Αφηρημένο

Στόχος

Οι βιοδείκτες ικανό να διακρίνει τους ασθενείς οι οποίοι είναι πιθανό να ανταποκριθούν σε ορισμένους χημειοθεραπευτικούς παράγοντες θα μπορούσαν να βελτιώσουν την κλινική αποτελεσματικότητα. Οι σουλφατάσες (SULFs) παίζουν ένα κρίσιμο ρόλο στην παθογένεση μίας ποικιλίας ανθρώπινων καρκίνων. Εδώ, εστιάσαμε την έρευνα μας για την προγνωστική και προβλεπτική επιπτώσεις των

SULF2

μεθυλίωσης σε καρκίνο του στομάχου.

Μέθοδοι

Ανάδοχος CpG νησί μεθυλίωση του

SULF2

αναλύθηκε σε 100 γαστρικό δείγματα καρκίνου. Η

in vitro

ευαισθησία στην σισπλατίνη, docetaxel, γεμσιταβίνη, ιρινοτεκάνη και πεμετρεξίδη προσδιορίστηκαν με τη δοκιμασία ιστοκαλλιέργεια ανταπόκριση των ναρκωτικών (HDRA). Επιπλέον, 56 ασθενείς με γαστρικό καρκίνο που έλαβαν αγωγή με ένα τροποποιημένο σχήμα FOLFOX (δύο φορές την εβδομάδα οξαλιπλατίνη συν 5-FU και φολινικού οξέος) έχουν αναδρομική ανάλυση για την περαιτέρω αξιολόγηση της προγνωστικής και πρόβλεψης των επιπτώσεων των

SULF2

μεθυλίωσης σε καρκίνο του στομάχου.

Αποτελέσματα

Methylated

SULF2

(

SULF2M

) ανιχνεύθηκε σε 28 ασθενείς, ενώ οι υπόλοιποι 72 ασθενείς παρουσίασαν μη μεθυλιωμένα

SULF2

(

SULF2U

, ποσοστό μεθυλίωσης: 28%). Δείγματα με

SULF2U

ήταν πιο ευαίσθητα στην σισπλατίνη σε σύγκριση με εκείνους με

SULF2M

(ποσοστό αναστολής: 48.80% έναντι 38.15%,

P

= 0,02), ενώ τα δείγματα με

SULF2M

ήταν πιο ευαίσθητα στην ιρινοτεκάνη από

SULF2U

(ποσοστό αναστολής: 53.61% έναντι 40,92%,

P

= 0,01). Υπήρχαν καμία συσχέτιση μεταξύ των

SULF2

μεθυλίωση και

in vitro

ευαισθησία με docetaxel, gemcitabine και πεμετρεξίδη.

SULF2

μεθυλίωση βρέθηκε να έχει σημαντική συσχέτιση με την αποτελεσματικότητα της σισπλατίνης (

SULF2M

: 57.14%,

SULF2U

: 80,56%,

P

= 0,02 ) και ιρινοτεκάνη αποτελεσματικότητα (

SULF2M

: 89,29%,

SULF2U

: 62,50%,

P

= 0,01). Μεταξύ των 56 ασθενών που έλαβαν το τροποποιημένο σχήμα FOLFOX, παρατηρήθηκε σημαντική συσχέτιση μεταξύ της επιβίωσης και

SULF2

κατάσταση μεθυλίωσης (

SULF2M:

309 ημέρες, 95% CI = 236-382 ημέρες?

SULF2U:

481 ημέρες, 95% CI = 418-490 ημέρες?

P

= 0,02). Η πολυπαραγοντική ανάλυση έδειξε ότι

SULF2

μεθυλίωσης ήταν ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας της συνολικής επιβίωσης σε ασθενείς με γαστρικό καρκίνο που έλαβαν θεραπεία με βάση την πλατίνα χημειοθεραπεία.

Συμπέρασμα

SULF2

μεθυλίωση συνδέεται αρνητικά με την ευαισθησία σισπλατίνη

in vitro

.

SULF2

μεθυλίωση μπορεί να είναι ένα μυθιστόρημα προγνωστικό βιοδείκτη για ασθενείς με γαστρικό καρκίνο που έλαβαν θεραπεία με βάση την πλατίνα χημειοθεραπεία

Παράθεση:. Shen J, Wei J, Wang Η, Yang Υ, Yue G, Wang L , et al. (2013)

SULF2

μεθυλίωση συνδέεται με

In Vitro

Cisplatin ευαισθησία και την κλινική αποτελεσματικότητα για γαστρικός καρκίνος ασθενείς που θεραπεύονται με ένα τροποποιημένο FOLFOX σχήμα. PLoS ONE 8 (10): e75564. doi: 10.1371 /journal.pone.0075564

Επιμέλεια: Zhengdong Zhang, Ιατρικό Πανεπιστήμιο Nanjing, Κίνα

Ελήφθη: 12 του Ιουνίου, 2013? Αποδεκτές: 14, Αυγούστου του 2013? Δημοσιεύθηκε: 4 Οκτωβρίου 2013

Copyright: © 2013 Shen et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο χρηματοδοτήθηκε από επιχορηγήσεις από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (Grant Νο 81220108023 και 81172094) και Top Έξι ταλέντα του έργου της επαρχίας Jiangsu (Grant Νο 2011ws005). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

καρκίνο του στομάχου είναι μια από τις πιο συχνές αιτίες θανάτου από καρκίνο σχετίζονται με όλο τον κόσμο [1], [2]. Συνδυασμένες πρωτόκολλα θεραπείας, βασίζονται κυρίως σε πλατίνα και 5-φθοριοουρακίλη (5-FU), έχει αποδειχθεί ότι παρατείνει την επιβίωση των ασθενών? Ωστόσο, με οποιοδήποτε συνδυασμό των χημειοθεραπευτικών παραγόντων, το ποσοστό ανταπόκρισης είναι μόνο περίπου το 30% -50% [3], [4]. Σε μια προσπάθεια να βελτιωθεί η κλινική αποτελεσματικότητα, είναι σημαντικό και αναγκαίο να προσδιοριστούν βιοδείκτες ικανό να διακρίνει τους ασθενείς οι οποίοι είναι πιθανό να ανταποκριθεί σε ορισμένους χημειοθεραπευτικούς παράγοντες [4] – [9].

πρωτεογλυκάνες θειικής ηπαράνης (HSPGs ) είναι συνδέκτες για ηπαρίνη-δεσμευτικών αυξητικών παραγόντων και κυτοκινών που διανέμεται στην επιφάνεια του κυττάρου και στην εξωκυτταρική μήτρα. Δύο ισομορφές των εξωκυτταρικών θειικής ηπαράνης 6-Ο-endosulfatases (SULFs), SULF1 και SULF2, έχουν ανακαλυφθεί στα θηλαστικά. Και οι δύο πρωτεΐνες που εκκρίνονται στην κυτταρική επιφάνεια να διαμορφώνει την θείωση του HSPGs [10]. Αν και προηγούμενες μελέτες έχουν κατηγορηματικά υπογράμμισε τον κρίσιμο ρόλο που διαδραματίζουν SULFs στην παθογένεση μιας ποικιλίας καρκίνων του ανθρώπου, οι απόψεις σχετικά με το ρόλο της SULFs στην ανάπτυξη καρκίνου έχουν κάπως πολωμένο. Αρκετές μαρτυρίες δείχνουν ότι SULFs είναι αρνητικοί ρυθμιστές της ανάπτυξης των κυττάρων του όγκου, και ότι η υπερέκφραση του SULFs σε καρκινικά κύτταρα αναστέλλει την ανάπτυξη των κυττάρων από την απορύθμιση διάφορους παράγοντες, συμπεριλαμβανομένων των FGF-2, ΗΒ-EGF και HGF [11] – [13]. Άλλες μελέτες έχουν την άποψη ότι SULFs είναι θετικοί ρυθμιστές της ογκογένεση μονοπάτια σηματοδότησης, συμπεριλαμβανομένων Wnt, BMP, σκαντζόχοιρος και GDNF [14] – [16], και αυξημένη έκφραση του SULFs είναι διαδεδομένη σε διάφορες μορφές καρκίνου, συμπεριλαμβανομένων του στομάχου, του ηπατοκυτταρικού, του παγκρέατος και του μαστού καρκίνους, μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC) και κεφαλής και λαιμού όγκους [10], [13], [17] – [20]. Υψηλή έκφραση του SULF2 έχει συνδεθεί με κακή επιβίωση σε ασθενείς με ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα και NSCLC [18], [20]. Τα διαθέσιμα στοιχεία σχετικά με τα επίπεδα κατάστασης και την έκφραση της μεθυλίωσης του

SULFs

στο γαστρικό καρκίνο, ωστόσο, δεν είναι πειστικά, και η προγνωστική ή διαγνωστική αξία των

SULFs

για την πρόβλεψη χημειοευαισθησία παραμένει άγνωστη.

σε αυτή τη μελέτη, έχουμε αναλύσει τον προαγωγό CpG νησί μεθυλίωση του

SULF2

, το γονίδιο που κωδικοποιεί την endosulfatase SULF2, και η σύνδεσή του με το

in vitro

ευαισθησία στην σισπλατίνη, docetaxel , γεμσιταβίνη, ιρινοτεκάνη, και πεμετρεξίδη σε 100 ανθρώπινα γαστρικά δείγματα καρκίνου. Για το σκοπό αυτό, πραγματοποιήσαμε μια σειρά

in vitro

τεστ ευαισθησίας σε φρέσκο ​​αφαιρεθεί ιστοί όγκου του στομάχου και αξιολόγησε την πιθανή χρήση του

SULF2

κατάσταση μεθυλίωσης για την πρόβλεψη της χημειοθεραπευτικών αποτελεσματικότητα του εκεί μέσα. Στη συνέχεια, αναδρομικά ανέλυσε το

SULF2

μεθυλίωσης σε μία ομάδα από 56 ασθενείς με γαστρικό καρκίνο που έλαβαν αγωγή με ένα τροποποιημένο σχήμα FOLFOX και κατέληξε στο συμπέρασμα ότι

SULF2U

χρησιμεύει ως ανεξάρτητο προγνωστικό βιοδείκτη σε ασθενείς με γαστρικό καρκίνο που έλαβαν θεραπεία με ένα τροποποιημένο σχήμα FOLFOX.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθική Δήλωση

Όλες οι έρευνες που αφορούν τα ανθρώπινα συμμετέχοντες έχουν εγκριθεί από την προστατευτική Επιτροπή Ανθρωπίνων Ερευνών του Drum Tower Νοσοκομείο συνεργαζόμενο με την Ιατρική Σχολή του Πανεπιστημίου Nanjing και γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από όλους τους ασθενείς.

ασθενείς και δείγματα ιστών

συμμετείχαν ασθενείς ήταν εκείνοι που υποβάλλονται το γαστρεκτομή στο Τμήμα Γενικής Χειρουργικής του Νοσοκομείου Drum Tower, Nanjing, Κίνα κατά την περίοδο από τον Αύγουστο του 2010 έως τον Οκτώβριο του 2011. τα κριτήρια επιλεξιμότητας για την εγγραφή στη μελέτη περιελάμβανε τις ακόλουθες παραμέτρους: (1) ηλικία & gt? 18 χρόνια? (2) επιβεβαιώθηκε ιστολογικά αδενοκαρκίνωμα στομάχου, βλεννώδες ή κυττάρων σφραγιστικό δαχτυλίδι αδενοκαρκίνωμα? (3) υπάρχουν προηγούμενη ή ταυτόχρονη κακοήθειες εκτός από καρκίνο του στομάχου? (4) δεν υπάρχει προηγούμενο ιστορικό χημειοθεραπεία ή ακτινοθεραπεία, είτε επικουρικό ή παρηγορητική? και (5) επαρκή λειτουργία όλων των σημαντικών οργάνων. Δείγματα ιστού εκχυλίστηκαν από 100 προσφάτως αφαιρεθεί γαστρικών όγκων. Κάθε ιστός όγκου διαιρέθηκε σε δύο μέρη: (1) ένα μέρος διατηρήθηκε σε ισορροπημένο διάλυμα άλατος 4 ° C Hanks ‘με 1% πενικιλλίνη /στρεπτομυκίνη μετά τη συλλογή, και στη συνέχεια αποστέλλονται στο εργαστήριο μέσα σε 15 λεπτά σε 4 ° C, για το

in vitro

αξιολόγηση της χημειοευαισθησίας με δοκιμασία ιστοκαλλιέργειας απόκριση φαρμάκου (HDRA) [21], [22]? (2) το υπόλοιπο μέρος έγινε σε όγκους (FFPE) όγκου εμπεδωμένα σε παραφίνη σταθεροποιημένα με φορμαλίνη για παθολογικές παρατήρηση και την ανίχνευση μεθυλίωσης. Μελετήσαμε αναδρομικά τα ιατρικά αρχεία των ασθενών και τις εκθέσεις χειρουργική επέμβαση για τον εντοπισμό των κλινικών και ιστοπαθολογικών δεδομένων, συμπεριλαμβανομένου του φύλου, της ιστολογίας, θέση του όγκου, το στάδιο, ιστολογικό βαθμό και μετάσταση στους λεμφαδένες. Οι όγκοι ταξινομούνται σύμφωνα με τη Διεθνή Ένωση κατά του Καρκίνου (UICC) ΤΝΜ ταξινόμηση. Γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από όλους τους ασθενείς και τα πρωτόκολλα για τη μελέτη αυτή εγκρίθηκε από την προστατευτική Επιτροπή Ανθρωπίνων Ερευνών του Drum Tower Νοσοκομείο.

HDRA

διαδικασίες HDRA εκτελέστηκαν όπως αναφέρθηκε προηγουμένως από Furukawa και οι συνεργάτες του [21], [22]. Εν συντομία, τα φρέσκα ιστούς όγκων πλύθηκαν δύο φορές με ισορροπημένο αλατούχο διάλυμα του Hanks και κόβονται σε μικρά κομμάτια περίπου 10 mg σε βάρος και 0,5 mm σε διάμετρο, τα οποία στη συνέχεια τοποθετήθηκαν σε προετοιμασμένη κολλαγόνου (Σχεδιασμός Υγεία, Rochester, ΝΥ) επιφάνειες σε 24 -Καλά μικροπλάκες. Βέλτιστη συγκεντρώσεις των φαρμάκων που χρησιμοποιούνται για τη διάκριση

in vitro

ευαισθησία και αντίσταση ήταν 20 μg /ml για σισπλατίνης [23], 100 μg /ml για docetaxel [22], 50 μg /ml για γεμσιταβίνης [23], 20 μg /ml για το irinotecan [23], και 400 μg /ml για πεμετρεξίδη [5], σύμφωνα με την μέγιστη συγκέντρωση πλάσματος σε ασθενείς. Σισπλατίνη, docetaxel και ιρινοτεκάνη ελήφθησαν από Jiangsu Hengrui Ιατρικής Εταιρείας (Jiangsu, Κίνα), ενώ η πεμετρεξίδη και γεμσιταμπίνη ελήφθησαν από Eli Lilly and Company (Σαγκάη, Κίνα). 8 παράλληλα φρεάτια καλλιέργειας χρησιμοποιήθηκαν για κάθε συγκέντρωση φαρμάκου, καθώς και για τον έλεγχο. Οι πλάκες επωάστηκαν για 7 ημέρες στους 37 ° C υπό την παρουσία φαρμάκων διαλύθηκαν σε RPMI 1640 που περιέχει 20% ορό εμβρύου μόσχου και αφέθηκαν σε υγροποιημένη ατμόσφαιρα που περιέχει 95% αέρα-5% CO

2. Μετά ιστοκαλλιέργεια, 100 μΐ κολλαγενάσης τύπου Ι (0,1 mg /ml, Sigma, Σαγκάη, Κίνα) και 100 μΐ 3- (4,5-διμεθυλο-2-thiazotyl) -2,5-διφαινυλ-2Η- τετραζολίου ( ΜΤΤ) διαλύματος (5 mg /ml, Sigma, Σαγκάη, Κίνα) προστέθηκαν σε κάθε φρεάτιο καλλιέργειας και επωάστηκαν για άλλες 16 ώρες. Μετά από εκχύλιση με διμεθυλοσουλφοξείδιο, η απορρόφηση του διαλύματος σε κάθε φρεάτιο μετρήθηκε στα 540 nm.

Αξιολόγηση της ευαισθησίας σε αντικαρκινικούς παράγοντες σε HDRA

Η απορρόφηση ανά γραμμάριο καλλιεργημένου ιστού όγκου υπολογίσθηκε από τη μέση απορρόφηση του ιστού από 8 παράλληλα φρεάτια καλλιέργειας, και το βάρος του ιστού του όγκου προσδιορίστηκε πριν καλλιέργειας. Το ποσοστό αναστολής κάθε αντικαρκινικού παράγοντα υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας τον ακόλουθο τύπο: ρυθμός αναστολής (%) = (1-Τ /Ο) χ 100, όπου Τ είναι η μέση απορρόφηση των επεξεργασμένων όγκου /βάρους και C είναι η απορρόφηση σημαίνει ελέγχου όγκου /βάρους. Τα ποσοστά αναστολής αποκοπής χρησιμοποιείται για να διακρίνει την ευαίσθητη και τις ανθεκτικές περιπτώσεις υιοθετήθηκαν κατά 30%, 40%, 50%, και 60% για κάθε δοκιμαζόμενο φάρμακο. Η

in vitro

ποσοστό αποτελεσματικότητας και υπολογίζεται με βάση το ποσοστό αναστολής αποκοπής ως εξής:. Ποσοστό αποτελεσματικότητας (%) = αριθμός των ευαίσθητων περιπτώσεων /συνολικός αριθμός των περιπτώσεων

χημειοθεραπεία ασθενών

από όλους τους ασθενείς, 56 με Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG) κατάσταση (PS) ≤2 έλαβε μια τροποποιημένη FOLFOX (ένα συνδυασμό 5-FU και πλατίνα) σχήμα χημειοθεραπείας μετά την εκτομή των πρωτοπαθών όγκων ως εξής: οξαλιπλατίνη 85 MGM

-2 συν φολινικό οξύ 200 MGM

-2 ως έγχυση 2 ωρών την ημέρα 1, ακολουθούμενη από μια έγχυση 22 ώρες 5-FU 2000 MGM

-2 τις ημέρες 1 και 2, κάθε δυο εβδομάδες. Αυτοί οι 56 ασθενείς υποβλήθηκαν περαιτέρω παρακολούθηση και ο χρόνος επιβίωσης τους υπολογίζεται από την ημερομηνία της διάγνωσης από την ημερομηνία της τελευταίας παρακολούθησης ή θανάτου από οποιαδήποτε αιτία.

DNA Εξόρυξη και Τροποποίηση

Τρεις τομές 7-μm παρασκευάσθηκαν από πρωτογενή τμήματα του όγκου που περιείχε τα καρκινικά κύτταρα τουλάχιστον κατά 80%. Μετά τη χρώση αιματοξυλίνης-ηωσίνης, τα καρκινικά μέρη είχαν μικροτομή και μεταφέρθηκαν σε ένα σωλήνα μικροφυγοκέντρου. DNA απομονώθηκε σαν ρουτίνα και στη συνέχεια χημικώς τροποποιημένη με όξινο θειώδες νάτριο για να μετατρέψει όλες τις μη μεθυλιωμένες κυτοσίνες σε ουρακίλες αφήνοντας αμετάβλητη methylcytosines [18]. Στη συνέχεια φυλάχθηκαν στους -20 ° C για περαιτέρω ανάλυση.

ειδική της μεθυλίωσης αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (MSP)

MSP εκτελέστηκε για να προσδιοριστεί η κατάσταση μεθυλίωσης του

SULF2

χρησιμοποιώντας το ΑΒΙ Prism 7300HT Σύστημα ανίχνευσης αλληλουχίας (Applied Biosystems). Κάθε αντίδραση PCR περιείχε γονιδιωματικό DNA 2 μΙ, SYBR Green PCR Mix (Takara, Ιαπωνία) 10 μΙ, νερό 7.7 μΐ, και εκκινητές 0,15 μΙ (10 μmol /l). Οι συνθήκες PCR ήταν 95 ° C για 10 λεπτά, ακολουθούμενη από 45 κύκλους στους 59 ° C για 30 s, 72 ° C για 30 s και 95 ° C για 30 s. Αστάρια για το

SULF2

μετουσιωμένο PCR (Takara, Ιαπωνία) έχουν ως εξής: προς τα εμπρός 5 ‘TAAGTGTTTTTTTTATAGCGGC 3’, αντίστροφη 5’TACCGTAATTTCCGCTATC 3 ‘. Αστάρια για το

SULF2

μη μεθυλιωμένα PCR (Takara, Ιαπωνία) έχουν ως εξής: προς τα εμπρός 5 ‘GTTTATAAGTGTTTTTTTATAGTGGT3 », αντίστροφη 5’TACCATAATTTCCACTATCCCT 3’. Κάθε παρτίδα της αντίδρασης περιελάμβανε ένα θετικό μάρτυρα από μεθυλοτρανσφεράσης (M.SssI) επεξεργασμένων με ανθρώπινο γονιδιακό DNA (πλήρως μετουσιωμένο), ένα αρνητικό έλεγχο από τα δείγματα DNA που είχαν επιβεβαιωθεί ως μη μεθυλιωμένη και ενός άλλου αρνητικού μάρτυρα χωρίς DNA. Όλες οι δοκιμές διεξήχθησαν εις διπλούν. Τα αποτελέσματα επικυρώθηκαν για επιλεγμένα δείγματα μέσω της συνδυασμένης τροποποίηση όξινου θειώδους και όξινου θειώδους αλληλουχίας.

Στατιστική Ανάλυση

Οι τιμές εκφράζονται ως μέσες τιμές ± τυπική απόκλιση. Οι διαφορές στα ποσοστά αναστολής μεταξύ των ομάδων αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας την t-test. Οι πιθανές ενώσεις SULF2 μεθυλίωσης με κλινικά χαρακτηριστικά και

in vitro

χημειοευαισθησία αποτελεσματικότητας αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το ακριβές τεστ πιθανότητας του Fisher. Όλες οι στατιστικές δοκιμασίες ήταν δύο όψεων, και μια τιμή Ρ μικρότερη από 0,05 θεωρήθηκε ως στατιστικά σημαντική. Η στατιστική ανάλυση έγινε με τη χρήση του SPSS, έκδοση 16.0.

Αποτελέσματα

Χαρακτηριστικά Ασθενών

Τα χαρακτηριστικά των ασθενών παρουσιάζονται στον Πίνακα 1. Η πλειοψηφία των ασθενών ήταν άνδρες (73%), και η επικρατούσα ιστολογία ήταν αδενοκαρκίνωμα (79%). Σε 35 (35%) ασθενείς, ο όγκος που βρίσκεται στην περιφερική στομάχι, σε 38 (38%) στην εγγύς στομάχι, και σε 27 (27%) στο σύνολο της στομάχι. Εξήντα τρεις (63%) ασθενείς είχαν σταδίου ΙΙΙ ή IV της νόσου. Λεμφαδενικές μεταστάσεις ήταν παρόντες σε 75 (75%) ασθενείς. Μεθυλιωμένα

SULF2

(

SULF2M

) ανιχνεύθηκε σε 28 ασθενείς, ενώ οι υπόλοιποι 72 ασθενείς παρουσίασαν μη μεθυλιωμένα

SULF2

(

SULF2U

, ποσοστό μεθυλίωσης: 28 %). Οι καμπύλες ενίσχυση RT-PCR του

SULF2M

και

SULF2U

δείχθηκαν στο Σχήμα S1. Δεν υπήρχε συσχέτιση μεταξύ της

SULF2

μεθυλίωση και οποιοδήποτε από τα χαρακτηριστικά των ασθενών, συμπεριλαμβανομένου του φύλου, της ιστολογίας, θέση του όγκου, το στάδιο, ιστολογικό βαθμό και μετάσταση στους λεμφαδένες.

Η

In vitro

αποτελεσματικότητα Ισοτιμία του Δοκιμασμένο Ναρκωτικών

in vitro

ευαισθησία στην σισπλατίνη, docetaxel, γεμσιταβίνη, ιρινοτεκάνη και πεμετρεξίδη δοκιμάστηκε με επιτυχία σε όλα τα δείγματα. Τα ποσοστά αναστολής μέση τιμή για κάθε δοκιμαζόμενο φάρμακο παρατίθενται στον Πίνακα 2. Τα δείγματα με

SULF2U

ήταν πιο ευαίσθητα στην σισπλατίνη σε σύγκριση με εκείνους με

SULF2M

(48.80% έναντι 38.15%,

P

= 0,02), ενώ τα δείγματα με

SULF2M

ήταν πιο ευαίσθητα στην ιρινοτεκάνη από

SULF2U

(53,61% έναντι 40,92%,

P

= 0.01, Πίνακας 2 και Σχήμα 1). Δεν υπήρχε συσχέτιση μεταξύ της

SULF2

μεθυλίωση και

in vitro

ευαισθησία με docetaxel, γεμσιταβίνη ή πεμετρεξίδη (Πίνακας 2). Όπως φαίνεται στον Πίνακα 3, δεν υπήρχε σχέση μεταξύ των ποσοστών αναστολής που παρατηρήθηκαν για τις αντικαρκινικών παραγόντων και οποιοδήποτε από τα κλινικά χαρακτηριστικά.

Ο διάμεσος είναι η κεντρική γραμμή σε κάθε κουτί.

Η

η

Για να διερευνήσει περαιτέρω την πιθανή σχέση μεταξύ

SULF2

μεθυλίωση και σισπλατίνη ή ιρινοτεκάνη ευαισθησία, η

εξετάστηκε in vitro

ποσοστό αποτελεσματικότητας της κάθε συγκέντρωσης φαρμάκου για τη δημιουργία διαφορετικών cut-off ποσοστά αναστολής (Πίνακας 4). εκδόθηκαν τέσσερις διαφορετικές τιμές cut-off: 30%, 40%, 50% και 60%. Στο αποκοπής του ποσοστού αναστολής 30%,

SULF2

μεθυλίωση βρέθηκε να έχει σημαντική συσχέτιση με την αποτελεσματικότητα της σισπλατίνης (

SULF2M

: 57.14%,

SULF2U

: 80.56 %,

P

= 0,02) και ιρινοτεκάνη αποτελεσματικότητα (

SULF2M

: 89,29%,

SULF2U

: 62,50%,

P

= 0.01, Σχήμα 2 και Πίνακας 4). Στο αποκοπής του 40%, 50% και 60% ποσοστό αναστολής, υπήρξε μια τάση ότι η

SULF2M

δείγματα έδειξαν υψηλότερη ιρινοτεκάνη αποτελεσματικότητα, αλλά μικρότερη αποτελεσματικότητα της σισπλατίνης από το

SULF2U

δείγματα (Πίνακας 4).

η

Σύλλογος

SULF2

μεθυλίωσης με κλινική ανταπόκριση στη χημειοθεραπεία

Μεταξύ των 56 ασθενών που έλαβαν το τροποποιημένο σχήμα FOLFOX, το διάμεσο χρόνος επιβίωσης ήταν 434 ημέρες (εύρος: 111 έως 641 ημέρες). Μια σημαντική συσχέτιση παρατηρήθηκε μεταξύ επιβίωσης και θέση του όγκου (

P

= 0,01). Καμία άλλη συσχέτιση μεταξύ κλινικών χαρακτηριστικών και της επιβίωσης βρέθηκε (Πίνακας 5 και Σχήμα 3).

SULF2M

ανιχνεύθηκε σε 19 ασθενείς, ενώ η

SULF2U

βρέθηκε σε 37 ασθενείς (

SULF2

ποσοστό μεθυλίωσης: 34%). Μια σημαντική συσχέτιση παρατηρήθηκε μεταξύ επιβίωσης και

SULF2

κατάσταση μεθυλίωσης. Η διάμεση συνολική επιβίωση ήταν 309 ημέρες (95% CI = 236 έως 382 ημέρες) για ασθενείς με

SULF2M

, και 481 ημέρες (95% CI = 418-490 ημέρες) για τα άτομα με

SULF2U

(

P = 0,02

, Εικόνα 3). Χρησιμοποιώντας τόσο μονοπαραγοντική και πολυπαραγοντική ανάλογη ανάλυση κινδύνου Cox που έλαβαν υπόψη την ηλικία, το φύλο, θέση του όγκου, το στάδιο, ιστολογικό βαθμό, μετάσταση στους λεμφαδένες και

SULF2

μεθυλίωση ως συμπαράγοντες, θέση του όγκου και

SULF2

μεθυλίωση παρέμεινε σημαντική δείκτες της συνολικής επιβίωσης σε ασθενείς με γαστρικό καρκίνο που υποβάλλονται σε χημειοθεραπεία με βάση την πλατίνα (Πίνακας 6).

η

η

Συζήτηση

Αν και προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει την συμμετοχή των SULF2 στην παθογένεση του καρκίνου, την αξία του σε πρόβλεψη χημειοευαισθησία παραμένει ασαφής. Αυτή η μελέτη επικεντρώνεται στην υποκινητή CpG νησί μεθυλίωση του

SULF2

ως πιθανό βιοδείκτη σε καρκίνο του στομάχου. Τα κύρια ευρήματα της παρούσας μελέτης δείχνουν ότι: (i) το ποσοστό των

SULF2M

στον ανθρώπινο καρκίνο του στομάχου είναι περίπου 30%? (Ii) τα πρώτα στοιχεία για το

SULF2U

συνδέεται με σισπλατίνη ευαισθησία στον καρκίνο? (Iii) αποδεικτικά στοιχεία για το

SULF2M

συνδέεται με ιρινοτεκάνη ευαισθησία σε καρκίνο του στομάχου? (Iv) μια αναδρομική μελέτη και επιβεβαίωση για το

SULF2

μεθυλίωσης σε μία ομάδα από 56 ασθενείς με καρκίνο του στομάχου, η οποία μας επέτρεψε να ανακαλύψει ότι

SULF2U

αποτελεί ανεξάρτητο προγνωστικό βιοδείκτη σε ασθενείς με γαστρικό καρκίνο που έλαβαν αγωγή με ένα τροποποιημένο σχήμα FOLFOX.

σε προηγούμενες μελέτες του καρκίνου του στομάχου, τα ευρήματα σχετικά με τα επίπεδα κατάσταση μεθυλίωσης και έκφραση

SULFs

ήταν ασαφή. Σε μία μελέτη, μόνο 13 πρώιμου σταδίου του μαστού και του γαστρικού καρκίνου, οι περισσότερες από τις οποίες ήταν σταδίου Ι, αναλύθηκαν με ημι-ποσοτική RT-PCR για

SULF1

έκφραση [24]. Αποδείχθηκε ότι η χαμηλή έκφραση του

SULF1

ήταν διαδεδομένη σε αυτούς τους δύο τύπους καρκίνου. Σε μια άλλη μελέτη, η έκφραση και των δύο

SULF1

και

SULF2

mRNA προσδιορίστηκε με πραγματικού χρόνου RT-PCR για μια μεγάλη ομάδα του γαστρικού καρκινικούς ιστούς, εύρημα που

SULFs

εκφράστηκαν σε υψηλότερα επίπεδα σε καρκίνο του στομάχου σε σύγκριση με φυσιολογικούς ιστούς. Στην παρούσα μελέτη βρήκαμε εξετάζοντας το

SULF2

μεθυλίωσης σε 100 γαστρικό δείγματα καρκίνου, ότι το ποσοστό των

SULF2M

ήταν περίπου 30%, η οποία ανέφερε ότι κυριαρχούν καρκίνο του στομάχου ήταν

SULF2U

. Πρόσφατες μελέτες από την ολοκληρωμένη γονιδιωματική αναλύσεις αποκάλυψαν ότι

SULF2

ενεργεί ως καθοδικός τελεστής του p53, και ότι η ενεργοποίηση του p53 θα μπορούσε να οδηγήσει στην

SULF2U

και up-ρύθμιση του

SULF2

. Η πιθανή σχέση μεταξύ ρ53 και SULF2 σε μονοπάτι σηματοδότησης παράγοντα ανάπτυξης πρότεινε ένα πιθανό ρόλο για SULF2 στην ανάπτυξη καρκίνου και την έκβαση ασθενών με καρκίνο »[25]. Η σχέση μεταξύ του

SULF2

unmethylation και

SULF2

πάνω ρύθμιση πρέπει να δοκιμαστεί περαιτέρω σε αυτά τα δείγματα. Τα διαφορετικά επίπεδα έκφρασης και μεθυλίωσης κατάσταση του

SULF2

μεταξύ όγκου και φυσιολογικού ιστού πρέπει επίσης να ελεγχθεί περαιτέρω.

Μελέτες για

SULF2

μεθυλίωση όπως χημειοευαισθησία προγνωστικό είναι λιγοστές. Η μεθυλίωση του

SULF2

υποστηρικτής έχει συσχετιστεί με καλύτερη επιβίωση των ασθενών εκτομή αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα, καθώς επίσης και με μια οριακή βελτίωση στην επιβίωση των ασθενών με προχωρημένο NSCLC που έλαβαν την κλασική χημειοθεραπεία (αναλογία κινδύνου = 0,63,

P

= 0,07) [18]. Μεταγενέστερες μελέτες έδειξαν ότι κυτταρικές σειρές NSCLC με

SULF2M

ήταν 134 φορές πιο ευαίσθητη σε αναστολέας τοποϊσομεράσης Ι από εκείνα με

SULF2U

. Στην παρούσα μελέτη, έχουμε αποδείξει ότι γαστρικών όγκων με

SULF2M

είναι πιο ευαίσθητα στην ιρινοτεκάνη από αυτούς με

SULF2U

. Επιπλέον, δείξαμε για πρώτη φορά ότι

SULF2

μεθυλίωση είναι επίσης ένας δυνητικός προγνωστική βιοδείκτη για την αποτελεσματικότητα της σισπλατίνης. Γαστρικών όγκων με

SULF2U

ήταν πιο ευαίσθητα στην σισπλατίνη σε σύγκριση με εκείνους με

SULF2M

, και γαστρικού καρκίνου σε ασθενείς με

SULF2U

έδειξε χαμηλότερη θνησιμότητα κατά την παραλαβή με βάση την πλατίνα χημειοθεραπεία. Παρά το γεγονός ότι αρκετές προγνωστική βιοδείκτες έχουν ταυτοποιηθεί για σισπλατίνη, όπως ERCC1 [7], BRCA1 [4], [26], [27] και ΧΚΧΧ1 [28] – [30], λαμβάνοντας υπόψη τις σχετικά χαμηλά ποσοστά απόκρισης του χρησιμοποιούνται συνήθως πλατίνα εισαγωγική πρωτόκολλο θεραπείας /5FU που βασίζεται σε ασθενείς προχωρημένο γαστρικό καρκίνωμα, η ταυτοποίηση βιοδεικτών για την πρόβλεψη ανταπόκριση χρειάζεται επειγόντως. Η ανακάλυψη ενός νέου πρόβλεψης βιοδεικτών που μπορούν να εξεταστούν με ανάλυση μεθυλίωσης είναι ενδιαφέρουσα και συμπληρωματικό. Ο λόγος για τον

SULF2

unmethylation αυξάνει την ευαισθησία του όγκου σε σισπλατίνη μπορεί να βρίσκεται για τα ένζυμα σύζευξης ουμπικουϊτίνης (UBE). Έχει αναφερθεί ότι

SULF2

μεθυλίωση οδηγεί σε αυξημένη έκφραση του UBE [18]. UBE πρόσθεσε ουβικιτίνης σε ορισμένα κατάλοιπα λυσίνης και συμμετείχε στην επιδιόρθωση του DNA, μεταλλαξιγένεση και τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων. Η υπερέκφραση ορισμένων UBEs, όπως RAD6B, θα μπορούσε να οδηγήσει σε σημαντική αντίσταση στη σισπλατίνη [31]. Περαιτέρω μελέτες θα πρέπει να διενεργείται με τη διερεύνηση του μοριακού μηχανισμού του

SULF2M

που προκαλείται από την αντίσταση σισπλατίνη.

Μια σημαντική συνεργιστική δράση της σισπλατίνης και DNA μεθυλοτρανσφεράση (DNMT) αναστολείς της 5-αζα-dC (DAC) στη βιωσιμότητα των κυττάρων παρατηρήθηκε στην cisplatin ανθεκτική AGS κυτταρική γραμμή, αλλά όχι στην σισπλατίνη ευαίσθητη κυτταρική γραμμή ΜΚΝ28 [32]. Τα δεδομένα από την ανάλυση ικανότητα σχηματισμού αποικίας έδειξε ότι knockdown του DNMT1 προκάλεσε αύξηση της σισπλατίνης ευαισθησίας [32]. Ο μοριακός μηχανισμός παραμένει ασαφής. Ωστόσο, η σχέση μεταξύ του

SULF2

μεθυλίωση και σισπλατίνη ευαισθησία μπορεί να εξηγήσει εν μέρει το φαινόμενο αυτό. Θεραπεία του γαστρικού καρκίνου με αναστολείς DNMT μπορούσε να οδηγήσει σε απομεθυλίωση του

SULF2

και, κατά συνέπεια, να αυξήσει την ευαισθησία στη σισπλατίνη. Έτσι, εκτός από την προγνωστική επίδραση, τα δεδομένα μας υποστηρίζει επίσης την συμπερίληψη ενός αναστολέα DNMT στην τρέχουσα πρωτόκολλα θεραπείας για τουλάχιστον ένα υποσύνολο των ασθενών με γαστρικό καρκίνο.

Συμπερασματικά, η μελέτη μας παρέχει νέες ενδείξεις ότι em

SULF2

μεθυλίωση συνδέεται αρνητικά με την ευαισθησία σισπλατίνη

in vitro

.

SULF2

μεθυλίωση είναι μια πιθανή προγνωστική βιολογικός δείκτης για ασθενείς με γαστρικό καρκίνο που έλαβαν θεραπεία με βάση την πλατίνα χημειοθεραπεία.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Εικόνα S1.

οι καμπύλες ενίσχυση RT-PCR του SULF2M και SULF2U. Η κόκκινη καμπύλη αντιπροσωπεύει ενίσχυση SULF2M, και το μπλε καμπύλη αντιπροσωπεύει ενίσχυση SULF2U. Το Σχήμα S1a δείχνει τις καμπύλες ενίσχυση του δείγματος με SULF2M? Σχήμα S1b δείχνει τις καμπύλες ενίσχυσης των δειγμάτων με SULF2U

doi:. 10.1371 /journal.pone.0075564.s001

(ΔΕΘ)