Αφηρημένο

Ιστορικό

Στοματική ακανθοκυτταρικό καρκίνωμα (OSCC) είναι η έκτη πιο κοινή μορφή καρκίνου σε παγκόσμιο επίπεδο. Η κατανάλωση καπνού και λοίμωξη από HPV, και οι δύο είναι ο σημαντικότερος παράγοντας κινδύνου για την ανάπτυξη καρκίνου του στόματος και προκαλεί δυσλειτουργία των μιτοχονδρίων. Γενετικοί πολυμορφισμοί στο ξενοβιοτικών-ένζυμα μεταβολισμού τροποποιήσουν την επίδραση της περιβαλλοντικής έκθεσης, παίζοντας έτσι σημαντικό ρόλο στην αλληλεπιδράσεων γονιδίων-περιβάλλοντος και ως εκ τούτου συμβάλλουν στην ευαισθησία του κάθε ατόμου στον καρκίνο. Εδώ, ερευνήσαμε τη σύνδεση του καπνού -. Betel λίρες μάσημα, λοίμωξη HPV,

GSTM1-GSTT1

null γονότυπους, και τα στάδια όγκου με το μιτοχονδριακό DNA (mtDNA) μεταβολή του περιεχομένου σε ασθενείς με καρκίνο του στόματος

Μεθοδολογία /Κύρια Ευρήματα

Η μελέτη αποτελείται από 124 περιπτώσεις OSCC και 140 άτομα ελέγχου με PCR ανίχνευση βασίζεται έγινε για τον HPV υψηλού κινδύνου χρησιμοποιώντας μια συναίνεση αστάρι και multiplex PCR έγινε για τον εντοπισμό των

GSTM1 -GSTT1

πολυμορφισμό. Μια συγκριτική μέθοδος ΔΟΙ χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό της περιεκτικότητας σε mtDNA. Ο κίνδυνος OSCC αυξήθηκε με την έπαψε αριθμό mtDNA αντιγράφων (

P

τάση

= 0,003). Η συσχέτιση μεταξύ του mtDNA αντιγράψετε τον αριθμό και τον κίνδυνο OSCC ήταν εμφανής μεταξύ των καπνών – chewers quid ινδοκάρυδο και όχι τον καπνό – betel λίρες μη chewers? η αλληλεπίδραση μεταξύ του mtDNA αριθμό αντιγράφων και τον καπνό – betel λίρες ήταν σημαντική (

P

= 0.0005). Σημαντική διαφορά παρατηρήθηκε μεταξύ των

GSTM1

–

GSTT1

null γονότυπους (

P

= 0.04,

P =

0.001 αντίστοιχα) και HPV λοίμωξη (

P

& lt? 0.001) με mtDNA μεταβολή του περιεχομένου σε περιπτώσεις και τους ελέγχους. Θετική συσχέτιση βρέθηκε με μείωση στην περιεκτικότητα mtDNA με την αύξηση στάδια όγκου (

P

& lt? 0.001). Είμαστε αναφορά για πρώτη φορά τη σχέση της HPV λοίμωξης και

GSTM1-GSTT1

null γονότυπων με περιεχόμενο mtDNA σε OSCC.

Συμπέρασμα

Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι το περιεχόμενο mtDNA στον όγκο ιστούς αλλαγές με το στάδιο του όγκου και του καπνού-ινδοκάρυδο συνήθειες quid μάσημα, ενώ χαμηλά επίπεδα περιεκτικότητας σε mtDNA προτείνει επεμβατική υπηρετούν ως εκ τούτου ως βιοδείκτη στην ανίχνευση της OSCC

Παράθεση:. Mondal R, Ghosh SK, Choudhury JH, Seram Α, Sinha Κ, Hussain M, et al. (2013) Αριθμός μιτοχονδριακού DNA αντιγραφής και κίνδυνος καρκίνου του στόματος: Μια έκθεση από την βορειοανατολική Ινδία. PLoS ONE 8 (3): e57771. doi: 10.1371 /journal.pone.0057771

Επιμέλεια: Syed A. Αζίζ, Health Canada, Καναδάς

Ελήφθη: 19 Νοεμβρίου 2012? Αποδεκτές: 24 Γενάρη του 2013? Δημοσιεύθηκε: 4, Μάρτη του 2013

Copyright: © 2013 Mondal et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Υποδομών εγκαταστάσεις που παρέχονται από το Τμήμα Βιοτεχνολογίας, Govt. της Ινδίας. Καμία εξωτερική ταμείο για τη μελέτη αυτή. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

OSCC, η πιο συχνή όγκου της στοματικής κοιλότητας, [1] και η έκτη πιο κοινή μορφή καρκίνου σε παγκόσμιο επίπεδο, που αντιπροσωπεύει περίπου το 5 τοις εκατό του συνόλου των κακοήθων όγκων σε όλο τον κόσμο [2], [3]. Η στατιστική ανάλυση από τον Διεθνή Οργανισμό Ερευνών για τον Καρκίνο (IARC) έδειξε ότι το χείλος και τη στοματική κοιλότητα είναι η δέκατη πιο κοινή θέση του όγκου στο ανθρώπινο [4]. Άκαπνων προϊόντων καπνού και ινδοκάρυδο λίρες, με ή χωρίς καπνό είναι οι κύριοι παράγοντες κινδύνου για τον καρκίνο του στόματος κοιλότητα στην Ταϊβάν, την Ινδία και άλλες γειτονικές χώρες [5] – [7]. Στη Βορειοανατολική Ινδία, συχνότητα εμφάνισης στοματικών καρκίνων που σχετίζονται με τον καπνό είναι περίπου 33% [8]. Το κάπνισμα, η χρήση αλκοόλ, τα προϊόντα καπνού χωρίς καύση, και HPV (ιό των ανθρώπινων θηλωμάτων) λοιμώξεις είναι οι κύριοι παράγοντες κινδύνου για τον καρκίνο του στόματος κοιλότητα, με το κάπνισμα και το αλκοόλ έχει συνεργιστικά αποτελέσματα [9], [10].

Η ανάπτυξη της καρκινογένεσης οφείλεται σε αλληλεπίδραση με το περιβάλλον γονίδιο έχει καλά απεικονίζεται από τα ένζυμα της φάσης Ι και φάσης II που εμπλέκονται στο μεταβολισμό των καρκινογόνων ουσιών. Η φάση ένζυμα Ι είναι CYPs (κυτόχρωμα Ρ450) που ενέχονται στην ενεργοποίηση των περιβαλλοντικών προκαρκινογόνα προσθήκη ή εκθέτουν λειτουργικές ομάδες τους, ενώ φάση ένζυμο II όπως GST (S-τρανσφεράση γλουταθειόνης) εμπλέκονται σε αποτοξίνωση των ενεργοποιημένων μεταβολίτες των καρκινογόνων ουσιών [11] . Ο καπνός του τσιγάρου είναι ένα σύνθετο μείγμα των καρκινογόνων ενώσεων, και καπνού χωρίς καύση είναι πλούσια σε νιτροζαμίνες. Επιπλέον, η ταυτόχρονη χρήση των ινδοκάρυδο λίρες οδηγεί σε 50-πλάσια αύξηση της αέργου είδη οξυγόνου (ROS) [12], [13]. Μια διαρθρωτική διαγραφή σε αυτά τα γονίδια αντιπροσωπεύει μια null γονότυπο και έχει συσχετιστεί με αυξημένο κίνδυνο για καρκίνο του στόματος [14].

Μιτοχονδριακή ελαττώματα έχουν από καιρό υποψίες ότι παίζουν σημαντικό ρόλο στην ανάπτυξη και εξέλιξη του καρκίνου [ ,,,0],15], [16]. Μιτοχονδριακής αναπνευστικής δραστηριότητας συνδέεται με την παραγωγή ROS. Το μιτοχονδριακό γονιδίωμα είναι ευπαθή σε ROS και άλλα είδη γενοτοξική βλάβη λόγω έλλειψης προστατευτικού ιστονών και των δυνατοτήτων της επισκευής περιορισμένη mtDNA. Ο αριθμός αντιγράφων ανά κύτταρο mtDNA διατηρείται εντός ενός σταθερού εύρους να ανταποκριθεί στην απαίτηση ενέργειας του κυττάρου να διατηρήσει τις κανονικές φυσιολογικές λειτουργίες. Θα διαφέρει σημαντικά μεταξύ του πληθυσμού από το 1000 έως 10.000 ανά κύτταρο [17], αλλά και διαφέρει σημαντικά από τον τύπο του κυττάρου. Είναι πιθανό ότι οι μεταβολές στον αριθμό των αντιγράφων των μιτοχονδρίων αντικατοπτρίζουν τα καθαρά αποτελέσματα του γονιδίου-περιβαλλοντικών αλληλεπιδράσεων μεταξύ άγνωστος κληρονομικούς παράγοντες και τα επίπεδα του οξειδωτικού στρες (μια ανισορροπία μεταξύ της παραγωγής ROS και την αντιοξειδωτική ικανότητα), που προκαλείται από μια ποικιλία από ενδογενείς και εξωγενείς παράγοντες, όπως, οι ορμόνες, η ηλικία, διατροφικών και περιβαλλοντικών οξειδωτικών /αντιοξειδωτικών, και αντίδραση σε οξειδωτική βλάβη, τα οποία πιστεύεται ότι είναι παράγοντες κινδύνου για διάφορους τύπους της ανάπτυξης του καρκίνου [18] – [20].

περιεχόμενο του μιτοχονδριακού DNA έχει ενοχοποιηθεί ως πιθανό βιοδείκτη για διάφορους τύπους καρκίνου [21], [22]. Μειωμένη περιεκτικότητα mtDNA είχαν αναφερθεί για θυρεοειδή [21], η νεφρική [23], [24], γαστρικό [25], του μαστού [26], προηγουμένως αγωγή κεφαλής και αυχένα [27], των ωοθηκών [28] και καρκίνο του ήπατος [29 ]. Σε αντίθεση, αρκετές μελέτες έχουν αποκαλύψει μια αυξημένη περιεκτικότητα σε mtDNA σε προστάτη [30], ακατέργαστα κεφάλι και το λαιμό [31], του ενδομητρίου [32], του πνεύμονα [33], του παχέος εντέρου [34], [35] και τον καρκίνο του παγκρέατος [36].

Ο σκοπός της παρούσας μελέτης ήταν να διερευνηθεί η συσχέτιση του καπνού – betel λίρες μάσημα, λοίμωξη HPV,

GSTM1-GSTT1

null γονότυπους, με περιεχόμενο mtDNA. Αξιολογήσαμε επίσης το περιεχόμενο mtDNA στον όγκο και συσχετίζεται με τα στάδια του όγκου. OSCC είναι μια πολυπαραγοντική και δυναμική εκδήλωση στην οποία πολλές αλλαγές συμβάλλουν στην ανάπτυξη της ασθένειας. Ως εκ τούτου, ο κίνδυνος του καπνού – betel λίρες μάσημα,

GSTM1-GSTT1

null γονότυπους, HPV λοίμωξη και το περιεχόμενο του mtDNA σχετίζονται με OSCC μελετήθηκε η οποία μπορεί να χρησιμεύσει ως μια πιθανή μοριακού βιοδείκτη για την έγκαιρη διάγνωση του καρκίνου του στόματος, είναι η συχνότερος καρκίνος της βορειοανατολικής περιοχής της Ινδίας.

Υλικά και Μέθοδοι

Θέματα και Δείγμα Συλλογή

εκατόν είκοσι μετα-επεξεργασία του ιστού του όγκου τέσσερις OSCC ασθενούς /FFPE /προφορική μπατονέτα και 140 μη-OSCC (χωρίς καρκίνο, έχουν τη συνήθεια του μασήματος καπνού betelquid και επίσης δεν υπάρχει οικογενειακό ιστορικό καρκίνου) ηλικίας και έλεγχοι των φύλων συμφωνημένα μπατονέτα από την εσωτερική κοιλότητα, συλλέχθηκαν κατά τη διάρκεια Ιούλιος 2010-Αύγουστος 2012 από τα νοσοκομεία, καθώς και από το σπίτι με έγγραφη συγκατάθεση και έχει εγκριθεί από IRB. Η διαθεσιμότητα και μόνο στο νοσοκομείο αυτών των ελέγχων ήταν αδύνατη, καθώς οι περισσότεροι από τους ασθενείς που έρχονται με τους συγγενείς τους, δεν ταιριάζει στα κριτήρια εκχωρηθεί για να είναι μάρτυρες στην παρούσα μελέτη. Δεδομένα σχετικά με την ηλικία, το φύλο, το επάγγελμα και τη φύση της κατανάλωσης καπνού betel λίρες συνήθεια (κάπνισμα ή χωρίς καύση) και την κατανάλωση αλκοόλ από άτομα OSCC είχε αντληθεί από τα αρχεία του νοσοκομείου και σε προσωπικές συνεντεύξεις. λήφθηκαν όλες οι δυνατές προφυλάξεις για την αποφυγή διασταυρούμενης μόλυνσης, ενώ τη συλλογή καθώς και η επεξεργασία των δειγμάτων

Ηθική δήλωση

Η παρούσα μελέτη εγκρίθηκε [No:.. IRB /CCHRC /01 /2010] με την Institutional Review Board (IRB), Cachar Αντικαρκινικό Νοσοκομείο και Κέντρο Ερευνών (CCHRC) (https://cacharcancerhospital.org), Μεχερπούρ, Assam, Ινδία.

Απομόνωση DNA

DNA απομονώθηκε από προεπιλεγμένες περιοχές του ιστού του όγκου, σταθεροποιημένα με φορμαλίνη ενσωματωμένα σε παραφίνη ιστού (FFPE) και από του στόματος μάκτρο. Οι ιστοί υποβλήθηκαν σε πέψη σε TES (50 mM Tris-HCl ρΗ 7,4, 25 mM EDTA, 150 mM NaCl) ρυθμιστικό διάλυμα και επωάστηκαν για μία νύχτα στους 55 ° C τα προϊόντα πέψης ιστού. Το DNA απομονώθηκε στη συνέχεια με την μέθοδο φαινόλης /χλωροφορμίου /ισοαμυλικής αλκοόλης που ακολουθείται από καταβύθιση με αιθανόλη και επαναιωρήθηκε σε ΤΕ (10 mM Tris-HCl ρΗ 8.0, 1 mM EDTA) ρυθμιστικό διάλυμα και αποθηκεύεται στους -20 ° C [37]. Bioline Απομονώστε Genomic DNA MINIKIT (Bioline, UK) χρησιμοποιήθηκε για την απομόνωση του γονιδιακού DNA από ιστούς FFPE ακολουθώντας τις οδηγίες του κατασκευαστή.

Multiplex PCR για

GSTM1

και

GSTT1

Ανάλυση για

GSTM1

–

GSTT1

πολυμορφισμό του γονιδίου χρησιμοποιώντας το

CYP1A1

γονίδιο ως εσωτερικός έλεγχος έγινε με multiplex PCR. Η προς τα εμπρός (F) και αντίστροφη (R) εκκινητές που χρησιμοποιήθηκαν για την ενίσχυση

GSTT1

ήταν F5′-TTCCTTACTGGTCCTCACATTCTC-3 ‘και R 5′-TCACGGGATCATGGCCAGCA-3’,

GSTM1

ήταν F5 » -GAACTCCCTGAAAAGCTAAAGC-3 ‘και R5′-GTTGGGCTCAAATATACGGTGG-3’,

CYP1A1

ήταν F5′- ACTGCCACTTCAGCTGTCT και R5′-GCTGCATTTGGAAGTGCTC αντίστοιχα [38], [39]. Το πρόγραμμα PCR που χρησιμοποιήθηκε για την ενίσχυση ήταν: αρχικό στάδιο μετουσίωσης στους 94 ° C για 2 λεπτά? 30 κύκλους μετουσίωσης στους 94 ° C για 30s? ανόπτηση στους 59 ° C για 45s και επιμήκυνση στους 72 ° C για 90s. Το ενισχυμένο προϊόν παρατηρήθηκε στο 1.5% πηκτή αγαρόζης.

HPV Ανίχνευση και γονοτυπικός

ενίσχυση PCR για την ανίχνευση HPV διεξήχθησαν με συναίνεση εκκινητές ΟΡ5 + /GP6 + ακολουθείται από ανίχνευση του υποτύπου του HPV 16 και 18 [40], [41]. Το μίγμα της αντίδρασης χωρίς εκμαγείο DNA χρησιμοποιήθηκε ως αρνητικός έλεγχος και ότι με γνωστά εκμαγείο DNA χρησιμοποιήθηκε ως θετικός έλεγχος που απέδωσε προϊόντα PCR του αναμενόμενα αποτελέσματα. PCR ενίσχυση διεξήχθη με σαράντα κύκλους. Τα προϊόντα της PCR αναλύθηκαν με ηλεκτροφόρηση σε πήκτωμα αγαρόζης 2%. Ένας δείκτης μοριακού βάρους των 50 bp επίσης τρέχουν ταυτόχρονα να προσδιορίσει το μοριακό μέγεθος των προϊόντων PCR.

Ποσοτική Real Time PCR

Οι StepOne ™ Real-Time PCR System (Applied Biosystems) ήταν χρησιμοποιείται για την εκτέλεση ενίσχυσης PCR για mtDNA D-loop (C-οδού) περιοχή.

GAPDH

χρησιμοποιήθηκε ως «γονίδιο καθαριότητας» για την εξομάλυνση όλων των κύκλο κατωφλίου (Ct) τιμές. Η προς τα εμπρός (F) και αντίστροφη (R) εκκινητές που χρησιμοποιήθηκαν για ενίσχυση της περιοχής C-οδού ήταν «CAGGGTCATAAAGCCTAAATAG 3 ‘F5 και R5’GAGGTAAGCTACATAAACTGTG3» (109 bp) και GAPDH ήταν F5’GAAATCCCATCACCATCTTCC 3’ και R5 ‘GAGCCCCAGCCTTCTCCATG 3’ (125 bp), αντιστοίχως. Για κάθε αντίδραση 10 μΙ, 1 μΙ αγνώστου DNA ενισχύθηκε περιείχε 0,5 μΙ εκάστου εκκινητή (20 pmol /μl), 5 μΙ 2Χ SYBR Green βασικού μείγματος (Applied Biosystems), και 3 μλ νερό χωρίς νουκλεάση. Η πραγματικού χρόνου PCR συνθήκες αποτελείτο από αρχική μετουσίωση και την ενεργοποίηση της πολυμεράσης Taq στους 95 ° C για 10 λεπτά ακολουθούμενη από 40 κύκλους των 95 ° C για 45 δευτερόλεπτα, 54 ° C για 45 δευτερόλεπτα, και 72 ° C για 1 λεπτό και ακολουθούμενη από μια ανάλυση καμπύλης τήξης. Κάθε μέτρηση επαναλήφθηκε εις τριπλούν και τον έλεγχο μη-πρότυπο περιλήφθηκε σε κάθε πείραμα.

Για τον προσδιορισμό των ποσοτήτων του mtDNA και nDNA υπάρχουν στα δείγματα, ο αριθμός μέσος όρος του κύκλου ορίου (Ct) αξίες της nDNA και mtDNA ελήφθησαν από κάθε περίπτωση. Το επίπεδο του μιτοχονδριακού DNA υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας το δέλτα Ct (ΔΟΙ) του μέσου όρου της Ct του mtDNA και nDNA (ΔΟΙ = CtmtDNA-CtnDNA) στο ίδιο καλά ως εκθέτης 2 (2

-ΔCt).

Στατιστική Ανάλυση

διάμεσες και οι συχνότητες των επιλεγμένων χαρακτηριστικών συγκρίθηκαν μεταξύ περιπτώσεων και των ελέγχων με τη χρήση του Mann-Whitney U για τις συνεχείς και την Pearson chi-square για όλες τις άλλες κατηγορικές μεταβλητές. αριθμός αντιγράφων του μιτοχονδριακού DNA κατηγοριοποιήθηκε σε τεταρτημόρια με βάση την κατανομή μεταξύ των ελέγχων. αναλογίες πιθανοτήτων (OR) και 95% διαστήματα εμπιστοσύνης (ΠΙ) εκτιμήθηκαν με τη χρήση λογιστικών μοντέλων παλινδρόμησης. Μια δοκιμή για τάση υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας τον αριθμό αντιγράφων του mtDNA ως συνεχή μεταβλητή. Μη-παραμετρική δοκιμασία Mann-Whitney χρησιμοποιήθηκε για να ελέγξετε αν mtDNA αλλοίωση του περιεχομένου σε όγκο είναι διαφορετική σε περιπτώσεις OSCC και τους ελέγχους, με ή χωρίς λοίμωξη από HPV,

GSTT1

και

GSTM1

null γονότυπους.

P

-τιμές λιγότερο από 0.05 θεωρούνται στατιστικά σημαντικές.

Αποτελέσματα

Τα χαρακτηριστικά των υποκειμένων OSCC και τους ελέγχους, όπως περιγράφεται στον Πίνακα 1. Δεν υπήρχαν στατιστικά σημαντικές διαφορές μεταξύ των περιπτώσεων και ελέγχει θέματα όσον αφορά την ηλικία (

P

= 0,82), το φύλο (

P

= 0.2), την πρόσληψη του τρέχοντος φρούτων (

P =

0,94) , παστά ψάρια ξηρά (

P

= 0,77) και τα ψάρια που έχουν υποστεί ζύμωση (

P

= 0,84). Ωστόσο, σημαντικές διαφορές παρατηρήθηκαν σε ημερήσια πρόσληψη καπνού betel λίρες (

P

= 0,01) και λαχανικών (

P

= 0.04). Εξετάστηκαν Οι επιμέρους παράγοντες κινδύνου που σχετίζονται με τον καρκίνο του στόματος. Η αύξηση του κινδύνου για OSCC είναι 2.2- φορές (95% CI, 1,31 – 3,68?

P

= 0,002) μεταξύ των chewers λίρες καπνού ινδοκάρυδο η οποία είναι ένας από τους σημαντικότερους παράγοντες που συμβάλλουν για τον καρκίνο του στόματος και στη Βορειοανατολική Ινδία μάσημα καπνού είναι μία από τις συνήθεις πρακτικές. PCR του ογκογόνου γονιδιώματος HPV πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας εκκινητές συναινέσεως παρατηρήθηκε GP5 + /GP6 + και 450 bp ζώνη (Σχήμα 1Α). Η ανίχνευση των κοινών HPV κινδύνου στο άτομο παρατηρήθηκε να είναι υψηλότερη (Σχήμα 1Β) και ευρέθη 43,54% (54) σε περιπτώσεις και 17,14% (24) σε ελέγχους (Πίνακας 2). Κατά τον προσδιορισμό του γονότυπου HPV θετικά δείγματα βρέθηκαν να είναι υψηλού κινδύνου υπότυπο HPV18. Η μόλυνση με HPV έχει ενοχοποιηθεί ως ένας από τους πιθανούς αιτιολογικούς παράγοντες για OSCC και στην παρούσα μελέτη, ο κίνδυνος OSCC αυξήθηκε 3,72 -folds (95% CI, 2,11 – 6,56?

P

& lt? 0,0001) λόγω σε μόλυνση HPV.

(Α) Αντιπροσωπευτική πηκτή αγαρόζης βάφτηκαν με βρωμιούχο αιθίδιο για τον προσδιορισμό του μεγέθους θραύσμα (κατά αναμενόμενο μέγεθος του ~ 450 ζεύγη βάσεων) και αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης απόδοση (PCR) για ανθρωπίνων θηλωμάτων κοινών κινδύνου (HPV ) γονιδιώματος από τους ελέγχους και τους ασθενείς με καρκίνο του στόματος. (Β) ιστόγραμμα που δείχνει την υψηλή συχνότητα εμφάνισης του HPV σε ασθενείς OSCC από τους ελέγχους με βάση την ανίχνευση PCR του γονιδιωματικού DNA που απομονώθηκε από το στόμα μάκτρο και τους ιστούς. (Γ) μοτίβα Multiplex PCR για

GSTM1

,

GSTT1

, και

CYP1A

γονίδια διαχωρίζονται με ηλεκτροφόρηση γέλης αγαρόζης, που αντιστοιχούν με τους μάρτυρες (διαδρομή 1-10) και τον καρκίνο του στόματος ασθενείς (λωρίδες 11-20). Η

CYP1A1

γονίδιο χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικός θετικός μάρτυρας. Lanes 1,4,5,7,10,11,12,13,15,11 και 18 αντιπροσωπεύει την παρουσία και των δύο

GSTM1

και

GSTT1

γονίδια, και η λωρίδα 2, 6 και 14 αντιπροσωπεύει null γονότυπους τόσο για

GSTM1

και

GSTT1

γονίδια. Οι διαδρομές 3 και 20 αντιπροσωπεύουν την παρουσία του

GSTM1

γονιδίων και μηδενική γονότυπους για το

GSTT1

γονίδιο. Λωρίδες 4, 58, 16 και 19 αντιπροσωπεύουν τα άγρια ​​παρουσία του

GSTT1

γονιδίων και μηδενική γονότυπους για το

GSTM1

γονίδιο. (Δ) Μπαρ γράφημα που δείχνει την κατανομή των

GSTM1

και

GSTT1

null γονοτύπων μεταξύ των ασθενών OSCC και τους ελέγχους με βάση την πολλαπλή PCR ανίχνευση του γονιδιακού DNA που απομονώθηκε από το στόμα μπατονέτα και τους ιστούς.

η

Multiplex PCR διεξήχθη ανάμεσα σε όλες τις περιπτώσεις και τη μηδενική γονότυπο του

GSTT1

ή

GSTM1

ή και τα δύο εντοπίστηκε από την απουσία της μπάντας, όταν παρατηρήθηκαν σε πηκτή αγαρόζης 1.5% (Σχήμα 1 C). Παρατηρήσαμε

GSTM1

null γονότυπου στο 47.58% (59) περιπτώσεις και 26,42% (37) έλεγχοι,

GSTT1

null γονότυπου στο 41.12% (51) περιπτώσεις και 22,85% (32) έλεγχοι, τόσο

GSTT1

και

GSTM1

null γονότυπων ήταν 28,22% (35) περιπτώσεις και 5% (7) ελέγχει αντίστοιχα (Σχήμα 1D). Η

GSTM1

null γονότυπο έχουν αυξηθεί τον καρκίνο του στόματος κίνδυνο από 2,52 φορές σε (95% CI, 1,50 – 4,22?

P

= 0,0003) ως μηδενική γονότυποι αυτής της κατηγορίας γονιδίων έχουν συνδεθεί με τον αριθμό των καρκίνων, πιθανόν να οφείλεται σε αυξημένη ευαισθησία στις περιβαλλοντικές τοξίνες και τις καρκινογόνες ουσίες, ενώ η ένωση κίνδυνο

GSTT1

null γονότυπο με OSCC βρέθηκε να είναι στατιστικά σημαντική (OR, 2,35? 95% CI, 1,38 – 4,01?

P

= 0,001) (Πίνακας 2). Περαιτέρω ο κίνδυνος αυξάνεται κατά 7,7 φορές για OSCC τόσο με

GSTM1-GSTT1

null γονότυπους (95% CI, 3,17 έως 18,67?

P

& lt? 0.0001).

Χρησιμοποιώντας ποσοτικές τεχνικές PCR, προσδιορίσαμε την σχετική περιεκτικότητα του mtDNA σε σχέση με το

GAPDH

γονιδίου σε 124 ασθενείς με OSCC διαφορετικό στάδιο του όγκου και των κανονικών κυττάρων του στοματικού βλεννογόνου σε 140 άτομα χωρίς νόσο (Εικόνα 2Α). Συνολικά, η σχετική μέση του περιεχομένου mtDNA είναι σημαντικά χαμηλότερο σε περιπτώσεις (0,22 σχετική αντίγραφα) σε σχέση με τους μάρτυρες (0,89 σχετική αντίγραφα) (

P

& lt? 0.009). Η κατανομή των mtDNA περιεχομένου σε περιπτώσεις και τους ελέγχους δείχθηκε στο Σχήμα 2Β. περιπτώσεις OSCC στο χαμηλότερο τεταρτημόριο του αριθμού αντιγράφων mtDNA παρουσίασαν σημαντικά αυξημένο κίνδυνο 2,92 φορές για καρκίνο του στόματος (95% CI, 1,32 έως 6,43) σε σύγκριση με εκείνους που στο υψηλότερο τεταρτημόριο (Πίνακας 3). Παρατηρήσαμε ότι ο κίνδυνος της OSCC αυξήθηκε με την έπαψε αριθμό αντιγράφων mtDNA (

P

τάση

= 0,003).

(Α) Ποσοτική PCR της περιοχής D-loop και

GAPDH

γονίδιο (καμπύλη). περιοχή D-loop και

GAPDH

είναι πανταχού παρόντα γονίδια βρίσκονται στα μιτοχονδριακών και πυρηνικών γονιδιώματα, αντίστοιχα. Χρησιμοποιώντας ποσοτική PCR σε δείγματα από τον ασθενή και τον έλεγχο, η σχετική μιτοχονδριακό περιεχόμενο υπολογίστηκε. (Β) Κατανομή των mtDNA αριθμού αντιγράφων σε OSCC και τους ελέγχους. (C) μιτοχονδριακού περιεχόμενο μειώνεται με την αύξηση του όγκου στάδιο: τα διάφορα στάδια των δειγμάτων OSCC από το στάδιο 0 έως το στάδιο IVB σε σχέση με το log 2 RQ (log φορές μεταβολής)

Η

Συλλόγου. μεταξύ αντιγράψετε mtDNA αριθμό και τον κίνδυνο OSCC ήταν εμφανής μεταξύ των καπνών – ινδοκάρυδο chewers λίρες αντί καπνού – betel λίρες μη chewers (Πίνακας 4)? η αλληλεπίδραση μεταξύ του mtDNA αριθμό αντιγράφων και τον καπνό – betel λίρες ήταν σημαντική (

P

= 0.0005). Παρόμοια αποτελέσματα παρατηρήθηκαν όταν οι υποθέσεις και οι έλεγχοι είχαν ταξινομηθεί ως tobacco- chewers betel λίρες και μη chewers βασίζεται σε χαμηλή (≤1) και υψηλή (& gt? 1) αριθμός αντιγράφων mtDNA, ο καπνός-ινδοκάρυδο quid chewers με τις χαμηλές mtDNA αριθμού αντιγράφων έχουν 3,54 φορές αυξημένο κίνδυνο OSCC (95% CI, 1,59 έως 7,87). Επιπλέον, μια σημαντική διαφορά βρέθηκε με το περιεχόμενο του mtDNA σε περιπτώσεις και τους ελέγχους, με ή χωρίς λοίμωξη HPV (

P

& lt? 0.001). Ομοίως, βρήκαμε μια σημαντική διαφορά μεταξύ του

GSTM1

και

GSTT1

null γονότυπων με περιεχόμενο mtDNA σε περιπτώσεις και τους ελέγχους (

P

= 0,04 και

P =

0.001 αντίστοιχα)

Η

Τα περιεχόμενα mtDNA σε ιστούς όγκων ήταν σημαντικά υψηλότερη σε στάδιο 0 και 1 όγκους σε σχέση με το στάδιο IV όγκους,

P & lt?.

0.001. Από 124 περιπτώσεις 18,5% (23) ήταν Ι, 27,4% (34) στάδιο III, 29% (36) ήταν σταδίου IV αντίστοιχα στάδιο 0, 25% (31) των όγκων ήταν σταδίου. Δεν υπήρχαν διαθέσιμα στο στάδιο του όγκου ΙΙ δείγματα. Το περιεχόμενο mtDNA σχετίζεται με το στάδιο του όγκου, όπου παρατηρείται ότι το περιεχόμενο του mtDNA μειώνεται με την αύξηση της το στάδιο του όγκου (

P

& lt? 0.001). (Σχήμα 2C)

Συζήτηση

Η συνήθεια του μασήματος καπνού και betelquid είναι ένα ενδημικό συνήθεια σε όλη την ινδική υποήπειρο. Το quid ινδοκάρυδο συνήθως αναφέρεται ως «Paan» στις χώρες της Νότιας Ασίας. Τα κύρια συστατικά ενός quid ινδοκάρυδο είναι Piper betel φύλλα και το παξιμάδι του arec (ο σπόρος του φυτού κατεχού Areca). Είναι κατασκευασμένο με τύλιγμα ψιλοκομμένο καρύδι του arec σε ένα φύλλο betel Piper, και κάποια άσβεστος (υδροξείδιο του ασβεστίου) και φύλλα καπνού ή zarda (αρωματισμένα καπνός) μπορούν να συμπεριληφθούν για να βελτιωθεί η γεύση? Οι συνδυασμοί των συστατικών μεταβάλλεται ανάλογα με τις ατομικές προτιμήσεις. Η κατανάλωση καπνού από το κάπνισμα ή το μάσημα πιστεύεται ότι είναι ο κύριος αιτιολογικός παράγοντες κινδύνου για την ανάπτυξη καρκίνου του στόματος που προκαλείται από ερεθισμό από την άμεση επαφή με τους βλεννογόνους του στόματος.

Τα αυξημένα αριθμός των περιπτώσεων OSCC σχετίζονται με το κάπνισμα είναι μια σημαντική ανησυχία βορειοανατολικά περιοχή της Ινδίας. Όλες οι μορφές του καπνού παράγει ελεύθερες ρίζες που καταστρέφουν τα αντιοξειδωτικά και να προκαλέσει οξειδωτική βλάβη στο DNA, τις πρωτεΐνες και τα λιπίδια [42], [43]. Αντιοξειδωτικές πλούσια τρόφιμα όπως τα πράσινα φυλλώδη λαχανικά και φρούτα που μπορεί να βοηθήσει στη μείωση του οξειδωτικού στρες που προκαλείται από τον καπνό [44], [45] είναι συνήθως απουσιάζουν από τη διατροφή [46], [47], οι λόγοι μπορεί να είναι η κακή κοινωνικοοικονομική -Οικονομική κατάσταση και επίσης συνήθης πρακτική των προφορικών κατανάλωσης.

στην παρούσα μελέτη, εξετάσαμε τη λοίμωξη HPV υψηλού κινδύνου, μια γνωστή ανεξάρτητη αιτιολογικός παράγοντας για τον καρκίνο του στόματος σε ασθενείς OSCC και μια σημαντική διαφορά με το περιεχόμενο του mtDNA σε περιπτώσεις και τους ελέγχους με ή χωρίς λοίμωξη HPV (

P

& lt? 0.001) λαμβάνεται. Ωστόσο, δεν υπάρχουν αναφορές της σύνδεσης της HPV λοίμωξης με τον αριθμό αντιγράφων mtDNA υπάρχουν, αν και ο συσχετισμός της HPV λοίμωξης με μιτοχονδριακή μετάλλαξη αναφέρθηκε σε μια μελέτη του καρκίνου του τραχήλου [48]. Bak πρωτεΐνη είναι προ-αποπτωτικά μέλη που εντοπίζεται στα μιτοχόνδρια, και λειτουργίες για να επάγει απόπτωση. Η εξάλειψη του Bak πρωτεΐνης με HPV

Ε6

προάγει την επιβίωση των κυττάρων που έχουν μολυνθεί από HPV, καθυστερώντας την απόπτωση διευκολύνοντας έτσι την ανάπτυξη του όγκου με αντίστοιχη μεταβολή στο περιεχόμενο mtDNA, για τις οποίες ο ακριβής μηχανισμός δεν έχει ακόμη αποκαλυφθεί. Είμαστε αναφορά για πρώτη φορά τη σχέση της HPV λοίμωξης με mtDNA παραλλαγή περιεχόμενο.

Μια σημαντική διαφορά μεταξύ του

GSTT1

και

GSTM1

null γονότυπων με περιεχόμενο mtDNA στις περιπτώσεις και ελέγχους (

P

= 0,04 και

P =

0,001) παρατηρήθηκε. Η παρουσία και των δύο

GSTM1

και

GSTT1

είναι απαραίτητα για την αποτοξίνωση των καρκινογόνων ένωσης. Ο πιο σημαντικός παράγοντας κινδύνου για καρκίνο του στόματος είναι το κάπνισμα, το μάσημα του καπνού και ινδοκάρυδο λίρες. Η ταυτόχρονη χρήση του betel λίρες οδηγεί σε μια 50-πλάσια αύξηση της αντιδραστικά είδη οξυγόνου που παράγονται [12]. Το αυξημένο παράγοντα κινδύνου null

GSTs

με τη συσσώρευση του mtDNA μεταλλάξεις ενζύμου και επειδή ενδεχομένως να παίζει μέσα στη μιτοχονδριακή μήτρα ως παράγοντας προστασίας του mtDNA σχετικά με τις ζημίες που προκαλούνται από αντιδραστικά είδη οξυγόνου που με τη σειρά τους επηρεάζουν το περιεχόμενο του mtDNA και μπορεί να οδηγήσει σε αιτιώδη συνάφεια του OSCC καθώς [39]. Οι ενώσεις της GST null γονότυπους και το περιεχόμενο του mtDNA δεν έχει ακόμα αναφερθεί.

Τα χαμηλά επίπεδα του mtDNA αριθμού αντιγράφων σε tobacco- chewers betel λίρες που βρέθηκαν στη μελέτη μας συνδέονται με υψηλό κίνδυνο OSCC λόγω απελευθέρωση σημαντικών ποσοτήτων των ROS. [49], η οποία με τη σειρά τους αυξάνουν μετάλλαξη mtDNA στην ανθρώπινη στοματική ιστούς. Η συσσώρευση των διαγραφών του mtDNA και μετέπειτα κυτταροπλασματική διαχωρισμός αυτών των μεταλλάξεων κατά τη διάρκεια της κυτταρικής διαίρεσης μπορεί να συμβάλλουν σημαντικά στην πρώιμη φάση της OSCC [50], [51]. Η μείωση στο mtDNA μπορεί να είναι αποτέλεσμα της καταστολής του μιτοχονδριακού βιογένεσης. Ο αριθμός αντιγράφων mtDNA σε καρκίνου εξαρτάται πιθανώς από διάφορους παράγοντες, συμπεριλαμβανομένης της θέσης της μετάλλαξης στο μιτοχονδριακό γονιδίωμα, όπως καταδεικνύεται στην περιοχή D-βρόχου, ένα εξαιρετικά ευπαθή περιοχή για την οξειδωτική βλάβη σε σύγκριση με τις άλλες περιοχές του mtDNA [52]. Τα ευρήματα της παρούσας μελέτης και να αποδείξει τον κίνδυνο OSCC και τον αριθμό αντιγράφων mtDNA σε καπνό betel λίρες chewers σε αυτή την περιοχή. Δεν αξιολογεί τα δείγματα καρκινικού ιστού για τον προσδιορισμό του mtDNA πριν από τη θεραπεία λόγω μη διαθεσιμότητας του από την biorepositary. Έτσι, δεν θα μπορούσαμε να καθορίσει τις αλλαγές mtDNA πριν από τη χημειοθεραπεία. Αυτό μπορεί να είναι ένας περιορισμός σε αυτό το είδος της μελέτης, αν και θα μας προσφέρει πρόσθετες πληροφορίες.

Η αντίστροφη συσχέτιση του περιεχομένου mtDNA σχετίζεται με ιστοπαθολογικές το στάδιο του όγκου και παρατηρείται στη μελέτη μας υποστηρίχθηκαν από παρόμοια εύρημα σε μετα-θεραπεία σιελογόνων πλύσεις στο κεφάλι και το λαιμό καρκίνωμα από πλακώδες επιθήλιο [27]. Ωστόσο, μείωση του mtDNA αριθμού αντιγράφων σε ιστούς όγκων έχουν αναφερθεί σε μία ποικιλία ανθρώπινων καρκίνων, συμπεριλαμβανομένων HCC [53], [54], του μαστού [55], [56], γαστρικό [57], οστεοσάρκωμα [58] και άλλες καρκίνους [59], [60]. Ο υποκείμενος μηχανισμός πίσω από το χαμηλό επίπεδο του περιεχομένου mtDNA με αυξημένη μέγεθος του όγκου δεν είναι σαφής. Επιπλέον, αναφέρθηκε ότι μειώθηκε περιεχόμενο mtDNA μπορεί να οδηγήσει σε μειωμένη ικανότητα οξειδωτικής φωσφορυλίωσης που με τη σειρά μπορεί να ευνοήσει την ταχύτερη ανάπτυξη ή αυξημένη διεισδυτικότητα [61]. Σε γενικές γραμμές, μειωμένη μιτοχονδριακή δραστηριότητα φαίνεται να είναι μια προσαρμογή στο περιβάλλον υποξίας των συμπαγών όγκων κατά τη διάρκεια της ανάπτυξής τους από το χαμηλό οξυγόνο ξεκινά χαμηλότερο οξειδωτικό στρες κάτω από συνθήκες υποξίας και υποξίας επαγώγιμου παράγοντα (HIF) αναστέλλει μιτοχονδριακή βιογένεση [62] ή διαταράσσει μιτοχόνδρια από mitophagy [63 ] .Όταν όγκων αυξάνεται σε μέγεθος, τα κύτταρα γίνονται πιο υποξικά, μιτοχονδριακή βιογένεση μειώνεται [63]. Εναλλακτικά, η μείωση του mtDNA μετά την αγωγή μπορεί να αντικατοπτρίζει ένα αποτέλεσμα της ακτινοβολίας που επηρεάζει το περιεχόμενο mtDNA ή μιτοχονδριακή αριθμός σε κύτταρα, τα οποία μπορεί να είναι υπεύθυνη για τη μείωση της mtDNA.

Το βάρος της στοματικής ασθένειες όπως ο καρκίνος του στόματος, της περιοδοντικής νόσου, και απώλεια των δοντιών μπορεί να μειωθεί με την αντιμετώπιση των κοινών παραγόντων κινδύνου, οι οποίες περιλαμβάνουν την αποφυγή του καπνίσματος και της κατανάλωσης των προϊόντων που σχετίζονται με τον καπνό, αλλά και την πρόσληψη του αλκοόλ. Επιπλέον, εξάσκηση καλή στοματική υγιεινή, όπως σωστή βούρτσα και δόντια καθημερινά μαζί με τον τακτικό καθαρισμό και την εξέταση από τον οδοντίατρο μπορεί να μειώσει τον κίνδυνο των νόσων του στόματος. Η πρόσληψη φρούτων και λαχανικών μπορεί να προστατεύσει από τον καρκίνο του στόματος, καθώς είναι πλούσια σε αντιοξειδωτικά. Ο HPV είναι ένας από τους παράγοντες κινδύνου για τον καρκίνο του στόματος και του πιο αξιόπιστος τρόπος για την πρόληψη της μόλυνσης είτε με υψηλού κινδύνου ή HPV χαμηλού κινδύνου είναι η αποφυγή κάθε δέρμα με δέρμα του στόματος, του πρωκτού ή των γεννητικών οργάνων επαφή με ένα άλλο άτομο. Εκείνοι που είναι σεξουαλικά ενεργοί, μακροπρόθεσμα, μακροπρόθεσμα, αμοιβαία μονογαμική σχέση με ένα μη μολυσμένο εταίρος είναι η στρατηγική πιθανότατα την πρόληψη της λοίμωξης από HPV.

Συμπέρασμα

Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι η περιεκτικότητα σε mtDNA σε όγκο ιστούς αλλαγές με το στάδιο του όγκου και του καπνού-ινδοκάρυδο συνήθειες λίρες μάσημα. Σημαντική απόκλιση από το μέσο εύρος συνδέεται με κακή επιβίωση. Τα υψηλά επίπεδα της περιεκτικότητας μιτοχονδριακού DNA μπορεί να υποδεικνύει ότι οι όγκοι μπορούν να υποστούν ταχεία ανάπτυξη του όγκου, ενώ τα χαμηλά επίπεδα της περιεκτικότητας μιτοχονδριακού DNA δείχνουν επεμβατική έτσι χρησιμεύει ως βιοδείκτη στην ανίχνευση της OSCC.

Ευχαριστίες

ταπεινή αναγνώριση μας πηγαίνει στο το Τμήμα Βιοτεχνολογίας (DBT), Govt. της Ινδίας για την παροχή υπο-διαρθρωτικές εγκαταστάσεις (BT /MED /NE-SFC /2009) για τη διεξαγωγή έρευνας για τον Καρκίνο. ειλικρινείς ευχαριστίες μας πηγαίνει στο Cachar Αντικαρκινικό Νοσοκομείο και Κέντρο Ερευνών biorepository, Ασσάμ? Agartalata κυβέρνηση Medical College, Tripura και Naga Νοσοκομείο Kohima, Νάγκαλαντ, Silchar Medical College και το νοσοκομείο, Assam για τη συλλογή των δειγμάτων.