Αφηρημένο

Ιστορικό

Casticin είναι ένα από τα κύρια ενεργά συστατικά που προέρχονται από

Fructus Viticis

και έχει αναφερθεί ότι εξασκεί αντι-καρκινογόνο δράση σε μια ποικιλία καρκινικών κυττάρων, αλλά ο ακριβής μηχανισμός βασίζεται η παρούσα δραστικότητα παραμένει ασαφής.

Υλικά και Μέθοδοι

τα αποπτωτικά δραστηριότητες του casticin (1,0 μmol /l) και TRAIL (25, 50 ng /ml) μόνο ή σε συνδυασμό στις κυτταρικές γραμμές γαστρικού καρκίνου BGC-823, SGC-7901 και MGC-803 ανιχνεύθηκαν με τη χρήση ενός κυτταρικής απόπτωσης κιτ ανίχνευσης ELISA, κυτταρομετρία ροής ( FCM) με ιωδιούχο προπίδιο (ΡΙ) χρώση και δραστηριότητες της κασπάσης-3, -8 και -9 με ELISA και διάσπαση της πρωτεΐνης πολυριβοζυλίωσης-ριβόζη πολυμεράση (PARP) χρησιμοποιώντας ανάλυση κηλίδος Western. τα επίπεδα έκφρασης των υποδοχέων θανάτου (DR) αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας ανάλυση FCM και western αποτύπωση. 2 ‘, 7’-διχλωρο διοξεικό (DCFH-DA) χρησιμοποιήθηκε ως ανιχνευτής για την εκτίμηση της αύξησης της αντιδραστικά είδη οξυγόνου επίπεδα (ROS) σε κύτταρα. Πολλαπλές παρεμβάσεις, όπως siRNA επιμόλυνση και φαρμακολογικών αναστολέων χρησιμοποιήθηκαν για να διερευνήσουν τους μηχανισμούς αυτών των δράσεων.

Αποτελέσματα

υποτοξικά συγκεντρώσεις casticin ενίσχυσε σημαντικά TRAIL επαγόμενη κυτταροτοξικότητα και την απόπτωση σε BGC-823, SGC-7901 και MGC-803 κύτταρα. Casticin απορυθμίζεται δραματικά την έκφραση του υποδοχέα DR5 αλλά δεν είχε επιπτώσεις στην DR4 ή δολώματα υποδοχείς. Απαλοιφή του DR5 με siRNA μείωσε σημαντικά την απόπτωση που επάγεται από την συν-εφαρμογή του TRAIL και casticin. Γονιδιακή σίγηση του ομόλογου πρωτεΐνης που δεσμεύεται με CCAAT /ενισχυτή πρωτεΐνη (CHOP) και προεπεξεργασία με salubrinal, ένας αναστολέας στρες ενδοπλασματικό δίκτυο (ER), εξασθενημένο έκφραση casticin επαγόμενη υποδοχέα DR5, και απόπτωση και παραγωγή ROS. Casticin μειωτικά τα επίπεδα έκφρασης των πρωτεϊνών κυτταρικής επιβίωσης cFLIP, Bcl-2, ΧΙΑΡ, και survivin. Επιπλέον, casticin που προκαλείται επίσης τις εκφράσεις της πρωτείνης DR5 σε άλλα γαστρικά καρκινικά κύτταρα (SGC-7901 και MGC-803).

Συμπέρασμα /Σημασία

Casticin ενισχύει TRAIL επαγόμενη απόπτωση μέσω της ρύθμιση προς τα κάτω των πρωτεϊνών κυτταρική επιβίωση και την προς τα πάνω ρύθμιση των υποδοχέων DR5 μέσω δράσεων για την ROS-ER στρες-CHOP οδού

Παράθεση:. Zhou Υ, Tian L, Long L, Quan Μ, Liu F, Cao J (2013) Casticin ενισχύει TRAIL απόπτωση των κυττάρων του καρκίνου του γαστρικού μέσω Ενδοπλασμικό Δίκτυο άγχος. PLoS ONE 8 (3): e58855. doi: 10.1371 /journal.pone.0058855

Επιμέλεια: Kaustubh Ντάτα του Πανεπιστημίου της Νεμπράσκα Ιατρικό Κέντρο, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 11 Ιουνίου του 2012? Αποδεκτές: 8η Φεβρουαρίου του 2013? Δημοσιεύθηκε: 11 Μαρτίου 2013

Copyright: © 2013 Zhou et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από το Πρόγραμμα της NSFC (αριθμός 30760248), του έργου της Επιστημονικής Έρευνας της επαρχίας Χουνάν, το Προεδρείο της Διοίκησης της Παραδοσιακής Κινέζικης Ιατρικής (αριθμός 2010081), το έργο της Επιστημονικής Έρευνας της επαρχίας Χουνάν, Παιδαγωγικό Τμήμα Δημοτικής Εκπαίδευσης (αριθμός 10C0975), Major Στοιχείο έργο της Επιστημονικής Έρευνας της επαρχίας Χουνάν το Υπουργείο Παιδείας (αριθμός 09A054) και το έργο της Επιστημονικής Έρευνας της Changsha Πόλη Γραφείο Επιστήμης και Τεχνολογίας (αριθμός K1104060-31). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Fructus Viticis

(

Manjingzi

είναι το κινεζικό όνομα) και συγκεκριμένα τα φρούτα του

Vitex trifolia L.

(οικογένεια

Verbenaceae

) ότι είναι μια παραδοσιακή κινεζική ιατρική χρησιμοποιείται ως αντιφλεγμονώδης παράγοντας. Casticin είναι ένα από τα δραστικά συστατικά που προέρχονται από

Fructus Viticis

[1]. Πολλές μελέτες έχουν αποδείξει ότι casticin ασκεί αντι-καρκινογόνο δράση στο μητρικό [2], του τραχήλου της μήτρας [3], του προστάτη [4], του πνεύμονα και του παχέος εντέρου [5], [6], καθώς και στο γαστρικό καρκίνο [7]

in vitro

. Έχει επίσης αναφερθεί ότι casticin αναστέλλει την ανάπτυξη των ανθρώπινων κυττάρων μυελογενούς λευχαιμίας [8] και προκαλεί το θάνατο των κυττάρων λευχαιμίας με την επαγωγή της απόπτωσης είτε ή μιτωτική καταστροφή [9].

Πρόσφατα, προηγούμενη δουλειά από εργαστήριο μας έδειξαν ότι η επίδραση της casticin στην απόπτωση των κυττάρων του ανθρώπινου ηπατοκυτταρικού καρκινώματος εμπλέκεται στο μονοπάτι DR5 ανεξάρτητη από την κατάσταση της ρ53 [10]. Έχει τεκμηριωθεί ότι η σύνδεση CCAAT /ενισχυτή πρωτεΐνη ομόλογη πρωτεΐνη (CHOP), επίσης γνωστή ως αναστολή της ανάπτυξης και της γονιδιακής βλάβης του DNA 153 (GADD153), ρυθμίζει άμεσα την έκφραση του DR5 μέσα από μια θέση δέσμευσης CHOP στην 5-πλευρική περιοχή του γονιδίου DR5 [11], [12]. Εμείς, και άλλοι, έχουν αναφέρει ότι ορισμένα φάρμακα, όπως 5, 7-dimethoxyflavone και διμεθυλο-σελεκοξίμπη, επάγουν την έκφραση του DR5 μέσα CHOP εξαρτώμενη διενεργοποίησης του γονιδίου DR5 [13] – [15]. Επιπλέον, διάφορες μελέτες έχουν δείξει μια στενή σχέση μεταξύ ενδοπλασματικό δίκτυο (ER) άγχος και έκφραση DR5. ER στρες επάγεται όταν ξεδιπλώνεται πρωτεΐνες συσσωρεύονται στον αυλό ER [16]. Φαίνεται ότι η απάντηση αυτή μπορεί να ενεργοποιήσει συγκεκριμένες αποπτωτικά μονοπάτια για την εξάλειψη σοβαρά κατεστραμμένα κύτταρα, στα οποία δεν μπορούν να επιλυθούν τα ελαττώματα πρωτεΐνης αναδίπλωση [17], [18]. Διάφοροι διεγέρτες στρες ER, όπως MG132 [12], η τουνικαμυκίνη [19] και θαψιγαργίνη [20], έχουν με συνέπεια έχει αποδειχθεί ότι επάγει την έκφραση του DR5 σε κυτταρικές επιφάνειες. Αν και οι μοριακοί μηχανισμοί για έκφραση πρωτεΐνης DR5 με επαγωγείς στρες ER μπορεί να ποικίλλει με ερεθίσματα και κυτταρικούς τύπους, το ER στρες παράγοντα μεταγραφής που επάγεται, CHOP, έχει παράσχει ένα σύνδεσμο μεταξύ ER στρες και DR5. Ωστόσο, αν casticin επάγει έκφραση του DR5 στα γαστρικά καρκινικά κύτταρα και, εάν ναι, η φύση του μοριακού μηχανισμού που εμπλέκονται είναι άγνωστος.

Μια πρόσφατη μελέτη έδειξε ότι η αποτελεσματική νέκρωσης όγκων παράγοντας-α σχετίζονται με συνδέτη που επάγει απόπτωση ( TRAIL) -με βάση τη συνδυαστική θεραπεία μπορεί να επιτευχθεί με προς τα πάνω ρύθμιση έκφρασης DR4 και DR5, και στόχευση άμεσα μιτοχόνδρια των καρκινικών κυττάρων να διεγείρουν απόπτωση που επάγει ιδιότητές τους [21]. Η ικανότητα των μιτοχονδρίων να μεσολαβούν απόπτωση ρυθμίζεται στενά από τα μέλη της οικογένειας Bcl-2 υπεροικογένεια [22]. Καταστολή αντι-αποπτωτική έκφραση πρωτεΐνης, με αντιπληροφοριακά RNA ή siRNA, έχει αποδειχθεί ότι ευαισθητοποιεί τα καρκινικά κύτταρα να TRAIL [23]. Ως αποτέλεσμα, οι παράγοντες που ρυθμίζουν προς τα κάτω, όπως αντι-αποπτωτικών πρωτεϊνών όπως survivin, κυψελοειδή FADD-όπως ιντερλευκίνης-1β του μετατρεπτικού ενζύμου ανασταλτική πρωτεΐνη (cFLIP), Bcl-2, και το Χ-συνδεδεμένη αναστολέας της πρωτεΐνης απόπτωσης (ΧΙΑΡ) μπορούν ενδεχομένως να ευαισθητοποιήσει τον καρκίνο κύτταρα στα αποπτωτικά αποτελέσματα του TRAIL [23], [24].

στην παρούσα μελέτη, ως εκ τούτου, εστιάσαμε στη διερεύνηση κατά πόσον casticin ενισχύει TRAIL επαγόμενη καρκινικών κυττάρων απόπτωση, και αν ναι, πώς casticin ενισχύει αυτή αποτέλεσμα. Βρήκαμε ότι casticin ενισχύεται TRAIL απόπτωση που επάγεται με προς τα πάνω ρύθμιση DR5 μέσω του ROS-ER στρες-CHOP οδού και με προς τα κάτω ρύθμιση της έκφρασης των πρωτεϊνών κυτταρικής επιβίωσης Bcl-2, ΧΙΑΡ, cFLIP, και survivin σε γαστρικά καρκινικά κύτταρα.

Αποτελέσματα

υποτοξικά συγκεντρώσεις casticin ενισχύει επιλεκτικά TRAIL-επαγόμενης κυτταροτοξικότητας σε γαστρικό καρκίνο κύτταρα

Η κυτταροτοξικότητα του casticin και TRAIL, μόνο του ή σε συνδυασμό, εξετάστηκε σε ανθρώπινο γαστρικό γραμμές καρκίνου BGC- 823, SGC-7901 και MGC-803, όπως προσδιορίζεται με τη δοκιμασία ΜΤΤ. Casticin και TRAIL μόνη προκάλεσε κυτταροτοξικότητα των γαστρικών καρκινικών κυττάρων, σε συγκέντρωση-εξαρτώμενο τρόπο (Σχήματα 1Α και Β). Ελαφρά κυτταροτοξικότητα (& lt? 20%) παρατηρήθηκε σε χαμηλότερη συγκέντρωση του casticin (1,0 μmol /l, Σχήμα 1Α). Θεραπεία του γαστρικού καρκίνου κυττάρων με 25-50 ng /ml TRAIL για 24 ώρες επαγόμενη περιορισμένη κυτταροτοξικότητα (& lt? 20%). Ωστόσο, συν-θεραπεία του γαστρικού καρκίνου κυττάρων με casticin (1,0 μmol /l) και TRAIL (25 ng /ml ή 50 ng /ml) αύξησε σημαντικά τα κυτταροτοξικά αποτελέσματα σε σύγκριση με τη θεραπεία με casticin ή TRAIL μόνο του (Σχήμα 1 C).

Επιδράσεις της casticin (Α) και TRAIL (Β) μόνο, ή μια θεραπεία συνδυασμού casticin και TRAIL (C) στην κυτταροτοξικότητα του BGC-823, SGC-7901, και MGC-803 κύτταρα (μέση ± SD,

n

= 3).

*

P & lt? 0,05

εναντίον θεραπεία με DMSO?

#

P & lt? 0,05

vs. θεραπεία με 1 μmol /l casticin ή 25 ng /ml TRAIL ή θεραπεία με TRAIL στην ίδια συγκέντρωση και μόνο. Επιπτώσεις της casticin και TRAIL μόνη της, ή μια θεραπεία συνδυασμού casticin και TRAIL στην κυτταροτοξικότητα της GES-1 κύτταρα (D).

Η

Επειδή διαπιστώσαμε ότι η συνδυασμένη θεραπεία με casticin και TRAIL έντονα επαγόμενη κυτταροτοξικότητα σε γαστρικό καρκίνο κύτταρα, εξετάσαμε έπειτα την επίδραση της αγωγής επί της αθανατοποιημένα ανθρώπινα γαστρικό βλεννογόνο επιθηλιακή κυτταρική σειρά GES-1. Είναι ενδιαφέρον ότι, ο συνδυασμός των casticin και TRAIL δεν προκάλεσε κυτταροτοξικότητα σε GES-1 κύτταρα (Σχήμα 1 D) .Οι αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι υποτοξικά συγκεντρώσεις casticin επιλεκτικά ευαισθητοποιημένα ανθρώπινα γαστρικά καρκινικά κύτταρα να TRAIL-επαγόμενης κυτταροτοξικότητας.

συγκεντρώσεις υποτοξικά της casticin ευαισθητοποιήσει γαστρικά καρκινικά κύτταρα να TRAIL επαγόμενη απόπτωση

για να διερευνηθεί κατά πόσο η απόπτωση εμπλέκονται στην αναστολή της κυτταρικής ανάπτυξης μετά την ταυτόχρονη θεραπεία με casticin και TRAIL, εξετάσαμε πρώτα απόπτωση χρησιμοποιώντας ανάλυση κυτταρομετρίας ροής για την ανίχνευση αυξήσεις υποδιπλοειδή κυττάρων πληθυσμούς. Τα αποτελέσματα αποκάλυψαν ότι ο ρυθμός της απόπτωσης ήταν 3,78 ± 1,3%, 4,69 ± 1,7% και 37,1 ± 4,9% (μέσος όρος ± SD,

n

= 3) για casticin (1 μmol /l), TRAIL (50 ng /ml) και casticin συν TRAIL, αντίστοιχα (Σχήμα 2Α). Ο πληθυσμός υπο-G1 του BGC-823 κύτταρα αυξήθηκε σημαντικά σε 12 ώρες, και κορυφώθηκε 24 ώρες μετά την προεπεξεργασία με 1 μmol /l casticin ακολουθούμενα από 50 ng /ml TRAIL (Σχήμα 2Β). Στην συνέχεια προσδιορίσαμε τα επίπεδα θραύσμα ιστόνης /DNA του γαστρικού καρκίνου κυτταρικών γραμμών BGC-823, SGC-7901 και MGC-803 χρησιμοποιώντας την κυτταρική απόπτωση κιτ ανίχνευσης ELISA. Σχήμα 2C απεικονίζει ότι η συνδυασμένη θεραπεία casticin και TRAIL επαγόμενη συνεργικά κατακερματισμό της ιστόνης /DNA. Τα επίπεδα θραύσμα ιστόνης /DNA του BGC-823 ήταν αυξημένα μετά από 12 ώρες και 24 ώρες κορυφώθηκε μετά την συν-κατεργασία με casticin (1 μmol /l) και TRAIL (50 ng /ml, Σχήμα 2D).

Casticin ενισχυμένη TRAIL επαγόμενη αποπτωτικό κυτταρικό θάνατο μετράται χρησιμοποιώντας ανάλυση κυτταρομετρίας ροής (Α και Β), την κυτταρική απόπτωση κιτ ανίχνευσης ELISA (Γ και Δ) σε BGC-823, SGC-7901, και τα κύτταρα MGC-803 (μέση ± SD, η = 3 ).

*

P & lt? 0,05

εναντίον θεραπεία με DMSO ή 0 h?

#

P & lt? 0,05

vs. θεραπεία με 1 μmol /l casticin ή TRAIL στην ίδια συγκέντρωση και μόνο για 6 ώρες. Οι ενζυματικές δραστηριότητες της κασπάσης-3 (Ε), -8 (F), και -9 (G) προσδιορίστηκαν με επώαση των 20 μg της συνολικής πρωτεΐνης με 200 μΜ χρωμογόνο υπόστρωμα (Ac-DEVD-

p

NA ή Ac-IETD-

σ

NA ή Ac-LEHD-

σ

NA) σε 100 μl ρυθμιστικού δοκιμασίας για 2 ώρες στους 37 ° C. Η απελευθέρωση της χρωμοφόρου

σ

νιτροανιλίδιο (

σ

NA) παρακολουθήθηκε με φασματοφωτόμετρο (405 nm). Τα δεδομένα που δεικνύονται είναι ο μέσος όρος ± Τ.Α (n = 3). *

σ

& lt? 0,01 έναντι 0,1% DMSO? #

σ

& lt? 0,05 έναντι της θεραπείας με casticin και TRAIL μόνο. Η διάσπαση της PARP εξετάστηκε από κηλίδωση western ανάλυση BGC-823 και SGC-7901 κύτταρα (H).

Η

επόμενο εξέτασε κατά πόσον κασπασών πραγματικά ενεργοποιούνται κατά την επαγωγή της αποπτωτικό κυτταρικό θάνατο από τη συνδυασμένη θεραπεία με casticin και TRAIL στα γαστρικά καρκινικά κύτταρα. Θεραπεία του γαστρικού καρκινικά κύτταρα με μόνη για 24 ώρες 1 μmol /L casticin δεν προκάλεσε καμία δραστηριότητα της κασπάσης-3, -8 και -9. Σε απάντηση στην TRAIL (50 ng /mL), οι δραστηριότητες της κασπάσης-3, -8 και -9 δεν άλλαξε. Ωστόσο, η συνδυασμένη θεραπεία της casticin και TRAIL επαγόμενη την ενεργοποίηση της κασπάσης-3 και -8 και ελαφρώς ενεργοποιημένη κασπάση-9 (Εικόνα 2 Ε, F και G).

Επίσης εξετάσαμε το οποίο κασπάσης ενεργοποιήθηκε ειδικά σε απόκριση σε casticin και θεραπεία TRAIL που χρησιμοποιούν αναστολείς κασπάσης, συμπεριλαμβανομένου του αναστολέα παν-κασπάσης-ίτηκ, τον αναστολέα της κασπάσης-3 zDEVD-fmk, κασπάσης-8 αναστολέα zIETD-fmk και κασπάσης-9 αναστολέα zLEHD-fmk. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 2Ε,-ίτηκ, zDEVD-fmk και zIETD-fmk μειώθηκε σημαντικά το επίπεδο της δραστηριότητας της κασπάσης-3 που προκαλείται από τη συνδυασμένη θεραπεία της casticin και TRAIL, αλλά zLEHD-fmk είχε μικρή επίδραση. -ίτηκ και zIETD-fmk μπορεί ταυτόχρονα να εμποδίσει εντελώς κασπάσης-8 ενεργοποίηση, και zDEVD-fmk μπλοκαριστεί μερικώς την ενεργοποίηση της κασπάσης-8? Ωστόσο, zLEHD-fmk είχε επηρεάσει λίγο την κατάσταση ενεργοποίησης της κασπάσης-8 (Σχήμα 2F). Αντίστοιχα, βρήκαμε ότι κασπάσης-9 ελαφρώς ενεργοποιούνται σε κύτταρα επεξεργασμένα με casticin και TRAIL αλλά όχι σε κύτταρα που έλαβαν θεραπεία με casticin και TRAIL παρουσία z-IETD-fmk,-ίτηκ και zLEHD-fmk (Σχήμα 2G). Συλλογικά, αυτά τα αποτελέσματα προτείνουν ότι casticin με την προσθήκη του TRAIL επάγει κασπάσης-8 ενεργοποίηση ανοδικά ενεργοποίηση της κασπάσης-9 [10].

Τελικά διερευνηθεί κατά πόσον θα μπορούσε να ενισχύσει casticin TRAIL-επαγόμενη διάσπαση PARP και διαπίστωσε ότι casticin ενισχυμένη TRAIL επαγόμενη αύξηση της διάσπασης της ΡΑΚΡ σε BGC-823 και SGC-7901 κύτταρα (Σχήμα 2Η). Αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν έντονα ότι μια υποτοξικά συγκέντρωση casticin ενισχύει TRAIL-επαγώμενη απόπτωση των γαστρικών καρκινικών κυττάρων.

Casticin επάγει την έκφραση του DR5 στα γαστρικά καρκινικά κύτταρα

απόπτωση κυττάρων ηπατοκυτταρικού καρκινώματος που επάγεται από casticin ενεπλάκη στην DR5 αυξορρύθμιση [10]. Ως εκ τούτου, κατεργασία BGC-823 κυττάρων με casticin για 24 ώρες και στη συνέχεια χρησιμοποιείται ανάλυση κηλίδος western για να εξετάσει τα κύτταρα για την έκφραση του υποδοχέα TRAIL. Casticin αυξημένη έκφραση του DR5 σε εξαρτώμενο από τη συγκέντρωση τρόπο, αλλά δεν είχε καμία επίδραση στην έκφραση DR4 ούτε DcR1 ή DcR2 επαγωγή (Σχήμα 3Α). Η επαγωγή της έκφρασης DR5 με casticin συνέβη σε 6 ώρες και κορυφώθηκε σε 24 ώρες (Σχήμα 3Β). Αυτά τα ευρήματα υποδηλώνουν ότι DR5 αυξορρύθμιση είναι υποψήφια μηχανισμός μέσω του οποίου casticin ενισχύει τα αποπτωτικά αποτελέσματα του TRAIL σε BGC-823 κύτταρα.

Επιδράσεις της casticin στο επίπεδο της έκφρασης του υποδοχέα TRAIL προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας κηλίδα western (Α και Β) και οι κυτταρικές επιφανειακές DRs με ανάλυση κυτταρομετρίας ροής (C και D) σε BGC-823 κύτταρα. Επιδράσεις της casticin σχετικά με τα επίπεδα των επιπέδων της πρωτεΐνης DR5 σε SGC-7901, MGC-803 και GES-1 κύτταρα χρησιμοποιώντας την ανάλυση Western Blot (Ε).

Η

Για να καθοριστεί αν η DR στην επιφάνεια των κυττάρων ήταν που εμπλέκονται στην επαγωγή της απόπτωσης με casticin, το κύτταρο-επιφανειακή έκφραση του DR5 και DR4 παρατηρήθηκε χρησιμοποιώντας κυτταρομετρία ροής. Μετά από έκθεση των κυττάρων σε casticin (1,0 μmol /l), το επίπεδο του DR5 στην κυτταρική επιφάνεια αυξήθηκε (Σχήμα 3C). Ωστόσο, casticin δεν επηρέασε το επίπεδο της έκφρασης DR4 (Σχήμα 3D). Συλλογικά, αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι casticin ρυθμίζει προς τα πάνω την έκφραση του DR5 στην κυτταρική επιφάνεια.

Είτε αυξορρύθμιση του DR5 με casticin είναι ειδικό για BGC-823 κύτταρα ή επίσης συμβαίνει σε άλλες κυτταρικές γραμμές γαστρικού καρκίνου, ερευνήθηκε επίσης. Casticin επαγόμενη έκφραση του DR5 σε καρκίνο του στομάχου SGC-7901 και κυτταρικές σειρές MGC-803, αλλά δεν έχουν προφανείς επιπτώσεις για την έκφρασή του σε αθανατοποίηση γαστρικό βλεννογόνο κυτταρική γραμμή GES-1 (Σχήμα 3Ε). Μαζί, αυτά τα ευρήματα υποδηλώνουν ότι η προς τα πάνω ρύθμιση του DR5 με casticin δεν είναι ειδική για έναν συγκεκριμένο τύπο γαστρικού καρκίνου των κυττάρων.

DR5 την επαγωγή με casticin απαιτείται για την ενίσχυση του TRAIL επαγόμενη απόπτωση σε BGC-823 κύτταρα

για τον προσδιορισμό του ρόλου των υποδοχέων DR5 στην ενίσχυση της TRAIL απόπτωση που επάγεται από casticin, χρησιμοποιήσαμε siRNA ειδικό για DR5 να ρυθμίζουν προς τα κάτω την έκφρασή του. Η επιμόλυνση των κυττάρων με siRNA για DR5 αλλά όχι με τα siRNA ελέγχου μειώνεται casticin επαγόμενη έκφραση του DR5.

Για να εξεταστεί αν DR5 αναρρύθμιση περιλαμβάνει casticin ενισχυμένη TRAIL επαγόμενη γαστρική κυτταρική απόπτωση, ανάλυση κυτταρομετρίας ροής χρησιμοποιήθηκε για να εξεταστεί αν καταστολή της έκφρασης DR5 με siRNA θα μπορούσε να εξασθενήσει την επίδραση της casticin επί TRAIL-επαγώμενη απόπτωση. Το Σχήμα 4Β δείχνει ότι η επίδραση του casticin επί TRAIL επαγόμενη απόπτωση αποτελεσματικά μειώθηκε σε κύτταρα επιμολυσμένα με DR5 siRNA, ενώ τα κύτταρα επιμολυσμένα με siRNA ελέγχου ήταν ανεπηρέαστα. Λαμβανόμενα μαζί, αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι η επαγωγή του DR5 είναι κρίσιμη για την ευαισθητοποίηση των κυττάρων όγκου με τα αποτελέσματα της casticin σε TRAIL-επαγώμενη απόπτωση.

Δράση του siRNA για DR5, σχετικά με τις επιδράσεις των επιπέδων έκφρασης DR5 casticin επαγόμενη (Α) χρησιμοποιώντας ανάλυση western blot και διαμεσολαβείται από TRAIL απόπτωση (Β).

*

P & lt? 0,05

εναντίον θεραπεία με DMSO?

#

P & lt?. 0.05

έναντι της θεραπείας με 1 μmol /l casticin συν 50 ng /ml TRAIL σε έλεγχο και scRNA επιμολυσμένα κύτταρα

Η

Casticin που προκαλείται από DR5 αυξητική ρύθμιση είναι διαμεσολαβείται μέσω της επαγωγής της CHOP στην BGC-823 κύτταρα

CHOP μεσολάβηση προς τα πάνω ρύθμιση της DR5 έχει αποδειχθεί [11] – [15]? Ως εκ τούτου, έχουμε την επόμενη διερευνηθεί πώς αυτό παράγοντα μεταγραφής μπορεί να εμπλέκεται σε casticin επαγόμενη DR5 αυξητική ρύθμιση. Το Σχήμα 5Α δείχνει ότι η επαγόμενη έκφραση casticin CHOP, η οποία συνέβη παράλληλα με την αύξηση της έκφρασης του DR5.

Επιδράσεις της siRNA για CHOP σχετικά με τη δράση του casticin επαγόμενης DR5 και CHOP έκφραση (Α και Β) με τη χρήση western blot ανάλυση και TRAIL-μεσολαβούμενη απόπτωση (C) σε BGC-823 κύτταρα (μέση ± SD,

n

= 3).

*

P & lt? 0,05

εναντίον θεραπεία με DMSO?

#

P & lt?. 0.05

έναντι της θεραπείας με 1 μmol /l casticin συν 50 ng /ml TRAIL σε έλεγχο και scRNA επιμολυσμένα κύτταρα

Η

Για να δοκιμάσετε το ρόλο του CHOP σε casticin που προκαλείται προς τα πάνω ρύθμιση του DR, χρησιμοποιήθηκε γονιδιακή σίγηση του CHOP από siRNA. Η επιμόλυνση με CHOP siRNA κατέστειλε σημαντικά casticin επαγόμενη DR5 αυξητική ρύθμιση (Σχήμα 5Β), ενώ casticin ρυθμίζεται προς τα πάνω την έκφραση του DR5 σε μη επιμολυσμένα και ελέγχου επιμολυσμένα (κωδικοποιημένο RNA) των κυττάρων.

επόμενο χρησιμοποιηθεί ανάλυση κυτταρομετρίας ροής για την εξετάζει αν η καταστολή της CHOP με siRNA εξασθένισε τις ευαισθητοποίηση του casticin επί TRAIL-επαγώμενη απόπτωση. Η επιμόλυνση με CHOP siRNA μείωσε σημαντικά τα αποτελέσματα (από 37,1 ± 5,3% έως 13,5 ± 1,3%, μέση ± SD,

n

= 3) σχετικά με casticin συν TRAIL-επαγώμενη απόπτωση (Σχήμα 5C), ενώ η θεραπεία με έλεγχο siRNA δεν είχε καμία επίδραση (Σχήμα 5C). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι CHOP εμπλέκεται στην προς τα πάνω ρύθμιση DR5 και συμβάλλει στην επίδραση ευαισθητοποίησης του casticin επί TRAIL επαγόμενη απόπτωση σε πειραματικό μοντέλο μας.

Casticin επάγεται ενδοπλασματικό δίκτυο (ER) στρες στα γαστρικά καρκινικά κύτταρα

είναι γνωστό ότι επάγει ER πρωτεϊνών δεικτών ER στρες (όπως GRP78 και φωσφο-eIF2α), η οποία ρυθμίζει προς τα πάνω την έκφραση του CHOP [12], [19], [20]. Στην παρούσα μελέτη, εξετάστηκε η επίδραση του casticin στην έκφραση πρωτεϊνών δεικτών ER στρες. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι casticin πράγματι να προκαλέσει όλα αυτά δείκτες ER στρες στην BGC-823 κύτταρα (Εικόνα 6Α). Για να καθοριστεί εάν ER στρες ενέχεται στην ενίσχυση της casticin στην απόπτωση που επάγεται από TRAIL, salubrinal, ένας αναστολέας της ER στρες, χρησιμοποιήθηκε. Salubrinal (50 μmol /l) σημαντικά προστατευμένη BGC 823-κύτταρα από την απόπτωση που προκαλείται από την συν-εφαρμογή του casticin και TRAIL (Σχήμα 6Β).

Επιδράσεις της casticin στα επίπεδα έκφρασης πρωτεϊνών που σχετίζονται ER στρες (Α ) χρησιμοποιώντας ανάλυση western blot και διαμεσολαβείται από TRAIL απόπτωση (Β) σε BGC-823 κύτταρα (μέση ± SD,

n

= 3).

*

P & lt? 0,05

εναντίον θεραπεία με DMSO?

#

P & lt? 0,05

εναντίον της θεραπείας με. 1 μmol /l casticin συν 50 ng /ml TRAIL σε κύτταρα προεπεξεργασμένα με 50 μmol /l salubrinal. Επιδράσεις της τουνικαμυκίνης επί των επιπέδων έκφρασης πρωτεϊνών που σχετίζονται ER στρες (C) χρησιμοποιώντας ανάλυση western blot και διαμεσολαβείται από TRAIL απόπτωση (D) σε BGC-823 κύτταρα (μέση ± SD,

n

= 3).

*

P & lt? 0,05

εναντίον θεραπεία με DMSO?

#

P & lt?. 0.05

εναντίον της θεραπείας με τη

Επίσης, δοκιμάζονται εάν η θεραπεία της BGC-823 κυττάρων με το ενδοπλασματικό δίκτυο (ER) επαγωγέα του στρες, η τουνικαμυκίνη [25 ], θα μπορούσε να αυξήσει τα επίπεδα της πρωτεΐνης DR5 και την ενίσχυση TRAIL-επαγόμενης αποπτωτικό κυτταρικό θάνατο. Βρήκαμε ότι τουνικαμυκίνη (3,0 μmol /L) χρονικά εξαρτώμενο αύξησε τα επίπεδα πρωτεΐνης του DR5, ρ-eIF2α, GRP78 και CHOP, σε BGC-823 κύτταρα (Σχήμα 6C). Ταυτόχρονης θεραπείας με τουνικαμυκίνη (3,0 μmol /L) και TRAIL (50 ng /mL) αύξησε σημαντικά το ποσοστό των κυττάρων σε υπο-G1 φάση, σε σύγκριση με τουνικαμυκίνη ή TRAIL μόνο του (Σχήμα 6D). Αυτά τα αποτελέσματα υποστηρίζουν την υπόθεση ότι ER στρες συμμετέχει στην ενισχυτική δράση της casticin στην απόπτωση που επάγεται από TRAIL.

Casticin που προκαλείται από DR5 προς τα πάνω ρύθμιση και την απόπτωση ενίσχυση είναι ROS που εξαρτώνται σε BGC-823 κύτταρα

Δείξαμε πρόσφατα ότι το 5, 7-dimethoxyflavone ενισχύει επιλεκτικά TRAIL απόπτωση που επάγεται από διεγερμένα ROS ER-στρες ενεργοποιεί CHOP μεσολάβηση DR5 αυξητική ρύθμιση σε κύτταρα ηπατοκυτταρικού καρκινώματος [15]. έτσι ερευνήσαμε αν casticin επάγει την παραγωγή ROS. 2 ‘7’-διχλωρο διοξεικό (DFCH-DA) χρησιμοποιήθηκε ως ανιχνευτής για να μετρήσει κάθε αύξηση στα επίπεδα ROS στα κύτταρα. Πειράματα πορεία Χρόνος αποκάλυψε ότι τα επίπεδα των ROS αυξήθηκαν αρχικά στο

1 ώρα, έφθασε σε αιχμή σε 3 ώρες και παρέμεινε για μέχρι και 24 ώρες μετά την θεραπεία με 1,0 μmol /l casticin (Σχήμα 7Α). Casticin που προκαλείται από την παραγωγή ROS σε συγκέντρωση-εξαρτώμενο τρόπο (Σχήμα 7Β).

Επιδράσεις της casticin στην παραγωγή ROS (Α και Β) και τις επιδράσεις της NAC στην casticin που προκαλείται από DR5 και CHOP ρύθμιση προς τα άνω (C) χρησιμοποιώντας τη δυτική ανάλυση κηλίδας και διαμεσολαβείται από TRAIL απόπτωση (D) σε BGC-823 κύτταρα (μέση ± SD,

n

= 3).

*

P & lt? 0,05

εναντίον θεραπεία με DMSO?

#

P & lt?. 0.05

έναντι της θεραπείας με 1 μmol /l casticin συν 50 ng /ml TRAIL σε κύτταρα προ-θεραπεία με NAC

Η

Για να αποκρυπτογραφήσει τη σχέση μεταξύ παραγωγής ROS και CHOP-εξαρτώμενη επαγωγή DR5, εξετάσαμε αν ROS ρυθμίζει casticin επαγόμενη υποδοχείς TRAIL και CHOP σε παρουσία και απουσία του

N

-acetylcysteine ​​(NAC), η οποία είναι μια διάταξη δέσμευσης των ελευθέρων ριζών οξυγόνου. Βρήκαμε ότι προκατεργασία των κυττάρων με NAC μείωσε την επαγόμενη casticin αυξητική ρύθμιση του DR5 και CHOP έκφρασης (Σχήμα 7C).

Στη συνέχεια, διερευνήσαμε κατά πόσον ROS παίζει ένα ρόλο στην προκαλούμενη από casticin TRAIL ενίσχυση. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 7D, casticin σημαντικά ενισχυμένη TRAIL επαγόμενη απόπτωση σε BGC-823 κύτταρα, και προεπεξεργασία των κυττάρων με NAC αξιοσημείωτα μειωμένη casticin επαγόμενη αποπτωτικό ενίσχυση κυτταρικού θανάτου από 52,4 ± 3,3% σε 8,2 ± 0,8%, (μέση ± SD, n = 3) υποδηλώνοντας ότι ROS διαδραματίζει έναν κρίσιμο ρόλο στη διαμεσολάβηση των επιπτώσεων της casticin σε TRAIL-επαγώμενη απόπτωση.

Casticin ρυθμίζει αρνητικά την έκφραση διαφόρων πρωτεϊνών κυτταρικής επιβίωσης σε BGC-823 κύτταρα

έχει αναφερθεί ότι πολλές αντι-αποπτωτικών πρωτεϊνών, όπως survivin, cFLIP, ΧΙΑΡ, Bcl-2 και Bcl-xL μπορούν να ρυθμίσουν TRAIL-επαγώμενη απόπτωση [25], [26]. Στην παρούσα μελέτη, ερευνήσαμε αν ορισμένους συγκεκριμένους πρωτεΐνες επιβίωση των κυττάρων που εμπλέκονται στην ενισχυτική δράση της casticin στην απόπτωση που επάγεται από TRAIL. BGC-823 κύτταρα εκτέθηκαν σε διαφορετικές συγκεντρώσεις casticin για 24 ώρες και στη συνέχεια εξετάστηκαν για Bcl-XL, Bcl-2, survivin, ΧΙΑΡ, cFLIP, CIAP-1 (κυτταρική αναστολέας της πρωτεΐνης απόπτωσης 1) και TRAF1 (TNF υποδοχέα που σχετίζεται παράγοντα 1) έκφραση. Casticin ανέστειλε Bcl-XL, Bcl-2, survivin, έκφραση cFLIP και ΧΙΑΡ (Σχήμα 8Α). Οι επιδράσεις του casticin στην έκφραση της Bcl-xL, Bcl-2, survivin, ΧΙΑΡ και cFLIP ήταν δραματικά, ενώ η προς τα κάτω ρύθμιση του CIAP-1 δεν ήταν πολύ έντονη. Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι μειορύθμιση των πρωτεϊνών κυτταρικής επιβίωσης είναι ένας από τους μηχανισμούς οδήγηση του ενισχυτική επίδραση casticin στην απόπτωση που επάγεται από TRAIL.

BGC-823 κύτταρα κατεργάστηκαν με casticin στις υποδεικνυόμενες συγκεντρώσεις για 24 ώρες. Η ανάλυση στυπώματος Western χρησιμοποιήθηκε για να προσδιοριστούν τα επίπεδα έκφρασης των πρωτεϊνών αντι-απόπτωση (cFLIP, Bcl-2, ΧΙΑΡ, CIAP-1 και survivin), και πρωτεΐνες απόπτωση (Βαχ και Bid). β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης.

Η

επόμενο εξετάστηκε κατά πόσον θα μπορούσε να casticin ρυθμίζουν την έκφραση των προ-αποπτωτικών πρωτεϊνών. Βρήκαμε ότι casticin δραματικά ρυθμίζεται προς τα πάνω την έκφραση Bax σε συγκέντρωση-εξαρτώμενο τρόπο (Σχήμα 8Β). Casticin αύξησε επίσης διάσπαση της προσφοράς σε εξαρτώμενο από τη συγκέντρωση τρόπο, όπως φαίνεται από τη μείωση της έκφρασης της πρωτεΐνης Bid (Σχήμα 8Β). Τα ευρήματα αυτά υποδηλώνουν ότι casticin μπορούν να ενεργοποιήσουν ταυτόχρονα με την εγγενή μιτοχόνδρια με τη μεσολάβηση της οδού και την εξωγενή DR-επαγόμενη οδού, όπως αποδεικνύεται από την περικομμένη προ-αποπτωτική πρωτεΐνη Bid.

Συζήτηση

Στην παρούσα έρευνα, ερευνήσαμε την ικανότητα των casticin, ένα polymethoxyflavone προέρχεται από

Fructus Viticis

, για να διαμορφώνει σηματοδότηση TRAIL στα γαστρικά καρκινικά κύτταρα, και τα ευρήματά μας υποδηλώνουν ότι casticin ενισχύει TRAIL επαγόμενη απόπτωση σε καρκίνο του στομάχου BGC-823, SGC-7901 και MGC-803 κύτταρα με (1) την επαγωγή της εκφράσεως DR5 και (2) downregulatin πρωτεϊνών κυτταρικής επιβίωσης που συνδέεται με την αντίσταση των καρκινικών κυττάρων να TRAIL. Casticin αυξορρύθμιση του DR5 φαίνεται ότι διαμεσολαβείται μέσω της ενεργοποίησης του μονοπατιού ROS-ER στρες-CHOP (Σχήμα 9).

Casticin προωθεί αρχικά παραγωγή ROS και ενεργοποιεί ER στρες, τότε επάγει DR5 αναρρύθμιση μέσω της ενεργοποίησης του CHOP οποία τότε αυξάνει TRAIL επαγόμενη ενεργοποίηση του DR5 που προκαλείται και οδούς απόπτωσης μιτοχόνδρια μεσολάβηση. Ταυτόχρονα, casticin διευκολύνει TRAIL-επαγόμενης αποπτωτικό κυτταρικό θάνατο με αναστολή της πρωτεΐνης αντι-απόπτωση (cFLIP, Bcl-2, survivin και ΧΙΑΡ) έκφραση και ενεργοποίηση των πρωτεϊνών προ-απόπτωσης.

Η

Έχουμε αποδείξει ότι casticin επαγόμενη έκφραση του DR5 στα γαστρικά καρκινικά κύτταρα. Τα αποτελέσματα αυτά είναι σε συμφωνία με αυτά των προηγούμενων εργασιών μας [10], αναφέραμε ότι η αποπτωτική επίδραση της casticin σε κύτταρα ανθρώπινου ηπατοκυτταρικού καρκινώματος εμπλέκεται στην DR5 αυξορρύθμιση αλλά δεν αντιμετωπιστούν τα ερωτήματα για το κατά πόσον casticin μπορεί να ενισχύσει TRAIL-επαγώμενη απόπτωση ή ο μηχανισμός της ευαισθητοποίησης. Εδώ, έχουμε δείξει ότι DR5 αναρρύθμιση είναι κρίσιμη για την ευαισθητοποίηση των κυττάρων σε TRAIL, όπως γονιδιακή σίγηση του υποδοχέα (DR5) εξασθενημένου TRAIL-επαγώμενη απόπτωση. Έτσι, DR5 πάνω ρύθμιση μπορεί να ευαισθητοποιήσει κύτταρα σε TRAIL επαγόμενη απόπτωση [27]. Πολυάριθμες μηχανισμοί έχουν περιγραφεί για την επαγωγή της DR, συμπεριλαμβανομένης της παραγωγής ROS, επαγωγή ρ53 και NF-κΒ, DDIT3 (DNA βλάβη που επάγεται μεταγραφή 3), υπεροξεισωμάτων ενεργοποίηση του υποδοχέα-γ και ΜΑΡΚ που ενεργοποιείται από πολλαπλασιαστή [27], [28] . Στην παρούσα μελέτη, βρέθηκε ότι επάγεται casticin CHOP και ότι η γονιδιακή σίγηση του CHOP με siRNA μπλοκάρει την επίδραση της casticin στην επαγωγή DRs και TRAIL επαγόμενη απόπτωση. Τα ευρήματά μας είναι παρόμοια με εκείνα άλλων μελετών που έδειξαν ότι CHOP δεσμεύεται στον προαγωγό DR5 και απορυθμίζει την έκφραση αυτή του υποδοχέα [12], [29].

Είναι γνωστό ότι CHOP είναι ένα τυπικό ER στρες ρυθμιζόμενων πρωτεΐνη που εμπλέκεται στην ER στρες απόπτωση [11]. Η ανακάλυψη μας της επαγωγής CHOP από casticin δείχνει ότι casticin μπορεί να προκαλέσει ER στρες και να αυξήσει τα επίπεδα έκφρασης των GRP78 και eIF2α, οι οποίες είναι πρόσθετες πρωτεΐνες συσσωρευτεί ή να αυξηθεί κατά τη διάρκεια της ER στρες [17]. Ως εκ τούτου, φαίνεται πιθανό ότι casticin προκαλεί ER στρες. Salubrinal είναι ένας εκλεκτικός αναστολέας της ER στρες απόπτωση [30]. Η παρουσία του salubrinal προφανώς προστατεύονται γαστρικά καρκινικά κύτταρα από casticin συν TRAIL-επαγώμενη απόπτωση. Έτσι, φαίνεται ότι casticin επάγει απόπτωση ενίσχυση με τη συμμετοχή μηχανισμών ER στρες.

Βρήκαμε ότι ίσως το πιο σημαντικό ανάντη σήμα που συνδέεται με casticin διαμόρφωση των υποδοχέων TRAIL είναι ROS. Τα αποτελέσματά μας αποδεικνύουν αναμφισβήτητα ότι το casticin προκάλεσε την παραγωγή των ROS, και ότι απόσβεση του ROS από την αντιοξειδωτική

N

-acetylcysteine ​​εξασθένησε την επίδραση της casticin στην επαγωγή CHOP και DR5. Βρήκαμε ότι σβέσης ROS εξασθενημένα επίσης casticin ενίσχυση του TRAIL-επαγώμενη απόπτωση. Τα ευρήματά μας συμφωνούν με εκείνα που αναφέρθηκαν σε προηγούμενες μελέτες με τη χρήση σουλφοραφάνη, zerumbone και celastrol για την επαγωγή DR5. Αποτελέσματα των σημερινών και προηγούμενες μελέτες δείχνουν έντονα ότι ROS παίζει σημαντικό ρόλο στην διαμόρφωση του TRAIL υποδοχέα DR5 [31], [32]. Τα αποτελέσματά μας είναι σε συμφωνία με αυτά της προηγούμενης εργασίας, αναφέραμε ότι casticin προκάλεσε συσσώρευση κυττάρων υπο-G1 και αυξημένη παραγωγή ROS σε κυτταρικές σειρές SiHa HeLa, CaSki και, αλλά όχι σε PBMCs [33]. Όμως δείξαμε ότι casticin μείωσε την περιεκτικότητα σε GSH (

P & lt? 0,05

), αλλά δεν επηρέασε το επίπεδο της ενδοκυτταρικής ROS στα PLC /G2 κύτταρα PRF /5 και ηπατίτιδα [10]. Μια πιθανή εξήγηση για τη σύγκρουση εμφανή στοιχεία είναι ότι υπάρχουν διαφορές στην μορφή που ρυθμίζει τις δράσεις σε διαφορετικούς τύπους κυττάρων.

Επίσης, διαπίστωσε ότι το άλλο μηχανισμό της ευαισθητοποίησης περιλαμβάνει τη ρύθμιση των αντι-αποπτωτικών πρωτεϊνών. Casticin μειωτικά τις elevels έκφραση του Bcl-2, Bcl-xL, ΧΙΑΡ και survivin, τα οποία έχουν συνδεθεί με ανθεκτικότητα των κυττάρων όγκου σε TRAIL [34], [35]. Πράγματι, ρύθμιση προς τα κάτω του ΧΙΑΡ, Bcl-2 και την έκφραση Bcl-xL έχει αποδειχθεί ότι ευαισθητοποιεί τα καρκινικά κύτταρα να TRAIL [36], [37]. Wang

et al.

(2005) [8] έδειξε ότι casticin μειώθηκε Bcl-2 επίπεδα έκφρασης και ρυθμίζεται προς τα κάτω της αναλογίας της έκφρασης /Bax Bcl-2 σε κύτταρα Κ562. Τα αποτελέσματά μας είναι επίσης σε συμφωνία με προηγούμενες μελέτες που έδειξαν ότι ένα εκχύλισμα αιθανόλης των αποξηραμένα ώριμα φρούτα του

λυγαριά

μείωσε το επίπεδο της Bcl-2, Bcl-xL και προσφορά πρωτεϊνών και αυξημένη στο επίπεδο του Βαχ πρωτεΐνης [7]. Η έκθεση Chen

et al.

(2011) πρόσφατα έδειξαν ότι Bax ρυθμίζεται αυξητικά, ενώ τα επίπεδα έκφρασης των Bcl-xL και ΧΙΑΡ ήταν μειωτικά από casticin [33].

Kobayakawa et al. ανέφεραν ότι casticin σημαντικά ανέστειλε την ανάπτυξη των κυττάρων ΚΒ, αλλά δεν ανέστειλε τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων Α431, το οποίο είναι παρόμοιο με τις κανονικές κυτταρικές γραμμές 3Τ3 Swiss Albino και TIG-103 [38]. Στην παρούσα μελέτη, δείξαμε ότι casticin επάγεται ειδικώς απόπτωση σε ανθρώπινα γαστρικά καρκινικά κύτταρα αλλά όχι σε κύτταρα GES-1, αν και ο μηχανισμός της επιλεκτικής επαγωγής απόπτωσης δεν έχει προσδιοριστεί. Τα ευρήματά μας υποδεικνύουν ότι casticin μπορεί να είναι ένας ειδικός παράγοντας κατά του όγκου με χαμηλή τοξικότητα.

Συνοπτικά, τα αποτελέσματά μας αποδεικνύουν ότι casticin συμβάλλει στην ευαισθησία των καρκινικών κυττάρων σε TRAIL με τη χρήση πολλαπλών μηχανισμών. Casticin προωθεί αρχικά γενιά ROS και ενεργοποιεί ER στρες στη συνέχεια προκαλεί DR5 ρύθμιση προς τα πάνω μέσω της ενεργοποίησης του CHOP οποία, κατά συνέπεια, ενισχύει TRAIL επαγόμενη ενεργοποίηση της DR5 που προκαλείται και τα μονοπάτια απόπτωσης μιτοχόνδρια μεσολάβηση. Ταυτόχρονα, casticin διευκολύνει TRAIL-επαγόμενης αποπτωτικό κυτταρικό θάνατο με αναστολή της έκφρασης πρωτεΐνης αντι-απόπτωση και ενεργοποίηση των πρωτεϊνών προ-απόπτωσης. Μελλοντικές έρευνες θα πρέπει να έχουν ως στόχο να αξιοποιηθεί πλήρως το δυναμικό του συνδυασμού θεραπείας casticin και TRAIL για τη θεραπεία ασθενών με καρκίνο του στομάχου.