Αφηρημένο

επιθηλιακό καρκίνο ωοθηκών (EOC) είναι μια επιθετική όγκου συχνά διαγιγνώσκεται σε προχωρημένο στάδιο, όταν υπάρχει ελάχιστη ή καμία προοπτική ίασης. Παρά τις προόδους σε χειρουργική και χημειοθεραπευτικών στρατηγικών έχουν μόνον οριακές βελτιώσεις στην έκβαση των ασθενών έχουν ληφθεί. Ως εκ τούτου, ξεσκεπάζοντας τους βιολογικούς μηχανισμούς που διέπουν ΕΓΚ εξέλιξη είναι ζωτικής σημασίας για τη βελτίωση της επιβίωσης των ασθενών. Πρόσφατα, αναφέρθηκε ότι CD157 (ένας εξωενζύμου ρυθμιστική λευκοκυττάρων διαπίδυση) εκφράζεται σε EOC και ότι η υψηλή έκφραση του μορίου συσχετίζεται αρνητικά με την έκβαση της νόσου σε ασθενείς. Εδώ, αποδεικνύουμε ότι η αναγκαστική υπερέκφραση του CD157 σε OVCAR-3, TOV-21G, Α2780 και OV-90 κυτταρικές γραμμές καρκίνου ωοθηκών προωθεί μορφολογικές και φαινοτυπικές αλλαγές που χαρακτηρίζονται από διαταραχή των διακυτταρικών συνδέσμων, ρύθμιση προς τα κάτω των επιθηλιακών δεικτών και αυξορρύθμιση των μεσεγχυματικών αυτά. Αυτές οι αλλαγές στο σχήμα των κυττάρων και φαινότυπο φέρει σε μειωμένη ευαισθησία σε anoikis, αυξημένη αγκύρωση ανάπτυξη ανεξάρτητη, κυτταρική κινητικότητα και μεσοθηλιακών εισβολή. Αντίθετα, νοκ ντάουν του CD157 στο OV-90 και OC314 κύτταρα επανέρχεται το φαινότυπο μεσεγχυματικών και μειώνει τις μεταναστευτικές δυναμικό των κυττάρων. Μεταγραφικό ανάλυσης των χαρακτηριστικών τόνισε 378 σημαντικά διαφορικά εκφρασμένων γονιδίων, που αντιπροσωπεύει την υπογραφή του OVCAR-3 και OV-90 κύτταρα CD157-υπερεκφράζουν. Η διαμόρφωση των επιλεγμένων γονιδίων μεταφράζεται σε αλλοίωση της έκφρασης πρωτεΐνης που δίνουν κύτταρα ένα άκρως κακοήθη φαινότυπο. Η συνολική εικόνα που συνάγεται από την ανάλυση των διαμορφωμένων προϊόντων μετεγγραφής είναι ότι η υψηλή έκφραση του CD157 ενισχύει έναν αριθμό βιολογικών διεργασιών ευνοώντας την εξέλιξη του όγκου (συμπεριλαμβανομένης της ανάπτυξης και κυτταρική κινητικότητα), και εξασθενεί αρκετές βιολογικές διαδικασίες που εμποδίζουν την εξέλιξη του όγκου (όπως απόπτωση, κυτταρικό θάνατο και απόκριση στο στρες). Μαζί, αυτά τα ευρήματα εμπλέκουν CD157 στην εξέλιξη του ΕΓΚ με μεταστατική νόσο και υποδεικνύουν ότι CD157 μπορεί να αντιπροσωπεύει ένα πολύτιμο θεραπευτικό στόχο

Παράθεση:. Morone S, Lo-Buono Ν, Parrotta R, Giacomino Α, Nacci G, Brusco A, et al. (2012) Η υπερέκφραση του CD157 Συμβάλλει στα επιθηλιακά καρκίνου των ωοθηκών Εξέλιξη με την προαγωγή της μεσεγχυματικά Διαφοροποίηση. PLoS ONE 7 (8): e43649. doi: 10.1371 /journal.pone.0043649

Επιμέλεια: Sandra Orsulic, Cedars-Sinai Medical Center, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 3 Απριλίου, 2012? Αποδεκτές: 23 Ιούλη του 2012? Δημοσιεύθηκε: 20, Αυγούστου του 2012

Copyright: © Morone et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Υποστηρίζεται από επιχορηγήσεις από την Ένωση της Ιταλίας Cancer Research (AIRC, MFAG6312 και IG 11602 για να ΕΟ), από το ιταλικό Υπουργείο Πανεπιστημίου και Επιστημονικής Έρευνας (ΠΡΙΝ και το 60% Έργα AF) και από το Διεθνές Ίδρυμα για την Έρευνα στο Experimental Medicine. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή καρκίνο των ωοθηκών

Τα επιθηλιακά (ΕΓΚ) είναι μια επιθετική και θανατηφόρα γυναικολογική κακοήθεια. Πάνω από το 70% των ασθενών παρουσιάζει με προχωρημένη νόσο και, παρά την επιθετική θεραπεία, τα 5-ετών ποσοστό επιβίωσης των ασθενών με EOC είναι κάτω από 50%. Αυτή η κακή πρόγνωση προκύπτει από τη δυσκολία της διάγνωσης στα πρώιμα κλινικά στάδια και της έλλειψης μίας αποτελεσματικής θεραπείας για τους όγκους προχωρημένου σταδίου. Η κατανόηση των βιολογικών μηχανισμών που ρυθμίζουν την εξέλιξη του ΕΓΚ εκ τούτου, είναι ζωτικής σημασίας για την επινόηση νέων θεραπευτικών επιλογών και βελτίωση της επιβίωσης των ασθενών.

EOC πιστεύεται ότι προέρχονται από το επιθήλιο των ωοθηκών επιφάνεια που γραμμές την ωοθήκη. κύτταρα EOC μπορεί να ρίξει από τον πρωτογενή όγκο και, επειδή καμία ανατομική εμπόδιο είναι παρόν, εξαπλωθεί άμεσα σε όλη την περιτοναϊκή κοιλότητα και στη συνέχεια διαδίδουν κυρίως μέσω του λεμφικού συστήματος, την ανάπτυξη τους απαραίτητους μηχανισμούς άμυνας για την επιβίωση κάτω από συνθήκες ανεξάρτητη από προσκόλληση [1]. Στο περιβάλλον του όγκου, εντοπισμένη πρωτεολυτική αποδόμηση της εξωκυτταρικής μήτρας (ECM) διευκολύνει τη μετανάστευση των επιπλεόντων κυττάρων, που τους επιτρέπει να αγκυροβολεί στο mesothelium και στη συνέχεια εισβάλλουν αυτό, για την ίδρυση όγκων σε δευτερογενείς θέσεις. διάδοση όγκου συνεπάγεται φαινοτυπική μετατροπή των επιθηλιακών κυττάρων, τα οποία δεν είναι κινητικά, σε μεσεγχυματικά κύτταρα. Η διαδικασία αυτή έχει αξιοσημείωτες ομοιότητες με την επιθηλιακή-μεσεγχυματικά μετάβαση (ΕΜΤ) που συμβαίνουν κατά τη διάρκεια της εμβρυϊκής ανάπτυξης [2]. Πράγματι, τύπου 3 ή ογκογόνο EMT αναγνωρίζεται όλο και περισσότερο ως μια δυναμική και παροδική μηχανισμός με τον οποίο τα κύτταρα στην πρωτοβάθμια μη επεμβατική όγκοι αποκτούν ιδιότητες απαραίτητα για τη μετανάστευση, την εισβολή, μεταστατική διάδοση και την αντίσταση στην απόπτωση [3]. Το πρόγραμμα ΕΜΤ μπορεί να προκληθεί από μια ποικιλία συμφραζόμενα σημάτων τα οποία κύτταρα μπορεί να υποστεί σε μικροπεριβάλλον του όγκου? ανεξάρτητα από τα σήματα σκανδαλισμού, η ενεργοποίηση του EMT σχετίζεται με κακή κλινική έκβαση σε διαφορετικούς τύπους όγκων, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου [4] ωοθηκών. Τα μόρια της κυτταρικής επιφάνειας που εμπλέκονται στον έλεγχο των διεργασιών, όπως κύτταρο-κύτταρο, κύτταρο-ECM πρόσφυση, εντοπισμένη μετανάστευση ενδοπεριτοναϊκή και την εισβολή του περιτοναίου από επιπλέοντα κύτταρα ή συσσωματώματα κυττάρων (σφαιροειδή) πιστεύεται ότι διαδραματίζει ηγετικό ρόλο στην εξέλιξη της EOC και, τελικά, , στην έκβαση των ασθενών.

CD157 /BST-1, ένα GPI-αγκυροβολημένα μέλος μιας οικογένειας NADase /ADP-ριβοζύλιον κυκλάσης, είναι μια εξωενζύμου η οποία διασπά εξωκυττάριο νικοτιναμίδη αδενίνη δινουκλεοτιδίου (NAD

+) , δημιουργώντας κυκλικό ριβόζη ADP (cADPR) και ADPR [5], [6]. Επιπλέον, CD157 καθορίζει λειτουργικές και δομικές αλληλεπιδράσεις με άλλα μόρια διαμεμβράνης αποκτώντας έτσι τη δυνατότητα να μετάγουν ενδοκυτταρικά σήματα [7] – [9]. Αν και CD157 αρχικά χαρακτηρίστηκε ως στρωματικά [10] και μυελοειδή γλυκοπρωτεΐνη επιφανείας [11] που εμπλέκονται στον έλεγχο της κυτταρικής μετανάστευσης και διαπίδυση [12], αποδείξαμε πρόσφατα ότι CD157 εκφράζεται επίσης από acc=GSE36364).

Statistical Μέθοδοι και τα δεδομένα

Ανάλυση

Εκτός αν υποδεικνύεται διαφορετικά, οι τιμές εκφράζονται ως μέσοι ± SEM. Συγκρίσεις μεταξύ δύο ομάδων διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας

t

δοκιμή μη ζευγαρωμένο δύο όψεων του Student για την κανονική διανέμονται μεταβλητές. Οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση SPSS Statistics 17 λογισμικό (Chicago, IL) και GraphPad Prism λογισμικό 5 (San Diego, CA). Όλες οι στατιστικές δοκιμασίες ήταν δύο όψεων. Για όλες τις αναλύσεις, οι διαφορές θεωρήθηκαν σημαντικές σε Ρ & lt? 0,05 (* P & lt? 0.05, ** P & lt? 0,01, *** P & lt? 0.001

σε σχέση με τον έλεγχο

) και

ns

για μη σημαντικό .

(Α) sqrt-PCR (αριστερά) και ανάλυση κηλίδος western (δεξιά) του CD157 σε OV-90 /CD157 και OV-90 /mock κυττάρων. GAPDH και β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκαν ως εσωτερικοί έλεγχοι, αντίστοιχα. (Β) Μορφολογία των αποικιών που σχηματίζεται από OV-90 /μακέτα και-90 OV /CD157 κύτταρα. Αντιπροσωπευτικά αποικίες οπτικοποιούνται μετά από χρώση με κρυσταλλικό ιώδες δείξει. bar Κλίμακα: 200 μΜ. (C) sqrt-PCR ανάλυση της Ε-καδερίνης και Ν-καδερίνης σε OV-90 /mock και OV-90 /CD157 κύτταρα. Πυκνομετρία ποσοτικοποιεί τα επίπεδα έκφρασης του mRNA των υποδεικνυόμενων μορίων σε σχέση με GAPDH. (D) Επίδραση της CD157 υπερέκφραση σε anoikis. Μετά από 48, 72. 96 και 192 ώρες ανεξάρτητη από προσκόλληση ανάπτυξη, τα κύτταρα σταθεροποιήθηκαν, χρωματίστηκαν με ιωδιούχο προπίδιο και αναλύθηκαν με ένα FACSCanto. Anoikis σε OV-90 /mock-90 και OV /CD157 κυττάρων προσδιορίστηκε μετρώντας το ποσοστό των κυττάρων υπο-G1. Τα αποτελέσματα αντιπροσωπεύουν το μέσο ± SEM τριών ανεξάρτητων πειραμάτων. * P & lt? 0,05? ** Ρ & lt? 0,01, δίπλευρη δοκιμασία t. (Ε) Anchorage-ανεξάρτητη ανάπτυξη του OV-90 /CD157 και ψευδο κύτταρα αναλύθηκε με προσδιορισμού σχηματισμού αποικίας μαλακού agar. Γράφημα αντιπροσωπεύει μέσος αριθμός των αποικιών που σχηματίστηκαν από τρία ανεξάρτητα πειράματα ± SEM μετά από 3 εβδομάδες επώασης των κυττάρων σε μαλακό άγαρ. *** Ρ & lt? 0.001, δύο-tailed t test. (F) Επίδραση της έκφρασης CD157 για τη μετανάστευση των κυττάρων σε μια δοκιμασία μηδέν-πληγή στο OV-90 /CD157 και εικονικές κύτταρα. Τα κύτταρα αναπτύχθηκαν ως μονοστιβάδες, τραυματίες, και φωτογραφήθηκαν σε χρόνο μηδέν και στις 24 ώρες. Πληγή άκρα υποδεικνύονται με μαύρες διακεκομμένες γραμμές (γραμμή κλίμακας: 200 μm). (G) Η ικανότητα των κυττάρων να κλείσει το τραύμα υπολογίστηκε μετρώντας 20 τυχαίως επιλεγμένων αποστάσεις κατά μήκος της άκρης του τραύματος στο χρόνο 0 και στις 24 ώρες. Τα αποτελέσματα αντιπροσωπεύουν το ποσοστό μείωσης του μέσου πλάτους πληγής και εκφράζονται ως μέσος όρος ± SEM τριών ανεξάρτητων πειραμάτων. * P & lt? 0,05? δίπλευρη δοκιμασία t.

Η

(Α) sqrt-PCR (αριστερά) και ανάλυση κηλίδος western (δεξιά) που δείχνουν OV-90 κύτταρα ρετροϊό μεταγωγή με ένα shRNA που στοχεύει το ανθρώπινο mRNA CD157, με αποτέλεσμα αποτελεσματική νοκ ντάουν της έκφρασης CD157. GAPDH και β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκαν ως εσωτερικοί έλεγχοι, αντίστοιχα. (Β) Μορφολογία των αποικιών που σχηματίζεται από OV-90 /αγωνίζομαι και OV-90 κύτταρα /shCD157. Αντιπροσωπευτικά αποικίες οπτικοποιούνται μετά από χρώση με κρυσταλλικό ιώδες δείξει. bar Κλίμακα: 200 μΜ. (C) sqrt-PCR για το E-cadherin, N-cadherin και σαλιγκάρι, Twist1 και γυμνοσάλιαγκα μεταγραφικοί καταστολείς στο OV-90 /αγωνίζομαι και OV-90 /shCD157 κύτταρα. Πυκνομετρία ποσοτικοποιεί τα επίπεδα έκφρασης του mRNA των υποδεικνυόμενων μορίων σε σχέση με GAPDH. δοκιμασία (D) Anoikis. Μετά από 48, 72, 96 και 192 ώρες κάτω από αγκύρωση ανάπτυξη ανεξάρτητη, σταθεροποιήθηκαν κύτταρα, χρωματίστηκαν με ιωδιούχο προπίδιο και αναλύθηκαν με ένα FACSCanto. Η ανάλυση των δεδομένων πραγματοποιήθηκε με ModFit LT ™ λογισμικού ανάλυσης κυτταρικού κύκλου. Anoikis σε OV-90 /σκαρφάλωμα και OV-90 κύτταρα /shCD157 προσδιορίστηκε μετρώντας το ποσοστό των κυττάρων υπο-G1. Τα αποτελέσματα αντιπροσωπεύουν το μέσο ± SEM τριών ανεξάρτητων πειραμάτων. * P & lt? 0,05? ** Ρ & lt? 0,01, δίπλευρη δοκιμασία t. (Ε) Anchorage-ανεξάρτητη ανάπτυξη του OV-90 /σκαρφάλωμα και OV-90 /shCD157 κύτταρα αναλύθηκε με προσδιορισμού σχηματισμού αποικίας μαλακού agar. Γράφημα αντιπροσωπεύει τον μέσο αριθμό των αποικιών /πεδίου που σχηματίζεται από τρία ανεξάρτητα πειράματα ± SEM μετά από 3 εβδομάδες επώασης των κυττάρων σε μαλακό άγαρ. * Ρ & lt? 0,05, δίπλευρη δοκιμασία t. (F) Επίδραση της CD157 νοκ ντάουν για OV-90 κυτταρική μετανάστευση σε μια δοκιμασία μηδέν-πληγή. Τα κύτταρα αναπτύχθηκαν ως μονοστιβάδες, τραυματίες, και φωτογραφήθηκαν σε χρόνο μηδέν και στις 24 ώρες (γραμμή κλίμακας: 200 μm). Οι τραύματος άκρα υποδεικνύονται με μαύρες διακεκομμένες γραμμές. (G) Η ικανότητα του OV-90 /σκαρφάλωμα και OV-90 κύτταρα /shCD157 να κλείσει το τραύμα υπολογίστηκε μετρώντας 20 τυχαίως επιλεγμένων αποστάσεις κατά μήκος της άκρης του τραύματος στο χρόνο 0 και στις 24 ώρες. Τα αποτελέσματα αντιπροσωπεύουν το ποσοστό μείωσης του μέσου πλάτους πληγής και εκφράζονται ως μέσος όρος ± SEM τριών ανεξάρτητων πειραμάτων. ** P & lt?. 0.01, δύο-tailed t test

Η

Αποτελέσματα

Η έκφραση CD157 Διαμορφώνει καρκίνου των ωοθηκών κύτταρα Μορφολογία και κυττάρου-κυττάρου αλληλεπίδραση

Εμείς επιλέξαμε OVCAR- 3 ωοθηκών καρκινικά κύτταρα ως το πιο κατάλληλο μοντέλο για τη μελέτη των επιπτώσεων που προκαλούνται από την έκφραση CD157, δεδομένου ότι έχουν μια επιθηλιακά φαινότυπο [24], είναι ελάχιστα επεμβατική, ελάχιστα κινητικό σε πλαστικό και μετά βίας αγκυροβόλιο ανεξάρτητη [25]. Για να διερευνηθεί η βιολογική σημασία του CD157 σε εξέλιξης του καρκίνου των ωοθηκών, έχουμε σταθερά επιμολυσμένα πλήρους μήκους CD157 σε CD157-αρνητικά κύτταρα OVCAR-3 (Σχήμα 1Α). Φως εικόνες μικροσκόπιο αποκάλυψε ότι mock κύτταρα μεγάλωσε όσο πιο σφιχτά συνδεδεμένα συμπλέγματα που αποτελούνται από κύτταρα με τυπικό πλακόστρωτα-όπως επιθηλιακά μορφολογία. Σε αντίθεση, OVCAR-3 /CD157 κύτταρα παρουσίασαν περισσότερα διάσπαρτα διανομής και επίμηκες σχήμα, ένα διακριτικό χαρακτηριστικό των ινοβλαστών ομοιάζουν με κύτταρα και σχηματίζονται ελάχιστα οργανωμένη διασταυρώσεις μεταξύ γειτονικών κυττάρων (Σχήμα 1Β, C).