Αφηρημένο

Στόχος

3′-δεσοξυ-3 ‘- [

18F] φθοροθυμιδίνη ([18F] FLT) είναι ένας ιχνηθέτης που χρησιμοποιείται για την εκτίμηση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων

στο vivo

. Ο σκοπός της μελέτης ήταν να χρησιμοποιήσει [18F] τομογραφία εκπομπής FLT ποζιτρονίων (ΡΕΤ) για τη μελέτη μη επεμβατικά νωρίς αντι-πολλαπλασιαστικά αποτελέσματα της πειραματικής χημειοθεραπευτικού παράγοντα TP202377 τόσο ευαίσθητων και ανθεκτικών όγκων.

Μέθοδοι

ξενομοσχεύματα σε ποντικούς από 3 ανθρώπινες καρκινικές κυτταρικές σειρές χρησιμοποιήθηκαν: το TP202377 ευαίσθητη Α2780 ωοθήκης κυτταρική σειρά καρκίνου (n = 8-16 όγκοι /ομάδα), η επαγόμενη ανθεκτική Α2780 κυτταρική γραμμή /Top216 (n = 8-12 όγκοι /ομάδα) και η φυσική ανθεκτική κυτταρική σειρά καρκίνου του παχέος εντέρου SW620 (n = 10 όγκων /ομάδα).

In vivo

πρόσληψη της [18F] FLT μελετήθηκε κατά την έναρξη και επαναλαμβάνεται 6 ώρες, Ημέρα 1 και την Ημέρα 6 μετά TP202377 θεραπεία (40 mg /kg ενδοφλεβίως) ξεκίνησε. πρόσληψη ιχνηλάτη ποσοτικοποιήθηκε χρησιμοποιώντας μικρό ζώο PET /CT.

Αποτελέσματα

TP202377 (40 mg /kg στις 0 ώρες) προκάλεσε αναστολή της ανάπτυξης κατά την Ημέρα 6 στον ευαίσθητο μοντέλο όγκου Α2780 σύγκριση με τον έλεγχο ομάδα (P & lt? 0.001). Στο μοντέλο όγκου θεραπεία TP202377 Α2780 προκάλεσε σημαντική μείωση στην πρόσληψη της [18F] FLT στις 6 ώρες (-46%? Ρ & lt? 0.001) και την Ημέρα 1 (-44%? Ρ & lt? 0.001) μετά τη θεραπεία αρχίζουν σε σύγκριση με την αρχική τιμή της πρόσληψης. Την ημέρα 6 πρόσληψη ήταν συγκρίσιμη με την αρχική τιμή. Η θεραπεία με TP202377 δεν επηρέασε την ανάπτυξη του όγκου ή [18F] πρόσληψη FLT στα ανθεκτικά μοντέλα όγκου Α2780 /Top216 και SW620. Σε όλες τις ομάδες ελέγχου πρόσληψη της [18F] FLT δεν άλλαξε. γονιδιακή έκφραση Κί67 παραλληλίζονται [18F] πρόσληψη FLT.

Συμπέρασμα

Θεραπεία ξενομοσχευμάτων Α2780 σε ποντικούς με TP202377 (εφάπαξ δόση iv) προκάλεσε μια σημαντική μείωση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων εκτιμήθηκε με [18F] FLT ΡΕΤ μετά από 6 ώρες. Αναστολή επέμεινε στην Day 1? Ωστόσο, τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων είχε επιστρέψει στην αρχική τιμή κατά την Ημέρα 6. Στην ανθεκτική Α2780 /Top216 και SW620 μοντέλα όγκων πρόσληψη της [18F] FLT δεν άλλαξε μετά τη θεραπεία. Με το [18F] FLT ΡΕΤ ήταν δυνατόν να γίνει διάκριση μη επεμβατικά μεταξύ ευαίσθητων και ανθεκτικών όγκων ήδη 6 ώρες μετά την έναρξη της θεραπείας

Παράθεση:. Munk Jensen Μ, Erichsen KD, Björkling F, Madsen J, Jensen ΡΒ, Sehested Μ, et al. (2012) [18F] FLT ΡΕΤ για μη-επεμβατική αξιολόγηση των όγκων ευαισθησία στη χημειοθεραπεία: Μελέτες με Πειραματικής Χημειοθεραπείας TP202377 σε ανθρώπινα καρκινικά ξενομοσχεύματα σε ποντίκια. PLoS ONE 7 (11): e50618. doi: 10.1371 /journal.pone.0050618

Συντάκτης: Vladimir V. Kalinichenko, Ιατρικό Κέντρο Νοσοκομείο Σινσινάτι των παιδιών, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 24, Αύγ του 2012? Αποδεκτές: 23η Οκτωβρίου 2012? Δημοσιεύθηκε: 30 Νοεμβρίου, 2012

Copyright: © 2012 Munk Jensen et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη χρηματοδοτήθηκε από το Εθνικό Ίδρυμα Προηγμένης Τεχνολογίας, της Δανίας Ιατρικό Συμβούλιο Έρευνας, Ίδρυμα Rigshospitalets Ερευνών, Svend Ίδρυμα Andersen, AP Møller Ιδρύματος, Novo Nordisk Foundation, Lundbeck Ιδρύματος και της Δανίας Cancer Society. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Peter Jensen Buhl έχει ιδιοκτησιακά συμφέροντα και την απασχόληση στην TopoTarget A /S. Maxwell Sehested έχει ιδιοκτησιακά συμφέροντα και την απασχόληση στην TopoTarget A /S. Fredrik Björkling έχει απασχόλησης στην TopoTarget A /S. Kamille Dumong Erichsen έχει απασχόλησης στην TopoTarget A /S. Όλοι οι άλλοι συγγραφείς δεν έχουν καμία σύγκρουση συμφερόντων. Ότι ορισμένοι από τους συν-συγγραφείς απασχολούνται από TopoTarget A /S δεν μεταβάλλει την τήρηση των συγγραφέων στα PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών. Δεν υπάρχουν διπλώματα ευρεσιτεχνίας, τα προϊόντα για την ανάπτυξη ή την εμπορία προϊόντων που να δηλώνουν.

Εισαγωγή

Μια πρόκληση κατά την ανάπτυξη νέων αντικαρκινικών φαρμάκων είναι η διάκριση μεταξύ των διασωστών και μη ανταποκρίθηκαν νωρίς στην πορεία της θεραπείας. Κατά τη διάρκεια της προ-κλινική ανάπτυξη αντικαρκινικών παραγόντων δοκιμή των in-vivo επίδραση των νέων ναρκωτικών υποψηφίων με βιοδείκτες απεικόνισης μπορεί να βοηθήσει στην καθοδήγηση του οποίου υποψήφιων φαρμάκων για την περαιτέρω ανάπτυξη, τη βελτίωση των γνώσεων των υποψηφίων φαρμάκων και θα βοηθήσει στην επιλογή η οποία προγνωστική βιοδείκτες θα μπορούσε να είναι συμπεριληφθούν σε μελλοντικές κλινικές μελέτες. Πολλές νέες και έχουν ήδη εγκριθεί χημειοθεραπευτικών έχουν μόνο δράση κατά του όγκου σε μια υποομάδα ασθενών. Η ταυτοποίηση αυτών των ασθενών νωρίς από την έναρξη της θεραπείας θα μπορούσε να οδηγήσει σε μια στροφή προς άλλες θεραπείες στα μη ανταπόκριση των ασθενών και κατά συνέπεια να μειωθούν οι περιττές θεραπείες. Η χρήση του μη-επεμβατική τομογραφία εκπομπής ποζιτρονίων τεχνική απεικόνισης (ΡΕΤ) για την εικόνα του πολλαπλασιασμού των κυττάρων με τον ιχνηθέτη 3′-δεσοξυ-3 ‘- [18F] φθοροθυμιδίνη ([18F] FLT) έχει δοκιμαστεί σε διάφορες προ-κλινικές ρυθμίσεις [1] – [10]. [18F] FLT χρησιμοποιείται για την εκτίμηση του κυτταρικού πολλαπλασιασμού

in vivo από

ΡΕΤ, με μέτρηση της δραστικότητας του θυμιδίνης κινάσης 1 (ΤΚ1) η οποία είναι ρυθμισμένα προς τα πάνω στην φάση S του κυτταρικού κύκλου [11] – [ ,,,0],16]. ΤΚ1 είναι ένα ένζυμο της οδού διάσωσης DNA. ΤΚ1 μετατρέπει θυμιδίνης σε μονοφωσφορική θυμιδίνη (σύμφωνα με την οποία φωσφορυλιώνεται περαιτέρω σε τριφωσφορική θυμιδίνη και ενσωματώθηκε στο DNA) και ως εκ τούτου έχουν μία λειτουργία κλειδί στην σύνθεση του DNA και τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων. ΤΚ1 είναι ένα κεντρικό ένζυμο που εμπλέκεται στην πρόσληψη της [18F] FLT και ως εκ τούτου οι μετρήσεις της γονιδιακής έκφρασης ΤΚ1 συμπεριλήφθηκε στις παρούσες μελέτες για την αξιολόγηση της [18F] πρόσληψη FLT. Η τυποποιημένη μέθοδος για την αξιολόγηση του κυτταρικού πολλαπλασιασμού σε όγκους είναι με Κί67 ανοσοϊστοχημεία. Μέτρηση της ποσότητας του Κί67 θετικών κυττάρων σε ένα συμπαγή όγκο απαιτεί βιοψία και επομένως διαδοχική μετρήσεις του κυτταρικού πολλαπλασιασμού σε όγκους κατά την διάρκεια της θεραπείας είναι συχνά περιορισμένη λόγω των προκλήσεων με απομάκρυνση διαδοχικές βιοψίες. Κί67 αντιγόνο είναι μια πρωτεΐνη που εκφράζεται σε πολλαπλασιαζόμενα κύτταρα όπου βρίσκεται στο πυρηνίσκο [17]. Κί67 εκφράζεται σε G1, S, G2 και Μ φάση του κυτταρικού κύκλου, αλλά όχι κατά τη φάση G0 ανάπαυσης, η έκφραση είναι υψηλότερη στην μιτωτική φάση [18]. Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων είναι συχνά είτε ο πρωτογενή ή δευτερογενή στόχος πολλών αντικαρκινικών φαρμάκων, και ως εκ τούτου διερεύνηση των αλλαγών στον κυτταρικό πολλαπλασιασμό με χρήση του [18F] FLT ΡΕΤ μπορεί να χρησιμοποιηθεί μετά από θεραπεία με διάφορους αντικαρκινικά φάρμακα. Ωστόσο, [18F] αλλαγές FLT μετά τη θεραπεία είναι πολύ μεταβλητά και εξαρτώνται από τους όγκους και τις θεραπείες [19].

Ακόμα κι αν πολλές προ-κλινικές μελέτες έχουν διερευνήσει τις αλλαγές στο [18F] πρόσληψης FLT μετά από θεραπεία με διάφορα χημειοθεραπευτικά λίγες μελέτες έχουν αναλύσει τις διαφορές στην πρόσληψη της [18F] FLT μεταξύ ανταποκρίνεται και μη ανταπόκριση όγκων [20], [21].

η

Προηγουμένως, διαπιστώσαμε ότι [18F] FLT μειώθηκε 2, 6 και 24 ώρες μετά την αγωγή με Top216 σε ένα μοντέλο όγκο ευαίσθητο Α2780 [22]. TP202377 είναι ένα ανάλογο του περιγραφόμενου προηγουμένως Top216 με το ίδιο ισχυρή δραστικότητα κατά του όγκου αλλά χαμηλότερη τοξικότητα [23]. Τόσο Top216 και TP202377 ανήκουν σε μια ομάδα ενώσεων στηριχθεί σε ένα 1,3-διυδροϊνδολο-2-όνη ικρίωμα. Αυτές οι ενώσεις αναστέλλουν τη σύνθεση των πρωτεϊνών και του DNA και επάγουν απόπτωση και δείχνουν ισχυρή αντικαρκινική δράση σε διάφορες κυτταρικές σειρές και τα μοντέλα ποντικού ανθρώπινου καρκίνου. TP202377 προκαλεί πλήρη υποχώρηση του όγκου σε ένα μοντέλο PC3 αρουραίου (ανθρώπινη κυτταρική σειρά καρκίνου του προστάτη) ξενομοσχεύματος [23]. Ο ακριβής μηχανισμός δράσης αυτών των ενώσεων είναι ακόμα άγνωστη? Εν τούτοις, η αντικαρκινική δράση είναι κατά κάποιο τρόπο συνδέεται με το μονοπάτι mTOR και θα μπορούσε να οφείλεται σε εξάντληση των ενδοκυτταρικών αμινοξέων [24].

Προκειμένου να διερευνηθεί αν η μείωση της [18F] πρόσληψης FLT μετά την αγωγή είναι προγνωστική για μεταγενέστερη υποχώρηση του μεγέθους του όγκου, υπάρχει μία ανάγκη για γνώση σχετικά με εάν οι πρώιμες αλλαγές σε [18F] πρόσληψης FLT είναι ειδικά για τα ευαίσθητα όγκους. Σε αυτή τη μελέτη διερευνήσαμε [18F] πρόσληψη FLT σε τρία μοντέλα όγκων των οποίων τα δύο είναι ανθεκτικά στην TP202377 (Α2780 /Top216 και SW620) [23], [24] μετά τη θεραπεία για να διερευνηθεί αν οι αλλαγές στο [18F] πρόσληψη FLT αποκαλύπτει το εάν οι όγκοι είναι ευαίσθητα ναρκωτικών. Χρησιμοποιήσαμε το ευαίσθητο Α2780 ωοθήκης μοντέλο όγκου επειδή TP202377 έχει αντικαρκινική δράση σε αυτό το μοντέλο όγκου και την ανάπτυξη νέων χημειοθεραπευτικών για τη θεραπεία του καρκίνου των ωοθηκών είναι εξαιρετικά απαραίτητη. Πολλοί ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών δείξει μια αρχική ανταπόκριση στη χημειοθεραπεία? Ωστόσο, πολλές ασθενείς υποτροπιάζουν με όγκους ανθεκτικών στα φάρμακα και ως εκ τούτου την ανάπτυξη νέων χημειοθεραπευτικών για τη θεραπεία του καρκίνου των ωοθηκών είναι μεγάλης συμφερόντων.

Ο σκοπός της μελέτης ήταν επομένως να αναλυθεί εάν [18F] FLT ΡΕΤ θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί να διαχωρίσει ανταπόκριση από μη ανταπόκριση όγκων μέσα σε 24 ώρες μετά την έναρξη της θεραπείας με τη νέα αντικαρκινική ένωση TP202377. Για να γίνει αυτό, θα απεικονίζεται πολλαπλασιασμό των κυττάρων

in vivo

με [18F] FLT ΡΕΤ πριν και κατά τη διάρκεια της θεραπείας τόσο σε TP202377 ευαίσθητο και δύο ανθεκτικά μοντέλα της ανθρώπινης ποντίκι του καρκίνου του όγκου. Τα δεδομένα απεικόνισης συγκρίθηκαν με Κί67 και γονιδιακή έκφραση ΤΚ1 και την ανάπτυξη του όγκου μετρήθηκε με αξονική τομογραφία (CT).

Η

Υλικά και Μέθοδοι

Όγκου Μοντέλο

φροντίδα των ζώων και όλες οι πειραματικές διαδικασίες πραγματοποιήθηκαν υπό την έγκριση του Συμβουλίου Ευημερίας των ζώων της Δανίας (2006/561 έως 1124). Θήλυ NMRI (Naval Medical Research Institute) γυμνά ποντίκια (ηλικίας 8 εβδομάδων) αποκτήθηκαν από την Taconic Ευρώπη (Lille Skensved, Denmark) και αφέθηκαν να εγκλιματιστούν για μία εβδομάδα στην εγκατάσταση ζώων πριν από την έναρξη κάθε παρέμβαση. Δέντρο διαφορετικές κυτταρικές σειρές χρησιμοποιήθηκαν, ο TP202377 ευαίσθητη ανθρώπινη κυτταρική σειρά καρκινώματος των ωοθηκών Α2780 [25] (ένα δώρο από τον R. Ozols, Fox Chase Cancer Center Philadelphia, PA, Ιανουάριος 2004), μια TP202377 ανθεκτική μορφή της κυτταρικής σειράς Α2780 Α2780 /Top216 και η ανθρώπινη κυτταρική σειρά καρκίνου του παχέος εντέρου SW620. Η κυτταρική γραμμή SW620 αποκτήθηκε από την ATCC (LGC Πρότυπα ΑΒ, Borås, Σουηδία). Η Top216 ανθεκτικός Α2780 κλώνος (A2870 /Top216) έγινε μετά σειριακή

in vitro

περάσματα και επιλογή κλώνου του Α2780 παρουσία αυξανόμενων συγκεντρώσεων Top216. Το Α2780 /Top216 κλώνος είναι διασταυρούμενη αντοχή στη TP202377 [23].

Η ανάπτυξη των όγκων μετά από TP202377-θεραπεία Α2780 (πάνω πίνακα), Α2780 /Top216 (μέσα πάνελ) και SW620 (κάτω πίνακας). Ο όγκος του όγκου προσδιορίστηκε με microCT. Τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε αγωγή με TP202377 (40 mg /kg ε.φ.) ή όχημα κατά την Ημέρα 0. Ν = 8-16 όγκοι /ομάδα. *) P & lt? 0,05, **) ρ & lt? 0,01, ***) p & lt? 0.001 θεραπείας σε σχέση με την ομάδα ελέγχου στο ίδιο χρονικό σημείο

Η

[18F] πρόσληψη FLT μετριέται ως SUVmean (αριστερά πάνελ). και SUVmax (δεξιά πάνελ) σε Α2780, Α2780 /Top216 και SW620 μετά από θεραπεία με TP202377 ή όχημα. Ν = 8-16 όγκοι /ομάδα. *) Ρ & lt? 0,05, **) ρ & lt? 0,01, ***) ρ & lt? 0.001 έναντι βασικής γραμμής σε ίδια ομάδα θεραπείας. #) Ρ & lt? 0,05, ##) ρ & lt? 0,01, ###) p & lt?. 0.001 θεραπείας σε σχέση με την ομάδα ελέγχου στο ίδιο χρονικό σημείο

Η

Εκπρόσωπος [18F] FLT PET /CT εικόνες Α2780 ( άνω πάνελ), Α2780 /Top216 (μέσα πάνελ) και SW620 (κάτω πίνακας) ξενομοσχεύματα (διακεκομμένη κύκλοι). [18F] πρόσληψη FLT μετράται στα ίδια ζώα κατά την έναρξη και 6 ώρες, Ημέρα 1 και την Ημέρα 6 έναρξη της θεραπείας συνέχεια με TP202377.

Η

Οι αλλαγές στον όγκο του όγκου μετρώνται ως Ημέρα αναλογία 6 /βάσης σε σύγκριση με το πρόσληψη της [18F] FLT μετράται ως αναλογία 6 ώρες /βασική γραμμή (δεξιά πλευρά) και την Ημέρα 1 /βάσης (αριστερό πάνελ).

η

η έκφραση του Κί67 και ΤΚ1 ομαλοποιούνται στη γεωμετρική μέση τιμή των τριών αναφοράς γονίδια. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως φορές αλλαγές μετά από θεραπεία σε σχέση με τα αρχικά επίπεδα. Ν = 6-8 όγκων /ομάδα. *) Ρ & lt? 0,05, **) ρ & lt? 0,01, ***) ρ & lt? 0.001 έναντι βασικής γραμμής σε ίδια ομάδα θεραπείας. #) Ρ & lt? 0,05, ##) ρ & lt? 0,01, ###) p & lt?. 0.001 θεραπείας σε σχέση με την ομάδα ελέγχου στο ίδιο χρονικό σημείο

Η

Για την εγκατάσταση των ξενομοσχευμάτων, 10

7 κύτταρα 100 μL μέσου αναμιγνύεται με 100 μL Matrixgel ™ Υπόγειο Membrane Matrix (BD Biosciences, San Jose, CA, USA) ενέθηκαν υποδορίως σε αριστερό και το δεξί πλευρό αντίστοιχα κατά τη διάρκεια αναισθησίας με 1:01 ν /ν μίγμα το Ηγρηοππ® (Janssen Pharmaceutica, Beerse, Βέλγιο) και Dormicum® (Roche, Βασιλεία, Ελβετία). Οι κυτταρικές γραμμές έχει ελεγχθεί ελεύθερα από μυκόπλασμα. Όλες οι κυτταρικές σειρές καλλιεργήθηκαν σε RPMI (Roswell Park Memorial Institute) μέσο 1640+ GlutaMAX (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου μόσχου (Biological Industries, Israel) και 1% πενικιλλίνη-στρεπτομυκίνη (Invitrogen) σε 5 .% CO

2 στους 37 ° C

χρησιμοποιήθηκαν Πειραματικός Σχεδιασμός

ξενομοσχεύματα σε ποντικούς από 3 κυτταρικές σειρές ανθρώπινου καρκίνου: το TP202377 ευαίσθητο Α2780 ωοθήκης κυτταρική σειρά καρκίνου (n = 4 -8 ποντίκια /ομάδα = 8-16 όγκοι /ομάδα), η επαγόμενη TP202377 ανθεκτική κυτταρική γραμμή /Top216 Α2780 (n = 4-6 ποντικοί /ομάδα = 8-12 όγκοι /ομάδα) και το φυσικό TP202377 ανθεκτικό καρκίνο του παχέος εντέρου SW620 κυτταρική σειρά (η = 5 ποντικοί /ομάδα = 10 όγκων /ομάδα).

In vivo

πρόσληψη της [18F] FLT μελετήθηκε σε διάφορα χρονικά σημεία μετά τη θεραπεία με TP202377 (40 mg kg iv /στους 0 ώρες) ή φορέα (2% DMSO, 20% ΗΡ-β-CD σε φυσιολογικό ορό ). Η χημική δομή της TP202377 παρουσιάζεται στο σχήμα 1. TP202377 ήταν σε προηγούμενες αναλύσεις αποδειχθεί ότι αναστέλλει την ανάπτυξη των όγκων ξενομοσχεύματος Α2780 αλλά όχι του Α2780 /Top216 και SW620. [18F] σαρώσεις FLT έγιναν πριν είτε TP202377 ή όχημα εγχύθηκε για να καθοριστεί το επίπεδο αναφοράς της πρόσληψης του ιχνηθέτη. Ο σχεδιασμός της μελέτης ήταν διαμήκη και το [18F] σαρώσεις FLT επαναλήφθηκαν στα ίδια ζώα 6 ώρες, ημέρα 1, και την Ημέρα 6 (5 έως 7) μετά την ένεση.

Ο όγκος του όγκου παρακολουθήθηκε με CT κατά τη διάρκεια της τα πειράματα [26]. Οι όγκοι των όγκων υπολογίστηκαν σε σχέση με τον όγκο κατά την έναρξη.

Η έκφραση του Κί67 και ΤΚ1 αναλύθηκαν

in vitro

σε παράλληλες ομάδες ποντικών με Α2780, Α2780 /Top216 και όγκους SW620 αντίστοιχα, τα οποία υποβλήθηκαν σε αγωγή είτε με TP202377 ή του οχήματος και σε βιοψία πριν και στις 6 ώρες, ημέρα 1 και την ημέρα 5 μετά την έναρξη της θεραπείας. Οι βιοψίες ελήφθησαν με χρήση βελόνας 18G και τοποθετήθηκε αμέσως σε RNA later® (Ambion (Europe) Limited, Cambridgeshire, UK). Όλα τα δείγματα φυλάχθηκαν στους 4 ° C και την επόμενη μέρα RNAlater® αφαιρέθηκε και τα δείγματα μεταφέρθηκαν σε -80 ° C μέχρι την περαιτέρω επεξεργασία qPCR.

Σύνθεση της [18F] FLT

[18F] FLT συντέθηκε χρησιμοποιώντας 3-Ν-Βοο-1- [5-Ο- (4,4′-διμεθοξυτριτυλ) -3-O-νοσύλιο-2-δεοξυ-β-D-lyxofuranosyl] θυμίνη ως πρόδρομος και συντίθεται σε ένα GE TracerLab MX Synthesizer όπως περιγράφηκε προηγουμένως [22]. Όλα τα αντιδραστήρια και [18F] κασέτες FLT αγοράστηκαν από την ABX (Radeberg, Γερμανία).

microPET και microCT Imaging

Τα ποντίκια ενδοφλέβια έγχυση με 9,6 ± 1,7 (μέση τιμή ± SD) MBq [18F] FLT. Μία ώρα μετά τα ποντίκια ένεση ιχνηθέτη αναισθητοποιήθηκαν με 3% sevofluran (Abbott Scandinavia AB, Solna, Σουηδία) αναμειγνύεται με 35% O

2 N

2 και σταθερά σε ένα κρεβάτι με παρουσία τριών βασικών δεικτών που επιτρέπουν τη σύντηξη των PET και CT εικόνες. Μια ΡΕΤ scan αποκτήθηκε χρησιμοποιώντας ένα MicroPET Focus 120 (Siemens Medical Solutions, Malvern, ΡΑ, USA) που ακολουθείται από μια microCT σάρωση αποκτήθηκαν με ένα σύστημα MicroCAT® II (Siemens Medical Solutions) όπως περιγράφηκε προηγουμένως [22]. Μετά την απόκτηση δεδομένων, τα δεδομένα PET ήταν τοποθετημένα σε sinograms και στη συνέχεια ανακατασκευάστηκε με τη μέγιστη αλγόριθμο ανακατασκευής των υστέρων (MAP). Το μέγεθος pixel ήταν 0.866 × 0.866 × 0,796 χιλιοστά και στο κέντρο οπτικό πεδίο το ψήφισμα ήταν 1,4 χιλιοστά πλήρες πλάτος στο μισό της μέγιστης.

PET και microCT εικόνες συγχωνεύθηκαν στο λογισμικό Inveon (Siemens Medical Solutions). Πριν περιοχή συγχώνευση των συμφερόντων (ROIs) καταρτίστηκαν στις εικόνες CT με το χέρι από την ποιοτική αξιολόγηση που καλύπτει το σύνολο των όγκων και εν συνεχεία ο όγκος του όγκου και του ιχνηθέτη πρόσληψη, η οποία αξιολογείται από αποκοπή τιμών πρόσληψης (SUV) μέση και μέγιστη, παρήχθησαν από την άθροιση των voxels εντός της τομογραφικές αεροπλάνα.

ποσοτική πραγματικού χρόνου αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (qPCR)

Ολικό RNA απομονώθηκε από τις βιοψίες με TRI reagent® ακολουθώντας τις οδηγίες του κατασκευαστή (Molecular Research Center Inc., ΟΗ, USA ) και στη συνέχεια το RNA ακεραιότητα μετρήθηκε σε 2.100 Bioanalyzer (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA). της ποιότητας του RNA αναφέρεται ως αριθμός ακεραιότητα του RNA (RIN). Η συγκέντρωση του RNA προσδιορίστηκε με NanoDrop 1000 (Thermo Fisher Scientific, Wilmington, DE, USA). Ολικό RNA (0.3 μα) αντιστράφηκε μεταγραφή χρησιμοποιώντας το κιτ Affinityscript ™ QPCR cDNA Synthesis (Stratagene, La Jolla, CA, USA) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Τα δείγματα ψύχθηκαν και αποθηκεύτηκαν στους -20 ° C μέχρι την περαιτέρω χρήση.

Η γονιδιακή έκφραση προσδιορίστηκε ποσοτικά σε πραγματικό χρόνο σύστημα PCR Mx3000P® από την Stratagene. Όλα γονίδιο συμφερόντων (GOIs) και τα γονίδια αναφοράς ποσοτικά με Brilliant® SYBR® Πράσινο QPCR Master Mix (Stratagene). Το ακόλουθο θερμικό προφίλ χρησιμοποιήθηκε σε όλα τα πειράματα: 10 λεπτά μετουσιώσεως στους 95 ° C που ακολουθείται από 45 κύκλους των 30 δευτερολέπτων μετουσιώσεως στους 95 ° C, 1 λεπτό ανόπτηση στους 60 ° C και επέκταση 1 λεπτού στους 72 ° C. Μια καμπύλη διαστάσεως ήταν αργότερα αποκτήθηκε από μετουσίωση των προϊόντων για 1 λεπτό στους 95 ° C που ακολουθείται από μία σταδιακή αύξηση της θερμοκρασίας από 55 ° C έως 95 ° C με βήματα των 0,5 ° C /κύκλο όπου η διάρκεια του κάθε κύκλου ήταν 18 δευτερόλεπτα για .

δεδομένα QPCR αναλύθηκαν στο πρόγραμμα qBase. Η σχετική ποσοτικοποίηση της GOIs υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας πολλαπλά γονίδια αναφοράς [27]. Ιστού από την αρχική τιμή δείγματα υπηρέτησε ως βαθμονομητή. Το επίπεδο του GOIs κανονικοποιήθηκε προς το γεωμετρικό μέσο όρο των τριών γονιδίων αναφοράς. Οι τρεις πιο σταθερή γονίδια αναφοράς βρέθηκαν από μια ομάδα 12 υποψηφίων, τον πίνακα του γονιδίου αναφοράς του ανθρώπου (ΤΑΤΑΑ Biocenter ΑΒ, Γκέτεμποργκ, Σουηδία) με τη χρήση του αλγορίθμου geNorm.

Οι εκκινητές σχεδιάστηκαν χρησιμοποιώντας Beacon Designer (PREMIER Biosoft, Palo Alto, CA, USA) και οι αλληλουχίες παρουσιάζονται στον πίνακα 1. Για κάθε γονίδιο η βέλτιστη συγκέντρωση εκκινητή βρέθηκε. Όλες οι δοκιμασίες βελτιστοποιηθεί για να έχουν αποδόσεις μεταξύ 95% και 105%. Όλα τα δείγματα αναλύθηκαν εις τριπλούν χρησιμοποιώντας μία μΙ cDNA. Σε κάθε δείγμα περιελάμβανε μια μη-αντίστροφη ελέγχου μεταγραφής (NORT), και σε κάθε πλάκα συμπεριλήφθηκε ένας έλεγχος χωρίς πρότυπο (NTC).

Στατιστική Ανάλυση

Συγκρίσεις του μεγέθους του όγκου μεταξύ της θεραπείας και ομάδες ελέγχου υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας t-test unpaired σπουδαστή. Paired t-test χρησιμοποιήθηκε για συγκρίσεις εντός του ομίλου. Bonferroni διόρθωση της Ρ-τιμές για πολλαπλές συγκρίσεις εφαρμόστηκε. Οι συσχετίσεις μεταξύ SUVmean και SUVmax αναλογίες και της ανάπτυξης των όγκων υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας γραμμική παλινδρόμηση. Οι υπολογισμοί έγιναν σε PASW 18.0 (IBM Corporation, Armonk, New York, USA). Τα δεδομένα αναφέρονται ως μέση τιμή ± SEM και P & lt?. 0.05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική

Αποτελέσματα

Tumor Ένταση

όγκους Α2780 που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με TP202377 είχαν όγκους κατά την Ημέρα 6, ότι ήταν 161 ± 13% σε σχέση με την αρχική τιμή. Στους όγκους ομάδα ελέγχου Α2780 την Ημέρα 6 ήταν 322 ± 38% σε σχέση με την αρχική τιμή η οποία ήταν σημαντικά υψηλότερη σε σύγκριση με την ομάδα θεραπείας (Ρ & lt? 0.001). Α2780 /Top216 όγκους που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με TP202377 είχαν όγκους κατά την Ημέρα 6 που ήταν 442 ± 65% σε σχέση με την αρχική τιμή. Στο Α2780 /Top216 όγκοι ομάδας ελέγχου την ημέρα 6 ήταν 376 ± 59% σε σχέση με την αρχική τιμή η οποία δεν ήταν διαφορετική από την ομάδα αγωγής. SW620 όγκους που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με TP202377 είχαν όγκους κατά την Ημέρα 6 που ήταν 198 ± 15% σε σχέση με την αρχική τιμή. Στους όγκους ομάδα ελέγχου SW620 την Ημέρα 6 ήταν 193 ± 9%, η οποία δεν ήταν διαφορετική από την ομάδα θεραπείας (σχήμα 2).

[18F] FLT Πρόσληψη

Baseline πρόσληψη [18F] FLT μετριέται ως SUVmean ήταν 1.44 ± 0.06 στους όγκους Α2780, 0,83 ± 0,02 στα /Top216 όγκους Α2780 και 0.86 ± 0.03 στους όγκους SW620. Στη θεραπεία μοντέλο TP202377 Α2780 όγκου προκάλεσε σημαντική μείωση στην πρόσληψη της [18F] FLT από 1,51 ± 0,07 κατά την έναρξη σε 0,78 ± 0,03 στις 6 ώρες (-46 ± 3%? P & lt? 0.001) και 0,79 ± 0,04 την Ημέρα 1 (- 46 ± 3%? Ρ & lt? 0.001) (σχήμα 3). Την Ημέρα 6 η πρόσληψη ήταν 1,67 ± 0,12 που ήταν συγκρίσιμη με την αρχική τιμή. Μεταξύ της ομάδας θεραπείας και ελέγχου η πρόσληψη ήταν διαφορετική στις 6 ώρες (Ρ & lt? 0.001) και την Ημέρα 1 (Ρ & lt? 0.001) (εικόνα 4). Η θεραπεία με TP202377 δεν επηρέασε [18F] πρόσληψη FLT SUVmean στα ανθεκτικά μοντέλα όγκου Α2780 /Top216 ή SW620 και δεν παρατηρήθηκαν διαφορές μεταξύ των ομάδων θεραπείας και ελέγχου. Σε όλες τις ομάδες ελέγχου [18F] FLT SUVmean δεν αλλάζουν κατά τη διάρκεια του πειράματος.

πρόσληψη Baseline της [18F] FLT μετριέται ως SUVmax ήταν 2,58 ± 0,13 στους όγκους Α2780, 1,24 ± 0,03 σε Α2780 /Top216 όγκους και 1,50 ± 0,04 στους όγκους SW620. θεραπεία TP202377 προκάλεσε σημαντική μείωση στην πρόσληψη της [18F] FLT στο μοντέλο όγκου Α2780, όπως μετράται με SUVmax. Στην πρόσληψη ομάδα θεραπείας μειώθηκε από 2,67 ± 0,17 κατά την έναρξη σε 1,20 ± 0,05 (-53 ± 3%? P & lt? 0.001) σε 6 ώρες και 1,19 ± 0,05 (-54 ± 3%? P & lt? 0.001) κατά την Ημέρα 1. Κατά την ημέρα 6 η πρόσληψη είχε επιστρέψει σε ένα βασικό επίπεδο 2,94 ± 0,23. Μεταξύ της ομάδας θεραπείας και ελέγχου η πρόσληψη ήταν διαφορετική στις 6 ώρες (Ρ & lt? 0.001) και την Ημέρα 1 (Ρ & lt? 0.001). (Εικόνα 3)

Η θεραπεία με TP202377 δεν επηρέασε [18F] πρόσληψη FLT SUVmax σε το ανθεκτικό μοντέλο όγκου /Top216 Α2780, ωστόσο η πρόσληψη του SUVmax μειώθηκε από 1,50 ± 0,07 κατά την έναρξη σε 1,36 ± 0,08 σε 6 ώρες (-10 ± 3%? Ρ = 0,02) στο μοντέλο όγκου SW620. Στην πρόσληψη ομάδα ελέγχου SW620 την Ημέρα 6 1.49 ± 0.04 ήταν χαμηλότερη σε σύγκριση με την αρχική τιμή πρόσληψη 1,29 ± 0,07 (-14 ± 4%? P = 0.04). Δεν παρατηρήθηκε διαφορά μεταξύ των ομάδων θεραπείας και ελέγχου παρατηρήθηκαν ούτε για το Α2780 /Top216 ή όγκους SW620 (σχήμα 3).

Οι συσχετίσεις μεταξύ SUVmean ή SUVmax αναλογίες από την έναρξη έως 6 ώρες και την Ημέρα 1, αντίστοιχα, και ο όγκος του όγκου υπολογίστηκαν οι αλλαγές από την έναρξη έως την Ημέρα 6. Για το TP202377 αντιμετωπίζονται Α2780 και Α2780 /όγκους Top216 μαζί, βρήκαμε μια σημαντική θετική συσχέτιση μεταξύ της αύξησης του όγκου και SUVmean 6 ώρες /αρχική τιμή (r

2 = 0,53? P & lt? 0.001), SUVmean Day1 /αρχική τιμή (r

2 = 0,65? P & lt? 0.001), SUVmax 6 ώρες /αρχική τιμή (r

2 = 0,51? P & lt? 0.001) και SUVmax Day1 /αρχική τιμή (r

2 = 0,63? P & lt? 0.001) (σχήμα 5).

Ki67 και Gene Expression ΤΚ1

Το δέντρο πιο σταθερή γονίδια αναφοράς βρέθηκαν να είναι πεπτιδυλπρολύλ ισομεράση Α (PPIA), ριβοσωμική πρωτεΐνη P0 (RPLP0) και ΤΑΤΑ πρωτεΐνης δέσμευσης κουτί (TBP). Το επίπεδο του GOIs κανονικοποιήθηκε προς το γεωμετρικό μέσο όρο των τριών αυτών γονιδίων. Τα επίπεδα έκφρασης του γονιδίου αναφέρονται σε σχέση με την αρχική τιμή. αριθμοί ακεραιότητα RNA (RIN-τιμές) ήταν 8,8 ± 0,9 (μέση τιμή ± SD) για όλα τα δείγματα.

γονιδιακής έκφρασης Κί67 ήταν χαμηλότερη στην ομάδα αγωγής συγκριτικά με την ομάδα ελέγχου στις 6 ώρες (0,60 ± 0,02 vs. 1,00 ± 0,04? Ρ & lt? 0.001) και την Ημέρα 1 (0,35 ± 0,03 έναντι 0,97 ± 0,05? Ρ & lt? 0.001) μετά την έναρξη της θεραπείας στην ομάδα Α2780 όγκου. Την ημέρα 5, η έκφραση του Κί67 στην ομάδα αγωγής ήταν συγκρίσιμη με την ομάδα ελέγχου. Σε σύγκριση με την αρχική τιμή της έκφρασης, Ki67 μειώθηκε κατά 6 ώρες (-40 ± 2%? Ρ & lt? 0.001) και την Ημέρα 1 (-65 ± 3%? Ρ & lt? 0.001) στην ομάδα θεραπείας Α2780. Η έκφραση του Κί67 δεν άλλαξε σε οποιαδήποτε από τις ομάδες θεραπείας Α2780 /Top216 και SW620 ή οποιαδήποτε από τις ομάδες ελέγχου.

Η έκφραση του ΤΚ1 ήταν αμετάβλητη στους όγκους Α2780 τόσο στην αγωγή και την ομάδα ελέγχου. Ωστόσο, στις Α2780 /όγκους Top216 παρατηρήσαμε μια μικρή αύξηση στην έκφραση ΤΚ1 στην θεραπεία σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου στις 6 ώρες (1,13 ± 0,06 έναντι 0,93 ± 0,03? Ρ = 0,04) μετά την έναρξη της θεραπείας (σχήμα 6). Ημέρα 5 η έκφραση της ΤΚ1 μειώθηκε στην ομάδα ελέγχου όγκου SW620 σε σύγκριση με την αρχική τιμή (-27 ± 6%? P = 0.02).

Συζήτηση

Η παρούσα μελέτη κατέδειξε μη επεμβατική διαφοροποίηση μεταξύ ανταποκρίνεται και μη ανταποκρινόμενους όγκους 6 ώρες μετά την έναρξη της θεραπείας με το TP202377 αντικαρκινικό φάρμακο με χρήση του [18F] FLT ΡΕΤ. Έξι ώρες μετά την ένεση του TP202377 παρατηρήσαμε μια μείωση -46% σε SUVmean αξίες και -53% μείωση στις τιμές SUVmax στον τύπο Α2780 όγκου TP202377 ευαίσθητη. Η μείωση στην πρόσληψη ιχνηλάτη προηγηθεί παλινδρομήσεις στον όγκο του όγκου την Ημέρα 6. Δεν παρατηρήσαμε αλλαγές στη SUVmean μετά τη θεραπεία των δύο TP202377 ανθεκτικά μοντέλα όγκου. Ωστόσο, στο μοντέλο SW620 όγκου TP202377 ανθεκτικά παρατηρήσαμε μια μικρή μείωση στους -10% 6 ώρες μετά την ένεση του TP202377 όταν μετριέται ως SUVmax. Την Ημέρα 1 SUVmax ήταν συγκρίσιμη με την αρχική τιμή στους όγκους SW620. Ο λόγος που παρατηρείται αυτή η μικρή αλλαγή στην πρόσληψη SUVmax στις 6 ώρες θα μπορούσε ενδεχομένως να είναι ότι αυτό το μοντέλο όγκου δεν είναι απόλυτη ανθεκτική σε TP202377 αλλά απλά έχει πολύ χαμηλή ευαισθησία φαρμάκου σε σύγκριση με το Α2780. Ωστόσο, υπάρχουν αλλαγές στον όγκο του όγκου στο τέλος του πειράματος παρατηρήθηκαν παρά τη μικρή μείωση στην SUVmax στις 6 ώρες. Δεν υπήρχε σημαντική διαφορά ούτε SUVmean ή SUVmax μεταξύ της ομάδας θεραπείας και ελέγχου 6 ώρες μετά την έναρξη της θεραπείας, έτσι ώστε να παρατηρείται ακόμη μια διαφορά μεταξύ των ανταποκρίνεται και μη ανταποκρινόμενους όγκους σε αυτό το χρονικό σημείο.

Την Ημέρα 6 [18F] πρόσληψη FLT στην ομάδα θεραπείας ήταν συγκρίσιμη με την ομάδα ελέγχου σε ευαίσθητους όγκους Α2780 που δείχνουν ότι οι όγκοι είχαν αρχίσει να ξανά πολλαπλασιάζονται. Αξιολογήσαμε την [18F] απόκριση FLT μετά από εφάπαξ δόση TP202377 και προκειμένου να αποκτήσει μακροχρόνια επίδραση της θεραπείας πρέπει να εγχυθεί αρκετές φορές το φάρμακο. Δυνητικά, αξιολόγηση μιας πολλαπλασιαστικής όγκων κατάσταση με [18F] FLT θα μπορούσαν να χρησιμοποιηθούν για τον προσδιορισμό της βέλτιστης χρονικό παράθυρο μεταξύ δύο ενέσεις του φαρμάκου.

Οι αλλαγές στο [18F] FLT στις 6 ώρες και την Ημέρα 1 συσχετίσθηκαν με όγκος του όγκου αναλογία βάσης /Ημέρα 6 προκειμένου να εξετάσει αν, σε επίπεδο μεμονωμένων όγκου, ήταν δυνατό να προβλεφθεί ανταπόκριση του όγκου. Υπήρξε μια καλή συσχέτιση μεταξύ των μεταβολών μετά από 6 ώρες και Day 1 στο [18F] πρόσληψη FLT ιχνηθέτη και τις αλλαγές στον όγκο του όγκου την Ημέρα 6. Οι όγκοι που μειώθηκε περισσότερο στην πρόσληψη ιχνηλάτη αμέσως (6 ώρες και Ημέρα 1) από την έναρξη της θεραπείας ήταν οι όγκοι που αργότερα είχε τη χαμηλότερη αύξηση στον όγκο του όγκου. Συνεπώς, 6 ώρες μετά την έναρξη της θεραπείας ήμασταν σε θέση να επισημάνει τους όγκους που ανταποκρίθηκαν καλύτερα στη θεραπεία. Κατά τη διάρκεια της ανάπτυξης νέων χημειοθεραπευτικών φαρμάκων, ειδικά στις πρώιμες κλινικές φάσεις, ταυτοποίηση ανταπόκριση όγκων έχει μεγάλη αξία, προκειμένου να προβλεφθεί το αποτέλεσμα της θεραπείας. Οι περισσότερες νέες θεραπείες κατά του καρκίνου έχουν επίδραση σε συγκεκριμένους στόχους σε όγκους και να κάνει στις περισσότερες περιπτώσεις έχουν επίδραση μόνο σε υποομάδες ασθενών. Προσδιορισμός των ανταποκρινόμενων ασθενών με [18F] FLT PET νωρίς από την έναρξη της θεραπείας μπορεί να μειώσει το κόστος της ανάπτυξης φαρμάκων και την αποφυγή περιττών θεραπείας σε ασθενείς στους οποίους η θεραπεία δεν λειτουργεί όπως η θεραπεία θα μπορούσε να σταματήσει στα μη ανταπόκριση των ασθενών. Επίσης, [18F] FLT ΡΕΤ θα επέτρεπε τη χρήση ισχυρών φαρμάκων που είναι αποτελεσματικές μόνο σε λίγους ασθενείς αν συνδυαστεί με την παρακολούθηση απόκριση απεικόνισης.

Το επίπεδο έκφρασης Κί67 και το γονίδιο ΤΚ1 μετρήθηκε σε μια παράλληλη μελέτη. Η έκφραση του Κί67 παραλληλίζεται την πρόσληψη της [18F] FLT, η οποία επιβεβαίωσε τα αποτελέσματα ΡΕΤ αναφέροντας ότι η μείωση στην πρόσληψη ιχνηλάτη οφειλόταν σε μια πραγματική φυσιολογική αλλαγή και όχι συνεπεία της π.χ. μειωμένη παράδοση της [18F] FLT. Δεν παρατηρήθηκαν αλλαγές στην έκφραση γονιδίων ΤΚ1. Σε προηγούμενη μελέτη, όπου αναλύθηκε [18F] πρόσληψης FLT μετά τη θεραπεία με το TP202377 αναλογικό Top216, απόκλιση μεταξύ της [18F] έκφραση πρόσληψη FLT και ΤΚ1 παρατηρήθηκε επίσης [22]. Φαίνεται πως η θεραπεία με αυτά τα φάρμακα, παρά προκαλεί σημαντική μείωση της [18F] πρόσληψη FLT, δεν ρυθμίζει τη γονιδιακή έκφραση ΤΚ1 και περισσότερες μελέτες είναι απαραίτητες για να μάθετε περισσότερα σχετικά με την επίδραση της ΤΚ1 για το [18F] πρόσληψης FLT μετά τη θεραπεία με TP202377. Άλλες μελέτες έχουν παρομοίως δεν βρέθηκε καμία αλλαγή στα επίπεδα του mRNA της ΤΚ1 παρά την αλλαγή στο [18] πρόσληψης FLT ιχνηθέτη [2] ή μόνο παρατηρήθηκε μια εβδομάδα συσχέτιση μεταξύ του [18F] mRNA FLT και ΤΚ1 [28]. Παρά ΤΚ1 γίνεται κεντρικός παράγοντας στην πρόσληψη της [18F] FLT αυτά τα δύο δεν είναι πάντοτε στενά συνδεδεμένη [29], και οι μεταβολές στο [18F] πρόσληψης FLT μπορεί να οφείλεται σε αλλαγές στα επίπεδα πρωτεΐνης και δραστικότητα ή αλλαγές στα επίπεδα ΑΤΡ [5 ], [12], [30], [31].

Ένα από τα TP202377-ανθεκτικές κυτταρικές γραμμές που χρησιμοποιούνται σε αυτή τη μελέτη προήλθαν από το TP202377 ευαίσθητη κυτταρική γραμμή Α2780. Η κυτταρική σειρά SW620 προηγουμένως βρέθηκε να είναι φυσικά ανθεκτικά σε TP202377. Χρησιμοποιήσαμε τόσο που προκαλείται από ανθεκτικά και φυσικά ανθεκτικά κυτταρική γραμμή, προκειμένου να αναλύσει εάν θα υπήρχε καμία διαφορά στην [18F] ανταπόκριση FLT στη μεταχείριση μεταξύ των δύο κυτταρικές σειρές. Είναι ενδιαφέρον ότι η [18F] πρόσληψη FLT σε καθεμία από τις TP202377-ανθεκτικές κυτταρικές γραμμές ήταν χαμηλότερη σε σύγκριση με την TP202377 ευαίσθητη κυτταρική γραμμή Α2780. Ωστόσο, η πρόσληψη της [18F] FLT ήταν και στις δύο κυτταρικές σειρές πάνω από τα επίπεδα υποβάθρου. Χαμηλή πρόσληψη της [18F] FLT σε SW620 έχει επίσης αναφερθεί από άλλους [32].

Σε πολλές μελέτες, η επίδραση πολλών διαφορετικών ειδών της χημειοθεραπείας για πρόσληψη [18F] FLT έχει μελετηθεί [1] – [10]. Ωστόσο, λίγες μελέτες έχουν δοκιμαστεί και τα δύο ευαίσθητα και ανθεκτικά όγκους. Μια μελέτη αναλύθηκαν [18F] πρόσληψη FLT σε τόσο cetuximab ευαίσθητο και ένα cetuximab ανθεκτική κυτταρική γραμμή μετά από αγωγή με cetuximab? Ωστόσο, καμία αλλαγή στην πρόσληψη FLT παρατηρήθηκαν σε οποιαδήποτε από τις κυτταρικές σειρές [20]. Μια άλλη μελέτη διαπίστωσε καμία αισθητή επίδραση της θεραπείας trastuzumab για την πρόσληψη του όγκου των [18F] FLT σε μία ομάδα από τις δύο ανταπόκρισης και μη ανταπόκρισης των όγκων [21].

Εν κατακλείδι, βρήκαμε μια μείωση -53% στο [ ,,,0],18F] πρόσληψη FLT SUVmax 6 ώρες μετά την έναρξη της αγωγής στο μοντέλο Α2780 όγκου TP202377 ευαίσθητα. Στα μοντέλα όγκων TP202377 ανθεκτικά δεν είδαμε καμία κλινικά σχετικές αλλαγές στις [18F] πρόσληψης FLT μετά τη θεραπεία. Αναστολή ανάπτυξης όγκου μετά από αγωγή TP202377 παρατηρήθηκε στην ανταπόκριση μοντέλο Α2780 όγκου αλλά όχι οι δύο μη ανταπόκριση μοντέλα όγκου. Αυτή η μελέτη κατέδειξε ότι οι διαφορές στο [18F] πρόσληψης FLT 6 ώρες μετά τη θεραπεία να ξεκινήσει με μία νέα ένωση κατά του όγκου θα μπορούσε να διαχωρίσει ανταπόκριση από τα μη ανταπόκριση όγκων πριν παρατηρήθηκε οποιαδήποτε υποχώρηση του μεγέθους του όγκου. Πιστεύουμε ότι αυτή η έννοια κατέχουν μεγάλες υποσχέσεις, τόσο για την ανάπτυξη φαρμάκων και προσαρμογή της θεραπείας του καρκίνου.