522 και SK-BR-3 κυτταρικές σειρές καρκίνου του μαστού ελήφθησαν από την American Type Culture Collection (Manassas, VA, USA). GM18997 Epstein-Barr ιό μετατραπεί λεμφοβλαστοειδή κυτταρική γραμμή (LCL) λήφθηκε από Coriell Biorepository (https://catalog.coriell.org/). Η522 κύτταρα και το LCL καλλιεργήθηκαν σε Roswell Park Memorial Institute-1640 (Nacalai Tesque, Kyoto, Japan) που περιέχει 10% βόειο εμβρυϊκό ορό (Sigma-Aldrich, St. Louis, ΜΟ, USA) και 1% διάλυμα πενικιλλίνης-στρεπτομυκίνης ( Nacalai Tesque). SK-BR-3 κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε τροποποιημένο μέσο Eagle /Hams F12 Dulbecco (Nacalai Tesque, Ιαπωνία) με 10% εμβρυϊκό βόειο ορό και 1% πενικιλλίνη /στρεπτομυκίνη. Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν στους 37 ° C σε ατμόσφαιρα που περιείχε 5% CO
2. DNA εκχυλίστηκε χρησιμοποιώντας ένα κιτ QIAquick DNA mini (Qiagen). μπλοκ κυττάρων FFPE Η522, SK-BR-3, και LCL ήταν προετοιμασμένοι για
HER2
-DISH αξιολόγησης.
Σταδιακή ανάμειξη με LCL.
Το γονιδιακό DNA από το Η522 και SK -Br-3 κύτταρα και το ΚΟΒ ρυθμίστηκε σε συγκέντρωση 50 ng /μl. Η522 και LCL γονιδιωματικό DNA αναμίχθηκε σε οκτώ βήματα στις ακόλουθες αναλογίες όγκου: 8: 2, 7: 3, 6: 4, 5: 5, 4: 6, 3: 7, 2: 8, και 1: 9 (Η522 : LCL). SK-BR-3 και LCL γονιδιωματικό DNA αναμίχθηκε σε τέσσερα στάδια στις ακόλουθες αναλογίες όγκου: 8: 2, 6: 4, 4: 6, και 2: 8 (SK-BR-3: LCL).
Στατιστικές αναλύσεις
Chi-τετράγωνο τεστ εφαρμόστηκαν σε σύγκριση μετρήσεις μεταξύ
HER2
-DISH και ψηφιακή PCR σε Η522 και SK-BR-3 κύτταρα και LCL. Οι διαφορές θεωρήθηκαν σημαντικές εάν
σ
& lt? 0.05
Αποτελέσματα
Ανάπτυξη του διαγράμματος TC για ψηφιακά δεδομένα PCR
Το
αναλογία HER2
/CEP17 προσδιορίστηκε με βάση τρεις μεταβλητές:. TCR και αριθμούς απόλυτη αντίγραφο του
HER2
και CEP17. Μόνο οι σχετικές αναλογίες των δύο τελευταίων μπορεί να ληφθεί με την ψηφιακή PCR χρησιμοποιώντας το δείγμα του όγκου χωρίς απομόνωση μεμονωμένων κυττάρων. Η
αναλογία HER2
/CEP17 λαμβάνεται με ψηφιακό PCR [
r
] εκφράστηκε ως εξής, με βάση την υπόθεση ότι οι αριθμοί γονίδιο αντίγραφο των καρκινικών κυττάρων είναι ομοιογενή και ότι μη καρκινικά κύτταρα είναι γενετικά σταθερός με διπλοειδή χρωμοσώματα (Σχήμα 1Α και 1Β) 🙁 1) όπου το [
r
] είναι η αναλογία του
HER2
να CEP17 λαμβάνεται με ψηφιακό PCR (0 & lt?
r
)? [
x
] είναι ΤΟΚ (0 ≤
x
≤ 1)? [
Μια
] είναι CEP17 αριθμό αντιγράφων σε ένα μόνο καρκινικό κύτταρο (0 ≤
Α
)? και [
Β
] είναι
HER2
αριθμό αντιγράφων σε ένα μόνο καρκινικό κύτταρο (0 ≤
Β
). Εφεξής, η δισδιάστατη σκέδασης αντιπροσωπεύεται από την εξίσωση (1), αναφέρεται ως διάγραμμα TC.
(Α) Μαθηματική αναπαράσταση της συσχέτισης μεταξύ
αναλογίες HER2
/CEP17 λαμβάνονται με ψηφιακές PCR [
r
] και TCR [
x
] (άνω). Όταν το [
Β
/
Μια
= 2], [
r
] αντιπροσωπεύεται από τη δεξιά πλευρά της εξίσωσης (υποδεικνύεται από ένα βέλος) και το δεξιό μέλος χέρι της εξίσωσης δείχνει μια μονότονη αύξηση. Ένα σχηματικό μοντέλο παρουσιάζεται για [
Α
= 2] και [
B
= 4] (κάτω δεξιά). Διάγραμμα (Β) TC αποδεικνύεται από την εξίσωση (1). Η σχέση μπορεί να σχεδιαστεί ως μια ευθεία γραμμή (κόκκινο) εκπροσωπείται από [
r
=
x
+ 1], το οποίο είναι το όριο μεταξύ αρνητικών και διφορούμενα περιοχές. Δεδομένου ότι η αξία των [
A
] υπερβαίνει 2,0, γραμμές γίνονται όλο και περισσότερο κυρτή και η καμπύλη προς τα πάνω, σύμφωνα με αυτή την εξίσωση. Γραμμές συγκλίνουν στις συντεταγμένες (0,1) και (1,2). Σε κλινικά δείγματα, [
Μια
] περιορίστηκε σε μια τιμή μεταξύ 2 και 8. Η περιοχή που περικλείεται από την ευθεία κόκκινη γραμμή [
r
=
x
+ 1] (
Μια
= 2) και το μωβ γραμμή καμπυλώνει προς τα πάνω [
r
= (7
x
+ 1) /(3
x
+ 1 )] (
Μια
= 8), ορίστηκε ως διφορούμενο χώρο, και η περιοχή πάνω από την μωβ γραμμή ορίστηκε ως θετική περιοχή.
η
στην παρούσα μελέτη, [
x
] προσδιορίστηκε από HE-χρωματίστηκαν δείγματα χρησιμοποιώντας λογισμικό ανάλυσης εικόνας, όπως ο ιστός Studio λογισμικό ανάλυσης εικόνας για τα δείγματα βιοψίας και Hybrid λογισμικό ΟβΙΙ Καταμέτρηση των χειρουργικά δείγματα, αντίστοιχα? και [
r
] και [
x
] προσδιορίστηκαν από μετρήσεις.
εξίσωση (1), γραφικής παράστασης, όπως το διάγραμμα TC, με [
r
] και [
x
] ως κατακόρυφη και οριζόντιους άξονες, αντίστοιχα (Σχήμα 1Β). Ο λόγος του [
Β
/
Μια
] ήταν η τιμή αναφοράς για τον καθορισμό
HER2
ενίσχυση γονιδίου. Πράγματι, ο πραγματικός αριθμός αντιγράφων των CEP17 [
Μια
] και
HER2
[
B
] δεν μπορεί να προσδιοριστεί χωρίς την εκτέλεση
HER2
-DISH. Ωστόσο, μια πρακτική αξιολόγηση της
HER2
και CEP17 αντιγράψετε αριθμούς από DISH διαπίστωσε ότι [
Μια
] κυμαινόταν 2,0 έως 6,0 (μεταξύ 40 και 117 CEP17 σήματα μεταξύ 20 καρκινικά κύτταρα στο S1 και S2 πίνακες) και δεν υπερέβη ποτέ το 8,0 σε κλινικά δείγματα γαστρικού καρκίνου. Σύμφωνα με την εμπειρία μας των 164 συνεχόμενες περιπτώσεις γαστρικού καρκίνου (Ushiku Τ
et al
. Αδημοσίευτα δεδομένα), αριθμός αντιγράφων CEP17 είναι 1,0 – 5,7, διάμεση τιμή 2,5, και μονοσωμία, ορίζεται ως [
A
& lt? 1.5], είναι αρκετά σπάνια μόνο σε δύο περιπτώσεις (1,2%). Έτσι, το εύρος των [
Μια
] έχει οριστεί ως [2 ≤
Μια
≤ 8] με ένα περιθώριο ασφαλείας.
Εμείς ορίζεται
HER2
ενίσχυση αρνητικά ως [
Β
/
Μια
& lt? 2] ή [
B
& lt? 2
Μια
]. [
Bx
+ 2 (1 –
x
)] εκφράστηκε στη συνέχεια ως εξής: (2)
Και οι δύο πλευρές της εξίσωσης (2) χωρίστηκαν από [
Ax
+ 2 (1 –
x
)] 🙁 3)
ο συνδυασμός με τις εξισώσεις (1) και (3) έδωσε τα ακόλουθα: (4) (5)
εξίσωση (5) ήταν μια κατάσταση που ισοδυναμεί με [
Β
/
μια
& lt? 2]. Η δεξιά πλευρά του μέλους της εξίσωσης (5) έδειξε μια μονότονη αύξηση σύμφωνα με τη μεταβλητή [
Μια
] (2 ≤
Μια
≤ 8)? ενσωμάτωση [
Μια
= 2], η οποία ήταν η ελάχιστη τιμή των [
Μια
], στην εξίσωση (5) έδωσε τα ακόλουθα: (6)
Ως εκ τούτου, όποτε εξίσωση (6) ήταν ικανοποιημένοι, το
HER2
ενίσχυση αρνητικό όρο [
Β
/
Μια
& lt? 2] ήταν ισχύει για οποιαδήποτε τιμή του [
Μια
] (2 ≤
Μια
≤ 8).
Από την άλλη πλευρά, ο ορισμός του
HER2
ενίσχυση θετικών ήταν [
Β
/
Μια
≥ 2] ή [
Β
≥2
Μια
]. Σε αυτήν την περίπτωση, [
Bx
+ 2 (1 –
x
)] εκφράστηκε ως εξής: (7)
εξίσωση (7) υποβλήθηκε σε επεξεργασία με τον ίδιο τρόπο όπως ΠΠΠ (2) – (5) και εκφράστηκε ως εξής: (8)
εξίσωση (8) ήταν μια κατάσταση που ισοδυναμεί με [
Β
/
μια
≥ 2]? η δεξιά πλευρά του μέλους της εξίσωσης έδειξε μια μονοτονική αύξηση. Ενσωμάτωση του [
Μια
= 8], η οποία ήταν η μέγιστη τιμή του [
Μια
], στην εξίσωση (8) έδωσε τα ακόλουθα: (9)
Έτσι, όποτε Eq (9) ήταν ικανοποιημένοι, το
HER2
ενίσχυση θετικών όρο [
Β
/
Μια
≥ 2] ήταν ισχύει για οποιαδήποτε τιμή του [
Α
] (2 ≤
Μια
≤ 8).
Όταν Εξ (6) και (9) χαράχθηκαν στο διάγραμμα TC, η περιοχή πάνω από τη γραμμή κάμπτοντας προς τα πάνω [
r
= (7
x
+ 1) /(3
x
+ 1)] (
Μια
= 8), ορίστηκε ως θετική περιοχή, και η περιοχή κάτω από την ευθεία γραμμή [
r
=
x
+ 1] (
Μια
= 2), ήταν η αρνητική περιοχή. Η περιοχή που περικλείεται από τις γραμμές [
r
=
x
+ 1] και [
r
= (7
x
+ 1) /(3
x
+ 1)] ήταν μια αόριστη ζώνη ανάλογα με την αξία της [
Μια
], η οποία ορίζεται ως η διφορούμενη περιοχής και ορίζεται ως εξής (Σχήμα 1Β) 🙁 10)
Όταν [
x
] ήταν 0 (που δεν περιέχει καρκινικά κύτταρα), όλες οι γραμμές συγκλίνουν σε συντεταγμένες (0,1) με βάση την παραδοχή ότι τα μη-καρκινικά κύτταρα είναι γονιδίωμά σταθερές. Όταν το [
x
] ήταν 1.0 (που αποτελείται από μόνο τα καρκινικά κύτταρα), οι γραμμές περνούν μέσα από τις συντεταγμένες (1,2), ανεξάρτητα από τις τιμές για το [
Μια
] και [
B
].
Σύγκριση των ψηφιακών PCR και
HER2
-DISH σε καλλιεργημένα κύτταρα
επικυρωθεί η θεωρητική εξίσωση (1) και το διάγραμμα TC από τη σταδιακή σύστημα μίγμα κυτταρικών σειρών. Η εξίσωση (1) λήφθηκε με χρήση πραγματικών μετρούμενες τιμές της [
Μια
] και [
B
] που λαμβάνεται από το
HER2
-DISH σε κυτταρικές σειρές, ή χρησιμοποιώντας την υπολογισμένη [
Β ‘
] από [
Μια
] και μετράται [
r
].
Οι αριθμοί Σχετική αντίγραφο του
HER2
και CEP17 (
HER2
/CEP17) σε LCL και Η522 και SK-BR-3cells αξιολογήθηκαν από
HER2
-DISH χρησιμοποιώντας μπλοκ κυττάρων FFPE και από την ψηφιακή PCR (Πίνακας 2).
HER2
σήματα εμφανίστηκε ως διακριτές κουκκίδες σε πυρήνες από
HER2
-DISH (Σχήμα 2Α και 2Β)?
HER2
αριθμό αντιγράφων σε μεμονωμένα κύτταρα ήταν σχεδόν δύο στις ΚΟΒ και τέσσερις σε Η522 κύτταρα. Σε αντίθεση, SK-BR-3 κύτταρα έδειξαν συγκεντρωμένα
HER2
σήματα που ήταν δύσκολο να εξατομικεύσει (Σχήμα 2C)? αριθμοί τους ήταν αυθαίρετα προς τις μέγιστες τιμές των 7, 14, και 21 σύμφωνα με τα μεγέθη συμπλέγματος. Έτσι, ένα κατώτερο
αναλογία HER2
/CEP17 ελήφθη με
HER2
-DISH από ό, τι από την ψηφιακή PCR.
Η
(Α-Γ) Μικρογραφίες του
HER2
-DISH της LCL, Η522 και SK-BR-3 μπλοκ κυττάρων FFPE.
Οι HER2
σήματα εμφανίζονται ως μαύρες κουκίδες ή συστάδες, και τα σήματα CEP17 εμφανίζονται ως κόκκινες κουκκίδες.
HER2
και CEP17 αντιγράψετε αριθμούς που μετράται από το
HER2
-DISH και ψηφιακή PCR φαίνονται στον Πίνακα 2. (Α) Η LCL ήταν γονιδίωμά σταθερά με δύο ζεύγη σημάτων που αντιστοιχούν σε
HER2
και CEP17, μιμούμενη μη καρκινικές στρωματικά ή φλεγμονώδη κύτταρα. (Β) Σε Η522 κύτταρα, τόσο
HER2
και σήματα CEP17 εμφανίστηκε ως τελείες και μεμονωμένα σήματα ήταν ευδιάκριτη. (Γ) Σε SK-BR-3 κυττάρων,
HER2
σήματα που σχηματίζονται συμπλέγματα και ακριβείς μετρήσεις ήταν δύσκολη. σήματα CEP17 κυμαινόταν μεταξύ 3 και 7, με μέση βαθμολογία 83/20 = 4,15. (D, E) Γονιδιωματικό DNA από Η522 και κυττάρων SK-BR-3 αναμίχθηκε με το γονιδίωμα LCL με σταδιακό τρόπο και αναλύθηκαν με ψηφιακό PCR. Ο οριζόντιος άξονας αναπαριστά την αναλογία του Η522 ή SK-BR-3 σε LCL, που αντιστοιχεί σε TCR [
x
] σε κλινικές περιπτώσεις? ο κάθετος άξονας αντιπροσωπεύει την αναλογία του HER2 να CEP17 σε ψηφιακή PCR [
r
]. [
Μια
] και [
Β
] προσδιορίστηκαν από
HER2
-DISH (Πίνακας 1). (Δ) Σε Η522, [
Μια
= 2.05] και [
Β
= 4.25], αποδίδοντας [
r
= (4.25
x +
2 (1 –
x
)) /(2,05
x
+ 2 (1 –
x
))] (στερεά γκρίζα γραμμή). Απεικονίζονται δεδομένα προσεγγίζεται από τη θεωρητική γραμμή. (Ε) Σε SK-BR-3 κυττάρων, [
Μια
= 4,15], αλλά
HER2
αριθμού αντιγράφων [
B
] ήταν δύσκολο να προσδιοριστεί λόγω του σχηματισμού συμπλέγματος .
HER2
αριθμού αντιγράφων [
Β ‘
] είχε προβλεφθεί [
Β’
= 5,69 × 4,15 = 23.61] με βάση τα ψηφιακά δεδομένα PCR [
r
] και τον αριθμό CEP17 αντίγραφο [
Μια
]. Η εξίσωση [
r
= (23.61
x
+ 2 (1 –
x
)) /(4.15
x
+ 2 (1 –
x
))] αντιπροσωπεύεται από το στερεό γκρι γραμμή. Σχεδιάζονται δεδομένα προσεγγίζεται από τη θεωρητική γραμμή.
Η
Η522 και SK-BR-3 κυττάρων γονιδιωματικό DNA αναμίχθηκε με εκείνη της LCL με σταδιακό τρόπο και τα μίγματα αναλύθηκαν με ψηφιακό PCR. Σε κύτταρα Η522,
HER2
[
Β
] και CEP17 [
Μια
] αντιγράψετε αριθμούς υπολογίστηκαν από
HER2
-DISH ως εξής: [
Μια
= 41/20 = 2.05] και [
Β
= 85/20 = 4,25]. Όταν οι τιμές του [
Μια
] και [
Β
] εφαρμόστηκαν με την εξίσωση (1), τα δεδομένα θα μπορούσε να περιγραφεί από τη γραμμή αναφοράς [
r
= ( 4.25
x
+ 2 (1 –
x
)) /(2,05
x
+ 2 (1 –
x
))] (Εικ 2Δ ). Στην περίπτωση-BR-3 SK κύτταρα, CEP17 αριθμό αντιγράφων [
Μια
] ήταν [
Μια
= 83/20 = 4.15]? Ωστόσο, όπως περιγράφεται ανωτέρω,
HER2
σήματα συγκεντρωμένα, η οποία μειώθηκε τον εκτιμώμενο αριθμό αντιγράφων. Ως εκ τούτου, εφαρμόζοντας [
Μια
= 4.15], [
r
= 5.69] και [
x
= 1,0] με την εξίσωση (1), η εκτιμώμενη
HER2
αριθμού αντιγράφων [
Β ‘
] θεωρήθηκε ότι είναι [
Β’
= 5,69 × 4,15 = 23.61]. Ως εκ τούτου, [
Μια
= 4.15] και [
Β ‘
= 23.61] ενώ και γραμμή αναφοράς ήταν [
r
= (23.61
x
+ 2 (1 –
x
)) /(4.15
x
+ 2 (1 –
x
))] (Σχήμα 2Ε). Απεικονίζονται ψηφιακά δεδομένα PCR από-BR-3 SK κύτταρα αναμιγνύονται με το ΚΟΒ ήταν σύμφωνα με αυτή τη γραμμή και όχι [
r
= (19.50
x
+ 2 (1 –
x
)) /(4.15
x
+ 2 (1 –
x
))], η οποία βασίστηκε σε
HER2
-DISH δεδομένα για τα οποία [
Β
= 19.50]. Αυτά τα αποτελέσματα αποδεικνύουν την εγκυρότητα της TC διάγραμμα-δηλαδή, ότι διαθέτει επαρκή quantitativity των ψηφιακών PCR να διακρίνει HER2-ενισχύθηκε από μη ενισχυμένα κύτταρα
Συμφωνία μεταξύ διάγραμμα TC για την ψηφιακή PCR και HER2-IHC /. – DISH σε κλινικά δείγματα βιοψίας
η γαστρική δείγματα βιοψίας καρκίνου (n = 44) από 32 ασθενείς αναλύθηκαν από ψηφιακές PCR. Η
HER2
κατάσταση της κάθε δείγμα προσδιορίστηκε με HER2-IHC και -DISH (Σχήμα 3Α-3C). Οι εκτιμώμενες τιμές ήταν σύμφωνες με τις οδηγίες μετρήσεις γίνονται από έναν παθολόγο (ΚΜ). ποσοστό TC προσδιορίστηκε από τις εικόνες, διακρίνοντας πυρήνες των καρκινικών από εκείνες των μη καρκινικών κυττάρων (Σχήμα 3D).
(Α-Γ) Εκπρόσωπος περιπτώσεις εμφανίζεται με HE χρώση, HER2-IHC, και
HER2
-DISH. (Α) Περίπτωση # 37: HER2-IHC βαθμολογία = 0,
HER2
-DISH αναλογία = 1,09. (Β) Περίπτωση # 6: βαθμολογίας HER2-IHC = 2+,
HER2
-DISH αναλογία = 2,83. (C) Περίπτωση # 25: βαθμολογίας HER2-IHC = 3+,
HER2
-DISH αναλογία = 6.56. (D) ρυθμός TC υπολογίστηκε με βάση την αναλογία των πυρήνων μετράει ολόκληρων εμπύρηνων και καρκινικά κύτταρα, τα οποία ήταν ημι-αυτόματα διακρίνονται από πυρήνα μεγέθους με καρκινικά κύτταρα που δείχνει διευρυμένη πυρήνες-μέσω Tissue Studio λογισμικό ανάλυσης εικόνας.
δεδομένα Ψηφιακή PCR και TCR κάθε περίπτωση χαράχθηκαν στο διάγραμμα TC (Σχήμα 4), συμπεριλαμβανομένων των δεδομένων για το
HER2
-DISH-θετικό (κόκκινο), -equivocal (μωβ) και – αρνητικό (μπλε), καθώς και HER2-IHC-θετικό (ρόμβους), -equivocal (τρίγωνα), και -αρνητικοί (cross-σήματα) δείγματα. Κλινικοπαθολογοανατομικές πληροφορίες σχετικά με αντιπροσωπευτική και συνολική περιπτώσεις φαίνεται στον Πίνακα 3 και S1 πίνακα αντίστοιχα. Δεν υπήρχαν
HER2
-DISH-θετικών κρουσμάτων κάτω από το όριο [
r
=
x
+ 1]? Ωστόσο, ένα
HER2
-DISH-αρνητικό (# 32), δύο διφορούμενες (# 8 και # 15), και τρία θετικά (# 1, # 41 και # 44) περιπτώσεις παρατηρήθηκαν στο διφορούμενο χώρο . Επιπλέον, υπήρχε ένα
-DISH-αρνητικό HER2
περίπτωση στη θετική περιοχή (# 33). Τρεις περιπτώσεις (# 25, # 26 και # 42) έδειξαν αξιοσημείωτα υψηλή ψηφιακές τιμές PCR (28.25, 19.99, 24.00 και, αντίστοιχα). Σε
HER2
-DISH, οι περιπτώσεις αυτές έδειξαν συγκεντρωμένα
HER2
σήματα (Σχήμα 3C) που ήταν δύσκολο να ποσοτικοποιηθούν, όπως και σε SK-BR-3 κυττάρων. Eq (1) εκφράστηκε επίσης ως εξής: (11)
Κάθε περίπτωση αξιολογήθηκε με HER2-IHC και ψηφιακή PCR, και στη συνέχεια να επικυρωθεί από
HER2
-DISH (Πίνακας 3 και Πίνακας S1 ). Τα αποτελέσματα απεικονίζονται στο TC-διάγραμμα. Τα ευρήματα του HER2-IHC αντιπροσωπεύεται από τα σύμβολα ως εξής? 3+ (θετικό) όπως ρόμβους? 2+ (διφορούμενα), όπως τρίγωνα? 0 ~ 1 + (αρνητικό) ως cross-σήμα. Τα αποτελέσματα του
HER2
-DISH απεικονίζονται με χρώματα ως εξής? θετική, κόκκινο? διφορούμενο, μοβ? αρνητικό, μπλε. Πολλαπλές περιπτώσεις λαμβάνονται από τους ίδιους ασθενείς (Pt) επισημαίνονται. Ο κάθετος άξονας μεταξύ 0,5 και 2,5 γραμμικά διέταξε και η ανώτερη περιοχή λογαριθμικά παραγγείλει. Δεν υπήρξαν θετικές περιπτώσεις (κόκκινο ρόμβους) στην αρνητική περιοχή, αποδεικνύοντας ότι η ψηφιακή PCR μπορεί να οθόνη από αρνητικές περιπτώσεις με υψηλή εξειδίκευση. Από την άλλη πλευρά, οι υποθέσεις απεικονίζονται στον διφορούμενο περιοχή δεν ήταν πάντα θετικές, όπως προσδιορίζεται με CEP17 αριθμό αντιγράφων. Τρεις περιπτώσεις (# 25, # 26 και # 42) έδειξε αξιοσημείωτα υψηλή βαθμολογία και ένα μοτίβο ομαδοποίηση στο
HER2
-DISH (Σχήμα 3C).
Η
Θεωρητικά εκτιμάται [
Β
/
Μια
] υπολογίστηκε με την εφαρμογή των μετριέται [
r
] και [
x
] και μετράται [
A
], η οποία προσδιορίστηκε από μετρήσεις των σημάτων που λαμβάνονται με CEP17
HER2
-DISH σε 20 καρκινικά κύτταρα (Πίνακας 3 και S1 πίνακα). [
Β ‘
] ελήφθη επίσης με μέτρηση [
r
] και [
A
] και [
x
= 1], όπως περιγράφεται για SK-BR-3 κυττάρων.
Πολλαπλές περιπτώσεις αξιολογήθηκαν για οκτώ ασθενείς (Σχήμα 4 και S1 πίνακα). Όλες οι περιπτώσεις σε κάθε ασθενή έδειξαν τα ίδια αποτελέσματα για πιάτο και ψηφιακό PCR εκτός από τον ασθενή 24 (Pt-24)? μία από τις πέντε περιπτώσεις (# 29) ήταν θετικός και δύο (# 30 και # 31) ήταν αρνητικές και για τις δύο μετρήσεις. Δύο περιπτώσεις αρνητικό για DISH διατέθηκαν σε θετικές (# 33) και διφορούμενη (# 32) περιοχές στο διάγραμμα TC (Πίνακας 3 και S1 πίνακα).
Συνολικά, 22 περιπτώσεις HER2-IHC είχε ένα σκορ 2+ (Πίνακας 4), η οποία περιλαμβάνει τρία θετικά, 15 αρνητικά, και τέσσερις αμφίβολες περιπτώσεις με βάση το διάγραμμα TC ψηφιακών PCR. Θετικά και αρνητικά αποτελέσματα ήταν εντελώς σύμφωνη με εκείνες του
HER2
-DISH. Από τις τέσσερις αμφίβολες περιπτώσεις με σκορ IHC 2+, μία (# 1) ήταν θετικό και οι άλλοι (# 8, # 32 και # 41) ήταν αρνητικές, όπως προσδιορίζεται με
HER2
-DISH. Η εκτιμώμενη [
Β
/
Μια
] αξία ήταν ανάλογα ≥ 2,0 στην περίπτωση # 1 και & lt? 2.0 στην τελευταία τρία, εκτός από την περίπτωση # 41, το εκτιμώμενο [
Β
/
Μια
] εκ των οποίων ήταν 2.12.
Η
Αξιολόγηση της εντός του όγκου HER2 ετερογένεια σε χειρουργικά δείγματα
η ενδονεοπλασματική HER2 ετερογένεια αξιολογήθηκε από έναν συνδυασμό HER2-IHC /-DISH και ψηφιακό PCR (Σχήμα 5, S1 και S2 Εικ πίνακα). Case_1, 2, και 4 έδειξαν διακριτή ενδοογκική ετερογένεια που αποτελείται από HER2-IHC θετικών και -αρνητικοί βλάβες σε ένα σύμπλεγμα, ενώ Case_3 έδειξε γενικά ένα διφορούμενο πρότυπο έκφρασης HER2-IHC. Σημαντικά, HER2-θετικό αλλοιώσεις ήταν προσβάσιμο από τον αυλό του στομάχου σε Case_1 (# 1-2, # 1-3), Case_2 (# 2-1, # 2-2), και Case_4 (# 4-4).
(Α) Τέσσερις χειρουργική εκτομή περιπτώσεις αξιολογήθηκαν σε κάθε αντιπροσωπευτικό τμήμα από ένα συνδυασμό χρώση HE, HER2-IHC και -DISH. Κάθε περίπτωση που υποδεικνύεται από χρώματα? Case_1, σκούρο πράσινο? Case_2, θαλάσσια μπλε? Case_3, σκούρο κόκκινο? Case_4, σκούρο μωβ. Υψηλή απόψεις μεγέθυνση χρώση HE, HER2-IHC, και
HER2
-DISH φαίνονται στο S1 Εικ. Οι περιοχές που έχουν επιλεγεί για την εκχύλιση του DNA που οριοθετείται από ένα στερεό μαύρη γραμμή. Case_1, _2 και _4 δείχνουν ετερογένεια στην κατάσταση του HER2. HER2-υπερέκφραση περιοχές HER2-IHC γενικά αντιστοιχεί στην
HER2
τομείς ενίσχυσης, με συμπλέγματος ή πολλαπλές
HER2
σήματα σε
HER2
-DISH. Περιοχή # 2-2 περιλαμβάνει στοιχεία που δείχνουν τόσο HER2-3+ κατά IHC και 0-1. Case_3 αποτελείται από σχετικά ομοιογενή συστατικά που δείχνει ένα 2+ (διφορούμενο) μοτίβο HER2-IHC. (Β) Τα ψηφιακά αποτελέσματα της PCR απεικονίζονται στο TC-διάγραμμα με τον ίδιο τρόπο όπως στο σχήμα 4. Κάθε οικόπεδο είναι σημειωμένα με το όνομα του δείγματος και [
r
] αξία στο χρώμα που προσιδιάζουν σε κάθε υπόθεση. Ο κάθετος άξονας μεταξύ 0,5 και 2,2 γραμμικά διέταξε και η ανώτερη περιοχή λογαριθμικά παραγγείλει.
Η
Όλα τα HER2-IHC /-DISH-θετικές περιπτώσεις χαράχθηκαν στη θετική περιοχή.
You must be logged into post a comment.