Αφηρημένο

Παρά το γεγονός ότι ο αποκλεισμός των υποδοχέων των ανδρογόνων (AR) σηματοδότησης αποτελεί την κύρια θεραπεία για τον προχωρημένο καρκίνο του προστάτη (PRCA), πολλοί ασθενείς να εξελιχθεί σε μια θανατηφόρο φαινότυπο των «Ευνουχισμός-Resistant» τον καρκίνο του προστάτη (CR-PRCA ). Με την υπόθεση ότι η πρώιμη PRCA μπορεί να φιλοξενούν έναν πληθυσμό ανδρογόνο αδιάφορη καρκινικά κύτταρα ως πρόδρομες ουσίες CR-υποτροπιάζουσα νόσο, αναλάβαμε τη διάδοση των ανδρογόνων-ανεξάρτητο κύτταρα από PRCA-προστατεκτομή δείγματα της πρώιμης, εντοπισμένες περιπτώσεις (Στάδιο-Ι). Μια συλλογή από 120 χειρουργικά δείγματα από τις περιπτώσεις προστατεκτομή ιδρύθηκε, μεταξύ των οποίων 54 ήταν αδενοκαρκινώματα. Ορμόνη χωρίς συνθήκες κυτταρικής καλλιέργειας αναπτύχθηκαν επιτρέποντας ρουτίνα πολλαπλασιασμό των κυττάρων που εκφράζουν δείκτες βασικοκυτταρικό προστάτη κυττάρου και δεικτών κυττάρου /προγονικών στέλεχος, και τα οποία πολλαπλασιάστηκαν ως σφαίρες /σφαιροειδή σε καλλιέργειες εναιωρήματος. Οι αποικίες των επιθηλιακών κυττάρων ανδρογόνα ανεξάρτητο αυξήθηκε από από 30/43 (70%) των περιπτώσεων αδενοκαρκινώματος μελετηθεί λεπτομερώς. Μικροσκοπία φθορισμού και κυτταρομετρία ροής έδειξε ότι τα κύτταρα CR-PRCA ήταν θετικά για CD44, CD133, CK5 /14, c-kit, ιντεγκρίνης α2β1, SSEA4, Ε-καδερίνη και Αλδεΰδη αφυδρογονάση (ALDH). Όλα τα 30 κυτταρικές καλλιέργειες CR-PRCA ήταν επίσης τ-θετικό, αλλά αρνητικό για TMPRSS2-ERG. Επιπροσθέτως, ένα υποσύνολο 22 από αυτές τις καλλιέργειες κυττάρων CR-PRCA εξετάστηκε με ορθοτοπική ξενομεταμόσχευση σε ανέπαφα και ευνουχισμένους ποντικούς SCID, δημιουργώντας ιστολογικά τυπικά τοπικά επεμβατικές ανθρώπινη PRCA ή αδιαφοροποίητα καρκίνους, αντίστοιχα, σε 6-8 εβδομάδες. Καλλιεργημένα κύτταρα PRCA και ορθοτοπικώς που προκαλείται

in vivo

καρκίνους έλειπε έκφραση του PSA. Αναφέρουμε εδώ την εξάπλωση του καρκίνου Έναρξη Cells (CIC) απευθείας από το Στάδιο Ι ανθρώπινο ιστό PRCA χωρίς επιλογή ή γενετικό χειρισμό. Η διάδοση των βλαστικών /προγονικών κυττάρων που μοιάζουν CR-PRCA προέρχεται από νωρίς ανθρώπινα καρκινώματα του προστάτη υποδηλώνει την ύπαρξη ενός υποπληθυσμού κυττάρων ανθεκτικών στη θεραπεία στέρηση ανδρογόνου και η οποία μπορεί να οδηγήσει το επακόλουθη εμφάνιση διαδίδονται CR-PRCA.

Παράθεση: Fiñones RR, Yeargin J, Λι Μ, Kaur AP, Cheng C, Sun P, et al. (2013) Early Human προστάτη αδενοκαρκινώματα Harbor ανδρογόνων-Ανεξάρτητη καρκινικά κύτταρα. PLoS ONE 8 (9): e74438. doi: 10.1371 /journal.pone.0074438

Επιμέλεια: Zoran Culig, Innsbruck Medical University, Αυστρία

Ελήφθη: 3η Μάη του 2013? Δεκτές: 1 Αυγούστου, 2013? Δημοσιεύθηκε: 25 Σεπτεμβρίου 2013

Copyright: © 2013 Fiñones et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Όλα τα ταμεία ήταν γενναιόδωρα παρέχεται μέσω του Ιδρύματος UC Σαν Ντιέγκο. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο αποκλεισμός των υποδοχέων των ανδρογόνων σηματοδότησης (AR) αντιπροσωπεύει την κύρια θεραπεία για τον προχωρημένο καρκίνο του προστάτη [1]. Παρ ‘όλα αυτά, πολλοί ασθενείς να εξελιχθεί σε μια θανατηφόρο φαινότυπο των «Ευνουχισμός-Resistant» τον καρκίνο του προστάτη (CR-PRCA). Όπως PRCA είναι ετερογενής [2], [3], υποθέσαμε ότι η πρώιμη PRCA μπορεί να περιέχει έναν πληθυσμό ανδρογόνο αδιάφορη καρκινικά κύτταρα που χρησιμεύει ως πρόδρομες ουσίες για CR-υποτροπιάζουσα ασθένεια. Ξεκινήσαμε την ταυτοποίηση των ανεξάρτητων ανδρογόνου κύτταρα από PRCA-προστατεκτομή δείγματα της πρώιμης, εντοπισμένη περιπτώσεις (Στάδιο-Ι), που περιέχεται εντός του προστάτη.

Η ύπαρξη των βλαστικών κυττάρων επιθηλιακής προστάτη είναι ευρέως αποδεκτή με βάση την έκτακτη αναγεννητική ικανότητα του προστάτη [4] – [6]. Ενώ ανδρογόνου απόσυρση επάγει απόπτωση του επιθηλίου του αυλού κυττάρων, τα βασικά κύτταρα παραμένουν ανέπαφα, επιτρέπει την ταχεία αναγέννηση κατόπιν αντικατάστασης ανδρογόνων και υποδεικνύοντας ότι τα βλαστικά κύτταρα του προστάτη κατοικούν στη βασική στοιβάδα κυττάρων. τα κύτταρα του αυλού του προστάτη έχουν δειχθεί ότι προκαλούν ανθρώπινο PRCA εξής υπερ-έκφραση συγκεκριμένων γονιδίων [7]. Αξίζει να σημειωθεί ότι τα βλαστικά /προγονικά κύτταρα δεν έχουν διαδοθεί σε ένα μη τροποποιημένο κράτος από τα πρώτα στάδια του CR-PRCA [8], [9]. Παρά την παρουσία του Καρκίνου κύτταρα έναρξης (CIC) σε αθάνατες κυτταρικές γραμμές που προέρχονται από PRCA μεταστατικό PRCA [10], ο ρόλος των επιθηλιακών βλαστικών /προγονικών κυττάρων για την παραγωγή του προστάτη CIC παραμένει ασαφής [11].

Current μοντέλα δείχνουν ότι PRCA αρχίζει με την ανάπτυξη της προστατικής ενδοεπιθηλιακής νεοπλασίας (ΡΙΝ), που γίνεται τοπικά επεμβατικές αδενοκαρκίνωμα, που ακολουθείται από μεταστατικό ανδρογόνο-εξαρτώμενη και, τέλος, μη εξαρτώμενου από ανδρογόνα καρκίνου του [4], [12], [13]. Χρησιμοποιώντας δείκτες κυτταρικής επιφάνειας, η απομόνωση του προστάτη CIC έχει αναφερθεί [14] – [16]. Στα ποντίκια, η εισαγωγή μόνιμα ενεργών κινάσης ΑΚΤ σε επιθηλιακά κύτταρα Sca-1-εμπλουτισμένο προστάτη οδήγησε σε την έναρξη του όγκου [17] και, σε ανθρώπινα κύτταρα, η υπερέκφραση του ΑΚΤ, ERG και AR στους αυλού κύτταρα καρκίνου του δημιουργείται προστάτη [7] . Σε δείγματα ανθρώπινου σταδίου Ι του προστάτη, 0,1% των κυττάρων του καρκίνου του προστάτη που εκφράζονται στελέχους /δείκτες προγονικών κυττάρων-παρόμοια, συμπεριλαμβανομένων CD44, CD133, CK5 /14 και ιντεγκρίνης α2β1 [18], [19]. Είναι σημαντικό, τα πρωτογενή κύτταρα PRCA μπορεί να αποθανάτισε από hTERT γονίδιο μεταφοράς, και εμφανίζουν υψηλό δυναμικό αυτο-ανανέωση [9], [20].

Αναφέρουμε εδώ την διάδοση της CIC απευθείας από το στάδιο Ι ανθρώπινο ιστό PRCA χωρίς επιλογή ή γενετικό χειρισμό. Μια συλλογή από 120 χειρουργικά δείγματα προστατεκτομή ιδρύθηκε, μεταξύ των οποίων 54 δείγματα ήταν αδενοκαρκινώματα. Ορμόνες και συνθήκες καλλιέργειας κυττάρων χωρίς ορό αναπτύχθηκαν για να επιτραπεί η ρουτίνα δημιουργία κυττάρων που εκφράζουν δείκτες βασικών κυττάρων του προστάτη και δείκτες κυττάρου /προγονικών στέλεχος, και τα οποία πολλαπλασιάστηκαν ως σφαίρες /σφαιροειδή σε καλλιέργειες εναιωρήματος. Επιπροσθέτως, το καρκίνωμα-προερχόμενα κύτταρα PRCA πολλαπλασιάστηκαν επιτυχώς από 30/43 από αυτές τις περιπτώσεις αδενοκαρκινώματος. Από αυτούς, οι καλλιέργειες PRCA κυττάρων που προέρχονται από 22 δείγματα αδενοκαρκινώματος εξετάστηκαν περαιτέρω με ορθοτοπική ξενομεταμόσχευση και βρέθηκε να παράγει τυπικό καρκίνους του προστάτη, ή αδιαφοροποίητα όγκων, αντίστοιχα, σε ορθοτοπική μοντέλα ξενομοσχεύματος σε ορμονικά άθικτη και ευνουχισμένοι ποντικοί SCID. Τα καλλιεργημένα κύτταρα είναι ανεξάρτητος από ανδρογόνο καρκινικών κυττάρων »Ευνουχισμός-Resistant» και ως εκ τούτου και την ικανοποίηση

in vitro

και

in vivo

κριτήρια της CIC. κύτταρα CR-PRCA αναπαράγεται όπως περιγράφεται εδώ μπορεί τώρα να χρησιμοποιηθεί για να αναλύσει τους μηχανισμούς της αυτο-ανανέωσης [21] – [23]., αλλαγές στην έκφραση γονιδίων, η επιλογή για τα νέα μεταλλάξεις, μεταστατική εξέλιξη, και θεραπευτικές αποκρίσεις

μέθοδοι

οι πειραματικές μέθοδοι που παρουσιάζονται σε μεθόδους S1.

Δήλωση Ηθικής

Όλα τα ανθρώπινα δείγματα ανώνυμα κωδικοποιημένα και λαμβάνεται σύμφωνα με UCSD IRB # 130397. Όλες οι διαδικασίες που εκτελούνται στο έργο που περιγράφεται σχολαστικά περιγράφεται στο UCSD-IRB και παρουσιάστηκαν, να αναθεωρηθεί και εγκριθεί από την ολομέλεια του Διοικητικού κριτική UCSD Θεσμική. Μια λεπτομερής ενημέρωση πακέτο συναίνεση που ήταν ειδικά γραμμένο για αυτή τη μελέτη ήταν σε μεγάλο βαθμό εξηγείται σε κάθε ασθενή δωρεά ιστών, πριν από τις κλινικές διαδικασίες και, όταν κατανοητή από και συμφώνησαν για κάθε ασθενή, δεόντως υπογεγραμμένη από τον κάθε ασθενή. Τα αρχεία αυτά είναι στο αρχείο στις αντίστοιχες κλινικές Τμήματα. Η όλη διαδικασία ήταν πλήρως τεκμηριωμένη σε έντυπη και ψηφιακή ως μέρος του κλινικά δεδομένα ασθενούς? Αυτά τα αρχεία αποθηκεύονται. Η ερευνητική ομάδα δεν είχε πρόσβαση, επί του παρόντος δεν έχει πρόσβαση και στο μέλλον δεν θα έχουν πρόσβαση σε οποιαδήποτε αναγνώριση ή κλινικά στοιχεία ούτε η παρακολούθηση των δεδομένων των ασθενών. Δεν υπήρχε προσωπικό επικάλυψη μεταξύ των κλινικών και των ερευνητικών ομάδων, οι δραστηριότητες που λαμβάνουν χώρα σε διαφορετικά κτήρια στην πανεπιστημιούπολη UCSD στο La Jolla. Συναινέσει ασθενείς εισήχθησαν στη μελέτη διαδοχικά, χωρίς οποιαδήποτε κατηγοριοποίηση, είτε σε κοινωνικοοικονομικές, φυλετικές, θρησκευτικές, θρεπτικά, περιβαλλοντική έκθεση ή παρόμοια βάσεις. Όλα τα δείγματα ιστού που μελετήθηκαν είχαν δωρίσει στο συμπέρασμα των κλινικών διαδικασιών προστατεκτομή. Οι διαδικασίες αυτές είναι, και έχουν σχολαστικά τηρούνται και έχουν εγκριθεί από την Επιτροπή Δεοντολογίας UCSD-IRB. Τα πρωτόκολλα διαδικασία είναι, και έχουν εκ νέου επισκέφθηκε και την εκ νέου άδεια από την επιτροπή UCSD-IRB σε ετήσια βάση. προστασία της ιδιωτικής ζωής και συναινεί ασθενούς λαμβάνονται πολύ σοβαρά στο UCSD.

Η δεοντολογική χρήση του ανοσοποιητικού ανεπαρκή ποντίκια για τη μεταμόσχευση ιστών ανασυνδυασμό και την ορθοτοπική μεταμόσχευση ER-λαμβάνονται ανθρώπινα κύτταρα καρκίνου προστάτη έχει ελεγχθεί και εγκριθεί από την UCSD IACUC αρχές μέσω του πρωτοκόλλου ζώο # S07410. Οι επιτροπές IACUC έχουν παρουσιαστεί με όλες τις πτυχές των πειραμάτων, συμπεριλαμβανομένης της πηγής των ανθρώπινων κυττάρων που μεταμοσχεύονται, ο ενημερωμένος συναινέσεις, κλπ και έχουν εγκριθεί το έργο σχετικά με τα δικαιώματα ηθική των ζώων και την ανθρωπιστική βάσεις.

Αποτελέσματα

η ανάπτυξη των καλλιεργειών επιθηλιακού πρωτογενών προστάτη

Μετά την διαλογή πολλών μέσων, παράγοντες ανάπτυξης, εξωκυτταρική μήτρα και την περιβαλλοντική τους συνδυασμούς, τα κύτταρα PRCA διαδόθηκαν από ανθρώπινο Στάδιο Ι του προστάτη καρκινώματα όπως περιγράφεται (βλέπε μεθόδους S1), με τη χρήση συνθετικό μέσο χωρίς ορό ή ανδρογόνα. Απλές αποικίες των επιθηλιακών κυττάρων παρατηρήθηκαν μέσα σε 3 ημέρες μετά την επίστρωση σε μέσο ανάπτυξης ( «Medium 6

+++»), και σε 7-9 ημέρες, ο αριθμός των αποικιών ήταν σταθερή. Αυτές οι καλλιέργειες πολλαπλασιάζονται για να σχηματίσουν επιθηλιακά, κυψελοειδή κύτταρα, τα οποία διατηρούνται κοντά κυττάρου-κυττάρου επαφή (Σχήμα 1Α), και τα οποία παρουσίασαν μια μικρή, συμπαγής ομάδα κυττάρων χαρακτηρίζονται προσωρινά ως Cancer Cell Cluster (CCC) (Σχήμα 1Β-D) . κυτταρικές αποικίες PRCA αρχικά διαιρείται με ένα χρόνο διπλασιασμού περίπου 20 h (Σχήμα 1 Ε). Οι καλλιέργειες ανακαλλιεργήθηκαν μέχρι περίπου το 8

ου διόδου ή -30 διπλασιασμούς πληθυσμού, στο οποίο σημείο τα κύτταρα άρχισαν να υιοθετούν ένα μεγάλο, πεπλατυσμένο μορφολογία και ήταν θετικά για γήρανση που σχετίζεται με β-γαλακτοσιδάση (Σχήμα 1 F). Τα αποτελέσματα των 43 από τις 54 περιπτώσεις διαγιγνώσκονται ως αδενοκαρκινώματα του προστάτη Gleason σκορ που κυμαίνονται από 6-9 συνοψίζονται (Πίνακας S1). Πίνακας S1 παραθέτει επίσης τον αριθμό των επιθηλιακών αποικιών που λαμβάνονται από κάθε ένα από τα δείγματα 30 αδενοκαρκίνωμα που απέδωσε επιθηλιακών αποικιών. Τα υπόλοιπα 13 δείγματα αδενοκαρκινώματος απέδωσε κανένα αποικίες και δεν μελετήθηκαν περαιτέρω.

(A) Τυπική κυτταρική μορφολογία φαίνεται, με την πλειοψηφία των κυττάρων που προέρχονται από πρωτογενή δείγματα PRCA εμφανίζοντας ένα σφιχτό, κηρήθρα μορφολογία. (Β-Δ) Τα παραδείγματα εμφανίζονται (βλέπε βέλη) των ημι-προσκολλημένη clusters, που ονομάζεται Clusters Cancer Cell (Επιτροπών CCC), καταγωγής μεμονωμένες αποικίες. Scalebar = 100 μm. (Ε) Η ανάπτυξη των κυττάρων PRCA από ένα μόνο CCC στις 3 χρονικά σημεία μετά την πρώτη παρατήρηση της αποικίας: 0, 24, και 48 ώρες, ποσοτικά με ανάλυση εικόνας. (F) Γήρανση δοκιμασία των κυττάρων σε 8

ου πέρασμα, που δείχνει θετική χρώση για γήρανση που σχετίζεται με β-γαλακτοσιδάση. Scalebar = 50 μm.

Η

Ως έλεγχοι, τα δείγματα που λαμβάνονται με διουρηθρική εκτομή και διαγνωστεί η καλοήθης υπερπλασία του προστάτη (ΚΥΠ) υποβλήθηκαν σε επεξεργασία και αναπτύχθηκαν ταυτόσημα με τα δείγματα αδενοκαρκινώματος. Μόνο 2 από 50 δείγματα διαγνώστηκαν ως περιπτώσεις καλοήθους υπερπλασίας του προστάτη που δημιουργούνται χαμηλό αριθμό (3-10) των κακώς-καλλιέργεια επιθηλιακών αποικιών.

Τα στοιχεία που παρουσιάζονται εδώ καταδεικνύουν την ύπαρξη των κυττάρων που μπορεί να αναπαραχθεί απευθείας από καρκίνο του προστάτη Στάδιο-Ι σε καθορισμένα μέσα που στερούνται ορό ή ανδρογόνα. Η διάδοση του ανεξάρτητου από ανδρογόνο και του καρκίνου που επάγει κύτταρα από νωρίς (στάδιο Ι) αδενοκαρκίνωμα ανθρώπινου προστάτη δεν έχει περιγραφεί προηγουμένως.

έκφρασης κυττάρου-δείκτη από κύτταρα PRCA

Early-πέρασμα κύτταρα PRCA επεκταθεί από μεμονωμένες αποικίες αναλύθηκαν με έμμεσο ανοσοφθορισμό για δείκτες προγονικών κυττάρων του προστάτη ιντεγκρίνης α2β1, CK5 /14, CD44 και CD133. πολιτισμών νωρίς πέρασμα περιέχονται τόσο ορατό συστάδες κυττάρων και μια διευρυνόμενη φωτοστέφανο των επιθηλιακών κυττάρων των απογόνων που εκφράζουν ιντεγκρίνη α2β1, CK5 /14 και CD44 (Σχήμα 2Α-C). έκφραση CD133 περιορίστηκε σε κύτταρα στα σφιχτά συμπλέγματα (Σχήμα 2D), αλλά σύντομα χάνεται μετά πέρασμα

Προστάτη CCC και γύρω επιθηλιακά κύτταρα του προστάτη PRCA εκφράζεται:. (Α) ιντεγρίνης α2β1 (κόκκινο)? (Β) υψηλού μοριακού βάρους κυτοκερατίνη (CK5 /14) (κόκκινο)? (C) CD44 (πράσινο)? και (Δ) CD133 (πράσινο). Πυρήνες ανιχνεύεται με DAPI (μπλε). Κυτταρομετρία ροής του ίδιου δεικτών παρουσιάζεται για ομαδοποιήθηκαν κύτταρα PRCA και Επιτροπών CCC: (Ε) ιντεγκρίνη α2β1 (-99% θετική)? (F) CK5 /14 (-48% θετική)? (G) CD44 (-98% θετική)? και (H) CD133 (~38% θετική). Έκφραση του CD133 μειώθηκε ραγδαία αργότερα μεταφορές αποικία, η οποία συσχετίζεται με προοδευτική αραίωση του CD133

+ Επιτροπών CCC, σε σχέση με την πιο ταχέως πολλαπλασιαζόμενα CD133

lo /-. Κύτταρα PRCA

Η

Με κυτταρομετρία ροής , κύτταρα PRCA εξέφρασαν ιντεγκρίνη α2β1 (Σχήμα 2Ε), υψηλού μοριακού βάρους (βασικοκυτταρικό καρκίνωμα) κυτοκερατίνη CK5 /14 (Σχήμα 2F), και CD44 (Σχήμα 2G). CD133 εκφράστηκε σε πρώιμο καλλιέργειες δίοδο (Σχήμα 2Η), αλλά η έκφραση χάθηκε κατά απόφυση σε φύλλα των επιθηλιακών κυττάρων. Ως εκ τούτου, το εύρος της έκφρασης CD133 με τους πολιτισμούς μας κυττάρων PRCA μειώθηκε γρήγορα από περίπου 50% σε πρόσφατα εκφυτευτεί αποικίες σε μη ανιχνεύσιμα επίπεδα στο πέρασμα του πολιτισμού 2 και άνω.

αποικίες κυττάρων PRCA προσδιορίστηκαν επίσης για προστάτη βλαστικά /προγονικά και δείκτες διαφοροποίησης. Διπλή χρώση για ρ63, Ck8 /18, και c-kit, μαζί με CD44, διεξήχθη. Η βασική ρ63 δείκτης κυττάρων κυρίως εντοπισμένη στον πυρήνα σε κύτταρα /CCC PRCA (Εικ. S1 Α), όπως βρίσκεται συνήθως σε φυσιολογικά κύτταρα βασική προστάτη. Αν και ρ63 τείνει να υποεκφράζεται σε αδενοκαρκινώματα [24], μερικές καλλιεργημένες κυτταρικές σειρές καρκινώματος προστάτη έχουν δειχθεί ότι εκφράζουν την πυρηνική p63 [25]. Επιπλέον, κυτταροπλασματική ρ63 έχει συσχετιστεί με τη θνησιμότητα του καρκίνου του προστάτη [26]. Καλλιεργημένα κύτταρα /CCC PRCA εξέφρασαν επίσης το δείκτη Ck8 διαφοροποίησης προστάτη (αυλού κυττάρων) /18 (Εικ. S1B), και c-kit (Εικ. S1c), το οποίο συν-εντοπισμένη με CD44. Καλλιεργημένα κύτταρα PRCA εκφράζεται ούτε χρωμογρανίνης Α ούτε PSA. Η εκπληκτική έλλειψη της έκφρασης PSA επιβεβαιώθηκε χρησιμοποιώντας 8 διαφορετικές PSA-ειδικά αντισώματα επί 22 διαφορετικές κυτταρικές καλλιέργειες PRCA (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Η έκφραση της αλδεϋδης αφυδρογονάσης (ALDH) βλαστικών κυττάρων-ειδικό ένζυμο

ΑΙ_ϋΗ, μια αποτοξίνωση ένζυμο υπεύθυνο για την οξείδωση αλδεϋδών σε καρβοξυλικά οξέα, έχει χρησιμεύσει ως ένα λειτουργικό σημειωτή [27], [28] για την παρουσία βλαστικών κυττάρων και CIC ​​σε μια ευρεία ποικιλία καρκίνων [29] – [31]. Στον καρκίνο του μαστού CIC, ο ισότυπος ALDH1A3 κυριαρχεί και είναι προβλεπτική μετάσταση [32], ενώ στον καρκίνο του προστάτη υπερισχύει ισότυπο ALDH7A1 [33]. Σε καλλιεργημένα κύτταρα PRCA μας, ALDH έντονα εκφράζεται (90,0% για Pr # 109), αλλά μειώθηκε σε 9,8% με την παρουσία της ΑΙ_ϋΗ ειδικής diethylaminobenzaldehyde αναστολέα (ϋΕΑΒ) (Σχήμα 3). Κύτταρα MCF7 χρησιμοποιηθεί ως ALDH-αρνητικό έλεγχο σε αυτά τα πειράματα (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Με την αύξηση του αριθμού πέρασμα, έκφραση ΑΙ_ϋΗ σε κύτταρα PRCA μειώθηκε, φθάνοντας λιγότερο από 1% μετά από 6 περάσματα (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

PRCA # 109 κύτταρα, tr.1 θρυψινοποιήθηκαν, αντέδρασε με το υπόστρωμα ALDH1A1 BODIPY- αμινοακεταλδεΰδης (ΒΑΑΑ). Η ϋΕΑΒ αναστολέας ALDH προστέθηκε σε ένα σωλήνα ελέγχου των ίδιων κυττάρων για να δείξει την ειδικότητα του ΑΙ_ϋΗ1 ενεργοποιημένης ΒΟϋΙΡΥ-φθορισμού ανίχνευση. Η διάμεση τιμή φθορισμού ΑΙ_ϋΗ1-σήμα των 3 × 10

5 μονάδες ανεστάλη -200 × από τον αναστολέα ϋΕΑΒ. 90,0% ΑΙ_ϋΗ1-φωτεινά κύτταρα (Α και C) μειώθηκαν σε 9,8% με την παρουσία του αναστολέα ΑΙ_ϋΗ ϋΕΑΒ (Β και D). Οι σχετικές dot-οικόπεδα φαίνεται στα δεξιά, και ένα διάγραμμα περιγράμματος σύγκριση της ALDH ενεργοποιούμενη φθορισμού και εκείνη των κυττάρων στα οποία η αντίδραση ανεστάλη από ϋΕΑΒ παρουσιάζεται παρακάτω (Ε).

Η

Επιπλέον , η έκφραση του ισοτύπου ALDH7A1 αποδείχθηκε με έμμεσο ανοσοφθορισμό σε 12 διαφορετικές καλλιέργειες καλλιεργημένες κυτταρικές PRCA δοκιμάστηκαν (Σχ. S2). Η έκφραση του ALDH7A1 ισοτύπου σε κύτταρα καλλιεργήθηκαν PRCA εδώ είναι συμβατό με τα στοιχεία της έκφραση σε ανθρώπινα PRCA και στα τμήματα ανοσοϊστολογία ανθρώπινων PRCA και οι μεταστάσεις τους [33].

Καλλιεργημένα κύτταρα PRCA δημιουργήσει εύκολα ανεξάρτητη από προσκόλληση σφαίρες /σφαιροειδή σε Matrigel καλλιέργειες

σε αντίθεση με τα διαφοροποιημένα κύτταρα, φυσιολογικά και καρκινικά-έναρξη βλαστικά /προγονικά κύτταρα πολλαπλασιάζονται για να σχηματίσουν σφαίρες /σφαιροειδή υπό συνθήκες αγκυροβόλιο ανεξάρτητα από τον πολιτισμό [34]. Τα προσκολλημένα κύτταρα PRCA τρυψινοποιήθηκαν σε μονά κύτταρα, πέρασε μέσα από ένα σουρωτήρι 40 μm, και 10

4 κύτταρα επιστρώνονται σε καλλιέργειες εναιωρήματος Matrigel. Αυτό είχε ως αποτέλεσμα την παραγωγή της καλλιέργειας σφαίρες σε Matrigel από & gt? 90% των αιωρούμενων μονά κύτταρα (Σχήμα 4), η οποία ήταν ανεξάρτητη από την Score Gleason (6-9) των δοτών καρκίνου. Μετά από χρώση πυρήνες κυττάρων με ϋΑΡΙ (4 ‘, 6-διαμιδινο-2-φαινυλινδόλη), ο αριθμός των κυττάρων ανά καλλιέργεια σφαίρα ποσοτικοποιήθηκε ως 88 ± 9,7 κύτταρα ανά αποικία (Εικ 4Α). Παραδείγματα σφαίρες σε καλλιέργεια εναιωρήματος Matrigel εμφανίζονται (Εικόνα 4Β) όπως είναι σφαίρες εναποτίθεται σε γυάλινα πλακίδια μικροσκοπίου με φυγοκέντρηση κυττάρων (Σχήμα 4C). Σφαίρες επέμενε στην έκφραση του ΑΙ_ϋΗ1, CD44, Ιντεγκρίνης α2β1, SSEA4 και TERT (δεν φαίνεται). Με διαδοχικές μεταβιβάσεις των προσκολλημένων κυττάρων PRCA σε αναλογία 1:03 υποκουλτούρα, μια μείωση του κλάσματος που παράγεται Matrigel σφαίρες, με & lt? 0,1% διατηρώντας αυτή την ικανότητα με το πέρασμα 7.

Χαμηλή διέλευση, προσκολλημένα κύτταρα PRCA (# 76 , tr 2) τρυψινοποιήθηκαν και εναιωρήθηκαν σε Matrigel σε μέσο 6

+++. Οι καλλιέργειες αιωρήματος αναπτύχθηκαν για 14 ημέρες και των σφαιρών πανομοιότυπες καλλιέργειες συλλέχθηκαν τις ημέρες 1, 4, 7, 9, 11 και 14. Οι καλλιέργειες υπέστησαν πέψη με δισπάση, σφαιροποιήθηκαν σε πλακίδια μικροσκοπίου με cytocentrifugation και σταθεροποιήθηκαν με μεθανόλη. (Α) Το μέγεθος των σφαιρών προσδιορίστηκε μετρώντας τα κύτταρα του & gt? 200 χρωματίζονται σφαίρες σε κάθε χρονικό σημείο. (Β) σφαίρες Πρώιμη και καθυστερημένη χρονικό σημείο φωτογραφήθηκαν κάτω από ένα ανεστραμμένο μικροσκόπιο. (C) Εκπρόσωπος συγκομίζονται σφαίρες αυξανόμενη 1, 4, 7, 11 και 14 ημέρες σε Matrigel πολιτισμούς, και κατατεθεί στις πλάκες μικροσκοπίου για την απεικόνιση, την καταμέτρηση και χρώση του αντισώματος.

Η

κύτταρα CR-PRCA εκφράζουν αντίστροφη τελομεράση μεταγραφάσης (TERT), ενώ τα φυσιολογικά κύτταρα επιθηλιακά ανθρώπινου προστάτη είναι τριτ-αρνητικά

TERT έκφραση από κύτταρα PRCA περιγράφεται εδώ προσδιορίστηκε με ανάστροφης μεταγραφάσης-αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (RT-PCR) (Σχήμα 5Α). Όλα τα 30 αδενοκαρκινώματα που απέφερε CR-PRCA καλλιεργημένα κύτταρα φαίνονται στον Πίνακα S1 εκφράζονται TERT RNA. RNA που εξάγεται από την ανθρώπινη κυτταρική γραμμή τεράτωμα NTERA χρησίμευσε ως τ-θετικός έλεγχος, ενώ τα κανονικά ανθρώπινα επιθηλιακά κύτταρα προστάτη (NPrEp) που προέρχεται από τους νέους δότες ήταν TERT-αρνητικά (n = 3).

(Α) TERT . ενίσχυση RT-PCR του mRNA που απομονώνεται από κύτταρα PRCA για την έκφραση της τελομεράσης ανάστροφης μεταγραφάσης (TERT) ένζυμο. Όλα τα 30 PrCaCell καλλιέργειες που δοκιμάστηκαν εξέφρασαν TERT ενώ κύτταρα NPrEp αυξηθεί από τρεις νέους χορηγούς δεν εκφράζουν το γονίδιο TERT. Η αθάνατη NTERA (φυσιολογικό ανθρώπινο τεράτωμα) κυτταρική γραμμή εχρησιμοποιήθη ως τριτο-θετικός έλεγχος. (Β) TMPRSSG-ERG. RT-PCR αποτελέσματα των PrCaCell πολιτισμών δεν αποδεικνύουν ενός mRNA σύντηξης TMPRSS2-ERG, ενώ τα κύτταρα του ανθρώπινου σπονδυλική μετάσταση του καρκίνου του προστάτη κυτταρική γραμμή vcap εκφράζουν το mRNA σύντηξης.

Η

Καλλιεργημένα CR-PRCA κύτταρα δεν εκφράζουν ανιχνεύσιμα επίπεδα του TMPRSS2-ERG RNA σύντηξης

παραμένει ασαφές εάν η έκφραση του mRNA σύντηξης TMPRSS2-ERG σε ένα καρκινικό κύτταρο του προστάτη χρησιμεύει ως σημαντική κινητήρια δύναμη για την ογκογόνο τις δυνατότητές του [33], ή αν λάβει χώρα το συμβάν σύντηξης

ως αποτέλεσμα

ενός κατάσταση των κυττάρων του όγκου που αποκρίνονται στο ανδρογόνο, όπως προτείνεται από την επαγωγή της εκδήλωσης σύντηξης σε φυσιολογικό προστάτη επιθηλιακά κύτταρα σε απόκριση σε ανδρογόνα [35], [36]. Ανεξάρτητα, από 30 ανεξάρτητα δείγματα PRCA καλλιεργημένα, όλα ήταν αρνητικά για την έκφραση του mRNA σύντηξης TMPRSS2-ERG με RT-PCR (Σχήμα 5Β). Δεδομένου ότι το RNA σύντηξης TMPRSS2-ERG μπορεί να είναι δύσκολο να ανιχνευθούν [37], χρησιμοποιήσαμε πολλαπλές σειρές ολιγο ενίσχυση και το κιτ εξαιρετικά ευαίσθητη ενίσχυση MyTaq (BIOLINE ΗΠΑ, Τόντον, ΜΑ) (Πίνακας S2). Η ανθρώπινη κυτταρική γραμμή VCAP, το οποίο εκφράζει ένα mRNA συγχωνεύσεως TMPRSS2-ERG, επιβεβαιώθηκε ως εκφράζουν το μετάγραφο σύντηξης χρησιμοποιώντας μόνο 1 ng του απομονωμένου κυτταρικού RNA (Πίνακας S2). Το ενισχυμένο mRNA σύντηξη κυττάρων VCAP επιβεβαιώθηκε με αλληλούχιση του προϊόντος ενίσχυσης DNA [38] (δεν φαίνεται). Συνοπτικά, τα κύτταρα CR-PRCA καλλιεργήθηκαν εδώ δεν εκφράζουν ανιχνεύσιμο RNA σύντηξης TMPRSS2-ERG.

ορθοτοπική εμφύτευση των κυττάρων PRCA

Η μείωση των αριθμών των κυττάρων PRCA είχαν εμφυτευμένα απευθείας στο πρόσθιο προστάτη του παραλήπτη SCID /μπεζ ποντίκια και σε ποντίκια χειρουργικά και χημικώς ευνουχισμένο. Σε μερικά πειράματα, τα κύτταρα PRCA πρώτα επισημανθεί με EGFP από μόλυνση των καλλιεργημένων κυττάρων με ένα ρετροϊό που κωδικοποιεί MSCV EGFP [39].

In vivo

απεικόνιση των ποντικών SCID ξενο-μεταμόσχευσις EGFP-επισημασμένα κύτταρα που δημιουργείται ένα σαφές σήμα φθορισμού δύο εβδομάδες μετά την εμφύτευση στη θέση πρόσθιο μόσχευμα προστάτη (Σχήμα 6Α). Αυτά PRCA κύτταρα αναπτύσσονται σε ένα τοπικά επεμβατικές, ηθμοειδή (αδένας-in-αδένα) σχέδιο συνάδει με χαμηλή Gleason Βαθμού PRCA (Σχήμα 6Β και 6C). Αυξημένη κυτταροβρίθεια του στρώματος δίπλα στο συγκρότημα των αδένων παρατηρήθηκε, μαζί με την κεντρική νέκρωση στους αυλούς και μια άτακτη μίγμα βασικών και cuboidal επιθηλιακά κύτταρα (Σχήμα 6D-G). Είναι ενδιαφέρον, απλό αδένες του όγκου εκφράζεται ρ63 σε βασικό στρώμα κυττάρων τους (Σχήμα 6D), ενώ σε ιστολογικά πιο πολύπλοκες αδένες, έκφραση ρ63 με βασικά κύτταρα μειώθηκε και άτακτη (Σχήμα 6Ε).

(Α)

In vivo

απεικόνιση του EGFP επισημασμένου PRCA κύτταρα /CCC εμφυτεύτηκαν στα πρόσθια προστάτες του παραλήπτη SCID ποντίκια δείχνει εντοπισμό των μοσχευμάτων δύο εβδομάδες μετά μεταμόσχευση εντός των καψουλών πρόσθιο προστάτη. (Β) χρώση αιματοξυλίνης-ηωσίνης της ανάπτυξης του όγκου στον προστάτη και ουρογεννητικών οργάνων. (C) Μεγαλύτερη μεγέθυνση των αδένων ηθμοειδή προτείνει αρχική ανάπτυξη του διηθητικού καρκίνου του προστάτη. Παρατηρήθηκαν οι δύο πιο απλή και πιο πολύπλοκες αδένες. (Δ) Διάδοση δείκτη p63-βάφονται βασική στιβάδα κυττάρων σύνθετων αδένες. (Ε) έκφραση p63 εμφανίζεται άτακτη σε ιστολογικά υψηλότερο αδένες βαθμού. (F) Απλούστερη αδένες εκφράζουν την CK5 δείκτη /14, ενώ (G) αδένες που φαίνεται να προχωρούν σε ηθμοειδή καρκίνο του προστάτη μόνο σποραδικά εκφράζουν υψηλού μοριακού βάρους κυτοκερατίνη.

Η

Η ιστολογική εμφάνιση ενός τοπικού καρκίνου επάγεται σε ένα SCID ποντίκι ορθοτοπικά ξενομεταμοσχευμένων με 200 κύτταρα PRCA συγκρίνεται με εκείνη του δότη σταδίου Ι δείγμα καρκινικού ιστού (Εικ. S3). Και οι δύο όγκοι που αποτελούνται από μικρές αδένες στην οποία τα κύτταρα με εξέχοντα πυρήνια είναι συχνές. Αδένα δομές συχνά back-to-back ή σχηματισμούς αδένα-μέσα-αδένα. PRCA κυττάρων που προκαλείται από καρκίνους σε άθικτα SCID ποντικούς δέκτες παρουσίασε μια ιστολογική εμφάνιση που δεν μπορούσε να διακριθεί από τον καρκίνο του προέλευση. Σε ευνουχισμένα ποντίκια, ελάχιστα διαφοροποιημένες και να διαδίδονται ευρέως όγκους προέκυψε. Σε αντίθεση, μέχρι 10

5 φυσιολογικά επιθηλιακά κύτταρα ανθρώπινου προστάτη (η = 3) που αναπαράχθηκαν πανομοιότυπα και μεταμοσχεύθηκαν ορθοτοπικά σε πρόσθια προστάτες του SCID και ευνουχισμένα ποντίκια SCID δεν παρήγαγε την ανάπτυξη του όγκου σε ποσοστό έως 30 εβδομάδες.

Συζήτηση

προς το παρόν, το στάδιο I αδενοκαρκίνωμα του προστάτη θεωρείται ότι είναι ορμονο-εξαρτώμενων και ορμόνη αποκρίνονται? Συνήθως, αυτά τα καρκίνοι θεραπεύονται με θεραπείες στέρηση ανδρογόνου (ADT). Πολλοί ασθενείς προχωρήσει στο θανατηφόρο φαινότυπο του ευνουχισμού ανθεκτικά (CR) PRCA, ενδεχομένως υπονοώντας την «μεταγωγή» καρκινικών κυττάρων από ορμόνη-εξάρτηση στην ορμόνη-ανεξαρτησία. Εναλλακτικά, τα ανήλικα πληθυσμούς κυττάρων μπορεί να έχει ιδιότητες που τους επιτρέπουν να επιβιώσουν ADT με το δυναμικό του πολλαπλασιαστικού επαναλαμβανόμενες CR-πρωτοβάθμια ή μεταστατική νόσο.

Σε αυτή τη μελέτη, έχουμε διαδίδεται «Ευνουχισμός Resistant» επιθηλιακά κύτταρα απευθείας από το στάδιο -Ι ιστό ανθρώπινου καρκίνου του προστάτη με Gleason βαθμολογίες που κυμαίνονται από 6 έως 9 (Πίνακας S1). Χρησιμοποιώντας τις συνθήκες που περιγράφονται, οι αποικίες των επιθηλιακών κυττάρων ανδρογόνα ανεξάρτητο αυξήθηκε από από 30/43 περιπτώσεις (70%) του αδενοκαρκινώματα, 22 εκ των οποίων μελετήθηκαν με ορθοτοπική xenotransplanation σε SCID ποντίκια. PRCA αριθμοί αποικιών κυττάρων τυπικά κυμαίνονταν από -40 έως 500 ανά 10

7 κύτταρα εισόδου (50 mg αρχικού ιστού καρκίνου), μια συχνότητα 0,0004 έως 0,005%, αν και ορισμένα από τα καρκινώματα αποικίας που παράγουν δημιουργούνται πολύ λίγα αποικίες (Πίνακας S1).

αποικίες προσκολλημένα κύτταρα πολλαπλασιάστηκαν PRCA απουσία ανδρογόνων και ορού, αλλά έκανε απαιτούν bFGF, EGF και εκχύλισμα υπόφυσης. αποικίες επιθηλιακά PRCA προήλθε από σφιχτό κέντρα των 10-30 κυττάρων, που ορίζονται Clusters Cancer Cell (CCC) (Σχήμα 1), η οποία έχασε CD133 αλλά εξέφρασε c-kit, p63, και E-cadherin, δείκτες των βασικών κυττάρων στον προστάτη [40 ]. Οι δείκτες που εκφράζονται από PRCA κύτταρα /CCC – CD44, CD133, CK5 /14, c-kit, ιντεγκρίνης α2β1, ΑΙ_ϋΗ, SSEA4 και Ε-καδερίνη – είναι χαρακτηριστικά των βασικών κυττάρων και του προστάτη βλαστικών /προγονικών κυττάρων [14], [41 ] -. [43], γεγονός που υποδηλώνει ότι η CCC μοιάζει με επιθηλιακά θέση του προστάτη βλαστικών κυττάρων

η έκφραση του CR-PRCA καλλιεργημένα κύτταρα του p63 και μερική απώλεια της στην παραγωγή πιο σύνθετων

in vivo

αδένες εξής ξενομεταμόσχευση (Εικ 6Ε) δείχνει ότι τα καλλιεργημένα κύτταρα CR-PRCA μπορεί να διαφέρουν μόνο μετρίως από τα κανονικά αντίστοιχά τους στον ανθρώπινο προστάτη. Παρ ‘όλα αυτά, η σημαντική

in vivo

ογκογονικότητα των κυττάρων και ξεκάθαρη έκφραση τους από TERT υποδηλώνει ότι αυτά τα κύτταρα CR-PRCA καλλιεργημένα από καρκίνο του προστάτη σταδίου Ι-αντιπροσωπεύουν μια πρώιμη εκδήλωση της καρκινογόνου διεργασίας. Πράγματι, θα είναι μεγάλο ενδιαφέρον στο μέλλον πειράματα για να συγκρίνει την έκφραση του καρκίνου-σχετικών γονιδίων μεταξύ των κυττάρων Cr-PRCA που περιγράφονται εδώ και ανθρώπινα κύτταρα NPrEp.

ορθοτοπική ξενομεταμόσχευση κυττάρων PRCA (Σχήμα 6) και την επακόλουθη όγκου επαγωγή επιβεβαίωσε τη θεμελιώδη φαινότυπο καρκίνου των καλλιεργημένων κυττάρων PRCA. Παρ ‘όλα αυτά,

in vivo

μεταμόσχευση μικρών αριθμών καλλιέργεια απομονώνονται κύτταρα PRCA σε ποντίκια SCID υπό διαφορετικές συνθήκες οδήγησαν σε διάφορα συμπεράσματα. Πρώτον, τα κύτταρα μεταμοσχεύονται σε PRCA κολλαγόνο ή Matrigel στον πρόσθιο προστάτη ποντικών SCID που παράγονται συγκρότημα, back-to-back ηθμοειδή μοτίβο-αδένες που εισέβαλαν τη γύρω στρώμα, χαρακτηριστικό της χαμηλής καρκίνου του προστάτη Gleason Βαθμού. Κατά τη διάρκεια της περιόδου παρατήρησης 12 εβδομάδα για τις othotopic ξενομοσχεύματος πειράματα, δεν παρατηρήθηκε μετάσταση. Ξενομεταμόσχευση όλων των 22 καλλιεργημένων κυτταροκαλλιέργειες CR-PRCA οδήγησε σε απλές ή πιο σύνθετες αδένες καρκίνου (Σχήμα 6Ε /F). Ωστόσο, η πιθανή συσχέτιση μεταξύ της Σκορ Gleason του αρχικού καρκίνου (Πίνακας S1) και την πολυπλοκότητα των ξενομεταμοσχευμένων όγκων σε SCID αποδέκτες θα είναι το θέμα της μελλοντικής έρευνας. Η υποδόρια μεταμόσχευση όσο 5 × 10

5 κύτταρα PRCA σε άθικτα ή ευνουχισμένα ποντίκια SCID δεν είχε ως αποτέλεσμα τη δημιουργία όγκων (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα), τονίζοντας το μικροπεριβάλλον εξαρτώμενη φύση των κυττάρων PRCA αναπτύχθηκαν από νωρίς καρκινώματα του προστάτη .

Δεύτερον, η μεταμόσχευση χρησιμοποιώντας ουρογεννητικού μεσεγχύματος (UGM) μοντέλο ξενομοσχεύματος ανασυνδυασμό [44], [45] κάτω από τη νεφρική κάψα του SCID ποντικών (Σχήμα S4) είχε ως αποτέλεσμα απλές αδένες αποτελείται κυρίως από cuboidal κυττάρων τα οποία παρουσιάζονται ως βασικά κύτταρα που εκφράζουν ρ63 και E-cadherin. Μερικοί από τους αδένες ανέπτυξε ένα δεύτερο στρώμα αυλού κύτταρα που δεν είχαν έκφραση ρ63 αλλά διατήρησε E-cadherin, παρόμοια με τη φυσιολογική ανάπτυξη του προστάτη [46], [47]. Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η εμβρυϊκή UGM στον ιστό ξενομοσχεύματος-ανασυνδυασμός που επιβάλλονται κανονική πολλαπλασιαστικά σήματα για το στάδιο-Ι-προερχόμενα κύτταρα PRCA [48], [49].

Η έλλειψη έκφρασης PSA από τα καλλιεργημένα κύτταρα PRCA περιγράφεται εδώ και με ορθοτοπικά καρκίνους ξενομεταμόσχευση επαγόμενη τους ήταν απροσδόκητη. Μια άλλη έκπληξη ήταν ότι αυτά τα καλλιεργημένα κύτταρα PRCA τελικά senesced παρά έκφραση της TERT. κύτταρα PRCA πάντα διαφοροποιούνται και senesced μετά από περίπου 8 μεταβιβάσεις σε πολιτισμό, γεγονός που υποδηλώνει ότι, ελλείψει του κατάλληλου μικροπεριβάλλοντος /εξειδικευμένη αυτά τα κύτταρα ήταν θνητός. Ωστόσο, αυτά τα ίδια τα κύτταρα ήταν προφανώς αθάνατα

in vivo

παρουσία μικροπεριβάλλον του προστάτη τους, όπως αποδεικνύεται από την ορθοτοπική xenotransplantion του -200 κύτταρα PRCA, με αποτέλεσμα ένα φορτίο του καρκίνου του & gt? 20 gm, που αντιστοιχεί σε ~ 25 κυττάρων διπλασιασμούς. Ως εκ τούτου, αυτο-ανανέωση των κυττάρων CICs CR-PRCA φαίνεται να είναι υπό όρους, που απαιτούν ένα κατάλληλο μικροπεριβάλλον. Πράγματι, ο κοινός ορισμός της CIC αγκαλιάζει ένα αθάνατο φαινότυπο [50], όπως CICs έχουν συνήθως έχουν απομονωθεί από πλήρως προχωρήσει και /ή μεταστατικών καρκίνων [51] – [53]. Επιπλέον, σε ευνουχισμένους ποντικούς ορισμένα καλλιεργημένα κύτταρα CR-PRCA που ορθοτοπικά ξενομεταμοσχευμένων στον πρόσθιο προστάτη των ποντικών SCID έχουν αναπτυχθεί συνεχώς μέχρι το ποντικοί έπρεπε να θυσιαστούν ως μετέφεραν ένα κοιλιακό φορτίο όγκου ίση με το βάρος του ποντικιού (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα ).

Η παρουσία του CR-προστάτη καρκινικά κύτταρα διαθέτουν ένα φαινότυπο βλαστοκυττάρων στις αρχές του καρκίνου του προστάτη είναι συνεπής με πρόσφατα ευρήματα [54] ότι το έγγραφο αυτό η συστηματική αύξηση της PRCA βλαστικών /προγονικών κυττάρων κατά τη διάρκεια της ADT των ασθενών PRCA, εξηγώντας πώς τρέχουσα ADT μπορεί να οδηγήσει σε μια ανεπιθύμητη επέκταση ενός κυτταρικού πληθυσμού PRCA αρχέγονων /προγονικών με την αποτυχία της θεραπείας. Τα ευρήματά μας υποδηλώνουν ότι CICs κυττάρων CR-PRCA που υπάρχουν σε περισσότερο από το ήμισυ της κλάσης ασθενούς Στάδιο-Ι που εξετάστηκαν μπορεί να σχετίζεται με την αποτυχία της θεραπείας που περιγράφεται από άλλους [54].

Άλλοι ερευνητές έχουν απομονωθεί υποθετικό PRCA βλαστικών κύτταρα χρησιμοποιώντας μία τροποποιημένη Hoechst 33342 δοκιμασία εκροής χρωστικής προς απομόνωση πλευρά-πληθυσμών εμπλουτισμένων υποθετικών βλαστικών κυττάρων από κακοήθη ιστό προστάτη [55] – [58]. Μια δεύτερη προσέγγιση έχει εξετάσει την ύπαρξη ενός βλαστικού κυττάρου ανεξάρτητου από ανδρογόνα που μπορούν να οδηγήσουν σε ανδρογόνο-εξαρτώμενη, πλήρως διαφοροποιημένα αυλού κύτταρα μέσω ενός πληθυσμού διέλευσης ενισχύει θετικά για έκφραση του CK5 /14, CK18, CD44, ABCG2, CD133, και ιντεγκρίνη α2β1 [14], [59], [60]. Μία τρίτη προσέγγιση έχει ερευνήσει τη αθανατοποίηση των βλαστικών κυττάρων του προστάτη μέσω της αναγκαστικής έκφραση της ανθρώπινης τελομεράσης (hTERT) [9], [20], [41], [61]. Τέλος, έχουν τα καρκινικά κύτταρα-κίνηση ανθρώπινου προστάτη έχουν περιγραφεί που εμφανίζουν ιδιότητες του στελέχους που μοιάζει με αυξημένη δραστηριότητα του NF-κΒ [62]. Η σχέση μεταξύ των κυττάρων PRCA που αναφέρονται εδώ, και τους κυτταρικούς πληθυσμούς που περιγράφονται από άλλους ερευνητές, θα απαιτήσει περαιτέρω πειραματική έρευνα.

Εν περιλήψει, τα δεδομένα που παρουσιάζονται καταδεικνύουν την παρουσία των καρκινικών κυττάρων, στα πρώτα στάδια της ανθρώπινης αδενοκαρκινώματα του προστάτη , που μπορεί να πολλαπλασιαστεί σε καθορισμένα μέσα που στερούνται ανδρογόνα. Οι μοναδικές συνθήκες καλλιέργειας που παρουσιάζεται εδώ και η σχετική ευκολία του πολλαπλασιασμού της πολλαπλασιαστικής κυτταρικών πληθυσμών ανεξάρτητου από ανδρογόνα μπορεί να αναμένεται να διεγείρουν περαιτέρω έρευνα. Σημαντικά, αυτές οι μέθοδοι μπορούν να εφαρμοστούν σε μικρό δείγματα βιοψίας, επιτρέποντας χαρακτηρισμός των θεωρούμενων CR-προστάτη καρκινικών κυττάρων και τη διευκόλυνση τεκμηριωμένων κλινική διαχείριση νωρίς στην ασθένεια.