Αφηρημένο

Τα αντιγόνα του καρκίνου των όρχεων MAGE (CTA) είναι ελκυστικοί υποψήφιοι για ανοσοθεραπεία. Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να προσδιοριστεί η συχνότητα της έκφρασης, χυμική ανοσία και προγνωστική σημασία της MAGE CTA στον επιθηλιακό καρκίνο των ωοθηκών ανθρώπου (EOC). συχνότητες mRNA ή έκφραση πρωτεΐνης προσδιορίστηκαν για ΜΑΟΕ-Α1, -Α3, -Α4, -A10 και -C1 (CT7) σε δείγματα ιστών που λαμβάνονται από 400 ασθενείς με EOC. Η παρουσία των αυτόλογων αντισωμάτων έναντι των αντιγόνων MAGE προσδιορίστηκε από 285 δείγματα ορού. Οι σχέσεις μεταξύ της έκφρασης MAGE, χυμική ανοσία σε αντιγόνα MAGE, και τα χαρακτηριστικά κλινικο-παθολογικών μελετήθηκαν. Οι επιμέρους συχνότητες έκφρασης είχαν ως εξής: A1: 15% (42/281), Α3: 36% (131/390), Α4: 47% (186/399), Α10: 52% (204/395), C1 : 16% (42/267). Ισχυρή συγκλίνουσες έκφραση παρατηρήθηκε με MAGE-Α1: Α4, ΜΑΟΕ-Α1:-C1 και MAGE-A4: Α10 (

σ

& lt? 0.0005). Έκφραση της MAGE-A1 ή -A10 αντιγόνων οδήγησε σε κακή επιβίωση χωρίς εξέλιξη (PFS) (OR 1.44, CI 01.01 έως 02.04,

σ

= 0,044 και OR 1,3, CI 1,03 έως 1,64,

p

= 0,03, αντίστοιχα)? λαμβάνοντας υπόψη ότι η έκφραση MAGE-C1 συνδέθηκε με βελτιωμένη PFS (OR 0.62, CI 0,42 έως 0,92,

σ

= 0,016). Οι βελτιωμένες PFS παρατηρήθηκε για έκφραση MAGE-C1, ελαττώθηκε με συν-έκφραση του ΜΑΟΕ-Α1 ή -A10. Αυθόρμητη χυμική ανοσία στα αντιγόνα MAGE ήταν παρούσα στο 9% (27/285) των ασθενών, και αυτό προέβλεψε κακή συνολική επιβίωση (δοκιμασία log-rank

σ

= 0,0137). Τα ευρήματα αυτά δείχνουν ότι η ΜΑΟΕ-Α1, MAGE-Α4, ΜΑΟΕ-Α3, και MAGE-A10 είναι ελκυστικοί στόχοι προτεραιότητας για πολυδύναμα ανοσοθεραπεία σε ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών

Παράθεση:. Daudi S, Eng KH, Mhawech-Fauceglia P , Morrison C, Miliotto Α, Beck Α, et al. (2014) Έκφραση και του ανοσοποιητικού απαντήσεις σε MAGE αντιγόνα Προβλέψτε επιβίωσης σε επιθηλιακό καρκίνο των ωοθηκών. PLoS ONE 9 (8): e104099. doi: 10.1371 /journal.pone.0104099

Επιμέλεια: Σοφία Ν Καραγιάννης, King College του Λονδίνου, Ηνωμένο Βασίλειο

Ελήφθη: 22, Απριλίου 2014? Δεκτές: 7 Ιούλ 2014? Δημοσιεύθηκε: 7, Αυγούστου, 2014

Copyright: © 2014 Daudi et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Η συγγραφείς επιβεβαιώνουν ότι όλα τα δεδομένα που διέπουν τα ευρήματα είναι πλήρως διαθέσιμα χωρίς περιορισμούς. Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. Η εργασία αυτή χρηματοδοτήθηκε εν μέρει από το Cancer Research Institute Ομάδα Εργασίας του καρκίνου των ωοθηκών Grant, Καρκίνος Εμβόλιο Συνεργατική επιχορήγησης του Ινστιτούτου Έρευνας Καρκίνου και Ludwig Institute για την Έρευνα του Καρκίνου, Άννα-Μαρία Kellen κλινικός ερευνητής Βραβείο του Ινστιτούτου Έρευνας Καρκίνου (σε Kunle Odunsi), Εθνικά Ινστιτούτα Υγείας 5T32 CA 108456, National Institutes of Health R01CA158318-01A1 και Roswell Park Cancer Institute-Πανεπιστήμιο του Πίτσμπουργκ Ινστιτούτου για τον Καρκίνο των ωοθηκών εξειδικευμένο πρόγραμμα της ερευνητικής αριστείας Εθνικά Ινστιτούτα Υγείας P50CA159981-01A1. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή καρκίνο των ωοθηκών

Τα επιθηλιακά (EOC) αντιπροσωπεύει την πιο θανατηφόρα γυναικολογική κακοήθεια στις γυναίκες. Παρά τις σημαντικές προσπάθειες που απευθύνονται σε πρώιμη ανίχνευση και τη βελτίωση των ποσοστών απόκρισης, η πλειοψηφία των γυναικών του παρόντος με την ασθένεια κατά την αρχική διάγνωση, μεταφέρουν ένα απαράδεκτο ποσοστό υποτροπής περίπου 85% και ένα 5-ετή συνολική επιβίωση 20-30% [1], [ ,,,0],2]. Κατά συνέπεια, στοχευμένες στρατηγικές θεραπείας, όπως η ανοσοθεραπεία θα πρέπει να βελτιώσουν την κλινική έκβαση των ασθενών με καρκίνο των ωοθηκών.

Η ανάπτυξη επιτυχών ανοσοθεραπείας απαιτεί το χαρακτηρισμό αντιγόνων που σχετίζονται με όγκο (ΤΑΑ) που συνήθως εκφράζεται σε ωοθηκών όγκους, με ένα περιορισμένο πρότυπο έκφρασης σε φυσιολογικούς ιστούς. Επιπλέον, το ιδανικό αντιγόνο θα πρέπει να παρουσιάζει μια υψηλή συχνότητα έκφρασης σε καρκίνο και απόδειξη της ανοσογονικότητας. Υποψήφιος ΤΑΑ προσδιορίζονται συχνά σε ασθενείς με ισχυρή κυτταρική και /ή χυμική ανοσολογική απαντήσεις που δείχνουν ισχυρή εγγενής ανοσογονικότητα σε αυτά τα αντιγόνα [3] – [5]

Τα αντιγόνα καρκίνου όρχεων (CTA) είναι μια υποκατηγορία των ΤΑΑ. που κωδικοποιείται από περίπου 140 γονίδια. Παρά κακώς χαρακτηριζόμενη από βιολογική λειτουργία τους, η έκφραση αυτών των αντιγόνων είναι γνωστό ότι περιορίζεται στην ανοσολογική προνομιούχες θέσεις, όπως το όρχεις, πλακούντα και του εμβρύου ωοθηκών, αλλά όχι σε άλλους φυσιολογικούς ιστούς. Ανώμαλη έκφραση αυτών των γονιδίων βλαστικής σειράς σε κακοήθεις όγκους μπορεί να αντανακλά την ενεργοποίηση ενός σιγήσει «γαμετογονικής πρόγραμμα», η οποία τελικά οδηγεί στην εξέλιξη του όγκου και την ευρεία ανοσογονικότητα [6]. Η ανοσογονικότητα του CTA έχει οδηγήσει στην ευρεία ανάπτυξη αντικαρκινικών εμβολίων που στοχεύουν αυτά τα αντιγόνα σε πολλούς συμπαγείς όγκους. Μέσα σε αυτό το μεγάλο τάξη ΤΑΑ, αντιγόνα σχετιζόμενα με μελάνωμα (MAGE) έχουν αναδειχθεί ως πολλά υποσχόμενοι υποψήφιοι για ανοσοθεραπεία του καρκίνου [7] – [9].

Περισσότερα από 30 καρκίνος όρχεων γονίδια (CT) έχουν αναφερθεί ως μέλη των οικογενειών πολλών γονιδίων που οργανώνονται σε συστάδες γονιδίων στο χρωμόσωμα Χ (αντιγόνα CT-X). Οι συστάδες CT γονιδίου που βρίσκεται μεταξύ Xq24 και Xq28 και περιλαμβάνουν οικογένειες γονιδίων, όπως MAGE και NY-ESO-1 [10]. συστάδες γονιδίων MAGE Ι είδους είναι οι πλέον εκτεταμένα χαρακτηριστεί και περιλαμβάνει το ΜΑΟΕ-Α, το MAGE-Β και των οικογενειών MAGE-C. Οι πρωτεΐνες MAGE-A κωδικοποιείται από 12 διαφορετικά μέλη της οικογένειας ΜΑΟΕ-Α γονίδιο (MAGE-A1 για ΜΑΟΕ-Α12) και ορίζονται από ένα διατηρούμενο βάσης 165-171 αμινοξέων, που ονομάζεται το πεδίο MAGE ομολογία (MHD). Η MHD αντιστοιχεί στη μοναδική περιοχή των κοινών αμινοξέων από όλα τα μέλη MAGE-A οικογένεια. MAGE-C1 /CT7 είναι δομικά διαφορετική από MAGE-μια οικογένεια, με ένα προϊόν πρωτεΐνης του 1142 αμινοξέων (vs. & lt? 400 υπολείμματα για τις πρωτεΐνες MAGE-Α) που περιέχει μια αλληλουχία επανάληψης tandem που απουσιάζει από MAGE-A [ ,,,0],11].

στην παρούσα μελέτη, αναλύσαμε την έκφραση και την ανοσογονικότητα μιας ομάδας πέντε MAGE CTA σε μια μεγάλη ομάδα των ασθενών με καρκίνο των ωοθηκών. Επιπλέον, έχουμε εξετάσει τη σχέση μεταξύ των συντεταγμένων της έκφρασης των γονιδίων MAGE και κλινικο-παθολογικών αποτελεσμάτων.

Υλικά και Μέθοδοι

Ασθενείς και δείγματα

φορμόλη-σταθερής εμπεδωθεί με παραφίνη (FFPE? για ανοσοϊστοχημεία) και καταψύχθηκαν ταχέως δείγματα ιστών (για αντίστροφη μεταγραφάση-ΡΟΚ) ελήφθησαν από 400 ασθενείς που υποβάλλονται σε κυτταρομειωτική χειρουργική επέμβαση για ωοθηκών, πρωτογενή περιτοναϊκή και καρκίνος των σαλπίγγων στο Roswell Park Ίδρυμα Καρκίνου (Buffalo, ΝΥ) μεταξύ του 1992 και 2008. Εντοπίζουμε, και αφορούν, αυτές οι τρεις καρκίνους όπως του ΕΓΚ λόγω της κοινής τους καταγωγής στην παραμεσονεφρική επιθήλιο. Όλα τα δείγματα ιστών συλλέχθηκαν στο πλαίσιο εγκεκριμένου πρωτοκόλλου από την επιτροπή δεοντολογίας (IRB) του Roswell Park Cancer Institute. Οι ασθενείς που υπέγραψε IRB ενέκρινε γραπτή συγκατάθεση, και αυτές υποβλήθηκαν στο IRB γραφείο. Όλα τα δείγματα παθολογία εξετάστηκαν στο θεσμικό μας όργανο, και η ιστοπαθολογική υποτύπου των όγκων που ταξινομούνται σύμφωνα με τις οδηγίες του Παγκόσμιου Οργανισμού Υγείας (ΠΟΥ) [12], [13]. Το στάδιο και το βαθμό των όγκων αξιολογήθηκαν σύμφωνα με τη Διεθνή Ομοσπονδία Γυναικολογίας και Μαιευτικής (FIGO) [14], [15]. Σε ένα υποσύνολο των ασθενών, δείγματα ορού συλλέχθηκαν κατά τη διάγνωση. Τα ιατρικά αρχεία των ασθενών αυτών αναδρομικά στο πλαίσιο εγκεκριμένου πρωτοκόλλου συμβούλιο θεσμική αναθεώρηση. Η επανεξέταση συμπεριλαμβάνονται εξωτερικά ιατρεία και ενδονοσοκομειακή θεραπεία. τα αποτελέσματα της μελέτης συμπεριλάμβαναν τη συνολική επιβίωση (OS) και η επιβίωση χωρίς εξέλιξη (PFS). Αμφότερα τα κριτήρια επιβίωση μετρήθηκαν από τη στιγμή της διάγνωσης. Υποτροπή ορίστηκε με αντικειμενικά κριτήρια, όπως όλα θεραπεία δόθηκε στην επικουρική θεραπεία. Η διάρκεια του OS ήταν το διάστημα μεταξύ διάγνωσης και θανάτου. PFS αντιπροσώπευε το διάστημα μεταξύ διάγνωσης για την εξέλιξη της νόσου, υποτροπής ή θανάτου. Ο χρόνος παρακολούθησης ήταν το διάστημα μεταξύ διάγνωσης και τελευταία επαφή (θάνατος ή η τελευταία παρακολούθηση). Τα δεδομένα περικόπηκαν κατά την τελευταία παρακολούθησης για τους ασθενείς χωρίς ενδείξεις υποτροπής, εξέλιξης ή του θανάτου.

Σύνολο ιστών Απομόνωση RNA

Το ολικό RNA ιστού απομονώθηκε από κατεψυγμένα ιστούς όγκων με τη χρήση του το αντιδραστήριο TRI (Molecular Research Center Inc, Cincinnati, ΟΗ, USA) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Δυνητικά μολυσματικού DNA απομακρύνθηκε με κατεργασία με RNase-free DNase Ι (Boehringer-Mannheim, Mannheim, Germany), που ακολουθείται από εκχύλιση με φαινόλη /chroloform. RNA διαλύθηκε σε RNase-free H

2O. Η προκύπτουσα συγκέντρωση του RNA μετρήθηκε φασματοφωτομετρικά (DU500 φασματοφωτόμετρο, Beckman Coulter, Fulleron, CA, USA), και η ποιότητα του RNA που ελέγχθηκε με ηλεκτροφόρηση σε 1,5% πηκτή αγαρόζης.

Αντίστροφη Μεταγραφάση-PCR Ανάλυση των MAGE -Α1, MAGE-Α3, MAGE-Α4, ΜΑΟΕ-Α10 και MAGE-C1 Έκφραση

Δύο μικρογραμμάρια από κάθε δείγμα RNA χρησιμοποιήθηκαν για να δημιουργήσουν cDNA με την Ready-To-Go Reverse Transcriptase-PCR (ΚΤ- PCR) χάντρες (GE Healthcare, Buckinghamshire, Ηνωμένο Βασίλειο). RNA από φυσιολογικό ιστό όρχεων (Clontech, Mountain View, CA) χρησιμοποιήθηκε ως θετικός μάρτυρας. Η PCR στη συνέχεια πραγματοποιήθηκε για να μελετηθεί η έκφραση του ΜΑΟΕ-Α1, -Α3, -Α4, -A10 και -C1 σε 305 ασθενείς με EOC. Αφυδρογονάση 3-αιμολυτική αναιμία (GAPDH) εκκινητές χρησιμοποιήθηκαν ως δοκιμασία για την ακεραιότητα του RNA. Πίνακας S1 παραθέτει τις αλληλουχίες εκκινητή για κάθε γονίδιο και αντίστοιχο μήκος αμπλικονίου του. Οι συνθήκες ενίσχυσης για όλα τα προϊόντα γονιδίων ήταν 5 λεπτά στους 95 ° C, που ακολουθείται από 35 κύκλους που αποτελούνταν από 1 λεπτό στους 95 ° C, 1 λεπτό στους 60 ° C, και 1 λεπτό στους 72 ° C. Αυτοί οι κύκλοι ακολουθήθηκαν από ένα βήμα επιμήκυνσης 6-λεπτά στους 72 ° C (BioRad iCycler, BioRad Laboratories, Hercules, CA, USA). Τα προϊόντα PCR διαχωρίστηκαν σε μια γέλη αγαρόζης 1,5% και οπτικοποιήθηκαν με βρωμιούχο αιθίδιο σε υπεριώδη transilluminator (IS-4400 ChemiImager, η Alpha Innotech, San Leandro, CA). Οι εντάσεις των προϊόντων PCR ήταν ετερογενή, και μερικά δείγματα απέδωσαν μόνο ασθενείς λωρίδες αμπλικόνιο. Αυτά βαθμολογήθηκαν θετικά μόνον εάν το αποτέλεσμα θα μπορούσε να αναπαραχθεί από επανειλημμένη εκχύλιση RNA και ειδικά RT-PCR από το ίδιο δείγμα όγκου. Περιπτώσεις με πολύ χαμηλά επίπεδα μεταγραφής που δεν ήταν επαναλήψιμα θετικά δεν είχαν θεωρηθεί ως θετική. ταινίες προϊόντος PCR αποκόπηκαν από το πήκτωμα αγαρόζης και η σχετική DNA απομονώθηκε με τη QIAquick Gel Extraction Kit (Qiagen, Valencia, CA, USA). δείγματα DNA υποβλήθηκαν σε καθορισμό αλληλουχίας για να επαληθευτεί η PCR προϊόν.

ανοσοϊστοχημική ανάλυση του MAGE-Α3, MAGE-Α4 και MAGE-A10 Έκφραση

Ανοσοϊστοχημική ανάλυση (IHC) πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας FFPE ιστούς από 304 ασθενείς σε ιστικές μικροσυστοιχίες (ΤΜΑ). TMA κατασκευάστηκαν χρησιμοποιώντας 0,6 χιλιοστά FFPE πυρήνες ιστού γρονθοκόπησε από κάθε μπλοκ δότη. Για να ξεπεραστεί η ετερογένεια του όγκου, επιλέχθηκαν τρεις αντιπροσωπευτικές πυρήνες από κάθε όγκο. Οι μm πάχους πυρήνες 4 ιστού αποπαραφινοποιήθηκαν και προκατεργάστηκαν με ένα ειδικό διάλυμα ανάκτηση αντιγόνου (DakoCytomation, Carpenteria, CA) επί 20 λεπτά. Τα πλακίδια ψύχθηκαν επί 20 λεπτά και έπειτα υποβλήθηκε σε επεξεργασία σε 3% Η

2O

2 για τη σβέση ενδογενής δραστικότητα υπεροξειδάσης. Τα πλακίδια TMA στη συνέχεια επωάστηκαν με ένα μπλοκ πρωτεΐνη χωρίς ορό (DakoCytomation, Carpenteria, CA) για 30 λεπτά. Πίνακας S2 απαριθμεί τα αντισώματα και τις προϋποθέσεις IHC. MAGE-A3 κουνελιού αντι-ανθρώπινο πολυκλωνικό αντίσωμα (LS-B4662, διάρκεια ζωής Biosciences, Inc.) ήταν εμπορικά αποκτηθεί. Anti-MAGE-Α4 mAb (κλώνος: 57β) και (κλώνος: A3)-MAGE-Α10 αντι υπερκείμενα υβριδώματος παρήχθησαν στο Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο της Βασιλείας (Basel, Ελβετία) [16], [17]. Κουνέλι IgG ή IgG1 ποντικού (Sigma, St. Louis, ΜΟ) χρησιμοποιήθηκε ως ο αρνητικός έλεγχος ισότυπου. Σημασμένη στρεπταβιδίνη βιοτίνη (LSAB +) αντιδραστήρια (DakoCytomation, Carpenteria, CA) χρησιμοποιήθηκαν σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή που ακολουθείται από ένα (DakoCytomation, Carpenteria, CA) επώαση 3,3′-διαμινοβενζιδίνη (DAB) +. Οι τομές με αιματοξυλίνη. Μια αποκοπής 5% θετικών καρκινικών κυττάρων χρησιμοποιήθηκε για να καθορίσει θετική έκφραση.

Μέτρηση των αντισωμάτων στον ορό με ELISA

Οι ορολογικές ανάλυση χουμικών ανοσοαποκρίσεων διεξήχθη όπως περιγράφηκε προηγουμένως [18]. 285 δείγματα ορού από ένα υποσύνολο των ασθενών αναλύθηκαν με ELISA για οροαντιδραστικότητα να παράγεται βακτηριακά πλήρους μήκους ανασυνδυασμένες πρωτεΐνες MAGE-Α1, -Α3, -Α4, -A10 ή -C1. Ως αρνητικός αντιγόνο ελέγχου, ανασυνδυασμένη πρωτεΐνη διϋδροφολικής αναγωγάσης παρασκευάστηκε και χρησιμοποιήθηκε σε κάθε δοκιμασία. Ο ορός αραιώθηκε σειριακά από 1:100 – 1:100,000 και προστέθηκαν σε τρυβλία 96 φρεατίων χαμηλού όγκου (Corning) επικαλύφθηκαν όλη τη νύκτα στους 4 ° C με 1 μg /mL αντιγόνου εντός 25 μΙ και αποκλείστηκαν για 2 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου με PBS που περιέχει 5% άπαχο γάλα. Μετά από ολονύκτια επώαση, οι πλάκες πλύθηκαν εκτεταμένα με PBS που περιέχει 0.2% Tween 20 και ξεπλένονται με PBS (BioTek ELx405 αυτόματο πλυντήριο). Ορός IgG δεσμευμένη σε αντιγόνα ανιχνεύθηκε με αντισώματα κατσίκας αντι-ανθρώπινης IgG συζευγμένο με αλκαλική φωσφατάση (Southern Biotech). Μετά την προσθήκη του υποστρώματος Attophos (Fisher Scientific), φθορίζον σήμα μετρήθηκε χρησιμοποιώντας ένα Cytofluor Series 4000 αναγνώστη φθορισμού (PerSeptive Biosystems). Μια αμοιβαία τίτλος υπολογίστηκε για κάθε δείγμα πλάσματος ως η μέγιστη αραίωση ακόμη αντιδρά σημαντικά σε ένα συγκεκριμένο αντιγόνο. Η εξειδίκευση προσδιορίστηκε με σύγκριση οροαντιδραστικότητα μεταξύ των διαφόρων αντιγόνων που δοκιμάστηκαν. Σε κάθε δοκιμασία, οι οροί από ασθενείς με γνωστή δραστικότητα χρησιμοποιήθηκαν ως μάρτυρες. Ένα θετικό αποτέλεσμα ορίστηκε ως αμοιβαία τίτλοι & gt?. 100

Στατιστική Ανάλυση

Όλες οι στατιστικές αναλύσεις που παράγεται με τη χρήση του λογισμικού SAS (SAS Σύστημα Copyright 2002 SAS Institute Inc. v.9.2) και το R 2.15.3 στατιστική γλώσσα υπολογιστών. Ένα ονομαστικό επίπεδο σημαντικότητας 0.05 χρησιμοποιήθηκε σε όλες τις δοκιμές. Χρησιμοποιώντας έναν πίνακα έκτακτης 2 × 2, προσδιορίστηκε το επίπεδο της αντιστοιχίας μεταξύ των διαφόρων προφίλ γονιδιακής έκφρασης MAGE. Οι κατανομές του MAGE-Α1, -Α3, -Α4, -A10 και -C1 έκφρασης και της κλινικής έκβασης αναλύθηκαν με τη Wilcoxon Rank Sum Test ή Pearson Chi square test. Η πολυπαραγοντική ανάλυση για ανεξάρτητους προγνωστικούς παράγοντες της επιβίωσης ελέγχθηκαν με τη χρήση του μοντέλου Cox αναλογικών κινδύνων [19]. Εκτιμώμενο διανομές επιβίωσης υπολογίστηκαν με τη μέθοδο των Kaplan και Meier [20], και οι δοκιμές του σημασία για διανομές επιβίωσης βασίστηκαν στην δοκιμασία log-rank. Σχετική πρόγνωση συνοψίστηκε με τη χρήση εκτιμήσεων και 95% όρια εμπιστοσύνης για την αναλογία κινδύνου (HR). Δεν έγιναν προσαρμογές για πολλαπλές συγκρίσεις. Ένα φυλογενετικό δέντρο κατασκευάζεται από απόσταση Manhattan, κωδικοποίηση της έκφρασης ως μηδέν (απούσα) και ένα (σήμερα), και η τυπική γείτονα που ενώνει αλγόριθμο.

Αποτελέσματα

Πληθυσμός μελέτης

Ένα σύνολο 400 ιστών από ασθενείς με ωοθηκών, πρωτογενή περιτοναϊκή και φαλλοπιανού καρκίνων σωλήνα ερευνήθηκαν με RT-PCR και IHC. Τα χαρακτηριστικά των ασθενών σε αυτή τη μελέτη παρουσιάζονται στον Πίνακα 1. Η μέση ηλικία του δείγματος των ασθενών ήταν 63 (εύρος: 21 έως 93), με διάμεση διάρκεια παρακολούθησης 35 μήνες (εύρος: 1-176 μήνες) . Όπως ήταν αναμενόμενο, η πλειοψηφία των ασθενών που παρουσιάζονται με προχωρημένη νόσο στάδιο (82%), χαμηλής διαφοροποίησης όγκους (74%) και με ορώδης ιστολογία (64%). ευαίσθητος Platinum νόσος καταδείχθηκε σε 182 από τους 400 ασθενείς (46%), με 116 ασθενείς που έχουν αντίσταση από λευκόχρυσο (29%), και 16 ασθενείς με πλατίνη πυρίμαχο απόκριση (4%). Η διάμεση OS για όλους τους ασθενείς ήταν 40 μήνες (εύρος: 0-173), ενώ η διάμεση PFS ήταν 12 μήνες (εύρος: 0-160).

Η

Έκφραση της MAGE-Α1, MAGE-Α3 , MAGE-Α4, ΜΑΟΕ-Α10 και MAGE-C1 σε καρκίνο των ωοθηκών

η έκφραση των αντιγόνων MAGE αξιολογήθηκε τόσο από RT-PCR και IHC για την πλειοψηφία των ασθενών από τους οποίους κατάλληλα δείγματα ήταν διαθέσιμα. Η έκφραση του MAGE-Α4 και MAGE-Α10 εντοπίστηκε να συμπίπτει με τις δύο μεθόδους (r = 0,31, OR = 3,88, p & lt? 0.001? R = 0,14, OR = 2,00, p & lt? .001 Αντίστοιχα), αλλά τα αποτελέσματα MAGE-Α3 δεν ήταν επαναλήψιμα συγκλίνουσες (r = -0.06, OR = 0,86, p = 0,9198), λόγω του χαμηλού ποσοστού ανίχνευσης (Πίνακας S3). Εκτός αν αναφέρεται διαφορετικά, προχωρήσαμε κατατάσσοντας ιστούς ως αντιγόνο θετικό αν ταυτοποιήθηκαν με RT-PCR ή IHC (Πίνακας 2). Κατά συνέπεια, κατά την εξέταση όλων των 400 δείγματα ιστών αναλύθηκαν με RT-PCR ή IHC σε αυτή τη μελέτη, οι συχνότητες για MAGE-Α3, Α4 και -A10 έκφρασης με οποιαδήποτε μέθοδο ήταν 36% (131/390), 47% (186/399 ) και 52% (204/395) των ιστών, αντίστοιχα (Πίνακας 2). MAGE-A1 και -C1 απέδειξαν τη χαμηλότερη συχνότητα της έκφρασης στο 15% (42/281) και 16% (42/267), αντίστοιχα. Πίνακας S3 είναι μια περίληψη της συχνότητας του MAGE mRNA και έκφρασης πρωτεΐνης σε δείγματα όγκου από το ΕΓΚ ασθενείς.

Η

MAGE-Α3, Α4 και -A10 δεν επέδειξε ανοσοχρώση σε φυσιολογικούς ιστούς (Figs.1A -C) αλλά έντονη ανοσοχρώση σε όρχεις (Figs.1D-F). Το πρότυπο χρώσης ήταν κυτταροπλασματικό και πυρηνικό για ΜΑΟΕ-Α3 και Α-4, και διάχυτη κυτταροπλασματική χρώση για MAGE-Α10 (Figs.1G-I).

Τα δείγματα χρωματίστηκαν με πολυκλωνικό αντίσωμα για MAGE-Α3 (X20 ), οι κλώνοι 57β και υπερκείμενα υβριδώματος A3 για MAGE-Α4 και MAGE-Α10, αντίστοιχα (X15). Δείγματα από την κανονική ωοθήκη και όρχεις χρησιμοποιήθηκαν ως αρνητικοί και θετικοί μάρτυρες αντίστοιχα. Α-Ο: Χρώση της κανονικής ωοθήκης που δεν εμφανίζει καμία αντιδραστικότητα. D-F: Χρώση των όρχεων που δείχνει σπερματικών σωληναρίων με ισχυρή ενδοσωληναριακό χρώση, και απουσιάζει η μη ειδική αντιδραστικότητα. G-Ι:. Χρώση των όγκων των ωοθηκών επίδειξη ισχυρής κυτταροπλασματική ή /και τα πρότυπα πυρηνικής χρώσης

Η

Συν-έκφραση του MAGE-Α και MAGE-C1 σε καρκίνο των ωοθηκών

Οι συχνότητες των συν-έκφραση των αντιγόνων MAGE φαίνονται στον πίνακα 2. Η υψηλότερη συχνότητα του συν-έκφραση παρατηρήθηκε για Α4: -A10 (29%). Ενώ και οι δύο συγκριτικά σπάνια, η MAGE-C οικογένειας αντιγόνου (-C1) έτειναν να είναι συν-εκφράζεται με ΜΑΟΕ-Α1 [OR 4,4, ρ = 0,00015, CI 03.06 έως 05.02] και να εκφράζεται ανεξάρτητα με το άλλο MAGE- Μια οικογένεια αντιγόνων (Σχήμα 2α). MAGE-Μια οικογένεια αντιγόνων Α1: Α4 [OR 3.7, p = 0,0003, 3,0-4,4] και Α1: Α3 [OR 2,8 p = 0,0022, CI 02.02 – 03.05] να έχει την ισχυρότερη συν-έκφραση? σχεδόν κάθε ζεύγος συνδέεται με εξαίρεση Α1: Α10 (OR = 1,2, p = 0,7 CI 0,6 – 1,8), γεγονός που υποδηλώνει ότι εκφράζονται ανεξάρτητα. Για να χαρακτηρίσουμε την πολυμεταβλητή μοτίβο έκφρασης MAGE, το φυλογενετικό δέντρο στο σχήμα 2β δημιουργήθηκε, σύμφωνα με την οποία κάθε φύλλο καταλήγει σε ένα γράφημα πίτας συμβολίζει ένα άτομο ή ένα σύνολο ατόμων. Υπάρχουν δύο διακριτά πρότυπα έκφρασης που παρατηρούνται. Το γονίδιο MAGE-Α4 κατευθύνει ένα σημαντικό μοτίβο έκφρασης (κάτω δεξιά κλάδων χέρι), και στη συνέχεια εξελίσσεται σε MAGE-Α3 και Α10 έκφραση σε αυτόν τον πληθυσμό ασθενών. Το δεύτερο μοναδικό πρότυπο έκφρασης αποτελείται από μία ανεξάρτητη έκφραση του MAGE-Α3 και -A10, το οποίο στη συνέχεια εξελίσσεται σε Α4 (άνω δεξιά κλάδων χέρι). Σε πλήρη αντίθεση, η έκφραση MAGE-C1 σπάνια εμφανίζεται μόνη της και προκύπτει σποραδικά σε όλη τη φυλογενετικό δέντρο. Ομοίως, MAGE-A1 εμφανίζεται σπάνια και σπάνια στην clade MAGE-A10. Οι παρατηρήσεις αυτές μεταφράζονται σε ισχυρή κλινική σημασία σε αυτή την μεγάλη ομάδα μελέτης.

(Α) MAGE-A1 είναι συν-εκφράζεται με Α3 ή Α4 ή -C1. MAGE-Α3 είναι συν-εκφράζεται με -A10. MAGE-Α4 είναι συν-εκφράζεται με MAGE-A10. Η πιο σκοτεινή ένταση του χρώματος αντιπροσωπεύει μια ισχυρότερη σημασία. Οι ισχυρότερες ενώσεις είναι μεταξύ MAGE-Α1 έως Α4, MAGE-A1-C1 έως και MAGE-Α1 έως Α3. αναλογίες πιθανοτήτων (OR) είναι μεγαλύτερη από 1 συνεπάγεται τα αντιγόνα τείνουν να εμφανίζονται μαζί. (Β) φυλογενετικό δέντρο για έκφραση MAGE. Κάθε φύλλο τελειώνει σε ένα γράφημα πίτας συμβολίζει ένα πρόσωπο.

Η

Συσχέτιση της MAGE αντιγόνου Έκφρασης με την κλινική έκβαση

Η σχέση μεταξύ της έκφρασης MAGE και κλινική-παθολογική παραμέτρους διερευνήθηκε. Βρήκαμε ότι η MAGE-Α3 και Α4 δεν έχουν ατομική προγνωστικά αποτελέσματα. Κατά συνέπεια, εστιάσαμε περαιτέρω ανάλυση για MAGE-Α1, MAGE-Α10, MAGE-C1 και άλλων γνωστών κλινικο-παθολογική προγνωστικούς παράγοντες για τον καρκίνο των ωοθηκών.

Μόνος, έκφραση MAGE-A10 (204/395, 52%) σχετίστηκε με χειρότερη κλινική έκβαση (διάμεση PFS 8.8 [07.02 – 12.03] έναντι 15,5 [13,6 έως 18,4] μήνες,

σ

= 0,009? OS 37.8 [28,2 έως 45,0] έναντι 45,0 [39,8 έως 52,2] μηνών, p = 0,0781). Συν-έκφραση με MAGE-C1 (25/204, 12%) αντιστραφεί αυτή η τάση για PFS, αλλά δεν OS: Α10 (+) /C1 (-) ασθενείς είχαν διάμεση PFS 7,9 μήνες (7,0 έως 12,1) έναντι Α10 (+) /C1 (+) 13.1 μήνες (CI9.5-29.9). Κατηγοριοποιήθηκαν σε τέσσερις ομάδες με βάση την Α10 /πρότυπο έκφρασης C1, αυτό το μοτίβο κατέχει (δοκιμασία log-rank p = 0,0133) και υποδηλώνει ότι Α10 (-) /C1 (+) η έκφραση μπορεί να είναι προστατευτική (διάμεση PFS 20 [15,7-NA] μήνες ) (Εικ. 3).

Συνολικά καμπύλες επιβίωσης για ομάδες ασθενών με βάση την MAGE-Α10 και -C1 έκφρασης. έκφρασης MAGE-C1 προβλέπει μια βελτιωμένη επιβίωση χωρίς εξέλιξη και μία τάση προς τη βελτίωση της συνολικής επιβίωσης. Έκφραση της MAGE-Α10 μειώνει την επιβίωση αποτελέσματα του βαθμού ασθενών με αρνητική έκφραση MAGE.

Η

μοτίβα έκφρασης δεν είχαν από κοινού που σχετίζονται με την ηλικία (p = 0,900), το στάδιο (p = 0,1373), Βαθμός ( p = 0,4532), ιστολογία (p = 0,737), πρωταρχική θέση (p = 0.744) ή debulking κατάσταση (p = 0,112) (Πίνακας 3). έκφραση MAGE-C1 συνδέθηκε με ευαίσθητο πλατίνα νόσο (28/38, 74% έναντι 70/142, 49%? p = 0,009) και την κλινική ανταπόκριση (30/38, 79% έναντι 92/164, 56%, σ = 0,015).

η

Παρά το γεγονός ότι επικεντρώνεται στην MAGE-A10, η λιγότερο διαδεδομένη MAGE-A1 (42/281, 15%) ήταν επίσης ήπια σχετίζεται με χειρότερη έκβαση επιβίωση (διάμεση PFS 10,3 [6.2- 15.0] έναντι 12,8 [10,5 έως 15,7] μήνες

σ

= 0,043, OS 38.7 [20,3 έως 78,4] έναντι 41,3 [36,5 έως 46,6] μηνών p = 0.607). Για PFS, MAGE-Α1 συν-έκφραση με Α10 είναι περιττή (στρωματοποιημένη δοκιμασία log-rank p = 0.57), ωστόσο Α1 (+) /A10 (-) ασθενείς έχουν ελαφρώς χειρότερη πρόγνωση (διάμεση PFS 12,7 [5,3 – 36,6] έναντι 16,3 [14,1 έως 19,4] μηνών, p = 0,0187). Για το μοντέλο και τις τρεις αντιγόνα από κοινού, προτείνουμε την εξέταση της έκφρασης είτε του A1 ή Α10 αντιγόνο μαζί με την έκφραση του MAGE-C1? το αποτέλεσμα δεν είναι σημαντικά διαφορετική από τη στρωματοποίηση παρουσιάζονται στον Πίνακα 3.

Συσχέτιση αντισώματος απάντηση στην MAGE αντιγόνο με την κλινική έκβαση

ELISA για MAGE ορό αντιγόνου-ειδικά αντισώματα πραγματοποιήθηκε σε δείγματα ορού που ελήφθη κατά τη διάγνωση από 285 από τους ασθενείς ΕΓΚ 400 (Πίνακας 2). Αυθόρμητα προκαλούμενη χυμική απόκριση σε τουλάχιστον ένα ΜΑΟΕ-αντιγόνο Α παρατηρήθηκε στο 9% (27/285) των ασθενών των οποίων το 85% (23/27) εξέφρασε επίσης ένα MAGE-A αντιγόνου. Η απάντηση ορολογικές σε οποιοδήποτε αντιγόνο MAGE ήταν κατανεμημένα ισομερώς μεταξύ όλων των παραμέτρων κλινικο-παθολογικές (Πίνακας 4). Η παρουσία του χυμική άνοση απάντηση σε οποιοδήποτε από τα αντιγόνα MAGE προβλέψει μια χειρότερη συνολική επιβίωση (διάμεση PFS 12,3 [6,4 – 19,7] έναντι 13.5 [10,9 έως 16,5] μηνών, p = 0,231? Διάμεση OS 27.8 [17,3 έως 52,2] vs 45.4 [40,2 έως 51,9] μηνών, p = 0,002) (Σχήμα 4).

Συνολικά καμπύλες επιβίωσης για τις ομάδες ασθενών με βάση την παρουσία των αντι-MAGE αυτοαντισώματος. Χυμική απόκριση σε οποιοδήποτε αντιγόνο MAGE προβλέπει κακή συνολική επιβίωση, και καμία σημαντική συσχέτιση με την επιβίωση χωρίς εξέλιξη.

Η

Συζήτηση

Η ανοσοθεραπεία είναι μια πολλά υποσχόμενη προσέγγιση για τη βελτίωση των ποσοστών επιβίωσης και της κλινικής εκβάσεις σε ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών [21] – [23]. Μεταξύ των πιθανών στόχων αντιγόνων όγκου, CTA θεωρούνται ως οι πλέον υποσχόμενοι υποψήφιοι για την ανάπτυξη εμβολίων κατά του καρκίνου. Για να εκτιμηθεί η χρησιμότητα της οικογένειας MAGE CTA ως στόχοι για ειδική ανοσοθεραπεία στην EOC, η παρούσα ολοκληρωμένη ανάλυση πραγματοποιήθηκε σε μια μεγάλη ομάδα των όγκων των ωοθηκών. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ανώμαλη έκφραση του ΜΑΟΕ-Α1, MAGE-Α3, MAGE-Α4, ΜΑΟΕ-Α10 και MAGE-C1 σε 15%, 36%, 47%, 52% και 16% των δειγμάτων EOC, αντίστοιχα. Επιπλέον, βρήκαμε ότι εξετάζει κάποιο από αυτά τα αντιγόνα MAGE, περίπου το 78% έδειξε έκφραση τουλάχιστον ενός από αυτά τα πέντε CT αντιγόνα. Επιπλέον, η έκφραση MAGE-A10 MAGE-A1 και συνδέθηκαν με κακή κλινική έκβαση, ενώ MAGE-C1 /CT7 συσχετίστηκε με βελτιωμένη επιβίωση.

Η συχνότητα της έκφρασης MAGE στο ΕΓΚ που αναφέρουμε είναι γενικά σύμφωνο με αυτό που αναφέρθηκαν για την πλειονότητα των άλλων όγκων, εκτός για το μελάνωμα και μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα [16], [24]. Η έκφραση του MAGE Α3 mRNA έχει βρεθεί σε 10-40% των διαφόρων τύπων όγκων, συμπεριλαμβανομένων της ουροδόχου κύστης [25], του μαστού [26] και του πολλαπλού μυελώματος [27]. Όσον αφορά την EOC, η συχνότητα των ΜΑΟΕ-Α1 και -Α3 έκφραση που αναφέρουμε είναι παρόμοια με αυτή που αναφέρθηκε σε προηγούμενες μελέτες, με την εξαίρεση του Zhang

κ.ά.

ο οποίος βρήκε μια έκφραση 54% και 37% σε ωοθηκών καρκινικούς ιστούς, αντίστοιχα [28] – [30]. Αυτό μπορεί να αντανακλά τις διαφορές στους πληθυσμούς της μελέτης, καθώς υπήρχαν πολύ περισσότεροι όγκοι πρώιμο στάδιο από ό, τι ομάδα μελέτης μας. Σε προηγούμενη μελέτη, η έκφραση του MAGE-Α4 συσχετίζεται αρνητικά με την επιβίωση ή έμμεσα με την καθιερωμένη προγνωστικούς παράγοντες στον καρκίνο των ωοθηκών [31]. Σύμφωνα με αυτές τις μελέτες, τα ευρήματά μας καταδεικνύουν μια σαφή συσχέτιση έκφρασης MAGE και την πρόγνωση. Από την άποψη αυτή, ενώ η έκφραση MAGE-A10 ΜΑΟΕ-Α1 και συνδέθηκαν με κακή κλινική έκβαση, MAGE-C1 συνδέθηκε με βελτιωμένη επιβίωση. Αυτές οι αντιθέσεις ευρήματα επιβίωσης μεταξύ των διαφόρων οικογενειών αντιγόνο MAGE εγείρουν πολλά βασικά ερωτήματα σχετικά με το ρόλο των γονιδίων MAGE στην ογκογένεση, εισβολή και μετάσταση στο ΕΓΚ.

Σε γενικές γραμμές, τα αντιγόνα MAGE τα πιο συχνά εκφράζονται σε ασθενείς με προχωρημένη νόσο και κακή έκβαση, υποδεικνύοντας ότι η έκφραση τους μπορεί να συνεισφέρει στην ογκογένεση [26], [32] – [37]. Αρκετές μελέτες έχουν δείξει ότι οι πρωτεΐνες MAGE είναι κρίσιμα για την κυτταρική επιβίωση, αύξηση των ογκογόνων ιδιοτήτων των κυττάρων και ως εκ τούτου, μπορεί να συμβάλλει ενεργά στην ανάπτυξη κακοηθειών [38] – [40]. Επιπλέον, δεδομένου ότι η έκφραση του αντιγόνου CT έχει συσχετιστεί με ογκογόνο μετασχηματισμό των βλαστικών κυττάρων του καρκίνου [41], είναι πιθανό ότι MAGE-A1 και MAGE-A10 εκφράζουν ωοθηκών καρκινικά κύτταρα αντιπροσωπεύουν ένα πληθυσμό με την αυτο-ανανέωση ιδιότητες βλαστικών κυττάρων, και ως εκ τούτου πιο ανθεκτικά να άνοση αποβολή ή χημειοθεραπεία.

σε αντίθεση με ΜΑΟΕ-Α1 και MAGE-Α10, ο πιθανός μηχανισμός (ες) με την οποία η έκφραση του MAGE-C1 /CT7 παρέχει όφελος επιβίωσης είναι λιγότερο σαφής. Κατά τη σύγκριση της πρωτεϊνικής δομής των μελών της οικογένειας MAGE, ενώ η πρώτη και η δεύτερη περιοχή είναι εξαιρετικά διατηρημένες μεταξύ των ΜΑΟΕ-Α και -C μέλη της οικογένειας, ο MAGE-C1 πρωτεΐνη φέρει ένα μοναδικό χαρακτηριστικό. Εκτός από μια 275-αμινοξέων MAGE-ομόλογο τμήμα στο C-άκρο αυτής, MAGE-C1 /CT-7 έχει μία περιοχή 867 αμινοξέων που αποτελείται από τρεις τύπους διαδοχικές επαναλήψεις σε Ν-άκρο της [11]. Αυτή η περιοχή μπορεί να είναι σημαντικής σημασίας, καθώς η επαναλαμβανόμενη αλληλουχία πρωτεΐνης μπορεί να διαμορφώσει τις επιτόπων που υπάρχουν για ανοσολογική αναγνώριση των MAGEC1 /CT-7 και ενδεχομένως με τον τρόπο αυτό καθορίζουν την ποιότητα των προκυπτόντων ανοσοαποκρίσεων.

Επιπλέον, τα αποτελέσματα μας υποδεικνύουν ότι οι ασθενείς με αντι-MAGE χυμική ανοσία είχαν χειρότερη πρόγνωση. Τα ευρήματα αυτά δεν σημαίνουν κατ ‘ανάγκη ότι η αντι-MAGE ανοσολογικές αποκρίσεις επηρεάσει άμεσα τα αποτελέσματα της θεραπείας σε ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών. Δεδομένου ότι η πυκνότητα αντιγόνο που παρουσιάζεται από αντιγονοπαρουσιαστικά κύτταρα

in vivo

επηρεάζει διαφορικά την δημιουργία χυμικής κατά όγκων και αποκρίσεις Τ κυττάρου [42], προτείνουμε ότι οι ασθενείς οι οποίοι ανέπτυξαν αυθόρμητες ανοσολογικές αντιδράσεις είναι εκείνες με υψηλή πυκνότητα αντιγόνου επειδή προηγμένων βάρος της νόσου, και ως εκ τούτου με την χειρότερη πρόγνωση. Αυτοί οι ασθενείς είναι ακόμα πιθανό να επωφεληθούν από την MAGE-σκηνοθεσία ανοσοθεραπεία, διότι εν εξελίξει αντι-MAGE-Α ανοσολογικές αποκρίσεις τους δεν είναι αποτελεσματικές. Σε μια προηγούμενη μελέτη των αυθόρμητων χυμική ανοσολογικές αποκρίσεις έναντι του αντιγόνου NY-ESO-1 CT, ο αντίκτυπος της χυμική ανοσία ήταν ουδέτερη για την πρόγνωση των ασθενών [43].

Επειδή η έκφραση των αντιγόνων MAGE ρυθμίζεται από επιγενετικών μηχανισμών όπως μεθυλίωση και ακετυλίωση ιστονών, εμείς αιτιολογημένη ότι η έκφραση του αντιγόνου MAGE σε όγκους μπορεί να είναι το αποτέλεσμα της ενεργοποίησης ενός συντονισμένου προγράμματος έκφρασης των γονιδίων, παρά μια σειρά από ανεξάρτητα γεγονότα [6]. Χρησιμοποιώντας αναλυτικές μεθόδους, η παρούσα μελέτη εντόπισε σημαντικές συν-έκφραση μεταξύ των αντιγόνων MAGE. Αυτά τα αποτελέσματα υποστηρίζουν την ιδέα ότι ο καρκίνος των ωοθηκών αποκτά γαμετογονικής προφίλ μεταγραφής, στην οποία συνήθως σιγήσει γονίδια ενεργοποιούνται τώρα οδηγούν στην εξέλιξη του όγκου. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι το MAGE-Α4 είναι το κεντρικό γονίδιο που κατευθύνει το μοτίβο της έκφρασης των άλλων γονιδίων, με MAGE-C 1 μόνο αναδυόμενες σποραδικά στην φυλογενετικό δέντρο. Λαμβανόμενα μαζί, τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι το MAGE-A1, -A10 και -C1 είναι δυνατές προγνωστικοί παράγοντες στον καρκίνο των ωοθηκών, με ΜΑΟΕ-Α1 και Α-10 που σχετίζεται με κακή πρόγνωση? και MAGE-C1 /CT7 σχετίζεται με καλύτερη πρόγνωση. Προτείνουμε MAGE-A1 και MAGE-Α10 ως στόχοι προτεραιότητας για την ανοσοθεραπεία στον καρκίνο των ωοθηκών. Από MAGE-Α4 παρουσιάζει μία σχετικά υψηλή συχνότητα έκφρασης, και εμφανίζεται να κατευθύνει ένα σημαντικό πρότυπο του συν-έκφραση άλλων αντιγόνων MAGE (Σχ. 2β), προτείνουμε επίσης MAGE-Α4 ως στόχο προτεραιότητας για ανοσοθεραπεία καρκίνου των ωοθηκών.

Υποστήριξη Πληροφορίες

πίνακα S1.

Αστάρια για τα γονίδια MAGE για RT-PCR

doi:. 10.1371 /journal.pone.0104099.s001

(DOCX)

Πίνακας S2. MAGE αντισώματα και προϋποθέσεις

για IHC

doi:. 10.1371 /journal.pone.0104099.s002

(DOCX)

Πίνακα S3. κατάσταση αντιγόνο

MAGE στον καρκίνο των ωοθηκών

doi:. 10.1371 /journal.pone.0104099.s003

(DOCX)

Ευχαριστίες

Οι συγγραφείς θα ήθελα να ευχαριστήσω Erika Ritter και Χριστίνα Sedrak, από υποκατάστημα LICR Νέα Υόρκη, για την εξαιρετική τεχνική βοήθεια τους.