Αφηρημένο

Ιστορικό

Ο καρκίνος του προστάτη είναι μια εξαιρετικά ετερογενής νόσος και μία από τις κύριες αιτίες θνησιμότητας στις ανεπτυγμένες χώρες. Ειδικά προγνωστικά και προγνωστικά δείκτες για τους ασθενείς με καρκίνο του προστάτη εξακολουθεί να λείπει. Αιτιολογική συσχέτιση μεταξύ ανδρογόνων και την ανάπτυξη του καρκίνου του προστάτη γενικά θεωρείται βιολογικά αληθοφανής, αλλά ανδρογόνα δεν είναι ο μοναδικός τελεστής της πολυπλοκότητας της καρκινογένεσης του προστάτη. Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να αξιολογήσει την προγνωστική σημασία του υποδοχέα προγεστερόνης στον ιστό του όγκου του T1-3N0 ασθενείς με καρκίνο προστάτη που υποβάλλονται σε προστατεκτομή.

Μέθοδοι

δομήθηκαν μικροσυστοιχίες ιστών από 535 ασθενείς με καρκίνο του προστάτη . Διπλασιασμός πυρήνες των κυττάρων του όγκου και στρωματικά όγκου ιστών από κάθε εκτομή δείγμα εκχυλίστηκαν. Ανοσοϊστοχημεία χρησιμοποιήθηκε για να αξιολογηθεί η έκφραση in-situ του υποδοχέα προγεστερόνης.

Αποτελέσματα

μονοπαραγοντική ανάλυση, υψηλή πυκνότητα κυττάρων όγκου (ρ = 0.006) και στο επίπεδο στρωματικών κυττάρων υψηλής πυκνότητας όγκου (ρ = 0,045) του υποδοχέα προγεστερόνης και οι δύο σημαντική συσχέτιση με την εξέλιξη του όγκου και κλινική αποτυχία. Στην πολυπαραγοντική ανάλυση, η έκφραση του υποδοχέα της προγεστερόνης στα καρκινικά κύτταρα ήταν ένας ανεξάρτητος αρνητικό προγνωστικό παράγοντα για την κλινική ανεπάρκεια (HR: 2,5, 95% CI: 01.02 – 05.02, p = 0,012).

Συμπέρασμα

πυκνότητα των υποδοχέων υψηλής προγεστερόνης στα καρκινικά κύτταρα του όγκου του καρκίνου του προστάτη είναι ένας ανεξάρτητος αρνητικό προγνωστικό παράγοντα για την κλινική αποτυχία

Παράθεση:. Grindstad Τ, Andersen S, Al-Saad S, Donnem Τ, Kiselev Υ, Nordahl Melbø- Jørgensen C, et al. (2015) υποδοχέας υψηλής προγεστερόνη έκφραση στον καρκίνο του προστάτη συνδέεται με κλινική αποτυχία. PLoS ONE 10 (2): e0116691. doi: 10.1371 /journal.pone.0116691

Ακαδημαϊκό Επιμέλεια: Zoran Culig, Innsbruck Medical University, ΑΥΣΤΡΙΑ

Ελήφθη: 26 Ιουν, 2014? Αποδεκτές: 8, Δεκέμβρη, 2014? Δημοσιεύθηκε: 27 Φεβ 2015

Copyright: © 2015 Grindstad et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. η εργασία αυτή χρηματοδοτήθηκε από το Υπουργείο νορβηγική Υγείας (https://www.regjeringen.no/en/dep/hod.html?id=421 ), η νορβηγική Ένωση Καρκίνου (https://kreftforeningen.no/en/main-priorities/), UIT – η Αρκτική Πανεπιστήμιο της Νορβηγίας (https://en.uit.no/startsida), Βόρεια Νορβηγία Περιφερειακή Αρχή Υγείας ( Helse Nord RHF) (https://www.helse-nord.no/?lang=en_US), αριθμός χρηματοδότηση 30125/30012. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ο καρκίνος του προστάτη (PCA) είναι μία από τις κύριες αιτίες θανάτου μεταξύ των ανδρών στο δυτικό κόσμο [1]. Η πλειοψηφία των προστάτη εμφανίζεται ως νωχελικός μορφή που είναι απίθανο να εισβάλει πέρα ​​από το τοπικό περιβάλλον ιστού. Μια υποομάδα των ΠΑΠ, ωστόσο, εμφανίζει επιθετικότητα και μεταστατικές ιδιότητες. Αυτοί οι καρκίνοι επιφέρει ταχεία εξέλιξη της νόσου και μειωμένη επιβίωση συγκεκριμένες νόσους [2]. Ως εκ τούτου, η κλινική πορεία της PCA είναι ιδιαίτερα εξατομικευμένη και είναι δύσκολο να προβλεφθεί από την αρχή.

Στην έλλειψη συγκεκριμένων μοριακών δεικτών, όπως διαγνωστικά και προγνωστικά εργαλεία, η ανίχνευση του προστάτη και η στρατηγική της θεραπείας της εξακολουθεί να βασίζεται κατά κύριο λόγο για την ειδικού προστατικού αντιγόνου (PSA) αξία, το σκορ Gleason βιοψιών όγκου και πρωτοπαθούς όγκου (pT) -staging [3]. PSA δεν μπορεί να διαχωρίσει μεταξύ των διαφόρων μοντέλων εξέλιξης του προστάτη. Κατά συνέπεια, πολλές από τις ανιχνεύονται περιπτώσεις προστάτη αντιπροσωπεύουν κλινικά νωχελικός όγκους, οι οποίοι χωρίς θεραπεία θα παραμείνει σταθερή για τα επόμενα χρόνια [2]. Ως εκ τούτου, η διαλογή PSA αποτελεί κίνδυνο για υπερδιάγνωσης και υπερθεραπεία η οποία συνδέεται με αρνητικές επιπτώσεις στην ποιότητα της ζωής και εκτεταμένη οικονομικό κόστος [4,5]. Η ταυτοποίηση νέων, βελτιωμένων προγνωστικές και διαγνωστικές βιοδείκτες για PCA είναι ως εκ τούτου μεγάλη ανάγκη.

Sex στεροειδείς ορμόνες, όπως ανδρογόνα, οιστρογόνα και προγεστερόνη, είναι ισχυροί τελεστές που εμπλέκονται στον πολλαπλασιασμό, τη διαφοροποίηση καθώς και κυτταρική ανάπτυξη, και γνωστό συνεισφέροντες στην ανάπτυξη διαφόρων καρκίνων [6]. Οι μεταβολικές λειτουργίες του προστάτη είναι υπό τον ρυθμιστικό έλεγχο αυτών των στεροειδών ορμονών [7]. Μια αιτιολογική σχέση μεταξύ ανδρογόνων και η ανάπτυξη της PCA είναι, σε γενικές γραμμές, θεωρείται βιολογικά αληθοφανής [8]. Αυτό δείχνει έναν κρίσιμο ρόλο για τον υποδοχέα ανδρογόνων στην αποτυχία καρκινογένεση προστάτη και ενδοκρινικές θεραπεία. Ωστόσο, υπάρχουν ενδείξεις ότι η τοποθέτηση υποδοχέα ανδρογόνων δεν είναι το μόνο αποτελεσματικό ενδοκρινικές υποδοχέα σε αυτή τη σύνθετη διαδικασία. Η έρευνα υποδηλώνει την εμπλοκή τόσο η glucocorticoid-, οιστρογόνο και προγεστερόνη υποδοχείς σε αυτή τη διαδικασία έχουν δημοσιευθεί [9-13].

Η προγεστερόνη είναι μια ορμόνη 21-άνθρακα συντίθεται από προδρόμους στεροειδών σε διάφορα μέρη του σώματος , συμπεριλαμβανομένων και των όρχεων, επινεφριδίων, του πλακούντα και τα γλοία κύτταρα του εγκεφάλου, εκτός από τις ωοθήκες [14]. Ο υποδοχέας της προγεστερόνης (PGR) υπάρχει σε δύο ισομορφές, PGR-Α και PGR-Β, και οι δύο μεταγράφονται από το ίδιο γονίδιο. Ανήκει στην ίδια οικογένεια υποδοχέων όπως τα ανδρογόνα και τα οιστρογόνα υποδοχείς, τα οποία εκφράζονται σε αμφότερα στρωματικά και καρκινικά κύτταρα του ιστού προστάτη [11,13,15-18]. Επί του παρόντος, υπάρχει μια γενική συμφωνία της παρουσίας PGR στα στρωματικά κύτταρα του προστάτη [10,17,19-23]. Αποτελέσματα που αφορούν την παρουσία PGR σε καρκινικά κύτταρα, ωστόσο, οι αντικρουόμενες [9,10,17,19-25]. Έτσι, η σημασία του PGR στον ανθρώπινο προστάτη και στην καρκινογένεση προστάτη δεν έχει ποτέ επαρκώς εξηγηθεί. Ως συνέπεια επιδιώξαμε να αξιολογηθεί η έκφραση του PGR στα δύο κύτταρα όγκου που προέρχονται από επιθήλια (ΤΕ) και στρωματικά κύτταρα όγκου (TS) σε κακοήθη δείγματα προστατεκτομή και βρήκε το επίπεδο πυκνότητας PGR τόσο ΤΕ και TS να συνδέεται με την εξέλιξη του προστάτη.

Υλικά και Μέθοδοι

οι ασθενείς, clinical- και ιστοπαθολογικά δεδομένα

671 ασθενείς που υποβλήθηκαν σε ριζική προστατεκτομών ως αρχική θεραπεία για αδενοκαρκίνωμα 1995-2005 έγιναν αναδρομικά εντοπίστηκαν από τα Τμήματα της παθολογία στο Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο της Βόρειας Νορβηγίας (n = 267), το Νοσοκομείο Nordland (n = 63) και το Νοσοκομείο του Αγίου Olavs (n = 341). Από αυτά, συνολικά 136 ασθενείς αποκλείστηκαν λόγω (i) ακτινοθεραπεία στην περιοχή της πυέλου πριν τη χειρουργική επέμβαση (n = 1), (ii) άλλες κακοήθειες εντός 5 έτη πριν από την διάγνωση του προστάτη (η = 4), ( iii) ανεπαρκής εγκλεισμένο σε παραφίνη τμήματα ιστού (n = 130), και (iiii) έλλειψη δεδομένων κλινικής παρακολούθησης (n = 1). Κανένας από τους ασθενείς είχαν λάβει ορμονική θεραπεία πριν από ή κατά τη στιγμή της προστατεκτομής. Έτσι, 535 ασθενείς με πλήρη δεδομένα παρακολούθησης συμπεριλήφθηκαν στην παρούσα μελέτη. Ο διάμεσος χρόνος παρακολούθησης ήταν 89 (εύρος 6-188) μηνών κατά την τελευταία ενημέρωση του ασθενούς, το Νοέμβριο του 2012. Η πλήρης δημογραφικά και κλινικά δεδομένα που ελήφθησαν από τα ιατρικά αρχεία. Όλα ιστό αναλύονται και πρόσθεσε με τη μελέτη υποβλήθηκε σε επεξεργασία με παρόμοιο τρόπο, οι όγκοι βαθμολογήθηκαν σύμφωνα με το τροποποιημένο σύστημα ταξινόμησης Gleason [26,27], και οργάνωσε, σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές της Παγκόσμιας Οργάνωσης Υγείας [28]. Όλες οι πρωτογενείς καρκίνους ήταν ιστολογικά επανεξετάζονται από δύο παθολόγους (ER και LTB), και όλα τα δημογραφικά, κλινικά και ιστοπαθολογικά δεδομένα (Πίνακας 1) καταγράφηκαν σε ένα αρχείο δεδομένων του SPSS, στην οποία οι ασθενείς είχαν de-εντοπίστηκαν. Η Περιφερειακή Επιτροπή για την ιατρική και την υγεία Δεοντολογίας (2009/1393), η Επίσημη Προστασίας Δεδομένων για την Έρευνα (NSD), και το Εθνικό Συμβούλιο Ελέγχου Δεδομένων ενέκρινε την εν λόγω μελέτη. Όλοι οι ασθενείς είχαν ανώνυμα με κάθε αριθμό δίκη. Αυτοί οι αριθμοί είχαν αρχικά συνδέεται με την ταυτότητα για έναν και μόνο σκοπό πριν? για τη συλλογή κλινικών πληροφοριών. Η νορβηγική Κοινωνικών Επιστημών Υπηρεσία Δεδομένων και το Γραφείο Προστασίας Δεδομένων του Νοσοκομείου του Πανεπιστημίου αποδέχθηκε τη λύση αυτή (2009/1393). Γραπτή συγκατάθεση από τους ασθενείς θεωρήθηκε, αλλά αυτό ήταν μια αναδρομική μελέτη, όπου το μεγαλύτερο μέρος του υλικού ήταν άνω των 10 ετών και οι περισσότεροι από τους ασθενείς θανόντος, θεωρήθηκε ότι δεν χρειάζεται. Όλα τα δεδομένα αναλύθηκαν ανώνυμα.

Η

κατασκευή μικροσυστοιχιών

Ιστός μικροσυστοιχιών (TMA) κατασκευή επιλέχθηκε για υψηλής απόδοσης αναλύσεις μοριακής παθολογίας. Για κάθε μπλοκ ιστού, ένας παθολόγος (ER) που προσδιορίζονται και επισημαίνονται δύο αντιπροσωπευτικές περιοχές του επιθηλιακού ιστού του όγκου και δύο για στρωματικών όγκων του ιστού στις αντίστοιχες διαφάνειες αιματοξυλίνη και ηωσίνη. Ένας τομέας με φυσιολογικά επιθηλιακά κύτταρα, και ένα με κανονικό στρωματικό ιστό ήταν επίσης προσεκτικά σήμανση. Από κάθε μία από αυτές τις περιοχές, πυρήνες, ελήφθησαν δείγματα από κάθε μπλοκ δότη, προκειμένου να κατασκευάσει μπλοκ TMA. πυρήνες του προστάτη από 20 ασθενείς χωρίς ιστορικό κακοήθειας χρησιμοποιήθηκαν ως μάρτυρες.

Η TMAs συναρμολογήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα όργανο ιστό-παράταξη (Beecher Instruments, Silver Springs, MD, USA). Χρησιμοποιήσαμε μια βελόνα διαμέτρου 0,6 χιλιοστών για τη συγκομιδή πυρήνες από τις σημαδεμένες περιοχές ιστού από κάθε παραφίνη-ενσωματωμένες μπλοκ ιστού. Τα δείγματα πυρήνα εισήχθησαν σε ένα άδειο μπλοκ αποδέκτη παραφίνης σε μια συγκεκριμένη συστοιχία. Για να συμπεριλάβετε όλα τα δείγματα πυρήνα, δώδεκα τεμάχια συστοιχία ιστού κατασκευάστηκαν. Πολλαπλές 4 μm τομές κόπηκαν με μικροτόμο Micron (HM355S), τοποθετείται σε γυάλινες πλάκες, και σφραγίζονται με παραφίνη. Η αναλυτική μεθοδολογία έχει αναφερθεί στο παρελθόν [29].

Η ανοσοϊστοχημεία (IHC)

Για την ανοσοϊστοχημική χρώση, η Ventana Benchmark XT αυτοματοποιημένο σύστημα χρώσης (Ventana Medical Systems, Tucson, AZ) και Ventana αντιδραστήρια είχαν χρησιμοποιήθει. TMA πλάκες αφαιρείται η παραφίνη με ξυλόλιο και επανυδατώθηκαν σε μειούμενες συγκεντρώσεις αιθανόλης. Η ενδογενής υπεροξειδάση παρεμποδίστηκε με τη χρήση της Ventana ενδογενούς υπεροξειδάσης εμποδίζοντας κιτ μετά ξεπλύνετε με απεσταγμένο νερό. Για ανάκτηση αντιγόνου, τα πλακίδια θερμαίνονται με διάλυμα κλιματισμού κυττάρων (CC1, Ventana), πρότυπο, σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Το παρακάτω αντίσωμα από Ventana Medical (Tucson, Arizona, USA) χρησιμοποιήθηκε σε αυτή τη μελέτη: Επιβεβαίωση αντι-προγεστερόνης υποδοχέα (κλώνος 1Ε2, κατάλογος # 790-4296) κουνελιού μονοκλωνικό πρωτογενές αντίσωμα, που κατευθύνεται έναντι αμφοτέρων των ισομορφών Α και Β της ανθρώπινης προγεστερόνης αισθητήριο νεύρο. Το αντίσωμα προαραιωμένο από τον κατασκευαστή. Η εφαρμοζόμενη αντίσωμα που παράγεται για τη συνήθη διαγνωστική IHC και έχει λάβει έγκριση από τον FDA (510k) για IVD (

in vitro διαγνωστική

) χρήση. Το αντίσωμα PGR εφαρμόζεται σήμερα στην καθημερινή πρακτική στην αξιολόγηση της κατάστασης PGR στον καρκίνο του μαστού. Για να επικυρωθεί η ειδικότητα του πρωτογενούς αντισώματος έναντι PGR, χρησιμοποιήθηκαν προϊόντα λύσεως των κυττάρων ΗΕΚ 293 με είτε παροδικά υπερεκφράζονται PGR ή ένα άδειο φορέα. Περαιτέρω λεπτομέρειες σχετικά με την επικύρωση του αντισώματος μπορεί να βρεθεί στα δικαιολογητικά αρχεία πληροφοριών (S1 Κείμενο, S2 κειμένου, S1 Εικ.). Ultraview Οικουμενική DAB χρησιμοποιήθηκε ως κιτ ανίχνευσης. Τέλος, TMA διαφάνειες Ακολούθησε χρώση με αιματοξυλίνη για την οπτικοποίηση των πυρήνων.

Η βαθμολόγηση των IHC

Το σύστημα ARIOL απεικόνισης (Applied Imaging Corp., San Jose, CA, USA) χρησιμοποιήθηκε για τη σάρωση και ψηφιοποιούν τα IHC βάφονται διαφάνειες TMA. Τα πλακίδια που είναι τοποθετημένο στο SL 50 αυτοματοποιημένο φορτωτής slide και σαρώνονται σε χαμηλή ανάλυση (1,25χ) και υψηλής ανάλυσης (20x) χρησιμοποιώντας ένα μικροσκόπιο Olympus BX61 με ένα αυτοματοποιημένο πλατφόρμα (Προηγούμενη Scientific, Cambridge, UK). Εικόνες των πυρήνων είχαν φορτωθεί στο λογισμικό Ariol. Όλα τα δείγματα απο-εντοπίστηκαν και σημείωσε χειροκίνητα από δύο παθολόγους (ER και SAS) ανεξάρτητα μεταξύ τους και οι δύο δεν γνώριζαν την κάθε παθολογική ή κλινικές πληροφορίες. Σε περίπτωση διαφωνίας, οι διαφάνειες επανεξετάστηκαν και οι παρατηρητές κατέληξαν σε συμφωνία. Εκπρόσωπος τμήματα βιώσιμο ιστό βαθμολογήθηκαν ημι-ποσοτικά και ο βαθμός της έκφρασης πυρηνικών PRG από την IHC βαθμολογήθηκε σύμφωνα τόσο με κυρίαρχη την ένταση χρώσης και η πυκνότητα τόσο ΤΕ και TS. Τόσο η ένταση και η πυκνότητα δόθηκε μια βαθμολογία μεταξύ 0-3. Ένταση βαθμολογήθηκε ως εξής: 0 = αρνητική, 1 = ασθενής, 2 = μέτρια, 3 = ισχυρή. Πυκνότητα βαθμολογήθηκε σύμφωνα με το ποσοστό των θετικών κυττάρων στο εξετάστηκε διαμέρισμα χρησιμοποιώντας το ακόλουθο σύστημα: 0 = 0%, 1 = ≤ 5%, 2 = 5-50%, 3 = & gt? 50%. Για κάθε περίπτωση, υπολογίσθηκαν μέσες βαθμολογίες. Οι μέσες τιμές βαθμολόγησης στη συνέχεια συνδέεται με κλινικά και ιστοπαθολογικά πληροφορίες ασθενούς. Οι τιμές βαθμολόγησης στη συνέχεια dichotomised ως υψηλής και χαμηλής έντασης ή της πυκνότητας των χρωματισμένων κυττάρων (Εικ. 1) χρησιμοποιώντας βέλτιστες cut off αξίες. Και στις δύο ΤΕ και TS, διακόπτει ορίστηκε ως το επίπεδο πυκνότητας × 4

ου τεταρτημόριο. Μια υψηλή βαθμολογία ορίστηκε ως το επίπεδο πυκνότητας ≥ 0.75 σε ΤΕ, και ≥ 1,75 σε TS.

Η ανοσοϊστοχημεία μικροσκοπικές εικόνες του ιστού μικρο πίνακα αντιπροσωπεύουν διαφορετική έκφραση της χρώσης PGR στα τμήματα προστάτη Α-Β. (Α) υψηλής πυκνότητας των PGR σε καρκινικά κύτταρα (ΤΕ), συμπεριλαμβανομένων μεγέθυνσης. (Β) Η χαμηλή πυκνότητα του PGR στη ΤΕ, συμπεριλαμβανομένων μεγέθυνση. Αρχικό x100 μεγέθυνση και X400.

Η

Στατιστικές μέθοδοι

Όλες οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του στατιστικού πακέτου IBM SPSS, έκδοση 21 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Οι τιμές βαθμολόγησης IHC από κάθε παθολόγο συγκρίθηκαν για την αξιοπιστία μεταξύ παρατηρητής με τη χρήση ενός αμφίδρομη μοντέλο τυχαίο αποτέλεσμα με απόλυτη ορισμό συμφωνία. Μία Wilcoxon rank test υπογραφεί χρησιμοποιήθηκε για να εκτιμηθεί αν υπήρχε στατιστικώς σημαντικές διαφορές στην ένταση PGR και πυκνότητας μεταξύ των διαφόρων διαμερισμάτων των δειγμάτων προστάτη. Χρησιμοποιήσαμε τον συντελεστή συσχέτισης Spearman για να εξετάσει τη σχέση μεταξύ της έκφρασης PGR και clinopathological μεταβλητές. Η μέθοδος Kaplan-Meier χρησιμοποιήθηκε για την μονοπαραγοντική ανάλυση επιβίωσης, και log-rank δοκιμασία για την αξιολόγηση της στατιστικής σημαντικότητας μεταξύ των καμπυλών επιβίωσης του μοντέλου. καμπύλες μονοπαραγοντική Kaplan Meier κατασκευάστηκαν για τα ακόλουθα τα τελικά σημεία: 1) Βιοχημικές ανεπάρκεια (BF), 2) Κλινική ανεπάρκεια (CF) και 3) του προστάτη θάνατο (ΣΑΠ). BF προσδιορίστηκε ως ≥ PSA επανάληψη 0,4 ng /ml σε τουλάχιστον δύο διαφορετικά δείγματα αίματος μετεγχειρητικά [30]. CF ορίστηκε ως επαληθεύεται τοπική συμπτωματική εξέλιξη πέρα ​​από τη θεραπεία ή /και τα ευρήματα της μετάστασης στα οστά, σπλαχνικά όργανα ή λεμφαδένες από CT, MR, σπινθηρογράφημα οστών ή υπερηχογράφημα. ΣΑΠ ορίστηκε ως ο θάνατος προκλήθηκε από προοδευτική και διαδίδονται ευνουχισμό ανθεκτικά προστάτη ανεξέλεγκτα από τη θεραπεία. Όλες οι σημαντικές μεταβλητές από την μονοπαραγοντική ανάλυση εισήχθησαν στην πολυπαραγοντική ανάλυση χρησιμοποιώντας ένα προς τα πίσω βηματική μοντέλο παλινδρόμησης Cox με πιθανότητα για σταδιακή κατάργηση εισόδου στα 0,05 και 0,1, αντίστοιχα. Θεωρήσαμε μια τιμή p & lt? 0.05 ως στατιστικά σημαντική για όλες τις αναλύσεις.

Αποτελέσματα

Τα χαρακτηριστικά των ασθενών

Η ριζική προστατεκτομή ήταν οπισθοηβική σε 435 περιπτώσεις και περινέου σε 100 περιπτώσεις. την ηλικία των ασθενών κατά την επέμβαση κυμαίνονταν 47-76 ετών, με μέση ηλικία τα 62 έτη. Περαιτέρω λεπτομέρειες σχετικά με την ομάδα που προηγουμένως δημοσιευθεί [31]. Μια επισκόπηση των δημογραφικών, κλινικών και ιστοπαθολογικών χαρακτηριστικών παρουσιάζεται στον Πίνακα 1. Συνδυασμένη Gleason βαθμολογία κυμαινόταν από 6 έως 10 και του όγκου στάδιο από T2a να T3b. Κατά την τελευταία παρακολούθηση 170 (32%) παρουσίασαν BF, 36 (7%) εμφάνισαν CF και 15 (3%) είχαν πεθάνει εξαιτίας του προστάτη.

έκφραση προγεστερόνης και συσχέτιση με κλινικοπαθολογοανατομικές μεταβλητές

Υπήρξε μια καλή συμφωνία σκορ μεταξύ των δύο διερεύνηση παθολόγους. Ο συντελεστής συσχέτισης ενδο-class (συντελεστής αξιοπιστίας, r) για το δείκτη PGR ήταν 0,78 (p & lt? 0.001). PGR εκφράστηκε στον πυρήνα και των δύο φυσιολογικών κυττάρων και σε ΤΕ και TS (σχ. 1). Υψηλής πυκνότητας PGR σε ΤΕ (≥ 0,75) βρέθηκε σε 109 (20%) από τους 535 ασθενείς, ενώ, υψηλή πυκνότητα PGR (x 1,75) σε TS βρέθηκε σε 120 (23%) των ασθενών. Δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στο επίπεδο πυκνότητας PGR σε επιθήλια ελέγχου σε σύγκριση με ΤΕ (p = 0,429), αν και ο μέσος όρος πυκνότητα ήταν 0,37 στα επιθήλια έλεγχο και 0,52 στην ΤΕ. Επιπλέον, το 61,9% των ελέγχων δεν εκφράζουν PGR, ενώ μόνο το 28,3% της ΤΕ ήταν χωρίς έκφραση PGR. Ωστόσο, υπήρχε ένα σημαντικά υψηλότερο επίπεδο πυκνότητας PGR σε TS σε σύγκριση με τον έλεγχο στρώμα (ρ & lt? 0.001). Περαιτέρω, μία σημαντικά υψηλότερη ένταση έκφρασης και η πυκνότητα επίπεδο PGR βρέθηκε σε TS, σε σύγκριση με ΤΕ (αμφότερα ρ & lt? 0.001).

επίπεδα υψηλής πυκνότητας του PGR σε ΤΕ συσχετίστηκαν με ένα θετικό ακραίο περιθώριο (p = 0,025) και περινευρικό διείσδυση (PNI) (p & lt? 0,01). Δεν διαπιστώθηκαν συσχετίσεις με άλλες μεταβλητές clinopathological.

μονοπαραγοντική ανάλυση

Σύλλογοι μεταξύ του επιπέδου της πυκνότητας του PGR και CFFS (κλινική αποτυχία επιβίωση χωρίς) παρουσιάζονται στον Πίνακα 2 και Σχ. 2. Οι ακόλουθες clinopathological μεταβλητές ήταν όλες οι σημαντικές προγνωστικοί παράγοντες για την CF: pT-στάδιο (p & lt? 0.001), PN-στάδιο (p & lt? 0.001), Gleason Βαθμός (p & lt? 0.001), το μέγεθος του όγκου (p = 0,019) , περινευρικό διείσδυση (p = 0,001), θετικά χειρουργικά περιθώριο (p = 0.038), μη ακραίο χειρουργική περιθώριο (p & lt? 0.001) και lymphovascular διήθησης (p & lt? 0.001) (Πίνακας 1)

Η

Kaplan-Meier καμπύλες εμφανίζουν ποσοστό των ασθενών Caner προστάτη (n = 535) με CFFS σύμφωνα με υψηλά και χαμηλά επίπεδα πυκνότητας των υποδοχέων προγεστερόνης (PGR) σε διαφορετικούς τύπους κυττάρων. μ.Χ. (Α) Κύτταρα όγκου στρωματικά (TS), κύτταρα (Β) του όγκου (ΤΕ), (Γ) ΤΕ και TS συνδυάζονται και (D) ΤΕ σε ασθενείς με υψηλή βαθμολογία Gleason (≥ 7). Ένα υψηλό επίπεδο πυκνότητας PGR συνδέεται σημαντικά με τη μείωση CFFS. Και στις δύο ΤΕ και TS, διακόπτει ορίστηκε ως το επίπεδο πυκνότητας × 4

ου τεταρτημόριο. Μια υψηλή βαθμολογία ορίστηκε ως το επίπεδο πυκνότητας ≥ 0.75 σε ΤΕ, και ≥ 1,75 στο TS. δοκιμές Log-rank χρησιμοποιήθηκαν για να εκτιμηθεί η στατιστική σημασία μεταξύ των καμπυλών επιβίωσης του μοντέλου. Ο διάμεσος χρόνος παρακολούθησης ήταν 89 (εύρος 6-188) μήνες. Η τιμή p & lt? 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική.

Η

Η αύξηση των επιπέδων πυκνότητας PGR τόσο ΤΕ (p = 0,006) και TS (p = 0,045) συσχετίζονταν σημαντικά με κυστική ίνωση (Εικ. 2, πάνελ Α και Β). Κατά τη συγχώνευση των επιπέδων πυκνότητας PGR στην ΤΕ και TS, οι ασθενείς με υψηλή (υψηλή υψηλή /) επίπεδα πυκνότητας PGR είχε μειωθεί σημαντικά CFFS (p = 0,019) σε σύγκριση με εκείνους με χαμηλά επίπεδα πυκνότητας (χαμηλή /υψηλή, υψηλή /χαμηλή και χαμηλή /χαμηλή) (Εικ. 2, πίνακας C). Δέκα έτους CFFS ήταν 76,8% έναντι 91,6% αντίστοιχα για τους ασθενείς με υψηλή (υψηλή /χαμηλή) επίπεδα πυκνότητας εναντίον χαμηλή (χαμηλή /υψηλή, υψηλή /χαμηλή και χαμηλή /χαμηλή) (Πίνακας 2).

Υψηλή επίπεδα PGR σε ΤΕ έδειξαν παρόμοια τάση για αυξημένη BF, αλλά αυτό δεν ήταν στατιστικά σημαντική (p = 0,144). Για TS ή TS και ΤΕ σε συνδυασμό, δεν υπήρχαν συσχετίσεις με BF ή ΣΑΠ.

Ένα υψηλό επίπεδο πυκνότητας του PGR στη ΤΕ συσχετίστηκε σημαντικά με κυστική ίνωση στην υποομάδα των ασθενών με Gleason score ≥ 7 (p = 0,002 Εικ. 2, πάνελ D) σε σύγκριση με την υποομάδα των ασθενών με Gleason σκορ 6 (p = 0,914). Δέκα έτους CFFS για ασθενείς με υψηλά επίπεδα πυκνότητας PGR ήταν 72,2% έναντι 97,2%, αντίστοιχα, για τους ασθενείς με Gleason score ≥ 7 εναντίον Gleason σκοράρει 6.

Η πολυπαραγοντική ανάλυση

Στην πολυπαραγοντική ανάλυση ( Πίνακας 3), υψηλή έκφραση του PGR στη ΤΕ ήταν ανεξάρτητος προγνωστικός δείκτης για την κυστική ίνωση (HR: 2,5, 95% CI: 01.02 – 05.02, p = 0,012), εκτός από την Gleason βαθμό (p = 0.001) και μη-ακραία χειρουργική περιθώριο ( p = 0,006). έκφραση PGR σε TS έτειναν να, αλλά δεν ήταν στατιστικά σημαντική (HR: 2.1, CI: 1,0 έως 4,3, p = 0,060). Δεν ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες αποτελέσματα για BF και ΣΑΠ.

Η

Συζήτηση

Για τις γνώσεις μας, αυτή είναι η πρώτη μεγάλης κλίμακας μελέτη διερευνά την προγνωστική ρόλο του PGR στη ΤΕ και TS σε ΣΕΣΣ. Στην μονοπαραγοντική ανάλυση, ένα επίπεδο υψηλής πυκνότητας της PGR τόσο ΤΕ και TS συνδέθηκε με CF. επίπεδο υψηλής πυκνότητας PGR στην ΤΕ ήταν ένας ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας για την κυστική ίνωση

Ένα πρώτο βήμα για την κατανόηση PGR δράση στο PCA είναι να καθορίσει την έκφραση του υποδοχέα σε προστατικό ιστό. Προηγούμενες δημοσιεύσεις στην έκφραση PGR στη ΣΕΣ, ιδίως εκείνων που χρησιμοποιούν IHC, έχουν παρουσιαστεί σε αντίθεση με τα αποτελέσματα και μόνο λίγες εκθέσεις έχουν ασχοληθεί με το ρόλο PGR στην καρκινογένεση του προστάτη. μεγάλου μεγέθους μελέτη μας δείχνει μια ευρεία διανομή του PGR σε στρωματικά και επιθηλιακά κύτταρα των καλοήθων και κακοήθων ιστών του προστάτη. Επί του παρόντος, φαίνεται να υπάρχει μια γενική συμφωνία της παρουσίας PGR στα στρωματικά κύτταρα του προστάτη [10,17,19-23] εκεί. Σύμφωνα με τα ευρήματά μας, αρκετές από αυτές έχουν επίσης αναφερθεί μια υψηλή έκφραση PGR στην ΤΕ του προστάτη [9,10,23,25]. Αντίθετα, άλλοι έχουν επιδείξει παντελή έλλειψη έκφρασης PGR στην ΤΕ [17,19,20,22]. Ακόμη και πειραματικές μελέτες που χρησιμοποιούν κυτταρικές σειρές έχουν αναφερθεί αντικρουόμενα αποτελέσματα [17,24,25,32]. Τέτοια διαφορά μπορεί να εξηγηθεί από διάφορους παράγοντες. Αυτό περιλαμβάνει τη χρήση διαφορετικών αντισωμάτων, την επεξεργασία των ιστών, οι μέθοδοι ανάκτησης αντιγόνου, ο αριθμός των δειγμάτων ιστού και διαφορετικά συστήματα βαθμολόγησης, και μπορεί να αντανακλά την έλλειψη μεθοδολογίας τυποποίησης. Το μονοκλωνικό αντίσωμα 1Ε2 που χρησιμοποιείται στη μελέτη μας έχει βελτιστοποιηθεί για κλινική χρήση και χρησιμοποιείται στην καθημερινή πράξη σε εκτίμηση της κατάστασης PGR στον καρκίνο του μαστού. Αυτή είναι επίσης η περίπτωση για το αντίσωμα NCL-PGR1A6 εφαρμόζεται στα άρθρα των Bonkhoff et al. [10] και Hiramatsu et al. [23], η οποία επιβεβαιώνει την παρουσία του PGR στη ΤΕ. Αρκετές από τις μελέτες IHC σε αντίθεση με το συμπέρασμα της παρούσας μελέτης πραγματοποιήθηκαν πριν από την ανάπτυξη νέων μεθόδων αύξηση μεθοδολογική ακρίβεια [17,19,20]. Τέτοιες μέθοδοι περιλαμβάνουν τη χρήση των νέων, εξαιρετικά ειδικά μονοκλωνικά αντισώματα έναντι PGR, με τη μέθοδο ακτινοβολίας μικροκυμάτων και του χρόνου αποτελεσματική μέθοδος επεξεργασίας των ιστών TMA [33], το οποίο έχει αναφερθεί ως ένα πολύτιμο εργαλείο για την αξιολόγηση του υλικού ασθενών και ένα καλό υποκατάστατο για ολόκληρο το τμήμα ανάλυσης [34].

Yu et al. διερευνήθηκε πρόσφατα τη θέση και το ρόλο των δύο PGR ισομορφών σε προστάτη και αναφέρουν τις διαπιστώσεις αντιφατική με τη δική μας. Αυτό μπορεί να εξηγηθεί από την έρευνά τους PGR που βρέθηκε να εκφράζεται μόνο σε ένα υποσύνολο των στρωματικά κύτταρα από τα 27 δείγματα ριζική προστατεκτομή [22]. Αυτό έρχεται σε αντίθεση με την εργασία μας ήταν η έκφραση του PGR τόσο ΤΕ και TS ήταν σαφώς ανιχνευθεί. Στην ομάδα μας, 129 (28,3%) των ασθενών δεν είχε καμία έκφραση PGR στην ΤΕ, σε αντίθεση με μόνο 8 ασθενείς (1,7%), με αρνητική χρώση PGR στο TS. Ωστόσο, τα άτομα με υψηλό επίπεδο πυκνότητας της PGR στην ΤΕ συσχετίστηκε σημαντικά με την CF. Η διαφορά στο μέγεθος της ομάδας θα μπορούσαν ενδεχομένως να εξηγήσουν μερικές από την ασυμφωνία μεταξύ των ευρημάτων. Επιπλέον, τόσο οι επιλεγμένες μεθόδους επεξεργασίας του αντισώματος και των ιστών διαφέρουν.

Σε μία άλλη μελέτη, χρησιμοποιώντας δοκιμασία πολλαπλασιασμού των κυττάρων, Υυ et al. βρέθηκε PGR να ρυθμίζουν αρνητικά τον πολλαπλασιασμό των στρωματικών κυττάρων

in vitro

[32]. Στην εργασία μας μονοπαραγοντική ανάλυση έδειξε μια υψηλή έκφραση PGR στο TS να σχετίζεται με την κλινική ανεπάρκεια σε ασθενείς ΣΕΣΣ. Μέχρι στιγμής δεν έχουν ακόμη αποδειχθεί το μηχανισμό που διέπουν αυτή τη συσχέτιση.

Οι στεροειδείς ορμόνες ρυθμίζουν την εξέλιξη του κυττάρου μέσω του κυτταρικού κύκλου μέσω σύνδεσης με τους αντίστοιχους υποδοχείς τους. Αυτοί οι υποδοχείς είναι μόρια μεταγωγής σήματος και μπορεί να ρυθμίζουν τον πολλαπλασιασμό με δύο διαφορετικούς τρόπους, γονιδιωματικές ή μη γονιδιωματικών δράσεις σε πολύπλοκα δίκτυα σηματοδότηση [6]. Αρκετές μη γονιδιωματικών πολλαπλασιαστική δράσεις της προγεστερόνης προταθεί στην καρκινικά κύτταρα άλλων οργάνων, συμπεριλαμβανομένου του μαστού [35-37], αστροκύτωμα [38] και οστεοσαρκώματος [39] κυτταρικές γραμμές. Ωστόσο, τα εν λόγω αποτελέσματα αντικρούονται από τις προτάσεις του αντι-πολλαπλασιαστική δράσεις της προγεστερόνης σε καρκίνο του ενδομητρίου [40]. Αυτό θα μπορούσε να δείξει ότι οι δράσεις της προγεστερόνης είναι συγκεκριμένες ιστό. Βρήκαμε ότι το υψηλό επίπεδο πυκνότητας PGR στην ΤΕ συνδέθηκε με κυστική ίνωση σε ασθενείς με Gleason score ≥ 7, γεγονός που υποδηλώνει μια up-ρύθμιση του PGR στην πρόοδο του προστάτη. Αυτό είναι σε συνέπεια με τις προηγούμενες εκδόσεις. Bonkhoff et al. έχουν προτείνει προοδευτική εμφάνιση της PGR κατά τη διάρκεια του προστάτη εξέλιξη και μετάσταση [10]. Υποστήριξη αυτών των ευρημάτων, Latil και οι συνεργάτες του βρήκαν μια μειωμένη έκφραση PGR στον κλινικά εντοπισμένο όγκους και αυξημένη έκφραση PGR σε ορμονοάντοχου όγκων, σε σύγκριση με το φυσιολογικό ιστό του προστάτη [9].

Σε αρκετές πειραματικές μελέτες από άφιξης et al., οι ποντικοί με προστάτη υποβλήθηκαν σε θεραπεία με έναν ανταγωνιστή PGR, η μιφεπριστόνη, και σε σύγκριση με τους μάρτυρες. Βρήκαν μια υψηλότερη θνησιμότητα σε εκείνους που δεν αντιμετωπίζονται. Επιπλέον, υπήρχαν λιγότερο PCa επιπλοκές στην ομάδα που έλαβε [41,42]. Παρόμοια ευρήματα της αντι-προγεστερόνης δραστηριότητα του μιφεπριστόνη στις δύο ανδρογόνων ευαίσθητα και μη ευαίσθητα κυτταρικές σειρές προστάτη

in vitro

και

in vivo

, έχουν αναφερθεί [43,44]. Τα ευρήματά μας παρέχουν περαιτέρω υποστήριξη για αυτά τα ευρήματα, δείχνουν ότι PGR παίζει ρόλο στην παθογένεση του προστάτη. Για να διερευνηθεί κατά πόσον η έκτροπη δραστηριότητα PGR είναι ένας μηχανισμός της ανάπτυξης ανθεκτικών ευνουχισμού του καρκίνου του προστάτη, μια φάση Ι /ΙΙ κλινικής δοκιμής έχει μόλις αρχίσει να ελεγχθεί η επίδραση του αντι-προγεστίνης, οναπριστόνη, σε ασθενείς με αυτή την κατάσταση (http: //clinicaltrials .gov /show /NCT02049190).

Ο μηχανισμός πίσω από την PGR ρύθμιση προς τα πάνω στον προστάτη δεν έχει ακόμη διευκρινιστεί. Σε αυτή τη μελέτη, Ki67 και PGR στην ΤΕ συσχετίστηκαν με κυστική ίνωση (S3 κειμένου), υποδεικνύοντας τη σύνδεση μεταξύ PGR και πολλαπλασιαστική δραστηριότητα. Arora et. al. [12] ανέφεραν ότι τα άνω ρύθμιση του υποδοχέα γλυκοκορτικοειδών εκ νέου ενεργοποιεί την έκφραση ενός υποσυνόλου ανδρογόνων γονιδίων υποδοχέα ρυθμίζονται και συνεπώς προκαλεί ευνουχισμού ανθεκτικά PCa. Το PGR είναι, όπως και τον υποδοχέα γλυκοκορτικοειδών, παρόμοια με υποδοχέα ανδρογόνου με 88% ομολογία αλληλουχίας στο πεδίο σύνδεσης συνδετήρα [45]. Σύμφωνα με αυτό το εύρημα, που προκαλείται από την προγεστερόνη έκφραση των ανδρογόνων γονιδίων υποδοχέα ρυθμιζόμενων θα μπορούσε να είναι ένας πιθανός μηχανισμός που συμβάλλει στην ανάπτυξη του ευνουχισμού ανθεκτικά προστάτη. Ωστόσο, περαιτέρω έρευνα διερευνά αυτό δικαιολογείται για μια τέτοια υπόθεση να επιβεβαιωθεί.

Μια πιθανότητα διαφορετικών ρόλων από τους δύο PGR ισομορφών σε φυσιολογικό ιστό του προστάτη και του προστάτη, όπως προτείνεται για τους υποδοχείς οιστρογόνων [13], πρέπει επίσης να ληφθεί υπόψη. Γνωρίζουμε τώρα ότι η στιχομυθία μεταξύ του ΤΕ και TS είναι απαραίτητη για την ανάπτυξη του προστάτη. Σε μια μελέτη με Memarzadeh et al., Σχετιζόμενη με καρκίνο παράγοντες ανάπτυξης ινοβλάστης προκάλεσε αυξητική ρύθμιση των επιθηλιακών υποδοχέα ανδρογόνων [46]. Αυτό θα μπορούσε να δείξει ότι τα επιθηλιακά-στρωματικά στιχομυθία είναι ο μηχανισμός πίσω από την επαγωγή της έκφρασης PGR στην ΤΕ και με τον τρόπο αυτό την προώθηση του προστάτη εξέλιξη. Ωστόσο, up-ρύθμιση του PGR μπορεί να μην είναι η άμεση μηχανισμός πίσω από αυξημένο πολλαπλασιασμό, αλλά μάλλον μια συνέπεια των άλλων σχετικών διαδικασιών. Έτσι, ο αντίστοιχος ρόλος της επιθηλιακής έναντι στρωματικών PGR στην καρκινογένεση του προστάτη και μια πιθανή ατομική ρόλος των ισομορφών PGR μένει να καθοριστεί.

Συμπέρασμα

Εδώ, βρήκαμε ότι ένα υψηλό επίπεδο πυκνότητας PGR στην ΤΕ είναι ένας ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας για την εξέλιξη της ΚΙ στη ΣΕΣΣ. Επιπλέον, τα υψηλά επίπεδα πυκνότητας PGR είναι σημαντικές για την εξέλιξη της ΚΙ σε ασθενείς με Gleason score ≥ 7. Η προγεστερόνη /PGR μπορεί, για αυτούς τους λόγους είναι χρήσιμη ως προγνωστικό εργαλείο, αλλά και ως στόχο για νέες θεραπευτικές στρατηγικές στην ΣΕΣΣ. Περαιτέρω λειτουργικές μελέτες διερεύνησης του ρόλου PGR και στις δύο επιθηλιακών και στρωματικών διαμερίσματα του προστάτη χρειάζονται ακόμη για να ολοκληρώσω το πώς να εφαρμόζουν τις βέλτιστες αυτή τη γνώση στη διάγνωση και τη θεραπεία του προστάτη.

Υποστήριξη Πληροφορίες

S1 συνόλου δεδομένων. SPSS προστάτη και PGR σύνολο δεδομένων

doi:. 10.1371 /journal.pone.0116691.s001

(SAV)

S2 συνόλου δεδομένων. SPSS προστάτη και Ki67 σύνολο δεδομένων

doi:. 10.1371 /journal.pone.0116691.s002

(SAV)

S1 Εικ. Προϊόντα λύσεως 293 κυττάρων ΗΕΚ είτε με ένα κενό φορέα (Α) ή ενός κατασκευάσματος υπερέκφραση PGR (Β) έτρεξε σε ένα πήκτωμα SDS-PAGE και μεταφέρθηκαν σε μεμβράνη νιτροκυτταρίνης.

Η μεμβράνη πρώτα ανιχνεύθηκε με το αντι-Ventana PGR αντίσωμα (άνω πάνελ), και στη συνέχεια με το αντίσωμα αντι-ακτίνης για τον έλεγχο της φόρτωσης (κάτω πίνακας)

doi:. 10.1371 /journal.pone.0116691.s003

(TIFF)

S1 κειμένου. Αντισώματος επικύρωση ειδικότητα

doi:. 10.1371 /journal.pone.0116691.s004

(DOCX)

S2 κειμένου. Ventana κατάλογος προϊόντων, επιβεβαιώνουν αντι-υποδοχέα προγεστερόνης (PR) (1E2) Κουνέλι Μονοκλωνικό Αντίσωμα Πρωτοβάθμια

doi:. 10.1371 /journal.pone.0116691.s005

(PDF)

S3 κειμένου. . Ki67 ανοσοχρώση

doi: 10.1371 /journal.pone.0116691.s006

(DOCX)

Ευχαριστίες

Θα θέλαμε να ευχαριστήσουμε Magnus Persson, (Τμήμα Κλινικής Παθολογίας, Πανεπιστήμιο νοσοκομείο της Βόρειας Νορβηγίας), και Mona Pedersen (UIT Η Αρκτική Πανεπιστήμιο της Νορβηγίας) για την πολύ προσεκτική εργαστηριακή δουλειά τους.