Αφηρημένο

Σκοπός

Ραδιοσυχνοτήτων θερμικής εκτομής (RFA) των ηπατικών και νεφρικών όγκων μπορούν να συνοδεύονται από μη επιθυμητή ογκογένεση σε υπολειμματικά, χωρίς θεραπεία των όγκων. Εδώ, μελετήσαμε την χρήση του μικκυλίου ενθυλακωμένης siRNA για την καταστολή της IL-6 με τη μεσολάβηση τοπικές και συστημικές παρενέργειες της RFA.

Μέθοδοι

Συγκρίναμε τυποποιημένο ηπατική ή νεφρική RFA (λαπαροτομία, 1 cm ενεργό άκρο στους 70 ± 2 ° C για 5 λεπτά) και εικονική διαδικασιών χωρίς και με τη χορήγηση 150 nm μικυλλίου-όπως νανοσωματιδίων (ΜΦ) αντι-IL6 siRNA (συζεύγματα DOPE-ΡΕΙ, μονής IP δόση 15 λεπτά μετά την RFA, C57Bl ποντίκι : 3.5 μg /100 ml, Fisher 344 αρουραίος: 20ug /200 μλ), RFA /κωδικοποιημένα siRNA, και RFA /άδειο ΜΦ. Οι μετρήσεις της έκβασης περιλάμβαναν: τοπική periablational κυτταρική διήθηση (α-SMA + αστεροειδή κύτταρα), περιφερειακά πολλαπλασιασμό των ηπατοκυττάρων, ορού /ιστών επίπεδα VEGF IL-6 και στο 6-72hr, και το μακρινό της ανάπτυξης του όγκου, τον πολλαπλασιασμό των όγκων (Ki-67) και την πυκνότητα μικροαγγειακή ( MVD, CD34) σε υποδόρια μοντέλα αδενοκαρκινώματος μαστού R3230 και MATBIII στις 7 ημέρες.

Αποτελέσματα

Για συκώτι RFA, ανοσοενισχυτικό ΜΝΡ αντι-IL6 siRNA μειωμένη RFA αυξήσεις που προκαλούνται στον ιστό της IL-6 επίπεδα , η διείσδυση α-SMA + αστεροειδών κυττάρων, και των περιφερειακών πολλαπλασιασμό των ηπατοκυττάρων με την αρχική τιμή (p & lt? 0,04, όλες οι συγκρίσεις). Επιπλέον, επικουρική MNP αντι-IL6- siRNA κατέστειλε αυξημένη μακρινό ανάπτυξη του όγκου και Ki-67 παρατηρήθηκε σε R3230 και MATBIII όγκους μετά τον ηπατικό RFA (p & lt? 0,01). Αντι-IL6 siRNA μείωσε επίσης RFA που προκαλείται ανύψωση του VEGF και MVD του όγκου (p & lt? 0,01). Ομοίως, η νεφρική RFA αυξήσεις που προκαλούνται στον ορό επίπεδα IL-6 και μακρινό ανάπτυξης όγκου R3230 καταστάλθηκε με αντι-IL6 siRNA (ρ & lt? 0,01).

Συμπεράσματα

ανοσοενισχυτικό νανοσωματίδιο ενθυλακωμένη siRNA κατά IL-6 μπορεί να χρησιμοποιηθεί για να διαμορφώσουν τις τοπικές και περιφερειακές επιπτώσεις της ηπατικής RFA για να εμποδίσει πιθανούς ανεπιθύμητα pro-ογκογόνο επίδραση της ηπατικής ή νεφρικής RFA σε μακρινά όγκου

Παράθεση:. Ahmed M, Kumar G, Navarro G, Wang Υ, Gourevitch S, Moussa ΜΗ, et al. (2015) Συστημική siRNA νανοσωματιδίων-Based φάρμακα συνδυάζονται με Καυτηρίαση για Θεραπεία Καρκίνου. PLoS ONE 10 (7): e0128910. doi: 10.1371 /journal.pone.0128910

Επιμέλεια: Yi-Hsiang Huang, Εθνικό και Καποδιστριακό Πανεπιστήμιο Yang-Ming, TAIWAN

Ελήφθη: 19 Μάρ 2015? Αποδεκτές: 1η Μαΐου 2015? Δημοσιεύθηκε: 8 Ιούλη του 2015

Copyright: © 2015 Ahmed et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του χειρογράφου

Χρηματοδότηση:. η εργασία αυτή χρηματοδοτήθηκε από το Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου (CCNE 1U54CA151881-01 VPT, SNG, ΜΑ, TL), Ακτινολογικής Εταιρείας Βορείου Αμερικής Έρευνας και Ίδρυμα Εκπαίδευσης (RSD1215, ΜΑ), του Χάρβαρντ Ιατρική Σχολή γιατροί Σχολή Ίδρυμα Ακτινολογίας (MA), Deutsche Forschungsgemeinschaft (SF8841, EG), η ισραηλινή Κέντρο αριστείας Ι-CORE (EG), και το Ίδρυμα του Ισραήλ Science (EG, SNG). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

υπήρξε πολύ πρόσφατο ενδιαφέρον για τη χρήση παρεμβολής RNA ( «μετα-μεταγραφική γονιδιακή σίγηση») και ιδίως οι μικρές παρεμβαλλόμενα RNA (siRNA) σε θεραπείες του καρκίνου. Αυτό έχει επικεντρωθεί σε μεγάλο βαθμό είτε διαμόρφωση κυτταρικές αποκρίσεις πρωτεΐνη για τη βελτίωση της αποτελεσματικότητας των πρωτογενών φαρμακολογικής /ογκολογικές θεραπείες [1,2], αυξάνοντας αντικαρκινικής ανοσίας μέσω επιλεκτικής εξουδετέρωσης της ανοσολογικής απάντησης καταστολής πρωτεΐνες, ή χημειο-ευαισθητοποίηση μέσω αποσιώπηση γονιδίων υποδοχέα αυξητικού παράγοντα [3-6]. Για να ξεπεραστούν οι περιορισμοί στην παράδοση με δωρεάν siRNA στο

in vivo

συστήματα, τα siRNA έχουν συνήθως χορηγείται με τη χρήση φορέων νανοσωματιδίων (όπως τα λιποσώματα, μικκύλια, ή δεσμεύονται σε σωματίδια) να μεγιστοποιήσουν ουσιαστικά

παθητική

ιστού παράδοσης (αν και σε υψηλότερες συγκεντρώσεις) στην πρωτοβάθμια όργανα και όγκους στόχο [7-11]. Ωστόσο, ακόμη και με τη βοήθεια από την παράδοση nanocarrier, προκλήσεις για ενδονεοπλαστική και στοχευμένη χορήγηση φαρμάκων εξακολουθούν να υπάρχουν [1,3]. Επιπλέον, λίγες μελέτες έχουν χρησιμοποιηθεί ανοσοενισχυτικό siRNA σε συνδυασμό με μη φαρμακολογική παραδείγματα, όπως η διαμόρφωση των ιστών ή φυσιολογικές αντιδράσεις μετά τη χειρουργική, επεμβατική ή θεραπείες ακτινοβολίας.

Εικόνα-καθοδηγούμενη κατάλυση θερμική ιστού με τη χρήση ραδιοσυχνοτήτων, φούρνο μικροκυμάτων, ή ενέργεια λέιζερ για τη δημιουργία τοπικών υψηλή θερμοκρασία (60-100 ° C) θέρμανση γύρω από μια διαδερμική τοποθέτηση εφαρμογής είναι τώρα σε ευρεία κλινική χρήση για τη θεραπεία εστιακών όγκους του ήπατος, των πνευμόνων, των νεφρών και των οστών (& gt? 100.000 περιπτώσεις /έτος παγκοσμίως) [ ,,,0],12]. Η επιτυχής κατάλυση πλήρη όγκου απαιτεί επίσης τη συμπερίληψη μιας 5-10 mm χείλος του φυσιολογικού παρεγχύματος ως «αφαιρετική περιθωρίου» για να διασφαλιστεί η πλήρης εξάλειψη του όγκου [13]. Σε μια προσπάθεια να διασφαλιστεί η πληρότητα της θεραπείας, έχουμε δείξει ότι η χορήγηση ακόμη και μία μόνο δόση του φαρμάκου φορτωμένων νανοσωματίδιο χημειοθεραπεία ταυτόχρονα με εκτομή RF μπορεί να οδηγήσει σε αύξηση της τοπικής χορήγησης periablational φαρμάκου (μέχρι 10 φορές), με συνακόλουθη αύξηση του καταστροφή του όγκου, η αυξημένη επιβίωση των ζώων τελικό σημείο, και μεγαλύτερες ποσότητες καταστροφή του όγκου σε ασθενείς με ηπατική όγκους [14-16]. Πρόσφατα έχουμε μόχλευση περαιτέρω με επιτυχία αυτό το βελτιωμένη παράδοση εστιακό να στοχεύσετε συγκεκριμένες απαντήσεις ιστού RFA-επαγόμενη (όπως η αυξημένη παρεμβολή DNA ή καταστολή της παραγωγής HSP) [16,17].

Μια σειρά από μελέτες έχουν δείξει ότι η υπο- θανατηφόρος κάτω θέρμανση του ιστού (40-47 ° C) γύρω από τη ζώνη εκτομής υποκινεί πολλαπλές αντιδράσεις δευτερογενή ιστό [18], συμπεριλαμβανομένης της αυξημένης φλεγμονώδους κυτοκίνης (όπως IL-6 και IL-10) [19] και του παράγοντα ανάπτυξης (όπως HGF, HIF-1α, και VEGF) [20-22] παραγωγής? διήθηση του καθαριστή και ανοσογόνων κυττάρων εντός του ιστού periablational [23]? και υπερθερμία που προκαλείται από αυξήσεις στην αγγειακή διαπερατότητα και ενδοθηλιακά διαρροή [24]. Συγκεκριμένα, πρόσφατες μελέτες έχουν δείξει ότι η αυξημένη ιντερλευκίνη-6 στον ορό μετά από θερμική εκτομή του φυσιολογικού ήπατος (προσομοίωση της κλινικής τελικό σημείο της εκτομής ολόκληρο το συκώτι όγκου και «αφαιρετική περιθώριο» της κανονικής γύρω από το συκώτι) είναι μια βασική κινητήρια δύναμη της periablational διείσδυση φλεγμονωδών και ανοσογόνων κυττάρων όπως τα μακροφάγα και μυϊκή ακτίνη (SMA) θετική ηπατικών αστεροειδών κυττάρων α-λείου [23,25]. Αυτά, με τη σειρά του, μπορεί να επιφέρει την ενεργοποίηση του κατάντη οδών υπέρ της ανάπτυξης, όπως κυτοκινών στην HGF /c-Met μονοπάτι, και αυξημένο πολλαπλασιασμό ηπατοκυττάρων σε ακατέργαστα ήπατος διαδικασίες οι οποίες είναι εμφανώς μειωμένες σε IL-6 ποντικούς νοκ-άουτ [25]. Δεδομένου ότι η επιτυχής ολοκλήρωση κατάλυση των όγκων απαιτεί επίσης τη συμπερίληψη μιας 5-10 mm χείλος του φυσιολογικού παρεγχύματος ως «αφαιρετική περιθωρίου» για να διασφαλιστεί η πλήρης εξάλειψη του όγκου [13], τη μελέτη αυτών των δευτερογενών συστηματικές επιδράσεις της κατάλυσης με υψίσυχνο ρεύμα σε φυσιολογικό ιστό όργανο είναι επιτακτική ανάγκη . Η ανάγκη για περαιτέρω μελέτη υποστηρίζεται από πρόσφατες πειραματικές αποδεικνύουν μελέτες, «εκτός στόχου« διέγερση των μακρινών ανάπτυξη του όγκου μετά από θερμική εκτομή του ήπατος και των νεφρών των ιστών, και κλινικές μελέτες που δείχνουν μια υψηλότερη συχνότητα εμφάνισης νέων HCC μετά την ηπατική εκτομή RF (πλησιάζουν 80 % σε 5 έτη) σε σύγκριση με ασθενείς με κίρρωση συγκριτική un-θεραπεία (22-50%) [26-29]. Εδώ, θα βασίζονται στις προηγούμενες εμπειρίες μας χρησιμοποιώντας νανοσωματίδια μεσολάβηση παροχής φαρμάκου κατά προτίμηση με στόχευση στο periablational χείλος για να μελετήσει αν πολυμερές μικκύλιο που μοιάζει με νανοσωματίδια (ΜΦ) φορτωμένο με αντι-IL6 siRNA μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την καταστολή θερμικής εκτομής επαγόμενη παραγωγή IL-6 , IL-6 με τη μεσολάβηση periablational κυτταρική διήθηση, τον πολλαπλασιασμό των ηπατοκυττάρων σε χωρίς θεραπεία του ήπατος, και IL-6 με τη μεσολάβηση κατάντη RF εκτομή διέγερση της ανάπτυξης του όγκου μακρινό.

Υλικά και Μέθοδοι

δήλωση Ηθική

Όλες οι μελέτες σε ζώα έγιναν με την έγκριση της Επιτροπής Δεοντολογίας Beth Israel Deaconess Medical Center Θεσμικών Φροντίδα ζώων και Επιτροπή Χρήσης και Hadassah Hebrew University Medical School Care Θεσμικών ζώων.

μοντέλα

Animal

Για όλα τα πειράματα και διαδικασίες, η αναισθησία προκλήθηκε με ένεση ΙΡ ενός μίγματος κεταμίνης (50 mg /kg, Ketaject? Phoenix Pharmaceutical, St. Joseph, ΜΟ) και ξυλαζίνη (5 mg /kg, Bayer, Shawnee Mission, KS). Τα ζώα θανατώθηκαν με υπερβολική δόση διοξειδίου του άνθρακα χρησιμοποιώντας Smartbox

Σύστημα τμήμα 2 CO (συστήματα ΕΖ, Palmer, ΡΑ) που ακολουθήθηκε από καρδιακή παρακέντηση.

Τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν σε φυσιολογικά ποντίκια C57Bl (40 ± 10 g), ή δύο κυτταρικές σειρές αδενοκαρκινώματος του μαστού (R3230 ή MATBIII) εμφυτεύονται υποδόρια σε θηλυκούς αρουραίους Fisher 344 (150 ± 20g? 14-16 εβδομάδων, Charles River, Wilmington, ΜΑ) [30]. Η γραμμή αδενοκαρκινώματος του μαστού όγκου R3230 είναι ένα καλά χαρακτηρισμένο γραμμή που έχουμε χρησιμοποιήσει για πάνω από 10 χρόνια [30]. Η γραμμή του όγκου MATBIII ελήφθη από την American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA). εμφύτευση, αξιολόγηση, και τεχνικές παρασκευής όγκου πραγματοποιήθηκαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [30]. Εν συντομία, ένας όγκος εμφυτεύθηκε σε κάθε ζώο με βραδεία έγχυση 0,3-0,4 mL του εναιωρήματος του όγκου εντός του μαστικού στρώματος λίπους του κάθε ζώου μέσω μιας βελόνας 18-gauge. Οι όγκοι μετρήθηκαν κάθε 1-2d μέχρι να φτάσει 6-7 mm σε ποιο σημείο είχαν συμπεριληφθεί στις μελέτες.

Εφαρμογή της αφαίρεσης RF

Συμβατικά μονοπολική RFA εφαρμόστηκε χρησιμοποιώντας ένα 500-kHz γεννήτρια RFA (μοντέλο 3Ε? Radionics, Burlington, ΜΑ), όπως έχει περιγραφεί στο παρελθόν [30]. Εν συντομία, το όργανο-στόχος εκτέθηκε μέσω λαπαροτομία χρησιμοποιώντας ένα υποπλεύρια (ήπαρ) ή πλευρικά (νεφρό) τομή κάτω από στείρες συνθήκες, ενώ το ζώο αναισθητοποιήθηκε. Η άκρη 1 cm από 21-gauge ηλεκτρικά μονωμένο ηλεκτρόδιο (SMK ηλεκτρόδιο? Cosman Medical Inc, Burlington, ΜΑ) τοποθετήθηκε στο ήπαρ ή τους νεφρούς. Για τα ζώα που έλαβαν θεραπεία με θερμική εκτομή, ενέργεια RF εφαρμόστηκε επί 5 λεπτά με έξοδο της γεννήτριας τιτλοποιηθεί για να διατηρηθεί μια καθορισμένη θερμοκρασία άκρο (70 ± 2 ° C). Αυτή η τυποποιημένη μέθοδος εφαρμογής RF έχει αποδειχθεί προηγουμένως για να παρέχει αναπαραγώγιμες όγκους πήξη με χρήση αυτού του συμβατικού συστήματος RFA [30,31]. Για να ολοκληρωθεί το κύκλωμα RF, το ζώο τοποθετήθηκε σε ένα μαξιλάρι γείωσης τυποποιημένο μεταλλικό (Radionics). Για τα ζώα που έλαβαν θεραπεία με είτε ψευδή ή έναν παράγοντα μόνο του, το ηλεκτρόδιο τοποθετήθηκε, αλλά καμία ενέργεια χορηγήθηκε.

νανοσωματιδίων siRNA σκεύασμα

Όλα τα υλικά αγοράστηκαν από την Sigma-Aldrich (St. Louis, ΜΟ) εκτός αν αναφέρεται διαφορετικά. Διακλαδισμένο πολυαιθυλενιμίνη (ΡΕΙ) με μοριακό βάρος 1,8 kDa αγοράστηκε από την Polysciences, Inc (Warrington, ΡΑ). 1,2-disrearoyl-sn-γλυκερο-3-φωσφοαιθανολαμίνη-Ν- [μεθοξυ (πολυαιθυλενογλυκόλη) -2000] (ΡΕΟ-ΡΕ 2kDa) και 1,2-διολεοϋλ-sn-γλυκερο-3-φωσφοαιθανολαμίνη-Ν- (γλουταρυλ ) (Glutaryl-ΡΕ) αγοράστηκαν από την Avanti Polar Lipids (Alabaster, AL). Ύδατος άνευ νουκλεάσης αγοράστηκε από την Qiagen (Germantown, MD). Όλα τα siRNA δίπολα είναι από Dharmacon (Lafayette, CO). Οι συντίθενται αλληλουχίες των siRNA που στοχεύει IL-6 ήταν: 5′-AGUCGGAGGCUUAAUUACAdTdT-3 ‘(νοηματικό), 5′-CAGGAAAUUUGCCUAUUGAdTdT-3′ (νοηματικό) και 5’-UAAGGACCAAGACCAUCCAdTdT-3 ‘(νοηματικό) [32,33]. Ένα siRNA αγωνίζομαι χρησιμοποιήθηκε ως αρνητικός μάρτυρας. Η ακολουθία των μη-στόχευσης ελέγχου siRNA ήταν 5’-AGUACUGCUUACGAUACGGdTdT-3 ‘(έννοια) [34].

μικκυλίων όπως νανοσωματίδια επιλέχθηκαν ως όχημα μεταφοράς βασίζονται σε προηγούμενη δουλειά που αποδεικνύουν ευεργετική κινητική χρονικής παράδοσης (6 -12hr) και μεγαλύτερη διάμεση διείσδυση σε ιστούς που περιβάλλουν τη ζώνη εκτομής [35]. Κατασκευάσαμε μικκυλίων όπως νανοσωματίδια (ΜΦ) με βάση προϊόντα σύζευξης τροποποιημένης πολυαιθυλενιμίνη φωσφολιπιδίου (ϋΟΡΕ-ΡΕΙ). Το συζυγές DOPE-ΡΕΙ και τα σύμπλοκα DOPE-ΡΕΙ /siRNA παρασκευάστηκαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [34]. Έχουμε αποδείξει στο παρελθόν ότι συζυγών DOPE-ΡΕΙ με βάση μικρού μοριακού βάρους ΡΕΙ αυτοσυναρμολογημένο εντός μικυλλιακή δομές που συμπυκνώνεται siRNA, έδειξαν υψηλή αποτελεσματικότητα επιμόλυνσης και είχε ένα καλύτερο προφίλ τοξικότητας από ΡΕΙ 25 kDa και Lipofectamine (κοινώς χρησιμοποιούνται DNA /siRNA αντιδραστήρια διαμόλυνσης) [11]. Έχουμε ενσωματωθεί PEG-ΡΕ στους μεταφορείς για να επιτευχθεί βελτιωμένη απόδοση

in vivo

. Οι υδρόφοβες αλληλεπιδράσεις μεταξύ των τμημάτων λιπιδίου σε DOPE-ΡΕΙ και εκείνων σε PEG-ΡΕ είχε σαν αποτέλεσμα αυτο-συναρμολόγηση τους σε μικκυλίων σαν σωματίδια με μέσο μέγεθος 150 nm και παρέχει κάποια στερική σταθεροποίηση των συμπλοκών σχηματίζοντας ένα προστατευτικό φράγμα και την προώθηση της αυξημένης σταθερότητα

in vivo

. Τα σύμπλοκα /siRNA DOPE-ΡΕΙ παρασκευάστηκαν με ανάμιξη ίσων όγκων DOPE-ΡΕΙ με siRNA-IL-6 (ισομοριακή πισίνα του 3 αλληλουχίες) ή σκαρφάλωμα siRNA σε μία τελική αναλογία /P N του 16. Το διάλυμα siRNA μεταφέρθηκε στο διάλυμα πολυμερούς, αναμιγνύεται με σθεναρή ανάδευση προχοϊδας και επωάστηκαν για 15 λεπτά. Η αναλογία πολυμερούς /siRNA εκφράστηκε ως το άζωτο /φωσφορικού (Ν /Ρ) του κινητήρα, και υπολογίζονται θεωρώντας ότι 43 g /mol αντιστοιχεί σε κάθε επαναλαμβανόμενη μονάδα του ΡΕΙ που περιέχουν μία αμίνη και 316 g /mol αντιστοιχεί σε κάθε επαναλαμβανόμενη μονάδα του siRNA που περιέχει ένα φωσφορικό άλας. Στη συνέχεια, ένα προηγουμένως λυοφιλιωμένο φιλμ λιπιδίων του PEG-ΡΕ ενυδατώθηκε με τα σύμπλοκα και αφέθηκε να παραμείνει σε θερμοκρασία δωματίου για 1 ώρα με διακοπτόμενη ανακίνηση του PEG-PE2kDa: αναλογία βάρους DOPE-ΡΕΙ ήταν 2: 1 [36]. Αδειάστε σκευάσματα παρασκευάστηκαν με την ενυδάτωση του φιλμ με διάλυμα πολυμερούς μόνο. Κάθε ποντικός έλαβε μια δόση των 3,5 μg του siRNA σε τελικό όγκο σκεύασμα 100 μL. Κάθε αρουραίος έλαβε μια δόση των 20 μα siRNA σε τελικό όγκο σκεύασμα 200 μL. Κάθε δόση χορηγήθηκε με ενδοπεριτοναϊκή ένεση (ΙΡ) σε επιλεγμένα χρονικά σημεία, όπως ορίζεται παραπάνω.

συγκομιδής Tumor

Τα ζώα θυσιάστηκαν σε συγκεκριμένους χρόνους που περιγράφονται ανωτέρω χρησιμοποιώντας ευθανασία διοξείδιο του άνθρακα. Ο ιστός στόχος (πρωτογενή θέση του κατάλυσης, χωρίς θεραπεία συκώτι λοβού, ή μακρινό όγκου) συλλέχθηκε, και χωρισμένο κάθετα προς την κατεύθυνση εισαγωγής του ηλεκτροδίου [17,30]. Distant όγκοι επίσης συγκομίζονται και τομές. Όλα τα δείγματα μονιμοποιήθηκαν σε 10% φορμαλίνη για όλη τη νύχτα στους 4 ° C, εμπεδώθηκε σε παραφίνη, τεμαχίστηκαν και σε πάχος 5 μm. Οι ιστοί βάφτηκαν με Η & amp?. Ε για το ακαθάριστο παθολογία

Η ποσοτικοποίηση της IL-6 και VEGF επίπεδα

επίπεδα ιστού της IL-6 (Ποντίκι /M6000B και κιτ Rat /R6000B Quantikine ορού και, R &? D Systems Inc., Minneapolis, ΜΝ) και κιτ VEGF (Rat /RRV00 Quantikine, R &? D Systems) προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας ένα ένζυμο-συνδεδεμένη ανοσορροφητική δοκιμασία (ELISA) κιτ σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Εν συντομία, φλας-κατεψυγμένο ιστό ήπατος ομογενοποιήθηκε σε ψυχρό ρυθμιστικό λύσης (Cell Signaling Technology Inc., Beverly, ΜΑ) που αποτελείται από ένα αναστολέα πρωτεϊνάσης 0,1% (Sigma-Aldrich). Τα ομογενοποιήματα στη συνέχεια φυγοκεντρήθηκαν στα 14.000 rpm για 20 λεπτά στους 4 ° C, και η συνολική συγκέντρωση πρωτεΐνης προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας μια μέθοδο bichinchoninic οξύ (BCA) (Sigma-Aldrich). Χρησιμοποιήθηκε μη αραιωμένου ορού. IL6 και VEGF τιμές ήταν τότε κανονικοποιήθηκαν προς συγκέντρωση πρωτεΐνης. Όλα τα δείγματα και τα πρότυπα μετρήθηκαν εις διπλούν, και η μέση τιμή καταγράφηκε ως pg ανά ml [37,38].

Η ανοσοϊστοχημική χρώση

Τμήματα από αφαιρεμένου ιστού και μακρινό όγκοι που παρασκευάζονται και ανοσοϊστοχημεία χρώση διεξήχθη για τις ακόλουθες δείκτες: α-SMA (ηπατικά αστεροειδή κύτταρα στο χείλος periablational), CDC-47 (τον πολλαπλασιασμό των ηπατοκυττάρων, χωρίς αγωγή ήπαρ) (έχει προηγουμένως περιγραφεί (Santa Cruz Biotechnology, Dallas, ΤΧ) [17,23] ), Ki-67 (αβ-16667 Abcam, Cambridge, MA) (πολλαπλασιασμό καρκινικών κυττάρων στο μακρινό όγκου), και CD34 (μικροαγγειακή πυκνότητα σε απομακρυσμένες όγκου) (AF4117 R & amp? συστήματα D, Minneapolis, MN). Υπόδειγμα διαφανειών απεικονίστηκαν και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας ένα Micromaster Ι μικροσκόπιο (Fisher Scientific, Pittsburgh, PA) και Micron Λογισμικό απεικόνισης (Westover Scientific, Inc., Mill Έλληνες, WA). Πέντε τυχαία πεδία υψηλής ισχύος αναλύθηκαν για τουλάχιστον 3 δείγματα για κάθε παράμετρο και σκόραρε με τυφλό τρόπο για να αφαιρέσετε παρατηρητή προκατάληψη [16,17]. Ως πρόσθετο έλεγχο για να ασφαλίσουν την ομοιομορφία της χρώσης, όταν έγιναν άμεσες συγκρίσεις γίνονται, IHC επαναλήφθηκε με όλες τις σχετικές διαφάνειες σύγκριση βάφονται ταυτόχρονα.

Στατιστική Ανάλυση

Το 13,0 πακέτο λογισμικού SPSS ( SPSS Inc., Chicago, IL) χρησιμοποιήθηκε για τη στατιστική ανάλυση. Όλα τα δεδομένα παρέχονται ως μέση τιμή συν ή μείον SD. Επιλεγμένα (Ημέρα 0 και κατά το χρόνο της θυσίας) σημαίνουν τα μεγέθη του όγκου, και ανοσοϊστοχημικές ποσοτικοποίηση συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας ανάλυση διακύμανσης (ANOVA). Πρόσθετες post-hoc ανάλυση διεξήχθη με T-test ζεύγη, δύο ουρών Student, εάν και μόνο εάν, η ανάλυση διακύμανσης επιτευχθεί στατιστική σημαντικότητα. Ένα

P

αξία μικρότερη από 0,05 θεωρήθηκε σημαντική. καμπύλες ανάπτυξης όγκου μετά από αγωγή αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας καλοσύνη-of-fit χαρακτηρισμό. Μέση μετα-κατεργασία πλαγιές καμπύλη ανάπτυξης συν ή μείον SD υπολογίστηκαν επίσης και συγκρίθηκαν με χρήση ANOVA και αντιστοιχισμένο, δίπλευρη Τ-τεστ.

Αποτελέσματα

νανοσωματιδίων αντι-IL6 siRNA μπλοκ τοπική periablational και περιφερειακών μακρινό ενδοηπατική επιπτώσεις της θερμικής κατάλυσης

οι αρχικές μελέτες κατάλυσης της ηπατικής RF πραγματοποιήθηκαν σε φυσιολογικά ποντίκια C57Bl χρησιμοποιώντας τυποποιημένα πρωτόκολλα για να καταστεί δυνατή η σύγκριση με προηγούμενες μελέτες σε φυσιολογικά και IL-6 ποντικούς νοκ άουτ [25]. Οι ακόλουθες 6 σκέλη θεραπείας συγκρίθηκαν (n = 5-6 ζώα /βραχίονα): ηπατική θερμικής εκτομής RF μόνο (λαπαροτομία και RF αίτηση για 5 λεπτά, θερμοκρασία άκρη τιτλοποιηθεί σε 70 ± 2 ° C), εικονική διαδικασία (λαπαροτομία και την τοποθέτηση της βελόνας χωρίς θέρμανση), RFA /MNP αντι-IL6 siRNA (εφάπαξ δόση των 3,5 μg siRNA δεδομένη IP, 15 λεπτά μετά την εκτομή), RFA /MNP ομελέτα siRNA, MNP αντι-IL6 siRNA μόνο, RFA /κενού οχήματος. Ηπατική εκτομή RF αυξημένη τοπική periablational ιστού IL-6 επίπεδα σε σχέση με διαδικασία sham στο 12hr μετά τη θεραπεία (1463 ± 108pg /ml έναντι 1,061 ± 45pg /ml, ρ = 0.004, Σχ 1Α). Επικουρική MNP αντι-IL6 siRNA δίνεται με ηπατική RFA μειωμένη τοπικού ιστού IL-6 επίπεδα (1.139 ± 159pg /ml? Ρ = 0,04 vs. RFA μόνο, ρ = 0,46 έναντι sham). Ηπατική RFA /MNP ομελέτα siRNA αύξηση της τοπικής ιστό της IL-6 επίπεδα (1.924 ± 141pg /ml? P & lt? 0.001 έναντι ψευδή, p = 0,01 έναντι RFA μόνη της, ρ = & lt? 0.001 έναντι RFA /αντι-IL-6 siRNA). Ιστό της IL-6 επίπεδα μετά MNP αντι-IL6 siRNA με σκεύασμα placebo ήταν 1.110 ± 42pg /ml, και μετά RFA /άδειο φορέα ήταν 1783 ± 125pg /ml.

(Α) ποσοτικοποίηση ήπατος ELISA της IL-6 επίπεδα 12 ώρες μετά τη θεραπεία (μέση τιμή ± τυπική απόκλιση). ποντίκια C57Bl τυχαιοποιήθηκαν να λάβουν εικονική θεραπεία, εκτομή του ήπατος RF, το συκώτι RFA /IP MNP αντι-IL6 siRNA, MNP αντι-IL6 siRNA μόνο, RFA /MNP ομελέτα siRNA, ή RFA /άδειο φορέα (n = 5-6 ανά ομάδα) . Ήπαρ RFA αύξηση της τοπικής 12hr συκώτι IL-6 επίπεδα (1463 ± 108 pg /ml) η οποία καταστέλλεται με ανοσοενισχυτικό IP ΜΦ αντι-IL6 siRNA (1139 ± 159 pg /ml, ρ = 0.04). Επιπλέον, ανοσοενισχυτικό ΜΝΡ αντι-IL6 siRNA δίδεται 15 λεπτά μετά την ηπατική θερμικής εκτομής (D, E) σε ποντικούς C57Bl κατέστειλε periablational διείσδυση του α-SMA θετικών μυοϊνοβλάστες σύγκριση με ηπατική θερμικής εκτομής μόνο (Β) ή RFA συνδυασμό με μπερδεμένο siRNA (C) (F, μέση τιμή ± τυπική απόκλιση, σ & lt? 0,01)

η

Όπως έχει ήδη αναφερθεί [23], τυποποιημένη RF θερμική εκτομή του φυσιολογικού ήπατος είχε ως αποτέλεσμα τη διείσδυση του periablational ζάντας από α-SMA-θετική ενεργοποιηθεί. μυοϊνοβλάστες (επίσης γνωστή ως ηπατικά αστεροειδή κύτταρα, ένας υποκατάστατος δείκτης για το σύμπλοκο periablational κυτταρική διείσδυση που εμφανίζεται μετά από τη θερμική εκτομή) στους 4 ημέρες μετά τη θεραπεία (60,1 ± 26,3% θετικά κύτταρα /HPF εντός της στεφάνης, Σχήμα 1Β-1Ε). Επικουρική MNP αντι-IL6 siRNA μείωσε σημαντικά α-SMA θετική periablational κυτταρική διείσδυση σε σύγκριση με άλλα σκέλη θεραπείας (31,7 ± 14,3% θετικά κύτταρα /HPF εναντίον RF και μόνο: 60,1 ± 26,3%? RF /ομελέτα siRNA: 72,9 ± 33,0%? P & lt ? 0,001? Σχήμα 1 F). Τόσο η διαδικασία επίφαση μόνο του ή σε συνδυασμό με MNP αντι-IL6 siRNA μόνη της δεν οδηγεί σε οποιαδήποτε αύξηση ή άλλες αλλαγές για να periablational κυτταρική διήθηση.

Επικουρική MNP αντι-IL6 siRNA είχε επίσης επιδράσεις στα όργανα-ευρύ μετά από ηπατική θερμική εκτομή. Όπως φαίνεται από Rozenblum et al [25], θερμικής εκτομής ενός λοβού του ήπατος αυξημένο πολλαπλασιασμό ηπατοκυττάρων στο μακρινό, μη επεξεργασμένο συκώτι λοβού, όπως μετρήθηκε με χρώση CDC47 (δείκτης κυττάρων που εισέρχονται στην φάση G1 του κυτταρικού αναδιπλασιασμού) (42.016. 2% θετικά κύτταρα /HPF, Σχήμα 2). MNP αντι-IL6 siRNA μείωσε το ποσό του πολλαπλασιασμού των ηπατοκυττάρων σε σύγκριση με το συκώτι θερμική κατάλυση μόνη (23,0 ± 10,7% /HPF έναντι 42.016.2% /HPF, σ & lt? 0.001). Καμία διαφορά δεν παρατηρήθηκε στον πολλαπλασιασμό των ηπατοκυττάρων σε ένα μακρινό, μη επεξεργασμένα συκώτι λοβού για RFA /ΜΦ κωδικοποιημένο siRNA (28,1 ± 16,7% /HPF) σε σύγκριση με εκτομή RF μόνο (ρ = 0,12) ή RFA /ΜΝΡ αντι-IL6 siRNA (p = 0.15 ) [Σχ 2Α-2D].

ανοσοενισχυτικό ΜΦ αντι-IL6 siRNA δίδεται 15 λεπτά μετά την ηπατική θερμικής εκτομής (C) σε ποντικούς C57Bl (n = 5-6 ζώα /βραχίονα) κατέστειλε τον πολλαπλασιασμό των ηπατοκυττάρων στο μακρινό, ανεπεξέργαστων συκώτι λοβού (με χρώση CDC47, μέση ± τυπική απόκλιση) σε σύγκριση με ηπατική θερμικής εκτομής μόνο (Α, D, ρ & lt? 0,01). Ηπατική θερμική εκτομή σε συνδυασμό με MNP κωδικοποιημένα siRNA δεν ήταν σημαντικά διαφορετικό από είτε θερμική εκτομή μόνο του ή σε συνδυασμό με εκτομή MNP αντι-IL6 siRNA (Β, D).

Η

νανοσωματιδίων αντι-IL6 siRNA καταστέλλει θερμική ablation- διέγερση των μακρινών επίπεδα IL-6 ανάπτυξη του όγκου και τον ορό R3230 μετά RF εκτομή φυσιολογικό ηπατικό παρέγχυμα

για να προσδιοριστεί η επίδραση σε απομακρυσμένα ανάπτυξη του όγκου για να προσομοιώσουν την κοινή κατάσταση των απομακρυσμένων μεταστάσεων, χρησιμοποιήσαμε ένα μοντέλο όγκου υποδόρια μαστού (R3230) στον οποίο ηπατική εκτομή RF έχει συσχετισθεί με την ανάπτυξη του όγκου μακρινό [26]. Εδώ, τα ακόλουθα σκέλη θεραπείας συγκρίθηκαν (n = 6-7 ζώα /βραχίονα): ηπατική RF θερμική εκτομή και μόνο, εικονική διαδικασία, RFA /MNP αντι-IL6 siRNA (20 mcg του siRNA, παράδοση IP), η RFA /MNP ομελέτα siRNA , MNP αντι-IL6 siRNA μόνο, RFA /κενού οχήματος. αξιολογήθηκε η επίδραση αυτών των έξι σκέλη θεραπείας σε μακρινά ανάπτυξης υποδόριου όγκου. Όλες οι όγκοι αυξήθηκαν με τον ίδιο ρυθμό πάνω 5d πριν από την τυχαιοποίηση σε διάφορα σκέλη θεραπείας. Θερμική εκτομή φυσιολογικό ήπαρ αυξήθηκε μακρινό ανάπτυξης όγκου R3230 για 7δ μετά τη θεραπεία σε σύγκριση με σκεύασμα placebo /ελέγχου (ρ & lt? 0,001? Σχήμα 3Α, Πίνακας 1). Επικουρική MNP αντι-IL6 siRNA κατέστειλε τις θερμικές κατάλυσης επαγόμενη επιδράσεις στην μακρινή ανάπτυξης όγκου R3230 τέτοια ώστε το μέσο μέγεθος του όγκου σε 7δ με θεραπεία συνδυασμού ήταν χαμηλότερη από ό, τι είτε η sham (μη ablation) και ηπατική μόνος ομάδες RFA (p = 0.02 vs . φενάκη, σ & lt? 0.001 έναντι μόνο ηπατική RFA? Σχήμα 3Α, Πίνακας 1). Ηπατική εκτομή RF σε συνδυασμό με MNP κωδικοποιημένα siRNA είχε ως αποτέλεσμα το μεγαλύτερο μακρινό διάμετρο όγκου στο 7δ σε σύγκριση με όλα τα άλλα σκέλη θεραπείας (19,3 ± 1,7 χιλιοστά, σ & lt? 0,03 για όλες τις συγκρίσεις).

(Α) υποδόρια R3230 όγκοι εμφυτεύονται σε Fisher 344 αρουραίους με παρόμοιους ρυθμούς ανάπτυξης τυχαιοποιήθηκαν την Ημέρα 0 σε ένα από έξι διαφορετικά σκέλη θεραπείας (η = 6-7 ζώα /βραχίονα). Ηπατική θερμικής εκτομής μόνο του ή σε συνδυασμό είτε με άδειο φορέα ή ΜΝΡ μπερδεμένο siRNA είχε ως αποτέλεσμα σημαντικά μεγαλύτερη ανάπτυξη του όγκου και η αλλαγή στη διάμετρο (5δ πριν έως 7δ μετά τη θεραπεία) σε σύγκριση με σκεύασμα placebo (ρ & lt? 0,01 για όλες τις συγκρίσεις, η μέση ± τυπική απόκλιση για όλες αριθμοί που παρουσιάζονται). Επικουρική MNP αντι-IL6 siRNA σε συνδυασμό με θερμική εκτομή οδήγησε σε μακρινές ρυθμό ανάπτυξης του όγκου και τέλος διάμετρο που ήταν η χαμηλότερη όλων των σκελών θεραπείας (p & lt? 0,01 για όλες τις συγκρίσεις). (Β) Επικουρική MNP αντι-IL6 siRNA σε συνδυασμό με ηπατική θερμικής κατάλυσης μειώνεται επίσης μακρινό πολλαπλασιασμό του όγκου (Ki-67) με την εικονική επίπεδα σε σύγκριση με ηπατική θερμική εκτομή μόνο του ή σε συνδυασμό με άδειο φορέα ή MNP ομελέτα siRNA (p & lt? 0,01 για σχετικές συγκρίσεις) . (Γ) Ηπατική θερμικής εκτομής μόνο του ή με ΜΝΡ περιπλεγμένο siRNA επίπεδα IL-6 ορού σε αυξημένη 6ώρες σε σύγκριση με την διαδικασία sham (η = 3-4 ζώα /βραχίονα, ρ & lt? 0,02). Αυτό το αποτέλεσμα καταστάλθηκε με ανοσοενισχυτικό ΜΦ αντι-IL6 siRNA (ρ = 0,03 έναντι μόνο συκώτι RF). (D) Σύγκριση της επίδρασης του χρονισμού χορήγησης siRNA έδειξε ότι ανοσοενισχυτικό ΜΦ αντι-IL6 siRNA χορηγήθηκε κατά την Ημέρα 0 ως αποτέλεσμα την χαμηλότερη μετά τη θεραπεία ρυθμός αύξησης του όγκου και του τελικού σημείου διάμετρος (n = 3-4 ζώα /βραχίονα, ρ & lt? 0,05 για όλες οι συγκρίσεις). Επικουρική MNP αντι-IL6 siRNA χορηγείται 3d μετά την εκτομή μειώνεται η διάμετρος του τελικού σημείου σε σύγκριση με μόνη την ηπατική εκτομή, αλλά ήταν ακόμα σημαντικά μεγαλύτερη ότι είτε ψευδο ή συνδυασμένου ημέρα θεραπείας 0 (ρ & lt? 0,05 για όλες τις συγκρίσεις)

Η.

πολλαπλασιασμού δείκτης όγκου (Ki-67) στο μακρινό R3230 υποδόριου όγκου μετρήθηκε για όλα τα θεραπευτικά σκέλη [Σχήμα 3Β, Πίνακας 1]. Ηπατική θερμική εκτομή αυξημένη μακρινό πολλαπλασιασμό του όγκου στην 7η σε σύγκριση με τη διαδικασία της εικονικής (p = 0,001). Ανοσοενισχυτικό συνδυασμού MNP αντι-IL6 siRNA και ηπατική θερμική εκτομή μειωθεί σημαντικά μακρινό πολλαπλασιασμό του όγκου (p = 0.045 έναντι φενάκη, σ & lt? 0.001 έναντι μόνο ηπατική RFA). Θερμική εκτομή σε συνδυασμό είτε με άδειο φορέα ή MNP ομελέτα siRNA οδήγησε σε αυξημένη prolilferation μακρινό όγκου (p & lt? 0,04 σε σύγκριση με την εικονική θεραπεία). Δεν υπήρχε διαφορά μεταξύ της θεραπείας επίφαση και ΜΦ αντι-IL6 siRNA μόνος βραχίονες (p = 0.59).

Στη συνέχεια, ο ορός επίπεδα της IL-6 προσδιορίστηκαν ποσοτικά με ELISA σε 6 ώρες μετά τη θεραπεία για κάθε μία από τις έξι βραχίονες (n = 3-4 ζώα /βραχίονα) για να προσδιοριστεί η επίδραση του ανοσοενισχυτικού ΜΦ αντι-IL6 siRNA επί εκτομή επαγόμενη συστημικά επίπεδα IL-6. Αυτό το χρονικό σημείο επιλέχθηκε ως ορού επίπεδα της IL-6 κορυφώθηκε σε 6 ώρες σε αυτό το μοντέλο μετα-ηπατική RFA. Ορός IL-6 επίπεδα αυξήθηκαν μετά από θερμική ηπατική εκτομή (266 ± 9ΡΟ /ml) σε σύγκριση με σκεύασμα placebo (199 ± 18pg /ml, ρ = 0,005) [Σχ 3C]. Η προσθήκη του ΜΦ αντι-IL6 siRNA μείωσε τα επίπεδα IL6 ορού σε 6 ώρες (229 ± 16pg /ml) σε σύγκριση με RFA μόνο (ρ = 0,03) ή RFA /ΜΝΡ κωδικοποιημένο siRNA (298 ± 18pg /ml, ρ = 0,02). RFA /άδειο φορέα αύξησε επίσης τα επίπεδα της IL-6 στον ορό σε 6 ώρες παρόμοια με RFA μόνο (298 ± 18pg /ml, p = 0,57).

Τέλος, το χρονοδιάγραμμα χορήγησης siRNA συγκρίθηκε, και MNP αντι-IL6 siRNA χορηγείται αμέσως μετά ηπατική RFA (Ημέρα 0) κατέληξε σε πλήρη καταστολή της RFA επαγόμενης ανάπτυξης του όγκου σε σύγκριση με τη χορήγηση σε ένα μεταγενέστερο χρονικό σημείο (3δ) μετά ηπατική RFA (Ημέρα 0 έναντι ημέρας 3, ρ & lt? 0,02) [Εικ 3D, Πίνακας 1] . Ομοίως, για την ηπατική RFA /νανο αντι-IL6 siRNA την Ημέρα 0, η πολλαπλασιαστική δείκτης όγκου στο 7δ ήταν σημαντικά χαμηλότερα σε σύγκριση με την Ημέρα 3 διοίκηση (p = 0,001).

νανοσωματιδίων αντι-IL6 siRNA καταστέλλει την ηπατική εκτομή επαγόμενη αύξηση μακρινό όγκου μέσω της μείωσης των VEGF-μεσολάβηση αγγειογένεσης των όγκων

Periablational επίπεδα ηπατικού ιστού του VEGF αυξήθηκαν μετά από θερμική εκτομή, κορυφώθηκε σε 72 ώρες. Εδώ, τα επίπεδα VEGF ιστού στην periablational χείλος συγκρίθηκαν με χρήση ELISA σε 72 ώρες μετά τη θεραπεία για τα ακόλουθα σκέλη: ηπατική RF θερμική εκτομή και μόνο, εικονική διαδικασία, RFA /MNP αντι-IL6 siRNA (20g του siRNA, παράδοση IP), RFA /MNP ομελέτα siRNA, MNP αντι-IL6 siRNA μόνο, RFA /κενού οχήματος (n = 3-4 ζώα /βραχίονα). Ηπατική εκτομή αυξημένη periablational επίπεδα VEGF ιστού σύγκριση με την εικονική θεραπεία σε 72 ώρες (2359 ± 233pg /ml έναντι 1429 ± 83pg /ml, p = 0,002) [Σχήμα 4Α]. Επικουρική MNP αντι-IL6 siRNA μείωσε τα επίπεδα των ηπατικών VEGF μετά από θερμική εκτομή (1799 ± 71pg /ml, p = 0,02 έναντι ablation). Ηπατική εκτομή σε συνδυασμό με ανοσοενισχυτικό κωδικοποιημένα siRNA οδήγησε σε παρόμοια επίπεδα των ηπατικών VEGF σε σύγκριση με RFA μόνο (2229 ± 42pg /ml? Εναντίον RFA και μόνο: p = 0,51? Εναντίον ψευδή: p = 0,001). Δεν παρατηρήθηκε διαφορά για θερμική εκτομή σε συνδυασμό με το άδειο φορέα σε σύγκριση με άλλα σκέλη θεραπείας (1.804 ± 370pg /ml? Εναντίον RFA μόνο του: ρ = 0,09? Εναντίον ψευδή: p = 0.16). MNP αντι-IL6 siRNA μόνη είχαν υψηλότερα επίπεδα VEGF ηπατικού ιστού σε σύγκριση με την εικονική (2234 ± 195pg /ml, p = 0,002).

(Α) τα επίπεδα των ιστών του VEGF (άξονας Υ

2, σκούρο γκρι στήλες) στην periablational ιστό που περιβάλλει τη ζώνη εκτομής ποσοτικοποιήθηκαν σε 72 ώρες μετά διαφορετικές θεραπείες (μέση ± τυπική απόκλιση, η = 3-4 ζώα /βραχίονα). Ηπατική θερμικής εκτομής αυξημένα επίπεδα periablational VEGF, οι οποίες στη συνέχεια καταστέλλεται με ανοσοενισχυτικό ΜΦ αντι-IL6 siRNA (ρ & lt? 0,05 για όλες τις συγκρίσεις). (BE) Ομοίως, ηπατική θερμική εκτομή οδήγησε σε αυξημένη πυκνότητα μικροαγγειακή /αγγειογένεση (ανοσοϊστοχημεία για CD34, Α: Υ-άξονα

1, ανοιχτό γκρι στήλες) σε απομακρυσμένες υποδόριου όγκου R3230 που επίσης κατέστειλε με ανοσοενισχυτικό αντι-IL6 siRNA ( n = 6-7 ζώα /βραχίονα).

η

πυκνότητα μικροαγγειακή (χρησιμοποιώντας χρώση CD34) συγκρίθηκε στη συνέχεια σε απομακρυσμένες υποδόρια όγκους για κάθε ένα από τα έξι σκέλη θεραπείας στην 7η μετά την αγωγή [Εικόνα 4Β-4Ε , Τραπέζι 1]. Ηπατική θερμική εκτομή αυξημένη μακρινό πυκνότητα μικροαγγειακή όγκου σε 7δ σε σχέση με τη διαδικασία της εικονικής (p = 0,003). Ανοσοενισχυτικό συνδυασμού MNP αντι-IL6 siRNA και ηπατική θερμική εκτομή μειωθεί σημαντικά μακρινό πυκνότητα μικροαγγειακή όγκου (p = 0,01 έναντι μόνο ηπατική RFA). Θερμική εκτομή σε συνδυασμό είτε με άδειο φορέα ή ομελέτα siRNA ως αποτέλεσμα την αύξηση της πυκνότητας μικροαγγειακή μακρινό όγκου (p & lt? 0.003 σε σύγκριση με το σκεύασμα placebo). Δεν υπήρχε διαφορά μεταξύ της θεραπείας επίφαση και μόνος όπλα ΜΦ αντι-IL6 siRNA (p = 0.46). Τα ευρήματα αυτά υποδηλώνουν ότι η αναστολή του ηπατικού μακρινό ανάπτυξη του όγκου κατάλυσης που προκαλείται από ανοσοενισχυτικό αντι-IL6 siRNA διαμεσολαβείται από την καταστολή της κατάντη παραγωγής VEGF και μακρινό αγγειογένεση των όγκων.

νανοσωματιδίων αντι-IL6 siRNA καταστέλλει μακρινό ανάπτυξη του όγκου μετά από εκτομή RF σε μια δεύτερη θέση κύριο όργανο (φυσιολογικό νεφρό)

Για τις μελέτες ανάπτυξης του όγκου, των νεφρών RF θερμική εκτομή και μόνο, εικονική διαδικασία, RFA /MNP αντι-IL6 siRNA (20g του siRNA, παράδοση IP), και MNP αντι- IL6 siRNA μόνη συγκρίθηκαν (n = 6-7 ζώα /βραχίονα). Ομοίως, RF εκτομή του φυσιολογικού νεφρού αυξήθηκε μακρινό ανάπτυξη του όγκου R3230 σύγκριση με την εικονική θεραπεία που επίσης κατέστειλε με ανοσοενισχυτικό μίας δόσης MNP αντι-IL6 siRNA (δεδομένη την Ημέρα 0) [Σχήμα 5Α, Πίνακας 1]. Tumor πολλαπλασιαστική δείκτη και πυκνότητα μικροαγγειακή για συνδυασμό νανοσωματιδίων αντι-IL6 και εικονική όπλα ήταν ισοδύναμες μεταξύ τους και χαμηλότερο σε σύγκριση με την ομάδα που έλαβε αγωγή με RF εκτομή του φυσιολογικού νεφρού και μόνο [Εικόνα 5Β, Πίνακας 1].

(Α ) Υποδόρια R3230 όγκοι εμφυτεύονται σε Fisher 344 αρουραίους με παρόμοιους ρυθμούς ανάπτυξης τυχαιοποιήθηκαν την Ημέρα 0 σε μία από τέσσερις διαφορετικές σκελών θεραπείας (η = 6-7 ζώα /βραχίονα). Θερμική εκτομή του φυσιολογικού νεφρού μόνος είχε σαν αποτέλεσμα σημαντικά μεγαλύτερη ανάπτυξη του όγκου και η αλλαγή στη διάμετρο (5δ πριν έως 7δ μετά την επεξεργασία) σε σύγκριση με το σκεύασμα placebo ή ΜΝΡ αντι-IL6 siRNA μόνο (ρ & lt? 0,01 για όλες τις συγκρίσεις, η μέση ± τυπική απόκλιση για όλα τα δεδομένα ). MNP αντι-IL6 siRNA σε συνδυασμό με θερμική εκτομή μειωμένο ρυθμό ανάπτυξης μακρινό όγκου και διάμετρο τελικού σημείου στα αρχικά επίπεδα φενάκη.