Αφηρημένο

αμυγδαλίνη, μια φυσική ένωση, έχει χρησιμοποιηθεί από πολλούς ασθενείς με καρκίνο ως μια εναλλακτική προσέγγιση για τη θεραπεία της ασθένειάς τους. Ωστόσο, έστω και αν η ουσία αυτή ασκεί πραγματικά μια αντικαρκινική δράση δεν έχει διευθετηθεί. Μια μελέτη in vitro άρχισε να διερευνηθεί η επίδραση της αμυγδαλίνη (1,25 έως 10 mg /ml) για την ανάπτυξη ενός πάνελ κυτταρικών γραμμών καρκίνου της κύστεως (UMUC-3, RT112 και TCCSup). Η ανάπτυξη του όγκου, τον πολλαπλασιασμό, την ανάπτυξη και την κλωνική εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου ερευνήθηκαν. (MTOR) που σχετίζονται με τα σήματα phosphoAkt, εξετάστηκαν οι πρωτεΐνες ρύθμισης CDK1, CDK2, CDK4, κυκλίνη Α, κυκλίνη Β, κυκλίνη D1, ρ19 του κυτταρικού κύκλου, ρ27 καθώς και ο στόχος της ραπαμυκίνης στα θηλαστικά phosphoRaptor και phosphoRictor. δοσο-εξαρτώμενο αμυγδαλίνη μειωμένη ανάπτυξη και τον πολλαπλασιασμό σε όλες τις τρεις γραμμές κυττάρων καρκίνου της ουροδόχου κύστης, η οποία αντικατοπτρίζεται σε μια σημαντική καθυστέρηση στην εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου και G0 /G1 σύλληψη. Μοριακή αξιολόγηση αποκάλυψε μειωμένη phosphoAkt, phosphoRictor και απώλεια των CDK και κυκλίνης συστατικά. Δεδομένου ότι παρατηρήθηκαν οι πιο σημαντικές επιδράσεις της αμυγδαλίνη στην cdk2-κυκλίνη Α άξονα, siRNA γκρεμίζω μελέτες διεξήχθησαν, αποκαλύπτοντας μια θετική συσχέτιση μεταξύ cdk2 /κυκλίνης Α επιπέδου έκφρασης και την ανάπτυξη του όγκου. Αμυγδαλίνη, ως εκ τούτου, μπορεί να εμποδίσει την ανάπτυξη του όγκου από τα κάτω-ρύθμιση cdk2 και κυκλίνη Α In vivo έρευνα πρέπει να ακολουθήσετε για να αξιολογήσει την πρακτική αξία αμυγδαλίνη ως ένα φάρμακο κατά του όγκου

Παράθεση:. Makarević J, Rutz J, Juengel Ε , Kaulfuss S, M Reiter, Tsaur I, et al. (2014) αμυγδαλίνη Μπλοκ καρκίνο της ουροδόχου κύστης Η ανάπτυξη των κυττάρων

In Vitro

μειώνοντας κυκλίνης Α και cdk2. PLoS ONE 9 (8): e105590. doi: 10.1371 /journal.pone.0105590

Επιμέλεια: Jun Li, η Sun Yat-sen University Medical School, Κίνα

Ελήφθη: 22 Απρ 2014? Αποδεκτές: 23 Ιουλίου 2014? Δημοσιεύθηκε: 19, Αύγ του 2014

Copyright: © 2014 Makarevic et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Η συγγραφείς επιβεβαιώνουν ότι όλα τα δεδομένα που διέπουν τα ευρήματα είναι πλήρως διαθέσιμα χωρίς περιορισμούς. Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του χαρτιού

Χρηματοδότηση:. Η εργασία αυτή χρηματοδοτήθηκε από το «Brigitta und Norbert Muth Stiftung» (https://www.muth-stiftung.de) και το «Freunde und der Förderer Γκαίτε -Universität Φρανκφούρτης «(https://www2.uni-frankfurt.de). Η χρηματοδότηση έγινε δεκτός από RAB. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

καρκίνωμα της ουροδόχου κύστης είναι η δεύτερη πιο συχνή κακοήθεια του ουροποιογεννητικού συστήματος σε δυτικές χώρες, με συχνότητα 37,9 /100.000 ανά έτος για τους άνδρες και 9,6 /100.000 ανά έτος για τις γυναίκες [1]. Περίπου το 70% των αρχικά διαγνωστεί όγκοι είναι επιφανειακές και μπορεί να θεραπευτεί με διουρηθρική εκτομή, όπου η κύστη θα διατηρηθεί. Το υπόλοιπο 30% των όγκων γίνονται μυών επεμβατικές και συνδέονται με υψηλό κίνδυνο μετάστασης [2]. Για εκείνους τους ασθενείς με τοπικά προχωρημένο ή μεταστατικό καρκίνο, χημειοθεραπεία είναι μια θεραπευτική επιλογή. Ωστόσο, η πρόγνωση των ασθενών με μεταστάσεις παραμένει φτωχή, με μέση επιβίωση 14 μηνών και ένα ποσοστό επιβίωσης 5 ετών 15% [3].

Περισσότερο από το 50% των ασθενών με καρκίνο στην Ευρώπη χρησιμοποιούν συμπληρωματικά /εναλλακτική ιατρική (CAM) αντί, ή σε συνδυασμό με, τη συμβατική θεραπεία [4]. Η δυσαρέσκεια με τη συμβατική θεραπεία και τη μείωση των χημειοθεραπευτικών ανεπιθύμητες ενέργειες είναι οι πιο κοινοί λόγοι για τη χρήση του CAM [5], [6]. Ωστόσο, αν και η χρήση CAM είναι δημοφιλής μεταξύ των ασθενών με καρκίνο, με βάση στοιχεία όφελος από ενώσεις φυσικά βασίζεται λείπει. Η διαφορά μεταξύ της χρήσης ενός φυσικού προϊόντος και γνώσεις σχετικά με τις ιδιότητες κατά του όγκου του αντικατοπτρίζεται κυρίως στην περίπτωση των αμυγδαλίνη. Αμυγδαλίνη (D-μανδελονιτρίλιο-β-gentiobioside) είναι ένα κυανιογόνοι διγλυκοζίτη παρόντες στα pits της πολλά φρούτα και σε πολλά φυτά που ανήκουν στην οικογένεια Rosaceae όπως Prunus persica (ροδάκινο), Prunus armeniaca (βερύκοκο) και Prunus amygdalus Amara (πικραμύγδαλο ). Ο όρος «laetrile» χρησιμοποιείται συχνά ως συνώνυμο για αμυγδαλίνη. Ωστόσο, laetrile είναι δομικά διαφορετική από την μητέρα ένωση, αμυγδαλίνη, και είναι ένα αρκτικόλεξο (αριστερόστροφο και μανδελονιτρίλιο) για ένα καθαρισμένο, ημι-συνθετική μορφή του αμυγδαλίνη. Η παρούσα έρευνα χρησιμοποιεί «αμυγδαλίνη».

αμυγδαλίνη ήταν ένα από τα πιο δημοφιλή, μη-συμβατικά, αντικαρκινικές θεραπείες στη δεκαετία του 1970. Με το 1978, 70.000 ασθενείς με καρκίνο των ΗΠΑ είχε χρησιμοποιήσει αμυγδαλίνη για τη θεραπεία του καρκίνου τους [7]. Παρόλα αυτά, με βάση στοιχεία της έρευνας σε αμυγδαλίνη είναι αραιή και το όφελος της αμφιλεγόμενη. Οι υποστηρικτές θεωρούν αμυγδαλίνη μια φυσική θεραπεία του καρκίνου, ενώ αντίπαλοι προειδοποιούν ότι αμυγδαλίνη είναι αναποτελεσματική και ακόμη και τοξικά. Αν και έχει υποστηριχθεί ότι η αμυγδαλίνη είναι μη ασφαλές, δεν υπάρχει σοβαρή οξεία τοξικότητα έχει συναντήσει. Έχει επίσης το συμπέρασμα ότι η αμυγδαλίνη δεν έχει δυνητική αντι-όγκου, αν και από 368 ασθενείς με καρκίνο που αναφέρονται σε μία κριτική, 12,5% παρουσίασαν πλήρη ή μερική ανταπόκριση, 6,8% είχε σταθερή νόσο και 22,9% απέδειξαν συμπτωματική όφελος από αμυγδαλίνη [8]. Να αποκτήσουν εικόνα για το πώς θα μπορούσε να λειτουργήσει αμυγδαλίνη, η in vitro έρευνα ξεκίνησε να διαπιστωθεί η επίδρασή της στην ανάπτυξη και τον πολλαπλασιασμό του καρκίνου της ουροδόχου κύστης. Επιπλέον, την εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου και ρύθμιση των πρωτεϊνών του κυτταρικού κύκλου αξιολογήθηκαν σε αμυγδαλίνη κατεργασμένα και μη-κατεργασμένα κύτταρα. siRNA γκρεμίζω μελέτες διεξήχθησαν για να διερευνήσει πρωτεΐνες μεταβάλλεται από αμυγδαλίνη, η οποία μπορεί να έχει κλινική σημασία.

Τα in vitro δεδομένα που παρουσιάζονται εδώ δείχνουν σημαντική ανάπτυξη και τον πολλαπλασιασμό αποκλεισμού επιδράσεις των αμυγδαλίνη, πιθανώς επάγεται από μία μείωση της ρύθμιση των πρωτεϊνών cdk2 και κυκλίνη Α

Υλικά και Μέθοδοι

καλλιέργειας κυττάρων

RT112, UMUC-3 (ATCC /LGC Promochem GmbH, Wesel, Γερμανία) και TCCSup κυτταρικού κύκλου (DSMZ, Braunschweig, Γερμανία) κύτταρα καρκινώματος ουροδόχου κύστεως αναπτύχθηκαν και υποκαλλιεργήθηκαν σε RPMI 1640, 10% ορό εμβρύου μόσχου (FCS), 20 mM ΗΕΡΕδ-ρυθμιστικό διάλυμα, 1% glutamax και 1% πενικιλλίνη /στρεπτομυκίνη (όλα: Gibco /Invitrogen? Καρλσρούη , Γερμανία). RT112 είναι μια επεμβατική (παθολογική στάδιο Τ2) μετρίως διαφοροποιημένα (βαθμός 2/3) μοντέλο του ανθρώπινου καρκίνου της ουροδόχου κύστης, ενώ TCCSup είναι ένα μεταβατικό κυτταρικό καρκίνωμα, βαθμός 4. UMUC-3 αντιπροσωπεύει μία υψηλού βαθμού 3, διηθητικό καρκίνο της ουροδόχου κύστης. χρησιμοποιήθηκαν υποκουλτούρες από περάσματα 7-24.

αμυγδαλίνη θεραπεία

αμυγδαλίνη από πυρήνες βερίκοκου (Sigma-Aldrich, Taufkirchen, Γερμανία) ήταν πρόσφατα διαλύθηκε σε μέσο καλλιέργειας κυττάρων και προστίθεται στα κύτταρα όγκου σε συγκεντρώσεις που κυμαίνονται από 1.25-10 mg /ml. Έλεγχοι παρέμειναν χωρίς θεραπεία. Σε όλα τα πειράματα, υποβλήθηκε σε επεξεργασία κυτταρικές καλλιέργειες όγκου σε σύγκριση με μη-επεξεργασμένες καλλιέργειες. Για να εκτιμηθούν οι τοξικές επιδράσεις του αμυγδαλίνη, η βιωσιμότητα των κυττάρων προσδιορίστηκε με trypan blue (Gibco /Invitrogen). Για την αξιολόγηση της απόπτωσης, η έκφραση αννεξίνης V /ιωδιούχο προπίδιο (ΡΙ) προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας το αννεξίνης V-FITC ανίχνευσης απόπτωσης κιτ (Βϋ Pharmingen, Heidelberg, Germany). Τα καρκινικά κύτταρα πλύθηκαν δύο φορές με PBS, και μετά επωάστηκαν με 5 μΐ αννεξίνης V-FITC και 5 μΙ ΡΙ στο σκοτάδι για 15 λεπτά σε RT. Τα κύτταρα αναλύθηκαν σε FACScalibur (BD Biosciences, Heidelberg, Germany). Το ποσοστό των αποπτωτικών κυττάρων (πρώιμη και όψιμη) σε κάθε τεταρτημόριο υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας λογισμικό CellQuest (BD Biosciences).

Μέτρηση της ανάπτυξης των καρκινικών κυττάρων και τον πολλαπλασιασμό

Η ανάπτυξη των κυττάρων εκτιμήθηκε με τη χρήση του 3- (4,5-διμεθυλθειαζολ-2-υλ) -2,5-διφαινυλτετραζόλιο βρωμίδιο (ΜΤΤ) αναγωγής χρωστικής (Roche Diagnostics, Penzberg, Γερμανία). Κύτταρα όγκου (100 μΙ, 1 × 10

4 κύτταρα /ml) σπάρθηκαν σε πλάκες καλλιέργειας ιστών 96 φρεατίων. Μετά από 24, 48 και 72 ώρες, ΜΤΤ (0,5 mg /ml) προστέθηκε για επιπλέον 4 ώρες. Στη συνέχεια, τα κύτταρα λύθηκαν σε ένα ρυθμιστικό διάλυμα που περιέχει 10% SDS σε 0,01 Μ HCl. Οι πλάκες στη συνέχεια επωάστηκαν όλη τη νύχτα στους 37 ° C, 5% CO

2. Απορρόφηση στα 570 nm μετρήθηκε για κάθε κυψελίδα χρησιμοποιώντας έναν μικροπλάκα αναγνώστη ELISA. Κάθε πείραμα έγινε εις τριπλούν. Μετά την αφαίρεση της απορρόφησης υποβάθρου, τα αποτελέσματα εκφράστηκαν ως μέσος αριθμός κυττάρων.

Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων μετρήθηκε χρησιμοποιώντας τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων BrdU συνδεδεμένη με ένζυμο ανοσορροφητική δοκιμασία (ELISA) κιτ (Calbiochem /Merck Biosciences, Darmstadt, Germany). Τα καρκινικά κύτταρα, εμβολιάζονται πάνω σε πλάκες μικροτιτλοδότησης 96 φρεατίων, επωάστηκαν με 20 μΙ διάλυμα σήμανσης BrdU ανά φρεάτιο για 8 ώρες, σταθεροποιήθηκαν και ανιχνεύθηκε χρησιμοποιώντας αντι-BrdU mAb σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Η απορρόφηση μετρήθηκε στα 450 nm.

Κλωνογόνος

δοκιμασία

κύτταρα όγκου, προκατεργάστηκαν με αμυγδαλίνη για 2 εβδομάδες, μεταφέρθηκαν σε τρυβλία 6 φρεατίων σε 300 κύτταρα ανά φρεάτιο. Μετά από 10 ημέρες επώασης, κατά την οποία τα κύτταρα είτε εκτέθηκαν σε αμυγδαλίνη ή όχι, οι αποικίες σταθεροποιήθηκαν και μετρήθηκαν. Αποικίες τουλάχιστον 50 κύτταρα μετρήθηκαν ως μία.

κυτταρικού κύκλου ανάλυσης

ανάλυση κυτταρικού κύκλου διεξήχθη με υποσυμβάλλουσες καρκινικά κύτταρα. πληθυσμοί κυττάρων όγκου υπέστησαν χρώση με ιωδιούχο προπίδιο, χρησιμοποιώντας ένα κύκλο δοκιμής PLUS σετ αντιδραστηρίων DNA (BD Pharmingen) και στη συνέχεια υποβλήθηκε σε κυτταρομετρία ροής με ένα FACScan κυτταρόμετρο ροής (Becton Dickinson). 10.000 γεγονότα συλλέχθηκαν για κάθε δείγμα. Η απόκτηση των δεδομένων πραγματοποιήθηκε με τη χρήση του λογισμικού Κυττάρου-Quest και διανομή του κυτταρικού κύκλου υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας το λογισμικό ModFit (BD Biosciences). Ο αριθμός των περιφραγμένο κυττάρων στο G1, G2 /M ή S-φάση παρουσιάζεται ως%.

κηλίδωση Western

Για να διερευνηθεί πρωτεΐνες που εμπλέκονται στην ρύθμιση της κυτταρικής ανάπτυξης, προϊόντα λύσης κυττάρου όγκου εφαρμόστηκαν σε μια πηκτή πολυακρυλαμιδίου 7% και ηλεκτροφορήθηκαν για 90 λεπτά στους 100 V. Η πρωτεΐνη μετά μεταφέρθηκε σε μεμβράνες νιτροκυτταρίνης. Μετά από αποκλεισμό με μη λιπαρό ξηρό γάλα για 1 ώρα, οι μεμβράνες επωάστηκαν όλη τη νύκτα με μονοκλωνικά αντισώματα που κατευθύνονται έναντι των πρωτεϊνών του κυτταρικού κύκλου: Cdk1 (IgG1, κλώνος 1), CDK2 (IgG2a, κλώνος 55), CDK4 (IgG1, κλώνος 97), κυκλίνη Α (IgG1, κλώνος 25), κυκλίνη Β (IgG1, κλώνος 18), η κυκλίνη D1 (IgG1, κλώνος G124-326), ρ19 (IgG1, κλώνος 52 /ρ19), ρ27 (IgG1, κλώνος 57? όλα: BD Pharmingen ). Ο στόχος της ραπαμυκίνης στα θηλαστικά (mTOR) οδού ερευνήθηκε χρησιμοποιώντας τα ακόλουθα μονοκλωνικά αντισώματα: αντι φωσφο Rictor (pRictor? IgG, Thr1135, κλώνος D30A3), αντι φωσφο Raptor (pRaptor? IgG, Ser792? Και τα δύο: New England Biolabs, Φρανκφούρτη, Γερμανία), αντι φωσφο Akt (pAkt? IgG1, Ser472 /Ser473, κλώνος 104A282? BD Pharmingen). Επιγενετικές διαμόρφωση ερευνήθηκε με αντι ακετυλιωμένης Η3 (ΑΗ3? IgG, Lys9, κλώνος C5B11) και αντι ακετυλιωμένης Η4 (AH4? Lys8, πολυκλωνικά, IgG? Ταυτόχρονα: New England Biolabs).

HRP-συζευγμένο αντίσωμα κατσίκας αντι- -mouse IgG (Upstate Biotechnology, Lake Placid, ΝΥ, USA? 1:5.000 αραίωση) χρησίμευσε ως δευτερεύον αντίσωμα. Οι μεμβράνες επωάστηκαν με συντομία αντιδραστήριο ανίχνευσης ECL (ECLTM, Amersham /GE Healthcare, München, Germany) για την οπτικοποίηση των πρωτεϊνών και στη συνέχεια αναλύονται με το σύστημα FX7 Fusion (Peqlab, Erlangen, Germany). β-ακτίνη (1:1000? Sigma, Taufenkirchen, Γερμανία). υπηρέτησε ως εσωτερικός έλεγχος

Gimp 2.8 λογισμικό χρησιμοποιήθηκε για να εκτελέσει την ανάλυση πυκνότητα pixel των πρωτεϊνικών ζωνών. Αναλογία ένταση του κάθε διερευνήθηκαν πρωτεΐνης /ένταση του β-ακτίνης υπολογίστηκε, και οι τιμές εντάσεως κατόπιν εκφράζεται σε ποσοστό, σε σχέση με τους ελέγχους στο 100%.

Cdk2 και κυκλίνης Ένα πτυσσόμενο

όγκου κύτταρα (3 χ 10

5/6 για φρεατίων) μορφομετατράπηκαν με μικρό παρεμβαλλόμενο RNA (siRNA) που κατευθύνονται έναντι CDK2 (γονίδιο ID: 1017, αλληλουχία στόχος: AGGTGGTGGCGCTTAAGAAAA) ή την κυκλίνη Α (γονίδιο ID: 890, αλληλουχία στόχος : GCCAGCTGTCAGGATAATAAA? Qiagen, Hilden, Γερμανία), με ένα αντιδραστήριο siRNA /διαμόλυνσης (αντιδραστήριο HiPerFect Transfection? Qiagen) αναλογία 1:06. Μη επεξεργασμένα κύτταρα και κύτταρα επεξεργασμένα με έλεγχο 5ηΜ siRNA (Όλα τα αστέρια αρνητικός siRNA ελέγχου? Qiagen) χρησίμευσαν ως μάρτυρες. Στη συνέχεια, η ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων αναλύθηκε όπως αναφέρεται ανωτέρω.

Στατιστικά

Όλα τα πειράματα διεξήχθησαν 3-6 φορές. Η στατιστική σημαντικότητα αξιολογήθηκε με την μη παραμετρική Wilcoxon-Mann-Whitney-U-test για πειράματα επαναλαμβάνεται 6 φορές. Πειράματα πραγματοποιούνται 3 φορές αξιολογήθηκαν στατιστικά με την παραμετρική δοκιμή t. Οι διαφορές θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές σε αξία απ ​​μικρότερη από 0,05.

Αποτελέσματα

δόσης-απόκρισης ανάλυση

Η έκθεση των καρκινικών κυττάρων σε αμυγδαλίνη (αίτηση ενιαίας δόσης) οδήγησε σε συγκέντρωση εξαρτώμενη μείωση του αριθμού των καρκινικών κυττάρων, με το πιο σημαντικό αποτέλεσμα εμφανείς στην TCCSup κυτταρική γραμμή (Σχ. 1, 24 ώρες εφαρμογή). Δεν παρατηρήθηκαν σημεία τοξικότητας φαίνεται από την trypan blue δοκιμή αποκλεισμού. Δεδομένου ότι η ισχυρότερη μείωση των κυττάρων παρατηρήθηκε με 10 mg /ml αμυγδαλίνη, αυτή η συγκέντρωση χρησιμοποιήθηκε για όλη την ακόλουθη έρευνα. Μακροχρόνια θεραπεία που αποτελείται από 10 mg /ml αμυγδαλίνη προστίθεται σε κύτταρα όγκου τρεις φορές την εβδομάδα για μια περίοδο 2 εβδομάδων έδειξε ότι η κυτταρική ανάπτυξη ελαττώθηκε σε παρόμοια έκταση όπως εκείνη που αντιμετωπίζονται με το πρωτόκολλο βραχυπρόθεσμη θεραπεία (σχ. 1, 2 εφαρμογή εβδομάδες).

Οι έλεγχοι παρέμειναν χωρίς θεραπεία. Κάτω: όγκου της κυτταρικής ανάπτυξης μετά από 2 εβδομάδες θεραπείας με 10 mg /ml αμυγδαλίνη. Κάθε πείραμα έγινε εις τριπλούν και επαναλήφθηκε 5 φορές. Τα δεδομένα από ένα αντιπροσωπευτικό πείραμα δείχνεται. * Υποδηλώνει σημαντική διαφορά με τους μάρτυρες (p = 0,0022).

Η

Οι έλεγχοι παρέμειναν χωρίς θεραπεία. Η άνω δεξιά τεταρτημόριο δείχνει το ποσοστό των κυττάρων στα τέλη της απόπτωσης, η κάτω δεξιά τεταρτημόριο ποσοστό των κυττάρων στην πρώιμη απόπτωση (ένας εκπρόσωπος από 3 δοκιμές? SD

ενδο-δοκιμασίας & lt? 10%).

Η

Η απόπτωση

Βραχυπρόθεσμες εφαρμογή αμυγδαλίνη για 24 ώρες δεν προκάλεσε απόπτωση (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Ωστόσο, το ποσοστό των κυττάρων του όγκου που υφίστανται απόπτωση νωρίς περίπου διπλασιάζονται μετά από δύο εβδομάδες έκθεση αμυγδαλίνη σε όλες τις τρεις κυτταρικές γραμμές: p = 0,0026 (UMUC-3), ρ = 0.0145 (TCCSup) και ρ = 0.0208 (RT112). Επιπλέον, ο διπλασιασμός στα τέλη απόπτωση σημειώθηκε στην κυτταρική γραμμή UMUC-3 (σχήμα 2?. P = 0,0230)

καρκινικών κυττάρων πολλαπλασιασμό και κλωνική κυτταρική ανάπτυξη

Ο πολλαπλασιασμός και στις τρεις κυτταρικές σειρές. σημαντικά μειώθηκε, αν αμυγδαλίνη εφαρμόστηκε για 24 ώρες ή 2 εβδομάδων (σχήμα 3, αριστερά). Μετά από 2 εβδομάδες έκθεση αμυγδαλίνη σε κύτταρα υποσυρρέοντα, κλωνική ανάπτυξη στη συνέχεια αξιολογήθηκε, οπότε αμυγδαλίνη ήταν είτε προστίθενται για μεταγενέστερη περίοδο 10 ημερών ( «αμυγδαλίνη Β») ή όχι ( «αμυγδαλίνη Α»). Ο αριθμός των κλώνων RT112 μειωθεί αισθητά με έκθεση αμυγδαλίνη 10 ημέρα κατά τη διάρκεια του σχηματισμού κλωνική και δεν κλώνοι TCCSup ήταν εμφανείς (Σχ. 3, δεξιά). Όταν αμυγδαλίνη δεν εφαρμόστηκε κατά το σχηματισμό κλώνων, ο αριθμός των RT112 και TCCSup κλώνους μειώθηκε επίσης, αν και όχι τόσο έντονα όπως φαίνεται στο σχήμα «αμυγδαλίνη Β» (εικ. 3, δεξιά). Η κυτταρική σειρά UMUC-3 δεν σχηματίζει αποικίες και, ως εκ τούτου, δεν αξιολογούνται

Δεξιά:. Κλωνογόνος ανάπτυξη των TCCSup και RT112 κύτταρα (μετά από 2 εβδομάδες πολιτισμό υποσυμβάλλουσες με 10 mg /ml αμυγδαλίνη) χωρίς (έλεγχο ) και με αμυγδαλίνη. Αμυγδαλίνη Α = 10 ημέρες αμυγδαλίνη δωρεάν επώασης κατά τη διάρκεια κλωνογονικού ανάπτυξης. Amygdalin Β = 10 ημέρα κλωνογονική ανάπτυξη με 10 mg /ml αμυγδαλίνη. Τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν εις τριπλούν και επαναλήφθηκε 5 φορές. * Υποδηλώνει σημαντική διαφορά με τους μάρτυρες (p = 0,0022).

#indicates σημαντική διαφορά για αμυγδαλίνη Α (p = 0,0022).

Η

κυτταρικού κύκλου εξέλιξης

Amygdalin διαμορφωμένου εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου, ανάλογα με την κυτταρική γραμμή όγκου (εικ. 4 ). Βραχυπρόθεσμες εφαρμογή αμυγδαλίνη (24 ώρες) για να UMUC-3 αύξησε τον αριθμό των κυττάρων G0 /G1 (ρ = 0,0169) και μείωσε τον αριθμό των κυττάρων φάσης S (p = 0,0138). Σε κύτταρα TCCSup βραχυχρόνια θεραπεία αύξησε τον αριθμό των κυττάρων G0 /G1 φάσης (p = 0,0121), αλλά μείωσε τον αριθμό των κυττάρων στο G2 /M φάσης (p = 0,0406). Σε κύτταρα RT112 βραχυχρόνια έκθεση αμυγδαλίνη προκάλεσε μείωση G2 /M φάσης (p = 0,0039) και μία αύξηση S-φάση (p = 0,0040). Δύο εβδομάδες έκθεση αμυγδαλίνη μείωσε την G2 /M φάσης (p

UMUC-3 = 0,0036? P

TCCSup = 0,0080? P

RT112 = 0,0015) και αύξησε το G0 /G1 φάσης σε όλες τις κυτταρικές όγκου γραμμές (p

UMUC-3 = 0,0019, p

TCCSup = 0,0143, p

RT112 = 0,0018). Ο αριθμός των κυττάρων φάσης S ήταν επίσης μειωθεί σημαντικά μετά από δύο εβδομάδες θεραπείας σε UMUC-3 (ρ = 0,0093) και κύτταρα RT112 (p = 0.0032), σε σύγκριση με τους ελέγχους.

Ο πληθυσμός των κυττάρων εκφράζεται ως εκατοστιαία αναλογία των συνολικών κυττάρων που αναλύθηκαν. Ένα αντιπροσωπευτικό πείραμα από τρία δείχνεται.

Η

κυτταρικού κύκλου που ρυθμίζουν την έκφραση της πρωτεΐνης

Δεδομένου ότι, θα μπορούσε να αναμένεται αμυγδαλίνη επηρεάζεται κυτταρικής ανάπτυξης και εξέλιξης του κυτταρικού κύκλου τροποποιήσεις της ελέγχουσας πρωτεϊνών του κυτταρικού κύκλου. Η έκφραση των CDK1 και CDK2 (όλες οι κυτταρικές σειρές) και CDK4 (TCCSup, RT112) ελαττώθηκε από 24 ώρες μετά την εφαρμογή αμυγδαλίνη (εικ. 5). Ρ-τιμές ήταν ως εξής για cdk1 (p

UMUC-3 = 0,0029, p

TCCSup = 0,0052, p

RT112 = 0,0007), για CDK2 (p

UMUC-3 = 0,0001, p

TCCSup = 0,0006, p

RT112 = 0,0001), για CDK4 (p

TCCSup = 0,0006, p

RT112 = 0,0001), για κυκλίνη Α (p

UMUC-3 = 0,0001, p

TCCSup = 0,0001, p

RT112 = 0,0002), για κυκλίνη Β (p

TCCSup = 0.001, p

RT112 = 0,0001) και για κυκλίνης D1 (p

UMUC-3 = 0,0001, ρ

TCCSup = 0,0001, p

RT112 = 0.0001). ρ19 ενισχύθηκε σε UMUC-3 (ρ = 0,0013) και RT112 (p = 0,0012), αλλά μειώνεται σε TCCSup (p = 0,0001), ενώ ρ27 μειώθηκε σε όλες τις κυτταρικές σειρές (p

UMUC-3 = 0,0013, p

TCCSup = 0,0001, p

RT112 = 0,0001). pAkt καθώς pRictor (αλλά όχι pRaptor), από την οδό mTOR, απενεργοποιήθηκαν σε όλες τις τρεις κυτταρικές γραμμές. Ρ-τιμές ήταν ως εξής για pAkt (p

UMUC-3 = 0,0002, p

TCCSup = 0,0004, p

RT112 = 0,0082) και για pRictor (p

UMUC-3 = 0,0015, p

TCCSup = 0,0017, p

RT112 = 0,0001). pRaptor ελαττώθηκε μόνο σε TCCSup (p = 0,0024).

Καρκινικά κύτταρα προκατεργάστηκαν με αμυγδαλίνη για 24 ώρες ή 2 εβδομάδες (έλεγχοι παρέμειναν χωρίς θεραπεία). β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικός έλεγχος. Ένας αντιπρόσωπος από τρία ξεχωριστά πειράματα. Το δεξί πάνελ του σχήματος 5 δείχνει τιμές πυκνότητας pixel δίνεται σε ποσοστό που σχετίζονται με τους ελέγχους που δεν αντιμετωπίζονται με αμυγδαλίνη. * Υποδηλώνει σημαντική διαφορά στον έλεγχο.

Η

Μικρές διαφορές ήταν εμφανείς μετά από 2 εβδομάδες, σε αντίθεση με την έκθεση αμυγδαλίνη 24 ώρες. Cdk1 αλλά δεν cdk2 ήταν ρυθμισμένα προς τα κάτω σε UMUC-3 (ρ = 0,0001). Το 24 h μειώνεται επιρροή του αμυγδαλίνη στην έκφραση ρ27 σε UMUC-3 και TCCSup κύτταρα χάθηκε μετά από 2 εβδομάδες, και pRaptor αυξημένη μετά από 2 εβδομάδες σε κύτταρα TCCSup (p = 0,0019), σε αντίθεση με το 24 h μείωσης της επίπτωσης (εικ. 5 ).

Cdk2 /κυκλίνης Α knockdown

από αμυγδαλίνη έντονα τροποποιημένων cdk2 και κυκλίνη Α σε όλες τις κυτταρικές σειρές όγκων και αυτές οι πρωτεΐνες ρυθμίζουν την είσοδο στην μιτωτική κύκλο, ο ρόλος αυτών των πρωτεϊνών στην ανάπτυξη του όγκου αξιολογήθηκε από siRNA knock-down. Η επώαση των UMUC-3, RT112 και TCCSup κυττάρων με siRNA έναντι CDK2 ή την κυκλίνη Α μειώνεται σαφώς η περιεκτικότητα σε πρωτεΐνες (εικ. 6, κάτω δεξιά) και συνοδεύτηκε από σημαντικές αποκλεισμό ανάπτυξης σε όλες τις τρεις κυτταρικές γραμμές (εικ. 6).

UMUC-3, TCCSup και RT112 κύτταρα επιμολυσμένα με CDK2 ή την κυκλίνη Α siRNA και γκρεμίζω ελεγχόταν από δυτικές κηλίδα (κάτω δεξιά). Ένας εκπρόσωπος από 6 πειράματα παρουσιάζεται. * Υποδηλώνει σημαντική διαφορά με τους μάρτυρες (p = 0,0022).

Η

Συζήτηση

Τα στοιχεία που παρουσιάζονται εδώ δείχνουν ότι αμυγδαλίνη καταστέλλει την ανάπτυξη και τον πολλαπλασιασμό σε τρεις γραμμές κυττάρων καρκίνου της ουροδόχου κύστης. Ο αριθμός των κυττάρων του όγκου που υφίστανται πρώιμη απόπτωση αυξήθηκε ελαφρά μετά από μακροχρόνια έκθεση αμυγδαλίνη, αν και όχι μετά από μικρής διάρκειας έκθεση και αυτή η αναστολή της πολλαπλασιαστικής δραστικότητας δεν προκλήθηκε από μια τοξική επίδραση του αμυγδαλίνη. Άλλοι ερευνητές έχουν επίσης δείξει σημάδια apoptotosis που προκαλείται από αμυγδαλίνη. Ταχεία ενεργοποίηση της κασπάσης-3, μαζί με τα κάτω ρύθμιση του Bcl-2 και άνω ρύθμιση του Bax παρουσία 0,1 mg /ml αμυγδαλίνη έχει καταδειχθεί σε DU145 και LNCaP κύτταρα καρκίνου του προστάτη [9]. Ο αποπτωτικός κυτταρικός θάνατος έχει επίσης προκαλείται από αμυγδαλίνη στην αυχενική καρκινική κυτταρική σειρά HeLa [10] και σε ανθρώπινη προμυελοκυτταρική λευχαιμία (HL-60) κύτταρα [11]. Συνολικά αυτές οι εκθέσεις δείχνουν ότι αμυγδαλίνη μπορεί να ευθύνεται για αποπτωτικά γεγονότα σε διάφορες καρκινικά κύτταρα, συμπεριλαμβανομένων εκείνων από την ουροδόχο κύστη, και να συμβάλλει στη μειωμένη ανάπτυξη του όγκου.

Amygdalin έντονα μεταβληθεί εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου σε όλα τα καρκινικές κυτταρικές σειρές τρία κύστης. Κατά τη διάρκεια της σύντομης διάρκειας θεραπεία, UMUC-3 και TCCSup συσσωρευτεί σε G0 /G1, ενώ RT112 συνελήφθη στην S-φάση. Μίτωση Συνεπώς, επηρεάζεται με διαφορετικό τρόπο σε διαφορετικές κυτταρικές σειρές με αμυγδαλίνη. Μια άλλη διαφορά ήταν ότι p19 αυξήθηκε το RT112 αλλά μειώθηκε σε TCCSup. Rictor απενεργοποιήθηκε και cdk4 κατεστάλη σε RT112 αλλά όχι σε UMUC-3. αναστολή CDK4 και ρ19 αύξηση έχει πρόσφατα αποδειχθεί ότι οδηγεί τα καρκινικά κύτταρα στην φάση S [12]. Δεδομένου ότι τόσο Cdk4 αναστολή και ρ19, σε συνδυασμό, εμφανίστηκε μόνο στα κύτταρα RT112, αυτό θα μπορούσε να εξηγήσει γιατί RT112 συσσωρευτεί στον S-φάση, και όχι στη φάση G0 /G1. Πράγματι, cdk4 δεν μειώθηκε μετά την εφαρμογή 2 εβδομάδες αμυγδαλίνη, και τα κύτταρα RT112 στη συνέχεια συνελήφθησαν σε G0 /G1. Παρ ‘όλα αυτά, η είσοδος S-φάση δεν ελέγχεται αποκλειστικά από CDK4 και ρ19. Αντίθετα, μια ομάδα πρωτεϊνών του κυτταρικού κύκλου εμπλέκεται στην οδήγηση κυτταρική διαίρεση προς τα εμπρός. Αμυγδαλίνη φαίνεται, ως εκ τούτου, να παρεμβαίνει σε μια κυτταρική σειρά με τρόπο που εξαρτάται με αρκετές οδοφράγματος μόρια, να διαταραχθεί η τελειοποιηθεί μηχανήματα μιτωτική. αποκλεισμό της ανάπτυξης είναι το τελικό αποτέλεσμα.

Η σημασία του p19 και p27 στην εξέλιξη του καρκίνου της ουροδόχου κύστης δεν έχει πλήρως διευκρινιστεί. Αμφότερες οι πρωτεΐνες ισχυρά τροποποιημένα μετά την εφαρμογή αμυγδαλίνη στην παρούσα έρευνα, ρ27 είναι ρυθμισμένα προς τα κάτω σε όλες τις κυτταρικές σειρές, ρ19 είναι επάνω ρυθμισμένη σε UMUC-3 και RT112 αλλά μειώθηκε σε TCCSup. Ημι-ποσοτική RT-PCR σε μια σειρά από 32 δείγματα καρκίνου της ουροδόχου κύστης σε συνδυασμό με παρακείμενες φυσιολογικούς ιστούς δεν προέκυψαν σημαντικές διαφορές των ρ19 και ρ27 έκφρασης [13]. Από την άλλη πλευρά, προοπτική αξιολόγηση των ασθενών με καρκίνο της ουροδόχου κύστης υψηλού βαθμού υποβάλλεται σε επεξεργασία με ριζική κυστεκτομή αποδειχθεί περισσότερο ρ27 θετικά παρά αρνητικά όγκων σε ασθενείς με υποτροπή της νόσου [14]. ανάλυση μικροσυστοιχιών έχει δείξει μια θετική συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης ρ27 και προηγμένο καρκίνο της ουροδόχου κύστης [15]. Σε αντίθεση, μια άλλη μελέτη έχει αναφερθεί δυσμενή επίδραση της απώλειας p27 που συνδέεται με το καρκίνωμα της ουροδόχου κύστης [16]. Σε πειράματα in vitro έχουν επισημανθεί σε έναν απροσδιόριστο ρόλο της p27 στο βαθμό που η καταστολή της πρωτεΐνης αυτής είναι αυξημένα ανάπτυξης, αλλά ταυτόχρονα μειώνεται εισβολή [17] – [19]. Με βάση αυτό, δεν είναι δυνατόν να εκτιμηθεί αν τελικά μείωση ρ27 μετά την εφαρμογή αμυγδαλίνη συνδέεται με τον πολλαπλασιασμό, να εισβολή ή και στα δύο. Να αποκτήσουν εικόνα για τη διαδικασία της εισβολής, μια νέα έρευνα έχει ξεκινήσει με επίκεντρο την δράση του αμυγδαλίνη σε καρκινικών κυττάρων εξαπλώνεται.

αμυγδαλίνη μειωμένη φωσφορυλίωση της Akt και της υπομονάδας mTOR, rictor. σηματοδότηση ΑΚΤ mTOR παίζει σημαντικό ρόλο στην καρκινογένεση της ουροδόχου κύστης, με Akt ενεργοποίηση συμβαίνει σε ολόκληρο το φάσμα της ουροδόχου κύστης ουροθηλιακά καρκινώματα [20]. Το έργο Cancer Genome Atlas έχει εντοπίσει το μονοπάτι AKT /mTOR ως ένα κρίσιμο θεραπευτικό στόχο για τον καρκίνο της ουροδόχου κύστης [21]. Η συγκεκριμένη δράση του αμυγδαλίνη στο συγκρότημα rictor mTOR είναι ενδιαφέρον, δεδομένου ότι οι εγκεκριμένες mTOR-αναστολείς, το everolimus και temsirolimus, στοχεύουν στην mTOR συγκρότημα αρπακτικών, ενώ rictor θεωρείται ευαίσθητος και στα δύο φάρμακα [22]. Rictor έχει δειχθεί ότι είναι ένας σημαντικός καθοριστικός παράγοντας στη μετανάστευση καρκίνο της ουροδόχου κύστης και εισβολή [23]. Έτσι, αμυγδαλίνη μπορούσε μόνο να μην είναι ένα καινοτόμο εργαλείο για να εξουδετερώσει μεταστατική διάδοση αλλά και για τη συμπλήρωση του mTOR αναστολέα σχήματα που βασίζονται.

Cdks, μαζί με κυκλίνες, αποτελούν βασικά μόρια που είναι υπεύθυνα για την εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου και την κυτταρική διαίρεση, σύμφωνα με την οποία συγκεκριμένα οι cdks συνδεδεμένες με ιδιαίτερη κυκλίνες. Συνεπώς, παρεκκλίνουσα ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων έχει αποδοθεί στην διαφοροποίηση στο επίπεδο έκφρασης cdk-κυκλίνης. Τα ισχυρότερα αλλοιώσεις πρωτεΐνη μετά αμυγδαλίνη επώασης 24 h παρατηρήθηκαν για cdk2 και κυκλίνη Α, και μπορεί να αντιπροσωπεύει κύριους στόχους του αμυγδαλίνη. Αν και δεν υπάρχουν μέχρι σήμερα ερευνητές έχουν προχωρήσει αυτή η υπόθεση, αμυγδαλίνη έχει δειχθεί ότι μεταβάλλει γονίδια που εμπλέκονται στη ρύθμιση του κυτταρικού κύκλου των ανθρώπινων καρκινικών κυττάρων του παχέος εντέρου [24]. Η cdk2-κυκλίνη Α άξονας προωθεί G1 /μετάβασης φάσης S, η οποία μπορεί να εξηγήσει γιατί cdk2 /κυκλίνη Α κάτω διαμόρφωση με αμυγδαλίνη συνοδεύτηκε από τη σύλληψη φάση G0 /G1 σε UMUC-3 και TCCSup κύτταρα. In vitro διερεύνηση κύτταρα σαρκώματος μαλακών ιστών έχει δείξει ότι η μείωση cdk2 συνδυάζεται με απώλεια ρ27 επηρεάζει το πρόγραμμα κυτταρική εισβολή [25]. Δεδομένου ότι η μείωση cdk2 έγινε παράλληλα με μια μείωση ρ27 στο μοντέλο καρκίνου της ουροδόχου κύστης, φαίνεται πιθανό ότι αμυγδαλίνη δρα όχι μόνο στην αύξηση του όγκου, αλλά θα μπορούσε επίσης να επηρεάσει μεταστατική εξάπλωση.

Πράγματι, αν και cdk2-κυκλίνη Α αλλοιώνονται σε πολλές συμπαγείς όγκους, πληροφορίες σχετικά με cdk2-κυκλίνη Α σε καρκίνο της ουροδόχου κύστης είναι αραιή. Πρωτεΐνης και mRNA αναλύσεις των ιστών καρκινώματος της ουροδόχου κύστης έχουν δείξει ότι η cdk2 συνδέεται στενά με την ανάπτυξη των όγκων της ουροδόχου κύστης και της προόδου [26]. εταίρου δέσμευσης Cdk2, η κυκλίνη Α, έχει συσχετισθεί με το βαθμό του όγκου και φτωχές συγκεκριμένες ασθένειες επιβίωση, που αποδεικνύεται από ανοσοϊστοχημεία και cDNA μικροσυστοιχίες [27]. Στα τρέχοντα πειράματα, να χτυπήσει κάτω cdk2 ή κυκλίνη Α οδήγησε σε σημαντική μείωση του αριθμού των κυττάρων του όγκου, υποδεικνύοντας την κλινική σημασία των δύο πρωτεϊνών για τον καρκίνο της ουροδόχου κύστης. Δεδομένου ότι οι cdks και κυκλίνες ενισχύεται όταν αναπτύσσεται αντοχή φαρμάκου [28], [29], εξουδετερώνοντας τη διαδικασία αυτή θα μπορούσε να είναι ένα ισχυρό στρατηγική για την πρόληψη ή την ελαχιστοποίηση της αντίστασης [29]. Κατά τη διάρκεια των τελευταίων ετών, αρκετές νέες θεραπευτικές στρατηγικές έχουν σχεδιαστεί για τη στόχευση cdks. Επί του παρόντος, αυτοί βρίσκονται σε διάφορα στάδια κλινικής ανάπτυξης, καθώς και οι δύο μονοί παράγοντες ή σε συνδυασμό [30]. Αμυγδαλίνη θα μπορούσε να είναι ένα «φυσικό» εναλλακτική λύση, σύμφωνα με την οποία [31] θα μπορούσαν να αποφευχθούν σοβαρές παρενέργειες που σχετίζονται με τα συμβατικά CDK-αναστολείς.

παρατηρήθηκαν μικρές διαφορές μεταξύ των βραχυπρόθεσμων και μακροπρόθεσμων εφαρμογή αμυγδαλίνη, ιδιαίτερα σε η κυτταρική γραμμή UMUC-3. Cdk2 δεν ήταν πλέον μειωθεί μετά από 2 εβδομάδες, αλλά CDK1 ήταν πιο έντονα μειώθηκε από μετά από 24 ώρες εφαρμογή αμυγδαλίνη. Ο λόγος για αυτή την αλλαγή πάνω, μετά από μακροχρόνια εφαρμογή δεν είναι σαφής. Cdk2 συσσωρεύεται στο όριο φάσης G1 /S, ενώ CDK1 δίσκους κυττάρων σε μίτωση [32]. Οι ποικίλους μηχανισμούς της CDK1 και CDK2 αντικατοπτρίζεται από τη δοκιμασία του κυτταρικού κύκλου επιδεικνύοντας επιπλέον σύλληψη του UMUC-3 σε G2 /M μετά από 2 εβδομάδες έκθεση αμυγδαλίνη. Από UMUC-3 ανάπτυξη και τον πολλαπλασιασμό παρομοίως τροποποιηθεί με την εφαρμογή αμυγδαλίνη 24 ώρες και για 2 εβδομάδες, cdk2 μπορεί να έχουν γίνει αναίσθητη σε καταστολή αμυγδαλίνη, αλλά αυτό αντισταθμίζεται από μία καταστολή της CDK1. Στην πραγματικότητα, CDK1 έχει αναφερθεί για την αντιστάθμιση cdk2 με αναπροσανατολισμό CDK1 στην κυκλίνη Α μονοπάτι, η οποία κανονικά περιορίζεται σε cdk2 [33].

Αυτή είναι η πρώτη έρευνα που παρέχει πληροφορίες σχετικά με την επιρροή αμυγδαλίνη για καρκίνο της ουροδόχου κύστης κύτταρο γραμμές in vitro. Τέτοιες μελέτες in vitro μπορεί να κάνει τίποτα περισσότερο από ό, τι προβάλλει μια πρόβλεψη της αποτελεσματικότητας αμυγδαλίνη σε ασθενείς. Οι κλινικές δοκιμές με αμυγδαλίνη δεν έχουν καλά τεκμηριωμένες και τυχαιοποιημένες ελεγχόμενες μελέτες δεν έχουν ποτέ πραγματοποιηθεί. Μια αναδρομική ανάλυση 67 ασθενών όγκου που είχε πάρει αμυγδαλίνη αναφερθεί δύο πλήρεις και 4 μερικές ανταποκρίσεις [34]. Μια μελέτη φάσης II διεξήχθη το 1982, σύμφωνα με την οποία οι ασθενείς έλαβαν επίσης βιταμίνες και τα παγκρεατικά ένζυμα. Θεραπεία διεκόπη όταν τα επίπεδα κυανίου στο αίμα αυξηθεί και εξήχθη το συμπέρασμα ότι Laetrile δεν ήταν μια αποτελεσματική θεραπεία του καρκίνου [35]. Άλλες εκθέσεις δείχνουν αμυγδαλίνη να είναι σαφές όφελος σε ασθενείς με καρκίνο [8]. Ωστόσο, ο όρος «όφελος» δεν προσδιορίζονται με σαφήνεια. Αμφιθυμία έχει επίσης αντανακλάται στις εκθέσεις περίπτωση, όπου αμυγδαλίνη ήταν αναποτελεσματική σε πέντε και αποτελεσματική σε τέσσερις περιπτώσεις [8].

Δεν είναι ακόμα σαφές εάν αμυγδαλίνη θα μπορούσε επίσης να λειτουργήσει σε κανονική, φυσιολογικά άθικτα επιθηλιακά κύτταρα. Από πρωτογενείς μη αθανατοποιημένη επιθηλιακά κύτταρα δεν εμφανίζουν μιτωτική δραστηριότητα ή ταχέως χάνουν μιτωτική δραστηριότητα in vitro, τα κύτταρα αυτά δεν μπορούν να υποβληθούν σε δοκιμασία ανάπτυξης ΜΤΤ. Ωστόσο, αμυγδαλίνη έχει πρόσφατα καταδειχθεί για να εμποδίσει την ανάπτυξη των ενδοθηλιακών κυττάρων [36]. Το αν αυτό το φαινόμενο μπορεί να μεταφερθεί σε άλλα κύτταρα παραμένει ανοικτό. Παρ ‘όλα αυτά, απόφραξη της αύξησης των ενδοθηλιακών κυττάρων από αμυγδαλίνη δείχνει ότι αμυγδαλίνη μπορεί να καταστείλει όγκου που προκαλείται από αγγειογένεση.

Ο κίνδυνος ανάπτυξης δηλητηρίαση με κυανιούχα έχει, επίσης, δεν έχει επιλυθεί. Από την άποψη αυτή η οδός χορήγησης (από το στόμα ή ενδοφλέβια), την ποσότητα και την ποιότητα θα επηρεάσει σίγουρα την αναλογία κινδύνου-οφέλους. Από κλινικές αναφορές της θεραπείας αμυγδαλίνη είναι άνω των 30 ετών [8], και κατά τη διάρκεια αυτής της περιόδου η κατανόηση των μηχανισμών μοριακής καρκίνος έχει πολύ προχωρήσει, θα άξιζε τον κόπο να δοκιμάσει τις in vitro υποθέσεις που παρουσιάζονται εδώ σε ένα βιολογικό μοντέλο. Καλά σχεδιασμένα, ελεγχόμενες κλινικές δοκιμές για την κριτική εξέταση αμυγδαλίνη τότε θα πρέπει να θεωρείται.

Γενικά, αμυγδαλίνη έχει δειχθεί ότι μπλοκάρει την ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων κύστης in vitro. Καταστολή της cdk2 και κυκλίνη Α μπορεί να είναι ένα σχετικό μηχανισμό που καθορίζει το πώς αμυγδαλίνη μπορεί να συλλάβει ή να μειώνουν τον πολλαπλασιασμό των όγκων.

Ευχαριστίες

Θα θέλαμε να ευχαριστήσουμε την Karen Nelson για την κριτική ανάγνωση του χειρογράφου. Το έργο αυτό χρηματοδοτήθηκε από το «Brigitta und Norbert Muth Stiftung» και το «Freunde und der Förderer Goethe-Universität Frankfurt».