Αφηρημένο

Ιστορικό

Σκοπός της παρούσας μελέτης ήταν να αξιολογηθεί η βιολογική λειτουργία στην πρόοδο του όγκου και τη μεταστατική διαδικασία καρκινοεμβρυϊκό μόρια κυτταρικής προσκόλλησης αντιγόνου που σχετίζονται με (CEACAM) 1, 5 και 6 του παγκρέατος αδενοκαρκίνωμα (PDAC).

Πειραματικός Σχεδιασμός

CEACAM γκρεμίζω κύτταρα δημιουργήθηκαν και αξιολογήθηκαν in vitro και σε μια υποδόρια και ενδοπεριτοναϊκή μοντέλο ξενομοσχεύματος ποντικού. Tissue και ορό έκφραση των ασθενών με PDAC αξιολογήθηκαν με ανοσοϊστοχημεία (IHC) και με ένζυμο ανοσορροφητικές δοκιμασίες.

Αποτελέσματα

Παρουσία μετάσταση λεμφαδένα συσχετίστηκε με CEACAM 5 και 6 έκφρασης (προσδιορίζεται από την IHC) και επανεμφάνισης του όγκου αποκλειστικά με CEACAM 6. ασθενείς με CEACAM 5 και 6 της έκφρασης έδειξαν σημαντικά μικρότερη OS στην Kaplan-Meier ανάλυση επιβίωσης. τιμές Αυξημένα CEACAM6 ορό έδειξαν συσχέτιση με μακρινή μετάσταση και. ανάλυση επιβίωσης έδειξε μια παρατεταμένη OS για τους ασθενείς με CEACAM 1 χαμηλές τιμές ορού. In vitro ικανότητα πολλαπλασιασμού και μετανάστευσης αυξήθηκε σε CEACAM γκρεμίζω κύτταρα PDAC, όμως, τα ποντίκια που εμβολιάσθηκαν με CEACAM γκρεμίσουμε κύτταρα έδειξε μια παρατεταμένη συνολική επιβίωση (OS). Ο αριθμός των αυθόρμητων πνευμονική μετάσταση αυξήθηκε στο γκρεμίζω ομάδα CEACAM.

Συμπέρασμα

Τα αποτελέσματα που προκαλούνται από την έκφραση CEACAM στην PDAC είναι πολύπλοκα, αν και η υπερέκφραση συσχετίζεται με την επιθετική ανάπτυξη του όγκου τοπική-περιφερειακή . Ωστόσο, η απώλεια του CEACAM μπορεί να θεωρηθεί ως μέρος της επιθηλιακής-μεσεγχυματικής μετάβασης και είναι συνεπώς μάλλον σημασία στη διαδικασία της μετάστασης μακρινό

Παράθεση:. Gebauer F, Wicklein D, Horst J, Sundermann P, Maar Η, Streichert Τ, et al. (2014) καρκινοεμβρυονικού αντιγόνου-Σχετικές Μορίων Κυτταρικής Προσκόλλησης (CEACAM) 1, 5 και 6 ως βιοδείκτες στον καρκίνο του παγκρέατος. PLoS ONE 9 (11): e113023. doi: 10.1371 /journal.pone.0113023

Επιμέλεια: Aamir Ahmad, Wayne State University School of Medicine, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 22 Ιούλ 2014? Αποδεκτές: 20 Οκτ 2014? Δημοσιεύθηκε: 19 Νοεμ, 2014

Copyright: © 2014 Gebauer et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Η συγγραφείς επιβεβαιώνουν ότι όλα τα δεδομένα που διέπουν τα ευρήματα είναι πλήρως διαθέσιμα χωρίς περιορισμούς. Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:.. Οι συγγραφείς δεν έχουν καμία υποστήριξη ή χρηματοδότηση για να αναφέρετε

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς δηλώνουν ότι δεν υπάρχουν αντικρουόμενα συμφέροντα

Εισαγωγή

τα τελευταία χρόνια, η πρόγνωση των ασθενών που πάσχουν από αδενοκαρκίνωμα παγκρεατικού πόρου (PDAC) δεν βελτίωσε σημαντικά [1], [2]. Οι περισσότεροι ασθενείς παρουσιάζουν προχωρημένα στάδια όγκων κάνει θεραπευτική αγωγή αδύνατη. Πλήρη χειρουργική εκτομή, ακολουθούμενο από επικουρική χημειοθεραπεία είναι σήμερα το χρυσό πρότυπο στη θεραπεία της PDAC. Ωστόσο, ακόμη και σε ασθενείς μετά από πλήρη χειρουργική εκτομή του όγκου, η συνολική επιβίωση παραμένει φτωχή με μέσο χρόνο επιβίωσης των 20-24 μηνών [3] – [5]. Επιθετική τοπική-περιοχική ανάπτυξη του όγκου πέρα ​​από νωρίς μακρινά και περιτοναϊκή μετάσταση και υψηλό βαθμό χημειοαντίσταση κάνουν PDAC μία από τις πιο θανατηφόρες όγκων του γαστρεντερικού [6].

Σήμερα, ούτε αξιόπιστα ορό ούτε δείκτες ιστού πρόβλεψη της κλινικής πορεία των ασθενών μετά τη διάγνωση της PDAC είναι διαθέσιμα. Επιπλέον, οι μοριακές αλληλεπιδράσεις του όγκου με τον ξενιστή και οι τοπικοί παράγοντες που επιτρέπουν PDAC να εμφανίζει μια τέτοια επιθετική εξέλιξη είναι ελάχιστα κατανοητές. Επομένως, υπάρχει επιτακτική ανάγκη για μια καλύτερη κατανόηση της βιολογίας του όγκου σε σχέση με τους μηχανισμούς της τοπικής εισβολής όγκου και την επανάληψη.

Carcioembryonic μόρια κυτταρικής προσκόλλησης αντιγόνου που σχετίζονται με (CEACAMs) είναι μέλη της γλυκοσυλφωσφατιδυλινοσιτόλης (GPI ) -συνδεδεμένες ανοσοσφαιρίνης (Ig) υπεροικογένεια [7]. Υπάρχουν περισσότερα από 17 γονίδια που ανήκουν σε αυτή την οικογένεια, με γονιδιακά προϊόντα τους ενσωματωθεί κυρίως στην κυτταρική μεμβράνη. Εντός της οικογένειας CEACAM οι υπότυποι CEACAM είναι δομικά όμοια και φυσιολογικά εκφράζονται στην κορυφαία επιφάνεια των πολυάριθμων τύπων κυττάρων, π.χ. ενδοθηλιακά και αιμοποιητικά κύτταρα καθώς και τα επιθηλιακά κύτταρα διαφόρων οργάνων. Ανάλογα με τον τύπο του κυττάρου και CEACAM υπότυπο, η μεταδιδόμενη ισχύ μετά δεσμευτικός ένα ορισμένο εταίρο ποικίλλει, συμπεριλαμβανομένης της ρύθμισης της κυτταρικής προσκόλλησης, η καταστολή του όγκου, της αγγειογένεσης, την ενεργοποίηση των λευκοκυττάρων και άλλων ανοσο-αντιδραστικών κυττάρων, και ρύθμιση του κυτταρικού κύκλου [8] – [11]. Το γονίδιο CEACAM 5, το προϊόν της επίσης γνωστή ως κωδικούς CD66e για την carcioembryonic αντιγόνο (CEA) και έχει γίνει ένα από τα πιο γνωστά μέλη της Ig-υπεροικογένεια, δεδομένου ότι έχει ένα σημαντικό ρόλο στην κλινική ρουτίνα ως δείκτης όγκου για αρκετές οντότητες όγκου συμπεριλαμβανομένων γαστρεντερικών και αναπνευστικών κακοήθειες [12]. Ωστόσο, λόγω της έλλειψης ευαισθησίας και της ειδικότητας προγνωστική αξία του και μόνο είναι ακόμη ανικανοποίητος [13] – [16]. Οι υπότυποι CEACAM 1 και 6 που περιγράφονται για να είναι υπο- ή υπερεκφράζεται σε διάφορους φορείς όγκων όπως ο καρκίνος του πνεύμονα, καρκίνος του παχέος εντέρου και μελάνωμα [17] – [23]. Αν και η υπερέκφραση είναι ευρέως παρατηρηθεί, μερικές μελέτες αναφέρουν ακόμη και μια μειωμένη έκφραση σε ορισμένες οντότητες του όγκου σε διάφορα στάδια όγκου.

Είναι ενδιαφέρον ότι, πρόσφατες μελέτες βρέθηκε CEACAM 1 και 6 της έκφρασης στην πρωτοβάθμια PDAC συσχετίζεται με μειωμένη συνολική επιβίωση των ασθενών [24 ], [25]. Οι βιολογικές αρχές γιατί έκφραση CEACAM διαμεσολαβεί την εξέλιξη του όγκου δεν είναι πλήρως κατανοητοί. Ως εκ τούτου, αναλύθηκαν τα αποτελέσματα του CEACAM 1, 5 και 6 in vitro και δημιούργησε ένα μοντέλο ποντικού ξενομοσχεύματος να διερευνηθεί ο λειτουργικός ρόλος της έκφρασης CEACAM σε PDAC. Για να εκτιμηθεί κατά πόσον η έκφραση CEACAM έχει αντίκτυπο στην εξέλιξη του όγκου σε ασθενείς, που σε συνδυασμό ορού και ανοσοϊστοχημική ανάλυση για τα μόρια CEACAM 1, 5 και 6 για να αναλύσει αν υπάρχει συσχέτιση της έκφρασης CECACM με κλινικο-pathologcial δεδομένων των ασθενών με PDAC.

Υλικό και Μέθοδοι

γραμμή κυττάρων και CEACAM γκρεμίζω

Το ανθρώπινο παγκρεατικό αδενοκαρκίνωμα κυτταρικής σειράς PaCa 5061 ιδρύθηκε από τον πρωτοπαθή όγκο. Οι λεπτομερείς χαρακτηριστικά της εγκατάστασης και του πολιτισμού της κυτταρικής σειράς έχουν περιγραφεί προηγουμένως [26]. Εν συντομία, τα κύτταρα ελήφθησαν από έναν ασθενή με PDAC που υποβλήθηκαν σε χειρουργική εκτομή του Τμήματος Γενικής, σπλαγχνική και Θωρακοχειρουργική στο Ιατρικό Κέντρο του Πανεπιστημίου του Αμβούργου-Eppendorf. Η τελική κατάταξη του όγκου σύμφωνα με την UICC 7

ου ed. αποκάλυψε ένα ρΤ3, Ν1, L1, V1, R0, G2 PDAC του παγκρέατος κεφάλι.

CEACAM γκρεμίζω παραλλαγές διεξήχθησαν από shRNA παρεμβολών όπως περιγράφηκε προηγουμένως [27]. Τα ολιγονουκλεοτίδια κλωνοποιήθηκαν σε ένα φορέα pSIREN-RetroQ και επιμολύνθηκαν με FuGENE μέσων επιμόλυνσης (Roche Diagnostics, Hilden, Germany) με τα κύτταρα του όγκου. Επιλογή των γκρεμίζω κλώνων πραγματοποιήθηκε με την έκφραση ενός χημειοαντίσταση πουρομυκίνη (Clontech, Saint-Germain-en-Laye, Γαλλία) και κυτταρόμετρο ροής (FACS-LSR Fortessa, BD Bioscience, San Jose, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής). Μόνο τα κύτταρα με ένα χτύπημα κάτω από & gt? 90%, όπως προσδιορίζεται με κυτταρομετρία ροής, χρησιμοποιήθηκαν για in vitro και in vivo πειράματα. Μη συζευγμένα αντισώματα έναντι CEACAM 1, 5 και 6 και το αντίστοιχο ποντίκι βιοτινυλιωμένη IgM ή αρουραίου IgM ελέγχου ισοτύπου (Dako, Glostrup, Denmark) ανιχνεύθηκαν με αντι-ποντικού Ig-APC (BD Biosciences). Τα κύτταρα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας ένα CyFlow κυτταρομετρητή (Partek, Münster, Γερμανία) με μεταγενέστερη προσθήκη AlexaFluor488 συζευγμένο στρεπταβιδίνη (Invitrogen) πριν από τη χρώση.

In vitro χαρακτηρισμός των CEACAM γκρεμίζω κύτταρα

Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων εκτιμήθηκε χρησιμοποιώντας χρωματομετρική δοκιμασία ΧΤΤ (Roche Diagnostics, Βασιλεία, Ελβετία) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Τα κύτταρα τοποθετήθηκαν σε πλάκες 96-φρεατίων στα 3000 κύτταρα /φρεάτιο. Μετά από 48 ώρες για να επιτραπεί κυτταρική πρόσφυση, τα κύτταρα επωάστηκαν με χρωματομετρικά υποστρώματα. Χρωματομετρική αλλαγές μετρήθηκαν σε μία πολλαπλών φρεατίων φασματοφωτόμετρο (MR5000 Multiplate Reader, Dynatech, Denkendorf, Germany).

Οι διαφορές στην κυτταρική μετανάστευση αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας Δοκιμασία FluoroBlok Μετανάστευσης (BD Bioscience, San Jose, ΗΠΑ) με 24- και 8 μικρών πόρων ένθετα μεγέθους. Τα κύτταρα θρυψινοποιήθηκαν και επανα-εναιωρήθηκαν σε RPMI1640 χωρίς ορό (Invitrogen, Darmstadt, Γερμανία) σε μία συγκέντρωση 300.000 κύτταρα /mL. 400 μΙ αιώρημα κυττάρων προστέθηκαν στην κορυφαία θάλαμο και 800 μΙ ΚΡΜΙ1640 με 10% ορό εμβρύου μόσχου (FCS, Invitrogen) προστέθηκε στον κάτω θάλαμο. Η δοκιμασία επωάστηκε για 24 ώρες κάτω από τυποποιημένες συνθήκες κυτταρικής καλλιέργειας.

Μετά την απομάκρυνση της χημειο προσελκύσεως του θαλάμου πυθμένα, απεικόνιση μετανάστευσαν κυττάρων πραγματοποιήθηκε με την προσθήκη 500 μΙ ρυθμιστικού καλά /HBSS με Calcein ΑΜ (Invitrogen) 4 μg /mL στον πυθμένα καλά και επώαση για 1 ώρα. Ανάγνωση διεξήχθη στα 494/517 nm (Ex /Em) σε μια εκ των κάτω προς ανάγνωση ανάγνωσης πλάκας φθορισμού Genios (Tecan, Männedorf, την Ελβετία).

πειράματα στρωτή ροή πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση IBIDI microslides VI (IBIDI, Μόναχο, Γερμανία) που συνδέεται σε μία αντλία σύριγγας (Model 100 Σειρά? kdScientific, Holliston, ΜΑ) και η κίνηση των κυττάρων παρατηρήθηκε με ένα ανεστραμμένο μικροσκόπιο (Zeiss, Jena, Γερμανία? Axiovert 200). Καρκινικά κύτταρα εναιωρήθηκαν σε μέσο κυτταρικής καλλιέργειας (20 ml, 200 000 κύτταρα /ml) και microslides επικαλύφθηκαν με Ανθρώπου Πνευμονική μικροαγγειακά ενδοθηλιακά κύτταρα (HPMEC) (Promocell, Heidelberg, Germany). HPMEC αιωρήθηκαν σε μέσο κυτταρικής καλλιέργειας, εμβολιάζονται σε microslides σε συγκέντρωση 5 × 10

5 κύτταρα /ml και 20 μΙ μέσου με κύτταρα μεταφέρεται δια σιφωνίου σε κάθε κανάλι ροής. Κυττάρων αυξήθηκε συρρέουσες όλη τη νύχτα υπό κανονικές συνθήκες. Συντελεστές διατμητικής κυμαίνονταν από 0,05 dyn /cm

2 με 10,0 dyn /cm

2. μετακίνηση των κυττάρων καταγράφηκε και αναλύθηκε σε σχέση με την ποιότητα της κίνησης (πρόσφυση, το τροχαίο και πρόσδεση) και το τροχαίο ταχύτητα χρησιμοποιώντας CapImage 8.5 πρόγραμμα (Δρ Heinrich Zeintl, Χαϊδελβέργη, Γερμανία).

Τα πειράματα σε ζώα

τα πειράματα σε ζώα διεξήχθησαν σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές UKCCR για την καλή διαβίωση των ζώων σε πειραματικά νεοπλασία [28], οι ντόπιοι επιτροπή Δεοντολογίας για τα πειράματα σε ζώα (Behörde für Soziales, Familie, Gesundheit, Verbraucherschutz? Amt für Gesundheit und Verbraucherschutz?. Billstr 80 , D-20539 Hamburg, Γερμανία, έργο αρ G58 /09) και καθώς το θεσμικό αξιωματικός καλή μεταχείριση των ζώων του University Medical-Center συνέστησε και ενέκρινε τη μελέτη.

Για το μοντέλο υποδόριου όγκου, ένα εκατομμύριο PaCa 5061 καρκινικά κύτταρα εγχύθηκαν στη δεξιά περιοχή της ωμοπλάτης σε 8-12 εβδομάδων C57BL /6N PfP

– /- /rag2

– /- ποντίκια διπλό νοκ-άουτ. Τα ζώα θυσιάστηκαν όταν πρωτοπαθείς όγκους υπέρβαση 2 εκατοστά

3 ή έλκος του δέρματος ποντικού, τα ποντίκια ήταν σε τελικό ναρκωμένο και θυσιάστηκαν με καρδιοκέντηση.

Για την εκτίμηση της επίδρασης της έκφρασης CEACAM στην περιτοναϊκή διάχυση, ιδρύσαμε ένα intraperiteoneal μοντέλο όγκου, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [29]. Εν συντομία, ένα εκατομμύριο κύτταρα όγκου εγχύθηκαν στην κάτω αριστερή κοιλιακή τεταρτημόριο ενδοπεριτοναϊκώς σε όγκο εναιώρημα 200 μί. σημεία αξιολόγηση και την ώρα λήξης του πειράματος διεξήχθη σύμφωνα με μια προηγούμενη καθιερωμένο σύστημα βαθμολόγησης. Εκτίμηση της έκτασης της ενδοπεριτοναϊκής αύξησης του όγκου γίνεται με ένα τροποποιημένο περιτοναϊκή δείκτης καρκινομάτωση (PCI), όπως περιγράφηκε προηγουμένως [30]. Εν συντομία, η περιτοναϊκή κοιλότητα χωρίζεται σε 9 Κοιλιοπλαστική-πυελική χώρα, ανάλογα με την έκταση της ανάπτυξης του όγκου, οι βαθμολογίες μεταξύ 0 και 3 σημεία ανατεθεί (0 σημεία: καμία παρούσα όγκου? 1 σημείο: όγκου & lt? 1 mm

3 ? 2 σημεία: όγκο & gt? 1 και & lt? 3 mm

3? 3 σημεία: όγκο & gt? 3 mm

3), που οδηγούν σε ένα αποτέλεσμα PCI από το 0 έως το 27.

Ποσοτικοποίηση πνευμονική μετάσταση, διαδίδονται καρκινικά κύτταρα (DTC) και CTC από Alu-PCR

το αριστερό πνεύμονες ομογενοποιήθηκαν σε ένα δείγμα διαταραχής (TissueLyser II, Qiagen, Hilden, Γερμανία) και υποβλήθηκε σε DNA-απομόνωσης (QIAamp DNA Mini Kit, Qiagen). Ο μυελός των οστών συλλέχθηκε με ξέπλυμα του αριστερού μηρού με 1 ml NaCl 0,9%. 200 μΙ αίματος και τα εναιωρήματα μυελού των οστών υποβλήθηκαν σε DNA- απομόνωση χρησιμοποιώντας το QIAamp Blood DNA Mini Kit.

συγκεντρώσεις DNA από όλα τα δείγματα ποσοτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα φασματοφωτόμετρο NanoDrop (Peqlab, Erlangen, Germany). Δεδομένου ότι η περιεκτικότητα του ανιχνεύσιμου Alu-αλληλουχίες στο εξής qPCR θα επηρεαζόταν απλά μεταβάλλοντας το DNA συγκεντρώσεις, όλα τα πνεύμονα- και οστών δείγματα μυελού-DNA ομαλοποιήθηκαν σε 30 ng /μl χρησιμοποιώντας ρυθμιστικό ΑΕ (Qiagen). Οι συγκεντρώσεις του αίματος DNA ήταν αρκετά παρόμοια σε όλα τα δείγματα (περ. 10 ng /μl) και ήταν, επομένως, δεν κανονικοποιήθηκαν. qPCR διεξήχθη με την καθιερωμένη ειδική ανθρώπου Alu-εκκινητές [31]. 2 μΐ ολικό DNA (δηλαδή, 60 ng του πνεύμονα /μυελού των οστών-DNA? 20 ng αίμα-DNA) χρησιμοποιήθηκαν για κάθε qPCR. Αριθμητική δεδομένα προσδιορίστηκαν έναντι μιας πρότυπης καμπύλης, όπως περιγράφεται [32]. Το όριο ανίχνευσης για ειδικά σήματα ανθρώπινη Alu-αλληλουχία προσδιορίστηκε για κάθε τύπο ιστού με τη δοκιμή DNA από πέντε υγιείς (μη-ένεση) PfP

– /- /rag2

– /- ποντίκια παρόμοιων φύλο και την ηλικία. Για κάθε δείγμα, αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν εις διπλούν και ως ανεξάρτητα πειράματα τουλάχιστον δύο φορές.

Οι ασθενείς και οι χειρουργικές επεμβάσεις

Μεταξύ του 1992 και του 2009, όλοι οι ασθενείς που υποβλήθηκαν σε μείζονα resectional παγκρέατος χειρουργική επέμβαση στο Τμήμα Γενικά, το σπλαχνικό και Θωρακοχειρουργική στο Πανεπιστημιακό Ιατρικό Κέντρο Hamburg-Eppendorf συμπεριλήφθηκαν σε μια προοπτική, παγκρέατος βάση δεδομένων. Η μελέτη εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας της Βουλής των Ιατρών στο Αμβούργο, Γερμανία. Γραπτή συγκατάθεση για τη χρήση των δειγμάτων για ερευνητικούς σκοπούς λήφθηκε από όλους τους ασθενείς πριν από τη χειρουργική επέμβαση ή σχέδιο του αίματος.

Οι ασθενείς με PDAC της περιοχής του παγκρέατος κεφάλι υποβλήθηκαν σε τακτική βάση, είτε μερική pancreatoduodenectomy (PD) ή πυλωρού-διατήρηση duodenopancreatectomy (PPDP ) και όργανο-διατήρηση μεθόδων εκτομή σε περιπτώσεις χρόνιας παγκρεατίτιδας (CP). Μόνο οι ασθενείς με μακροσκοπική πλήρη εκτομή του όγκου συμπεριλήφθηκαν στην τελική ανάλυση. Ενδονοσοκομειακή θνησιμότητα ορίστηκε ως ο θάνατος ανά πάσα στιγμή καθ ‘όλη τη διάρκεια της νοσηλείας. Συνέχεια πληροφορίες που ελήφθησαν από εξωτερικά ιατρεία του οργάνου μας, από τα γραφεία των κατάλληλων γενικών ιατρών, ή από το περιφερειακό μητρώο του καρκίνου. Όταν η ημερομηνία του θανάτου δεν καταγράφηκε, οι ασθενείς είχαν λογοκριθεί κατά την τελευταία καταγραφεί επαφή.

Ιστός μικρο κατασκευή γεννήτριας και immounohistochemistry

πυρήνες ιστού ελήφθησαν από φορμόλη σταθερό εμπεδωθεί με παραφίνη (FFPE) κομμάτια ιστού από ασθενείς με παθολογικά αποδεδειγμένο PDAC. επιλέχθηκαν αντιπροσωπευτικές περιοχές του όγκου βασίζονται σε χρώση με αιματοξυλίνη-ηωσίνη

ΤΜΑ κατασκευή διεξήχθη όπως περιγράφηκε προηγουμένως [33] – [35].. Εν συντομία, 252 κύλινδροι ιστού με διάμετρο 0,6 mm αποκόπηκαν από τα «δότη» μπλοκ ιστού χρησιμοποιώντας ένα ημιαυτόματο όργανο ρομποτικό ακριβείας παραγγελία και τοποθετήθηκαν σε ένα μπλοκ παραφίνης που περιείχαν τα 252 ατομικά δείγματα. Μέσα σε αυτά τα δείγματα, υπήρχαν 142 PDACs, παγκρεατικών όγκων 40 νευροενδοκρινείς (ΝΕΤ), 33 ενδοπορικού θηλώδες βλεννώδες νεόπλασμα (IPMN), και 37 δείγματα από υγιείς ιστούς ως αρνητικός έλεγχος. Τα προκύπτοντα τεμάχια TMA χρησιμοποιήθηκαν για την παραγωγή 4-μm τομές που μεταφέρθηκαν σε ένα σύστημα slide επενδεδυμένη με κόλλα (Instrumedics Inc., Hackensack, New Jersey, USA).

Οι ανοσοϊστοχημική χρώση πρωτόκολλα είχαν βελτιστοποιηθεί σε διάφορα καλοήθη και κακοηθών ιστών σε μια εκτεταμένη διαδικασία πολλαπλών βαθμίδων που τροποποίησαν το πρωτόκολλο χρώσης μέχρι το απαιτούμενο επιλεκτική χρώση επιτεύχθηκε με το χαμηλότερο δυνατό σήμα υποβάθρου (σύμφωνα με το [36]).

τμήματα αποπαραφινοποιήθηκαν και ξηραίνονται όλη τη νύκτα στους 37 ° C . Το αντιγόνο ανάκτηση διεξήχθη με μικροκύματα κατεργασία φούρνο σε κιτρικό ρυθμιστικό (ρΗ 6.0) για 1 λεπτό, οι τομές στη συνέχεια επανυδατώθηκαν σε Tris-ρυθμισμένο αλατούχο διάλυμα (TBS? 0,05 Μ Tris-HCl σε ρΗ 7.6 και 0.15 Μ NaCl) και αποκλείστηκαν με κουνέλι ΑΒ ορό (Biotest Diagnostics, Dreirach, Germany) αραιωμένο 1:10 σε TBS για 60 λεπτά. χρώση CEACAM πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας ένα μονοκλωνικό αντίσωμα ειδικό CEACAM (λειτουργίας του CEACAM1 κλώνος 4D1 /C2 IgG2a, in-house κλώνος (που περιγράφηκε προηγουμένως από [37]) σε αραίωση 1:200, CEACAM5 κλώνος # 2383 IgG1 σε αραίωση 1:50 (Cell Signaling, Beverly, USA)? CEACAM6 κλώνος IgG1 (9A6), σε αραίωση 1:40 [Sigma Aldrich, Αμβούργο, Γερμανία]) επί μία νύκτα στους 4 ° C. αντισώματα αντι-ποντικού βιοτινυλιωμένο δευτερογενές πολυκλωνικό κουνελιού (Dako, Αμβούργο, Γερμανία) χρησιμοποιήθηκαν για τη δέσμευση του πρωτογενούς αντισώματος CEACAM. Επιθηλιακά-μεσεγχυματικά μεταβατικών (ΕΜΤ) σημειωτές ήταν οι μελέτες με ανοσοϊστοχημεία, όπως καλά. Zeb 1 (IgG σε αραίωση 1:100, αντι-ανθρώπινο πολυκλωνικό κουνελιού, Atlas Antibodies, Στοκχόλμη, Σουηδία), Zeb 2 (IgG σε αραίωση 1:100, αντι-ανθρώπινο πολυκλωνικό κουνελιού, Atlas Αντισώματα, Στοκχόλμη, Σουηδία ), Ε-καδχερίνη (), Pan-Cytokeratin ().

Οι θέσεις πρόσδεσης ανιχνεύτηκαν χρησιμοποιώντας το ABC-ΑΡ-Kit (Vector Laboratories Inc., Burlingame, USA). Αλκαλική φωσφατάση δραστικότητα ενός συμπλόκου βιοτίνης-στρεπταβιδίνης-αλκαλικής φωσφατάσης έγινε ορατή χρησιμοποιώντας ναφθόλης-Αδ διφωσφορικής ως υπόστρωμα και hexatozised New Fuchsin χρησιμοποιήθηκε για ταυτόχρονη σύζευξη. Οι τομές βάφτηκαν αντίθετα με hemalum της Mayer (Merck, Darmstadt, Germany).

Η ένταση χρώσης (0, 1+, 2+, 3+) και το κλάσμα των θετικών κυττάρων όγκου βαθμολογήθηκαν για κάθε σημείο του ιστού ως που δημοσιεύθηκε πρόσφατα [34]. Οι κηλίδες χωρίς χρώση και με μια ένταση χρώσης του 1+ σε & lt? 70% και 2+ σε & lt? 30% των κυττάρων του όγκου βαθμολογήθηκαν ως CEACAM χαμηλής, μέσης βαθμολογίες δόθηκαν για ένταση χρώσης του 1+ σε ≥70%, 2+ σε ≥30% ή 3+ & lt? 30% των κυττάρων του όγκου, και την υψηλή βαθμολογία δόθηκαν για ένταση χρώσης των 2+ σε ≥70% ή 3+ σε ≥30% των κυττάρων του όγκου. Ανοσοϊστοχημική ανάλυση των τμημάτων έγινε χωρίς γνώση της ταυτότητας των ασθενών ή την κλινική κατάσταση. Ανοσοϊστοχημική ανάλυση και βαθμολόγηση διεξήχθησαν από δύο ανεξάρτητους ερευνητές οι οποίοι δεν γνώριζαν την έκβαση του ασθενούς ή άλλα κλινικά ευρήματα. Στο 95% των δειγμάτων, οι αξιολογήσεις των δύο παρατηρητές ήταν πανομοιότυπα, τα υπόλοιπα πλακίδια επανεκτιμάται, και οι αποφάσεις συναίνεση έγιναν.

Το πρωτόκολλο χρώσης καθώς χρησιμοποιείται για τα ποντίκια που καλλιεργούνται όγκους και έδειξε παρόμοια ευαισθησία και ειδικότητα σε σύγκριση με την κηλίδωση TMA.

Ένζυμο συνδεδεμένη ανοσορροφητική δοκιμασία (ELISA)

για υποτύπους ποσοτικοποίηση CEACAM στο περιφερικό αίμα, δείγματα ορού από 46 ασθενείς με Καυκάσου PDAC και 47 Καυκάσιους ασθενείς με CP , οι οποίοι ενδείκνυνται για χειρουργική θεραπεία, αναλύθηκαν με συνδεδεμένη ανοσοδοκιμασία ενζύμου (ELISA). Όλα τα δείγματα αίματος λήφθηκαν αμέσως πριν από τη χειρουργική επέμβαση. Όπως υγιείς μάρτυρες, 50 Καυκάσιοι αίματος τράπεζα δοτών, που λαμβάνονται από το Ινστιτούτο για την ιατρική των μεταγγίσεων (Ιατρικού Κέντρου του Πανεπιστημίου του Αμβούργου-Eppendorf), συμπεριλήφθηκαν στη μελέτη. Προετοιμασία των δειγμάτων ορού διεξήχθησαν σύμφωνα με ένα τυποποιημένο πρωτόκολλο [38]. Η διάμεση ηλικία ήταν 62,4 χρόνια κατά τη στιγμή της διάγνωσης (εύρος 36,3 έως 90,4 χρόνια, 24 άρρενες [52,2%], 21 θηλυκά [47,8%]). τιμές ορού από 47 ασθενείς που υποβλήθηκαν σε χειρουργική επέμβαση λόγω χρόνιας παγκρεατίτιδας (διάμεση ηλικία κατά τη διάγνωση 47,0 έτη, εύρος 31,1 έως 76,1 έτη) και 50 δείγματα από υγιείς δότες αίματος χρησιμοποιήθηκαν ως έλεγχοι (25 αρσενικά [50%], 25 θηλυκά [ ,,,0],50%]).

Για την ανίχνευση των CEACAM 1 και CEACAM 5 στον ορό, 96 φρεατίων εύκαμπτο πλάκες μικροτίτλου (Costar 9019, USA) επικαλύφθηκαν με 50 μΙ ανά φρεάτιο 2 μg /ml μονοκλωνικού αντίσωμα ποντικού σύλληψης (κλώνος 283324 και 843130, IgG1 ποντικού, R &? συστήματα D, USA) για όλη τη νύχτα στους 4 ° C. Τα φρεάτια αποκλείστηκαν με 3% β /ο αλβουμίνη βόειου ορού (BSA? Κλάσμα V, καθαρότητα 98%, Sigma Aldrich, Germany) σε PBS /T (αλατούχο φωσφορικό ρυθμιστικό διάλυμα, ρΗ 7.3, που περιέχει 0.05% ν /ν Tween) για 45 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου και στη συνέχεια επωάστηκαν για 1 ώρα με ανθρώπινους ορούς αραιωμένο 1:50 σε PBS σε θερμοκρασία δωματίου. Μετά από πέντε πλύσεις με PBS /T, η δεσμευμένη πρωτεΐνη ανιχνεύθηκε με 1 ή 5 συζευγμένο με βιοτίνη πολυκλωνικό αντίσωμα-CEACAM αντι (CEACAM 1 Goat IgG, ο κλώνος 842284? CEACAM 5 IgG προβάτου, κλώνος 843131Goat IgG, Ε & amp? Συστήματα D, USA), αντίστοιχα, που ακολουθείται από στρεπταβιδίνη συζευγμένη με υπεροξειδάση χρησιμοποιώντας ΤΜΒ (3,3 ‘, 5,5 «-τετραμεθυλβενιδίνη) ως υπόστρωμα. Η αντίδραση χρώματος διακόπηκε με την προσθήκη 10 mM H

2SO

4 και αναλύθηκε στα 450 nm χρησιμοποιώντας αναγνώστη ELISA (Dynatech MR 5000, USA). Ανθρώπινη ανασυνδυασμένη CEACAM 1 και 5 πρωτεΐνες (R &? Συστήματα D) χρησίμευσε ως εσωτερικό πρότυπο για την δοκιμασία

CEACAM 6 προσδιορίσθηκε με άμεση ELISA επικάλυψη 50 μΙ ορού του ασθενούς σε μια 1:50 αραίωση όλη τη νύχτα ένα. 4 ° C στο πλακίδιο 96 φρεατίων. Τα φρεάτια αποκλείστηκαν με 3% αλβουμίνη βόειου ορού (BSA? Κλάσμα V,% καθαρότητα 98, Sigma Aldrich) σε PBS /T (ορός ρυθμισμένο με φωσφορικά, ρΗ 7,3, που περιέχει 0,05% ν /ν Tween) για 45 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου και στη συνέχεια επωάστηκαν για 1 ώρα με αντι-CEACAM 6 αντίσωμα ανίχνευσης (lgG1 ποντικού, κλώνος 843158, Κ & amp? συστήματα D). Η αντίδραση χρώματος διακόπηκε με την προσθήκη 10 mM H

2SO

4 και αναλύθηκε στα 450 nm. Για να εξασφαλιστεί ότι η ανοσοδοκιμασία ήταν κατάλληλο για τη μέτρηση κλινικά δείγματα ορού, εξετάστηκαν αναπαραγωγιμότητα και τη γραμμικότητα (σύμφωνα με το [39]).

Στατιστική ανάλυση

Για διερευνητική στατιστική ανάλυση των επιμέρους ομάδων ασθενών, χρησιμοποιήθηκε είτε δύο όψεων chi-square test ή μια ακριβή δοκιμασία Fisher. Ποσοτικές μεταβλητές είτε ελεγχθεί με τη βοήθεια της Φοιτητικής

t-test

ή από τις διαμέσους του τεστ Wilcoxon. Δοκιμή για την κανονική κατανομή των ποσοτικών μεταβλητών πραγματοποιήθηκε με Kolmogorov-Smirnov-Test. Η ανάλυση Kaplan-Meier (δοκιμασία log-rank) χρησιμοποιήθηκε για ελεύθερο νόσου και ανάλυση συνολική επιβίωση εξαιρουμένων νοσοκομειακή θνητότητα. Όλες οι μεταβλητές επίτευξη μιας τιμής Ρ ≤0.05 συμπεριλήφθηκαν σε ένα μοντέλο COX-παλινδρόμησης πολλών μεταβλητών. Το επίπεδο αποκοπής των CEACAM ορού ποσοτικοποίηση προσδιορίστηκε με τη χρήση του Youden-δείκτη και όπως περιγράφηκε προηγουμένως [33], [40].

Αποτελέσματα

In vitro χαρακτηριστικά CEACAM γκρεμίζω PDAC κύτταρα

Όπως αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής, βασική έκφραση CEACAM ήταν παρούσα στα κύτταρα του όγκου. επιφανειακά επίπεδα των υποτύπων CEACAM 1, 5 και 6 μειώθηκαν σε & lt? 5% σε σύγκριση με την έκφραση σε κύτταρα CEACAM ελέγχου (Σχήμα 1Α). Ο πολλαπλασιασμός και η μετανάστευση αυξήθηκε στα γκρεμίζω κύτταρα CEACAM σύγκριση με τα κύτταρα ελέγχου (Εικόνα 1Β και Γ), αλλά CEACAM knockdown δεν επηρέασαν την προσκόλληση σε διεγερμένα ενδοθήλιο (HPMEC) (Σχήμα 1 D και Ε).

( ΈΝΑ). έκφραση της βασικής CEACAM ποικίλει ανάλογα με τον υπότυπο CEACAM, υψηλότερα επίπεδα αποτελέσματα για CEACAM 1, ενδιάμεσο για CEACAM 6 και χαμηλότερα επίπεδα για CEACAM 5. Όπως φαίνεται στον πολλαπλασιασμό (Β) και οι δοκιμασίες μετανάστευσης (C), CEACAM γκρεμίζω κύτταρα παρουσίασαν υψηλότερο πολλαπλασιαστικών και μεταναστευτικό δυναμικό σε σύγκριση με τα κύτταρα ελέγχου. Οι διαφορές στην πρόσφυση σε διεγερμένα (TNFa) ενδοθηλιακά κύτταρα δεν ήταν ανιχνεύσιμα μεταξύ CEACAM kd και κύτταρα ελέγχου. Ούτε ο μέσος αριθμός (D), ούτε ο μέσος χρόνος προσκόλληση στα ενδοθηλιακά κύτταρα ήταν διαφορετικό (Ε). Ποντικού όγκοι ξενομοσχεύματος ήταν άκρως θετικό για CEACAM 1, 5 και 6. χρώση ανοσοϊστοχημική στα κύτταρα ελέγχου έδειξαν πλήρη απουσία της έκφρασης CEACAM στην ανοσοϊστοχημεία σε γκρεμίζω κύτταρα (F).

Η

Για τον έλεγχο της παρουσίας των CEACAM γκρεμίζω στους όγκους ποντικού που αναπτύχθηκε, IHC χρώση CEACAM 1, 5 και 6 διεξήχθη και, όπως απεικονίζεται στο Σχήμα 1F, τα γκρεμίζω επίπεδα ήταν σταθερή και εξακολουθεί να υπάρχει στους όγκους που αναπτύσσονται σε ποντίκια.

μοντέλο ξενομοσχεύματος για τη λειτουργική ανάλυση των CEACAMs σε PDAC

για να απαντηθεί το ερώτημα αν τα μέλη της οικογένειας CEACAM έχουν λειτουργική επίδραση στο σχηματισμό όγκων, την ανάπτυξη και μετάσταση, ένα πείραμα ξενομόσχευμα όγκου με ανθρώπινα κύτταρα PDAC (με και χωρίς CEACAM νοκ ντάουν ) στο PfP

– /rag2

– ποντίκια έγινε. Μετά από υποδόρια ένεση των κυττάρων του όγκου, τα ποντίκια που εμβολιάσθηκαν με CEACAM γκρεμίζω κύτταρα έδειξαν σημαντικά παρατεταμένη συνολική επιβίωση μέχρι να φτάσει τα κριτήρια τερματισμού (μέση επιβίωση 144 δ) όταν συγκρίνεται με PaCa 5061 ελέγχου (μέση επιβίωση 104 d? Ρ = 0,014) και άγριου τύπου PACA 5061 (μέση επιβίωση 79 d? Ρ = 0,01) (Σχήμα 2Α). Το μέγεθος του όγκου και το βάρος κατά τη στιγμή του θανάτου δεν διέφερε σημαντικά μεταξύ των ομάδων (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα).

ενδοπεριτοναϊκώς, δεν υπάρχουν διαφορές στο δείκτη περιτοναϊκή καρκινωμάτωση (PCI) παρατηρήθηκαν κατά τη στιγμή της αμυχή (80 ημέρες μετά την ένεση). CEACAM γκρεμίζω έδειξαν περισσότερο DNA αντίγραφα του ανθρώπινου DNA στο αριστερό πνεύμονα (Ρ = 0,021) (C) το οποίο συσχετίζεται με υψηλότερο μεταστατικό φορτίο στον πνεύμονα, ωστόσο, δεν παρατηρήθηκε διαφορά για κυκλοφορούντων καρκινικών κυττάρων στο αίμα (D) .

η

Αν και το μοντέλο του υποδόριου ξενομοσχεύματος έδειξε μια παρατεταμένη OS για ποντίκια με CEACAM νοκ ντάουν, η επιρροή του CEACAM γκρεμίζω στην ενδοπεριτοναϊκή ξενομόσχευμα μοντέλο δεν ήταν παρούσα. Η περιτοναϊκή δείκτης καρκινομάτωση δεν διέφερε μεταξύ των ομάδων, το οποίο εκπροσωπείται επίσης στην λείπουν διαφορές στη διάδοση καθώς δεν υπήρχαν διαφορές μεταξύ των CEACAM γκρεμίζω και την ομάδα ελέγχου σε κυκλοφορούντων καρκινικών κυττάρων στο περιφερικό αίμα (Εικόνα 2Β και D). Ωστόσο, στην CEACAM γκρεμίζω ομάδα, βρήκαμε υψηλότερες ποσότητες ανθρώπινου DNA (που σημαίνει σημαντικά περισσότερα κύτταρα PDAC) στους πνεύμονες σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου (Σχήμα 2C). κύτταρα PDAC δεν έδειξαν συγγένεια για τη διάδοση στο μυελό των οστών, το DNA ανθρώπινων καρκινικών κυτταρικών δεν ανιχνεύθηκε σε οποιαδήποτε από τις ομάδες. Μαρκαδόροι για EMT δεν έδειξαν σημαντικές διαφορές μεταξύ του άγριου τύπου και CEACAM γκρεμίζω όγκων όπως προσδιορίζεται με ανοσοϊστοχημεία (Εικ S1).

Ανοσοϊστοχημική CEACAM 1, 5 και 6 της έκφρασης σε ασθενείς δείγματα

Από τα 142 σημεία του όγκου, 5 (3,5%) του δείγματος δεν είναι αξιολογήσιμα για την TMA λόγω ελλιπών ή μη αντιπροσωπευτικές ιστό του όγκου. δείγματα ιστών από 137 ασθενείς ήταν τελικά αξιολογήθηκαν και συσχετίζονται με τα δεδομένα κλινική-παθολογική. Οι ασθενείς ήταν ηλικίας μεταξύ 33,1 – 85,0 έτη (διάμεση 63,5 έτη). Υπήρχαν 82 άνδρες ασθενείς (59,9%) και 55 γυναίκες (40,1%).

CEACAM 1 έκφρασης βρέθηκε στο 62,8% του συνόλου των δειγμάτων του όγκου (n = 86), CEACAM 5 σε 87 ασθενείς (63,5%) , CEACAM 6 έκφραση παρατηρήθηκε σε 99 ασθενείς (72,3%). Η πλειονότητα των όγκων έδειξε μια ομοιογενή χρώση εντός κάθε δείγμα, αν και σε μια μειοψηφία των δειγμάτων όγκου, παρατηρήσαμε ένα ανομοιογενές πρότυπο χρώσης IHC εντός της περιοχής του όγκου. Το πρότυπο έκφρασης των τριών CEACAMs ήταν μεμβρανώδη και κυτταροπλασματική καθώς (Σχήμα 3). Έκφραση των CEACAM 5 συνδέθηκε με την παρουσία του CEACAM 6 έκφραση (P & lt? .001). Μια συσχέτιση μεταξύ CEACAM 1 και CEACAM 5 έκφραση (P = 0,113) ή CEACAM 6 δεν παρατηρήθηκε (P = 0,09).

Η

Μια συσχέτιση με τα δεδομένα κλινικο-παθολογικές δεν αποκάλυψε καμία στατιστικά σημαντική συσχέτιση με κάθε παράμετρο για την CEACAM 1 εκτός από ένα συσχετισμό με μακρινή μετάσταση (P = 0,008). CEACAM 5 και 6 έκφραση συσχετίστηκε με την κατάσταση θετικό λεμφαδένα (Ρ = 0,017 και Ρ = 0,046, αντίστοιχα) και μακρινή μετάσταση (P & lt? 0.001). (Πίνακας 1)

Η

Η Kaplan-Meier ανάλυση επιβίωσης δεν έδειξε συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης CEACAM 1 και το συνολικό (OS) ή ελεύθερη νόσου επιβίωση (DFS), αντίστοιχα. Οι ασθενείς με θετική CEACAM 5 και /ή 6 έκφραση είχε μια συντομευμένη OS και DFS (Ρ = 0,025 και Ρ = 0,007, Ρ = 0.010 και Ρ = 0.030, αντίστοιχα) (Σχήμα 4A-C, Πίνακας 2). Σε ασθενείς με θετική έκφραση και για τις τρεις πρωτεΐνες CEACAM παρατηρήθηκε καμία σημαντική διαφορά στα DFS ή OS σύγκριση με τους ασθενείς που ήταν αρνητικοί για όλους τους υποτύπους CEACAM (Ρ = 0.144 και Ρ = 0.742, δεδομένα που δεν φαίνονται).

(Α-Γ). CEACAM 1 θετικούς ασθενείς εμφάνισαν διάμεση OS 17,0 μήνες (14,0 έως 20,1 μήνες), CEACAM 1 αρνητική 23,0 μήνες (9,5 έως 36,5 μηνών, p = 0,279). OS της CEACAM 5 θετικούς ασθενείς ήταν 16,0 μήνες (12,8 έως 19,2 μήνες) έναντι 22,0 μήνες (4,1 έως 47,9 μήνες) (p = 0.025). CEACAM 6 θετικούς ασθενείς παρουσίασαν OS 14,0 μήνες (7,9 έως 20,0) έναντι 22,0 μήνες (5,6 έως 38,4 μηνών, p = 0,010). Οι καμπύλες επιβίωσης για τη συσχέτιση μεταξύ της συνολικής επιβίωσης και της έκφρασης ορού CEACAM (D-F). CEACAM 1 θετικούς ασθενείς παρουσίασαν OS 11,8 μήνες (2,4 έως 25,2) έναντι 18,3 μήνες (10,0 έως 26,2 μηνών, p = 0,022). Διάμεση OS για τους ασθενείς θετικοί για CEACAM 5 ήταν 15,7 μήνες (2,4 έως 32,3 μήνες) έναντι 18,6 μήνες (8,7 έως 28,6 μηνών, p = 0.651), και η διάμεση OS για τους ασθενείς με CEACAM 6 θετικότητα ήταν 18,8 μήνες (9,5 έως 28,1 μήνες ) έναντι 12,8 μήνες (3,3 έως 22,3 μηνών, p = 0,187). Boxplots για CEACAM 1 έκφραση ορού (G), CEACAM 5 (Η) και CEACAM 6 (Ι) σε σύγκριση πόρου αδενοκαρκίνωμα του παγκρέατος (PDAC), χρόνια παγκρεατική (CP) και υγιείς δότες αίματος (BD). καμπύλη λειτουργίας δέκτη (ROC) για την έκφραση του ορού CEACAM (J).

Η

CEACAM 1, 5 και 6 στο

ορού

CEACAM 1 τιμές στην PDAC δεν ήταν αυξημένη σε σύγκριση με το ασθενείς με ΠΣ, αλλά ήταν υψηλότερες σε σύγκριση με BD (PDAC διάμεση 33,0 μg /l, εύρος 3,3 έως 136,7 μg /l? CP διάμεση 23,1 μg /l, εύρος 1,8 έως 110,1? BD διάμεση 16,1 μg /l, εύρος 7,8 – 36,5 μg /l? Ρ = 0,059 και Ρ & lt? 0.001, αντίστοιχα). Παρόμοια αποτελέσματα βρέθηκαν για CEACAM 5: Οι τιμές στον ορό ήταν υψηλότερα στην ομάδα PDAC σύγκριση με BD, αλλά όχι για CP (PDAC διάμεσος 8,5 μg /l, εύρος 0,7 έως 75,2 ng /ml? CP διάμεσος 4,8 μg /l, το εύρος 0.7- 24,0? BD διάμεσος 1,9 μg /l, εύρος 0,2 έως 9,2 μg /l? Ρ = 0.122 και Ρ = 0.002, αντίστοιχα). Ασθενείς με PDAC έδειξαν αυξημένη έκφραση CEACAM 6 στον ορό σε σύγκριση με τα δύο, CP και BD (PDAC διάμεση 2,90 μg /l, εύρος 1,34 – 5,46 μg /l? CP διάμεση 2,25 μg /l, το εύρος 0,77 – 5,15? BD διάμεση 2,34 μg /l , εύρος 1,25 – 6,99 μg /l? Ρ = 0,06 και Ρ = 0,029, αντίστοιχα). Σε καμία από τις εκτελούνται αναλύσεις, μια σημαντική διαφορά μεταξύ CP και BD ήταν ανιχνεύσιμη (Εικόνα 2G-I).

Δέκτης χαρακτηριστικές καμπύλες χρησιμοποιήθηκαν για να καθοριστεί η σχέση ευαισθησίας-ειδικότητας για CEACAM 1, 5 και 6 λειτουργούν. οι βέλτιστες τιμές αποκοπής προσδιορίστηκαν με υπολογισμό Youdens-Index. Η περιοχή κάτω από την καμπύλη (AUC) για CEACAM 1 ήταν 0.711 (τιμή αποκοπής 184,1 μg /l), για CEACAM 5 0.689 (τιμή αποκοπής 1,95 μg /l) και για CEACAM 6 0,664 (cut-off αξίας 3,58 μg /l) (Σχήμα 2J) Η ευαισθησία της CEACAM 1 στην ανίχνευση PDAC ήταν 53,5% με αντίστοιχη ειδικότητα 54,7%. Για CEACAM 5, η ευαισθησία είναι 79,1% με ειδικότητα 44,2%. Ευαισθησία CEACAM 6 ήταν 47,0% με ειδικότητα 82,6%. Η AUC για ένα συνδυασμό όλων των τριών CEACAMs δεν έδειξε βελτίωση σε σύγκριση με τον προσδιορισμό του καθενός από μόνα τους CEACAMs (AUC 0.680, τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Για μια συσχέτιση μεταξύ των τιμών CEACAM ορού με δεδομένα κλινικο- παθολογικές, οι τιμές του ορού χωρίστηκαν σε χαμηλό επίπεδο (& lt? 75

ο εκατοστημόριο) και μια ομάδα υψηλού επιπέδου (≥75

ο εκατοστημόριο). Υψηλή CEACAM 6 αξίες με την παρουσία των μακρινών μεταστάσεων (p = 0,009) και ταξινόμησης (P = 0,019) (Πίνακας 1).