Αφηρημένο

Ιστορικό

επίπεδα μεθυλίωσης της μακράς διάσπαρτα στοιχεία νουκλεοτιδίων (LINE-1) είναι αντιπροσωπευτικά της κατάστασης μεθυλίωσης του γονιδιώματος-ευρεία και ζωτικής σημασίας για τη διατήρηση της γονιδιωματικής σταθερότητας και της έκφρασης. προγνωστική επιπτώσεις τους σε ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου που λαμβάνουν επικουρική χημειοθεραπεία δεν έχει εδραιωθεί. Αξιολογήσαμε τη συσχέτιση μεταξύ της κατάστασης LINE-1 μεθυλίωση και κλινικοπαθολογική χαρακτηριστικά και μετεγχειρητική ογκολογικά αποτελέσματα σε στάδιο ΙΙΙ ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου.

Υλικά και Μέθοδοι

129 UICC σταδίου ΙΙΙ ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου οι οποίοι είχαν λάβει ριζοσπαστικές εκτομή και FOLFOX επικουρική χημειοθεραπεία είχαν εγγραφεί. Παγκόσμια μεθυλίωση εκτιμήθηκε αναλύοντας γραμμή όγκου-1 κατάσταση μεθυλίωσης χρησιμοποιώντας αλυσιδωτή αντίδραση διθειώδες-πολυμεράσης (PCR) και ανίχνευση Pyrosequencing. Δημογραφικά στοιχεία, κλινικοπαθολογοανατομικές δεδομένων, και μετεγχειρητική αποτελέσματα καταγράφηκαν από εκπαιδευμένους ληπτών. μετρήσεις έκβασης που περιλαμβάνονται μετεγχειρητική υποτροπή και επιβίωση ελεύθερη νόσου. Μονοπαραγοντική, πολυπαραγοντική, και την επιβίωση αναλύσεις διεξήχθησαν για τον εντοπισμό προγνωστικούς παράγοντες ογκολογικών αποτελέσματα.

Αποτελέσματα

Το LINE-1 μεθυλίωση όλων των 129 ασθενών μετρήθηκε σε μια κλίμακα 0-100 (μέσος όρος 63,3 ? διάμεση 63,7, τυπική απόκλιση 7,1), LINE-1 υπομεθυλίωση ήταν πιο συχνή σε ασθενείς ηλικίας 65 ετών και άνω (61,7% ± 7,6% έναντι 64,6 ± 6,4,

σ

= 0,019) και εκείνοι με μετα- θεραπευτική υποτροπής (61,7 ± 7,4 έναντι 64,3 ± 6,7,

σ

= 0,041). Λαμβάνοντας υπόψη προσαρμογή στον κίνδυνο, LINE-1 υπομεθυλίωση βρέθηκε να αποτελεί ανεξάρτητο παράγοντα κινδύνου της μετα-θεραπευτική υποτροπής (Adjusted OR = 14,1,

σ

= 0.012). Η ανάλυση Kaplan-Meier έδειξε ότι οι ασθενείς στην ομάδα χαμηλού μεθυλίωση είχαν μικρότερο χρονικό διάστημα ελεύθερο νόσου (

σ

= 0,01). Σε μία στρωματοποιημένη ανάλυση που περιλάμβανε 48 ασθενείς με μετα-θεραπευτική επανάληψη, διαπιστώθηκε ότι εκείνοι που εμφάνισαν μικρότερο χρονικό επιβίωσης χωρίς νόσο (≦ 6 μήνες) φάνηκε να έχουν χαμηλότερα 1 LINE-επίπεδα μεθυλίωσης σχέση με τους ασθενείς που ανέφεραν επανάληψης μετά από 6 μήνες (56,68 ± 15,75 έναντι 63,55 ± 7,57,

σ

= 0,041)

Συμπέρασμα

υπήρχε ένα σημαντικά μεγαλύτερο κίνδυνο πρόωρης μετεγχειρητική υποτροπή και ένα μικρότερο χρονικό διάστημα από ασθένειες επιβίωση χωρίς στο στάδιο ΙΙΙ ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου παρουσιάζουν LINE-1 κατάσταση υπομεθυλίωση μετά από θεραπεία με ριζική εκτομή και FOLFOX χημειοθεραπεία

Παράθεση:. Lou ΥΤ, Chen CW, Fan YC, Chang WC, Lu CY, Wu IC, et al. (2015) LINE-1 μεθυλίωση Κατάσταση Συσχετίζεται σημαντικά στη μετα-θεραπευτική Υποτροπή στο στάδιο ΙΙΙ ασθενείς καρκίνου του παχέος εντέρου λήψη FOLFOX-4 επικουρική χημειοθεραπεία. PLoS ONE 10 (4): e0123973. doi: 10.1371 /journal.pone.0123973

Ακαδημαϊκό Επιμέλεια: Γιάννης Souglakos, Πανεπιστήμιο Κρήτης, ΕΛΛΆΔΑ

Ελήφθη: 7η Οκτωβρίου 2014? Αποδεκτές: 24, Φεβ 2015? Δημοσιεύθηκε: 28 του Απριλίου, 2015

Copyright: © 2015 Lou et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. η μελέτη αυτή χρηματοδοτήθηκε από το Ίδρυμα Kaohsiung Ιατρικό Πανεπιστήμιο Έρευνας (KMU-1Μ-30), το Κέντρο για Βιοδείκτες και Biotech τα ναρκωτικά, Kaohsiung Ιατρικό Πανεπιστήμιο (KMU-TP103C03 , KMU-TP103H11), και η επιχορήγηση των Biosignature στην παχέος εντέρου, Academia Sinica, Ταϊβάν. ΣΧΟ και JYW λάβει τη χρηματοδότηση. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

έχει υπάρξει μια σταθερή αύξηση του καρκίνου του παχέος εντέρου (CRC) περιπτώσεις σε όλο τον κόσμο τα τελευταία χρόνια. Σύμφωνα με τις εκτιμήσεις GLOBOCAN παρουσιάστηκε το 2008, CRC είναι η τρίτη πιο κοινή μορφή καρκίνου στους άνδρες και η δεύτερη πιο συχνή στις γυναίκες [1]. Λόγω του πολλαπλασιασμού των ανθυγιεινή διατροφή και τον τρόπο ζωής στην Ταϊβάν, CRC έχει γίνει η τρίτη πιο κοινή αιτία θανάτου από καρκίνο. Τα τελευταία χρόνια, περισσότερα από 4.000 CRC ασθενείς έχουν πεθάνει σε ετήσια βάση (https://www.doh.gov.tw/statistic/index.htm? Προσεγγιστεί το Δεκέμβριο του 2013). Οι πρόσφατες βελτιώσεις στην ανίχνευση όγκων και επικουρική θεραπεία, ωστόσο, έχουν αυξήσει τις προσδόκιμο ζωής των ασθενών CRC [2]. Ωστόσο, παρά τη θεραπευτική χειρουργική επέμβαση και επικουρική χημειοθεραπεία, εξακολουθούν να υπάρχουν ένας σημαντικός αριθμός των ασθενών που αντιμετωπίζουν επανεμφάνιση του όγκου κατά τη διάρκεια της περιόδου παρακολούθησης τους. Πολλά προγράμματα μετεγχειρητική επιτήρησης έχουν προταθεί για την ανίχνευση της δυνατότητας επανάληψης σε πρώιμο στάδιο. Ιατρικές ερευνητές έχουν επίσης κατέληξαν σε συναίνεση για παρακολούθηση ρουτίνας του σταδίου ΙΙ και ΙΙΙ CRC ασθενείς που έχουν υποβληθεί σε θεραπεία με θεραπευτική χειρουργική επέμβαση [3-5]. Την ίδια στιγμή, πολλοί ερευνητές συνεχίζουν να ψάξετε εξελιγμένα βιοδείκτες ικανή για την αποτελεσματική ανίχνευση ασυμπτωματικών επανάληψη του CRC μετά την επέμβαση. Επί του παρόντος, ορισμένες βιοδείκτες είναι πολλά υποσχόμενη, αλλά εξακολουθεί να απέχει πολύ από το να είναι εκτιμητέο στους περισσότερους ασθενείς. Εν τω μεταξύ, η επισήμανση των ομάδων υψηλού κινδύνου που είναι επιρρεπείς σε υποτροπή φαίνεται να είναι μια άλλη τακτική μεταξύ των εντατικών στρατηγικών μετεγχειρητική παρακολούθησης που χρησιμοποιούνται σε αυτά τα ευαίσθητα πληθυσμούς.

CRC αναπτύσσεται οφείλεται σε γενετικούς και επιγενετικές αλλοιώσεις. Κατά την τελευταία δεκαετία, πολλές μελέτες έχουν ερευνήσει το ρόλο των επιγενετικών παραγόντων στην ανάπτυξη του CRC σε ασθενείς [6,7]. Επιγενετική, η οποία έχει περιγραφεί ως γέφυρα μεταξύ της γενετικής και του περιβάλλοντος, έχει βρεθεί να έχουν μια στενή σχέση με τη βιολογία του καρκίνου [8,9]. Επιγενετικές διαταραχές θα μπορούσαν να είναι κληρονομική αλλά αυτοί οι παράγοντες είναι επίσης αναστρέψιμη και μπορεί να αποδειχθεί χρήσιμη στην διαλεύκανση πολλών διφορούμενες πτυχές της καρκινογένεσης και της επανάληψης του όγκου σε ασθενείς CRC. Επιπλέον, δεδομένου ότι επιγενετικές γεγονότα μπορεί να αντιστραφεί, είμαστε σε θέση να ρυθμίζουν τη διαδικασία της χημικής τροποποίησης, συμπεριλαμβανομένων των πιθανών αντι-νεοπλασματική δράση [7,10].

Μεταξύ των διαφόρων επιγενετικές εκδηλώσεις, μεθυλίωση του DNA είναι ένα βασικό συστατικό της επιγενετική σε γονιδιώματος θηλαστικού που έχει ως αποτέλεσμα την προσθήκη ενός (CH

3) μεθυλική ομάδα στην θέση άνθρακα-5 του δακτυλίου κυτοσίνης. Δύο σημαντικοί προτύπων μεθυλίωσης που παρατηρείται συχνά σε CRC: η μία είναι υπερμεθυλίωση, η οποία συνήθως περιλαμβάνει νησίδες CpG, και το άλλο είναι υπομεθυλίωση, το οποίο συχνά συνεπάγεται επαναλαμβανόμενες αλληλουχίες του DNA [6,8]. Αν και οι αναφορές σε υπερμεθυλίωση σε κακοήθειες ξεπερνούν σε αριθμό εκθέσεων σχετικά με υπομεθυλίωση, ο τελευταίος φαίνεται να έχει γίνει ένα θέμα έντονης έρευνας τα τελευταία χρόνια [9,11]. Επιπλέον, τα επίπεδα μεθυλίωσης θα μπορούσε να επηρεαστεί από τις τεχνικές δειγματοληψίας, θέσεις όγκου, περιβαλλοντικούς παράγοντες, και την ηλικία του ασθενούς [9,12-15].

Παγκόσμια υπομεθυλίωσης του DNA μπορεί να οδηγήσει σε γενετική αστάθεια. στενή σχέση του με μια μεγάλη ποικιλία κακοηθειών, συμπεριλαμβανομένου CRC, έχει αναφερθεί σε προηγούμενες μελέτες [6,7,9]. Ρετροστοιχείων, επαναλαμβανόμενες αλληλουχίες μακρών διάσπαρτες πυρηνικών στοιχεία-1 (LINE-1), εμφανίζονται σε περίπου 18% του ανθρώπινου γονιδιώματος [16]. Αυτά ρετροστοιχείων μπορεί να έχει αρνητικές επιπτώσεις στο κύτταρο ξενιστή, αλλά είναι γενικά αναστέλλεται από κατασταλτικός μηχανισμούς. Ωστόσο, ρετροστοιχείων μπορεί να συνεισφέρει στην ογκογένεση σε διαφορετικά περιβάλλοντα. Παγκόσμια μεθυλίωση μπορεί να μετρηθεί έμμεσα μέσω της αξιολόγησης της κατάστασης μεθυλίωσης του LINE-1 [17]. Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι η δοκιμασία Pyrosequencing για LINE-1 μεθυλίωση είναι ποσοτική, αποτελεσματική και επαναλήψιμη [18-20].

Πρόσφατα, πολλοί επιγενετικές μελέτες έχουν αποκαλύψει τη σχέση μεταξύ LINE-1 μεθυλίωση και καρκίνους. Έχει προταθεί ότι ο βαθμός LINE-1 υπομεθυλίωση χρησιμεύει ως ανεξάρτητος παράγοντας για τον καθορισμό δυσμενής ογκολογικά αποτελέσματα σε ασθενείς CRC [18,21,22]. Ogino et al. διαπίστωσε ότι LINE-1 υπομεθυλίωσης είναι ένας ανεξάρτητος παράγοντας κινδύνου, υποδεικνύοντας υψηλή ειδική θνησιμότητα λόγω καρκίνου και τη συνολική θνησιμότητα στους ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου [21]. Sunami et al. Αναφέρθηκε επίσης ότι υπάρχει μια γραμμική σχέση μεταξύ της εξέλιξης της LINE-1 μεθυλίωση και την εξέλιξη του όγκου [23]. Goel et al. ανέφερε ότι η κληρονομική μη-πολυποειδούς καρκίνο του παχέος εντέρου (HPNCC) συσχετίστηκε με χαμηλότερο βαθμό LINE-1 μεθυλίωση [24]. Επιπλέον, ορισμένες μελέτες έχουν δείξει ότι η πρώιμη εμφάνιση CRC συνδέεται με χαμηλότερη LINE-μεθυλίωση και έχουν αναδείξει το δυναμικό ρόλο της ως προγνωστικό βιοδείκτη σε νεότερους ασθενείς CRC [18,25]. Ωστόσο, πολλοί ερευνητές έχουν προτείνει LINE-1 ως μια πολλά υποσχόμενη δείκτης για την πρόβλεψη της CRC πρόγνωση. Ως εκ τούτου, πιο ασθενή και σχετίζονται με τη θεραπεία η σύγχυση θα πρέπει να ελέγχονται για να δημιουργήσει πιο πειστική συμπεράσματα, ειδικά υπό το φως των σύγχρονων στρατηγικών που αναδεικνύουν προσαρμοσμένες θεραπείες για τα διάφορα στάδια του ΚΕΣ.

Κατά συνέπεια, στην παρούσα μελέτη, που εστιάζεται αποκλειστικά στον πληθυσμό καρκίνου του παχέος εντέρου σταδίου ΙΙΙ. Ερευνήσαμε το καρκινικό LINE-1 κατάσταση μεθυλίωσης του σταδίου ΙΙΙ ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου, αφού υποβλήθηκαν σε θεραπεία με ριζική εκτομή και FOLFOX επικουρική χημειοθεραπεία. Σε αυτή τη μελέτη, δόθηκε ιδιαίτερη προσοχή στην ογκολογική των αποτελεσμάτων τους, συμπεριλαμβανομένων μετεγχειρητική υποτροπή και τη θνησιμότητα του καρκίνου ειδικά. Με τον έλεγχο άλλων δυνητικών προγνωστικούς παράγοντες, επιδιώξαμε να εξετάσει την προγνωστική επίδραση των LINE-1 μεθυλίωσης στο στάδιο ΙΙΙ ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου.

Υλικά και Μέθοδοι

Δήλωση Ηθικής

Η μελέτη εγκρίθηκε από το Διοικητικό συμβούλιο Institutional Review του Kaohsiung Ιατρικό Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο (KMUHIRB-20120043) σε Καοσιούνγκ, Ταϊβάν. Όλοι οι συμμετέχοντες σε αυτή τη μελέτη υπέγραψαν έντυπο ενημερώνεται-συναίνεση.

Τα άτομα της μελέτης

αναδρομικά τα αρχεία όλων των ασθενών με καρκίνο του παχέος εντέρου οι οποίοι χειρουργήθηκαν στο Kaohsiung Ιατρικό Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο μεταξύ Ιανουαρίου 2008 και τον Ιούλιο το 2012. συνολικά 150 ασθενείς σταδίου ΙΙΙ καρκίνο του παχέος εντέρου οι οποίοι υποβλήθηκαν σε ριζική εκτομή και την επακόλουθη FOLFOX επικουρική χημειοθεραπεία είχαν αρχικά εγγραφεί. Δεκατέσσερις ασθενείς αποκλείστηκαν ως βέλτιστη δείγματα ιστού δεν ήταν διαθέσιμα. Μεταξύ των υπολοίπων 136 ασθενείς, επτά εξαιρέθηκαν επειδή τα κλινικά στοιχεία των ασθενών ήταν ελλιπής. Έτσι, συνολικά 129 ασθενείς πληρούσαν τις προϋποθέσεις για την τελική ανάλυση (Σχήμα 1). Όλοι οι ασθενείς έλαβαν τακτική παρακολούθηση-ups σε διαστήματα 2-3 μηνών μέχρι το θάνατο ή το τέλος του Ιουνίου 2013.

Η

Η μετεγχειρητική επικουρική χημειοθεραπεία

Όλοι οι συμμετέχοντες στη μελέτη έλαβαν επικουρική FOLFOX-4 χημειοθεραπεία σύμφωνα με τις οδηγίες του κέντρου για τη θεραπεία του καρκίνου. Το ακόλουθο πρωτόκολλο χρησιμοποιήθηκε για τη χορήγηση FOLFOX-4 χημειοθεραπεία: οξαλιπλατίνη 85 mg /m

2 εγχύθηκε μέσα σε διάστημα δύο ωρών την ημέρα 1? leucovorin 200 mg /m

2 εγχύθηκε ταυτόχρονα με την οξαλιπλατίνη εντός προθεσμίας δύο ωρών την ημέρα 1, ακολουθούμενη από bolus 5-FU 400 mg /m

2? τότε μια συνεχή έγχυση 5-FU 600 mg /m

2 χορηγήθηκε πάνω από 22 ώρες. Αυτό το πρωτόκολλο επαναλαμβάνεται κάθε δύο εβδομάδες × 12 κύκλους.

Κλινικά δεδομένα συλλογή

Τα χαρακτηριστικά των ασθενών, όπως η ηλικία, το φύλο, τη θέση του όγκου, και κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά, ελήφθησαν από ηλεκτρονικά ιατρικά αρχεία και κλινικές διαγράμματα . Κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά και τα στάδια των πρωτοπαθών όγκων ορίστηκαν με βάση τα κριτήρια που προτείνονται από την κοινή Επιτροπή theAmerican για τον Καρκίνο /Ένωσης για τη Διεθνή Έλεγχο του Καρκίνου (AJCC /UICC) [26]. βαθμοί ιστολογίας ταξινομήθηκαν ως εξής: καλά διαφοροποιημένα (WD), μετρίως διαφοροποιημένων (MD), ή κακώς διαφοροποιημένα (PD). Όπως αναφέρθηκε σε προηγούμενη μελέτη, οι θέσεις όγκου κατηγοριοποιούνται ως εγγύς ή άπω του σπληνική καμπή [27]. Αγγειακή εισβολή, περινευρικές εισβολή, το βάθος εισβολή όγκου και της λέμφου μετάσταση στους λεμφαδένες ήταν παράγοντες ιδιαίτερα κατηγοριοποιηθεί πριν από την περαιτέρω σύγκριση δεδομένου ότι κάθε παράγοντας θεωρήθηκε ως ανεξάρτητος παράγοντας κινδύνου [28-31].

Γονιδιωματική απομόνωση DNA

Αυτά φορμόλη σταθερό, έχει εμπεδωθεί με παραφίνη (FFRE) δείγματα που ελήφθησαν από 129 ασθενείς εξετάστηκαν για να προσδιοριστούν οι αντιπροσωπευτικές θέσεις του καρκίνου. κομμάτια ιστού FFPE υποβλήθηκαν σε μικροδιατομή να αποκτήσουν 10 μm τομές από κάθε δείγμα. Κατεργασία όξινου θειώδους των καρκινικών DNA στη συνέχεια διεξήχθη με EpiTech διθειώδες κιτ (Quiagen, Valencia, CA) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή.

Pyrosequencing για μέτρηση LINE-1 μεθυλίωση

Εκτός από την προαναφερθείσα διαδικασία μετατροπής όξινο θειώδες DNA (Kits EpiTech Bisulfite Fast FFPE? Qiagen? No.59844) νάτριο, οι δοκιμασίες Pyrosequencing επίσης αποτελείται αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) (Pyromark PCR Kit? Qiagen? No.978703) και προσδιορισμός της αλληλουχίας της αλληλουχίας στόχου με σύνθεση δοκιμασία (Pyromark Gold Ε24 Αντιδραστήρια? Qiagen? No.970802). Αυτή η δοκιμασία ενισχύει μια περιοχή του στοιχείου LINE-1. Οι συνθήκες PCR ήταν 45 κύκλοι των 95 ° C για 20 s, 50 ° C για 20 s, 72 ° C για 20 s, που ακολουθείται από 72 ° C για 5 λεπτά. Τα αποτελέσματα μεθυλίωση LINE-1 ελήφθησαν σε συνεχή κλίμακα από 1-100 χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία Pyrosequencing.

μετρήσεις Αποτέλεσμα

χρησιμοποιήθηκαν Η ανάπτυξη μετεγχειρητική υποτροπή του καρκίνου και της νόσου επιβίωση χωρίς (DFS) ως κύρια τελικά σημεία για να εξασφαλιστεί ότι τα συμπεράσματα συνάφεια για παρατηρείται αποτελέσματα αποδόθηκαν κυρίως με τον καρκίνο. Η ανάπτυξη ενός νέου τοπικής υποτροπής ή μακρινές μεταστατικές βλάβες μετά από χειρουργική επέμβαση θεωρήθηκε ως μετεγχειρητική υποτροπές. Ενώ τον υπολογισμό αποτελέσματα DFS, αποκλείστηκαν περιπτώσεις μετεγχειρητικής θνησιμότητας που συνέβησαν μέσα σε 30 ημέρες. Τα άτομα που έχασαν τη ζωή τους από αιτίες εκτός από CRC εξαιρέθηκαν επίσης από την ανάλυση αποτελεσμάτων. Όσον αφορά την έκβαση της θεραπείας για το σχήμα FOLFOX, DFS ορίστηκε ως ο χρόνος που έχει παρέλθει από την έναρξη της χημειοθεραπείας FOLFOX σε υποτροπή.

Στατιστική Ανάλυση

Τα δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το στατιστικό πακέτο για οι Κοινωνικές Επιστήμες, έκδοση 17.0 (SPSS. Inc., Chicago, IL). Student t-test, chi-square test Pearson, το ακριβές τεστ του Fisher, και η δοκιμή Kruskal-Wallis χρησιμοποιήθηκαν για τη σύγκριση των δημογραφικών και κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά μεταξύ των ομάδων σύμφωνα με τις διαφορετικές μετρήσεις έκβασή τους. Όλες οι μεταβλητές περαιτέρω διαχωρίστηκαν μεταξύ τους για την παραγωγή λόγου αδιόρθωτη αποδόσεις στο μονοπαραγοντική ανάλυση που έγινε στη συνέχεια. Πολλαπλή ανάλυση λογιστικής παλινδρόμησης διεξήχθη για να προσδιορίσει τις μεταβλητές που σχετίζονταν σημαντικά με την πιθανότητα υποτροπής του όγκου ή ειδική για τον καρκίνο επιβίωση. μοντέλα παλινδρόμησης ελέγχονται για τις επιπτώσεις της σύγχυσης των μεταβλητών. Τα αποτελέσματα της ανάλυσης λογιστικής παλινδρόμησης έχουν αναφερθεί ως προσαρμοσμένο ποσοστό πιθανοτήτων (OR) με% διάστημα εμπιστοσύνης 95 (CI). Η συγκριτική αξιολόγηση των μακροπρόθεσμων αποτελεσμάτων έγινε με ανάλυση των καμπυλών επιβίωσης χρησιμοποιώντας τη μέθοδο Kaplan-Meier. Καμπύλες για DFS συγκρίθηκαν με δοκιμασία log-rank. Όλες οι δοκιμές σημαντικότητας ήταν δύο ουρά, και

P

-τιμές & lt? 0,05 θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές.

Αποτελέσματα

κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά του πληθυσμού των ασθενών

Η μέση ηλικία κατά την επέμβαση για αυτούς τους 129 ασθενείς ήταν 61,6 χρόνια (εύρος, 30-87 ετών ), και 81 ασθενείς ήταν άνδρες (62,8%). Οι κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά περιγράφονται λεπτομερώς στον Πίνακα 1. Όλοι οι ασθενείς υποβλήθηκαν σε θεραπεία με επικουρική χημειοθεραπεία FOLFOX. Ο μέσος χρόνος παρακολούθησης ήταν 24 μήνες (IQR: 16,9 – 36). Όγκου επανάληψης αναφέρθηκε από 48 ασθενείς, ενώ 34 ασθενείς πέθαναν κατά τη διάρκεια της περιόδου παρακολούθησης τους.

Η

LINE-1 μεθυλίωση ανάλυση

Αν και τα επίπεδα LINE-1 μεθυλίωση στα 129 παχέος όγκους (Σχήμα 2), είχαν διανεμηθεί ευρέως (εύρος, 37,4 έως 77,9 σε μια κλίμακα 0-100), εξακολουθούν να εμφανίζουν κανονική κατανομή (δοκιμασία Kolmogorov-Smirnov?

P

& gt? 0,05). Το μέσο επίπεδο μεθυλίωσης LINE-1 σε αύξουσα, εγκάρσια, φθίνουσα, σιγμοειδές κόλον και του ορθού, ήταν 66.41 ± 5.23%, 60.71 ± 7.26%, 61,53 ± 10,45%, 63,32 ± 6,34%, 61.33 ± 8.05%, αντίστοιχα. Το επίπεδο της μεθυλίωσης ήταν σημαντικά υψηλότερη σε αύξουσα παχέος εντέρου σε σύγκριση με άλλες περιοχές. (

σ

= 0,042) Το επίπεδο της μεθυλίωσης μέση LINE-1 στην ομάδα επιβίωση ήταν 63,8 ± 6,6% έναντι 61,9 ± 8,2% στην ομάδα της θνησιμότητας (

σ

= 0.164). Όσον αφορά την μετεγχειρητική υποτροπή του όγκου, το μέσο επίπεδο μεθυλίωσης LINE-1 ήταν σημαντικά χαμηλότερη στην ομάδα της υποτροπής σε σύγκριση με το μη επανάληψης ομάδα (61,7 ± 7,4% έναντι 64,3 ± 6,7%?

σ

= 0,041) . Επειδή δεν υπάρχει καθολικά αποδεκτός όριο για να καθορίσει κατά πόσον το επίπεδο LINE μεθυλίωσης είναι η βέλτιστη ή ανώμαλη, χωρίσαμε τα επίπεδα μεθυλίωσης σε δύο ομάδες, χρησιμοποιώντας ένα δέκτη που λειτουργεί χαρακτηριστική ανάλυση (ROC) έχει ισορροπημένη ευαισθησία και ειδικότητα. Η τιμή αποκοπής ήταν 70.15% και η περιοχή κάτω από την καμπύλη (AUC) ήταν 0.593.

Η

μονοπαραγοντική ανάλυση LINE-1 επίπεδο μεθυλίωσης

Εξετάσαμε τα επίπεδα μεθυλίωσης LINE-1 οι διάφορες ομάδες που χαρακτηρίζονται από τις μεταβλητές που παρατίθενται στον πίνακα 1. Για την καλύτερη σύγκριση, η ηλικία διχοτομήθηκε σε δύο ομάδες, με τιμή αποκοπής σημείο των 65 ετών. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 2, στην μονοπαραγοντική ανάλυση ενσωματώνει εννέα μεταβλητές, LINE-1 επίπεδα μεθυλίωσης δείχθηκαν να είναι σημαντικά διαφορετική μεταξύ της ομάδας ηλικίας 65 ετών και άνω και την ομάδα ηλικίας κάτω των 65 ετών (64.6% έναντι 61.7%, αντίστοιχα?

σ

= 0,019).

η

μονοπαραγοντική και πολυπαραγοντική ανάλυση των μετρήσεων έκβασης

Ο Πίνακας 3 δείχνει τα αποτελέσματα της μονοπαραγοντική και πολυπαραγοντική ανάλυση σε σχέση με τις μετρήσεις έκβασης της μετα-θεραπευτική υποτροπή. Οι βαθμοί ιστολογίας χωρίστηκαν σε δύο ομάδες, μία ενσωμάτωση καλά διαφοροποιημένο (WD) και μετρίως διαφοροποιημένα δείγματα (MD), και τα άλλα που περιλαμβάνουν ελάχιστα διαφοροποιημένα (PD) δείγματα. Λόγω του περιορισμένου αριθμού των περιπτώσεων Τ1, T-φάσεις διαχωρίστηκαν μεταξύ τους σε «Τ1 + Τ2» και «Τ3 + Τ4» ομάδες. Τα επίπεδα μεθυλίωσης LINE-1 διαχωρίστηκαν μεταξύ τους σε «χαμηλή» σε σχέση με «υψηλή» ομάδες σύμφωνα με μια τιμή αποκοπής του 70.15% που παράγεται από προηγούμενη ανάλυση ROC μας. Στη συνέχεια, λογιστικής παλινδρόμησης εφαρμόστηκε με τα εμπρός επιλογή. LINE-1 μεθυλίωση φαίνεται να είναι το μόνο ανεξάρτητο προγνωστικό παράγοντα για την ογκολογική έκβαση της μετα-θεραπευτική επανεμφάνιση του όγκου (Adjusted OR = 14,1,

σ

= 0,012).

Η

Η ανάλυση επιβίωσης

Συνέχεια δεδομένα ήταν διαθέσιμα για όλους τους 129 συμμετέχοντες. Η μέση περίοδος επιβίωσης ήταν 25 (ΙΟΚ: 19-40) μήνες για τους ασθενείς που επέζησαν, 19,1 (IQR: 12,9 – 26,7) μήνες για τους ασθενείς που έχασαν τη ζωή τους και 24 (IQR: 16,9 – 36) μήνες για τη συνολική ομάδα. Για την αξιολόγηση των προγνωστικών επιπτώσεις LINE-1 μεθυλίωση, επικεντρωθήκαμε στην μετεγχειρητική υποτροπή και DFS αφού ληφθούν υπόψη τα πορίσματα της πολυπαραγοντική ανάλυση. Η μέθοδος Kaplan-Meier έδειξε ότι περισσότερες περιπτώσεις μετεγχειρητική υποτροπή και μικρότερη μέση DFS σημειώθηκαν στην ομάδα μεθυλίωση χαμηλή LINE-1 (Σχήμα 3,

σ

= 0,010).

Οι καμπύλες απεικονίζει τις επιπτώσεις στην μετεγχειρητική υποτροπή του LINE-1 μεθυλίωση όταν διαιρεθεί σε ασθενείς με «χαμηλό» έναντι «υψηλό» μεθυλίωσης.

Η

Επίδραση των LINE-1 επίπεδο μεθυλίωσης για DFS σε ασθενείς με μετα-θεραπευτική υποτροπή

με βάση τα στοιχεία σχετικά με την μικρότερη μέση DFS στην ομάδα μεθυλίωση χαμηλή LINE-1, υποθέσαμε ότι υπάρχει κάποια συσχέτιση μεταξύ LINE-1 επίπεδο μεθυλίωσης και DFS στην ομάδα υποτροπής. Προκειμένου να εντοπίσει το όριο της DFS προκαλώντας σημαντικές διαφορές στα επίπεδα LINE-1 μεθυλίωση, εισαγάγαμε τέσσερις εμπειρική όρια της DFS (3, 6, 9, και 12 μήνες) και διαχωρίστηκαν μεταξύ τους όλα τα επανεμφάνιση τους ασθενείς σε «πρώιμη υποτροπή» (DFS μικρότερη από ή ίση προς το όριο) και «αργά recurrence2010043 (DFS μεγαλύτερο από το όριο) ομάδες. Όταν το όριο του DFS είναι έξι μήνες, η ομάδα νωρίς στην επανάληψη φάνηκε να έχουν σημαντικά χαμηλότερη μέση LINE-1 επίπεδο μεθυλίωσης (Πίνακας 4).

Η

Συζήτηση

Βασικά ευρήματα της παρούσα μελέτη

στην παρούσα μελέτη, αποδείξαμε ότι LINE-1hypomethylation σχετίζεται με υψηλότερη μετεγχειρητική υποτροπή και βραχύτερη DFS σε ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου σταδίου ΙΙΙ, οι οποίοι έχουν υποστεί ριζική χειρουργική επέμβαση και την επακόλουθη χημειοθεραπεία FOLFOX. Προηγούμενες μελέτες έχουν αναφέρει ότι η εξέλιξη του όγκου των ασθενών CRC », επιβίωση, ή επανάληψης μπορεί να διαφέρουν ανάλογα με το επίπεδο των LINE-1 μεθυλίωση [21,23,32]. Παρ ‘όλα αυτά, όπως οι μελέτες αυτές περιλαμβάνονται διάφορες διαδικασίες επεξεργασίας του πληθυσμού και, υπήρχε εμφανής ετερογένεια στο ευρήματά τους. Εμείς αξιολογούνται μόνο τα προγνωστικά επιπτώσεις των επιπέδων μεθυλίωσης LINE-1 σε ομοιογενή πληθυσμό που περιλαμβάνει το στάδιο ΙΙΙ ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου, ο οποίος είχε λάβει ριζική εκτομή και FOLFOX επικουρική χημειοθεραπεία. Τα αποτελέσματά μας επιβεβαιώνουν τα προηγούμενα ευρήματα που έχουν αναφερθεί από Ahn et al. σχετικά με την προγνωστική επίδραση της LINE-1 υπομεθυλίωση στην εκτομή σταδίου III ασθενείς CRC [33]. Τόνισαν ότι το DNA hypomethyaltion ήταν εφικτή βιολογικός δείκτης της υποτροπής στο εγγύς αλλά όχι στην άπω περιπτώσεις CRC. Με συμπεριλαμβανομένων των αναπροσαρμογών παράγοντας σύγχυσης, όπως η θέση του όγκου (εγγύς έναντι άπω) στη μελέτη μας, διαπιστώσαμε ότι τα χαμηλά επίπεδα LINE-1 μεθυλίωσης (κάτω 70.15) εξακολούθησε να είναι ένα ισχυρό παράγοντα κινδύνου που έχει περίπου οκτώ φορές μετεγχειρητικού κινδύνου υποτροπής.

Σχέση μεταξύ LINE-1 μεθυλίωση και τις θέσεις δευτερεύουσα όγκων

Η έννοια των δύο παχέος εντέρου είναι συνήθως χρησιμοποιείται για να δείξει διακριτών μοριακά χαρακτηριστικά μέσω της διχοτομικής ταξινόμησης των εγγύς και άπω του παχέος όγκους. Σε προηγούμενες μελέτες, χρωμοσωμική αστάθεια (CIN) έχει πιο συχνά παρατηρείται στην άπω CRCs [34]. Από την άλλη πλευρά, μικροδορυφόρων αστάθεια (MSI) και

BRAF

μεταλλάξεις είναι πιο συχνές σε εγγύς CRCs [35-37]. Ωστόσο, Yamauchi et al. Πρόσφατα διαπιστώθηκε ότι οι συχνότητες της υψηλής CpG νησί methylator φαινότυπο (CIMP), MSI-υψηλή, και

BRAF

μεταλλάξεις αυξάνουν σταδιακά από το ορθό με την αύξουσα παχέος εντέρου [38]. Αυτό το εύρημα βαθιά αμφισβήτηση τη συμβατική έννοια του μοντέλου δύο κόλον που έχει χρησιμοποιηθεί για αρκετές δεκαετίες. Στη δική μας δεδομένα, αν και η σύγκριση μας LINE 1-επίπεδα μεθυλίωσης σε ασθενείς δεξιάς και αριστερής πλευράς του καρκίνου του παχέος εντέρου έδειξε οριακή στατιστική σημαντικότητα, παρατηρήσαμε ότι το επίπεδο μεθυλίωσης μέση ήταν σημαντικά υψηλότερη σε αύξουσα όγκων του παχέος εντέρου σε σύγκριση με εκείνες στις άλλες θέσεις . Σας συνιστούμε τα site-specific η σύγχυση θα πρέπει πάντα να λαμβάνονται υπόψη κατά τη διεξαγωγή ερευνητικών μελετών σχετικά με τη γενετική ή επιγενετικές διαταραχές.

Ο ορισμός της υπερμεθυλίωσης ή υπομεθυλίωσης

Παρά το γεγονός ότι ένα αυξανόμενο σώμα της στοιχεία υποστηρίζουν την προγνωστική σημασία της LINE-1 μεθυλίωση, ένα όριο που καθορίζει αν το μετρούμενο επίπεδο μεθυλίωσης υπερμεθυλίωση ή μεθυλιωμένος δεν έχει ακόμη καθοριστεί. Saito et al. παρατήρησε την προγνωστική επιπτώσεις της γραμμής-1 μεθυλίωσης σε μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα διατηρώντας ένα υψηλό όριο του 90% [39]. Antelo et al. ορίζεται LINE-1 υπομεθυλίωση σε νέους CRC ασθενείς χρησιμοποιώντας μια τιμή αποκοπής του 65%, και δήλωσε ότι οι ασθενείς που είχαν & lt? 65% LINE-1 μεθυλίωσης είχε φτωχότερη συνολική επιβίωση [18]. Στη μελέτη μας, κατηγοριοποιούνται τα επίπεδα LINE-1methylation σε υψηλές και χαμηλές ομάδες επίπεδο με βάση τις έννοιες προηγούμενων ερευνητών [40,41]. Προκειμένου να προσδιορίσει με ακρίβεια τη βέλτιστη τιμή αποκοπής για το LINE-1 μεθυλίωση σε ασθενείς που αναφέρουν επανεμφάνιση του όγκου μετά από ριζική χειρουργική επέμβαση CRC, τότε να διεξαχθεί ανάλυση ROC. Για τη συνεχή δεδομένα που λαμβάνονται από αυτά τα δείγματα, η περιοχή κάτω από την καμπύλη (AUC) βρέθηκε να είναι 0.593, και το 70,15% θεωρήθηκε ως η τιμή αποκοπής της μεθυλίωσης ήταν με ισορροπημένη ευαισθησία και ειδικότητα. Με υψηλότερη τιμή αποκοπής και φτωχότερες διακριτική επιδόσεις, αποτέλεσμα μας ήταν ελαφρώς διαφορετική από αυτή που παρουσιάζεται στην προηγούμενη μελέτη από Baba et al [25]. Σε έναν ετερογενή πληθυσμό που περιλαμβάνει CRCs του όλα τα στάδια, πέτυχαν την καλύτερη AUC 0.62 θεωρώντας μια τιμή αποκοπής του 60%. Παρ ‘όλα αυτά, υπάρχει χώρος για τη βελτίωση των διαγνωστικών επιδόσεων, όπως περισσότερες μελέτες μεγάλης κλίμακας πρέπει να βασίζεται σε στρωματοποιημένη πληθυσμών και διαφορετικές τοποθεσίες του όγκου.

LINE-1 παραλλαγή μεθυλίωσης στο CRC με και χωρίς υποτροπή

Πολλά οι ερευνητές έχουν ενθουσιασμό συνέχισε την εξερεύνηση του μηχανισμού με τον οποίο LINE-1 μεθυλίωση σχετίζεται με ογκολογικά αποτελέσματα. Υπομεθυλίωση του LINE-1 έχει ως αποτέλεσμα μεταγραφική ενεργοποίηση των πιθανών καρκινογένεση [9,16]. Μια επαυξημένη έκφραση του LINE-1 μετά από υπομεθυλίωση μπορεί να οδηγήσει σε χρωμοσωμική αστάθεια (CIN), η οποία έχει ονομαστεί ως ένα χαρακτηριστικό φαινότυπο σε πιο επεμβατικές καρκίνους που έχουν χειρότερη πρόγνωση [13,16]. Επιπλέον, Hur et al. Πρόσφατα αναφέρθηκε ότι υπήρξε στοιχείο που να αποδεικνύει ότι LINE-1 υπομεθυλίωση χρησιμεύει ως ένα κρίσιμο χαρακτηριστικό στο CRC μεταστάσεις, ιδιαίτερα στην ηπατική μετάσταση [42]. Αυτό είναι σε καλή συμφωνία με την στατιστικώς σημαντική διαφορά μεταξύ των επιπέδων μεθυλίωσης LINE-1 της υποτροπής και μη επανάληψη ομάδες της μελέτης μας (Πίνακας 2). Μεταξύ των 48 παχέος εντέρου υποτροπές του καρκίνου στην ομάδα μελέτης μας, υπήρξαν 14 περιπτώσεις ηπατικών μεταστάσεων. Ωστόσο, τα επίπεδα μεθυλίωσης LINE-1 των ασθενών με καρκίνο παχέος εντέρου με μετάσταση στο ήπαρ δεν έδειξε σημαντική διαφορά σε σύγκριση με εκείνους με άλλες υποτροπές. Σε αντίθεση με τις προοπτικές των προηγούμενων ερευνητών, το έχουμε αποδείξει κεντρικό εύρημα ότι LINE-1 υπομεθυλίωση έχει κάποια επίδραση στην πρώιμη υποτροπή (DFS μικρότερη από 6 μήνες) στην ομάδα που τελικά βιώσει υποτροπή. Τα αποτελέσματα αυτά υπογραμμίζουν τον κρίσιμο ρόλο των LINE-1 μεθυλίωση στην ανάπτυξη της υποτροπής του καρκίνου του παχέος εντέρου, ειδικά νωρίς υποτροπή. Ως εκ τούτου, είναι απαραίτητο να επινοηθούν συχνή και στις αρχές των στρατηγικών εποπτείας για την καθοδήγηση της μετεγχειρητικής παρακολούθησης των ασθενών που ανήκουν στην ομάδα υπομεθυλίωση.

Περιορισμοί

Πρέπει να εξεταστούν ορισμένοι περιορισμοί, ενώ την ερμηνεία των ευρήματα της μελέτης μας. Κατ ‘αρχάς, δεν θα μπορούσαν να ελεγχθούν ορισμένοι σημαίνοντες παράγοντες της παγκόσμιας μεθυλίωσης. Επειδή ο πληθυσμός της μελέτης δεν ήταν προοπτικά προσληφθεί, ορισμένοι περιβαλλοντικοί παράγοντες ή πληροφοριών σχετίζονται με τον ασθενή, δεν θα μπορούσε να καταγραφεί σε χειρουργική επέμβαση. Για παράδειγμα, η ιοντίζουσα ακτινοβολία, το κάπνισμα και τη σωματική δραστηριότητα έχει αναφερθεί ότι προκαλεί μεταβολές στην LINE-1 μεθυλίωση [43-45]. Να αποφευχθεί η εισαγωγή πιο προκαταλήψεις ανάκληση, εμείς δεν προσπαθήσουμε να ελέγξουμε αυτές τις πιθανούς συγχυτικούς παράγοντες στη μελέτη μας. Επιπλέον, με βάση αυτή τη μελέτη, θα μπορούσε να είναι ηθικά απαράδεκτο να διεξάγει μια μελέτη που επιλέγει αυτόματα ασθενείς με ή χωρίς τη χορήγηση FOLFOX επικουρική χημειοθεραπεία. Προτείναμε ότι η κατάσταση μεθυλίωσης θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί ως παράγοντας διαστρωμάτωσης. Δεύτερον, ο αριθμός των συμμετεχόντων στην μελέτη είναι περιορισμένη και η εξαιρούνται πληθυσμός εξακολουθεί να είναι σημαντική. Η αποκλείεται μερίδα μπορεί να έχουν κάποια επίπτωση στα συνολικά αποτελέσματα αν είχαν επίσης εγγραφεί. Επιπλέον, η διάρκεια παρακολούθησης θα μπορούσε να επεκταθεί για να αποσαφηνιστεί η προγνωστική επίπτωση στην ειδική θνησιμότητα λόγω καρκίνου. Παρά τους περιορισμούς αυτούς, ήμασταν σε θέση να αποδείξει ότι οι κλινικοπαθολογική χαρακτηριστικά ήταν διαφορετικές και οι προγνώσεις ήταν διαφορετική για τις υποομάδες μεθυλίωση σχηματίζεται από ένα ομοιογενές ασιατικό πληθυσμό.

Συμπέρασμα

Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι παρά το γεγονός ότι αντιμετωπίζεται με ριζική χειρουργική επέμβαση και FOLFOX επικουρική χημειοθεραπεία, στάδιο ΙΙΙ ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου με LINE-1 υπομεθυλίωση αντιμετώπισε πρώιμη μετεγχειρητική υποτροπές και μικρότερη DFS.

Υποστήριξη Πληροφορίες

S1 συνόλου δεδομένων. Λεπτομέρειες των συμμετεχόντων 129 μελέτη

doi:. 10.1371 /journal.pone.0123973.s001

(XLS)

Ευχαριστίες

Οι συγγραφείς ευχαριστήσω Ming-Yii Hwang για την παροχή χρήσιμες προτάσεις σχετικά με προηγούμενες εκδόσεις αυτού του χειρογράφου.