Αφηρημένο

Μια σειρά από εκθέσεις έδειξαν ότι Aurora-Α ή Aurora-Β υπερέκφραση αντιπροσώπευε ένα αρνητικό προγνωστικό παράγοντα σε αρκετές ανθρώπινη κακοήθειες. Στον καρκίνο του θυρεοειδούς ιστούς μια απορυθμισμένη έκφραση της Aurora κινασών έχει επίσης αποδειχθεί, butno πληροφορίες σχετικά με πιθανή προγνωστική ρόλο της στην διαφοροποιημένο καρκίνο του θυρεοειδούς είναι διαθέσιμη. Εδώ, weevaluated Aurora-Α και η έκφραση του mRNA Aurora-Β και προγνωστική σημασία της σε μια σειρά από 87 θηλώδες καρκίνων του θυρεοειδούς (PTC), με διάμεση παρακολούθηση 63 μηνών. Η ανάλυση των επιπέδων Aurora-Β mRNA Aurora-Α και σε ιστούς PTC, σε σύγκριση με την κανονική συμφωνημένα ιστούς, αποκάλυψε ότι η έκφραση τους ήταν είτε επέκτασης ή υποβιβασμού regulatedin την πλειοψηφία των καρκινικών ιστών. Ειδικότερα, η Aurora-A και τα επίπεδα Aurora-Β mRNA τροποποιήθηκαν, αντίστοιχα, σε 55 (63,2%) και 79 (90,8%) από τις 87 PTC analyzed.A σημαντική θετική συσχέτιση μεταξύ mRNAswas Aurora-Α και Αυτοτα-Β που παρατηρήθηκαν (ρ = 0,001). Η έκφραση και των δύο γονιδίων Aurora δεν επηρεάστηκε από την BRAF

μετάλλαξη V600E. Μονοπαραγοντική, πολυπαραγοντική και Kaplan-Mayer αναλύσεις τεκμηριώσει την έλλειψη σύνδεσης μεταξύ Aurora-Α ή έκφραση Aurora-Β και κλινικοπαθολογοανατομικές parameterssuch όπως το φύλο, την ηλικία, το μέγεθος του όγκου, ιστολογία, το στάδιο TNM, λεμφικό μετάσταση στους λεμφαδένες και το καθεστώς BRAF καθώς asdisease υποτροπές ή ασθένειας -δωρεάν διάστημα. Μόνο Aurora-Β mRNA ήταν σημαντικά υψηλότερη σε Τ (3-4) σε ιστούς, σε σχέση με Τ (1-2) PTC ιστούς. Τα δεδομένα που αναφέρονται εδώ δείχνουν ότι η έκφραση της Aurora κινασών απορυθμίζεται στην πλειονότητα των ιστών PTC, πιθανόν συμβάλλοντας στην εξέλιξη PTC. Ωστόσο, διαφορετικά από άλλες ανθρώπινες στερεά καρκίνους, η ανίχνευση της Aurora-Α ή Aurora-Β mRNAs δεν αποτελεί προγνωστικό βιοδείκτη inPTC ασθενείς

Παράθεση:. Baldini E, Tuccilli C, Prinzi Ν, Sorrenti S, Falvo L, de Vito C, et al. (2015) η απορρύθμιση της έκφρασής του Aurora κινασών δεν είναι ένα Πρόγνωσης βιοδεικτών στο θηλώδες καρκίνο του θυρεοειδούς ασθενείς. PLoS ONE 10 (3): e0121514. doi: 10.1371 /journal.pone.0121514

Ακαδημαϊκό Επιμέλεια: Adriano Angelucci, Πανεπιστήμιο της Λ ‘Άκουιλα, Ιταλία

Ελήφθη: 9 Δεκεμβρίου του 2014? Αποδεκτές: 2 του Φεβρουαρίου 2015? Δημοσιεύθηκε: 25 του Μάρτη του 2015

Copyright: © 2015 Baldini et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του χαρτιού

Χρηματοδότηση:. το έργο αυτό ήταν η υποστήριξη με επιχορήγηση (ΠΡΙΝ 2010BX2SNA_007) του Ministero dell’Istruzione, dell’Università e della Ricerca. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Η συχνότητα των διαφοροποιημένων καρκίνων του θυρεοειδούς (DTC) έχει αυξηθεί κατά τις τελευταίες δεκαετίες, κυρίως λόγω της αυξανόμενης ικανότητα να διαγνώσουν κακοήθη μετασχηματισμό σε μικρές μη ψηλαφητών οζιδίων [1-4]. DTC περιλαμβάνουν δύο κύριες ιστολογικές οντότητες, το σπάνιο θυλακιώδες καρκίνωμα του θυρεοειδούς (FTC) και themore κοινή θηλώδες καρκίνωμα του θυρεοειδούς (PTC). Μετά αποδιαφοροποίηση DTCare ανέλαβε να δημιουργήσει κακώς DTC (PDTC) και άκρως επιθετική αναπλαστικά καρκινώματα του θυρεοειδούς (ATC) [5-6]. Σχετικές μοριακές μεταβολές που ανέκυψαν κατά την εξέλιξη του καρκίνου του θυρεοειδούς περιλαμβάνει γονίδιο αναδιατάξεις των υποδοχέων κινάσης τυροσίνης, όπως η RET /PTC και ΝΤΡΚ1, ενεργοποιώντας μεταλλάξεις σημείου των γονιδίων RAS και BRAF, και η πρωτεΐνη σύντηξης ογκογόνου-PAX8 ΡΡΑΚγ [7].

Η πρόγνωση του DTC ασθενείς συνήθως είναι ευνοϊκή, με ποσοστό 10-year-επιβίωσης για περίπου το 90% από αυτούς. Παρ ‘όλα αυτά, περίπου το 20% των ασθενών που αντιμετωπίζουν υποτροπή της νόσου και DTC που σχετίζονται με θανάτους [8]. Η διαστρωμάτωση και την πρόγνωση των ασθενών DTC βασίζονται σε κλινικοπαθολογοανατομικές μεταβλητές, όπως η ηλικία του ασθενούς, το μέγεθος του όγκου, ιστολογία, λεμφικό κομβικά ή μακρινή μετάσταση [8-11]. Αυτές οι παράμετροι, πάντως, είναι ικανά να παρέχουν μόνο μια πρόχειρη πρόβλεψη της έκβασης της νόσου, τη διάθεση ασθενείς με πολύ διαφορετικές εξέλιξη και επιβίωση φορές συγκεκριμένες ασθένειες μέσα στην ίδια ομάδα κινδύνου. Ομοίως, αποτυγχάνουν να προβλέψουν τον κίνδυνο υποτροπής του καρκίνου. Ως εκ τούτου, απαιτείται η ταυτοποίηση νέων προγνωστικών μοριακοί βιοδείκτες σε θέση να καταθέσει την επιθετικότητα του όγκου [11-17].

Η γενετική αστάθεια οδηγεί σε κυτταρικό ανευπλοειδία και μετάβαση σε πιο επιθετική φαινοτύπους αντιπροσωπεύει ένα σήμα κατατεθέν των στερεών καρκίνων, συμπεριλαμβανομένων των καρκινωμάτων του θυρεοειδούς [18-22] .Στην πραγματικότητα, ο αριθμός και η συχνότητα των χρωμοσωμικών ανωμαλιών που παρατηρήθηκαν σε καρκίνους του θυρεοειδούς αυξηθεί από DTC με PDTC και ATC [5, 20]. Διαφορετικές μιτωτική κινάσες, των οποίων η έκφραση ή λειτουργία έχει βρεθεί αλλοιωμένη σε καρκινικά κύτταρα, θεωρούνται υπεύθυνοι για όγκο γενετική αστάθεια. Αυτά περιλαμβάνουν τα τρία μέλη της οικογένειας Aurora κινάση, Aurora-Α, -Β και -C, εμπλέκεται στη ρύθμιση των πολλαπλών πτυχών του χρωμοσώματος διαχωρισμού και την κυτοκίνηση [23]. Κατά τη διάρκεια του κυτταρικού κύκλου, η έκφραση τους είναι στενά ρυθμισμένη, που είναι μέγιστη στην G2 /M φάση, ενώ η ταχεία αποικοδόμηση τους στο τέλος της μίτωσης η οδός ουβικιτίνης-πρωτεασώματος απαιτείται για να επιτρέψει το κύτταρο να εισέλθει σε ένα νέο κυτταρικό κύκλο [23 ]. Aurora-A εντοπίζεται επάνω στις διπλές κεντροσωμάτια και εμπλέκεται σε μιτωτική είσοδο, κεντροσωμάτων και άτρακτος ωρίμανση, ενώ Aurora-Β συνδέεται με χρωματίνη, όπου σχηματίζει το σύμπλοκο λεγόμενο χρωμοσωμικό επιβάτη (CPC) με άλλες πρωτεΐνες όπως INCENP, survivin και borealin , συμμετέχοντας σε συμπύκνωση χρωμοσώματος [23]. Επιπλέον, κατά τη μετάβαση από ανάφαση να τελόφασης, Aurora-Β παίζει ένα ρόλο στην μιτωτική άτρακτο δυναμική, οι συνδέσεις των χρωμοσωμάτων στον πείρο μικροσωληνίσκους, και αυλάκι διάσπαση. Aurora-C εκφράζεται κυρίως στους όρχεις και, παρομοίως με Aurora-Β, έχει αποδειχθεί να ενταχθούν στην CPC σε μιτωτικά κύτταρα [23]. Λαμβάνοντας υπόψη τα κρίσιμα καθήκοντα της Aurora κινασών σε όλα τα στάδια της μιτωτικής, δυσλειτουργία και /ή απορύθμιση θεωρούνται υπεύθυνοι, τουλάχιστον εν μέρει, για τις μη φυσιολογικές κυτταρικές διαιρέσεις και ανευπλοειδία παρατηρούνται σε κακοήθη κύτταρα. Σε συμφωνία με αυτό, η υπερέκφραση του Aurora-Α και /ή Aurora-Β έχει δειχθεί ότι συνδέουν με κακή πρόγνωση σε πολλές ανθρώπινες κακοήθειες, συμπεριλαμβανομένου του μαστού, του στομάχου, του προστάτη, κεφαλής και λαιμού, της ουροδόχου κύστης, των ωοθηκών, του παχέος εντέρου, του φλοιού των επινεφριδίων και των πνευμόνων καρκίνους [24-31].

Τα στοιχεία από τη δική και άλλες ερευνητικές ομάδες μας έδειξαν στο παρελθόν μια αλλαγμένη έκφραση της Aurora κινασών σε διάφορες καρκίνου του θυρεοειδούς που προέρχονται κυτταρικές σειρές και ιστούς [32-35]. Αν και αυτές οι κινάσες τώρα αναδύονται ως πολλά υποσχόμενη νέων θεραπευτικών στόχων για τη θεραπεία του καρκίνου του θυρεοειδούς, καμία προσπάθεια ήταν madeso μακριά για να αξιολογήσει την πιθανή προγνωστική αξία των κινασών Aurora σε ασθενείς PTC [23, 36-39]. Στην παρούσα studywe αξιολογούνται, μέσω της ποσοτικής RT-PCR, το επίπεδο έκφρασης της Aurora-Α και Aurora-Β σε μια μελέτη περίπτωσης των 87 PTC ιστούς συγκρίνεται με φυσιολογικούς ιστούς. Τα δεδομένα στη συνέχεια συσχετίζεται με τις παραμέτρους και κλινικοπαθολογοανατομικές με την ασθένεια διάστημα χωρίς ασθενών. Επιπλέον, δεδομένου ότι το BRAF

μετάλλαξη V600E, το απαντώνται συχνότερα μεταβολή PTC, δείχθηκε πρόσφατα ότι επάγει την έκφραση της Aurora-Β σε κύτταρα μελανώματος, τα αποτελέσματα της μετάλλαξης BRAF για την έκφραση των κινασών Aurora σε ιστούς PTC αξιολογήθηκε επίσης [40]

Υλικά και Μέθοδοι

δείγματα ιστών, ιστολογία και στάσης

ασθενούς

Η περιπτωσιολογική μελέτη περιελάμβανε 87 διαδοχικούς ασθενείς.? κανονική και συμφωνημένα ιστούς του θυρεοειδούς όγκου ελήφθησαν από χειρουργικά δείγματα των 19 αρσενικά και 68 θηλυκά (εύρος ηλικίας 11-83 ετών, μέση 44.21yrs), οι οποίοι υποβλήθηκαν σε ολική θυρεοειδεκτομή για PTC στο Τμήμα Χειρουργικής Επιστημών, «Sapienza» Πανεπιστήμιο της Ρώμης (n = 31) ή στο Τμήμα της Ιατρικής και Χειρουργικής Επιστημών, Πανεπιστήμιο της Πάντοβα, Ιταλία (n = 56) .Όλα ασθενείς έδωσαν γραπτή συγκατάθεση τους. Για τρεις ανήλικους ασθενείς λήφθηκε η έγγραφη συγκατάθεση από τους γονείς τους. Η μελέτη εγκρίθηκε από την επιτροπή δεοντολογίας του νοσοκομείου Policlinico Umberto I (Κωδ. 2615). Δείγματα ιστών συλλέχθηκαν, καταψύχθηκαν σε υγρό άζωτο και αποθηκεύτηκαν στους -80 ° C. Από τους 87 ασθενείς PTC, 76 παρουσίασαν την κλασική, 10 η ωοθυλακίων, και 1 η παραλλαγή ψηλό κυττάρων. Δύο διαφορετικές ιστοπαθολόγους έκανε τις ιστολογικές διαγνώσεις ανεξάρτητα σύμφωνα με την ταξινόμηση του Παγκόσμιου Οργανισμού Υγείας και τυφλό τρόπο σε σχέση με την έκφραση της κινάσης Aurora [41]. Κατά το χρόνο της χειρουργικής επέμβασης, μεταστάσεων λεμφαδένων βρέθηκαν σε 38 ασθενείς. Μετά ΤΝΜ σταδιοποίηση, 54 ασθενείς που διαπιστώνεται ότι το στάδιο Ι, 1 στο στάδιο ΙΙ, 25 στο στάδιο ΙΙΙ και 7 στο στάδιο IV. Σαράντα έως πενήντα ημέρες μετά την επέμβαση, όλοι οι ασθενείς υποβλήθηκαν σε ραδιενεργό ιώδιο θεραπεία και η μετέπειτα ολόκληρο σάρωση σώματος (WBS) έδειξε την απουσία των μεταστάσεων. Οι ασθενείς στη συνέχεια άρχισε θυρεοειδούς θεραπεία ορμονικής υποκατάστασης. Για να εξακριβωθεί ελεύθερη νόσου κατάστασή τους, από 4 έως 5 μήνες αργότερα όλοι οι ασθενείς υποβλήθηκαν σε υπέρηχο στο λαιμό και τη μέτρηση της θυρεοσφαιρίνης ορού (Tg). Υποτροπές διαγνώστηκαν με λεπτή βελόνα (FNA) κυτταρολογία,

131I WBS ή ιστολογική ανάλυση μετά από χειρουργική εκτομή της βλάβης. Από τους 87 ασθενείς, η παρακολούθηση (διάμεση τιμή 63 μήνες, εύρος 8-133months) ήταν διαθέσιμα για 78 (18 άνδρες και 60 γυναίκες με μέση ηλικία των 44yr), 52of τους οποίους ήταν στο στάδιο TNM Ι-ΙΙ και το υπόλοιπο 26 σε σταδίου III-IV. Το κατώτερο όριο φορές προς επανάληψη ξεκίνησε στους 6 μήνες. Κατά τη διάρκεια καταγράφηκαν οι παρακολούθηση 21 υποτροπές, 17 είναι τραχηλικούς λεμφαδένες, διαγνώστηκε με FNA κυτταρολογία και 4 μεταστάσεις στους πνεύμονες, που είχαν διαγνωστεί με WBS.

Προσδιορισμός του BRAF

μετάλλαξη V600E

Γενωμικό DNA εκχυλίστηκε από τα κατεψυγμένα ιστούς χρησιμοποιώντας το κιτ DNeasy αίμα και τους ιστούς, σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Η κατάσταση BRAF του εξονίου 15 εκτιμήθηκε τόσο από την άμεση αλληλούχιση και μεταλλαγμένο αλληλόμορφο-ειδική ενίσχυση PCR για την Τ προς Α υποκατάσταση στο νουκλεοτίδιο 1799 (V600E), χρησιμοποιώντας τη διαδικασία που προηγουμένως describedand σε τυφλό τρόπο σε σχέση με την έκφραση της κινάσης Aurora [42].

καλλιέργεια κυττάρων PCCL3

Το καλά διαφοροποιημένο, μη μετατραπεί αρουραίος θυρεοειδούς επιθηλιακά κυτταρική σειρά PCCL3 ήταν ένα δώρο από τον Dr. JA Fagin (Memorial Sloan-Kettering Cancer Center, Νέα Υόρκη). Τα κύτταρα πολλαπλασιάστηκαν σε H4 πλήρες μέσο που αποτελείται από μέσο /F12 υψηλής ψευδάργυρος Coon συμπληρωμένο με 5% ορό εμβρύου μόσχου, 0,3 mg /ml L-γλουταμίνη, 1 mIU /ml TSH, 10 μg /ml ινσουλίνη, 5 μg /ml από- τρανσφερίνη, 10 ηΜ υδροκορτιζόνης, και πενικιλλίνη /στρεπτομυκίνη. Αυτά τα κύτταρα υπό όρους εκφράζουν BRAF

V600E σε δοξυκυκλίνη-εξαρτώμενο τρόπο [43]. Το

επαγωγή V600E BRAF ελήφθη με την προσθήκη στο Η4 πλήρες μέσο δοξυκυκλίνη 1 μg /ml, και επώαση των κυττάρων για 48 ώρες.

Εξαγωγή και ανάλυση του mRNA

Οι ιστοί του θυρεοειδούς ήταν ομογενοποιούνται με τον ultra-Turrax, και το συνολικό RNA εκχυλίστηκε από τα κύτταρα ή ιστούς PCCL3 την εφαρμογή της μεθόδου θειοκυανικού-φαινόλης-χλωροφορμίου οξύ γουανιδινίου [44]. Ο πρώτος κλώνος cDNA συντέθηκε από 5 μg του RNA με την M-MLV αντίστροφη μεταγραφάση και στάσιμων ολίγο (dT) 23 εκκινητές (Sigma Chemicals Co.). Παράλληλες έλεγχοι για μόλυνση του DNA διεξήχθησαν παραλείποντας την αντίστροφη μεταγραφάση. Τα πρότυπα που αποκτήθηκαν χρησιμοποιούνται για την ποσοτική PCR ενισχύσεις των κινασών Aurora και τα γονίδια καθαριότητας που απασχολούν το μέσο LightCycler (Roche Diagnostics, Mannheim, Germany), το SYBR Προμίγματα Ex Taq II (TliRNase Η Plus) (Takara, Οτσού, Σίγκα, Ιαπωνία) και ειδικούς εκκινητές παρατίθενται στον πίνακα 1. εξειδικεύσεις αμπλικονίου ελέγχθηκαν με αυτοματοποιημένη αλληλούχιση του DNA (Primm, San Raffaele Βιοϊατρικών Επιστημών Park, Μιλάνο, Ιταλία), αξιολόγηση των θερμοκρασιών τήξης, ή /και ηλεκτροφόρηση σε γέλη αγαρόζης 2% που περιέχει βρωμιούχο αιθίδιο. Πρότυπες καμπύλες για όλα τα γονίδια επιτεύχθηκαν με πέντε-φορές αραιώσεις κυττάρων PCCL3 ή μικτών cDNA ανθρώπινης θυρεοειδούς ιστού. Υπολογισμός των δεδομένων για τους ανθρώπινους ιστούς θυρεοειδούς διεξήχθη με Το λογισμικό εργαλείο σχετική έκφραση (REST 2009) χρησιμοποιώντας ένα παράγοντα κανονικοποίησης (NF) υπολογίζεται ως το γεωμετρικό media 3 γονίδια αναφοράς (GAPDH, RPL13A και SDHA), όπως περιγράφηκε προηγουμένως [45, 46 ]. Η φορές αλλαγή της έκφρασης της κινάσης Aurora για κάθε δείγμα όγκου που αναφέρεται στην κανονική ομόλογό του. Η ανάλυση αυτή performedin τυφλό τρόπο σε σχέση με ιστολογικά και κλινικά δεδομένα των ασθενών. Fold διακυμάνσεις μεταξύ 0,8 και 1,2 θεωρήθηκαν αμετάβλητη. Οι υπολογισμοί των δεδομένων για τα πειράματα σε κύτταρα PCCL3 διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό LightCycler σχετική ποσοτικοποίηση 1.0 (Roche Diagnostics), και η πτυχή έκφραση κινασών Aurora για κύτταρα PCCL3 υποστεί αγωγή με ντοξυκυκλίνη ομαλοποιήθηκε έναντι μη-κατεργασμένα κύτταρα. Όλα τα αποτελέσματα αναφέρονται ως μέσος όρος ± SEM και διάμεσες τιμές.

Η

Στατιστική ανάλυση

Η μη παραμετρική δοκιμή Mann Whitney χρησιμοποιήθηκε για τον υπολογισμό της στατιστικής σημαντικότητας των διαφορών στα επίπεδα έκφρασης της Aurora κινάσες σε PTC με την απορυθμισμένη έκφραση έναντι PTC με αμετάβλητα τα επίπεδα mRNA, και σε άγριου τύπου σε σχέση με μεταλλαγμένα δείγματα BRAF. Επιπλέον, η συσχέτιση της έκφρασης των κινασών Aurora με το φύλο, την ιστολογία, λεμφικό μετάσταση στους λεμφαδένες, το στάδιο TNM ή υποτροπές αξιολογήθηκε με τη δοκιμασία Mann Whitney. Οι αναλύσεις της συσχέτισης μεταξύ Aurora-A και τα επίπεδα Aurora-Β mRNAs, καθώς και μεταξύ αυτών και της ηλικίας εκτελέσθηκαν χρησιμοποιώντας το τεστ Rho Spearman. Για να εκτιμηθεί η ανεξάρτητη ένωση των κινασών Aurora με DFI, εφαρμόστηκε το κείμενο παλινδρόμησης Cox. Η επίδραση της έκφρασης της κινάσης Aurora στην ελεύθερη νόσου διάστημα (DFI) εκτιμήθηκε με τη βοήθεια της ανάλυση Kaplan-Meier σε συνδυασμό με Mantel-Cox log-rank. Για την ανάλυση Kaplan-Meier, οι τιμές της κινάσης Aurora χωρίστηκαν σε τρεις ομάδες με βάση την αύξηση, αμετάβλητα ή μειωμένη έκφραση της κινάσης. Όλες οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας την έκδοση 8.0 του λογισμικού Stata (Stata Corporation 2003, College Station, ΤΧ). Τα αποτελέσματα θεωρήθηκαν σημαντικά διαφορετική αν σ τιμές ήταν χαμηλότερες από 0,05.

Αποτελέσματα

Η έκφραση των κινασών Aurora στο θηλώδους καρκίνου του θυρεοειδούς (PTC) ιστούς

Οι αναλύσεις της Aurora-Α και τα επίπεδα Aurora-B mRNA σε ιστούς PTC, σε σύγκριση με την κανονική συμφωνημένα ιστούς τους, αποκάλυψε ότι Aurora-Α mRNA levelswere απορυθμισμένη σε 55 (63,2%) από 87 δείγματα PTC, με αύξηση σε 30 και μία μείωση σε 25 (Σχ. 1Α). επίπεδα Aurora-Β mRNA μεταβλήθηκαν σε 79 (90,8%) από 87 δείγματα, που είναι επάνω ρυθμισμένη σε 57 και ρυθμισμένα προς τα κάτω σε 22 (Εικ. 1 Β) των περιπτώσεων. Όπως αναφέρεται στο σχ. 1C, τα επίπεδα mRNA του Aurora-Α και Αυτοτα-Β συσχετίζεται θετικά με το άλλο (p = 0,001).

Α και Β) Οι αποκλίσεις στην έκφραση του Aurora-Α και Αυτοτα-Β σε θηλώδους καρκίνου του θυρεοειδούς ιστούς. Τα φορές αλλαγές υπολογίστηκαν λαμβάνοντας υπόψη την Aurora-Α ή επίπεδα Aurora-Β mRNAs που παρατηρήθηκαν σε φυσιολογικά συμφωνημένα θυρεοειδικού ιστού ίσο με 1. Η στατιστική αξιολόγηση των δεδομένων έγινε usingthe μη-παραμετρικό τεστ Mann-Whitney. Τα μικρά μπαρ στο γράφημα δείχνουν τις μέσες τιμές. Γ) ανάλυση Συσχέτιση της Aurora-Α και Aurora-B mRNAs σε ιστούς PTC. Τα δεδομένα που αξιολογήθηκαν από την εφαρμογή του τεστ Rho Spearman.

Η

BRAF

μετάλλαξη V600E και την έκφραση της κινάσης Aurora σε ιστούς PTC

Για να εκτιμηθεί η επίδραση της BRAF

V600E μετάλλαξη σχετικά με την έκφραση του Aurora-Α και Αυτοτα-Β αναλύσαμε πρώτα το επίπεδο του mRNA και των δύο γονιδίων σε BRAF

όγκους V600E PTC (n = 37), σε σύγκριση με εκείνα που φέρουν το αγρίου τύπου πρωτεΐνη (n = 38) (Σχ. 2Α). Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι thepresence του BRAF

V600Emutation δεν επηρέασε τα επίπεδα έκφρασης του Aurora-Α ή Aurora-Β στους ιστούς PTC, σε σύγκριση με την άγριου τύπου BRAF PTC ιστούς. Για να επιβεβαιωθούν αυτά τα

in vivo

παρατηρήσεις, πραγματοποιήσαμε

in vitro

πειράματα σε καλά διαφοροποιημένα, μη μετασχηματισμένα αρουραίου επιθηλιακά κυτταρική σειρά PCCL3, χαρακτηρίζεται από μια δοξυκυκλίνη εξαρτώμενη BRAF

V600E σύστημα έκφρασης [50]. Σε αυτά τα κύτταρα ο BRAF

έκφραση V600E και επακόλουθη επαγωγή της /ΕΚΚ μονοπάτι φωσφορυλίωσης ΜΕΚ εμφανίστηκε 12 ώρες μετά την προσθήκη του δοξυκυκλίνη, και η συνολική έκφραση BRAF (ενδογενής άγριου τύπου + επαγόμενη μεταλλαγμένο V600E) σε 48 ώρες εκτιμήθηκε σε είναι 2-φορές μεγαλύτερη από τον έλεγχο. Όπως αναφέρεται στο σχ. 2Β, η θεραπεία των PCCL3 με δοξυκυκλίνη (1 μg /ml για 48 ώρες) δεν επηρεάζει τα επίπεδα του mRNA της κινάσης Aurora.

Α) Εκφραση του Aurora-Α και Αυτοτα-Β σε θηλώδους καρκίνου του θυρεοειδούς ιστούς με άγριου τύπου (n = 38) ή μεταλλαγμένου BRAF (n = 37). Οι πολλαπλές μεταβολές υπολογίστηκαν λαμβάνοντας υπόψη την Aurora-Α ή επίπεδο Aurora-Β mRNAs που παρατηρήθηκαν σε φυσιολογικά συμφωνημένα ιστό θυρεοειδούς ίσο προς 1. Η στατιστική αξιολόγηση των δεδομένων πραγματοποιήθηκε με την εφαρμογή της μη παραμετρικής δοκιμής Mann Withney. Τα μικρά μπαρ στο γράφημα δείχνουν τις μέσες τιμές. Β) Επίδραση των BRAF

V600E σε Aurora κινασών mRNAs στα κύτταρα PCCL3. Ο τελευταίος προκλήθηκαν να εκφράσουν BRAF V600E

σε ένα δοξυκυκλίνη-εξαρτώμενο τρόπο. Οι αλλαγές πτυχή του Aurora mRNA της κινάσης ομαλοποιήθηκαν έναντι των μη κατεργασμένων κυττάρων.

Η

Προγνωστική σημασία της έκφρασης της κινάσης Aurora σε ασθενείς PTC

Παραλλαγές στην έκφραση της Aurora-A δεν συνδέσει με οποιαδήποτε από τις κλινικοπαθολογοανατομικών παραμέτρους που αναλύθηκαν (Πίνακας 2), ενώ apositive συσχέτιση (p & lt? 0.001) βρέθηκε μεταξύ των επιπέδων Aurora-Β mRNA και το μέγεθος του όγκου (Πίνακας 2) ανάλυση .Η Kaplan-Meier έδειξε καμία συσχέτιση μεταξύ των ασθενών ελεύθερη νόσου διαστήματος και της κινάσης Aurora πάνω ή προς τα κάτω ρύθμιση (Εικ. 3). Η πολυπαραγοντική ανάλυση έδειξε ότι η αυξημένη ή μειωμένη έκφραση της Aurora-Α ή Aurora-Β, το στάδιο TNM, την ηλικία ή το BRAF

V600E μετάλλαξη απέτυχε να προβλέψει την πορεία της νόσου (Πίνακας 3). Μόνο τα θηλυκά έδειξαν μια στατιστικά σημαντική μείωση του δείκτη κινδύνου (HR 0,286) για υποτροπές της νόσου (Πίνακας 3).

ανάλυση Kaplan-Meier σε συνδυασμό με Mantel-Cox log-rank στατιστική δοκιμή πραγματοποιήθηκε σε 75 ασθενείς PTC Ακολούθησαν μέχρι 8-133 μήνες.

Η

Η

Συζήτηση

σε προηγούμενες μελέτες, άλλες ερευνητικές ομάδες μας και έδειξε μια απορυθμισμένη έκφραση της Aurora κινασών σε διαφοροποιημένες και αναπλαστικά του θυρεοειδούς καρκινικούς ιστούς [23]. Αυτό επιβεβαιώθηκε στην παρούσα μελέτη όπου βρέθηκε Aurora-A και γονιδιακή έκφραση Aurora-Β είτε προς τα πάνω ρυθμισμένη ή προς τα κάτω ρυθμισμένα (63,2% και 90,8%, αντίστοιχα) στην πλειοψηφία του καρκίνου θηλώδους θυρεοειδούς αναλύθηκαν (PTC) ιστούς, σε σύγκριση με την κανονική συμφωνημένα ιστούς θυρεοειδούς τους. Αξίζει να σημειωθεί ότι είτε η ρύθμιση προς τα πάνω ή προς τα κάτω ρύθμιση των κινασών Aurora μπορεί να αποδειχθεί πολλαπλασιαστικώς συμφέρουσα για τον καρκίνο του θυρεοειδούς κύτταρα. Στην πραγματικότητα, διάφορες εκθέσεις απέδειξαν ότι η ποσότητα του Aurora-Α proteinin κεντροσώματος είναι κρίσιμη για αντιγραφή και μιτωτικές λειτουργίες του, και ότι είτε η έλλειψη ή περίσσεια του Aurora-Acan να οδηγήσει σε ανώμαλη μίτωσης, καθώς και προς το χρωμόσωμα του διαχωρισμού και την κυτοκίνηση ελαττώματα [ ,,,0],47].

έχει πρόσφατα αποδειχθεί ότι σε κύτταρα μελανώματος η έκφραση της Aurora-Β και Wee1-όπως κινάση πρωτεΐνης που προκαλείται από την παρουσία του BRAF

V600E [40]. Από BRAF

μετάλλαξη V600E συναντάται συχνά στην PTC, αναζητήσαμε επίσης να καθοριστεί αν η μετάλλαξη σε καρκινικά κύτταρα του θυρεοειδούς συνδέθηκε σε αυξημένη έκφραση του κινασών Aurora. Στη σειρά μας, η κατάσταση BRAF εκτιμήθηκε σε 75 PTC ιστούς και BRAF

V600E βρέθηκε σε 37 (49,3%) από αυτούς. Ωστόσο, καμία διαφορά στην έκφραση Aurora-Α ή Aurora-Β levelswas βρεθεί μεταξύ άγριου τύπου και BRAF

V600E PTC ιστούς. Αυτές οι παρατηρήσεις ήταν επιβεβαιώνεται από

in vitro

πειράματα σε κύτταρα PCCL3 θυρεοειδούς αρουραίου, εκφράζοντας την V600E BRAF

με δοξυκυκλίνη εξαρτώμενο τρόπο [43]. Στην πραγματικότητα, η θεραπεία αυτών των κυττάρων με δοξυκυκλίνη δεν επηρέασε το επίπεδο έκφρασης της είτε Aurora-Α ή Aurora-Β.

Κατά την τελευταία δεκαετία, ένα αριθμός των εκθέσεων έδειξε ότι η υπερέκφραση του Aurora-Α ή Aurora-Β αντιπροσωπεύει ένα αρνητικό προγνωστικό παράγοντα σε πολλές ανθρώπινες κακοήθειες, συμπεριλαμβανομένου του μαστού, του στομάχου, του προστάτη, κεφαλής και λαιμού, της ουροδόχου κύστης, των ωοθηκών, του παχέος εντέρου, του φλοιού των επινεφριδίων και πνεύμονα [25-32]. Λιγότερες μελέτες, ωστόσο, σχετίζεται της υπερέκφρασης του Aurora-Α ή Aurora-Β με ευνοϊκή πρόγνωση σε ορθοκολικό, γαστρικά και καρκινώματα ωοθηκών [48-50]. Μέχρι σήμερα, δεν υπάρχουν πληροφορίες σχετικά με την πιθανή προγνωστική ρόλο των κινασών Aurora σε διαφοροποιημένο καρκίνο του θυρεοειδούς έχει αναφερθεί. Σε αυτό το πλαίσιο, εμείς εδώ αξιολόγησε την προγνωστική σημασία της Aurora-Α και τα επίπεδα Aurora-Β mRNA σε μια σειρά από 78 PTC, με διάμεση παρακολούθηση 63 μηνών. Η μονοπαραγοντική ανάλυση τεκμηριώνεται η έλλειψη σύνδεσης μεταξύ Aurora-Α έκφρασης και κλινικοπαθολογικών παραμέτρων, όπως η ηλικία, το φύλο, το μέγεθος του όγκου, λεμφικό μετάσταση στους λεμφαδένες, ιστολογία, ΤΝΜ, την κατάσταση BRAF και υποτροπές. Ομοίως, η έκφραση της Aurora-Β δεν συσχετίζονται με οποιαδήποτε από αυτές τις παραμέτρους, με εξαίρεση του μεγέθους του όγκου, όπου τα επίπεδα mRNA ήταν σημαντικά υψηλότερα σε Τ (3-4) σε ιστούς, σε σχέση με Τ (1-2) ιστούς. Kaplan-Meyer και πολυπαραγοντική αναλύσεις επιβεβαίωσαν ότι απορυθμισμένη έκφραση της Aurora κινασών δεν αποτελεί προγνωστικό βιοδείκτη των ασθενών θηλώδους καρκίνου του θυρεοειδούς. Στην πολυπαραγοντική ανάλυση γυναικείο φύλο έδειξε μία σημαντική προστατευτική δράση (αναλογία κινδύνου 0,286, p = 0,021). Το τελευταίο είναι σε συμφωνία με δύο πρόσφατες μελέτες που διεξήχθησαν σε μεγάλα περίπτωση σειράς που δείχνει τον προστατευτικό ρόλο του γυναικείου φύλου σε συγκεκριμένες ασθένειες επιβίωσης [51, 52] .είναι πρέπει να αναφερθεί ότι ένα όριο της παρούσας μελέτης είναι η σχετικά χαμηλή αριθμός των ασθενών που αναλύθηκαν τα οποία παρέχουν μια στατιστική ισχύ (1-β) των 0,63.

Συμπεράσματα

Εν κατακλείδι, αν και τα δεδομένα που αναφέρθηκαν hereneed να επιβεβαιωθεί μέσω της μεγαλύτερης περιπτωσιολογικές μελέτες, που έδειξαν ότι η έκφραση της Aurora κινασών απορυθμίζεται στην πλειονότητα των ιστών PTC, και πιθανώς συμβάλλει στην PTC εξέλιξης και καρκινικών κυττάρων ανευπλοειδία. Ωστόσο, διαφορετικά από άλλους ανθρώπινους συμπαγείς καρκίνοι, έκφραση Aurora-Β Aurora-Α ή στο επίπεδο του mRNA δεν αποτελεί προγνωστικό βιοδείκτη σε περίπτωση ασθενών PTC.