Αφηρημένο

Ιστορικό

Methylated DNA σε υγρά μπορεί να είναι ένας κατάλληλος βιολογικός δείκτης για ασθενείς με καρκίνο.

XAF1

έχει δειχθεί ότι είναι συχνά ρυθμίζεται προς τα κάτω σε ανθρώπινο γαστρικό καρκίνο (GC). Εδώ, ερευνήσαμε εάν

XAF1

μεθυλίωσης στο GC θα μπορούσε να είναι ένα χρήσιμο βιοδείκτη.

Μέθοδοι

Σε πραγματικό χρόνο RT-PCR χρησιμοποιήθηκε για την ανίχνευση

XAF1

mRNA έκφραση? ανοσοϊστοχημεία και στύπωμα western χρησιμοποιήθηκαν για να εξεταστεί η έκφραση πρωτεΐνης XAF1 σε ιστούς GC (n = 202) και τα αντίστοιχα παρα-καρκινικούς ιστολογική φυσιολογικούς ιστούς τους (PCHNTs). Σε πραγματικό χρόνο μεθυλίωσης συγκεκριμένων-PCR χρησιμοποιήθηκε για να διερευνήσει

XAF1

μεθυλίωση προαγωγού στο ίδιο πάνελ των ιστών GC, PCHNTs τους και οι οροί.

Αποτελέσματα

Εμείς επιβεβαίωσε συχνές

XAF1

ρύθμιση προς τα κάτω και στις δύο mRNA και τα επίπεδα πρωτεΐνης σε ιστούς GC συγκριτικά με φυσιολογικούς ελέγχους και PCHNTs.

XAF1

υπερμεθυλίωση αποδείχθηκε στο 83,2% (168/202) των ιστών GC και 27,2% (55/202) των PCHNTs, ενώ δεν μεθυλίωση ανιχνεύθηκε στα 88 φυσιολογικούς μάρτυρες. Το επίπεδο της μεθυλίωσης στους ιστούς GC ήταν σημαντικά υψηλότερη από ότι σε PCHNTs (

p & lt?

0.05). Η υπερμεθυλίωση

XAF1

συσχετίστηκε σημαντικά με την ρύθμιση προς τα κάτω των

XAF1

σε ιστούς GC και στα δύο επίπεδα του mRNA και της πρωτεΐνης (

σ

& lt? 0.001 το καθένα). Επιπλέον, ανιχνεύσαμε υψηλή συχνότητα

XAF1

μεθυλίωσης (69,8%, 141 από 202) στις DNAs ορούς από τους ίδιους τους ασθενείς, ενώ τα DNA ορούς από 88 μάρτυρες μη-όγκου ήταν αρνητικά για

XAF1

μεθυλίωση. Η

XAF1

μεθυλίωση σε δύο ιστούς GC και στον ορό θα μπορούσε να είναι μια καλή βιοδεικτών για τη διάγνωση του GC (AUC = 0,85 για ιστών και AUC = 0,91 για οροί) και σχετίζεται σημαντικά με τη χειρότερη πρόγνωση (

p

& lt? 0.001). Επιπλέον, μετά από τη χειρουργική επέμβαση αρνητική προς θετική μετάβαση του

XAF1

μεθυλίωση σε ορούς έντονα συνδέονται με υποτροπή του όγκου.

Συμπεράσματα

1) Δυσλειτουργία του

XAF1

είναι συχνή και ρυθμίζεται μέσω

XAF1

υπερμεθυλίωση προαγωγού? 2) ανίχνευση των κυκλοφορούντων μεθυλιωμένο

XAF1

ΟΝΑ στον ορό μπορεί να είναι ένα χρήσιμο βιοδείκτη στη διάγνωση, την αξιολόγηση των αποτελεσμάτων (πρόγνωση και την επανάληψη του ασθενούς) για τους ασθενείς GC

Παράθεση:. Ling ZQ, Lv P , Lu XX, Yu JL, Han J, Ying LS, et al. (2013) Κυκλοφορούν Methylated

XAF1

DNA Υποδεικνύει φτωχή πρόγνωση για τον καρκίνο του στομάχου. PLoS ONE 8 (6): e67195. doi: 10.1371 /journal.pone.0067195

Επιμέλεια: DunFa Peng, Πανεπιστήμιο Vanderbilt Ιατρικό Κέντρο, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 12 Μαρτίου 2013? Αποδεκτές: 16η του Μάη του 2013? Δημοσιεύθηκε: 27 Ιουνίου του 2013

Copyright: © 2013 Ling et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η έρευνα υποστηρίχθηκε από μια επιχορήγηση από το Πρόγραμμα Επιστήμης και Τεχνολογίας Γενική της επαρχίας Zhejiang (αρ. 2009C33143), και εν μέρει από μια επιχορήγηση από το Backbone Talent της Zhejiang Provincial Ιατρικής και Υγιεινής Προγράμματα πλατφόρμας (αρ. 2011RCA009). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

γαστρικό καρκίνο είναι ένα από τα πιο κοινούς καρκίνους στην Κίνα, με υψηλή συχνότητα και θνησιμότητα, περίπου αντιπροσωπεύοντας το 10% όλων των κακοηθειών [1]. Η γαστρική ογκογένεση είναι μια περίπλοκη, πολλαπλών σταδίων διαδικασία που περιλαμβάνει αλλαγές πολλών γονιδίων [2]. Η ανώμαλη μεθυλίωση υποκινητής είναι ένας από τους κύριους μηχανισμούς για σίγαση κάποια ογκοκατασταλτικών γονιδίων και γονιδίων που σχετίζονται με όγκο και παίζει πολύ σημαντικό ρόλο στην παθογένεση και την πρόοδο σε ανθρώπινους καρκίνους [3], [4] – [6], συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του γαστρικού [7] , [8]. Εν τω μεταξύ, συσσωρεύοντας δεδομένα υποδηλώνουν έντονα ότι μεθυλίωσης του DNA θα μπορούσαν να είναι χρήσιμο και ισχυρό βιοδείκτη σε αξιολόγηση του κινδύνου καρκίνου του [5], [7], η έγκαιρη διάγνωση [7], πρόβλεψη πρόγνωση των ασθενών [7], [8], και την αξιολόγηση της ευαισθησίας σε χημειοθεραπευτικά φάρμακα [9]. πρόσφατη μελέτη μας και άλλες έρευνες έδειξαν ότι την ανίχνευση κυκλοφορούντων μεθυλιωμένου DNA στο αίμα είναι ένας ισχυρός και πρακτική προσέγγιση για τους ασθενείς με καρκίνο [7], [10], [11].

X-συνδεδεμένο αναστολέας της απόπτωσης (

ΧΙΑΡ

) -associated παράγοντα 1 (

XAF1

) είναι ένα μυθιστόρημα αρνητικός ρυθμιστής του

ΧΙΑΡ

, που αντιστρέφει το ρόλο της προστασίας ΧΙΑΡ για καρκινικά κύτταρα [12] – [14]. Η απώλεια του

XAF1

έκφρασης θα καταστήσει τα καρκινικά κύτταρα αντοχή σε απόπτωση και να προωθήσει την επιβίωση των καρκινικών κυττάρων [14] – [17]. Δυσλειτουργία του

XAF1

έχει αναφερθεί σε αρκετές ανθρώπινους καρκίνους πιθανώς μέσω μεθυλίωσης υποκινητή [15] – [19], υποδηλώνοντας τη σημασία της στην ογκογένεση. Σε ανθρώπινο γαστρικό καρκίνο,

XAF1

έχει αναφερθεί ότι είναι συχνά και σημαντικά κάτω ρυθμιζόμενα και αυτό προς τα κάτω ρύθμιση

XAF1

πιθανώς μέσω DNA υπερμεθυλίωση συγκεκριμένες θέσεις CpG [15], [16 ], [18]. Ωστόσο, δεν υπάρχει έκθεση είναι διαθέσιμη για

XAF1

μεθυλίωσης στο αίμα και δυναμικότητα του ως βιοδείκτη. Στην παρούσα μελέτη, εξετάσαμε

XAF1

μεθυλίωση προαγωγού σε ζευγαρωμένα δείγματα ιστού και ορού από ένα μεγάλο πάνελ των ασθενών με καρκίνο του στομάχου και αξιολογούνται κυκλοφορεί μεθυλιωμένο

XAF1

ως πιθανό βιοδείκτη για καρκίνο του στομάχου .

Υλικό και Μέθοδοι

Δήλωση Ηθικής

De-εντοπίστηκαν δείγματα ανθρώπινου ιστού και οι οροί ελήφθησαν από την επαρχία Zhejiang Ανθρωπίνων ιστών δειγμάτων Τράπεζας. Η χρήση των δειγμάτων εγκρίθηκε από το Διοικητικό Συμβούλιο κριτική Θεσμικών σε επαρχία Zhejiang Αντικαρκινικού Νοσοκομείου. Γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από κάθε ασθενή, σύμφωνα με τις απαιτήσεις του διοικητικού συμβουλίου του οργάνου μας δεοντολογίας. 88 μη-καρκίνου εθελοντές υπό την προϋπόθεση γραπτή συγκατάθεση. Μέρος των δειγμάτων ήταν από το Νοσοκομείο επαρχία Zhejiang Λαϊκό και το Νοσοκομείο οι πρώτοι άνθρωποι της Chunan County. Το Διοικητικό κριτική Θεσμικών για την ιατρική δεοντολογία του Νοσοκομείου επαρχία Zhejiang Λαϊκό και το Νοσοκομείο οι πρώτοι άνθρωποι της Chunan County εγκρίνει τη μέθοδο της συλλογής δείγματος, συμπεριλαμβανομένων γραπτή συγκατάθεση από όλους τους ασθενείς, αντίστοιχα.

Ιστός Δείγμα

Αξιόπιστες όγκου και παρα-καρκινικά ιστολογικά φυσιολογικούς ιστούς (PCHNT) δείγματα συλλέχθηκαν κατά το χρόνο της χειρουργικής επέμβασης από 202 ασθενείς με πρωτοπαθή γαστρικό αδενοκαρκίνωμα σε επαρχία Zhejiang Αντικαρκινικό Νοσοκομείο, Νοσοκομείο επαρχία Zhejiang Λαϊκό και το Νοσοκομείο οι πρώτοι άνθρωποι της Chunan County από τον Ιανουάριο 2008 έως τον Δεκέμβριο 2009. Η PCHNT εκτιμήθηκε μικροσκοπικώς για τη παρουσία φυσιολογικών κυττάρων και απουσία δυσπλαστικών κυττάρων. Καμία από αυτές τις περιπτώσεις είχαν υποστεί καμία ιατρική θεραπεία πριν την επέμβαση. Δημογραφικά, κλινικά και ιστοπαθολογικά παραμέτρους από αυτές τις υποθέσεις φαίνονται στον Πίνακα 1. Το υπόδειγμα ανάπτυξης των καρκινικών κυττάρων προσδιορίστηκε σύμφωνα με την ταξινόμηση του Ming [20]. Όλοι οι ασθενείς που προσλαμβάνονται είχε ακολουθηθεί-up σε τακτά χρονικά διαστήματα, μέχρι την ημερομηνία λήξης της προθεσμίας. Άντρου δείγματα βιοψίας βλεννογόνου από 88 εθελοντές μη-καρκίνου με γαστροσκόπηση τυχαία συλλέγονται ως μάρτυρες στο πλαίσιο της ίδιας περιόδου, συμπεριλαμβανομένων των 54 άνδρες και 34 γυναίκες, με μέση ηλικία 52,9 ετών. Μεταξύ αυτών των εθελοντών, 48 ασθενείς διαγνώστηκαν με χρόνια μη-ατροφική γαστρίτιδα. Εν τω μεταξύ, σε συνδυασμό δείγματα ορού συλλέχθηκαν πριν από τη χειρουργική επέμβαση ή ενδοσκόπηση.

Η

Ανάλυση του ελικοβακτηριδίου του πυλωρού (

Η. Pylori

) Μόλυνση

Οι βιοψίες ελήφθησαν από όλους τους ασθενείς που είχε ενδοσκοπική εξέταση.

Η

.

πυλωρού

κατάσταση προσδιορίστηκε με ταχεία δοκιμή ουρεάσης και μεθόδους χρώσης Giemsa [21], [22]. Θεωρήθηκε ως

Η

.

πυλωρού

μόλυνση όταν οι δύο δοκιμές ήταν θετικές, και τα δείγματα με μόνο θετικό αποκλείστηκαν για τη στατιστική ανάλυση [22].

Real-time RT-PCR

Η έκφραση του mRNA του

XAF1

αναλύθηκε με πραγματικού χρόνου RT-PCR [23]. Ολικά RNAs εκχυλίσθηκαν χρησιμοποιώντας το ΤπζοΙ (Gibco). Ένα σύνολο 3 μg ολικού RNA που υποβλήθηκε σε αντίστροφη μεταγραφή χρησιμοποιώντας τα M-MLV αντίστροφη μεταγραφάση (Promega). Η αφυδρογονάση φωσφορικής γλυκεραλδεΰδης (

GAPDH

) επελέγη ως εσωτερική αναφορά. Οι αλληλουχίες του

XAF1

εκκινητές ήταν ως ακολούθως: (F) 5′-TGGGTGTAGGATTCTCCAGG-3 ‘, (R) 5′-GGTTTGCCCAAG GACTACAA-3’.

GAPDH

αλληλουχίες εκκινητών ήταν ως εξής: (F) 5′-CATGA GAAGTATGACAACAGCCT-3 ‘, (R) 5′-TAATTTTAGGTTAGAGGGTTATTGT- 3’. Το 2

-ΔΔCt μέθοδος χρησιμοποιήθηκε για τον υπολογισμό σχετικές μεταβολές στη γονιδιακή έκφραση.

ανοσοϊστοχημική χρώση

Η έκφραση της πρωτεΐνης XAF1 προσδιορίστηκε με ανοσοϊστοχημική ανάλυση με μονοκλωνικό αντίσωμα XAF1 (Santa Cruz Biotechnology ). Η ανοσοϊστοχημική χρώση για XAF1 διεξήχθη χρησιμοποιώντας αντιπροσωπευτικά δείγματα εγκλεισμένα σε παραφίνη από τους ασθενείς 202 GC. Μετά αποπαραφίνωση, ανάκτηση αντιγόνου σε 0,01 Μ κιτρικού ρυθμιστικού διαλύματος, και αδρανοποίηση της ενδογενούς υπεροξειδάσης σε 3% Η

2O

2 /μεθανόλη, επωάσαμε τις διαφάνειες με αντίσωμα για XAF1 στο C όλη τη νύκτα, και χρώση 4 ° ανοσοϊστοχημική, μετά από μια τυπική avidinbiotin-υπεροξειδάσης τεχνική, διεξήχθη χρησιμοποιώντας 3,3′-διαμινοβενζιδίνη (DAB) ως χρωμογόνο. Οι πυρήνες με αιματοξυλίνη. Το σκορ ανοσοϊστοχημική χρώση (ISS) προσδιορίζεται από τρεις ανεξάρτητους παθολόγους συνδυάζοντας τη συχνότητα και την ένταση χρώσης ως εξής [24], [25]: δεν χρώση βαθμολογείται ως 0, 1~10% των κυττάρων βαμμένων βαθμολογήθηκε ως 1, 11~50% ως 2, 51~80% ως 3, και 81~100% ως 4. ένταση χρώσης βαθμολογείται σε μια κλίμακα από το 0 έως 3, με 0, αρνητικά? 1, αδύναμη? 2, μέτρια? και 3, ισχυρή. Όταν υπάρχει πολυεστιακή ανοσοαντιδραστικότητα και υπάρχουν σημαντικές διαφορές στην κηλίδωση εντάσεις μεταξύ εστιών, ο μέσος όρος των λιγότερο έντονη και πιο έντονη χρώση καταγράφηκε. Τα ακατέργαστα δεδομένα μετατράπηκαν στην ISS πολλαπλασιάζοντας το σκορ συχνότητα και το σκορ ένταση χρώσης. Θεωρητικά, ο ΔΔΣ μπορεί να κυμαίνεται από το 0 έως το 12. Η ISS των 9~12 θεωρήθηκε ισχυρή ανοσολογική αντίδραση, 5-8 κρίθηκε μέτρια, 1~4 θεωρήθηκε αδύναμη και 0 βαθμολογήθηκε ως αρνητική. Τμήματα στα οποία η χρώση δεν θα μπορούσε να χαρακτηριστεί καλά θεωρήθηκαν διφορούμενα.

Ανάλυση Western Blot

Paired όγκου και PCHNT δείγματα 20 περιπτώσεις επιλέχθηκαν τυχαία από 202 ασθενείς με γαστρικό καρκίνο για ανάλυση στυπώματος western. Η συνολική πρωτεΐνη εκχυλίζεται και στη συνέχεια ποσοτικοποιούνται χρησιμοποιώντας τη μέθοδο Lowry [26]. Η ανάλυση στυπώματος Western πραγματοποιήθηκε με τη χρήση αντι-XAF1 μονοκλωνικά αντισώματα (Santa Cruz, CA) σύμφωνα με προηγούμενη έκθεση [6]. β-τουμπουλίνης επιδόθηκε ως εσωτερικός έλεγχος.

DNA Extraction, τροποποίηση όξινου θειώδους και σε πραγματικό χρόνο ειδικούς μεθυλίωσης-PCR (MSP)

Serial τμήματα 5-mm που περιείχε το καρκίνωμα και μη-νεοπλασματικές ιστοί τοποθετήθηκαν σε γυάλινα πλακίδια μη επικαλυμμένο και ξηραίνεται στους 37 ° C όλη τη νύκτα. Μετά αποπαραφινώσεως και χρώση με αιματοξυλίνη και ηωσίνη (Η &? Ε), συλλέξαμε 5000 πυρήνες από 5 έως 10 διαδοχικές τομές χρησιμοποιώντας μία βελόνα 27G. Τα συλλεχθέντα πυρήνες υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 40 ml 200 mg /ml πρωτεϊνάση Κ (Sigma-Aldrich Co., St. Louis, ΜΟ) στους 42 ° C, για 72 ώρες. Η παραμαγνητικά τεχνολογία χάντρα (AxyPrep Mag Blood gDNA κιτ, Axygen Scientific, Inc., Union City, CA) χρησιμοποιήθηκε για να απομονώσει γονιδιακό DNA από φρέσκο ​​αίμα σύμφωνα με το πρωτόκολλο κιτ. Το πρωτόκολλο αποτελείται από τα εξής στάδια: λύσης, δεσμευτική, το πλύσιμο, και έκλουση. Οι ρύποι απομακρύνονται κατά τη διάρκεια της δέσμευσης και το πλύσιμο βήματα. Η ποιότητα του DNA αξιολογήθηκε από το 280 αναλογία A260 /στο NanoDrop ND-1000 φασματοφωτόμετρο (NanoDrop Technologies, Inc., Wilmington, DE), την ακεραιότητα του DNA ελέγχθηκε με ηλεκτροφόρηση σε αποδιατακτικό πήκτωμα αγαρόζης.

DNAs τροποποιήθηκαν με νάτριο όξινο θειώδες χρησιμοποιώντας το κιτ EpiTect Bisulfite (Qiagen Inc.) σύμφωνα με τις οδηγίες εργοστάσιο του. Τροποποιημένο DNAs αναλύθηκαν με πραγματικού χρόνου MSP στο ABI7500 PCR (ΑΒΙ Co.) με τη χρήση του SYBR Premix Taq ExTaq Kit (Takara Co. Ltd).

μεθυλίωση και unmethylation XAF1

ειδικών εκκινητών σχεδιάστηκαν ως εξής:

XAF1

(MF) 5′-TTTGTAAGAAACG AAATTTAATCGA-3 ‘, (MR) 5′- CCTACCCTTAAAACCCACGAT-3’?

XAF1

(UF) 5′-TTTGTAAGAAATGAAATTTAATTGA-3 ‘, (UR) 5′-CTCCTACCCTTAAAACC CACAAT-3’ [23]. Ανθρώπινο γονιδιωματικό DNA (ΝΕΒ) αντιμετωπίζονται από SSSI μεθυλοτρανσφεράση in vitro χρησιμοποιήθηκε ως θετικός έλεγχος. Ένα DNA περιφερικού αίματος από ένα υγιές άτομο χρησιμοποιήθηκε σαν αρνητικός έλεγχος. Το ποσοστό των μεθυλιωμένων DNAs στα δείγματα υπολογίστηκαν σύμφωνα με τις αναφορές όπως προηγούμενα περιγράφεται [27], [28]. δείκτης μεθυλιωμένο DNA που βαθμολογήθηκε σύμφωνα με το ποσοστό της μεθυλίωσης του DNA? 0, & lt? 20%? 1, 20% -40%? 2, 40% -60%? 3, 60% -80%? και 4, & gt? 80%. Η βαθμολογία στο δείκτη από το 0 θεωρείται DNA unmethylation και οι βαθμολογίες 1-4 θεωρήθηκαν υπερμεθυλιωμένων, αντίστοιχα [7], [27]. Η κόψει όριο του 20% για το DNA υπερμεθυλίωση βασίστηκε σε έλεγχο φυσιολογικά δείγματα και των εσωτερικών ελέγχων ποιότητας που παράγονται στην ανάλυση MSP σε πραγματικό χρόνο.

Cell Culture και τα ναρκωτικά Θεραπεία

Ανθρώπινο κυτταρικές γραμμές γαστρικού καρκίνου (AGS και ΚΑΤΩ-III) καλλιεργήθηκαν σε μέσο RPMI1640 συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου μόσχου, 100 U /mL πενικιλλίνη, και 100 U /mL στρεπτομυκίνη στους 37 ° C και 5% CO

2, αντίστοιχα. Τα καλλιεργημένα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 5-αζα-2′-δεοξυκυτιδίνη (5-Αζα-CDR) (Sigma-Aldrich) σε τελική συγκέντρωση 1,0 μmol /L. Τριχοστατίνη Α (TSA) (Sigma-Aldrich) σε τελική συγκέντρωση 20 ng /ml χορηγήθηκε μετά τη θεραπεία 5-Αζα ή μόνο του για 24 ώρες. Τα κύτταρα συλλέχθηκαν και υποβλήθηκαν σε DNA, RNA και καθαρισμό πρωτεΐνης και επόμενες αναλύσεις.

Στατιστική Ανάλυση

SPSS 17.0 στατιστικό λογισμικό υιοθετήθηκε για την ανάλυση δεδομένων. Μετρώντας τις συγκρίσεις των δεδομένων μεταξύ των ομάδων υποβλήθηκαν σε το

χ

2 δοκιμών και ακριβής δοκιμασία του Fisher. Η ανάλυση επιβίωσης ήταν από υπολογιστή με τη βοήθεια της μεθόδου Kaplan-Meier και σημαντικά επίπεδα αξιολογήθηκαν με τη βοήθεια του τεστ log-rank. Μία μονοπαραγοντική ανάλυση με το μοντέλο παλινδρόμησης Cox χρησιμοποιήθηκε για τον καθορισμό προσδιορισμένων προγνωστικούς παράγοντες, και πολυπαραγοντική ανάλυση με το μοντέλο παλινδρόμησης Cox χρησιμοποιήθηκε για να διερευνήσει συνδυασμένα αποτελέσματα. Για όλες τις στατιστικές αναλύσεις,

σ

τιμές & lt?. 0.05 θεωρήθηκαν ότι είναι στατιστικά σημαντική

Αποτελέσματα

κάτω ρύθμιση του

XAF1

στην Πρωτοβάθμια Γαστρικό Οι όγκοι

Για να διερευνήσουν

XAF1

προφίλ γονιδιακής έκφρασης, εξετάσαμε την έκφραση του mRNA της

XAF1

σε 88 εθελοντές μη καρκίνο, και 202 πρωτοβάθμια γαστρικό καρκινικούς ιστούς και τα αντίστοιχα PCHNTs τους. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 1Α, η

XAF1

έκφραση ήταν σημαντικά μειωμένη σε γαστρικό καρκίνο δείγματα σε σύγκριση με εκείνη σε φυσιολογικούς ελέγχους και PCHNTs (

ρ & lt?

0.001). Ωστόσο, δεν υπήρξε σημαντική διαφορά στο

XAF1

έκφραση σε PCHNTs σε σύγκριση με τους μάρτυρες μη-καρκίνου.

Α

XAF1

επίπεδο έκφρασης mRNA σε ιστούς GC, PCHNTs ( παρα-καρκινικό ιστολογική φυσιολογικού ιστού) και μη καρκινικές μάρτυρες προσδιορίσθηκαν με πραγματικού χρόνου RT-PCR και ομαλοποιήθηκε στο

GAPDH

. Β-Ρ, η έκφραση της πρωτεΐνης XAF1 ήταν ρυθμισμένα προς τα κάτω σε γαστρικό καρκινικούς ιστούς. Β, ένας εκπρόσωπος θετική, υψηλή έκφραση XAF1 πρωτεΐνης σε ένα PCHNT ιστούς? C, Απών έκφρασης XAF1 σε φτωχά διαφοροποιημένα GC? αρχική μεγέθυνση × 200. Α, μια περίληψη των XAF1 ανοσοϊστοχημική χρώση αποτελέσματα σε 202 γαστρικών καρκίνων. Ε, Εκπρόσωπος ανάλυση western blot της έκφρασης XAF1 σε καρκίνο του στομάχου και τα αντίστοιχα δείγματα PCHNT με διαφορετικές

XAF1

επίπεδα μεθυλίωσης. ιστούς PCHNT στην υπόθεση 59 (XAF1 σκορ μεθυλίωσης: 0)? ιστούς GC στην υπόθεση 59 (μεθυλιωμένο

XAF1

βαθμολογία: 4)? ιστούς PCHNT στην υπόθεση 20 (μεθυλιωμένο βαθμολογία: 0)? ιστούς GC στην υπόθεση 20 (μεθυλιωμένο

XAF1

βαθμολογία: 1). Βήτα-τουμπουλίνης χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικός έλεγχος. F, Περίληψη των δυτικών αποτύπωση αποτελέσματα από τις 20 ΔΘ και τα αντίστοιχα PCHNTs παρουσιάζονται ως σχετικές ζώνες πυκνότητας ομαλοποιούνται στη β-τουμπουλίνης των ίδιων δειγμάτων.

Η

Επιπλέον,

XAF1

έκφραση ήταν σημαντικά χαμηλότερη σε προχωρημένους όγκους (σταδίου III /IV) από ότι σε όγκους πρώιμο στάδιο (στάδιο I /II) (

p & lt?

0,0001, Σχήμα S1 Α), και ήταν σημαντικά χαμηλότερη σε χαμηλής διαφοροποίησης όγκους από ότι σε καλά /μετρίως διαφοροποιημένων όγκους (

p & lt?

0,0001, Σχήμα S1B)

Για να ελέγξετε το επίπεδο της πρωτεΐνης XAF1 στο γαστρικό καρκινικούς ιστούς, πραγματοποιήθηκε ανοσοϊστοχημική ανάλυση στα 202 γαστρικό καρκινικούς ιστούς και τα αντίστοιχα PCHNTs τους.. έκφραση της πυρηνικής XAF1 ήταν συνεχώς παρών στην κανονική γαστρικό επιθήλιο δείχνει υψηλή ανοσοδραστικών βαθμολογίες. Η έκφραση της πρωτεΐνης XAF1 ανιχνεύθηκε σε υψηλό επίπεδο σε 97,5% (197/202) των PCHNTs (Σχήμα 1Β). Ωστόσο, η υψηλή έκφραση της XAF1 πρωτεΐνη ανιχνεύθηκε μόνο σε 16,8% (34/202) των γαστρικών καρκινικών ιστών? πλειοψηφία των γαστρικών καρκινικών ιστών ήταν απόντες ή σε χαμηλό επίπεδο του XAF1 πρωτεΐνης (Εικόνα 1 C). Τα ανοσοϊστοχημικά ευρήματα συνοψίζονται στον Πίνακα 1. Η ανοσοϊστοχημική χρώση με άνεση σε γαστρικό καρκινικούς ιστούς ήταν σημαντικά χαμηλότερη από ότι στην PCHNTs ή σε φυσιολογικούς μάρτυρες (

ρ & lt?

0,0001, σχήμα 1Δ). Η απώλεια της XAF1 πρωτεΐνης συσχετίζονται σημαντικά με

H. pylori

λοίμωξη, το μέγεθος του όγκου, η ιστολογική διαφοροποίηση, λεμφική εισβολή, φλεβική εισβολή, επεμβατική βάθος, λεμφαδένα μετάσταση, μακρινή μετάσταση και κλινικό στάδιο (Πίνακας 1) (όλο το

p & lt?

0.05)

.

Οι ανοσοϊστοχημικές αποτελέσματα της 20ης γαστρικών καρκινικών ιστών επιβεβαιώθηκε περαιτέρω μέσω της ανάλυσης κηλίδος western. Οι αντιπροσωπευτικές κηλίδωση Western αποτελέσματα σε δύο υποθέσεις που φαίνεται στο Σχήμα 1Ε. Η σχετική ποσότητα της πρωτεϊνικής έκφρασης XAF1 κανονικοποιήθηκε στην β-τουμπουλίνης των ίδιων δειγμάτων. Το μέσο επίπεδο της πρωτεΐνης XAF1 σε 20 γαστρικό καρκινικούς ιστούς ήταν σημαντικά χαμηλότερη από ότι σε PCHNTs (

σ

& lt? 0,05). (Σχήμα 1F)

Ανάδοχος υπερμεθυλίωση του

XAF1

στην Πρωτοβάθμια γαστρικών όγκων

για την διερεύνηση των μοριακών μηχανισμών για το

XAF1

σιωπή γαστρικών καρκίνων, εφαρμόσαμε μια τεχνολογία MSP σε πραγματικό χρόνο για να μελετήσει την κατάσταση μεθυλίωσης του DNA των

XAF1

υποκινητή. Η συχνότητα των

XAF1

υπερμεθυλίωση σε γαστρικό καρκινικούς ιστούς, που αντιστοιχεί PCHNTs και μάρτυρες μη καρκίνος ήταν 83,2% (168/202), 24,8% (50/202) και 5,7% (5/88), αντίστοιχα. Η συχνότητα υπερμεθυλίωση

XAF1

σε καρκίνους είναι σημαντικά υψηλότερο από εκείνο PCHNTs και τους ελέγχους μη-καρκίνου (όλα

σ

& lt? 0,0001, Σχήμα 2)

δείχνει δεδομένων. η συχνότητα των

XAF1

(επίπεδο μεθυλίωσης του DNA ≥20%) υπερμεθυλίωση σε κάθε ομάδα.

η

Αξίζει να σημειωθεί ότι το μετουσιωμένο ιδιότητα του

XAF1

συσχετίστηκε σημαντικά με κάποια κλινικο-παθολογική παραμέτρων σε γαστρικό καρκίνο, όπως μετάσταση λεμφαδένα, T-στάδιο,

H

.

πυλωρού

μόλυνση, κλπ (όλοι

p & lt?

0.05, Πίνακας 2). Δεν παρατηρήθηκε σημαντική συσχέτιση μεταξύ της υπερμεθυλίωση

XAF1

και το φύλο, την ηλικία κατά τη διάγνωση, η περιοχή του όγκου και μακρινή μετάσταση αποδείχθηκε (όλα

σ

& gt? 0,05). (Πίνακας 2)

XAF1

Ανάδοχος υπερμεθυλίωση σχετίζεται με μεταγραφική σίγαση σε γαστρικά κύτταρα του καρκίνου

Για να εξετάσει τις σχέσεις μεταξύ των

XAF1

μεθυλίωση και

XAF1

έκφραση, συγκρίναμε το

XAF1

επίπεδο μεθυλίωσης με

XAF1

επίπεδα επίπεδο του mRNA και της πρωτεΐνης προσδιορίζεται είτε με ανοσοϊστοχημική ανάλυση (Σχήμα 3Α) ή κηλίδωση western (Σχήμα 3Β) από την ανάλυση συσχέτισης Spearman. Όπως φαίνεται στο Σχήμα-3Α, η έκφραση της πρωτεΐνης XAF1 (που προσδιορίζεται με ανοσοϊστοχημική ανάλυση) σε 202 ιστούς GC ήταν συσχετίζεται στενά με το

XAF1

επίπεδο mRNA [lg (T /N)] (που προσδιορίζεται με RT-PCR) (

γ

= 0,841,

p & lt?

0,0001). Πιο σημαντικό,

XAF1

επίπεδο μεθυλίωσης συσχετίστηκε σημαντικά με το

XAF1

επίπεδο mRNA (

γ

= – 0,846,

p & lt?

0,0001) και XAF1 πρωτεΐνη επίπεδο (

γ

= -0,969,

p & lt?

0,0001). Παρόμοια αποτελέσματα ελήφθησαν κατά την ανάλυση της συσχέτισης του

XAF1

μεθυλίωση προαγωγού και η έκφραση της πρωτεΐνης XAF1 προσδιορίζεται με ανάλυση κηλίδος western (Σχήμα 3Β). Αυτά τα αποτελέσματα ισχυρά κατηγορούνται ότι

XAF1

έκφραση ρυθμίζεται από

XAF1

μεθυλίωση του υποκινητή.

Α, Συσχέτιση

XAF1

μεθυλίωση με

XAF1

επίπεδο του mRNA προσδιορίστηκε με ανάλυση RT-PCR και η έκφραση πρωτεΐνης XAF1 προσδιορίστηκε με ανοσοϊστοχημική ανάλυση σε 202 γαστρικό καρκινικούς ιστούς. Β, Συσχέτιση

XAF1

μεθυλίωση με

XAF1

επίπεδο του mRNA προσδιορίστηκε με ανάλυση RT-PCR και η έκφραση της πρωτεΐνης XAF1 προσδιορίζεται με κηλίδωση Western ανάλυση σε 20 κατεψυγμένα γαστρικό καρκινικούς ιστούς. Σε αμφότερα τα Α και Β,

XAF1

σκορ μεθυλίωσης αντιστρόφως ανάλογη με το

XAF1

γονιδιακής έκφρασης σε δύο επίπεδα mRNA και πρωτεΐνης.

Η

5-Aza-CdR Διοίκησης Επαναφέρει η έκφραση του

XAF1

η

Για να επιβεβαιωθεί περαιτέρω η επιγενετική ρύθμιση του

XAF1

έκφρασης, τα κύτταρα AGS και ΚΑΤΩ-ΙΙΙ υποβλήθηκαν σε θεραπεία με 5-Aza-CdR ή /και TSA .

XAF1

έκφραση mRNA επανενεργοποιήθηκε στις δύο κυτταρικές γραμμές γαστρικού καρκίνου, που συνοδεύεται από απομεθυλίωση του

XAF1

προαγωγό (Σχήμα 4), υποδεικνύοντας ότι

XAF1

είναι μεταγραφικά σιγήσει σε αυτά τα κύτταρα από το DNA υπερμεθυλίωση. Είναι ενδιαφέρον ότι, η θεραπεία TSA μόνη της ήταν αποτελεσματική για την αποκατάσταση

XAF1

έκφραση στο AGS και ΚΑΤΩ-ΙΙΙ χωρίς σημαντική αλλαγή της

XAF1

επίπεδο μεθυλίωσης, γεγονός που υποδηλώνει ότι οι τροποποιήσεις ιστονών μπορεί επίσης να εμπλέκεται στη ρύθμιση

XAF1

έκφρασης. Ωστόσο, η χορήγηση του TSA παρακάτω 5-Aza-CdR είχε ένα προσθετικό αποτέλεσμα στην αποκατάσταση της γονιδιακής έκφρασης με μια περαιτέρω μείωση στο επίπεδο της μεθυλίωσης του

XAF1

. Τα αποτελέσματα αυτά είναι σε συμφωνία με τις πρόσφατες μελέτες που πρότεινε ότι TSA μπορεί να έχει μια επίδραση απομεθυλίωσης σε ένα γονίδιο-ειδικό τρόπο [5]. Η ανάλυση Western Blot χρησιμοποιώντας AGS κύτταρα, ως μοντέλο, επιβεβαίωσε την αυξητική ρύθμιση του XAF1 πρωτεϊνών μετά την 5-Αζα-CDR και 5-αζα-CdR θεραπείες /TSA (Σχήμα 4).

Δύο γαστρικό καρκίνο κυτταρικές γραμμές (AGS και ΚΑΤΩ-III) υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 1,0 mmol /L 5-Αζα-CdR για 72 ώρες ή /και 100 ηΜ TSA για 24 ώρες. Τα επίπεδα μεθυλίωσης προσδιορίστηκαν με πραγματικό χρόνο MSP. Πραγματοποιήσαμε πραγματικού χρόνου RT-PCR ανάλυση εις τριπλούν για κάθε δείγμα cDNA και χρησιμοποιήθηκαν οι μέσες τιμές σε τρία πειράματα. Η σχετική

XAF1

έκφραση του mRNA normolized για το

GAPDH

των ίδιων δειγμάτων χρησιμοποιώντας τον τύπο 2

-ΔΔCT. Τα αποτελέσματα πολλαπλασιάζονται με 100 για καλύτερη οπτικοποίηση. Το ποσοστό των

XAF1

μεθυλίωσης του DNA παρουσιάζεται στην αριστερή πλευρά? ενώ η σχετική έκφραση του mRNA της

XAF1

εμφανίζεται στη δεξιά πλευρά. Β: Έκφραση XAF1 στο πρωτεϊνικό επίπεδο ακόλουθες 5-Αζα-CDR και TSA θεραπείες. Η ανάλυση στυπώματος Western των κυττάρων AGS μετά από αγωγή με DMSO (έλεγχος), 5-Αζα-CdR ή 5-Αζα-CdR /TSA για 72 ώρες επιδεικνύουν τα πάνω ρύθμιση των πρωτεϊνών XAF1 σε κατεργασμένα κύτταρα σε σύγκριση με τον έλεγχο (DMSO). Η βήτα-τουμπουλίνης παρουσιάζεται ως μάρτυρας φόρτωσης.

Η

ανίχνευση των κυκλοφορούντων

XAF1

μεθυλίωση

Διαπιστώσαμε υψηλή συχνότητα

XAF1

μεθυλίωσης σε πρωτογενείς γαστρικό καρκίνο (83,2%), γεγονός που υποδηλώνει ότι μπορεί να είναι ένας καλός βιοδείκτης εάν

XAF1

μεθυλίωσης θα μπορούσε να είναι ανιχνεύσιμη στον ορό. Ως εκ τούτου, εξετάσαμε

XAF1

μεθυλίωση στα συμφωνημένα DNA που ορό από τους ασθενείς 202 GC.

XAF1

μεθυλίωση ανιχνεύθηκε σε 141 (69,8%) DNAs ορού από τους ασθενείς 202 γαστρικό καρκίνο (Σχήμα 5). Σε αντίθεση,

XAF1

μεθυλίωση δεν ανιχνεύθηκε στο DNA που ορό από τους 88 μάρτυρες μη-καρκίνου.

Η

Στη συνέχεια, επιβεβαίωσε τη συνέπεια στο

XAF1

μεθυλίωσης μεταξύ ιστούς όγκων και την αντίστοιχη του ορού. Σε 168 περιπτώσεις που έδειξε

XAF1

μεθυλίωση σε καρκινικούς ιστούς, 141 εμφανίζεται

XAF1

μεθυλίωση σε ζεύγη ορό τους, δίνοντας μια συνέπεια των 83,9% μεταξύ τους. Και στους 34 ασθενείς με γαστρικό καρκίνο, χωρίς να

XAF1

μεθυλίωσης στο γαστρικό ιστούς τους καρκίνο, δεν μεθυλίωση βρέθηκε σε όλες τις ορισθείσες εθνικές αρχές ορού (Εικόνα S2).

XAF1

μεθυλίωση ως βιοδεικτών στη διάγνωση της γαστρικός καρκίνος

Για την εκτίμηση της αξίας των

XAF1

μεθυλίωση ως βιολογικός δείκτης για τη διάγνωση GC, θα χαράσσονται καμπύλες λειτουργικού χαρακτηριστικού δέκτη (ROC) και υπολογίζεται περιοχή κάτω από την καμπύλη (AUC), χρησιμοποιώντας δεδομένα της μεθυλίωσης του DNA και από τις δύο ιστούς GC και ορών. Τόσο η ROC ανάλυση των

XAF1

μεθυλίωσης στους ιστούς και ορών αποκάλυψε σημαντική διακριτική ικανότητα (Σχήμα 6)? η AUC αξία των ιστών

XAF1

μεθυλίωση ήταν 0.849 (95% διάστημα εμπιστοσύνης, 0,806 έως 0,892?

σ

& lt? 0.0001), η τιμή της AUC του ορού

AXF1

μεθυλίωσης ήταν 0.909 (διάστημα εμπιστοσύνης 95%, 0,875 έως 0,942?

σ

& lt? 0.0001).

ο δέκτης λειτουργεί ανάλυση χαρακτηριστικών (ROC) καμπύλη χρησιμοποιήθηκε για να αξιολογήσει τη δυνατότητα

XAF1

μεθυλίωση στο γαστρικό καρκινικούς ιστούς ή σε ορό ως βιοδείκτη για τη διάγνωση του καρκίνου του στομάχου. Για

XAF1

μεθυλίωσης στο γαστρικό καρκινικούς ιστούς, μια περιοχή κάτω από την καμπύλη ROC (AUC) είναι 0.849 (95% διάστημα εμπιστοσύνης, 0,806 έως 0,892?

P & lt?

0,0001). Για

XAF1

μεθυλίωση στον ορό, η AUC είναι 0.909 (95% διάστημα εμπιστοσύνης, 0,875 έως 0,942?

P & lt?

0,0001).

Η

Επιπλέον, όπως

XAF1

κατάστασης μεθυλίωσης στο γαστρικό καρκινικούς ιστούς και οι οροί συσχετίστηκε σημαντικά με μετάσταση λεμφαδένα, T-στάδιο, κλινικό στάδιο, και άλλες παραμέτρους κλινικο-παθολογική (όλα

ρ & lt?

0.05, Πίνακας 2 ).

XAF1

μεθυλίωση Συναφές με πρόγνωση του γαστρικού Καρκινοπαθών

Η σημαντική συσχέτιση της

XAF1

μεθυλίωση με πολλές κλινικο-παθολογικών παραμέτρων (Πίνακας 2 ) πρότειναν ότι μπορεί να συνδέσει με την πρόγνωση των ασθενών με καρκίνο του στομάχου. Μέχρι την ημερομηνία λήξης της παρακολούθησης, 113 από 168 ασθενείς με

XAF1

υπερμεθυλίωση στο γαστρικό καρκινικούς ιστούς πήγε ταχεία εξέλιξη της νόσου ή απεβίωσαν. Η διάμεση επιβίωση χωρίς νόσο (DFS) ήταν μόλις 23,4 μήνες. Αντίθετα, στα 34 ασθενείς χωρίς

XAF1

υπερμεθυλίωση στο γαστρικό ιστούς τους τον καρκίνο, μόνο 5 ασθενείς επιδείνωση, και το μεσαίο DFS ήταν 39,6 μήνες. Η ανάλυση Kaplan-Meier έδειξε ότι οι ασθενείς με

XAF1

υπερμεθυλίωση στο γαστρικό ιστούς τους καρκίνου παρουσίασαν προφανή χειρότερη επιβίωση από ότι χωρίς

XAF1

υπερμεθυλίωση (

p & lt?

0.0001) (Σχήμα 7Α). Ομοίως, η ανάλυση Kaplan-Meier απέδειξε ότι οι ασθενείς με θετικό ορό

XAF1

μεθυλίωση είχαν σημαντικά χαμηλότερη DFS από ότι σε ασθενείς χωρίς ορό

XAF1

μεθυλίωσης (

σ

& lt? 0,0001 ) (Σχήμα 7Β), υποδεικνύοντας ότι

XAF1

μεθυλίωση υποστηρικτής στον ορό ήταν μια δυσμενής προγνωστικός παράγοντας για τους ασθενείς με καρκίνο του στομάχου.

Αθροιστική ελεύθερη νόσου επιβίωση (DFS είναι Cum καμπύλες) απεικονίζονται agains em

επίπεδο μεθυλίωσης t XAF1

DNA σε γαστρικό καρκινικούς ιστούς (Α) και σε ορούς (Β). Σε αμφότερα τα Α και Β, η ανάλυση Kaplan-Meier χρησιμοποιήθηκαν και

P & lt?.

0,0001, αντίστοιχα

Η

ανάλυση Cox παλινδρόμησης αποκάλυψε ότι

XAF1

μεθυλίωση σε ορούς είναι αποτελεί ανεξάρτητο παράγοντα για την επιβίωση των ασθενών: ασθενείς με

XAF1

μεθυλίωση είχαν χειρότερη πρόγνωση (

p & lt?

0,0001? αναλογία κινδύνου, 5.710? 95% CI, 3.474~9.383). Επιπλέον, τα στάδια ΤΝΜ και η ηλικία κατά τη διάγνωση θα μπορούσε να θεωρηθεί ως η παράγοντας που επηρεάζει την πρόγνωση σε γαστρικό καρκίνο, μόνο όταν η επίδραση του

XAF1

μεθυλίωση είχε εξαλειφθεί. Επιπλέον, κυκλοφορεί μεθυλιωμένο

XAF1

στο αίμα είχε μεγαλύτερο αντίκτυπο στην πρόγνωση από ότι σε στάδια ΤΝΜ (Πίνακας S1).

θετική μετάβαση των κυκλοφορούντων

XAF1

μεθυλίωση Προβλέπει Όγκων υποτροπής και κακή πρόγνωση

Ανάμεσα στους 202 ασθενείς που αξιολογήθηκαν για την προεγχειρητική κυκλοφορούν

XAF1

μεθυλίωση, 72 ασθενείς έλαβαν εξετάσεις παρακολούθησης των κυκλοφορούντων

XAF1

μεθυλίωση 2~5 φορές σε διαστήματα 1~6 μήνες μετά την επέμβαση. Μεταξύ 12 επαναλαμβανόμενες ασθενείς, 10 ασθενείς εμφανίζεται αρνητική προς θετική μετάβαση σε

XAF1

κατάσταση μεθυλίωσης στους ορούς τους, οι άλλες δύο παρουσίασαν πάντα θετικό για

XAF1

μεθυλίωση, υποδηλώνοντας ότι η παρακολούθηση του

XAF1

μεθυλίωση στον ορό μπορεί να είναι ένας καλός δείκτης για την πρόβλεψη υποτροπής του όγκου (Πίνακας 3).

η

Συζήτηση

XAF1

(

ΧΙΑΡ

-associated παράγοντας 1) είναι ένα μυθιστόρημα

ΧΙΑΡ

πρωτεΐνη που θα μπορούσε να διαταράξει την συνδυασμού της δέσμευσης

ΧΙΑΡ

με κασπάσες, καταργεί την προστασία του σχετικά με καρκινικά κύτταρα και οδηγεί στην απόπτωση των καρκινικών κυττάρων [12 ] – [14]. Η λειτουργία αντι-απόπτωση των

ΧΙΑΡ

καθορίζεται από την αναλογία των επιπέδων έκφρασης του

ΧΙΑΡ

ενάντια

XAF1

[15]. Μειωμένη έκφραση ή τη σιωπή του

XAF1

είναι ένα συχνό συμβάν σε ανθρώπινους όγκους [16] – [19]. Στην παρούσα μελέτη, επιβεβαίωσε κατ ‘αρχάς ότι

XAF1

γονιδιακή έκφραση ήταν σημαντικά κάτω-ρυθμίζονται τόσο το επίπεδο mRNA και το επίπεδο της πρωτεΐνης σε ένα μεγάλο πίνακα του πρωτογενούς γαστρικού καρκινικούς ιστούς, και το κάτω ρύθμιση των

XAF1

έκφραση συσχετίστηκε σημαντικά με τα στάδια του όγκου, της μετάστασης και ούτω καθεξής, που εμπλέκουν απώλεια του

XAF1

λειτουργία στην πρόοδο του όγκου. Αυτό είναι συνεπές με άλλες ερευνητικές εκθέσεις [17] – [19]. Για να εξερευνήσετε των μοριακών μηχανισμών που ευθύνονται για το

XAF1

σιωπή, εξετάσαμε

XAF1

μεθυλίωση προαγωγού σε ένα μεγάλο πίνακα γαστρικό καρκινικούς ιστούς (

n

= 202) και υγιών μαρτύρων (

n

= 88) με τη χρήση της τεχνολογίας MSP πραγματικό χρόνο. Διαπιστώσαμε μια υψηλή συχνότητα (83,2%) του DNA υπερμεθυλίωση

XAF1

στο γαστρικό καρκινικούς ιστούς. Το DNA υπερμεθυλίωση

XAF1

σημαντική συσχετίζεται με την προς τα κάτω ρύθμιση του

XAF1

τόσο mRNA και τα επίπεδα πρωτεΐνης στο γαστρικό καρκινικούς ιστούς (Εικόνα 3). Επιπλέον, η θεραπεία 5-Αζα-CdR αποκατασταθεί σημαντικά

XAF1

έκφραση σε

XAF1

σιγήσει γαστρικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές (Σχήμα 4). Αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν έντονα ότι η συχνή ρύθμιση προς τα κάτω του

XAF1

στα γαστρικά καρκινικά κύτταρα ρυθμίζεται από υπερμεθυλίωση προαγωγέα της. Είναι ενδιαφέρον, θεραπεία του γαστρικού καρκινικών κυττάρων με TSA, έναν αναστολέα αποακετυλάσης ιστόνης αποκατασταθεί επίσης

XAF1

έκφρασης, μόνο του ή σε συνδυασμό με θεραπεία 5-Αζα-CdR, υποδεικνύοντας ότι η τροποποίηση της ιστόνης μπορεί επίσης να εμπλέκεται σε

XAF1

ρύθμιση

μεθυλίωσης του DNA μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως μια πιθανή βιοδείκτη όγκου σε διάφορους ανθρώπινους καρκίνους [3] – [11], [23]. Η παρουσία του ελεύθερου κυττάρων DNA που κυκλοφορούν στο περιφερικό αίμα έχει περιγραφεί σε ασθενείς με κακοήθεις διεργασίες, και την ενεργό απελευθέρωση του DNA του όγκου στην κυκλοφορία έχει αναφερθεί [29] – [31].