Αφηρημένο

Ένα λειτουργικό rs4245739 A & gt? C πολυμορφισμού ενός νουκλεοτιδίου (SNP) τον εντοπισμό στην

MDM4

3′-αμετάφραστη (3′-UTR) περιοχή δημιουργεί ένα miR-191-5p ή miR-887-3p περιοχές στόχευσης. Η αλλαγή αυτή έχει ως αποτέλεσμα μειωμένη έκφραση του ογκογονιδίου

MDM4

. Ως εκ τούτου, εξετάσαμε τη συσχέτιση μεταξύ αυτού του SNP και μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (SCLC) του κινδύνου καθώς και ρυθμιστική λειτουργία του σε SCLC κύτταρα. Γονότυποι προσδιορίστηκαν σε δύο ανεξάρτητα σύνολα περίπτωση ελέγχου αποτελούνταν από 520SCLC περιπτώσεις και 1040 ελέγχους από δύο περιοχές της Κίνας. αναλογίες πιθανοτήτων (OR) και 95% διαστήματα εμπιστοσύνης (ΠΙ) εκτιμήθηκαν με λογιστική παλινδρόμηση. Ο αντίκτυπος του SNP rs4245739 στο miR-191-5p /miR-887-3p μεσολάβηση

MDM4

ρύθμισης έκφρασης διερευνήθηκε χρησιμοποιώντας λουσιφεράση δοκιμασίες γονιδίου αναφοράς. Βρήκαμε ότι τα

MDM4

rs4245739AC και CC γονότυπους ήταν σημαντικά σχετίζεται με μειωμένο SCLC ευαισθησία σε σύγκριση με το γονότυπο ΑΑ και στις δύο σειρές ασθενών-μαρτύρων (Shandong που: OR = 0,53, 95% CI = 0,32 – 0,89,

P

= 0,014? σετ Jiangsu: OR = 0.47, 95% CI = 0,26 – 0,879,

P

= 0,017). Στρωματοποιημένη αναλύσεις έδειξαν ότι υπήρξε μια σημαντική πολλαπλασιαστική αλληλεπίδραση μεταξύ rs4245739 και το κάπνισμα (

P

interactioin = 0,048). Μετά από συν-επιμόλυνσης των miRNAs και διαφορετικές allelic-

MDM4

δημοσιογράφος κατασκευάζει σε SCLC κύτταρα, βρήκαμε ότι η τόσο miR-191-5p και miR-887-3p μπορεί να οδηγήσει σε σημαντικά μειωμένη

MDM4

δραστηριότητες έκφραση στο κατασκεύασμα με C-αλληλόμορφη 3′-UTR αλλά όχι ένα-αλληλικές 3′-UTR, προτείνοντας μια συνεπή γενότυπου-φαινότυπου συσχέτιση. Τα στοιχεία μας φωτίζουν το

MDM4

rs4245739SNP συμβάλλει στην SCLC κίνδυνο και να υποστηρίξει την ιδέα ότι το γονίδιο 3′-UTR γενετικές παραλλαγές, επηρεάζοντας miRNA-δεσμευτική, μπορεί να τροποποιήσει την ευαισθησία SCLC

Παράθεση:. Gao F , Xiong Χ, Παν W, Yang Χ, Zhou C, Yuan Q, et al. (2015) Μια Ρυθμιστική

MDM4

γενετική παραλλαγή Εντοπισμός στην αλληλουχία δέσμευσης των πολλαπλών Τα microRNAs Συμβάλλει στην Ευαισθησία μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα. PLoS ONE 10 (8): e0135647. doi: 10.1371 /journal.pone.0135647

Επιμέλεια: Yifeng Zhou, Ιατρικό Κολέγιο του Πανεπιστημίου Soochow, ΚΙΝΑ

Ελήφθη: 18 του Μάρτη του 2015? Αποδεκτές: 24 Ιουλ του 2015? Δημοσιεύθηκε: 14 Αυγούστου 2015

Copyright: © 2015 Gao et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του χαρτιού

Χρηματοδότηση: Η μελέτη αυτή υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας. (αριθμοί επιχορήγησης: 31271382 & amp? 81.201.586? URL: https://www.nsfc.gov.cn/) ? το Εθνικό Πρόγραμμα High-Tech Έρευνας και Ανάπτυξης της Κίνας (αριθμοί επιχορήγησης: 2015AA020950? URL: https://www.most.gov.cn/)? οι Θεμελιωδών Κονδυλίων Έρευνας για τις Κεντρικές Πανεπιστήμια (αριθμοί επιχορήγησης: YS1407? URL: https://www.moe.edu.cn/)? Πεκίνο Εκπαίδευση Νέων Έργων Ανώτατη Elite Δάσκαλος (αριθμοί επιχορήγησης: YETP0521? URL: https://www.bjedu.gov.cn/)? και το Πρόγραμμα για Changjiang μελετητές και πρωτοποριακή ομάδα Έρευνας στο Πανεπιστήμιο (αριθμοί επιχορήγησης: IRT13045? URL: https://www.moe.edu.cn/). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του πνεύμονα είναι οι κύριες αιτίες θανάτου από καρκίνο στον κόσμο, με περισσότερα than1,000,000 θανάτους ετησίως [1]. Ο καρκίνος του πνεύμονα είναι κοινώς ταξινομούνται ως μικροκυτταρικό καρκίνο πνεύμονα (SCLC) και καρκίνο των πνευμόνων μη μικρών κυττάρων (NSCLC). Αν και αντιπροσωπεύει μόνο περίπου είκοσι τοις εκατό όλων των περιπτώσεων καρκίνου του πνεύμονα, SCLC είναι πολύ πιο επιθετική σε σύγκριση με NSCLC [2,3]. Ως κακοήθεια με φτωχή πρόγνωση, SCLC παρουσιάζει υψηλό ποσοστό ανάπτυξης, γρήγορο χρόνο διπλασιασμού, και πρώιμη ανάπτυξη της ευρείας μεταστάσεων [2,3]. Όταν διαγνωστεί, οι περισσότεροι ασθενείς έχουν SCLC μετάσταση και κακή πρόγνωση αν αφεθεί χωρίς θεραπεία [3]. Συσσωρευμένες επιδημιολογικές ενδείξεις δείχνουν ότι το βαρύ κάπνισμα αποτελεί κύριο παράγοντα κινδύνου της νόσου [2,3] του περιβάλλοντος. Οι πρόσφατες εξελίξεις στις μελέτες συσχέτισης γονιδιώματος-ευρεία (GWAS) έχουν αποκαλύψει ότι οι πολλαπλές νέες γενετικές παραλλαγές που συνδέονται με την ευαισθησία του καρκίνου του πνεύμονα [4-12]. Ωστόσο, οι περισσότερες μελέτες που εξετάστηκαν δύο υποτύπους του καρκίνου του πνεύμονα ή επικεντρώνεται μόνο σε NSCLC. Είναι ενδιαφέρον ότι, η πλειοψηφία των προσδιορισμένων τόπους κινδύνου δεν επηρεάζουν σημαντικά τον κίνδυνο καρκίνου του πνεύμονα διαφορικά με ιστολογία, υποδεικνύοντας ότι μπορεί να υπάρχουν διαφορετικές γενετικές επιπτώσεις μακιγιάζ κίνδυνο SCLC ή NSCLC [4-12]. Ως εκ τούτου, η ανακάλυψη νέων SCLC κινδύνου που σχετίζεται με SNPs μπορεί να είναι ένα δυνητικά πολύτιμο πορεία προς το φωτισμό αιτιολογία του SCLC.

MDM4, επίσης γνωστή ως MDMX ή HDMX, είναι δομικά ομόλογη πρωτεΐνη MDM2. μετοχές MDM4 μια ΝΗ

2-τερματικό Ρ53-πεδίο σύνδεσης με MDM2 και μπορεί να αναστείλει τις δραστηριότητες της Ρ53 σε διάφορες κακοήθειες [13-17]. Ως θεματοφύλακας της ανθρώπινου γονιδιώματος, λειτουργίες P53 στο κέντρο ενός πολύπλοκου μοριακό δίκτυο να μεσολαβήσει καταστολή όγκου. Ως γνωστό ογκογονίδιο, υπερεκφράζονται MDM4 σε ανθρώπινους όγκους, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του πνεύμονα οδήγησε στην κατάθλιψη δραστηριότητες Ρ53 και, ως εκ τούτου, την ογκογένεση. Σύμφωνα με αυτό, μοντέλο ποντικού με υπερεκφράζεται MDM4 μέσω της τεχνολογίας διαγονιδιακά έδειξε αυθόρμητη καρκινογένεση κατά τη διάρκεια της ζωής τους [18].

Υπάρχει ένα

MDM4

3′-untranslatedregion (3′-UTR) rs4245739A & gt ? C SNP τον εντοπισμό στην θέση δέσμευσης στόχου για δύο miRNAs (miR-191-5p και miR-887-3p) [19,20]. miR-191-5p και miR-887-3p θα μπορούσε να δεσμεύονται επιλεκτικά σε

MDM4

3′-UTR με το αλληλόμορφο rs4245739C αλλά όχι 3′-UTR με το Α αλληλόμορφο. δέσμευσης οδηγεί Αυτό αλληλομόρφων miRNAs »σε αυξημένα επίπεδα έκφρασης του

mRNA MDM4

και /ή πρωτεΐνη μεταξύ rs4245739A αλληλόμορφο φορείς με καρκίνους [19-22]. Δύο GWAS έδειξαν ότι το

MDM4

rs4245739 A-αλληλόμορφο συνδέεται σημαντικά με αυξημένο κίνδυνο τόσο καρκίνου του προστάτη και του καρκίνου του μαστού [23,24]. Αρκετές μελέτες ασθενών-μαρτύρων χρησιμοποιώντας στρατηγική γονιδιακής υποψήφιος επιβεβαίωσε επίσης τη θετική συσχέτιση μεταξύ αυτού του πολυμορφισμού και την ευαισθησία του καρκίνου των ωοθηκών, του καρκίνου του μαστού, του οισοφάγου πλακώδες καρκίνωμα και μη-Hodgkin λεμφώματος σε διαφορετικές εθνοτικές πληθυσμούς [20,22,25,26]. Ωστόσο, η συμμετοχή αυτής της λειτουργικής SNP στο SCLC εξακολουθεί να είναι σε μεγάλο βαθμό άγνωστη. Λαμβάνοντας υπόψη το σημαντικό ρόλο της MDM4 στην καρκινογένεση, υποθέσαμε ότι η

MDM4

rs4245739 SNP μπορεί να συμβάλει στην SCLC ευαισθησίας μέσω της ρύθμισης αλληλομόρφων ofmiR-191-5p και /ή συγγένεια σύνδεσης miR-887-3p και, ως εκ τούτου, MDM4 έκφραση. Στην παρούσα μελέτη, πραγματοποιήσαμε μια μελέτη ασθενών-μαρτύρων σε δύο στάδια του μικροκυτταρικού καρκίνου του πνεύμονα που προσλαμβάνονται από Jinan πόλη (επαρχία Shandong, Κίνα) και Huaian πόλη (επαρχία Jiangsu, Κίνα). Επιπλέον, για να επικυρώσετε τη βιολογική λειτουργία αυτού του πολυμορφισμού, ερευνήσαμε τη ρύθμιση των αλληλομόρφων miR-191-5p και miR-887-3p για MDM4 στο SCLC κύτταρα.

Υλικά και Μέθοδοι

Μελέτη θέματα

Αυτή η μελέτη αποτελούνταν από δύο σύνολα case-control: σετ (i) Shandong case-control: 320 SCLC ασθενείς από Shandong Αντικαρκινικό Νοσοκομείο, Shandong Ακαδημίας Ιατρικών Επιστημών (Jinan, Shandong Province, Κίνα) και sex- και ίδιας ηλικίας (± 5 έτη) 640 ελέγχους. Οι ασθενείς που προσλαμβάνονται μεταξύ Ιουνίου 2009 και Νοεμβρίου 2014 Shandong Αντικαρκινικού Νοσοκομείου. άτομα ελέγχου επιλέχθηκαν τυχαία από ένα σύνολο 4500 ατόμων από ένα πρόγραμμα προσυμπτωματικού ελέγχου του καρκίνου κοινότητα για την έγκαιρη διάγνωση του καρκίνου που διεξάγονται στην πόλη Τζινάν, όπως περιγράφεται λεπτομερώς στο παρελθόν [22]. (Ii) σύνολο Jiangsu case-control: 200 SCLC ασθενείς από Huaian Νο 2 Νοσοκομείο (Huaian, στην επαρχία Jiangsu, Κίνα) και sex- και ίδιας ηλικίας 400 ελέγχους. Οι ασθενείς διαδοχικά προσληφθεί από τον Ιανουάριο του 2009 και Ιανουάριο του 2015 σε Huaian Νο 2 Νοσοκομείο. Οι μάρτυρες ήταν χωρίς καρκίνο άτομα που επιλέγονται από ένα κοινοτικό πρόγραμμα προσυμπτωματικού ελέγχου του καρκίνου (3600 άτομα) για την έγκαιρη ανίχνευση του καρκίνου που διεξάγονται στην πόλη Huaian όπως περιγράφεται λεπτομερώς στο παρελθόν [22]. Τα άτομα που κάπνιζαν ένα τσιγάρο την ημέρα για πάνω από 1 χρόνο θεωρήθηκαν ως καπνιστές [22]. Όλα τα θέματα που είχαν σχέση εθνοτικών Κινέζων Χαν. Η μελέτη αυτή εγκρίθηκε από την Institutional Review Boards του Huaian Νο 2 Νοσοκομείο και Shandong Αντικαρκινικό Νοσοκομείο, Shandong Ακαδημίας Ιατρικών Επιστημών. Γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από κάθε υποκείμενο σε προσλήψεις

SNP γονοτυπική

που βασίζεται στην PCR μήκους θραυσμάτων εκ περιορισμού πολυμορφισμού (RFLP) χρησιμοποιήθηκε για να προσδιοριστεί

MDM4

rs4245739A & gt?. C γονότυπους όπως περιγράφεται λεπτομερώς προηγουμένως [22,25,26]. Εν συντομία, οι εκκινητές που χρησιμοποιήθηκαν για ενίσχυση τμημάτων DNA με τη θέση rs4245739 (η βάση αναντιστοιχία υπογραμμίζεται) ήταν 5′-AAGACTAAAGAAGGCTGGGG-3 ‘και 5′-TTCAAATAATGTGGTAAGTGACC-3’. ένζυμο περιορισμού

Msp

Ι (New England Biolabs) χρησιμοποιήθηκε για την πέψη των PCR προϊόντων και να διακρίνουν τους γονότυπους rs4245739. Ένα τυχαίο δείγμα 10% ήταν αμοιβαία εξετάστηκε από διαφορετικό πρόσωπο, και η επαναληψιμότητα ήταν 98,7%. Επιπλέον, ένα 5% τυχαία δείγματα εξετάστηκαν επίσης μέσω αλληλούχισης Sanger, και η επαναληψιμότητα ήταν 100%.

πλασμίδιο κατασκευή

Οι

MDM4

rs4245739A και rs4245739C αλληλομόρφων κατασκευάσματα δημοσιογράφος ήταν παρασκευάζεται με ενίσχυση μέρος του

MDM4

περιοχής 3′-UTR από άτομα ομόζυγα για το rs4245739AA ή rs4245739CC γονότυπο. Οι εκκινητές PCR που χρησιμοποιήθηκαν ήταν ως εξής: 5′-AACTCTAGAGGTAGTACGAACATAAAAATGC-3 ‘και 5′-AACTCTAGACTGCATAAAGTAATCCATGG-3’, η οποία περιλαμβάνει τις

Xba Ι Ιστοσελίδα περιορισμού (υπογραμμισμένες αλληλουχίες). Τα προϊόντα PCR υποβλήθηκαν σε πέψη με

Xba

Ι (New England Biolabs) και συνδέθηκε, αντίστοιχα, σε ένα κατάλληλα χωνεμένο φορέα pGL3-ελέγχου (Promega). Τα κατασκευάσματα που ορίζονται aspGL3-rs4245739A και pGL3b-rs4245739C, αντίστοιχα. Τα ένθετα επιβεβαιώθηκαν με αλληλούχιση του DNA.

Διπλή γονίδιο αναφοράς λουσιφεράσης δοκιμασία

Ένα λουσιφεράση πυγολαμπίδας πλασμίδιο αναφοράς (pGL3-ελέγχου, pGL3-rs4245739A ή pGL3-rs4245739C), ένα φορέα λουσιφεράσης Renilla (pRL -SV40, Promega) συν 30 nMsmall RNAs (miR-191-5p μιμείται, miR-887-3p μιμείται ή αρνητικό RNAs ελέγχου) (Genepharma, Guangzhou, Κίνα) συν-επιμολύνθηκαν σε SCLCH446 κύτταρα με Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA). Η δραστικότητα λουσιφεράσης προσδιορίστηκε σε 48 ώρες μετά την επιμόλυνση χρησιμοποιώντας ένα σύστημα δοκιμασίας λουσιφεράσης (Promega) όπως περιγράφεται προηγουμένως [27-29]. Τρία ανεξάρτητα πειράματα διαμόλυνσης εκτελέσθηκαν και κάθε έγινε εις τριπλούν. Πλάσια αύξηση υπολογίστηκε με τον καθορισμό της δραστηριότητας των κενό φορέα pGL3-ελέγχου, όπως 1.

Στατιστική

αναλύει

Όπως περιγράφεται λεπτομερώς προηγουμένως [22, 30-32], οι διαφορές στις δημογραφικές μεταβλητές και κατανομές γονότυπου

MDM4

rs4245739 SNP μεταξύ SCLC περιπτώσεις και οι έλεγχοι υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας δοκιμή χ κατά Pearson

2. Συσχετίσεις μεταξύ των

MDM4

γονότυπους rs4245739 και SCLC κινδύνου εκτιμήθηκαν με αναλογία πιθανοτήτων (OR) και 95% διαστήματα εμπιστοσύνης τους (ΠΙ) υπολογίζεται χρησιμοποιώντας την άνευ όρων μοντέλο λογιστικής παλινδρόμησης. Όλες οι ΕΑΠ προσαρμόστηκαν ως προς την ηλικία, το φύλο και το κάπνισμα κατάσταση, όπου ήταν σκόπιμο. Δοκιμάσαμε τις μηδενικές υποθέσεις της πολλαπλασιαστική αλληλεπίδραση γονιδίων-συμμεταβλητή και αξιολογούνται αναχωρήσεις από πολλαπλασιαστική μοντέλα αλληλεπίδρασης με τη συμπερίληψη κύριες μεταβλητές αποτελέσματος και τους όρους των προϊόντων τους στο μοντέλο λογιστικής παλινδρόμησης [30-32]. Ένα

P

αξία μικρότερη από 0,05 χρησιμοποιήθηκε ως κριτήριο στατιστικής σημασίας, και όλα τα στατιστικά τεστ ήταν δύο όψεων. Όλες οι αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με το λογισμικό SPSS πακέτο λογισμικού (έκδοση 16.0, SPSS Inc., Chicago, IL).

Αποτελέσματα

συχνότητες Τα αλληλόμορφα και κατανομές γονότυπου του

MDM4

rs4245739SNP

Η διάμεση ηλικία ήταν 57 έτη (εύρος, 25 έως 82 ετών για Shandong που? εύρος, 23-79 ετών για την ομάδα Jiangsu) για τους ασθενείς και 57 έτη (εύρος, 19-80 ετών για την ομάδα Shandong? φάσμα, 20-81 χρόνια για παύση Jiangsu) για τους ελέγχους (Shandong που:

P

= 0.615? Jiangsu σετ:

P

= 1.000). Δεν υπήρχε σημαντική διαφορά μεταξύ των περιπτώσεων και ελέγχων στη διανομή σεξ (Shandong που: 78,4% άνδρες incases έναντι 76,4% στους ελέγχους?

P

= 0.480? Jiangsu σύνολο: 74,0% άνδρες incases έναντι 71,3% στους ελέγχους ?

P

= 0.479). Αυτό υποδεικνύει ότι η αντιστοίχιση συχνότητα ήταν επαρκής (Πίνακας 1). Ωστόσο, πιο καπνιστών μεταξύ SCLC ασθενείς βρέθηκαν στο σύνολο Shandong περίπτωση ελέγχου σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου (Shandong σύνολο: 77,8% έναντι 34,2%,

P

& lt? 0.001). Ομοίως, υπάρχουν περισσότερα SCLC ασθενείς που το κάπνισμα από τους ελέγχους στο σύνολο Jiangsu (78,5% έναντι 21,5%,

P

& lt? 0.001). Επιπλέον, οι περισσότεροι ασθενείς με περιορισμένη νόσο παρατηρήθηκαν από ό, τι μεταξύ αυτών με εκτεταμένη νόσο σε δύο σειρές (Shandong σύνολο: 56,9% έναντι 43,1%? Jiangsu σύνολο: 56,5% έναντι 43,5%).

Η

Όπως φαίνεται στον πίνακα 2, η συχνότητα για το

MDM4

αλληλόμορφο rs4245739 C ήταν 0.038 και 0.073among SCLC ασθενείς και υγιείς μάρτυρες από το σύνολο Shandong, και 0.043 και 0.101 από το σύνολο Jiangsu. Όλα τα παρατηρούμενα συχνότητες γονοτύπου και στις δύο περιπτώσεις SCLC και ελέγχους συμμορφώνονται με ισορροπία Hardy-Weinberg. Διανομές αυτά

MDM4

γονότυπους στη συνέχεια συγκρίθηκαν μεταξύ SCLC περιπτώσεις και τους ελέγχους. Οι συχνότητες των

MDM4

rs4245739 ΑΑ και AC ή CC γονότυπους μεταξύ των ασθενών ήταν σημαντικά διαφορετικές από εκείνες μεταξύ των ελέγχων στο σύνολο Shandong (χ

2 = 10,70,

P

= 0.005,

df

= 2) (Πίνακας 2). Ομοίως, οι συχνότητες των

MDM4

rs4245739 ΑΑ και AC ή CC γονότυπους μεταξύ των περιπτώσεων ήταν σημαντικά διαφορετικές από εκείνες μεταξύ των ατόμων της ομάδας ελέγχου σε σύνολο Jiangsu (χ

2 = 12,84,

P

= 0,002 ,

df

= 2) (Πίνακας 2).

Η

σύνδεσης μεταξύ

MDM4

rs4245739SNP και SCLC

κινδύνου

Σύλλογοι μεταξύ γονότυπων του

MDM4

rs4245739 Α & gt? πολυμορφισμού C και SCLC κίνδυνο υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας την άνευ όρων λογιστικής αναλύσεις παλινδρόμησης (Πίνακας 2). Όπως φαίνεται στον Πίνακα 2, οι

MDM4

αλληλόμορφο rs4245739 C δρα ως προστατευτικό αλληλόμορφο του SCLC. Τα άτομα με το γονότυπο AC είχε OR 0,52 (95% CI = 0,31 – 0,87,

P

= 0,013) για την ανάπτυξη SCLC, σε σύγκριση με άτομα με το γονότυπο ΑΑ. Σημαντικά μειωμένη SCLC κίνδυνος παρατηρήθηκε επίσης μεταξύ rs4245739 AC ή φορείς CC σε σύγκριση με τους φορείς AA (OR = 0,53, 95% CI = 0,32 – 0,89,

P

= 0,014). Οι ενώσεις του SCLC κινδύνου με το

MDM4

rs4245739SNP περαιτέρω επικυρωθεί σε ένα ανεξάρτητο σύνολο ασθενών-μαρτύρων Jiangsu. Ένα σημαντικά μειωμένο κίνδυνο SCLC συσχετίστηκε επίσης με rs4245739 (AC: OR = 0.48, 95% CI = 0,26 – 0,88,

P

= 0,019? AC ή CC: OR = 0.47, 95% CI = 0,26 – 0,87 ,

P

= 0,017). Στις συγκεντρωτικές αναλύσεις, βρήκαμε ότι ο rs4245739 γονότυπος AC είχε μια 0,49-folddecreased κινδύνου για SCLC σύγκριση με το γονότυπο ΑΑ (95% CI = 0,32 – 0,75,

P

= 0.001), και το rs4245739 AC ή CC γονότυπο είχαν 0,50-folddecreased κινδύνου σε σύγκριση με το γονότυπο ΑΑ (95% CI = 0,32 – 0,76,

P

= 0,001) (Πίνακας 2). Όλες οι ΕΑΠ προσαρμόστηκαν για το φύλο, την ηλικία και το κάπνισμα.

Εξετάσαμε περαιτέρω το SCLC κίνδυνο που συνδέεται με το

MDM4

rs4245739genotypes από στρωματοποίηση ως προς την ηλικία, το φύλο, το κάπνισμα και το στάδιο της νόσου που χρησιμοποιούν συγκεντρωτική δεδομένα από δύο κινεζικές ομάδες ασθενών-μαρτύρων (Πίνακας 3). Σε στρωματοποιημένη ανάλυση με την ηλικία, rs4245739AC και CC γονότυπους ήταν σημαντικά σχετίζεται με μειωμένο κίνδυνο σε άτομα ηλικίας 57 χρόνων ή νεότερος (OR = 0.40, 95% CI = 0,21 – 0,74,

P

= 0,003), αλλά όχι σε άτομα ηλικίας μεγαλύτερης ηλικίας από 57 ετών (OR = 0,63, 95% CI = 0,35 – 1,15,

P

= 0,134). Δεν υπήρχε σημαντική αλληλεπίδραση γονιδίων-ηλικία (

P

αλληλεπίδρασης = 0,274). Ένα σημαντικά μειωμένο κίνδυνο SCLC συνδέθηκε με AC και CC γονότυπους μόνο μεταξύ των γυναικών (OR = 0,33, 95% CI = 0,15 – 0,74,

P

= 0,007), αλλά όχι στους άνδρες (OR = 0,63, 95 % CI = 0,38 – 1,06,

P

= 0,083), σε σύγκριση με το

MDM4

rs4245739 ΑΑ γονότυπο. Καμία σημαντική αλληλεπίδραση γονιδίων-σεξ παρατηρήθηκε (

P

αλληλεπίδρασης = 0,135). Δεν βρήκαμε σημαντικά μειωμένο κίνδυνο (OR = 0,73, 95% CI = 0,42 – 1,28,

P

= 0,274) για τους μεταφορείς με AC και γονότυπους CC σε σύγκριση με τα άτομα με το γονότυπο ΑΑ σε καπνιστές. Ωστόσο, thers4245739AC και CC γονότυπους έδειξε 0.30 φορές μειωμένο κίνδυνο να αναπτύξουν SCLC (95% CI = 0,14 – 0,64,

P

= 0,002) σε σύγκριση με το γονότυπο ΑΑ σε μη καπνιστές. υπήρχε μια πολλαπλασιαστική αλληλεπίδραση γονιδίων-καπνιστών (

P

interactioin = 0,048). Συσχετίσεις μεταξύ rs4245739 γονότυπων AC και CC και SCLC κίνδυνο παρατηρήθηκαν σε δύο ασθενείς με την περιορισμένη στάδιο της νόσου (OR = 0,52, 95% CI = 0,32 – 0,84,

P

= 0,008) ή η εκτεταμένη στάδιο της νόσου (OR = 0.48, 95% CI = 0,24 – 0,97,

P

= 0,040) (Πίνακας 3).

Η

Λειτουργική ενδιαφέρον ofrs4245739 για miRNA με τη μεσολάβηση

MDM4

κανονισμού

SNPrs4245739A & gt? C μπορεί να οδηγήσει σε υψηλότερη συγγένεια μεταξύ miR-191-5p /miR-887-3p και

MDM4

mRNA και μειώθηκε

MDM4

έκφρασης σε πολλές κακοήθειες [19 -22]. Ωστόσο, οι επιπτώσεις του στο

MDM4

κανονισμού SCLC είναι ακόμα ασαφής. Ως αποτέλεσμα, εξετάσαμε αν υπάρχει ένα αλληλόμορφο-ειδική επίδραση των rs4245739polymorphismon

MDM4

έκφραση σε SCLC κυττάρων με miR-191-5p και miR-887-3p. Σχετική δοκιμασίες έκφρασης λουσιφεράσης έδειξαν ότι miR-191-5p μπορεί σημαντικά χαμηλότερη λουσιφεράσης δραστηριότητες σε κύτταρα SCLC Η446 επιμολυσμένα με κατασκευάσματα ανταποκριτή rs4245739C αλληλικές σε σύγκριση με αρνητικό έλεγχο RNAs (

P

= 0,003) (Σχήμα 1). Ομοίως, miR-887-3p ρυθμίζει επίσης

MDM4

3′-UTR περιοχή με σημαντικά χαμηλότερο λουσιφεράσης δραστηριότητες στα κύτταρα Η446 εκφράζουν κατασκευάσματα rs4245739C αλληλομόρφων σε σύγκριση με αρνητικό RNAs ελέγχου (

P

= 0,014) ( Εικ. 1). Ωστόσο, δεν υπήρχε τέτοια κατάθλιψη σε Η446 κύτταρα με επιμόλυνση rs4245739A αλληλικές ρεπόρτερ κατασκευάσματα από τα δύο miRNAs μιμείται (Σχήμα 1).

Η446 κύτταρα συνεπιμολύνθηκαν με pRL-SV40 για την τυποποίηση αποτελεσματικότητα της επιμόλυνσης. Πλάσια αύξηση μετρήθηκε με τον καθορισμό της δραστηριότητας των κυττάρων συν-επιμολύνθηκαν με αμφότερα pGL3-rs4245739A ή pGL3-rs4245739Creporter κατασκεύασμα και NC-RNAs ως 1. Όλα τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν εις τριπλούν τουλάχιστον σε τρία ανεξάρτητα πειράματα επιμόλυνσης και κάθε τιμή αντιπροσωπεύει μέση ± SD . *

P

& lt? 0.05compared με κάθε κατασκευάσματος λουσιφεράσης από

t

-ΜΕΛΕΤΕΣ. NC-RNA, αρνητική RNAs ελέγχου? SCLC, μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα.

Η

Συζήτηση

Στην παρούσα μελέτη, διερευνήθηκε η σχέση μεταξύ του

MDM4

rs4245739 λειτουργικό SNP και SCLC κινδύνου μέσω μιας υπόθεσης -Έλεγχος προσέγγιση. Παρατηρήσαμε ότι τα άτομα με

MDM4

rs4245739 γονότυπους AC ή CC δείχνουν μειώθηκαν σημαντικά SCLC κίνδυνο σε σύγκριση με τους φορείς ΑΑ γονότυπο. Να αποκαλύψει miR-191-5p /miR-887-3p μεσολάβηση αλληλομόρφων-ρύθμιση από αυτόν τον SNP, εξετάσαμε λουσιφεράσης δραστηριότητες στο SCLC κύτταρα επιμολυσμένα με διαφορετικές δομές αλληλομόρφων δημοσιογράφος. αναλύσεις Η συσχέτιση γονοτύπου-φαινοτύπου έδειξε ότι και οι δύο miRNAs θα μπορούσε να αναστείλει

MDM4

έκφραση μόνο σε SCLC κυττάρων με C-αλληλόμορφο κατασκευές έκφρασης αλλά όχι A-αλληλόμορφο κατασκευάσματα. Τα αποτελέσματα αυτά υπογραμμίζουν την συμμετοχή των λειτουργικών γενετικές παραλλαγές σε miRNA-θέσεις σύνδεσης στο SCLC αιτιολογία.

Οι συσσωρευμένες αποδείξεις έδειξαν ότι η γενετική σύσταση θα μπορούσε να έχει άμεση συμβολή του στο SCLC κινδύνου [33-35]. Είναι ενδιαφέρον, αναφορικά με τις βάσεις δεδομένων των προφίλ γονιδιακής έκφρασης για τον εντοπισμό γονιδίων που δεν διέπονται από ρυθμίσεις στο SCLC και SNPs τους στην 3′-UTR, Xiong et al εντόπισε SCLC ευαισθησία rs3134615 SNP G & gt? T μπορεί να αναστέλλει την αλληλεπίδραση του miR-1827 με

MYCL1

3′-UTR, με αποτέλεσμα την υψηλότερη συστατική έκφραση MYCL1 [35]. Σύμφωνα με αυτή την έννοια, βρήκαμε επίσης μια

MDM4

3′-UTR SNP στόχο miRNAs συνδέεται με SCLC ευαισθησία.

Το

MDM4

rs4245739 πολυμορφισμός έδειξε μια συνεπή συσχέτιση με SCLC κίνδυνο intwo ανεξάρτητες ομάδες ασθενών-μαρτύρων, που είναι απίθανο να οφείλεται σε άγνωστους παράγοντες σύγχυσης λόγω έχοντας σημαντικά αυξημένη περίεργο αναλογίες με μικρά

P

τιμές. Επιπλέον, η σχέση γονότυπου-φαινότυπου μεταξύ του πολυμορφισμού rs4245739 και έκφραση γονιδίου ανταποκριτή υποστηρίζει το συμπέρασμά μας. Επιπλέον, η

MDM4

rs4245739 SNP θα μπορούσε να είναι ένα κοινό συστατικό γενετικό κίνδυνο για διάφορες μορφές καρκίνου, το οποίο έχει αποδειχθεί από την ομάδα μας και τους άλλους είτε μέσω προσέγγιση υποψηφίου γονιδίου ή GWAS [19-26]. Για παράδειγμα, έχουμε ήδη διαπιστώσει ότι rs4245739 AC και γονότυπους CC ήταν σημαντικά σχετίζεται με μειωμένο κίνδυνο καρκίνου του οισοφάγου [22], μια κακοήθεια με παρόμοιες περιβαλλοντικές αιτιολογία του SCLC (δηλαδή βαρύ κάπνισμα). Ωστόσο, μπορεί να υπάρχουν διάφοροι περιορισμοί στην τρέχουσα μελέτη ασθενών-μαρτύρων. Για παράδειγμα, δεδομένου ότι όλα τα SCLC περιπτώσεις είχαν προσληφθεί από το νοσοκομείο, εγγενή μεροληψία της επιλογής μπορεί να υπάρχουν. Ως εκ τούτου, τα ευρήματα της μελέτης εντάλματος μας να επικυρωθεί σε έναν πληθυσμό με βάση προοπτική μελέτη στο μέλλον. Σχετικά μικρό μέγεθος του δείγματος για τους μη καπνιστές θα πρέπει να αναλυθεί περαιτέρω σε μεγαλύτερο πληθυσμό.

Εν κατακλείδι, τα αποτελέσματά μας πρότεινε ότι η λειτουργική

MDM4

rs4245739 SNP συσχετίστηκε με σημαντικά μειωμένο κίνδυνο SCLC σε κινέζικα πληθυσμούς των Χαν. Οι συσχετίσεις μεταξύ των SNPs και SCLC κινδύνου είναι αξιοσημείωτη σε μη καπνιστές. Λαμβάνοντας υπόψη το γεγονός αυτό, απαιτούνται περαιτέρω προσπάθειες για να εξεταστεί κατά πόσον

MDM4

rs4245739 γενετικός πολυμορφισμός μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως μια πιθανή διαγνωστική δείκτη του SCLC.