Αφηρημένο

Παρά τη χρόνια φλεγμονή, ψωριασικές βλάβες σχεδόν ποτέ να εξελιχθούν σε καρκίνο του δέρματος. Η ανώμαλη λειτουργία του γονιδίου CCHCR1 (συσπειρωμένης σπείρας α-ελικοειδή Rod πρωτεΐνη 1, HCR) εντός του τόπου PSORS1 μπορεί να συμβάλλει στην εμφάνιση της ψωρίασης. Όπως CCHCR1 εκφράζεται σε ορισμένους καρκίνους και ρυθμίζει κερατινοκυττάρων (KC) πολλαπλασιασμό σε ένα διαγονιδιακό μοντέλο ποντικού, μελετήσαμε τη σχέση της με πολλαπλασιασμό σε δερματικά καρκινικά πλακωδών κυττάρων (SCC) κυτταρικές σειρές με συστοιχίες έκφρασης και ποσοτική RT-PCR και σε όγκους του δέρματος με ανοσοϊστοχημεία . CCHCR1 πρωτεΐνη ανιχνεύθηκε στο ωθώντας σύνορα της SCC και ευθυγραμμίζουν βασικοκυτταρικό καρκίνωμα νησιά. Διαφορετικό από ψωρίαση, Ki67 είχε ένα παρόμοιο μοτίβο έκφρασης όπως CCHCR1. Η πιο έντονη χρώση CCHCR1 σημειώθηκαν σε περιοχές θετικά για τον υποδοχέα του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGFR). Η έκφραση του mRNA CCHCR1 ρυθμίζεται αυξητικά 30-80% στις γραμμές SCC σε σύγκριση με την κανονική KCs και συσχετίζεται θετικά με την έκφραση Κί67. Οι πιο επιθετική και επεμβατική καρκινικών κυτταρικών σειρών (RT3, FaDu) εξέφρασε CCHCR1 mRNA λιγότερο από τους μη-ογκογόνο HaCaT κύτταρα. Επιπλέον, οι υποστηρικτές του όγκου οκαδαϊκό οξύ και μεναδιόνη μειωτικά CCHCR1 mRNA. Καταλήγουμε στο συμπέρασμα ότι τόσο στην περίπτωση της ψωρίασης και τα πρώτα στάδια της μεταμόρφωσης KC, CCHCR1 μπορεί να λειτουργήσει ως αρνητικός ρυθμιστής του πολλαπλασιασμού, αλλά πέρα ​​από ένα ορισμένο σημείο στην ογκογένεση δεν μπορεί να ελέγξει αυτό το φαινόμενο πλέον

Παράθεση:. Suomela S, Elomaa O, Skoog Τ, Ala-aho R, Jeskanen L, Pärssinen J, et al. (2009) CCHCR1 ρυθμίζεται προς τα πάνω στον καρκίνο του δέρματος και των συνδεδεμένων με έκφραση EGFR. PLoS ONE 4 (6): e6030. doi: 10.1371 /journal.pone.0006030

Επιμέλεια: Benjamin Rich, του Χάρβαρντ Ινστιτούτο Ιατρικής, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 8 Δεκεμβρίου 2008? Αποδεκτές: 21, Μαΐου, 2009? Δημοσιεύθηκε: 24 Ιούνη του 2009

Copyright: © 2009 Suomela et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε από την Ακαδημία της Φινλανδίας (US-Κ. δεν χορηγούν. 115590, SS δεν χορηγούν. 122236, RA και VM.K. δεν χορηγούν. 114409, LL δεν χορηγούν. 108828), Ίδρυμα Juselius Sigrid (US-KJK, VM .Κ.), Το Πανεπιστήμιο του Ελσίνκι Νοσοκομείο ταμείο έρευνας (TYH 7113), Το Ίδρυμα φινλανδική Cancer Research (VM.K.) και το πρόγραμμα της Ευρωπαϊκής Ένωσης πλαίσιο 6 (LSHC-CT-2003 με 503.297) (RA και VM.K.) , Turku University Κεντρικό Νοσοκομείο EVO επιχορήγηση (13336 του έργου), και της Φινλανδίας Δερματολογικά Κοινωνία (SS), η Φινλανδία, το Συμβούλιο Έρευνας της Σουηδίας (ΗΠΑ-Κ., JK) και σουηδικό Ίδρυμα Καρκίνου (ΗΠΑ-Κ., JK), και Finsen- Welander Ίδρυμα (TS), Σουηδία. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Έχουμε προηγουμένως δείξει ότι το γονίδιο CCHCR1 εντός της μείζονος επιδεκτικότητα ψωρίαση locus PSORS1 μπορεί να λειτουργεί ως αρνητικός ρυθμιστής του πολλαπλασιασμού των KC [1] – [3]. Το γονίδιο CCHCR1 κωδικοποιεί μια πρωτεΐνη οξύ 782 αμινοξέων (GenBank AY029160) [4], που εκφράζεται σε διαφορετικά αλλοιωμένο δέρμα με ψωρίαση σε σύγκριση με το κανονικό δέρμα: στην πληγή CCHCR1 εντοπίζει στην βασική και υπερβασικά KCs όπου η επιδερμίδα είναι στο λεπτότερο του. Η χρώση για τον δείκτη πολλαπλασιασμού των κυττάρων Κί67 εμφανίζει αντίστροφη συσχέτιση να CCHCR1 στην ψωρίαση αλλοιώσεις, συνεπής με ένα ρόλο σε KC πολλαπλασιασμό [1], [4]. Επιπλέον, το μοντέλο ποντικού μας υπερεκφράζουν το αλληλόμορφο κίνδυνο ψωρίασης CCHCR1 * WWCC υπό κερατίνη 14 υποκινητή δείχνει διαταραγμένη ικανότητα πολλαπλασιασμού των KCs [3], υποδηλώνοντας λιγότερο δραστική πρωτεΐνη ενεργοποιητή 1 (ΑΡ-1) με τη μεσολάβηση σηματοδότηση στα ποντίκια κινδύνου. ΑΡ-1 με τη μεσολάβηση σηματοδότηση ρυθμίζει γονίδια που σχετίζονται με τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό, περιλαμβανομένων των EGFR είναι επίσης γνωστός ως ErbB1 [5].

Ψωρίαση βλάβες σχεδόν ποτέ να εξελιχθούν σε καρκίνο του δέρματος, παρά τη χρόνια φλεγμονή που συχνά είναι ένας παράγοντας κινδύνου για καρκίνο [6] , [7]. Τόσο η ψωρίαση και ο καρκίνος του δέρματος χαρακτηρίζονται από ανεξέλεγκτο πολλαπλασιασμό KC εκτός από αγγειογένεση και φλεγμονή. Ο κυτταρικός πολλαπλασιασμός και η διαφοροποίηση μπορεί να διαμεσολαβείται μέσω σηματοδότηση EGFR [8]. Πολλαπλές συνδέτες EGFR (ΤΟΡ-α, αμφιρεγουλίνη, δέσμευσης ηπαρίνης παράγοντα EGF αυξητικός) υπερεκφράζεται σε ψωρίαση αλλοιώσεις, και η διαγονιδιακή έκφραση του ανθρώπινου γονιδίου αμφιρεγουλίνη επάγει ψωρίαση φαινότυπο [8]. σηματοδότηση EGFR έχει επίσης εμπλακεί στην παθογένεση του καρκίνου του δέρματος μη-μελανώματος [8] – [10]. Είναι ενδιαφέρον ότι, τόσο η βελτίωση και η έξαρση της ψωρίασης έχουν αναφερθεί σε σχέση με τη θεραπεία με EGFR τυροσίνης κινάσης του καρκίνου του αναστολέα [11], [12].

Σε προηγούμενες μελέτες μας, η έκφραση CCHCR1 ανιχνεύθηκε σε μη πολλαπλασιαζόμενα κύτταρα του μαστού και του πνεύμονα αδενοκαρκινώματα: ο δείκτης υπερπολλαπλασιασμό Ki67 ανιχνεύθηκε σε παρακείμενες, αλλά όχι στα ίδια κύτταρα σαν CCHCR1 [1]. Επιπλέον, EGF επάνω ρυθμισμένη έκφραση πρωτεΐνης CCHCR1 σε κύτταρα HaCaT [2]. Για να κατανοηθεί περαιτέρω η λειτουργία της CCHCR1 στο μετασχηματισμό KC και τον καρκίνο του δέρματος, μελετήσαμε την έκφραση της σε προ-κακοήθη και κακοήθη πλακώδες βλαβών και καρκίνωμα βασικών κυττάρων (BCC). Όπως EGFR και κατάντη στόχος κυκλίνη-D1 της συμμετέχουν στην ανάπτυξη καρκίνου και επηρεάζεται πιθανώς από τις υποθετικές οδούς CCHCR1, εξετάσαμε την έκφρασή τους σε σύγκριση με CCHCR1. Η σχέση της CCHCR1 στην KC υπερπλασία τονίστηκε από χρώση γειτονικά δείγματα με το αντίσωμα Κί67. Μελετήσαμε επίσης τη συσχέτιση του επιπέδου έκφρασης CCHCR1 με εκείνες του Κί67 και EGFR σε καλλιέργειες κυττάρων με διαφορετικές πολλαπλασιασμού και της εισβολής χαρακτηριστικά. επίπεδα CCHCR1 mRNA προσδιορίστηκαν σε HaCaT καλλιέργειες επωάζονται με ποικίλες βιοδραστικών παραγόντων με σημασία στην προώθηση του όγκου, το οξειδωτικό στρες ή ψωριασική φλεγμονή. Τέλος, τα επίπεδα έκφρασης του CCHCR1, Κί67, και EGFR mRNAs προσδιορίστηκαν σε ένα ολιγονουκλεοτίδιο μικροσυστοιχιών του δερματικού SCC κυτταρικές γραμμές και κανονικά ανθρώπινα επιδερμικά KC κυτταρικές σειρές. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι CCHCR1 εκφράζεται σε μη-μελάνωμα καρκίνος του δέρματος σε συνδυασμό με EGFR και Κί67 in vivo. Ωστόσο, σε καλλιέργεια κυττάρων τα πιο atypic κύτταρα εκφράζουν CCHCR1 λιγότερο από αθάνατα κύτταρα HaCaT, και την προώθηση των όγκων και προκάλεσε τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων HaCaT συσχετίζεται με μειωμένη έκφραση CCHCR1.

Αποτελέσματα

CCHCR1 εκφράζεται σε SCC σε συνδυασμό με EGFR, κυκλίνη D1, και Ki67

για να μελετηθεί ο ρόλος των CCHCR1 στον πολλαπλασιασμό KC και μετασχηματισμού, ερευνήσαμε την έκφραση της πρωτεΐνης CCHCR1 με ανοσοϊστοχημεία σε διαφορετικούς όγκους του δέρματος σε σχέση με το EGFR, κατάντη cyclin- στόχο της D1, και ο δείκτης υπερπολλαπλασιασμό Κί67. CCHCR1 θετικά κύτταρα ήταν παρούσα σε 20/22 κλώνοι ενός κυττάρου που μελετήθηκαν. Πολλαπλασιαστικές καρκινικά κύτταρα στο μεταναστευτικό μέτωπο εκφράζεται CCHCR1 (Σχήμα 1Α, D, G, S1? Σχήμα 2Α, C, E), ενώ τα συνεκτικά καρκινικά κύτταρα στο μέσο ήταν CCHCR1 αρνητικά. Διηθητική απόφυση ήταν χαρακτηριστική της CCHCR1 θετικών περιοχών, ωστόσο, οι atypic κύτταρα ήταν ετερογενής για έκφραση CCHCR1 (Σχήμα 2Α). έκφραση CCHCR1 σε SCC συνδέθηκε με θετική χρώση EGFR σε όλα τα δείγματα (Σχήμα 1Α, C, D, F). Οι CCHCR1 θετικό καρκίνο φωλιές στις χαμηλότερες χόριο ήταν κυκλίνη-D1 θετικό, καθώς και (Σχήμα 2C-F). Κύτταρα θετικά για το δείκτη υπερπολλαπλασιασμό Ki67 βρίσκονταν ως επί το πλείστον στις ίδιες περιοχές όπως CCHCR1 θετικά κύτταρα (Εικόνα 1Β, Ε? 2Β). Ωστόσο, στον βαθμό III κλώνοι ενός κυττάρου Ki67 ήταν περισσότερο σε αφθονία και σε συνεκτικές περιοχές του όγκου που στερούνται έκφρασης CCHCR1 (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Για σύγκριση, ένα κανονικό δείγμα δέρματος εμφανίζεται με βασική KCs θετικό για CCHCR1 και EGFR, και διάσπαρτα θετικότητα για Κί67 (Σχήμα 1 Η-J).

Διαδοχικές τομές του βαθμού Ι SCC (A-C) και το κανονικό δέρμα (H-J) έχουν ανοσοχρώση με αντισώματα έναντι CCHCR1, Ki67, και EGFR. Οι μεγαλύτερες μεγεθύνσεις Α-C παρουσιάζεται επίσης (D-F, αντίστοιχα). χρώση CCHCR1 (G) σε ένα παρακείμενο τμήμα για χρώση EGFR (F). CCHCR1 πρωτεΐνη (Α) εκφράζεται σε πολλαπλασιαστική καρκινικά κύτταρα στο μεταναστευτικό μέτωπο της δερματικής καρκινικών κυττάρων νησιά του SCC σε συνδυασμό με τον δείκτη υπερπολλαπλασιασμό Ki67 (Β) και EGFR (C). Τα θετικά κύτταρα Ki67 (Ε) εκφράζουν CCHCR1 (D). χρώση EGFR (F) συνδέεται με χρώση CCHCR1 (G) σε γειτονικά τμήματα. Φυσιολογικά δείγματα δέρματος εκφράζουν CCHCR1 (H) και EGFR (J) στα βασικά KCs, ενώ η έκφραση Ki67 (Ι) είναι πιο αραιή. Τα βέλη επισημαίνουν ενδεικτικά θέσεις.

Κλίμακα μπαρ:

(Α-Γ) 50 μm? (D-G) 12,5 μm? (H-J) 25 μm.

Η

Διαδοχικές τομές του βαθμού III (Α, Β) και βαθμού II (C, D) SCC βάφτηκαν με τα υποδεικνυόμενα αντισώματα. Μεγαλύτερη μεγέθυνση του άλλου SCC βαθμού II (Ε, F). Στην τάξη III SCC (Α, Β), η έκφραση του CCHCR1 είναι ετερογενής: πολλοί, αλλά όχι όλα, τα καρκινικά κύτταρα εκφράζουν τόσο CCHCR1 (Α) και Ki67 (Β). Τα ένθετα δείχνουν μικρότερη μεγέθυνση της ίδιας περιοχής, αστερίσκος επισημαίνει ένα καρκινικό κύτταρο με αρνητικές CCHCR1 και της έκφρασης Κί67. Στην τάξη II SCC (C, D), διηθητική απόφυση είναι CCHCR1 θετικό (C), και οι φωλιές CCHCR1 θετικού καρκίνου είναι επίσης κυκλίνη-D1 θετικό (D). Δίπλα τμήματα του βαθμού II SCC (E, F) δείχνουν ένωση CCHCR1 και κυκλίνη-D1 θετικά κύτταρα. Τα βέλη δείχνουν αντίστοιχες περιοχές.

Κλίμακα μπαρ:

(Α, Β, Ε, ΣΤ) 12.5 μm? (C, D, ένθετα) 50 μm.

Η

CCHCR1 εκφράζεται από τα καρκινικά κύτταρα palisading στο BCC

Σε BCC, CCHCR1 εκφράστηκε κυρίως στο κυτταρόπλασμα των καρκινικών κυττάρων palisading των σαφώς καθορισμένων νησιά καρκινώματος (Σχήμα 3Α, C). Τρία από τα 15 δείγματα BCC ήταν σκληρωτική, αλλά CCHCR1 δεν ήταν πιο άφθονο σε αυτούς (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα). CCHCR1 εκφράστηκε σε κοκκώδη μορφή σε επτά δείγματα (Σχήμα 3Α, C) συν-εντόπιση με EGFR (Εικόνα 3Β, D). Όλα τα πέντε δείγματα που μελετήθηκαν ήταν η κυκλίνη-D1 θετικός: ωστόσο, η έκφραση της δεν ήταν τόσο ισχυρή όσο εκείνη της CCHCR1 και πιο συγκεντρωμένη στο κέντρο των φωλιών όγκου (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Κυτταροπλασματική έκφραση CCHCR1 στη βασική KCs στο κανονικό δέρμα αναζητούν δίπλα στο χώρο της BCC κυμαινόταν μεταξύ των δειγμάτων. έκφραση EGFR ήταν υψηλότερη στην βασική KCs του φυσιολογικού δέρματος από ό, τι palisading κύτταρα στα περισσότερα από τα δείγματα.

Διαδοχικές τομές των BCC (Α, Β) βάφτηκαν με αντισώματα έναντι CCHCR1 και EGFR. Υψηλότερες μεγεθύνσεις των Α και Β επίσης δείξει (C, D, αντίστοιχα). CCHCR1 πρωτεΐνη εκφράζεται σε ένα κοκκώδες μοτίβο στο κυτταρόπλασμα των καρκινικών palisading κυττάρων ενός οζώδης BCC (A, C). έκφραση CCHCR1 (C) συν-εντοπίζεται με χρώση EGFR (D). CCHCR1 και EGFR εκφράζονται επίσης στην βασική KCs (Α, Β). Τα βέλη δείχνουν αντίστοιχες θέσεις.

Κλίμακα μπαρ:

(Α, Β) 50 μm? (C, D) 25 μm.

Η

Για να μελετηθεί κατά πόσο CCHCR1 και EGFR συν-Localize επίσης σε κυτταρικό επίπεδο, παροδικά επιμολυσμένα κύτταρα HaCaT με κατασκεύασμα CCHCR1 και οπτικοποιήθηκε CCHCR1 και έκφραση EGFR με ανοσοφθορισμό. έκφραση CCHCR1 ανιχνεύθηκε ως ένα δαχτυλίδι-όπως, κυτταροπλασματική μοτίβο, ενώ η έκφραση EGFR ήταν περισσότερο ή λιγότερο συνδεδεμένη με μεμβράνη και δεν συν-εντοπίζεται με χρώση CCHCR1 (Εικόνα 4Α-Δ). Τα επιμολυσμένα και μη επιμολυσμένα κύτταρα έδειξαν παρόμοια έκφραση EGFR, γεγονός που υποδηλώνει ότι CCHCR1 δεν επηρεάζει την έκφραση EGFR ή εντοπισμού (Σχήμα 4Β).

CCHCR1 επιμολυσμένα κύτταρα HaCaT (Α-Δ) χρωματίστηκαν με αντισώματα έναντι CCHCR1 (Α) και EGFR (Β). Επικάλυψη των Α και Β φαίνεται στο (C), και χρώση ϋΑΡΙ δείχνει πυρήνες σε (D). Κύτταρα που εκφράζουν CCHCR1 (πράσινο) ήταν επίσης θετικά για EGFR (κόκκινο), αλλά οι δύο πρωτεΐνες δεν είχαν συν-Localize (C). CCHCR1 θετικό (βέλος) και αρνητικό (κεφαλή βέλους) κύτταρα παρουσιάζουν παρόμοια έκφραση του EGFR που υποδηλώνει ότι CCHCR1 υπερέκφραση δεν επηρεάζει EGFR έκφραση (Β).

Η

έκφραση CCHCR1 στο κερατοακανθώματα συνδέεται με λεμφοκυτταρική διήθηση

Κερατοακάνθωμα (ΚΑ), ιστολογικά ένα κακόηθες νεόπλασμα, αλλά συμπεριφέρεται με καλοήθη τρόπο, συχνά θεωρείται «πρόδρομος» βλάβη σε SCC. ΒΔ έδειξε γενικά θετική χρώση CCHCR1 ειδικά σε KCs των συνόρων ωθεί σε περιοχές με εμφανή λεμφοκυττάρων διήθηση που περιβάλλει τον όγκο (Σχήμα 5Α, C). EGFR-θετικά κύτταρα ήταν παρόντα στις ίδιες περιοχές που μελετήθηκαν στα δείγματα (Σχήμα 5Β, D). Στην θετική περιοχή CCHCR1, έκφραση Κί67 επίσης συναντώνται σε όλα τα τρία δείγματα, αλλά με λιγότερη ένταση από ό, τι κλώνοι ενός κυττάρου (Σχήμα 5Ε, F).

Διαδοχικές τομές των ΚΑ (Α, Β, Ε, F) ήταν χρωματίζονται με τα αντισώματα έναντι CCHCR1 και EGFR (Α, Β) ή κατά CCHCR1 και Ki67 (E, F). Οι μεγαλύτερες μεγεθύνσεις Α και Β που δείχνονται (C, D, αντίστοιχα). Η ώθηση των συνόρων της ΚΑ είναι CCHCR1 θετικό (Α) συν-εντόπιση με EGFR (Β). Ένα άλλο δείγμα παρουσιάζεται (Ε) με εμφανή διήθηση λεμφοκυττάρων και κυτταροπλασματική έκφραση CCHCR1 των πιέζει σύνορα κύτταρα. Πιο σπάνια έκφραση Ki67 (F) ορίζεται στις ίδιες περιοχές, αλλά όχι κατ ‘ανάγκη με τα ίδια κύτταρα. Τα βέλη δείχνουν αντίστοιχες θέσεις.

Κλίμακα μπαρ:

(Α, Β, Ε, ΣΤ) 50 μm? (C, D) 12,5 μm.

Η

νόσο του Bowen και ακτινικές κερατώσεις εκφράζουν CCHCR1 σε σπογγίωση και φλεγμονώδεις περιοχές

σπογγίωση, φλεγμονώδης διήθηση, και τον πολλαπλασιασμό των τριχοειδών συνδέθηκαν με έκφραση CCHCR1 σε 11 /21 νόσος του Bowen (SCC in situ) δείγματα (Σχήμα 6Α, Β). Περιοχές που στερούνται φλεγμονή και spongiosis εξέφρασε λιγότερο CCHCR1 (Σχήμα 6C), ούτε ήταν CCHCR1 έκφραση που σχετίζονται με KC ατυπία. Στη νόσο του Bowen, κυτταροπλασματική χρώση CCHCR1 αντιμετωπίστηκε basally και suprabasally σε δερματικές θηλές (Σχήμα 6Β) που μοιάζει με CCHCR1 χρώση ψωριασικό αλλοιωμένο δέρμα (Σχήμα 6Ε), ειδικά σε υπερτροφική δείγματα. Επίσης EGFR έκφραση σε νόσο του Bowen έμοιαζε με το πρότυπο έκφρασης του CCHCR1 (Σχήμα 6D). Στην ψωρίαση, η έκφραση CCHCR1 ήταν πιο έντονη σε περιοχές με λιγότερο Κί67 θετικό KCs (Σχήμα 6F). Οκτώ από 11 μελετηθεί ακτινική κεράτωση (ΑΚ) δείγματα είχαν CCHCR1 θετικό βασική ή υπερβασικά KCs (Σχήμα 6G). CCHCR1 θετικά κύτταρα συχνά συναντώνται σε περιοχές με spongiosis ή φλεγμονή.

Τμήματα της νόσου του Bowen (Α-Δ) ανοσοχρώση με αντισώματα έναντι CCHCR1 και EGFR όπως υποδεικνύεται. Διαδοχικές τομές της ψωρίασης (E, F) βάφτηκαν με αντισώματα για CCHCR1 και Κί67. δείγματα ΑΚ (G, H) βάφτηκαν με CCHCR1 αντισώματα. Στη νόσο του Bowen (Α, Β), σπογγίωση, φλεγμονώδης διήθηση, και τον πολλαπλασιασμό των τριχοειδών σχετίζονται με έκφραση CCHCR1 ενώ οι περιοχές που στερούνται φλεγμονή και σπογγίωση εκφράζουν λιγότερο CCHCR1 (C). έκφραση EGFR (D) στην βασική και υπερβασικά KCs της δερματικής θηλές συνεργάτες με έκφραση CCHCR1 (Β). Επίσης, στην ψωρίαση (Ε), CCHCR1 εκφράζεται βασικά είτε suprabasally (βέλη) που υπέρκειται της δερματικής θηλές (DP), ενώ πλεγματικές ραβδώσεις (RR) που προεξέχουν εντός του δέρματος είναι σχεδόν αρνητικά για CCHCR1. Αντίθετα, η έκφραση Ki67 (F) εντοπίζεται σε περιοχές που είναι σχεδόν αρνητικά για CCHCR1 κύτταρα (βέλη). δείγματα ΑΚ (G) εκφράζουν CCHCR1 basally και suprabasally σε συνεργασία με KC ετερογένεια, spongiosis ή φλεγμονή αλλά παρακείμενες περιοχές με λιγότερη φλεγμονή ή spongiosis (H) λεκέ μόνο αχνά.

Κλίμακα μπαρ:

(Α-Δ) 50 μm? (Ε, F) 25 μm? (G, H) 12.5 μm.

Η

Η έκφραση της CCHCR1 ρυθμίζεται προς τα πάνω και συσχετίζεται με την έκφραση Κί67 στο δερματικό κυτταρικές σειρές SCC

Στη συνέχεια, συγκρίναμε τα προφίλ έκφρασης του mRNA της CCHCR1 , EGFR, Ki67, και κυκλίνη-D1 σε διάφορες δερματικές SCC κυτταρικές γραμμές (πέντε πρωτογενή και τρία μεταστατικά), με εκτέλεση πειραμάτων Affymetrix. Το προφίλ έκφρασης που βασίζεται ολιγονουκλεοτίδιο microarray έδειξε ότι το γονίδιο CCHCR1 εκφράζεται σε SCC κύτταρα (Σχήμα 7Α). επίπεδα σήματος από τα σύνολα ανιχνευτή CCHCR1 ήταν μέχρι και 80% υψηλότερη στους δερματικό SCC κυτταρικές γραμμές (n = 8) σε σχέση με το φυσιολογικό ανθρώπινο επιδερμικό KCs (n = 5), αλλά δεν υπήρχαν σημαντικές διαφορές στα επίπεδα έκφρασης CCHCR1 μεταξύ πρωτογενούς και μεταστατικό SCC γραμμές. Τα επίπεδα έκφρασης στις κυτταρικές σειρές SCC ήταν μεταβλητές, αλλά τα μέσα επίπεδα παρουσίασε μικρή αύξηση (30%? p & gt? 0,05) σε σύγκριση με την κανονική KCs μέσω ποσοτικής πραγματικού χρόνου RT-PCR (TaqMan) (Σχήμα 7C). επίπεδα σήματος από τα σύνολα ανιχνευτή Ki67 ήταν 3-4 φορές υψηλότερη σε κυτταρικές γραμμές SCC από ότι στα φυσιολογικά επιδερμικά KCs (Σχήμα 7Α). Αυτή η παρατήρηση επιβεβαιώθηκε και από TaqMan PCR (Σχήμα 7D). Σημαντικά, τα επίπεδα έκφρασης του CCHCR1 συσχετίζονται με τα επίπεδα του Κί67 στα δεδομένα μικροσυστοιχίας (Σχήμα 7Β). Μια μικρή συσχέτιση (R = 0,46) μεταξύ των επιπέδων CCHCR1 και Ki67 mRNA παρατηρήθηκε στα δεδομένα TaqMan επίσης (Σχήμα 7Ε). Τα επίπεδα έκφρασης του EGFR mRNA στα SCC κυτταρικές γραμμές ήταν μεταξύ 80% και 180% των φυσιολογικών επιπέδων έκφρασης KC ​​σε 4 από τα 8 σετ ανιχνευτή (Σχήμα 7Α). Και τα δύο σύνολα ανιχνευτή κυκλίνη-D1 ήταν παρόντες σε όλες τις κυτταρικές σειρές και οι μέσες στάθμες σήματος ήταν μέχρι και 60% υψηλότερη στις κυτταρικές γραμμές SCC σύγκριση με τα φυσιολογικά KCs. CCHCR1 είχε μια ελαφρά αρνητική συσχέτιση με το επίπεδο έκφρασης του EGFR, αλλά καμία συσχέτιση μεταξύ CCHCR1 και κυκλίνη-D1 ανιχνεύθηκε (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Α) Ki67, EGFR, κυκλίνη D1 και CCHCR1 προφίλ γονιδιακής έκφρασης του πέντε κανονικές επιδερμική οκτώ δερματικού SCC κυτταρικές σειρές (heatmap) KC και. τιμές σήματος των ανιχνευτών συγκρίθηκαν με τις μέσες τιμές σήματος κάθε ανιχνευτή που ορίζεται στο KCs. Ο χρωματισμός βασίζεται στις τιμές log2 της μεταβολής των τιμών σήματος. Τα ρυθμισμένα προς τα πάνω γονίδια που φαίνεται στο κόκκινο και οι κάτω-ρυθμιζόμενα γονίδια που φαίνεται στο πράσινο. Β) Συσχέτιση μεταξύ CCHCR1 και σετ ανιχνευτή Ki67 υπολογίστηκε μεταξύ των τιμών του σήματος ενός CCHCR1 και ένας ανιχνευτής Ki67 που στο HG-U133 Plus 3.0 συστοιχία. συντελεστή συσχέτισης R του Pearson = 0.88. Γ) CCHCR1 και D) Τα επίπεδα έκφρασης Κί67 mRNA στους φυσιολογικούς SCC κυτταρικές γραμμές KCs και δερματικό όπως μετράται με qRT-PCR (TaqMan). Τα επίπεδα έκφρασης του CCHCR1 και Κί67 στις κανονικές κυτταρικές γραμμές KCs και SCC αναλύθηκαν με qRT-PCR και διορθώθηκαν για τα επίπεδα του mRNA β-ακτίνης στα ίδια δείγματα. Ε) Συσχέτιση μεταξύ CCHCR1 και σετ ανιχνευτή Ki67 υπολογίστηκε μεταξύ των τιμών του σήματος των επιπέδων CCHCR1 και Ki67 mRNA. συντελεστή συσχέτισης R του Pearson = 0,46.

Η

οκαδαϊκό οξύ και μεναδιόνη ρυθμίζουν προς τα κάτω την έκφραση CCHCR1 mRNA σε κύτταρα HaCaT

Για να προσδιοριστεί αν διαφορετικές βιοενεργών παραγόντων μεταβάλλει την έκφραση CCHCR1 mRNA, που αντιμετωπίζονται HaCaT κυττάρων καλλιέργειες με υποστηρικτές του όγκου, το οξειδωτικό στρες επαγωγείς, και παράγοντες που εμπλέκονται στην ψωριασική φλεγμονή. Το οκαδαϊκό οξύ (ΟΑ) και menadione, και οι δύο ενώσεις που φαίνονται να προωθήσει όγκους σε βιολογικό περιβάλλον και προκαλούν οξειδωτικό στρες, μειωτικά επίπεδα CCHCR1 mRNA σε κύτταρα HaCaT έως 10 φορές με την αύξηση της δόσης (ΟΑ) και 3-φορές (μεναδιόνη) (Σχήμα 8Α) . επίπεδα EGFR και Ki67 mRNA της ΟΑ και υποβλήθηκε σε επεξεργασία μεναδιόνης κύτταρα HaCaT ρυθμίστηκαν προς τα κάτω, καθώς και (Σχήμα 8Β, C). Μεναδιόνη ή ΟΑ θεραπείες δεν μετέβαλε ουσιαστικά έκφραση του σπιτιού διατήρησης γονίδιο GAPDH σε κύτταρα HaCaT, υποδηλώνοντας ότι αυτοί οι παράγοντες δεν επηρέασαν τη βιωσιμότητα των κυττάρων. Οι υποστηρικτές του όγκου 12-φορβόλης-13-μυριστικό-οξικό (PMA) και σταυροσπορίνη ή του αντι-οιστρογόνο ταμοξιφένη, H

2O

2 παράγει το οξειδωτικό στρες, η λεπτίνη, IL-6 ή σταφυλοκοκκική ενδοτοξίνη Β, ακτιβίνη ή ανισομυκίνης , δεν επηρέασε σημαντικά τα επίπεδα CCHCR1 mRNA (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

CCHCR1 (Α), Ki67 (Β), και EGFR (Γ) τα επίπεδα έκφρασης του mRNA (TaqMan) σε κύτταρα HaCaT μετά την επεξεργασία οι υποκινητές όγκων ΟΑ και μεναδιόνη. CCHCR1 (D), Ki67 (Ε) και mRNA έκφραση EGFR (F) σε HaCaT, Α5, ΙΙ4, RT3, Α431, και FaDu κύτταρα. Τα κύτταρα επεμβατική ΙΙ4 και FaDu και μεταστατικά κύτταρα RT3 εξέφρασαν λιγότερο CCHCR1 (D) και Ki67 (Ε) από ό, τι τα κύτταρα HaCaT και Α5. Α431 κύτταρα (F) εκφράζουν EGFR mRNA σαφώς περισσότερο από άλλες κυτταρικές σειρές. Τα ras-μετασχηματισμένων κλώνων Α5, ΙΙ4 και RT3 και τα κύτταρα FaDu εκφράζουν EGFR λιγότερο από κύτταρα HaCaT. Τα ποσοτικά αποτελέσματα RT-PCR δείχνονται σε σχέση με τα επίπεδα mRNA από τα αντίστοιχα κύτταρα ελέγχου (λαμβάνει την τιμή 1). Τα επίπεδα έκφρασης του CCHCR1, Κί67, και EGFR σε κύτταρα HaCaT ομαλοποιήθηκαν στα επίπεδα GAPDH mRNA στα ίδια δείγματα. * P & lt? 0,05, ** p & lt? 0,01, *** p & lt? 0.001

Η

CCHCR1 ρυθμίζεται προς τα κάτω στις πιο επιθετικές κυτταρικές σειρές όγκων

Για να μελετήσει περαιτέρω το ρόλο της CCHCR1. στο μετασχηματισμό KC, συγκρίναμε την έκφραση CCHCR1 mRNA σε κυτταρικές σειρές με διαφορετικές μεταστατικές και επεμβατική ιδιότητες. Με βάση την ποσοτική TaqMan RT-PCR, τα επίπεδα έκφρασης CCHCR1 και Ki67 ήταν παρόμοια σε αθανατοποιημένα ras-μετασχηματισμένων κυτταρικών σειρών HaCaT και ογκογόνα Α5 (Σχήμα 8D, E). Ωστόσο, με αύξουσα ογκογονικότητα σε ras-μετασχηματισμού, επεμβατική ΙΙ4 και μεταστατικά κύτταρα RT3 εξέφρασαν λιγότερο mRNA CCHCR1, και αυτή η τάση παρατηρήθηκε επίσης με κακοήθη κύτταρα Α431 (Εικόνα 8D). Παρομοίως, κύτταρα FaDu που είναι πιο επεμβατική από HaCaT και τα κύτταρα Α431 [13] εκφράζεται λιγότερο CCHCR1, Ki67, και EGFR (Εικόνα 8D-F). Επίσης Κί67 και έκφραση EGFR μειώθηκε με ras-μετασχηματισμό (Σχήμα 8Ε, F). Είναι ενδιαφέρον ότι, τα κύτταρα Α431 ήταν τα μόνα κύτταρα να εκφράζουν EGFR σημαντικά περισσότερο από τα κύτταρα HaCaT (Σχήμα 8F), Κί67 και CCHCR1 έκφραση υπόλοιπο σε χαμηλότερο επίπεδο (Σχήμα 8D, E).

έκφραση CCHCR1 mRNA ρυθμίζεται προς τα κάτω όταν κερατινοκύτταρα σε μια ταχέως πολλαπλασιαζόμενα κατάσταση

για την μελέτη της έκφρασης CCHCR1 mRNA σε αθάνατη, αλλά μη ογκογόνων HaCaT κύτταρα των διαφόρων πολλαπλασιαστικών στάδια, πραγματοποιήσαμε πειράματα κυτταρικής καλλιέργειας σύμφωνα με τη στρατηγική της Pivarcsi et al. [14]. Στα πειράματά μας, συρρέοντα κύτταρα HaCaT (έλεγχοι) και τα κύτταρα σε συρροή μετά από μια περίοδο λιμοκτονούν 1-wk (κύτταρα αναγκάζονται να ησυχίας) εξέφρασε CCHCR1 περισσότερα από τα κύτταρα HaCaT διεγείρονται για να πολλαπλασιαστούν με την προσθήκη ορού σε μη συρρέουσες υποκαλλιέργειας (Σχήμα 9Α). έκφραση CCHCR1 μειώθηκε ιδιαίτερα κατά τις πρώτες τέσσερις ημέρες. Η κατάσταση πολλαπλασιασμός των κυττάρων (όπως επιβεβαιώθηκε από την έκφραση Ki67 mRNA) συσχετίζεται αρνητικά με την έκφραση CCHCR1 (Σχήμα 9Β): μείωση της έκφρασης CCHCR1 συσχετίστηκε με αύξηση στην έκφραση Κί67. Καθώς τα κύτταρα reattained συρροή, η έκφραση του CCHCR1 αυξήθηκε και πάλι στο αρχικό επίπεδο (Σχήμα 9Α). Ένα από τα τέσσερα πειράματα έγινε χρησιμοποιώντας ακόμα χαμηλότερη αριθμούς κυττάρων. Εδώ δείξαμε μια έντονη πολλαπλασιασμό κατά τη διάρκεια των πρώτων χρονικά σημεία (24 ώρες και 48 ώρες), όπως σχετική έκφραση Κί67 mRNA αυξήθηκε 6 φορές σε σύγκριση με κύτταρα ελέγχου (δύο σύνολα κυττάρων ελέγχου δίνοντας τις δύο τιμές γύρω τιμή 1). Η αρνητική συσχέτιση της έκφρασης CCHCR1 με έκφραση Κί67 ήταν ακόμη πιο βαθιά ως σχετική mRNA CCHCR1 συγχρόνως μειώθηκε σχεδόν στο μηδέν από τις δύο τιμές των κυττάρων ελέγχου γύρω τιμή 1 (Σχήμα 9D). Είναι ενδιαφέρον ότι, τα επίπεδα EGFR mRNA ακολούθησαν το πρότυπο έκφρασης CCHCR1 αντί μοτίβο έκφρασης Κί67 (Σχήμα 9C, E). Αναγκάζοντας κύτταρα HaCaT να διαφοροποιηθούν με μέσο υψηλής ασβέστιο, η έκφραση του CCHCR1 παρέμεινε αμετάβλητη, όπως μετράται με TaqMan PCR (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα), συμφωνώντας με προηγούμενα δεδομένα μας ότι τα επίπεδα CCHCR1 mRNA ήταν μη-μεταβάλλεται σε διαφοροποιημένα κανονική KCs [1]. Ινβολουκρίνης χρησιμοποιήθηκε ως δείκτης διαφοροποίησης για την επιβεβαίωση της κατάστασης διαφοροποίησης των κυττάρων HaCaT κατά την χορήγηση ασβεστίου [15].

Α) σχετική έκφραση του mRNA CCHCR1 (όπως μετράται από TaqMan) σε διαφορετικά χρονικά σημεία (από 24 h 8 δ) μετά την απελευθέρωση των κυττάρων από την πείνα ορό και υψηλή καλλιέργεια πυκνότητας. Έκφραση των CCHCR1 δεν διέφερε μεταξύ των κυττάρων σε συρροή (έλεγχος) και ηρεμίας (πεινασμένο) κύτταρα. Τα κύτταρα ελέγχου που εκφράζεται CCHCR1 2,5 φορές περισσότερο από ό, τι πολλαπλασιαστική HaCaT κύτταρα (24-48 h, 3-4 d). Όπως συρροή ήταν reattained (8 δ), η έκφραση του CCHCR1 αυξήθηκε στο επίπεδο των κυττάρων ελέγχου. Β) Συσχέτιση μεταξύ σχετική CCHCR1 και τα επίπεδα έκφρασης Κί67. Όταν τα επίπεδα έκφρασης του mRNA CCHCR1 συγκρίθηκαν με εκείνες του Κί67, μια αρνητική συσχέτιση παρατηρήθηκε, επιβεβαιώνοντας την πολλαπλασιαστική κατάσταση των κυττάρων HaCaT. έκφραση C) EGFR mRNA συσχετίζεται με την έκφραση CCHCR1 mRNA. Δ) Συσχέτιση μεταξύ CCHCR1 και της έκφρασης Κί67 στο πείραμα με χαμηλότερη πυκνότητα των κυττάρων. Η αρνητική συσχέτιση της έκφρασης CCHCR1 με την έκφραση του Κί67 ήταν ακόμη πιο βαθιά η σχετική mRNA CCHCR1 μειωθεί κοντά στο μηδέν στα δύο κύτταρα ελέγχου. Ε) Συσχέτιση μεταξύ CCHCR1 και την έκφραση του EGFR στο πείραμα με χαμηλότερη πυκνότητα των κυττάρων. Εδώ πάλι, η έκφραση CCHCR1 συσχετίζεται με την έκφραση του EGFR. Τα αποτελέσματα TaqMan PCR δείχνονται σε σχέση με τα επίπεδα mRNA από τα αντίστοιχα κύτταρα ελέγχου λαμβάνει την τιμή 1. Τα επίπεδα έκφρασης του CCHCR1, Κί67, και EGFR σε κύτταρα HaCaT είχαν κανονικοποιημένη σε επίπεδα GAPDH mRNA στα ίδια δείγματα. * P & lt? 0,05, ** p & lt? 0,01, *** p & lt? 0.001

Η

Συζήτηση

Τα αποτελέσματα που παρουσιάζονται εδώ δείχνουν ότι CCHCR1, ένα υποψήφιο γονίδιο για την ψωρίαση, εκφράστηκε. στην πλειονότητα των ΕΕΑΚ BCCs και ΒΔ μελετήθηκαν, γεγονός που υποδηλώνει ότι CCHCR1 μπορεί να έχει ένα ρόλο όχι μόνο στον πολλαπλασιασμό KC, αλλά και στο μετασχηματισμό. έκφραση EGFR συσχετίζεται με την έκφραση CCHCR1, και κυκλίνη D1, μια προς τα κάτω στόχος του EGFR και ένας θετικός ρυθμιστής της προόδου του κυτταρικού κύκλου [16], βρέθηκε επίσης εκφράζονται στις ίδιες περιοχές. Σε κανονική επιδερμίδα, τόσο EGFR και CCHCR1 εκφράζονται basally [4], [8] (Σχήμα 1). Έκφραση του EGFR, «ένας παράγοντας επιβίωσης για τα κύτταρα του όγκου», είναι ακόμη και θεωρείται ότι είναι αναγκαίο να διατηρηθεί KCs σε μία πολλαπλασιαστική κατάσταση [8]. Εμείς υποθέσουμε ότι EGFR μπορεί να ρυθμίζει την έκφραση CCHCR1 όπως έχουμε δείξει πρόσφατα ότι το ΕΤΠ διέγερση απορυθμίζει την έκφραση CCHCR1 πρωτεΐνη [2]. Τα πειράματά μας εδώ με τα επιμολυσμένα κύτταρα HaCaT πρότεινε ότι η υπερέκφραση του CCHCR1 δεν ρυθμίζουν την έκφραση του EGFR.

Σύμφωνα με τα ευρήματά μας, μεταμορφώθηκε KCs έχουν διαφορετικό καθεστώς CCHCR1 σε συσχετισμό με το δείκτη υπερπολλαπλασιασμό κατάσταση Ki67 σε σύγκριση με μη-ογκογόνο KCs. Ξεχωριστά από την καλοήθη υπερπολλαπλασιαστικής διαταραχής ψωρίαση ([1]? Σχήμα 6Ε-F), η έκφραση του δείκτη υπερπολλαπλασιασμού Κί67 καταδείχθηκε εδώ στις ίδιες περιοχές όπως έκφραση CCHCR1 στο μεταναστευτικό μέτωπο του κλώνοι ενός κυττάρου. Έχουμε δείξει προηγουμένως ότι σε μαστού και του πνεύμονα αδενοκαρκινώματα, CCHCR1 θετικά κύτταρα είναι Κί67 αρνητικά [1], αλλά αυτή η ασυμφωνία μπορεί να οφείλεται σε διαφορές μεταξύ αδενοκαρκινώματος και κυττάρων SCC ή οργάνου τοποθεσία του καρκίνου. Η θετική συσχέτιση με CCHCR1 και έκφραση Ki67 σε καρκίνους του δέρματος υποστηρίχθηκε από το προφίλ έκφρασης του δερματικού SCC κυτταρικές γραμμές. Ωστόσο, υπήρξε αρνητική συσχέτιση με CCHCR1 και έκφραση EGFR σε αυτές τις ίδιες κυτταρικές σειρές όπως επίσης και σε καρκινικά κύτταρα επεμβατική FaDu [17], υποδηλώνοντας ότι η μεταγραφή EGFR ανεστάλη. Ωστόσο, αυτό μπορεί να αντανακλά διαφορετικές EGFR παραλλαγών που μελετήθηκαν, δεδομένου ότι το ειδικό ανιχνευτή για την παραλλαγή 2 φάνηκε να είναι πιο μειωτικά από παραλλαγή 1 ή ανιχνευτές που αναγνωρίζουν όλες τις παραλλαγές.

Παρά τις θετικές CCHCR1 και της έκφρασης Κί67 in vivo σε καρκίνο του δέρματος και Affymetrix δοκιμασία κυτταρικών γραμμών SCC, δείχνουμε ότι οι CCHCR1 και Ki67 mRNAs μειωτικά σε καλλιεργημένα κύτταρα με μετασχηματισμό αύξουσα και επίσης σε μη ογκογόνα HaCaT κύτταρα που κατεργάζονται με ενώσεις που προάγουν όγκους in vivo. Μεταστατικό RT3 και επεμβατικές κύτταρα ΙΙ4 εκφράζεται CCHCR1 και Ki67 λιγότερο από ογκογόνα Α5 και αθανατοποιημένα κύτταρα HaCaT, υποδηλώνοντας ότι CCHCR1 και έκφραση Ki67 αυξάνει αντιστρόφως με το επίπεδο των ras-μετασχηματισμού. Ομοίως, η έκφραση EGFR ήταν προς τα κάτω σε όλα τα κύτταρα ras-μετασχηματισμένα, ακόμη και σε Α5 κύτταρα. CCHCR1 mRNA επίσης μειώθηκε στα μεταστατικών κυττάρων σε σύγκριση με FaDu Α431 συσχέτιση με τα πάνω ρύθμιση του EGFR από FaDu σε κύτταρα Α431. έκφραση High EGFR σε κύτταρα Α431 σε σύγκριση με κύτταρα FaDu συμφωνεί με προηγούμενες μελέτες [17]. Επιπλέον, στην ΕΕΑΚ η ανοσοχρώση CCHCR1 ήταν ετερογενή στο atypic κύτταρα – πολλά atypic κύτταρα ήταν επίσης άνευ Κί67

Το υποστηρικτές του όγκου ΟΑ και μεναδιόνη μειωτικά την έκφραση της CCHCR1, Ki67, και EGFR mRNAs σε κύτταρα HaCaT.. OA αναστέλλει σερίνης /θρεονίνης-ειδική φωσφατασών πρωτεΐνης, συμπεριλαμβανομένων των πρωτεϊνών φωσφατασών 1, 2Α, και ΡΡ3 [18] και ενεργοποιεί την κυτταρική /2, JNK και ρ38 ΜΑΡΚ μονοπάτια σηματοδότησης Erk1 και ΑΡ-1 μεταγραφικούς παράγοντες [19] – [21] εκτός για την ενεργοποίηση Akt-1, ένα προ-επιβίωσης σερίνης-θρεονίνης κινάσης [22]. Μεναδιόνη αναστέλλει φωσφατάσες τυροσίνης πρωτεΐνης ενεργοποίησης ErbB2 που υπερεκφράζεται σε BCC και SCC μειωτικά σε σχέση με το φυσιολογικό επιδερμίδα [23]. Είναι ενδιαφέρον ότι, η δραστηριότητα EGFR έχει εμπλακεί σε ΟΑ-επαγόμενης καρκινογένεσης και ενεργοποίηση μεναδιόνης επαγόμενη ErbB2 [24], [25]. Επιπλέον, EGFR έχει αναφερθεί ότι ενεργοποιούν Erk1 /2 και της Akt σε SCC [10].

Η υπεριώδης ακτινοβολία είναι ένας από τους πιο σημαντικούς παράγοντες που προδιαθέτουν για καρκίνο του δέρματος και είναι επίσης γνωστή για την ενεργοποίηση του EGFR [9]. Δεν έχουν εντοπιστεί σημαντικές αλλαγές στα επίπεδα CCHCR1 mRNA σε κύτταρα HaCaT καλλιεργούνται για διάφορες περιόδους μετά την ακτινοβολία UVA /UVB (Suomela, Latonen και Saarialho-Kere, αδημοσίευτα δεδομένα). Εμείς δεν θα μπορούσε να αποδείξει οποιαδήποτε επίδραση του H

2O

2 (παραγωγή οξειδωτικού στρες) σχετικά με έκφραση CCHCR1 mRNA είτε, αν και επίσης ΟΑ καθώς και μεναδιόνη είναι γνωστό ότι επάγει το σχηματισμό δραστικών ειδών οξυγόνου και υπεροξείδωση των λιπιδίων σε αθανατοποιημένες κυτταρικές γραμμές [26], [27], υποδηλώνοντας ότι το οξειδωτικό στρες δεν εμπλέκονται στην αλληλεπίδραση της ΟΑ και CCHCR1.

Τέλος, δείχνουμε ότι σε κύτταρα HaCaT, έκφραση CCHCR1 μειώθηκε με τον πολλαπλασιασμό, σύμφωνα με τις προηγούμενες μας εκθέσεις [1], [3], [4]. Μετά προκαλώντας πολλαπλασιασμό σε κύτταρα HaCaT όπως περιγράφηκε νωρίτερα [14], η πιο πολλαπλασιαστική τα μη ογκογόνα HaCaT κύτταρα, τόσο λιγότερο CCHCR1 εκφράστηκε. Είναι ενδιαφέρον ότι, η έκφραση του EGFR mRNA ακολούθησε εκείνη της έκφρασης CCHCR1 mRNA και όχι έκφραση Ki67, γεγονός που υποδηλώνει μια κοινή τελεστή ανάντη σε μονοπάτια σηματοδότησης. Δεν μπορούμε, όμως, σε αυτή τη ρύθμιση αποκλείει την επίδραση της μόνη της έκφρασης CCHCR1 κυτταρική συρροή, καθώς επίσης επηρεάζει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων HaCaT.

κακοήθη εξαλλαγή των ψωριασική αλλοιωμένη KCs είναι πολύ ασυνήθιστο παρά ανεξέλεγκτο πολλαπλασιασμό KC και συν -Ύπαρξη της χρόνιας φλεγμονής. Ο λόγος για την προστασία από την ανάπτυξη καρκίνου παραμένει ασαφής. έχουν μειώσει τα επίπεδα του ΑΡ-1 σε ψωριασική KCs προταθεί ως εξήγηση [28], [29]. ΑΡ-1 μεσολαβεί μονοπάτι εμπλέκεται επίσης στην ενεργοποίηση του EGFR που οδηγεί στην KC υπερπολλαπλασιασμού [5]. Όταν οι CCHCR1 ποντίκια διαγονιδιακά κινδύνου, με μειωτικά του υποδοχέα της βιταμίνης D [30], τραυματίστηκαν και ΡΜΑ-θεραπεία, πολλαπλασιασμός KC μειώθηκε [3], υποδηλώνοντας λιγότερο δραστικό ΑΡ-1 ή STAT3 σηματοδότηση. Επιπλέον, η βιταμίνη D, ένα φάρμακο που χρησιμοποιείται στη θεραπεία της ψωρίασης, ρυθμίζει προς τα κάτω EGFR και κυκλίνη-D1 [31]. CCHCR1 έχει επίσης προταθεί για τη ρύθμιση της μετανάστευσης της RNA πολυμεράσης II υπομονάδας 3 (RPB3) [32], το οποίο ενεργοποιεί το παράγοντα ενεργοποίησης μεταγραφής 4 (ATF4 ή CREB2) [31] συνδέει με διακοπή της ανάπτυξης [34], [35] και είναι είναι σε θέση να σχηματίζουν ετεροδιμερή με τα μέλη της οικογένειας ΑΡ-1. Η παρούσα μελέτη εμπλέκει ότι CCHCR1, ένα υποψήφιο γονίδιο για την ψωρίαση, έχει μια λειτουργία στο KC βιολογία επίσης σε κακοήθη μετασχηματισμό. [14].