Αφηρημένο

Ιστορικό

Καρκίνος του παχέος εντέρου (CRC) είναι μια σημαντική επιβάρυνση της δημόσιας την υγεία και την παγκόσμια υγειονομική περίθαλψη. Μικροχλωρίδας έχει προταθεί στην προώθηση της χρόνιας φλεγμονής στο έντερο που, με τη σειρά του, προωθεί την ανάπτυξη του όγκου. Αυτή η μελέτη επικεντρώνεται σε πιθανές συσχετίσεις των ανθρωπίνων θηλωμάτων λοίμωξης (HPV) με προφλεγμονώδεις δραστηριότητες σηματοδότησης Stat3 και τα προκύπτοντα επίπεδα της κατάντη προφλεγμονωδών κυτοκινών της IL-17 σε ασθενείς με CRC.

Μέθοδοι

HPV εξετάστηκε χρησιμοποιώντας την τεχνολογία HPV Γονοτυποποίηση Chip και ουσιαστικά δραστική Stat3 (ρ-Stat3) και IL-17 επίπεδα εξετάστηκαν χρησιμοποιώντας ανοσοϊστοχημεία (IHC) σε εγκλεισμένα σε παραφίνη καρκινικούς και φυσιολογικούς ιστούς παρακείμενα (ΑΝΤ) από μία κοόρτη 95 ​​ασθενών CRC. Συσχέτιση αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν μεταξύ της λοίμωξης από HPV και κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά, δραστηριότητες Stat3 και IL-17 επίπεδα μεταξύ αυτών CRC ασθενείς

Αποτελέσματα

Τρεις μεγάλες ευρήματα παρατηρήθηκαν:. (1) HPV λοίμωξη υπήρχε σε ένα υψηλό ποσοστό των περιπτώσεων CRC (48,4%, 46/95), εκ των οποίων 45 περιπτώσεις (45/46, 97,8%) ήταν HPV16-θετικά υψηλού κινδύνου και μόνο μία περίπτωση ήταν ΗΡν53-θετικού. (2) Η λοίμωξη από HPV συσχετίζεται με τις φτωχότερες κλινικά στάδια (III + IV) της CRC. (3) λοίμωξη HPV συσχετίζεται έντονα με τα δύο συστατικά υψηλότερες δραστηριότητες Stat3 (P & lt? 0,01) και τα υψηλότερα επίπεδα της IL-17 (Ρ & lt? 0,01). Μόνο στους ιστούς CRC, αλλά όχι σε ΑΝΤ ιστούς

Συμπεράσματα

HPV λοίμωξη είναι συχνή σε ασθενείς CRC προτείνοντας ενδεχομένως προληπτική αποτελεσματικότητα του εμβολιασμού HPV μεταξύ των νεαρών ατόμων υψηλού κινδύνου. Έχουμε για πρώτη φορά αποκάλυψε μια τριμερή σχέση μεταξύ HPV λοίμωξη, συστατική δραστηριότητα Stat3 και IL-17 επίπεδο, των οποίων η συλλογική πράξη μπορεί να ενορχηστρώσει μια προφλεγμονωδών μικροπεριβάλλον του παχέος εντέρου ότι, με τη σειρά του, μπορεί να προωθήσει την καρκινογένεση και, ενδεχομένως, να διευκολύνει την εξέλιξη της CRC .

Παράθεση: Li YX, Zhang L, Simayi D, Ζανγκ Ν, Tao L, Yang L, et al. (2015) Ανθρωπίνων Θηλωμάτων Λοίμωξη συσχετίζεται με φλεγμονώδεις Stat3 Σηματοδοσίας Δραστηριότητα και IL-17 Επίπεδο σε ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου. PLoS ONE 10 (2): e0118391. doi: 10.1371 /journal.pone.0118391

Ακαδημαϊκό Επιμέλεια: Zhi-Ming Zheng, Εθνικό Ινστιτούτο Υγείας – Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου, Ηνωμένες Πολιτείες |

Ελήφθη: 22 Οκτώβρη 2014? Αποδεκτές: 15 Ιανουαρίου, 2015? Δημοσιεύθηκε: 23 του Φλεβάρη του 2015

Copyright: © 2015 Li et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. η εργασία αυτή χρηματοδοτήθηκε από το Oasis Scholar Ταμείο του Πανεπιστημίου Shihezi (LZXZ201023), το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (NSFC αριθ 81160301 και 81260301. ). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν ανταγωνιστικά συμφέροντα υπάρχουν

Εισαγωγή

καρκίνος του παχέος εντέρου (CRC) είναι η τρίτη πιο κοινή μορφή καρκίνου σε παγκόσμιο επίπεδο μετά από καρκίνο του πνεύμονα και τον καρκίνο του μαστού, με συχνότητα εμφάνισης, θνησιμότητα και η επικράτηση 5 ετών αντιπροσωπεύουν το 9,7%, 8,5% και 10,9%, αντίστοιχα, μεταξύ όλων των καρκίνων, σύμφωνα να GLOBOCAN 2012 [1]. Το ποσοστό θανάτου CRC έχει μειωθεί σε όλο τον κόσμο τα τελευταία χρόνια, χάρη στην εξέταση των προγραμμάτων σε πολλές χώρες και εμφανείς επιπτώσεις του κινδύνου μειώσεις και βελτιωμένες θεραπείες [2,3].

Το τρέχον παράδειγμα είναι ότι οι περισσότεροι συμπαγείς όγκους συμπεριλαμβανομένων CRC συνδέονται με χρόνια φλεγμονή, άμεσα ή έμμεσα, [4]. Μεταξύ των πολλών μικροοργανισμών που μελετήθηκαν, οι ιογενείς λοιμώξεις που προτείνεται στην ανάπτυξη του καρκίνου, ιδίως αυτή που προκαλείται από ιό των ανθρωπίνων θηλωμάτων (HPV). Ιογενείς λοιμώξεις από HPV υποτύπους υψηλού κινδύνου, όπως HPV16 και HPV18, είναι αιτιώδης στην ανάπτυξη του τραχήλου της μήτρας, του πρωκτού και των γεννητικών οργάνων καρκίνων. Πρόσφατα, HPV16 /18 λοιμώξεις έχουν αναφερθεί ότι συνδέονται με στοματοφαρυγγική καρκίνο [5,6]. Κατά τα τελευταία έτη, η μόλυνση από HPV έχει αποδειχθεί ότι σχετίζεται με καρκίνο του παχέος εντέρου [7,8].

Λόγω διαφόρων φλεγμονωδών κυττάρων και των κυτοκινών που υπάρχουν στο μικροπεριβάλλον του όγκου, οι όγκοι έχουν αναφέρεται ως «πληγές που δεν επουλώνονται »[9]. μετατροπέα σήματος και ενεργοποιητής της μεταγραφής 3 (Stat3) είναι ένα κρίσιμο μονοπάτι σηματοδότησης που εμπλέκεται στο σχηματισμό του μικροπεριβάλλον του όγκου μέσω ρύθμισης προς τα κάτω προφλεγμονώδεις κυτοκίνες και παράγοντες που προωθούν την ανάπτυξη του όγκου και προόδου [10]. Η φωσφορυλιωμένη Stat3 (ρ-Stat3) είναι η δραστική μορφή της Stat3 που μπορεί να ανιχνευθεί σε διάφορους καρκίνους συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του παχέος [11]. Μεταξύ των κατάντη μορίων που προκαλούνται από την ενεργοποίηση Stat3, IL-17 είναι ένα ουσιαστικό προφλεγμονώδης κυτοκίνη που εκκρίνεται από τα Τ-βοηθητικά IL-17-κύτταρα που παράγουν (Th17), τα οποία παράγονται από CD4

+ Τ κύτταρα υπό την επαγωγή του ΤΟΡ-β. Πρόσφατες μελέτες έχουν δείξει ότι η IL-17 παίζει ένα διπλό ρόλο στην εξυπηρέτηση είτε ως παράγοντας υποκινητή ή κατά του όγκου ανάλογα με τα μοντέλα του καρκίνου [12]. Στο CRC, ένα μεγάλο σώμα των μελετών δείχνει ότι η IL-17 δρα ως ένας προαγωγός μάλλον παρά παράγοντα κατά του όγκου στην έναρξη της εξέλιξης του όγκου και [4,13,14]. Ουσιαστικώς δραστικής ρ-Stat3 μπορεί να ρυθμίσει τη διαφοροποίηση και την ωρίμανση των κυττάρων Th προς μυστικό IL-17, η οποία, με τη σειρά τους, θετικά τροφοδοτεί πίσω στο Stat3 σηματοδότηση, επάγει περισσότερη IL-17 που πρόκειται να εκφραστεί. Stat3 σηματοδότηση παίζει ένα ρόλο στην προαγωγή του όγκου μέσω επαγωγής του σχηματισμού αιμοφόρων αγγείων του όγκου, διευκολύνοντας την συσσώρευση των ουδετερόφιλων, ενισχύοντας την ικανότητα καρκινικών κυττάρων να αντιστέκονται απόπτωση, και επεκτείνεται διαρκώς την τοπική φλεγμονώδη απόκριση [4]. Από την άλλη πλευρά, η IL-17 προάγει την καρκινογένεση κυρίως με προκαλεί την ενεργοποίηση του Stat3 μονοπατιού σηματοδότησης για να προκαλέσει αντίσταση στην απόπτωση και την προώθηση της αγγειογένεσης με την οποία να διευκολύνει την ανάπτυξη και την εξέλιξη [15] του όγκου.

Βακτηριακές λοιμώξεις έχουν δειχθεί να συνεργαστούν με την οδό σηματοδότησης Stat3 να προκαλέσει CRC [4]. Δεν είναι γνωστό, όμως, αν ιογενείς λοιμώξεις μπορεί επίσης να είναι σε θέση να ενεργεί κατά τον ίδιο τρόπο, όπως τα βακτήρια. Αυτή η μελέτη επικεντρώνεται σε πιθανές συσχετίσεις της HPV λοίμωξης με δραστηριότητα σηματοδότησης προφλεγμονώδεις Stat3 και κατάντη της IL-17 κυτοκίνης της στην CRC. Έχουμε εξετάσει την υπόθεση ότι, παρόμοια με βακτηριακές λοιμώξεις, χρόνια HPV λοίμωξη μπορεί επίσης να είναι σε θέση να συνεργάζεται με Stat3 σηματοδότηση, προκαλώντας μία φλεγμονώδη απόκριση που διευκολύνει το σχηματισμό μίας μικροπεριβάλλον ευνοϊκό για καρκινογένεση ή /και εξέλιξη του καρκίνου του CRC. Εξετάζοντας μια κοόρτη των ιστών 95 ασθενών CRC ‘και των παρακείμενων φυσιολογικών ιστών τους (ΑΝΤ), έχουμε λάβει τρεις μεγάλες διαπιστώσεις: (1) HPV λοίμωξη υπάρχει σχεδόν το ήμισυ των περιπτώσεων CRC, εκ των οποίων 97,8% είναι μολυσμένα με υψηλού κινδύνου τύπου HPV16? (2) Η λοίμωξη από HPV συσχετίζεται με φτωχότερη κλινικά στάδια του CRC? και (3) λοίμωξη HPV συσχετίζεται έντονα με το καταστατικό δραστηριότητες του Stat3 και κατάντη της IL-17 επίπεδα σε ιστούς CRC. Αυτές οι παρατηρήσεις έχουν μια πιθανή επίπτωση που διέπουν μια HPV-Stat3 μηχανισμό στην παθογένεση της CRC, και μια πιθανή προληπτική εφαρμογή του HPV εμβολιασμού των νεαρών ατόμων υψηλού κινδύνου, τουλάχιστον σε περιοχές με επικρατούσα HPV σχετίζεται με CRC.

Μέθοδοι

Ηθική Δήλωση

Αυτή η μελέτη εγκρίθηκε από το Διοικητικό συμβούλιο Θεσμικών δεοντολογικής εξέτασης (IERB) στο First Affiliated Νοσοκομείο μας Shihezi Ιατρική Σχολή του Πανεπιστημίου (IERB Νο SHZ2010LL02). Η IERB παραιτήθηκε από την ανάγκη των ασθενών συγκατάθεση λόγω ανώνυμη αναλύσεις των δεδομένων και τις τυποποιημένες κατευθυντήριες γραμμές πανεπιστημιακό νοσοκομείο, σύμφωνα με τη Διακήρυξη του Ελσίνκι συμπεριλαμβανομένης της εμπιστευτικότητας και ανωνυμίας ακολουθήθηκαν κατά το χειρισμό και τη δημοσίευση των ασθενών ιστών.

ασθενείς

Ένα σύνολο 235 χειρουργικά και λήφθηκε παραφίνη-ενσωματωμένες αρχειακό ανθρώπινους ιστούς, συμπεριλαμβανομένων 95 ιστούς CRC και 90 ζεύγη ΑΝΤ ιστούς, και 50 ορθοκολικού αδενώματος (CRA) σε ιστούς από το Τμήμα Παθολογίας, το First Affiliated νοσοκομείο Shihezi Ιατρικής Σχολής του Πανεπιστημίου χρονολογούνται από το 2005 έως το 2007. Όλα τα επιλεγμένα ιστοί με βάση την ιστοπαθολογική διάγνωση και επιβεβαιώθηκε για διαγνώσεις πριν από τον πειραματισμό. Αυτοί οι ασθενείς είχαν αρχικά επιλεγεί λόγω των δύο διαθέσιμων κλινικών πληροφοριών τους και επαρκές μέγεθος ιστό για πειραματικούς αναλύσεις (συμπεριλαμβανομένων των επαναλήψεων). ασθενείς CRC ήταν ηλικίας 33 έως 85 ετών (με μέση ηλικία 66 ετών), συμπεριλαμβανομένων 43 περιπτώσεις καρκίνου του παχέος εντέρου (με 41 ζεύγη ANTs διαθέσιμη) και 52 περιπτώσεις καρκίνου του ορθού (με 49 ζεύγη ANTs διαθέσιμο). Οι 5 ασθενείς CRC χωρίς να συνδυάζεται ANTs παρέμειναν στη μελέτη, προκειμένου να αποκτήσουν στατιστική ισχύ στις κλινικές αναλύσεις με διάφορες υπο-ομάδες. Αυτά τα CRC ασθενείς δεν έλαβαν προεγχειρητική χημειοθεραπεία ή χημειο-ακτινοθεραπεία και κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά τους συνοψίζονται.

Λόγω της κατανάλωσης των ιστών σε προηγούμενες μελέτες και απαιτείται μεγάλο μέγεθος των ιστών για την εκχύλιση του DNA και η επακόλουθη HPV τεστ, μόνο 50 ζεύγη ΑΝΤ ιστούς ήταν διαθέσιμα που ικανοποίησαν το κριτήριο επιλογής 5 εκατοστά μακριά από την άκρη του καρκίνου. Για την εκχύλιση του DNA και HPV τεστ, ως εκ τούτου, ήμασταν σε θέση να δοκιμάσουν αυτές τις διαθέσιμες 50 ζεύγη ιστών ΑΝΤ οποία κατανεμήθηκαν τυχαία ανάμεσα σε συνδυασμό ιστούς CRC μόνο. Επιπλέον, θα δοκιμαστεί επίσης, 50 άσχετες ιστούς CRA, μια κοινή μη καρκινική νόσο του πεπτικού συστήματος, για την HPV λοίμωξη να διερευνήσει κατά πόσον υπήρξε οποιαδήποτε διαφορά μεταξύ CRC και CRA, εκ των οποίων CRA ιστών υπηρέτησε ως διαφορετική ομάδα ελέγχου από την άποψη της HPV λοίμωξη.

Ανίχνευση HPV μόλυνση χρησιμοποιώντας Gene Chip Technology

Γενωμικό DNA εκχυλίστηκε από ιστούς χρησιμοποιώντας κιτ εκχύλισης DNA ακόλουθα πρωτόκολλα του κατασκευαστή (Qiagen, Γερμανία). δείγματα DNA στη συνέχεια κωδικοποιούνται χωρίς ταυτοποίηση του καρκίνου ή μη-καρκινικές διαγνώσεις και αποστέλλονται σε εργαστήριο του γονότυπου ειδικότητα DNA (Yaneng Bioscience Co, Ltd, Shenzhen, Κίνα, https://www.yanengbio.com/en/home2.asp) για τον έλεγχο του HPV. Η ποιότητα και η ακεραιότητα του εκχυλίζεται DNA ελέγχθηκε με PCR χρησιμοποιώντας β-ακτίνης γονίδιο ως εσωτερικός έλεγχος (εμπρόσθιος εκκινητής: 5′-CTTAGTTGCGTTACACCCTT-3 ‘και αντίστροφος εκκινητής: 5′-TGTCACCTTCACCGTTCC-3’). Ένα προϊόν PCR 155 bp του γονιδίου της β-ακτίνης ανιχνεύθηκε με ηλεκτροφόρηση σε 2% πηκτή αγαρόζης

Κατόπιν αιτήματος της Yaneng Bioscience Co, ελήφθησαν οι ακόλουθες προφυλάξεις για να αποφευχθεί η πιθανή διασταυρούμενη μόλυνση κατά τη διάρκεια της διαδικασίας.: (1) αναλώσιμα μιας χρήσης απασχολούνταν στην εξαγωγή DNA και μετέπειτα HPV τεστ? (2) Από την πρώτη παρτίδα των εκχυλίζεται DNA και τεστ HPV αποτελέσματα, έχουμε επιλέξει ένα αρνητικό μάρτυρα HPV (ένα ΑΝΤ δείγμα με μεγάλο μέγεθος του ιστού) και ένας θετικός έλεγχος HPV (ένα δείγμα CRC με μεγάλο μέγεθος του ιστού) που πρέπει να περιλαμβάνονται σε κάθε παρτίδα εξαγωγή DNA (20 δείγματα ανά παρτίδα)? (3) Σε κάθε παρτίδα εκχύλιση του DNA, ίσο αριθμό ιστών CRC (10 ανά παρτίδα) και ΑΝΤ ή CRA ιστούς (10 ανά παρτίδα) συμπεριλήφθηκαν για την εκχύλιση του DNA? και (4) Αυτά τα DNAs ελέγχου ελέγχθηκαν για HPV μαζί με την ίδια παρτίδα εκχυλισμάτων DNA. Σε όλη τη διάρκεια εκχύλισης DNA και HPV τεστ, παρατηρήσαμε δυο παρτίδες DNA εκχυλισμάτων μεταξύ των οποίων ο θετικός έλεγχος δεν έδειξε θετικότητα για τον HPV και οι δύο αυτές παρτίδες 40 ιστοί στη συνέχεια επανεκχυλίζεται για το DNA και επανελέγχονται για HPV μέχρι τη θετική ελέγχου HPV ήταν θετική για τεστ HPV. Ωστόσο, δεν παρατηρήσαμε ο αρνητικός μάρτυρας HPV αποδείχθηκε να είναι θετική, μέσω εκχύλισης DNA και τεστ HPV.

HPV γονοτυπική πραγματοποιήθηκε με τη χρήση του HPV Γονοτυπικές Kit, ένα κλινικό διαγνωστικό προϊόν της Yaneng Bioscience ΣΙΑ (έγκριση κινεζικό κράτος FDA αρ. 2008-340099) στο Εργαστήριο Ειδικότητα HPV Γονοτυπικές μέσα Yaneng Bioscience ΣΙΑ, που είχε επιλεγεί από τον Διεθνή Οργανισμό Ερευνών για τον Καρκίνο (IARC, Παγκόσμιος Οργανισμός Υγείας) για να εκτελέσετε τις έρευνες επιπολασμού του ιού HPV λοίμωξη και τραχήλου στην Κίνα. μίγμα της αντίδρασης PCR (25 μΙ) περιείχε 5 μΐ γονιδιωματικού ΟΝΑ, 20 μΐ ρυθμιστικού αντίδρασης PCR. Οι συνθήκες κύκλων είχαν ως εξής: αρχική μετουσίωση στους 95 ° C για 5 λεπτά, στη συνέχεια 40 κύκλους στους 94 ° C για 30 s, 42 ° C για 90 s, 72 ° C για 30 s, και μια τελική επέκταση στους 72 ° C για 5 min. Ένας θετικός μάρτυρας DNA HPV τοποθετήθηκε σε κάθε κηλίδα υβριδισμού (S1 Εικ.). Η μέθοδος κηλίδα αντίστροφη σειρά (RLB) χρησιμοποιήθηκε σε όλα τα δείγματα με ενισχυόμενο DNA και οι συνθήκες υβριδισμού που περιγράφηκε προηγουμένως [16,17]. Τα προϊόντα PCR με το χέρι φορτώθηκε η διαδικασία blots τσιπ και υβριδισμός διεξήχθη με αυτοματισμό. Οι κηλίδες αρχικά διαβάσει αυτόματα και να ελέγχεται με το χέρι πριν από την αναφορά (S1 Εικ.). Το HPV γονοτυπικός Kit ήταν σε θέση να ανιχνεύσει 23 HPV υποτύπους συμπεριλαμβανομένων 18 HPV υψηλού κινδύνου (HR-HPV) (HPV16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 73, 83, και MM4) και 5 HPV χαμηλού κινδύνου (LR-HPV) (HPV 6, 11, 42, 43, και 44) (S1 Εικ.). Κάθε δείγμα DNA έγινε εις τριπλούν σε συγκεντρώσεις 3 κλίσης του γονότυπου κηλίδες τσιπ και ο θετικός ρυθμός σύμπτωση ήταν 100%. Αυτό το τεστ HPV γονοτυπική έχει μια ευαισθησία ανίχνευσης 103 αντίγραφα του HPV DNA /ml και ειδικότητα 99% με βάση τις προδιαγραφές της εταιρείας. αποτελέσματα των δοκιμών HPV είχαν επιστραφεί σε εμάς και αποκωδικοποιείται για να ταιριάζει με ταυτοποιήσεις των ασθενών πριν από την ανάλυση.

Ανίχνευση Active π-Stat3 και εξέφρασε την IL-17 Χρησιμοποιώντας ανοσοϊστοχημεία (IHC) Δοκιμασία

ιστούς παραφίνης ήταν χωρισμένο σε 4-μm φέτες και IHC αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη μέθοδο στρεπταβιδίνης υπεροξειδάσης (κιτ SP, Zhongshan Χρυσή Γέφυρα Co, Πεκίνο, Κίνα). Εν συντομία, πλακίδια ιστός αποκηρώθηκαν και ενδογενούς υπεροξειδάσης εμποδίστηκε με 3% υπεροξείδιο υδρογόνου. Μετά από αποκλεισμό με φυσιολογικό ορό κατσίκας, πρωταρχικός κουνελιού αντι-ανθρώπου πολυκλωνικά αντισώματα έναντι IL-17 (IL-17Α, αραίωση 1: 200, Santa Cruz, CA, USA) και ρ-Stat3 (αραίωση 1: 400, Santa Cruz, CA, USA) εφαρμόστηκαν πάνω στις πλάκες ιστού ακολουθώντας τις διαδικασίες όπως περιγράφηκε προηγουμένως [18].

Θετικές IHC λεκέδες ορίστηκαν ως κίτρινο-καφέ χρώμα σύμφωνα με την επιδεικτική διαφάνειες του κατασκευαστή (Εικ. 1). διαφάνειες χρώση IHC διαβάστηκαν σε ένα οπτικό μικροσκόπιο της Olympus πάνω κίτρινο-καφέ κηλίδες χρώματος για 12 διαδοχικά πεδία και βαθμολογήθηκαν σύμφωνα με δύο μεταβλητών παραγόντων: (1) μετρώντας τον αριθμό των θετικώς χρωματισμένων κυττάρων (0 = & lt? 5%? 1 = 6% -25%? 2 = 26% -50%? 3 = 51% -75%? και 4 = 76% -100%)? και (2) σημειώνοντας την ένταση της χρώσης (0 = απούσα? 1 = αδύναμη? 2 = μέτρια? 3 = ισχυρή). Το τελικό αποτέλεσμα ήταν το προϊόν του (1), τον πολλαπλασιασμό (2) για μεμονωμένες διαφάνειες (Πίνακας 1). Αυτό το σύστημα βαθμολόγησης ήταν παρόμοια κατ ‘αρχήν σε μια δημοσιευμένη βιβλιογραφία [19]. Όπως πινακοποιούνται στον Πίνακα 1, εκφράσαμε τελική βαθμολογία χρώσης με τους ακόλουθους τρόπους για την απλότητα: αρνητική χρώση ως 0 για (-)? στοιχειωδών θετική χρώση ως 1+ για το (+)? 2+ για (++)? και 3+ για (+++), αντίστοιχα.

Έξι αντιπροσωπευτικά πάνελ χρώση IHC δείξει. Αντίσωμα-χρώση κατά ρ-Stat3 εντοπίζεται κυρίως στον πυρήνα (Α, Β και C, θετική χρώση από κίτρινο-καφέ), ενώ το αντίσωμα-χρώσης έναντι IL-17 είναι κατά κύριο λόγο στο κυτταρόπλασμα (D, Ε και F, θετική χρώση κίτρινο-καφέ). Α και Β προήλθε από ζεύγη ιστούς του ίδιου ασθενή, αλλά C ήταν από ένα άσχετο ιστό. D και Ε προήλθε από ζεύγη ιστούς του ίδιου ασθενούς αλλά F ήταν από ένα άσχετο ιστό. Μπορεί να φανεί ότι το ρ-Stat3 είναι έντονα χρωματισμένο σε CRC (2) (C, βαθμολογήθηκαν ως 3+) σε σύγκριση με ένα άλλο CRC (1) (Β, βαθμολογήθηκαν ως 2+) ή ΑΝΤ ιστού (Α, ως αρνητικές ή 0). Ομοίως για την IL-17, CRC (2) ιστός παρουσιάζει έντονη χρώση (F, σημείωσε ως 3+) σε σύγκριση με ένα άλλο CRC (1) (Ε, σημείωσε ως 1+), αλλά ΑΝΤ δείχνει μικρή ή καθόλου χρώση (D, βαθμολογείται ως αρνητική ή 0). Μικροσκοπική μεγέθυνση είναι X200 με ένθετα του X400. ANT = παρακείμενο φυσιολογικούς ιστούς και CRC = καρκίνο του παχέος εντέρου, αντίστοιχα.

Η

Στατιστικές Αναλύσεις

Οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του πακέτου SPSS στατιστικού λογισμικού (έκδοση 17.0). χ

2 τεστ και t-τεστ υιοθετήθηκαν για την ανάλυση διακύμανσης και συσχέτισης αναλύθηκε χρησιμοποιώντας Spearman μέθοδο βαθμό συσχέτισης. Οι διαφορές με το

P

& lt?. 0.05 θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές

Αποτελέσματα

HR-HPV λοίμωξη είναι μια κοινή Εκδήλωση στην κινεζική ασθενείς CRC

Κατά τη διάρκεια της ολόκληρο εξαγωγή DNA και HPV τεστ, παρατηρήσαμε δυο παρτίδες DNA εκχυλισμάτων μεταξύ των οποίων ο θετικός έλεγχος δεν έδειξε θετικότητα για τον HPV και οι δύο αυτές παρτίδες 40 ιστοί στη συνέχεια επανεκχυλίζεται για το DNA και να δοκιμάζονται εκ νέου για HPV μέχρι το θετικό μάρτυρα HPV ήταν θετική για τεστ HPV. Ωστόσο, εμείς δεν παρατηρούμε τον αρνητικό μάρτυρα HPV αποδείχθηκε να είναι θετική, μέσω εκχύλισης DNA και HPV τεστ, προτείνοντας την κατάλληλη διαχείριση της διασταυρούμενης μόλυνσης κατά τη διάρκεια της δοκιμής του HPV. HPV λοίμωξη ανιχνεύθηκε σε 46/95 περιπτώσεις CRC (48,4%, 95% CI 38% -58%) το οποίο ήταν πολύ υψηλότερη από ΑΝΤ (15/50 ή 30,0%, 95% CI 17% -42%) και του παχέος αδενώματα (CRA, 14/50 ή 28,0%, 95% CI 16% -40%), αντίστοιχα (Πίνακας 2). Μεταξύ 46 HR-HPV θετικά CRC περιπτώσεις, 45 (97,8%) είχαν μολυνθεί με HPV 16, ενώ μόνο μία περίπτωση είχε μολυνθεί με HR-HPV υποτύπου, ΗΡν53.

Η

Επιπλέον, αναλύοντας τις 50 CRC ιστούς με ζεύγη ΑΝΤ ιστούς (Πίνακας 2) έδειξε ότι η συχνότητα της HPV λοίμωξης ήταν επίσης υψηλότερη σε ιστούς CRC (54%, 27/50) από εκείνο στο ΑΝΤ ιστούς (30%, 15/50, χ

2 = 5,9,

P

= 0,015). Μεταξύ αυτών των 50 ζεύγη περιπτώσεις, 6 περιπτώσεις ήταν HPV16-θετικά τόσο CRC και ΑΝΤ ιστούς (6 περιπτώσεις, CRC-θετικών /ANT-θετικό)? 14 περιπτώσεις ήταν HPV-αρνητικά τόσο CRC και ΑΝΤ ιστούς (14 περιπτώσεις, CRC-αρνητικό /ANT-αρνητικό)? 21 περιπτώσεις ήταν HPV-θετικές CRC, αλλά HPV-αρνητική ΑΝΤ ιστούς (21 περιπτώσεις, CRC-θετικών /ANT-αρνητικό, 20 του HPV 16-θετικοί και 1 του ΗΡν53-θετικού)? και οι υπόλοιπες 9 περιπτώσεις ήταν HPV16-θετική ΑΝΤ ιστούς, αλλά HPV16-αρνητικά στους ιστούς CRC (9 περιπτώσεις, ΑΝΤ-θετικών /CRC-αρνητική). Από την άποψη της μόλυνσης από HPV, δεν βρέθηκε συσχέτιση μεταξύ των 50 ιστούς CRC και σε συνδυασμό ΑΝΤ ιστούς τους (r = -0.18,

P

= 0,201). Οι παραπάνω παρατηρήσεις έδειξαν γεγονός ότι η μόλυνση από HPV ήταν μια κοινή εκδήλωση στο CRC ασθενείς Κινέζικα (48,4%) και CRC ιστοί είχαν υψηλότερη συχνότητα της HPV λοίμωξης από δύο ζεύγη ΑΝΤ ιστούς τους (χ

2 = 5,9,

P

= 0,015), καθώς και αταίριαστα ιστούς ΑΝΤ (χ

2 = 4,6,

P

= 0,033, Πίνακας 2). Το ποσοστό της HPV λοίμωξης, ωστόσο, δεν είχε καμία διαφορά μεταξύ 50 ANT ιστών και 50 ιστούς CRA (χ

2 = 0.05,

P

= 0,826, Πίνακας 2).

Δύο επιπλέον παρατηρήσεις ήταν ενδιαφέρουσα: (1) δεν είναι χαμηλού κινδύνου HPV υποτύπους ανιχνεύθηκαν σε όλους τους ιστούς μας δοκιμάζονται? (2) Μεταξύ όλων των ιστών που προέρχεται από ANT και CRA, εντοπίσαμε ένα μόνο υποτύπου HR-HPV 16 (Πίνακας 2). Επιπλέον, όλοι οι ιστοί HPV λοίμωξη ήταν θετικό για τον HPV υποτύπους ενιαία και καμία ιστοί βρέθηκαν θετικά για διπλές ή πολλαπλές λοιμώξεις του HPV υποτύπους. Μεταξύ 50 περιπτώσεις ορθοκολικού αδενώματος (CRA), δεν υπάρχουν διαφορές στις συχνότητες της μόλυνσης HPV16 παρατηρήθηκαν μεταξύ των 3 υποτύπων CRA σωληνοειδή, λαχνών-σωληνοειδή, και λαχνών αδενώματα (χ

2 = 1.2,

P

= 0,543, Πίνακας 2).

HPV λοίμωξη σχετίζεται με Ύστερη κλινικά στάδια του CRC

για να καταλάβετε αν η λοίμωξη από HPV θα μπορούσε να επηρεάσει κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά των ασθενών, ερευνήσαμε πιθανές επιπτώσεις της μόλυνσης από HPV σε έναν αριθμό της κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά όπως η ηλικία, το φύλο, τη θέση του όγκου, η ιστολογική διαβάθμιση, λεμφικό μετάσταση, κλινική σταδιοποίηση [20], μεταξύ άλλων. Οι αναλύσεις αποδείχθηκε ότι για να δείξει ότι η HPV λοίμωξη σχετίζεται με καθυστερημένη ή φτωχότερες κλινική σταδιοποίηση της III + IV (Πίνακας 3). Επιπλέον, πιο λεπτομερείς αναλύσεις των HPV λοίμωξης από κλινικά στάδια με τη σειρά του I + II vs ΙΙΙ ή IV ή III + IV έδειξε στοιχειώδη διαφορές, όπως ορίζεται από το

P

τιμές (I + II vs III,

P

= 0.058? I + II vs IV,

P

= 0.034? I + II vs III + IV,

P

= 0,028, αντίστοιχα). Επειδή κλινικά στάδια III + IV ορίστηκαν ως έχει θετική μετάσταση είτε να λεμφαδένα ή σε άλλα απομακρυσμένα όργανα, οι ανωτέρω συσχετισμοί πρότεινε ένα πιθανό ρόλο της HPV μόλυνσης στην εξέλιξη και τη μετάσταση του CRC. Μεταξύ των 50 ζεύγη ΑΝΤ ιστούς, δεν καταφέραμε να παρατηρήσουμε τυχόν συσχετίσεις μεταξύ της λοίμωξης από HPV και κλινικοπαθολογικών χαρακτηριστικά όπως φαίνεται στον Πίνακα 3 που περιλαμβάνει τη διαφοροποίηση των κυττάρων, μετάσταση, την κλινική σταδιοποίηση μεταξύ άλλων αναλύθηκαν (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Η

ιδιοσυστατικά υπερδραστήρια ρ-Stat3 και υπερέκφραση της IL-17 κυτοκίνης σε CRC

Όπως φαίνεται στο Σχ. 1, ρ-Stat3 αντίσωμα λίγο βάφονται σε ΑΝΤ ιστού (Α, βαθμολογήθηκαν ως 0), ωστόσο, βάφονται έντονα CRC ιστού (C, βαθμολογήθηκαν ως 3+). Ομοίως, η IL-17 αντισώματος δεν είχε καμία χρώση στο ΑΝΤ ιστού (D, βαθμολογείται ως 0) αλλά έδειξε ισχυρή χρώση στο CRC ιστό (F, σημείωσε ως 3+). Υπερδραστήρια p-Stat3 και υπερεκφράζεται IL-17 στο CRC ήταν εμφανής σε σύγκριση με ΑΝΤ σε όλη την ομάδα. Όπως αναγράφονται στον Πίνακα 4, συγκρίναμε τρεις κατηγορίες θετικών συνδυασμών χρώσης (1+, 2 + /3 +, και 1 + /2 + /3 +, αντίστοιχα) με αρνητική χρώση (0) p-Stat3 και IL-17 , αντίστοιχα. Σε γενικές γραμμές, πολύ πιο ιστούς CRC έδειξε ενεργό ρ-Stat3 από ΑΝΤ ιστούς (1 + /2 + /3 + vs 0: 95,8% έναντι 76,7%,

P

& lt? 0.001). Οι διαφορές ήταν ιδιαίτερα εμφανής για την ισχυρή ενεργό p-Stat3 (2 + /3 + vs 0: 50,5% έναντι 18,9%,

P

& lt? 0.001). Για την IL-17, από την άλλη πλευρά, αυτό το φαινόμενο (βλέπε πίνακα 4) ήταν εντυπωσιακά παρόμοια με ρ-Stat3 σε ότι πολλοί περισσότεροι ιστοί CRC έδειξε ισχυρή έκφραση της IL-17 από ό, τι ο ΑΝΤ ιστούς (2 + /3 + vs 0: 45.3 % vs 22,2%,

P

& lt?. 0.001)

Η

για να διερευνήσουν γενικές διαφορές μεταξύ CRC και ΑΝΤ για τις δραστηριότητές τους Stat3 και IL-17 επίπεδα, συγκρίναμε συγκεντρώθηκαν IHC βαθμολογίες από όλα τα άτομα ελέγχθηκαν για ρ-Stat3 και IL-17 χρησιμοποιώντας t-test. Όπως φαίνεται στο Σχ. 2, πίνακας Α, συστατική π-Stat3 ήταν σημαντικά υψηλότερη σε ιστούς CRC σε σχέση με το ΑΝΤ ιστούς (Μ ± SD, 4.5 ± 3.0 vs 3.1 ± 2.5,

P

= 0,001). Πολύ Ομοίως, η IL-17 επίπεδα ήταν επίσης υψηλότερη σε ιστούς CRC σε σχέση με το ΑΝΤ ιστούς (Μ ± SD, 5.0 ± 2.7 vs 3.3 ± 2.4,

P

& lt? 0.001). Οι παρατηρήσεις αυτές, από διαφορετική γωνία, υποστήριζαν τις παρατηρήσεις όπως παρουσιάζονται στον Πίνακα 4, που υποδηλώνει φλεγμονή μικροπεριβάλλον σε ιστούς όγκων. Από την άλλη πλευρά, πάνελ Β στο Σχ. 2 αποκάλυψε ένα φαινόμενο που CRC στην πραγματικότητα είχαν περισσότερα επιμέρους ιστούς με έντονη χρώση (2 + /3 + θετικά) τόσο για ρ-Stat3 (

P

& lt? 0.001) και IL-17 (

P

& lt? 0.001), και πάλι, σύμφωνα με τις παρατηρήσεις, όπως φαίνεται στον πίνακα 4 (2 + /3 + θετικών). Το ποσοστό των ατόμων με ασθενή χρώση (1+ θετικά), εντούτοις, δεν ήταν διαφορετική μεταξύ CRC και ΑΝΤ ιστούς είτε για ρ-Stat3 (

P

= 0,07) ή IL-17 (

P

= 0,25).

(Α) Με βάση τα κριτήρια βαθμολόγησης (Πίνακας 1), συγκεντρώνονται βαθμολογίες για ρ-Stat3 ή IL-17 σε σύγκριση μεταξύ CRC και ΑΝΤ ατόμων χρησιμοποιώντας t-test και τα δεδομένα εκφράζονται ως μέσος ± τυπική απόκλιση (Μ ± SD). Όπως φαίνεται, συστατική ρ-Stat3 είναι υψηλότερη σε σχέση με το CRC ΑΝΤ (Μ ± SD, 4.5 ± 3.0 vs 3.1 ± 2.5,

P

= 0,001). Παρομοίως, εκφραζόμενη IL-17 είναι επίσης υψηλότερη σε σχέση με το CRC ΑΝΤ (Μ ± SD, 5.0 ± 2.7 vs 3.3 ± 2.4,

P

& lt? 0.001). (Β) Σύγκριση μεταξύ CRC και ANT για τον αριθμό των ατόμων (%) με διαφορετικές εντάσεις χρώσης χρησιμοποιώντας χ

2 τεστ. Όπως φαίνεται p-Stat3, κατηγορία CRC έχει λιγότερα άτομα βαθμολογείται ως 0 από ΑΝΤ κατηγορία (4,2% έναντι 23,3%,

P

& lt? 0.001). Για το αντίθετο, CRC έχει πολλά περισσότερα άτομα που βαθμολογήθηκαν ως ισχυρά θετικά (2 + /3 +) από ό, τι ΑΝΤ (50,5% έναντι 18,9%,

P

& lt? 0.001). Μια εντυπωσιακή ομοιότητα είναι αλήθεια για την IL-17, εκ των οποίων κατηγορίας CRC έχει λιγότερα άτομα βαθμολογείται ως 0 από ΑΝΤ κατηγορία (2,1% έναντι 16,7%,

P

& lt? 0.001), αλλά και πάλι, CRC έχει πολλά περισσότερα άτομα σκόραρε ως ισχυρότερη θετικά 2 + /3 + από ΑΝΤ (45,3% έναντι 22,2%,

P

& lt? 0.001). Τόσο για p-Stat3 και IL-17, ένταση χρώσης των αδύναμων θετικότητας (1+) δεν είναι σημαντικά διαφορετική μεταξύ CRC και ΑΝΤ κατηγορίες (

P

= 0,07 και

P

= 0,25, αντίστοιχα ). ΑΝΤ δείχνει παρακείμενα φυσιολογικούς ιστούς και CRC απεικονίζει καρκίνο του παχέος εντέρου, αντίστοιχα.

Η

Ήταν ένα αινιγματικό φαινόμενο που δεν καταφέραμε να παρατηρήσουμε τυχόν συσχετίσεις είτε π-Stat3 δραστηριότητες ή IL-17 επίπεδα με κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά μεταξύ αυτών CRC ασθενείς συμπεριλαμβανομένων κυτταρική διαφοροποίηση, μετάσταση, την κλινική σταδιοποίηση μεταξύ άλλων αναλύθηκαν (Πίνακας 5). Επιπλέον, επίσης απέτυχε να παρατηρήσει τυχόν συσχετίσεις του ρ-Stat3 δραστηριότητες ή IL-17 επίπεδα με κλινικοπαθολογικών χαρακτηριστικά μεταξύ των 50 ζεύγη ΑΝΤ ιστούς, αντίστοιχα (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Τα αποτελέσματα αυτά μπορεί ενδεχομένως να υποδηλώνουν μια έγκαιρη συμμετοχή των Stat3 μονοπατιού σηματοδότησης στην παθογένεια της CRC.

Η

HPV λοίμωξη συσχετίζεται με π-Stat3 Δραστηριότητες και IL-17 Επίπεδα

Για να διερευνηθεί αν HPV λοίμωξη θα διαδραματίσει ρόλο στην ενορχήστρωση ενός περιβάλλοντος όγκου με αυξημένη ενεργό Stat3 και IL-17 επίπεδα, πραγματοποιήσαμε διμεταβλητή συσχέτισης αναλύσεις. Στο CRC, όπως φαίνεται στον Πίνακα 6, η ισχυρή θετικές συσχετίσεις μεταξύ αποκαλύφθηκαν HPV μόλυνσης και ενεργοποιημένων Stat3 επίπεδα (r = 0,38,

P

& lt? 0,01)? μεταξύ της λοίμωξης HPV και IL-17 επίπεδα (r = 0.33,

P

& lt? 0,01)? και μεταξύ των p-Stat3 και IL-17 επίπεδα (r = 0.44,

P

& lt? 0,01). Ωστόσο, τέτοιες συσχετίσεις μεταξύ λοίμωξη από HPV, τα επίπεδα ρ-Stat3 και IL-17 επίπεδα δεν υφίστανται στην ΑΝΤ ιστούς (r = 0,05, 0,06, και -0,07 αντίστοιχα, με

P

& gt? 0,05).

Συζήτηση και Συμπεράσματα

το τρέχον παράδειγμα είναι ότι το ανοσοποιητικό σύστημα και η μικροχλωρίδα αμοιβαία αλληλεπιδρούν για να διατηρηθεί η ομοιόσταση στο ανθρώπινο έντερο. Ωστόσο, τα συστατικά της μικροχλωρίδας μπορεί να μεταβάλει αυτή την ισορροπία και την προώθηση της χρόνιας φλεγμονής, τροφοδοτώντας περαιτέρω όγκου ανάπτυξης [4]. Μεταξύ αυτών, ως επί το πλείστον έχουν αναφερθεί είναι ο Ιωάννης ο ιός Cunningham (ιός JC), τον ιό ΒΚ, ανθρώπινος κυτταρομεγαλοϊός (CMV), ιού των ανθρωπίνων θηλωμάτων (HPV, ιδιαίτερα πληκτρολογήστε 16 και 18) [21].

HPV υψηλού κινδύνου (HR -HPV) μόλυνση είναι η κύρια αιτία για καρκίνο του τραχήλου και του HPV εμβολιασμός είναι αποτελεσματική στην πρόληψη του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας [22]. Είναι ενδιαφέρον, HPV λοίμωξη έχει βρεθεί επίσης σε πολλούς καρκίνους μη-τραχήλου. Για παράδειγμα, πολλές μετα-αναλύσεις σε αδενώματα του παχέος εντέρου και αδενοκαρκινώματα έχουν αναφέρει ότι, μεταξύ των 2.630 αδενοκαρκινώματα στρωματοποιημένη κατά γεωγραφικές περιοχές, οι HPV λοιμώξεις βρέθηκε να είναι το υψηλότερο σε ασθενείς από τη Νότια Αμερική (45,1%), την Ασία (39,2%), και η Μέση Ανατολή (32,2%) [23,24]. Άλλες μετα-αναλύσεις έχουν επίσης αναφερθεί λοιμώξεις HPV σε καρκίνους της ωοθήκης [25], της ουροδόχου κύστης [26], του πνεύμονα [27] και του μαστού [28]. Αυτά τα ευρήματα υποδεικνύουν ότι HPV λοίμωξη είναι μια κοινή εκδήλωση σε πολλούς τύπους καρκίνων, υποδηλώνοντας την εμπλοκή του HPV στην παθογένεση καρκίνων του τραχήλου της μήτρας μη συμπεριλαμβανομένου του ορθοκολικού καρκίνου. Σε πληθυσμό ασθενών μας, έχουμε παρατηρήσει ένα υψηλό επιπολασμό των λοιμώξεων HR-HPV σε ασθενείς CRC (46/95 ή 48,4%), μεταξύ των οποίων 45 περιπτώσεις CRC είναι θετικές για HPV 16 (45/46 ή 97,8%) και μόνο μία περίπτωση μολύνθηκαν με HR-ΗΡν53.

Επιπλέον, έχουμε επίσης δοκιμαστεί HPV λοιμώξεις σε άλλους καρκίνους και βρέθηκε εντελώς διαφορετικές συχνότητες της HPV λοίμωξης. Για παράδειγμα, 10,5% των HPV μόλυνσης ήταν σε ασθενείς με καρκίνο του μαστού (χειρόγραφο που υποβλήθηκε)? 48,4% σε ασθενείς CRC (αυτή η μελέτη)? και 90,4% σε ασθενείς με καρκίνο του τραχήλου της μήτρας (χειρόγραφο σε προετοιμασία). παρατηρείται συχνότητες μας λοίμωξης HPV σε αυτούς τους καρκίνους είναι γενικά σε συμφωνία με τις περισσότερες δημοσιευμένες εκθέσεις, γεγονός που υποδηλώνει την ποιότητα και την αξιοπιστία της μεθόδου HPV του γονότυπου που χρησιμοποιείται εδώ.

Για το καλύτερο της γνώσης μας, αυτή είναι η υψηλότερη επικράτηση της HPV λοίμωξη που παρατηρείται στην κινεζική CRC, που υποδηλώνουν το δυναμικό προληπτικού εμβολιασμού HPV [22] μεταξύ των ατόμων υψηλού κινδύνου στην επαρχία Xinjiang, όπου οι εν λόγω CRC ασθενείς διαγνώστηκαν. Μια πρόσφορη προσέγγιση για να αποδειχθεί αυτή η υπόθεση είναι να παρακολουθεί αυτά τα νεαρά κορίτσια και αγόρια εμβολιασμένα με τα εμβόλια HPV για να δείτε εάν έχουν μια μειωμένη συχνότητα εμφάνισης CRC σε μια προοπτική μακροπρόθεσμης επιδημιολογικής παρατήρησης.

Υπάρχουν διάφορες προτάσεις ως για το πώς HPV μολύνει το ορθό και το κόλον. Μερικοί Προβολή ως HPV μπορεί ενδεχομένως να ταξιδέψει προς τα πάνω από αναπαραγωγικού συστήματος έως το ορθό και το κάτω μισό της φθίνουσα παχέος εντέρου [29]. Άλλοι, ωστόσο, έχουν αναφερθεί κανένα ενώσεις του HPV DNA με θέσεις όγκου συμπεριλαμβανομένων αύξουσα, εγκάρσια, φθίνουσα ή σιγμοειδές κόλον και του ορθού [7,30]. Η πλειοψηφία των εκθέσεων προτείνουν ότι ο HPV μπορεί να ταξιδεύουν μέσω της κυκλοφορίας του αίματος για να μολύνει το κόλον και του ορθού [6,31,32,33,34]. Σε CRC ασθενείς μας, έχουμε παρατηρήσει μόνο μια συσχέτιση της HPV λοίμωξης με προχωρημένο στάδιο κλινικών CRC (Ι + ΙΙ vs III + IV, 44,2% έναντι 88,8%,

P

= 0.028), αλλά όχι με οποιαδήποτε άλλη κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά, όπως θέσεις όγκου (άνω και κάτω τελεία vs ορθό) (Πίνακας 3). Παρ ‘όλα αυτά, η πορεία της λοίμωξης HPV σε παχέος εντέρου είναι ασαφής, η οποία χρειάζεται περαιτέρω διερεύνηση. Από την άλλη πλευρά, η παρατήρηση μας την λοίμωξη HPV προτείνει μια πιθανότητα ότι, κατά τη διάρκεια της εξέλιξης του καρκίνου, ανοσολογικά και μεταβολικά σε κίνδυνο τους ασθενείς με πιο προχωρημένο στάδιο CRC μπορεί να προκαλέσει ευκαιριακές ιογενείς έκρηξη αντιγραφής σε διαφορετικά λανθάνουσα μόλυνση HPV, η οποία μπορεί να οδηγήσει σε αυξημένο αριθμό αντιγράφων του HPV που ανιχνεύεται στην θέση του όγκου. Αυτή η ευκαιριακή λοίμωξη HPV μπορεί να προκαλέσει περαιτέρω την ενεργοποίηση του Stat3 σηματοδότησης και την επακόλουθη έκφραση των προφλεγμονωδών κυτοκινών όπως IL-17 στο μικροπεριβάλλον του όγκου.

Πράγματι, συστατικώς ενεργοποιημένου Stat3 (ρ-Stat3) είναι σημαντικά αυξημένη σε CRC ιστούς από ότι σε γειτονικό κανονικούς ιστούς ή ΑΝΤ (Εικ. 1), ειδικότερα των ισχυρών θετικών χρώσης ρ-Stat3 (50,5% το CRC έναντι 18,9% το ΑΝΤ, Εικ. 2 και Πίνακας 4). Συμπτωματικά, η εκφρασμένη IL-17 ακολουθεί τα βήματα του ρ-Stat3 για να δείξει ένα πολύ υψηλότερο επίπεδο σε CRC από εκείνο στο ΑΝΤ (45,3% το CRC έναντι 22,2% το ΑΝΤ, Σχ. 2 και Πίνακας 4). Οι ισχυρές ρ-Stat3 δραστηριότητες και υψηλής IL-17 επίπεδα σε CRC σε σχέση με ΑΝΤ επιβεβαιώνεται από δύο στρατηγικές σύγκριση: το ένα είναι οι διαφορές στην ομαδοποιήθηκαν IHC βαθμολογίες (Σχήμα 2Α.), και το άλλο, οι διαφορές στα ποσοστά επιμέρους ιστών ( Σχ. 2Β). Προς στήριξη της παραπάνω παρατηρήσεις μας είναι μελέτες σε άλλους καρκίνους όπως των ωοθηκών, του μαστού, του οισοφάγου, του γαστρικού καρκίνου και δερματικό λέμφωμα Τ-κυττάρων [35,36,37,38,39]. Μία αινιγματική παρατήρηση ήταν ότι, σε αντίθεση με λοίμωξη HPV (Πίνακας 3), είτε π-Stat3 δραστηριότητες ή IL-17 επίπεδα έχουν αποτύχει να συσχετίζονται με οποιεσδήποτε κλινικοπαθολογικά χαρακτηριστικά του CRC (Πίνακας 5). Υπάρχουν δύο δυνατότητες. Το ένα είναι ότι HPV-μεσολαβητική ενεργοποίηση Stat3 μπορεί να εμπλέκεται μόνο στην αρχική ενορχήστρωση της εντερικής φλεγμονής και καρκινογένεσης και κατόπιν περνά το ρελέ σε άλλες φλεγμονώδεις μονοπάτια σηματοδότησης όπως ΝΡ-κΒ [4], η οποία μπορεί να εμπλέκονται στην περαιτέρω εξέλιξη του CRC.