Αφηρημένο

Ιστορικό

Gypenosides (GYP), τα κύρια συστατικά από το

Gynostemma pentaphyllum

Makino, χρησιμοποιούνται ευρέως στην παραδοσιακή κινεζική ιατρική. Η παρούσα μελέτη είχε ως στόχο να διερευνήσει την επίδραση κατά του καρκίνου και των υποκείμενων μηχανισμών της GYP για τα ανθρώπινα ορθοκολικού καρκίνου κύτταρα SW-480.

Υλικά και Μέθοδοι

Η ανασταλτική επίδραση των GYP στο SW-480 κύτταρα αξιολογήθηκε με ανάλυση ΜΤΤ. Ο αποπτωτικός κυτταρικός θάνατος ανιχνεύθηκε με Hoechst 33342 πυρηνική χρώση ανάλυση και DNA κατακερματισμό. Η απόπτωση αναλύθηκε χρησιμοποιώντας χρώση αννεξίνης V-ΡΕ /7-αμινο-ακτινομυκίνη D. ακεραιότητα της μεμβράνης των κυττάρων εκτιμήθηκε με κυτταρομετρία ροής μετά από χρώση ΡΙ. Αλλαγές του δυναμικού της μιτοχονδριακής μεμβράνης (

Δψ

m) ανιχνεύθηκαν μέσω ανάλυση κυτταρομετρίας ροής της ροδαμίνης 123 (Rh123). Ο ρόλος των αντιδραστικά είδη οξυγόνου (ROS) σε GYP κυτταρικό θάνατο που επάγεται ερευνήθηκε από ενδοκυτταρική παραγωγή ROS και γενικές καθαριστή ROS. δοκιμασία επούλωσης πληγών διεξήχθη για να διερευνηθεί GYP-ανέστειλαν μετανάστευση των SW-480 κύτταρα

in vitro

. Επιπλέον, οι μεταβολές στην F-ακτίνη μικρονημάτια αναλύθηκαν με FITC-επισημασμένο φαλλοϊδίνη χρώση τοξίνη και οι μορφολογικές μεταβολές αξιολογήθηκαν σύμφωνα με ηλεκτρονικό μικροσκόπιο σάρωσης (SEM).

Αποτελέσματα

μετά τη θεραπεία GYP, παρατηρήθηκαν η διαπερατότητα της μεμβράνης πλάσματος του SW-480 κυττάρων αυξήθηκε,

Δψ

m μειώθηκε σημαντικά, το επίπεδο της ενδοκυτταρικής επίπεδο ROS αυξήθηκε, ο κατακερματισμός του DNA και αποπτωτική μορφολογία. Κύτταρα κατεργασμένα με GYP ασκήσει σοβαρή κατάρρευση δίκτυο μικρονηματίων καθώς και τη σημαντική μείωση του αριθμού των μικρολαχνών. GYP επαγόμενη τις αλλαγές της κυτταρικής βιωσιμότητας, η κυτταρική μετανάστευση, η ενδοκυτταρική παραγωγή ROS και η πυρηνική μορφολογία ανακουφίζεται προφανώς από την NAC.

Συμπέρασμα

Τα αποτελέσματα σε αυτή τη μελέτη να εννοηθεί ότι ROS παίζουν σημαντικό ρόλο στην GYP που προκαλείται από την τοξικότητα των κυττάρων και την απόπτωση, και η βλάβη των μιτοχονδρίων μπορεί να είναι ανάντη της γενιάς ROS θεραπείας μετά GYP. Τα ευρήματα της παρούσας μελέτης παρέχουν νέα αποδεικτικά στοιχεία για τους μηχανισμούς κατά των όγκων με την οποία GYP επάγει την απόπτωση

in vitro

Η

Παράθεση:. Yan H, Wang Χ, Niu J, Wang Υ, Wang P , Liu Q (2014) αντικαρκινική δράση και οι υποκείμενοι μηχανισμοί της Gypenosides για τα Ανθρώπινα καρκίνο του παχέος εντέρου SW-480 κύτταρα. PLoS ONE 9 (4): e95609. doi: 10.1371 /journal.pone.0095609

Επιμέλεια: Nukhet Aykin-Burns, Πανεπιστήμιο του Αρκάνσας Ιατρικών Επιστημών? College of Pharmacy, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 16, Δεκ, 2013? Αποδεκτές: 27 Μάρτη, 2014? Δημοσιεύθηκε: 21 του Απρίλη 2014

Copyright: © 2014 Yan et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από το Εθνικό σχέδιο «Δωδέκατη πενταετές» για την Επιστήμη και Υποστήριξη Τεχνολογία (2011BAI06B05). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Καρκίνος του παχέος εντέρου (CRC) είναι η κύρια αιτία θανάτου παγκοσμίως, με σχεδόν 1.000.000 νέες περιπτώσεις και 500.000 θάνατοι από CRC σε όλο τον κόσμο κάθε χρόνο [1], [2]. Υπάρχουν πολλοί παράγοντες κινδύνου για CRC, συμπεριλαμβανομένης της προχωρημένης ηλικίας, φλεγμονώδεις νόσους του εντέρου, το ιατρικό ιστορικό της καλοήθους αδενωματώδεις πολύποδες, το οικογενειακό ιστορικό CRC, χαμηλή πρόσληψη λαχανικών και φρούτων, υψηλή πρόσληψη ζωικού λίπους και επεξεργασμένου κρέατος [3], [4] .

Σε κλινική θεραπεία CRC, παραδοσιακές θεραπείες, όπως ακτινοθεραπεία, χημειοθεραπεία και η χειρουργική επέμβαση δεν είναι η καλύτερη μέθοδος θεραπείας για αυτό λόγω της κακής πρόγνωσης και σοβαρές παρενέργειες. Ως εκ τούτου, ψάχνοντας για νέα θεραπευτικά αντι-όγκου είναι εξαιρετικά επείγουσα. Τώρα, φυσικό φάρμακο στη θεραπεία του καρκίνου έχει προκαλέσει μεγάλη ανησυχία στο εσωτερικό και στο εξωτερικό, λόγω της ασφάλειας, effiiciency και ελάχιστες παρενέργειες [5].

Gypenosides (GYP), ένας δημοφιλής λαϊκή ιατρική στην Κίνα, είναι τα κύρια συστατικά σε αποσπάσματα από

Gynostemma pentaphyllum

Makino. Θα υπάρχουν κυρίως ως dammarane τύπου τριτερπενικοί γλυκοζίτες (Σχήμα 1). GYP ήταν γνωστή για την ευρεία ευεργετικά αποτελέσματα για τη θεραπεία της ηπατίτιδας, υπερλιποπρωτεϊναιμία και των καρδιαγγειακών παθήσεων [6] – [8]. Μελέτες έχουν δείξει ότι GYP έχει δραστικότητα αντι-φλεγμονώδη, αντι-θρομβωτική, αντιοξειδωτική και αντικαρκινική δράσεις [9] – [12]. Αλλά, μέχρι τώρα, δεν υπάρχει καμία αναφορά σχετικά με GYP επαγόμενη δράση κατά του όγκου σε ανθρώπινα παχέος εντέρου. Έτσι, στην παρούσα μελέτη, η κυτταροτοξικότητα και απόπτωση των SW-480 κυττάρων που προκαλείται από GYP ερευνήθηκαν. Ρόλος των δραστικών μορφών οξυγόνου (ROS) σε GYP κυτταρικό θάνατο που επάγεται αναλύθηκε με ενδοκυτταρική παραγωγή ROS και ROS καθαριστή. Τα αποτελέσματα αυτά μπορεί να παρέχουν αποδείξεις για το ρόλο των GYP ως ένα ισχυρό αντι-ορθοκολικού καρκίνου σε παράγοντα κλινική εφαρμογή.

Η

Υλικά και Μέθοδοι

Χημικά και Αντιδραστήρια

GYP παρασχέθηκε ευγενώς από τον Ankang Φαρμακευτική Ινστιτούτο του Πανεπιστημίου του Πεκίνου. Η σκόνη διαλύθηκε σε 80% αιθανόλη (EtOH) για να πάρετε ένα απόθεμα διαλύματος 100 mg /ml, το οποίο αποστειρώνεται με διήθηση 0,22 μm μεμβράνης. 3- (4, 5-διμεθυλθειαζολ-2-υλ) -2, 5-diphenyltertrazolium βρωμιούχο τετραζόλιο (ΜΤΤ), ροδαμίνη-123 (Rh123), Hoechst 33342, ιωδιούχο προπίδιο (ΡΙ) και Ν-ακετυλοκυστεϊνη (NAC) αγοράστηκαν από η Sigma Chemical Company (St. Louis, ΜΟ, USA). 2 ‘, 7’- dichlorodihydrofluorescein-διοξεικό (DCFH-DA) και ΡΙΤΟ-Φαλλοϊδίνη παρασχέθηκαν από Molecular Probes Inc. (Carlsbad, CA, USA). Αντιδραστήριο νεξίνη Γκουάβα ελήφθη από την Millipore Corporation (Billerica, ΜΑ, USA). Όλα τα άλλα αντιδραστήρια ήταν εμπορικά προϊόντα της αναλυτικής καθαρότητας.

Cell Culture

Τα ανθρώπινα κύτταρα καρκίνου του παχέος εντέρου SW-480 ελήφθησαν από την κυτταρική τράπεζα της Κινεζικής Ακαδημίας Επιστημών, Σαγκάη της Κίνας. Η κυτταρική σειρά καλλιεργήθηκε σε RPMI-1640 που περιέχει 10% FBS, 1% πενικιλλίνη-στρεπτομυκίνη (100 U /ml πενικιλλίνη και 100 μg /ml στρεπτομυκίνη) και 1% γλουταμίνη σε φιάλη καλλιέργειας κυττάρων κάτω από ένα υγροποιημένο 5% CO

2 και 95% ατμόσφαιρα αέρα στους 37 ° C.

Αξιολόγηση της Βιωσιμότητας κυττάρων μετά GYP Θεραπεία

για να διερευνηθεί η επίδραση της GYP στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων SW-480, τα κύτταρα σπάρθηκαν σε 96 φρεατίων πλακών. Διάφορες συγκεντρώσεις (0, 70, 100 και 130 μg /ml? 80% αιθανόλης χρησιμοποιήθηκε ως ο έλεγχος διαλύτη) προστέθηκαν του GYP και τα κύτταρα επωάστηκαν για διάφορες χρονικές περιόδους, σε πυκνότητα 1 × 10

5 κύτταρα /ml, αντίστοιχα. Η βιωσιμότητα των κυττάρων προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας δοκιμασία ΜΤΤ [13]. Η απορρόφηση στα 570 nm καταγράφηκε χρησιμοποιώντας ένα αναγνώστη μικροπλάκας (Bio-Tek ELX800, USA). Η κυτταρική βιωσιμότητα του GYP επεξεργασμένα δείγματα στη συνέχεια λαμβάνεται με σύγκριση με τον έλεγχο.

ανάλυση κυτταρομετρίας ροής των κυτταρικών μεμβρανών Ακεραιότητας

ΡΙ είναι μία φθορίζουσα μεμβράνη διαπερνά χρωστική που χρωματίζει τους πυρήνες μέσω παρεμβολής μεταξύ τα στοιβαγμένα βάσεις των νουκλεϊκών οξέων. Από PI εισέρχεται στο κύτταρο μόνο εάν η κυτταρική μεμβράνη γίνεται διαπερατό, χρησιμοποιείται ευρέως στην έρευνα κυτταρικό θάνατο για να μετρηθεί η ακεραιότητα της μεμβράνης του πλάσματος. Όταν συνδέεται με νουκλεϊνικά οξέα, η μέγιστη απορρόφηση για ΡΙ είναι 535 nm και η μέγιστη εκπομπή φθορισμού είναι 617 nm [14]. Κύτταρα σε πλάκες 24 φρεατίων υποβλήθηκαν σε αγωγή με την υποδεικνυόμενη συγκέντρωση του GYP για 6, 12, 24 και 48 ώρες, αντίστοιχα. Στη συνέχεια, τα κύτταρα συλλέχθηκαν και ξεπλύθηκαν δύο φορές με PBS, χρωματίστηκαν με 5 μg /ml ΡΙ για 5 λεπτά στο σκοτάδι και αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής. Τα δεδομένα αναλύθηκαν με τη χρήση FCS Express V3 (de novo λογισμικού).

Εξέταση της μιτοχονδριακής μεμβράνης δυναμικού (Δψ

m)

Για να μελετηθεί η

Δψ

αλλαγές m, κύτταρα βάφτηκαν με Rh123, το οποίο εισέρχεται επιλεκτικά μιτοχόνδρια με ανέπαφο δυναμικού μεμβράνης και συγκρατείται στη μιτοχονδριακή [15]. Μόλις το δυναμικό της μεμβράνης μιτοχονδρίων έχει χαθεί, Rh123 στη συνέχεια ξεπλένεται από τα κύτταρα. Κύτταρα σε πλάκες 24 φρεατίων υποβλήθηκαν σε αγωγή με την υποδεικνυόμενη συγκέντρωση του GYP για 4 και 8 ώρες. Τα κύτταρα συλλέχθηκαν και ξεπλύθηκαν δύο φορές με PBS, επαναιωρήθηκαν σε 500 μΐ 1 μg /ml Rh123 και επωάστηκαν στους 37 ° C για 30 λεπτά στο σκοτάδι. Τα δείγματα στη συνέχεια ανιχνεύεται αμέσως με κυτταρομετρία ροής. Τα δεδομένα αναλύθηκαν με τη χρήση FCS Express V3 (de novo λογισμικού).

κυτταρομετρίας ροής Ανάλυση του DNA κατακερματισμός

Για να αναλύσουμε τον κατακερματισμό του DNA, ανίχνευση με κυτταρομετρία του DNA hypoploidy ροής μετά την προσθήκη ΡΙ στα κύτταρα πεθαίνουν και διαπερατότητας τους με κατάψυξη-απόψυξη πραγματοποιήθηκε [14]. Το μέγεθος των θραυσμάτων DNA εμφανίζεται ως hypoploid ιστόγραμμα DNA. Για να διερευνηθεί η επίδραση της GYP επί βλάβη του DNA του SW-480 κύτταρα, πραγματοποιήσαμε ολιγονουκλεοσωματικής κατάτμησης DNA με κυτταρομετρία ροής. Κύτταρα σε πλάκες 24 φρεατίων υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με διάφορες συγκεντρώσεις GYP για 6, 12, 24 και 48 ώρες, αντίστοιχα. Τα κύτταρα στη συνέχεια χρωματίστηκαν με 5 μg /ml ΡΙ και αναλύθηκαν για περιεκτικότητα DNA με τη χρήση κυτταρομετρίας ροής.

Hoechst 33342 χρώσης

Προκειμένου να παρατηρηθούν μεταβολές των πυρήνων μορφολογία των κυττάρων όγκου μετά από αγωγή GYP, Hoechst χρώση 33342 χρησιμοποιήθηκε. Μετά την επεξεργασία με την υποδεικνυόμενη συγκέντρωση του GYP για 6, 24 και 48 ώρες, τα κύτταρα χρωματίστηκαν με 10 μΜ Hoechst 33342 για 15 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Στη συνέχεια, τα χρωματισμένα κύτταρα ξεπλύθηκαν τρεις φορές με PBS και παρατηρήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα μικροσκόπιο φθορισμού με πρότυπο φίλτρα διέγερσης. Το μήκος κύματος διέγερσης και το μήκος κύματος εκπομπής ήταν 346 nm και 460 nm, αντίστοιχα.

Ανάλυση κυτταρικής απόπτωσης

απόπτωση των κυττάρων ανιχνεύθηκε μετά την αγωγή με την υποδεικνυόμενη συγκέντρωση του GYP για 12 και 24 ώρες. Ποσοτικοποίηση της κυτταρικής απόπτωσης μετρήθηκε με γκουάβα νεξίνη δοκιμασία, η οποία χρησιμοποιεί αννεξίνης V-ΡΕ για την ανίχνευση της φωσφατιδυλοσερίνη στην εξωτερική μεμβράνη των αποπτωτικών κυττάρων. Η χρωστική μεμβράνη διαπερνά, 7-αμινο-ακτινομυκίνη D, χρησιμοποιείται επίσης ως ένας δείκτης της ακεραιότητας της κυτταρικής μεμβράνης. Εν συντομία, 100 μΙ κύτταρα από κάθε δείγμα εναιωρήθηκε σε ένα μίγμα από 100 μΙ αννεξίνης V-ΡΕ και ρυθμιστικό διάλυμα δέσμευσης 7-ADD. Μετά από επώαση σε θερμοκρασία δωματίου για 20 λεπτά, τα δείγματα αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής. Ο πληθυσμός χωρίστηκε σε τρεις ομάδες: τα ζωντανά κύτταρα με φθορισμό χαμηλού επιπέδου, τα αποπτωτικά κύτταρα σε προηγούμενα στάδια με πράσινο φθορισμό, και τα τέλη της δεκαετίας αποπτωτικά κύτταρα τόσο με κόκκινο και πράσινο φθορισμό

Επούλωση Δοκιμασία Healing

.

τα κύτταρα σπάρθηκαν σε πλάκες 24 φρεατίων και επωάζονται 24 ώρες. Στη συνέχεια, τα κύτταρα σε μεμονωμένα φρεάτια τραυματίστηκαν με ξύσιμο με ένα ρύγχος πιπέτας και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με την υποδεικνυόμενη συγκέντρωση του GYP. Μετά από 24 ώρες επώασης, τα κύτταρα φωτογραφήθηκαν κάτω από μικροσκοπία αντίθεσης φάσεων.

Μικρο Ανάλυση

Μετά την διαφορετική επεξεργασία, τα κύτταρα μονιμοποιήθηκαν με 4% παραφορμαλδεΰδη σε PBS για 10 λεπτά στους 37 ° C. Τα κύτταρα κατέστησαν διαπερατά με 0.1% Triton Χ-100 σε PBS για 7 λεπτά και αποκλείστηκαν με 1% BSA σε PBS για 1 ώρα στους 37 ° C. Μεταξύ κάθε βήμα που περιγράφηκε παραπάνω, τα κύτταρα πλύθηκαν τρεις φορές με PBS για 5 λεπτά στους 37 ° C. Ακολουθούμενη κύτταρα εμποδίζοντας βάφτηκαν με 5 μg /ml FITC-Φαλλοϊδίνη για 1 ώρα στους 37 ° C στο σκοτάδι. Εικόνες ελήφθησαν με μια σάρωση με λέιζερ συνεστιακό μικροσκόπιο (TCS SP5, Leica, Germany).

Ηλεκτρονικό Μικροσκόπιο Σάρωσης (SEM)

Παρατήρηση

Μετά από 24 ώρες μετά από διάφορες επεξεργασίες, τα κύτταρα σε κάθε ομάδα σταθεροποιήθηκαν σε διάλυμα γλουταραλδεΰδης ρυθμισμένο με φωσφορικό 2,5%, ξεπλύθηκαν με PBS και αφυδατώνεται με διαβαθμισμένης αλκοόλης, κρίσιμο σημείο ξηραίνεται από υγρό CO

2 και το χρυσό έκπτυστων. Οι επιφάνειες των κυττάρων παρατηρήθηκαν με ηλεκτρονικό μικροσκόπιο σάρωσης (S-3400N, Hitachi, Japan).

Ανίχνευση των ενδοκυτταρικών δραστικών μορφών οξυγόνου (ROS) και ο ρόλος της στην GYP προκαλείται κυτταροτοξικότητα

προκειμένου να προσδιοριστεί μεταβολές στο επίπεδο ROS, μετράμε την οξειδωτική μετατροπή της ευαίσθητης φθορίζοντα ανιχνευτή 2 ‘, 7′-διχλωρο-διοξεικό (DCFH-DA) να φθορίζουν 2′, 7’-διχλωροφθορεσκεϊνης (DCF). DCFH-DA διαχέεται εύκολα μέσω της κυτταρικής μεμβράνης και ενζυματικά υδρολύεται από ενδοκυτταρικές εστεράσες για να σχηματίσει μη φθορίζον DCFH, το οποίο στη συνέχεια ταχέως οξειδώνεται για να σχηματίσει εξαιρετικά φθορίζουσα DCF παρουσία ROS, και η ένταση φθορισμού είναι ανάλογη με την παραγωγή ROS. Κύτταρα σε πλάκες 24 φρεατίων υποβλήθηκαν σε αγωγή με την υποδεικνυόμενη συγκέντρωση του GYP για 4 και 8 ώρες. Τα κύτταρα συλλέχθηκαν και ξεπλύθηκαν δύο φορές με PBS, επαναιωρήθηκαν σε 500 μΐ 10 μΜ DCFH-DA και επωάστηκαν στους 37 ° C για 30 λεπτά στο σκοτάδι. Τα δείγματα στη συνέχεια ανιχνεύεται αμέσως με κυτταρομετρία ροής. Τα δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας FCS Express V3 (de novo Software).

Για να διερευνηθεί ο ρόλος των ROS σε GYP επαγόμενο κυτταρικό θάνατο και απόπτωση, NAC (5 mM) χρησιμοποιήθηκε ως αναστολέας ROS προστίθεται στο μέσο καλλιέργειας πριν από την φόρτωση GYP από 1 ώρα. Η μείωση κυτταρική βιωσιμότητα, η ενδοκυτταρική παραγωγή ROS, το

Δψ

απώλεια m, η πυρηνική μορφολογικές αλλαγές και η αναστολή της μετανάστευσης των κυττάρων ήταν ειδικά αναλύθηκαν όπως περιγράφεται παραπάνω.

Στατιστική Ανάλυση

τα δεδομένα εκφράζονται ως μέση τιμή ± τυπική απόκλιση τουλάχιστον τριών ανεξάρτητων πειραμάτων. Η στατιστική ανάλυση έγινε με μονόδρομη ανάλυση της διακύμανσης. Η στατιστική σημαντικότητα ορίστηκε σε

σ

& lt?. 0.05

Αποτελέσματα

Επιδράσεις της GYP για την Κυτταρική Βιωσιμότητα

Εικόνα 2 έδειξε ότι GYP ανέστειλε SW-480 κυτταρικού πολλαπλασιασμού σε μια δόση και το χρόνο-εξαρτώμενο τρόπο. Η βιωσιμότητα ήταν σημαντικά μειωμένη όταν δόση GYP ήταν 70 μg /ml ή παραπάνω (

ρ

& lt? 0,01) και η παρατεταμένη επώαση αύξησε την απώλεια βιωσιμότητας. Οι τιμές IC50 ήταν περίπου 91,77 και 83,8 μg /ml όταν τα κύτταρα επωάστηκαν με GYP για 24 και 48 ώρες, αντίστοιχα.

SW-480 σπάρθηκαν σε πλάκες 96-φρεατίων και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με 0, 70, 100 και 130 μg /ml του GYP για 24 και 48 ώρες. Η βιωσιμότητα των κυττάρων μετρήθηκε με δοκιμασία ΜΤΤ. Κάθε τιμή εκφράζεται ως μια μέση τιμή ± S.D. τουλάχιστον τριών ανεξάρτητων προσδιορισμών. Η μονόδρομη ANOVA χρησιμοποιήθηκε για συγκρίσεις πολλαπλών ομάδας σημαίνει ακολουθούμενη από t-test του Dunnett. **

P

& lt? 0,01 έναντι του ελέγχου. (Μπάρες σφάλματος = SD, η = 3).

Η

GYP επαγόμενη μεμβράνη πλάσματος Βλάβη του SW-480 κύτταρα

χρώση ΡΙ σε συνδυασμό με κυτταρομετρία ροής χρησιμοποιήθηκε για την αξιολόγηση GYP επαγόμενη βλάβες της κυτταρικής μεμβράνης. Σε SW-480 κύτταρα, βλάβη της μεμβράνης ως ένα πρώιμο συμβάν του GYP τραυματισμού που προκαλείται από κύτταρο (Σχήμα 3). Μετά από επώαση για 6 ώρες, το ποσοστό των κυττάρων με υψηλότερη ΡΙ φθορισμός αυξήθηκε σταδιακά από 10.07% σε 21.93% όταν τα κύτταρα εκτέθηκαν σε εύρος δόσης GYP από 70 έως 130 μg /ml. Τα κύτταρα εκτέθηκαν σε 70 μg /ml GYP δεν έδειξε πολύ αυξημένη βλάβη της κυτταρικής μεμβράνης με τη παρατεταμένο χρόνο επώασης. Ενώ τα κύτταρα μετά από 100 μg /ml και 130 μg /ml θεραπεία GYP, η ζημία κυτταρική μεμβράνη αυξήθηκε πολύ από τον παρατεταμένο χρόνο επώασης, περίπου 46.27% και 67.87% των κυττάρων που εμφανίζονται υψηλές φθορισμού ΡΙ στις 48 ώρες μετά τη θεραπεία, αντίστοιχα.

τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με GYP για 6, 12, 24 και 48 (κάθετος άξονας) έναντι φθορισμού ΡΙ (οριζόντιος άξονας).

η

GYP επαγόμενη ο Δψ

m Απώλεια στην SW-480 κύτταρα

Rh123 χρώση σε συνδυασμό με κυτταρομετρία ροής χρησιμοποιήθηκε για την αξιολόγηση GYP που προκαλείται

Δψ

αλλαγές m. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 4, δείχνει ότι GYP προκάλεσε την απώλεια του

Δψ

M αρκετά νωρίς και προκάλεσε την ελάττωση του

Δψ

m σε ένα δόση και χρονικά εξαρτώμενο τρόπο. Μετά από 4 ώρες επώασης, το ποσοστό των κυττάρων με

Δψ

απώλεια m αυξήθηκε από 9,9% σε 28,8%, όταν GYP αυξήθηκε από 70 μg /ml έως 130 μg /ml. Όταν ο χρόνος επώασης αυξήθηκε από 4 έως 8 ώρες, το ποσοστό των κυττάρων με το

Δψ

απώλεια m αυξήθηκε από 16,65% έως 20,95%, όταν GYP ήταν 100 μg /ml.

Cells υποβλήθηκαν σε θεραπεία με GYP για 4, 8 ώρες και σημάνθηκαν με ροδαμίνη 123 και αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής. Ιστογράμματα δείχνουν τον αριθμό των καναλιών κυττάρων (κάθετος άξονας) έναντι ροδαμίνης 123 φθορισμού (οριζόντιος άξονας).

Η

GYP που προκαλείται DNA κατακερματισμός της SW-480 κύτταρα

Για τον προσδιορισμό του DNA βλάπτει δραστηριότητα του GYP, το ποσοστό των κατεστραμμένων κυττάρων αναλύθηκε χρησιμοποιώντας ΡΙ βαφή με κυτταρομετρία ροής, όπως περιγράφεται στις μεθόδους. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 5, GYP επαγόμενη κατάτμηση του DNA ήταν σε δόση και το χρόνο-εξαρτώμενο τρόπο. Καμία σημαντική κατάτμηση DNA ανιχνεύθηκε με διαφορετική δόση του GYP μετά τη θεραπεία από 6 ώρες, ενώ μία σημαντική ποσότητα της μεγάλης κλίμακας DNA κατάτμηση παρατηρήθηκε από την GYP υψηλότερη δόση (100, 130 μg /ml) μετά από 12 ώρες επώασης, και το DNA βλάβη σε χαμηλότερη δόση GYP (70 μg /ml) κατεργάζεται κύτταρα δεν ενισχύεται με τη παρατεταμένο χρόνο επώασης. Μετά από 48 ώρες επώασης, το θραύσμα DNA της ομάδας ελέγχου είναι 2,37%, αυξήθηκε σε 10.03%, 26.33% και 56.07%, όταν GYP concertration ήταν 70, 100 και 130 μg /ml, αντίστοιχα.

Τα κύτταρα αντιμετωπίζονται με GYP για 6, 12, 24 και 48 (κάθετος άξονας) έναντι φθορισμού ΡΙ (οριζόντιος άξονας).

Η

GYP που προκαλείται από μορφολογικές αλλαγές του SW-480 κύτταρα

Εικόνα 6 έδειξαν τα αποτελέσματα της Hoechst χρώση 33342 σε SW-480 κύτταρα αντιμετωπίζονται από GYP. Ελαφρώς μπλε και ομοιογενή κυττάρου παρατηρήθηκε στην ομάδα ελέγχου. Κύτταρα σε ομάδες GYP αντιμετωπίζονται έδειξαν βελτίωση της Hoechst 33342 χρώση και η αλλαγή της μορφολογίας των κυττάρων σε ένα GYP δόσης και εξαρτάται από την επώαση χρόνο τρόπο. Όταν η συγκέντρωση GYP ήταν πάνω από 100 μg /ml, SW-480 κύτταρα υπέστησαν σοβαρές ζημιές με φωτεινό μπλε πυρηνική χρώση και τις εικόνες φάση υποδεικνύεται κύτταρα ήταν συρρικνωμένο σε ανώμαλη γύρο τύπου, και ο αριθμός των κυττάρων μειώθηκε σημαντικά.

Cells υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με GYP στις υποδεικνυόμενες συγκεντρώσεις για 6, 24, 48 «Υλικά και μέθοδοι».

η

Ανίχνευση κυτταρικής απόπτωσης χρησιμοποιώντας Κυτταρομετρία ροής

τα αποπτωτικά ποσοστά μετρήθηκαν με Annexin V ΡΕ και 7-ADD χρώση μετά από 12,24 ώρες μετά από διάφορες θεραπείες. Τα κλάσματα των κυττάρων σε κάθε τεταρτημόριο αναλύθηκαν με στατιστικές τεταρτημόριο [16]. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 7, τα ποσοστά των κυττάρων με Αηηβχίη V-θετική χρώση αυξήθηκε σταδιακά σε ένα εξαρτώμενο από τη συγκέντρωση τρόπο μετά τη θεραπεία GYP, υποδηλώνοντας ότι θα μπορούσε να προκαλέσει GYP αποπτωτική απόκριση σε SW-480 κύτταρα. Στην ομάδα ελέγχου χωρίς θεραπεία, 94.85% των κυττάρων ήταν βιώσιμα, 1.45 πληθυσμός% κυττάρων ήταν στο πρώιμο στάδιο της απόπτωσης (κάτω δεξιά) και 2.95% του πληθυσμού των κυττάρων ήταν στην όψιμο στάδιο της απόπτωσης (επάνω δεξιά). Ενώ, μετά από 12 ώρες επώασης με GYP, ο πληθυσμός αποπτωτικό κυτταρικό (κάτω δεξιά + πάνω δεξιά) αυξήθηκε από 25,40% έως 38,70%, όταν η συγκέντρωση του φαρμάκου αυξάνεται από 70 μg /ml έως 130 μg /ml. Όταν ο χρόνος επώασης αυξήθηκε από 12 σε 24 ώρες, ο πληθυσμός αποπτωτικό κυτταρικό αυξήθηκε από 29,45% έως 41,70%, όταν GYP ήταν 100 μg /ml.

Dot οικόπεδα αννεξίνης V και την πρόσληψη 7-AAD μετά αναφερόμενες συγκεντρώσεις σε SW-480 κύτταρα. Τα κύτταρα αναλύθηκαν σε 12, 24 ώρες μετά τη θεραπεία.

Η

GYP Αναστολή Μετανάστευσης της SW-480 In vitro

Για να επαληθεύσετε περαιτέρω την ανασταλτική επίδραση της GYP στο SW-480 κυτταρική μετανάστευση, μια πληγή δοκιμασία επούλωσης διεξήχθη (Σχήμα 8). Η ικανότητα επούλωσης πληγών των κυττάρων αντανακλά την κίνηση και τη μετανάστευση τους στην επιφάνεια στην οποία είναι συνδεδεμένη με την ανάπτυξη. Σε σύγκριση με 0 h μετά τον τραυματισμό, μετά από 24 ώρες επώασης, πολύ πυκνά κύτταρα σε έλεγχο σταδιακά αυξήθηκε σε ενδιάμεσο χώρο του τραύματος, τα κύτταρα σε 70 μg /ml GYP ομάδα που έλαβε αγωγή έδειξαν μικρή διαφορά με διαφορά ελέγχου με έλεγχο, ενώ τα κύτταρα σε 100 μg /ml και 130 μg /ml ομάδες που έλαβαν GYP σπανίως μεγάλωσε στον ενδιάμεσο χώρο του τραύματος, και η πυκνότητα των κυττάρων ήταν σοβαρά μειωμένη.

κύτταρα σε πλάκες 24 φρεατίων τραυματίστηκαν με ξύσιμο με ένα ρύγχος πιπέτας και τα κύτταρα επωάστηκαν με GYP για 24 ώρες. Τα κύτταρα φωτογραφήθηκαν κάτω από μικροσκόπιο αντίθεσης φάσης (× 200 μεγέθυνση).

Η

Μικρο Ανάλυση

Είναι καλά τεκμηριωμένο ότι τα στοιχεία του κυτταροσκελετού ήταν στενά συνδεδεμένη με την κίνηση των κυττάρων [17], [ ,,,0],18]. Οι αλλαγές του F-ακτίνης οργάνωση μικρονηματίων σε SW-480 κύτταρα μετά από επεξεργασία GYP διερευνήθηκε με μικροσκοπία φθορισμού χρησιμοποιώντας FITC-επισημασμένο φαλλοειδίνη τοξίνη. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 9, τα κύτταρα ελέγχου παρουσίασαν μία κανονική συστοιχία ορίζεται νημάτια ακτίνης παρούσα κατά μήκος των κυττάρων, ομοιόμορφα κατανεμημένα στο κυτταρόπλασμα, ενώ τα κύτταρα σε 100 μg /ml GYP έδειξε μια αποδιοργάνωση των νημάτων της ακτίνης, μια αύξηση των ινών stree ακτίνης και πράσινο παρατηρήθηκαν σημεία φθορισμού. Τα κύτταρα που έλαβαν θεραπεία με 130 μg /ml GYP αποδεικνύεται απόλυτη βλάβη του δικτύου ακτίνης και πλήρη εξαφάνιση των νηματίων ακτίνης.

Τα κύτταρα βάφτηκαν με φθαλλοϊδίνη (πράσινο) για F-ακτίνης. Κλίμακα μπαρ, 10 μm.

Η

SEM Παρατήρηση

Οι μορφολογικές αλλαγές που παρατηρήθηκαν υπό SEM (Σχήμα 10). Στην ομάδα ελέγχου, τα κύτταρα εμφανίστηκε επιθηλιακά στο σχήμα με πολλές μικρολάχνες πάνω από την επιφάνεια του κυττάρου. Ενώ σε 70 μg /ml, τα κύτταρα έδειξαν μια σημαντική μείωση του αριθμού των μικρολαχνών, η επιφάνεια πολλών κυττάρων γίνει σχετικά ομαλή χωρίς προφανή μικρολάχνες. Όταν GYP δόση ήταν πάνω από 100 μg /ml, SW-480 κύτταρα υπέστησαν σοβαρές ζημιές με εμφανή παραμόρφωση, συρρικνωμένο σε ανώμαλη γύρο τύπου, και ο αριθμός των κυττάρων μειώθηκε σημαντικά. Ενώ σε 130 μg /ml, περίπου papillous προεξοχές παρατηρήθηκαν στην επιφάνεια των κυττάρων όπου το κυτταρόπλασμα έμοιαζε να έχει εξωθηθεί μέσω του ορίου μεμβράνης.

Η μεγέθυνση των εικόνων ήταν 1.500 και 5.000 ×, αντίστοιχα. Ράβδοι κλίμακας:. 30, 10 μm

Η

ROS Συμμετέχετε στην GYP που προκαλείται SW-480 κυτταροτοξικότητα

Η ενδοκυτταρική παραγωγή ROS αναλύθηκε με κυτταρομετρία ροής με χρώση DCFH-DA. Τα δεδομένα που παρουσιάζονται στο Σχήμα 11 δείχνουν τα ενδοκυτταρικά επίπεδα ROS αυξήθηκε μετά τη θεραπεία GYP, στις 4 ώρες μετά τη θεραπεία, υπήρχαν περίπου 13,97%, 21% και 13,07% των κυττάρων σε 70, 100 και 130 μg /ml ομάδες που έλαβαν GYP έδειξε έντονο DCF φθορισμός, ενώ μόνο το 5,43% των κυττάρων στην ομάδα ελέγχου έδειξαν έντονο φθορισμό DCF. Όταν ο χρόνος επώασης αυξήθηκε από 4 έως 8 ώρες, το ποσοστό των κυττάρων με φωτεινά φθορισμού DCF αυξήθηκε σε 29,77%, 35,97% και 33,43%, όταν GYP ήταν 70, 100 και 130 μg /ml, αντίστοιχα. Βρήκαμε η γενιά ROS αρχικά αυξήθηκε με αυξανόμενη συγκέντρωση GYP και στη συνέχεια μειώθηκαν ελαφρά σε πολύ υψηλότερη δόση GYP, η οποία μπορεί να οφείλεται σε περισσότερους κυτταρική λύση που προκαλείται από θεραπεία GYP σε υψηλότερη συγκέντρωση φαρμάκου.

Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με GYP για 4, 8-DA και η ένταση φθορισμού του οξειδωμένου προϊόντος DCF σε μεμονωμένα κύτταρα ανιχνεύθηκε με κυτταρομετρία ροής. Το ποσοστό των φθοριζόντων κυττάρων σε κάθε ομάδα δείχθηκε.

Η

Για να εξετασθεί περαιτέρω αν ενδοκυτταρική ανύψωση ROS είχε εμπλακεί σε GYP-επαγόμενο κυτταρικό θάνατο, εκτελέσαμε μετέπειτα δοκιμασίες. Αποτέλεσμα στην Εικόνα 12Α δείχνει ότι η μειωμένη βιωσιμότητα των κυττάρων που προκαλείται από GYP διασώθηκε σε μεγάλο βαθμό από την NAC (

ρ

& lt? 0,05). Επιπλέον, η GYP προκάλεσε ενδοκυτταρική παραγωγή ROS, συμπύκνωση χρωματίνης και η αναστολή της μετανάστευσης των κυττάρων ήταν όλα εμφανώς προληφθεί με NAC (σχήμα 12Β-ϋ). Ωστόσο, η μειωμένη

Δψ

M προκαλείται από GYP δεν εμποδίστηκε από NAC (Σχήμα 12Ε). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι ROS είχε εμπλακεί σε GYP που προκαλείται από βλάβη στο SW-480 κύτταρα και το

Δψ

απώλεια m μπορεί να είναι ένα σημαντικό ανάντη ενεργοποιητής της γενιάς ROS, και η αυξημένη ROS μπορεί να διεγείρεται από την κατεστραμμένα μιτοχόνδρια.

(Α) κυτταρική βιωσιμότητα, (Β) ενδοκυτταρική παραγωγή ROS, (C) πυρηνική μορφολογικές αλλαγές, (D) κυτταρική μετανάστευση, (Ε)

Δψ

απώλεια m ήταν ειδικά αναλύθηκαν όπως περιγράφεται στο «Υλικά και μέθοδοι».

η

Συζήτηση

ο καρκίνος είναι μια πολύπλοκη ασθένεια και οι παραδοσιακές θεραπείες του καρκίνου δεν έχουν προχωρήσει σημαντικά τα τελευταία χρόνια. Οι κύριοι περιορισμοί της χειρουργικής επέμβασης, η χημειοθεραπεία και η ακτινοθεραπεία είναι ότι προκαλούν σοβαρές παρενέργειες και την κακή πρόγνωση λόγω τοξικότητας της μη καρκινικών ιστών και χημειοαντίσταση [19]. Ωστόσο, φυσικό φάρμακο έχει προκαλέσει μεγάλη ανησυχία στην περιοχή του καρκίνου χημειοθεραπεία λόγω της ασφάλειας, της αποτελεσματικότητας και αντι-πολυφαρμακευτικής αντίστασης.

GYP έχει χρησιμοποιηθεί ως παραδοσιακή κινέζικη ιατρική εδώ και εκατοντάδες χρόνια, λόγω της ποικιλίας της υγείας οφέλη [20] – [22]. Στην παρούσα μελέτη, GYP επαγόμενη απόπτωση σε ανθρώπινα ορθοκολικού καρκίνου SW-480 κύτταρα διερευνήθηκε.

Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι GYP μείωσε το ποσοστό των βιώσιμων κυττάρων σε SW-480 κύτταρα. Εν τω μεταξύ, προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι η κυτταροτοξική δράση του GYP στα φυσιολογικά κύτταρα PBMC ήταν πολύ λιγότερο [23]. Τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι GYP είναι ικανό να ασκεί διαφορετικών εναλλακτικών κυτταροτοξικότητα σε καρκινικά κύτταρα και φυσιολογικά κύτταρα, τα οποία θα μπορούσαν να είναι δυνητικά χρήσιμη ως καρκίνος πρόληψης ή θεραπείας παράγοντα.

Η κυτταρική γραμμή SW-480, που ιδρύθηκε από την πρωτογενή αδενοκαρκίνωμα που προκύπτουν στο παχύ έντερο, ήταν πάπια του σταδίου Β (σημαίνει ότι ο καρκίνος έχει αναπτυχθεί μέσα από το μυϊκό στρώμα του παχέος εντέρου ή του ορθού, εισέβαλε μέσα μπολ τοίχο, αλλά λεμφαδένες σαφές κατά Dukes Β) [24]. Spread είναι μέσω των τοπικών εισβολή μέσα από τον τοίχο μπολ και μέσω των τοπικών λεμφαγγεία, το αίμα (πυλαίας φλέβας στο συκώτι) και transcoelomic. Ως εκ τούτου, η μετάσταση είναι μία από τις μεγαλύτερες προκλήσεις για την επιτυχή θεραπεία του καρκίνου [25] και την πρόληψη της μετάστασης του καρκίνου είναι ως σημαντικός στόχος για τη βελτίωση της πρόγνωσης του ασθενούς. Σε αυτή τη μελέτη, ερευνήσαμε εάν GYP θα μπορούσε να αναστείλει τη μετανάστευση των SW-480 κύτταρα. Τα αποτελέσματα στο Σχήμα 8 προτεινόμενες GYP ανέστειλε τη μετανάστευση του κυτταρικού τύπου σε ένα δοσοεξαρτώμενο τρόπο GYP. Το κυτταροσκελετού της ακτίνης είναι ένα δομικό δίκτυο των πρωτεϊνών που είναι απαραίτητες για πολλές βιολογικές λειτουργίες, όπως συστολή των κυττάρων, κυτταρική κινητικότητα και διακίνησης κυστιδίων κ.ά. [26], [27]. Οι αλλαγές σε κυτταρικά διαμερίσματα μπορεί να επηρεάσουν την δυναμική του προσκόλλησης κυττάρου [18]. Σχήμα 9 εκτεθειμένες τις μεταβολές των μικρονηματίων, διαταραγμένη ρύθμιση του F-ακτίνης και πλήρη εξαφάνιση του δικτύου μικρονημάτια παρατηρήθηκε στους 100, 130 μg /ml GYP. Εκτός αυτού, όπως φαίνεται στο σχήμα 10, ο αριθμός των μικρολαχνών μειώθηκε σημαντικά όταν δόση GYP ήταν 70 μg /ml ή παραπάνω. Τα αποτελέσματα υποδεικνύουν GYP επάγουν κατάρρευση δίκτυο μικρονηματίων, και τελικά, να τραυματίσει το σχήμα των κυττάρων και την ικανότητα μετανάστευσης.

Η απόπτωση παίζει σημαντικό ρόλο στην ομοιόσταση και μπορεί να προκληθεί και να ρυθμίζεται από πολλούς οδούς ερέθισμα σήματος [28], [29 ]. Δυσλειτουργία της απόπτωσης θεωρείται ως ένα σημαντικό χαρακτηριστικό γνώρισμα του καρκίνου, ούτως ώστε η επαγωγή της απόπτωσης είναι αναμφισβήτητα το πιο ισχυρό άμυνα κατά του καρκίνου [30], [31]. Πολλές μελέτες έχουν αποκαλύψει ότι διάφορες ενώσεις που εξάγονται από φυτά θα μπορούσαν να επάγουν απόπτωση σε πολλά καρκινικά κύτταρα [29], [32], [33]. κατακερματισμού του DNA και μερικές μορφολογικά χαρακτηριστικά, συμπεριλαμβανομένων διόγκωση της μεμβράνης, κυτταρική συρρίκνωση, η συμπύκνωση της χρωματίνης και ο σχηματισμός των αποπτωτικών σωμάτων είναι τυπικές βιοχημικές χαρακτηριστικό της απόπτωσης [34], [35]. Στην παρούσα μελέτη, GYP ήταν σε θέση να προκαλέσει προφανή κατακερματισμό του DNA σε SW-480 κύτταρα σε ένα δόση και το χρόνο-εξαρτώμενο τρόπο. Εκτός αυτού, η Hoechst 33342 δοκιμασία χρώσης που εμφανίζονται κάποια μορφολογικά χαρακτηριστικά μετά τη θεραπεία GYP όπως συρρίκνωση κυττάρων, συμπύκνωση της χρωματίνης με την περιθωριοποίηση της χρωματίνης στην πυρηνική μεμβράνη και κατακερματισμένη στικτή μπλε πυρηνικό φθορισμό σε SW-480 κύτταρα. Τέλος, το σχήμα 7 δείχνουν το GYP θα μπορούσε να αυξήσει σημαντικά τα αποπτωτικά κύτταρα και να μειώσει τις βιώσιμων κυττάρων, υποδεικνύοντας την αποπτωτική απόκριση ενισχύεται σημαντικά μετά GYP στο SW-480 κύτταρα. Επομένως, τα αποτελέσματα υποδεικνύουν GYP θα μπορούσε να επάγει απόπτωση σε κύτταρα SW480.

Η βλάβη του συστήματος της κυτταρικής μεμβράνης θα προκαλέσει αποπόλωση μεμβράνης, disturbe ασυμμετρία των λιπιδίων μεμβράνης, επάγουν αναστολή των ενζύμων μεμβράνης, προκαλέσει απώλεια ακεραιότητας πλασματικής μεμβράνης [36 ], και αυτά τα κυτταρικές λειτουργίες μπορεί τελικά να επάγει κυτταρική απόπτωση από την εμπλοκή των υποδοχέων θανάτου [37]. Χρώση με ΡΙ και αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής έδειξε ότι GYP προκάλεσε βλάβη της κυτταρικής μεμβράνης ήταν μια πρόωρη εκδήλωση. Θεωρούμε ότι ο μηχανισμός της gypenosides σε βλάβη της μεμβράνης πλάσματος ίσως λόγω των άγλυκα των gypenosides [38] έχει τη θέση δράσης στην κυτταρική μεμβράνη, μεμβράνη έτσι επιζήμια κυττάρου ή να εισέρχεται στα κύτταρα για την πρόληψη της ανάπτυξης του όγκου.

Η μιτοχόνδρια παίζουν σημαντικό ρόλο στην εξέλιξη της απόπτωσης [39]. Ως εκ τούτου, τα μιτοχόνδρια μεμβράνη πιθανές αλλαγές μετά την διαφορετική συγκέντρωση της θεραπείας GYP στο SW-480 κυττάρων μετρήθηκε. Στη μελέτη, η μείωση του

Δψ

m ήταν σε πρώιμο 4 ώρες μετά τη θεραπεία GYP και ενισχύεται με αυξανόμενη συγκέντρωση του GYP, υποδηλώνοντας GYP επάγεται κύτταρο απόπτωσης σε SW-480 κύτταρα μπορεί να είναι τα μιτοχόνδρια εξαρτώμενη.

Εκτός αυτού, η ενίσχυση της παραγωγής ROS έχει συσχετισθεί με την αποπτωτική απόκριση που επάγεται από διάφορα προ-αποπτωτικών ενώσεων [40]. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν θεραπεία GYP τόνωσε σημαντικά την παραγωγή ROS σε SW-480 κύτταρα. NAC, ένας οδοκαθαριστής των ROS, χρησιμοποιήθηκε για να επιβεβαιώσει την επίδραση της ROS μετά τη θεραπεία GYP. NAC διασωθεί σημαντικά GYP που προκαλείται SW-480 κυτταροτοξικότητα, ενδοκυτταρική παραγωγή ROS, πυρηνική μορφολογικές αλλαγές και η αναστολή της μετανάστευσης των κυττάρων, αλλά όχι το

Δψ

μείωση m, υπονοώντας ROS έπαιξε σημαντικό ρόλο στην GYP που προκαλείται SW-480 τοξικότητα των κυττάρων και την κυτταρική απόπτωση, και η παραγωγή ROS ήταν κατάντη της βλάβης μιτοχονδρίων θεραπείας μετά GYP, και η αυξημένη παραγωγή ROS μπορεί να τονώσει τα κατεστραμμένα μιτοχόνδρια στο πειραματικό μας σύστημα.

Εν κατακλείδι, η παρούσα μελέτη αξιολογήθηκε η κυτταροτοξικότητα GYP στο SW-480 κύτταρα, έδειξε ότι GYP θα μπορούσε να προκαλέσει κυτταρική μεμβράνη ζημιές ακεραιότητα, να μειώσετε το

Δψ

επίπεδο m, προκαλείτε κατακερματισμό του DNA και την κίνηση αποπτωτική απόκριση σε SW-480 κύτταρα. ROS παράγονται σε SW-480 κύτταρα παίζουν σημαντικό ρόλο στην GYP θάνατο που επάγεται κυττάρου. Και, πιθανολογείται ότι GYP που προκαλείται κυτταρική απόπτωση στα SW-480 κύτταρα μπορεί να είναι ο θάνατος υποδοχείς μονοπάτι και τα μιτοχόνδρια εξαρτάται. Επιπλέον, η μελέτη μας έδειξε επίσης ότι GYP θα μπορούσε να ασκήσει μια ανασταλτική επίδραση στην κυτταρική μετανάστευση

in vitro

και σοβαρή κατάρρευση δίκτυο μικρονηματίων καθώς και τη σημαντική μείωση του αριθμού των μικρολαχνών. Τα αποτελέσματα αυτά υποδεικνύουν GYP να προκαλέσει την κατάρρευση του δικτύου μικρονηματίων και να τραυματίσουν το σχήμα των κυττάρων και την ικανότητα της μετανάστευσης. Αυτές οι μελέτες δείχνουν GYP μπορεί να έχει μεγάλη αξία στην ανθρώπινη παχέος θεραπείες για τον καρκίνο. Περαιτέρω έρευνες απαιτούνται για να εξηγήσει τους μοριακούς μηχανισμούς της GYP στη θεραπεία του καρκίνου.