Αφηρημένο

Ιστορικό

Η ρεσβερατρόλη (3, 4, 5 tri-hydroxystilbene), ένα φυσικά πολυφαινόλες, εμφανίζει αντι-φλεγμονώδη, αντιοξειδωτικό, καρδιοπροστατευτικές και αντικαρκινικές δραστηριότητες. Δείξαμε πρόσφατα ότι η ρεσβερατρόλη μπορεί να ενισχύσει το δυναμικό επαγωγής απόπτωσης του TRAIL σε καρκινικά κύτταρα του προστάτη μέσω πολλαπλών μηχανισμών

in vitro

. Ως εκ τούτου, η παρούσα μελέτη σχεδιάστηκε για να επαληθεύσει αν η ρεσβερατρόλη μπορεί να ενισχύσει το δυναμικό επαγωγής απόπτωσης από TRAIL σε ένα μοντέλο ξενομοσχεύματος καρκίνου του προστάτη.

Μεθοδολογία /Κύρια Ευρήματα

Η ρεσβερατρόλη και TRAIL και μόνο ανέστειλε την ανάπτυξη PC-3 ξενομοσχεύματα σε γυμνούς ποντικούς με αναστολή του πολλαπλασιασμού των καρκινικών κυττάρων (PCNA και Ki67 χρώση) και επαγωγή απόπτωσης (χρώση TUNEL). Ο συνδυασμός της ρεσβερατρόλης και TRAIL ήταν πιο αποτελεσματική στην αναστολή της ανάπτυξης του όγκου από ό, τι μόνο παράγοντα μόνο του. Σε ξενομόσχευμα όγκων, η ρεσβερατρόλη ρυθμίζεται προς τα πάνω τις εκφράσεις του TRAIL-R1 /DR4, TRAIL-R2 /DR5, Βαχ και ρ27

/K ΙΡ1, και ανέστειλε την έκφραση του Bcl-2 και κυκλίνης D1. Η αγωγή των ποντικών με ρεσβερατρόλη και TRAIL μόνη ανέστειλε την αγγειογένεση (όπως αποδεικνύεται από μείωση του αριθμού των αιμοφόρων αγγείων, και VEGF και VEGFR2 θετικά κύτταρα) και δείκτες της μετάστασης (ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9). Ο συνδυασμός της ρεσβερατρόλης με TRAIL περαιτέρω ανέστειλε αριθμός των αιμοφόρων αγγείων σε όγκους, και κυκλοφορεί υποδοχέα ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα 2-θετικά ενδοθηλιακά κύτταρα από απλός παράγων μόνος. Επιπλέον, η ρεσβερατρόλη ανέστειλε την κυτταροπλασματική φωσφορυλίωση FKHRL1 καταλήγοντας σε αυξημένη ενεργοποίηση του όπως αποδεικνύεται από την αυξημένη δραστηριότητα δέσμευσης DNA.

Συμπεράσματα /σημαντικότητα

Αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι η ρεσβερατρόλη μπορεί να ενισχύσει το δυναμικό επαγωγής απόπτωσης TRAIL ενεργοποιώντας FKHRL1 και γονιδίων-στόχων της. Η ικανότητα της ρεσβερατρόλης να αναστέλλει ανάπτυξη όγκου, μετάσταση και την αγγειογένεση, και να ενισχύσει το θεραπευτικό δυναμικό του TRAIL υποδηλώνει ότι η ρεσβερατρόλη μόνη της ή σε συνδυασμό με TRAIL μπορούν να χρησιμοποιηθούν για τη διαχείριση του καρκίνου του προστάτη

Παράθεση:. Ganapathy S, Chen Q, Singh KP, Shankar S, Srivastava RK (2010) Η ρεσβερατρόλη Ενισχύει την αντικαρκινική δραστικότητα του TRAIL στον καρκίνο του προστάτη ξενομοσχεύματα μέσω της ενεργοποίησης των FOXO Μεταγραφή Factor. PLoS ONE 5 (12): e15627. doi: 10.1371 /journal.pone.0015627

Επιμέλεια: Hiranmoy Das, Το Ιατρικό Κέντρο του Πανεπιστημίου του Οχάιο, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 19 Σεπτεμβρίου 2010? Αποδεκτές: 17 του Νοέμ του 2010? Δημοσιεύθηκε: 28η Δεκεμβρίου 2010

Copyright: © 2010 Ganapathy et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Οι συγγραφείς δεν έχουν καμία υποστήριξη ή χρηματοδότηση για να αναφέρετε

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

η ρεσβερατρόλη (3, 4, 5, τρι- hydroxystilbene), ένα φυσικό πολυφαινόλη, επιδεικνύει πλειοτροπική οφέλη υγείας, συμπεριλαμβανομένων αντιφλεγμονώδη, αντιοξειδωτική, καρδιοπροστατευτικές και κατά του όγκου δραστηριότητες [1], [2], [3], [4]. Επί του παρόντος, πολυάριθμες προκλινικές ευρήματα δείχνουν ρεσβερατρόλης ως μια πολλά υποσχόμενη παράγων για την πρόληψη ή /και θεραπεία του καρκίνου. Ως δυνητική αντι-καρκινικό παράγοντα, η ρεσβερατρόλη έχει αποδειχθεί ότι αναστέλλουν ή επιβραδύνουν την ανάπτυξη διαφόρων καρκινικών κυττάρων

in vitro

και εμφυτευμένων όγκων in vivo [5], [6], [7], [8] , [9]. Η ρεσβερατρόλη έχει αποδειχθεί ότι αναστέλλουν την ενεργοποίηση του JAK2-STAT3, Src-STAT3, ΑΚΤ και ΙΚΚ-ΝΡκΒ οδούς και να επάγουν απόπτωση σε αρκετές καρκινικές κυτταρικές γραμμές [10], [11], [12], [13]. Έχουμε αποδείξει πρόσφατα ότι η ρεσβερατρόλη μειωτικά την έκφραση της Bcl-2, Bcl-X

L και survivin και ρυθμίζεται προς τα πάνω την έκφραση του Bax, Bak, Puma, Noxa, και ΒΙΜ και των υποδοχέων θανάτου (TRAIL-R1 /DR4 και ρυμουλκουμένων R2 /DR5) [1], [14], [15]. Επιπλέον, Θεραπεία του καρκίνου του προστάτη κυττάρων με ρεσβερατρόλη είχε σαν αποτέλεσμα την παραγωγή δραστικών μορφών οξυγόνου (ROS), μετατόπιση του Bax στα μιτοχόνδρια και την επακόλουθη πτώση του δυναμικού της μιτοχονδριακής μεμβράνης, η απελευθέρωση των μιτοχονδριακών πρωτεϊνών (κυτόχρωμα c, Smac /DIABLO, και ΟΕΕ) να κυτοσόλιο , η ενεργοποίηση του τελεστή κασπάσης-3 και κασπάσης-9, και επαγωγή της απόπτωσης [1], [14], [15]. Η ρεσβερατρόλη που προκαλείται από την παραγωγή ROS, η δραστικότητα κασπάσης-3 και την απόπτωση ανεστάλησαν από Ν-ακετυλοκυστεΐνη, γεγονός που υποδηλώνει την παραγωγή ROS, τουλάχιστον εν μέρει, παίζει ένα ρόλο στη διαμεσολάβηση αντικαρκινική δραστηριότητες της ρεσβερατρόλης [1], [14], [15]. Η ρεσβερατρόλη ενισχυθεί το δυναμικό επαγωγής απόπτωσης του TRAIL σε κύτταρα PC-3 και ευαισθητοποιημένα TRAIL-ανθεκτικά κύτταρα καρκίνου του προστάτη LNCaP

in vitro

[1], [14], [15]. Συνολικά, αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι η ρεσβερατρόλη μπορεί να ρυθμίσει πολλαπλές οδούς σηματοδότησης και κατέχει πολλά θεραπευτικά οφέλη.

ΡΙ3Κ σηματοδότηση διαδραματίζει κεντρικό ρόλο σε ενδοκυτταρικά μονοπάτια μεταγωγής σήματος που εμπλέκονται στον κυτταρικό μετασχηματισμό, την κυτταρική ανάπτυξη, και ογκογένεση [16], [ ,,,0],17]. Η απενεργοποίηση του ΑΚΤ καταλήγει σε αποφωσφορυλίωση και ενεργοποίηση των παραγόντων μεταγραφής FOXO, αναφέρθηκε ότι διαμεσολαβούν διακοπή του κυτταρικού κύκλου, την επιδιόρθωση του DNA, και η απόπτωση [18], [19]. Αυτοί οι παράγοντες μεταγραφής, ανήκουν στην «O ‘υποομάδα /forkhead οικογένειας μεταγραφή παράγοντα φτερωτό-έλικα, αποτελείται κυρίως από τέσσερα μέλη FOXO1, FOXO3a, FOXO4 και FOXO6 [20]. πρωτεΐνες FOXO είναι εξελικτικά συντηρημένες μεταγραφικών παραγόντων που εμπλέκονται σε διάφορες βασικές κυτταρικές λειτουργίες, λειτουργώντας ως καταληκτικό σημείο για την μεταγραφική προγράμματα που εμπλέκονται στην απόπτωση, αντίδραση στο στρες και τη μακροζωία [21], [22]. Από κατάργηση της λειτουργίας FOXO συχνά παρατηρείται στον καρκίνο του ανθρώπου, η επανενεργοποίηση των πρωτεϊνών FOXO θα είναι μια ελκυστική στρατηγική για τη θεραπεία του καρκίνου και την πρόληψη. Οι πρωτεΐνες FOXO ενσωματωθούν ρυθμιστικά εισόδους από μια ποικιλία από οδούς σηματοδότησης ανάντη, το σημαντικότερο σε απόκριση σε παράγοντα ανάπτυξης και το άγχος σηματοδότηση [23]. Πρόσφατα, οι παράγοντες FOXO καθιερωθεί ως καταστολείς όγκων, προάγοντας την μεταγραφή των προ-αποπτωτικών μορίων όπως FasL και Bim όταν η οδός ΡΙ3Κ /ΑΚΤ ρυθμίζεται προς τα κάτω λόγω της θρεπτικής ουσίας ή ορό ασιτίας και κυτταρικό στρες [24], [25]. Τρίκλινο μοντέλα νοκ-άουτ το ποντίκι αποδειχθεί τις ιδιότητες καταστολής του όγκου των FOXOs, όπως ποντίκια ταυτόχρονα στερούνται τα βασικά μέλη της FOXO υποοικογένεια των θηλαστικών, FOXO1, FOXO3a και FOXO4, είναι επιρρεπείς στην ανάπτυξη αιμαγγειώματα και λεμφοϋπερπλαστικές νόσους [26]. Αντίθετα, το άτομο ή σε συνδυασμό αδρανοποίηση των FOXO1, FOXO3a ή FOXO4 οδήγησε σε λιγότερο σοβαρό φαινότυπο, υποστηρίζοντας την ιδέα των λειτουργικών απολύσεων αυτών των παραγόντων FOXO [26]. Επιπλέον, η αναγκαστική έκφραση FOXO έχει αποδειχθεί ότι αναστέλλουν την ογκογένεση σε μοντέλα ξενομοσχεύματος σε γυμνά ποντίκια [27], [28]. Ως εκ τούτου, η επανενεργοποίηση του FOXO με βάση όγκου ιδιότητες καταπιεστής του θεωρείται ως μια πολύ ελκυστική στρατηγική για την καταπολέμηση του καρκίνου. Δεδομένου ότι οι πρωτεΐνες FOXO αναφέρθηκαν ότι είναι κρίσιμη μεσολαβητές απόπτωσης που επάγεται από αντικαρκινικά φάρμακα, μπορούμε υποτεθεί ότι η έκφραση FOXO ή μεταγραφική δραστηριότητα θα μπορούσε να είναι σημαντικό γεγονός στη διαμεσολάβηση των δράσεων της ρεσβερατρόλης.

TNF που σχετίζονται με συνδέτη που επάγει απόπτωση (TRAIL ) έχει δειχθεί ότι TRAIL-R1 /DR4 και TRAIL-R2 /DR5 [29]. Εμείς και άλλοι έχουν δείξει ότι το TRAIL μπορεί να διεγείρει απόπτωση σε διάφορους τύπους καρκινικών κυττάρων [29], [30], [31], [32], [33]. Με βάση τα προκλινικά δεδομένα, φαίνεται ότι TRAIL έχει μεγάλη υπόσχεση ως ένας επιλεκτικός αντικαρκινικό παράγοντα [31], [32]. Η ρεσβερατρόλη έχει αποδειχθεί ότι ενισχύει το θεραπευτικό δυναμικό του TRAIL

in vitro

[14], [34]. Οι αλληλεπιδράσεις της ρεσβερατρόλης και TRAIL μπλοκαρίστηκαν με είτε επικρατούσα αρνητική FADD ή κασπάσης-8 siRNA [14], [15]. Ο συνδυασμός της ρεσβερατρόλης και TRAIL ενίσχυσε τις μιτοχονδριακές δυσλειτουργίες κατά την απόπτωση. θεραπεία ρεσβερατρόλη μπορεί να ενεργοποιήσει την εξωγενή TRAIL-μεσολάβηση υποδοχέα μονοπάτι θάνατο, αυξάνοντας έτσι την ευαισθησία στην TRAIL σε καρκινικά κύτταρα του προστάτη. Ωστόσο, οι μοριακοί μηχανισμοί με τους οποίους η ρεσβερατρόλη μπορεί να ενισχύσει τις θεραπευτικές δυνατότητες του TRAIL

in vivo

δεν έχει εξεταστεί.

Ο σκοπός της μελέτης μας ήταν η διερεύνηση των μοριακών μηχανισμών με τους οποίους η ρεσβερατρόλη αυξάνει η θεραπευτικές δυνατότητες του TRAIL σε ξενομοσχεύματα καρκίνου του προστάτη σε γυμνούς ποντικούς. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι η ρεσβερατρόλη ανέστειλε PC-3 ανάπτυξη ξενομοσχεύματος και δείκτες της μετάστασης, και της αγγειογένεσης μέσω της ενεργοποίησης των μεταγραφικών παραγόντων FOXO. Έτσι, τα δεδομένα μας δείχνουν ότι η ρεσβερατρόλη μπορεί να χρησιμοποιηθεί μόνη ή σε συνδυασμό με TRAIL για τη διαχείριση του καρκίνου του προστάτη.

Αποτελέσματα

Η ρεσβερατρόλη αυξάνει αντικαρκινική δραστικότητα του όγκου του TRAIL σε PC-3 ξενομοσχεύματα

in vivo

η

Έχουμε δείξει πρόσφατα ότι η ρεσβερατρόλη μπορεί να ενισχύσει την απόπτωση που προκαλεί τη δυνατότητα του TRAIL

in vitro

. Ως εκ τούτου, στην παρούσα μελέτη, εξετάσαμε κατά πόσο η ρεσβερατρόλη μπορεί να ενισχύσει την δραστικότητα κατά του όγκου του TRAIL

in vivo

. PC-3 κύτταρα ξενομόσχευμα σε Balb c γυμνούς ποντικούς. Μετά το σχηματισμό όγκου, αυτοί οι ποντικοί υποβλήθηκαν σε αγωγή με ρεσβερατρόλη, TRAIL, ή ρεσβερατρόλη συν TRAIL για 6 εβδομάδες και εξετάσθηκαν οι επιδράσεις αυτών των παραγόντων στην ανάπτυξη του όγκου. Η ρεσβερατρόλη και TRAIL μόνη ανέστειλε την ανάπτυξη των PC-3 ξενομοσχεύματα (Εικ. 1). Συγκριτικά, ο συνδυασμός ρεσβερατρόλης και TRAIL ήταν πιο αποτελεσματική στην αναστολή της ανάπτυξης του όγκου από ό, τι μόνο παράγοντα μόνο του.

(Α), PC-3 κύτταρα εγχύθηκαν εντός των δεξιών πλευρών του Balb c γυμνών ποντικών. Μετά το σχηματισμό όγκων (περίπου 100 mm

3), τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε αγωγή με φυσιολογικό ορό, ρεσβερατρόλη (30 mg /kg, τρεις ημέρες την εβδομάδα), TRAIL (15 mg /kg, τέσσερις φορές κατά τη διάρκεια των τριών πρώτων εβδομάδων) ή ρεσβερατρόλη συν TRAIL . Ο όγκος του όγκου μετρήθηκε σε εβδομαδιαία βάση. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση τιμή ± SE. *, # Και $ είναι σημαντικά διαφορετική από τον έλεγχο, η P & lt?. 0.05)

Η

Αυτά τα στοιχεία υποδηλώνουν ότι η ρεσβερατρόλη μπορεί να ενισχύσει την αντικαρκινική δράση του TRAIL στον καρκίνο του προστάτη

Κανονισμός του όγκου. τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων και την απόπτωση με ρεσβερατρόλη ή /και TRAIL σε PC-3 ξενομοσχεύματα

πολλαπλασιασμός καρκινικών κυττάρων και την απόπτωση μπορεί να ρυθμίσει το μέγεθος του όγκου σε κάθε δεδομένη στιγμή. Ως εκ τούτου, εκτελέσαμε ανοσοϊστοχημεία σε ιστούς όγκων για να μετρηθεί η έκφραση του Κί67 και PCNA, και δοκιμασία TUNEL για τη μέτρηση της απόπτωσης (Σχ. 2Α). πολλαπλασιασμός καρκινικών κυττάρων μετρήθηκε με μέτρηση Κί67 και PCNA θετικών κυττάρων, και η απόπτωση μετρήθηκε με απαρίθμηση TUNEL θετικά κύτταρα (Σχ. 2Β-D). Η αγωγή των ποντικών με ρεσβερατρόλη και TRAIL μόνος είχε σαν αποτέλεσμα την αναστολή του πολλαπλασιασμού των καρκινικών κυττάρων, και επαγωγή στην απόπτωση. Ο συνδυασμός της ρεσβερατρόλης και TRAIL ήταν πιο αποτελεσματική στην αναστολή του πολλαπλασιασμού των καρκινικών κυττάρων και την επαγωγή της απόπτωσης από απλός παράγων μόνος. Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι η ρεσβερατρόλη, αν και είναι αποτελεσματική μόνο, μπορεί να ενισχύσει την δραστικότητα κατά του όγκου του TRAIL σε καρκίνο του προστάτη.

(Α), Ανοσοϊστοχημεία εκτελέστηκε σε ιστούς όγκων που προέρχονται από τον έλεγχο, η ρεσβερατρόλη και /ή ποντικούς που υπέστησαν αγωγή TRAIL επί εβδομάδες 6 για τη μέτρηση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων με Κί67 και PCNA χρώση και η απόπτωση με τη δοκιμασία TUNEL. (B, C και D), Ποσοτικοποίηση του Κί67, PCNA και θετικών καρκινικών κυττάρων TUNEL. διαφάνειες όγκου των διαφόρων ομάδων αγωγής έγιναν ορατά κάτω από μικροσκόπιο, και θετικά κύτταρα Ki67, PCNA και TUNEL ποσοτικοποιήθηκαν. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση τιμή ± SE. * Και ** είναι σημαντικά διαφορετική από την αντίστοιχη των ελέγχων τους, P & lt?. 0.05)

Η

In vivo

ρύθμιση του υποδοχέα θανάτου TRAIL-R1 /DR4 και TRAIL-R2 /DR5 από ρεσβερατρόλη και /ή TRAIL

Δεδομένου ότι η ρεσβερατρόλη αυξάνει το θεραπευτικό δυναμικό του TRAIL με επαγωγή απόπτωσης

in vivo

, επιδιώξαμε να εξετάσουμε τους μοριακούς μηχανισμούς με τους οποίους η ρεσβερατρόλη ενισχύει την αντικαρκινική δράση του TRAIL σε PC- 3 ξενομοσχεύματα. Εξετάσαμε την επόμενη τις επιδράσεις της ρεσβερατρόλης ή /και TRAIL στην έκφραση των υποδοχέων θανάτου (TRAIL-R1 /DR4 και TRAIL-R2 /DR5) με ανοσοϊστοχημεία σε ιστούς όγκων που προέρχονται από

in vivo

πείραμα (Σχ. 3Α , αριστερά και δεξιά πάνελ). Η αγωγή των ποντικών με ρεσβερατρόλη ενίσχυσε τις εκφράσεις των DR4 και DR5. TRAIL επαγόμενη ελαφρώς την έκφραση του DR4 και DR5. Από την άλλη πλευρά, η θεραπεία ποντικών με έναν συνδυασμό ρεσβερατρόλης συν TRAIL έδειξαν σημαντικά αυξημένη έκφραση των πρωτεϊνών DR4 και DR5 από εκείνη των ποντικών που έλαβαν μόνο ρεσβερατρόλη ή TRAIL μόνο. ​​

(Α), Ανοσοϊστοχημεία εκτελέστηκε για να μετρούν τις εκφράσεις του TRAIL-R1 /DR4 και TRAIL-R2 /DR5 σε ιστούς όγκων που προέρχονται από τον έλεγχο και ποντίκια με αγωγή για την εβδομάδα 6. Ποσοτικοποίηση των DR4 και θετικών κυττάρων DR5 είναι επίσης εμφανίζονται στην δεξιά πλευρά. (Β), Εκφράσεις του TRAIL-R1 /DR4, TRAIL-R2 /DR5 και β-ακτίνης σε ιστούς όγκων που προκύπτουν με ανάλυση εβδομάδα 6. Western blot πραγματοποιήθηκε για να μετρηθεί η έκφραση του DRs (αριστερό πάνελ). Ποσοτικοποίηση των DR4 και θετικών καρκινικών κυττάρων DR5 (δεξιά πλευρά). (C), Μέτρηση DR4 και DR5 με ELISA. Πρωτεΐνες εκχυλίσματα παρασκευάστηκαν και οι εκφράσεις δρχ μετρήθηκαν σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.

Η

Εμείς επιβεβαίωσε τα στοιχεία ανοσοϊστοχημεία εξετάζοντας την έκφραση αυτών των πρωτεϊνών με ανάλυση κηλίδος Western (Σχ. 3Β). Η αγωγή των ποντικών με ρεσβερατρόλη και TRAIL μόνος είχε σαν αποτέλεσμα προς τα πάνω ρύθμιση των υποδοχέων θανάτου DR4 και DR5. Συγκριτικά, η ρεσβερατρόλη συν TRAIL θεραπείες είχε περισσότερες επιδράσεις στην επαγωγή των DR4 και DR5 σε σύγκριση με μόνο παράγοντα μόνο. Τα στοιχεία αυτά είναι σε συμφωνία με τα δεδομένα ανοσοϊστοχημείας όπου ρυθμίζεται προς τα πάνω οι προ-αποπτωτικών πρωτεϊνών DR4 και DR5.

Επιβεβαιώσαμε την επόμενη της ανοσοϊστοχημείας και τα δεδομένα κηλίδας western εξετάζοντας τις εκφράσεις δραχμών με ELISA (Σχ. 3C, δεξί πάνελ). Η αγωγή των ποντικών με ρεσβερατρόλη και TRAIL μόνος αυξητικά την έκφραση των υποδοχέων θανάτου (DR4 και DR5). Συγκριτικά, ο συνδυασμός της ρεσβερατρόλης συν TRAIL επαγόμενη πιο DR4 και DR5 εκφράσεις από μόνο παράγοντα μόνο. Τα στοιχεία αυτά είναι σε συμφωνία με ανοσοϊστοχημεία και τα δεδομένα κηλίδας western, όπου οι προ-αποπτωτικών πρωτεϊνών DR4 και DR5 ήταν απορυθμίζεται από ρεσβερατρόλη και TRAIL. Up-ρύθμιση του DRs μπορεί να ενισχύσει το δυναμικό επαγωγής απόπτωσης του TRAIL.

In vivo

ρύθμιση της Bcl-2 μελών της οικογένειας και ρυθμιστικές πρωτεΐνες του κυτταρικού κύκλου με ρεσβερατρόλη ή /και TRAIL

Δεδομένου ότι τα μέλη οικογένειας Bcl-2 παίζουν σημαντικό ρόλο στην απόπτωση, επιδιώξαμε να εξετάσει την έκφραση του Bax και Bcl-2 σε ιστούς όγκων που προέρχονται από ρεσβερατρόλη και /ή ποντίκια TRAIL-αγωγή (Σχ. 4Α, αριστερό πάνελ). Η αγωγή των ποντικών με ρεσβερατρόλη και TRAIL μόνος είχε σαν αποτέλεσμα προς τα πάνω ρύθμιση του Βαχ, και αναστολή της έκφρασης Bcl-2. Συγκριτικά, ο συνδυασμός της ρεσβερατρόλης συν TRAIL ήταν πιο αποτελεσματική στην προς τα πάνω ρύθμιση Βαχ και αναστέλλοντας Bcl-2. Εμείς επόμενη επιβεβαίωσαν τα δεδομένα κηλίδας Western με την εξέταση τις εκφράσεις αυτών των πρωτεϊνών με ανοσοϊστοχημεία (Εικ. 4Α, μεσαία και δεξιά πάνελ). Η αγωγή των ποντικών με ρεσβερατρόλη ρυθμίζεται προς τα πάνω την έκφραση Bax και ανέστειλε την έκφραση του Bcl-2. Συγκριτικά, η θεραπεία ποντικών με έναν συνδυασμό ρεσβερατρόλης συν TRAIL είχε περισσότερες επιδράσεις στην ρύθμιση προς τα άνω του Bax και η αναστολή της Bcl-2 από ό, τι μόνο παράγοντα μόνο του.

(Α), ανάλυση κηλίδας Western εκτελέστηκε για να μετρηθεί η εκφράσεις του Βαχ και Bcl-2 σε ιστούς όγκων που προέρχονται από τον έλεγχο, η ρεσβερατρόλη και /ή ποντικούς που υπέστησαν αγωγή TRAIL επί εβδομάδες 6 (αριστερό πάνελ). Ανοσοϊστοχημεία εκτελέστηκε για τη μέτρηση των εκφράσεων του Βαχ και Bcl-2 σε ιστούς όγκων που προέρχονται από τον έλεγχο και ποντίκια που πήραν φάρμακο επί εβδομάδες 6 (μεσαίο πλαίσιο). Ποσοτικοποίηση των Βαχ και Bcl-2 θετικά κύτταρα σε καρκινικά κύτταρα (δεξιά πάνελ). (Β), ανάλυση κηλίδας Western διεξήχθη για να μετρηθούν οι εκφράσεις του ρ27

/KIP1 και κυκλίνης D1 σε ιστούς όγκων που προέρχονται από τον έλεγχο και την αγωγή με φάρμακο ποντικών την εβδομάδα 6 (αριστερό πάνελ). Ανοσοϊστοχημεία εκτελέστηκε για τη μέτρηση των εκφράσεων του ρ27

/KIP1 και κυκλίνης D1 σε ιστούς όγκων που προέρχονται από τον έλεγχο και την αγωγή με φάρμακο ποντικών την εβδομάδα 6 (μεσαίο πλαίσιο). Ποσοτικοποίηση των p27

/KIP1 και κυκλίνης D1 θετικά κύτταρα σε ιστούς όγκων (δεξιά πλευρά).

Η

Εξετάσαμε την επόμενη τις επιδράσεις της ρεσβερατρόλης ή /και TRAIL στην έκφραση του p27

/KIP1 και κυκλίνη D1 σε ιστούς όγκων με κηλίδωση Western και ανοσοϊστοχημεία (Εικ. 4Β). Η αγωγή των ποντικών με ρεσβερατρόλη είχε ως αποτέλεσμα την επαγωγή του αναστολέα του κυτταρικού κύκλου ρ27

/KIP1 και αναστολή της έκφρασης κυκλίνης D1 (σχ. 4Β). Συγκριτικά, TRAIL δεν είχε σημαντική επίδραση στην έκφραση ρ27, αλλά ανέστειλε ελαφρώς την έκφραση της κυκλίνης D1 σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου. Ωστόσο, ο συνδυασμός της ρεσβερατρόλης και TRAIL έδειξαν προς τα πάνω ρύθμιση ρ27, και η αναστολή της κυκλίνης D1 σε σύγκριση με μόνο παράγοντα μόνο. Εμείς επόμενη επιβεβαίωσαν τα δεδομένα κηλίδος Western με δεδομένα ανοσοϊστοχημείας εξετάζοντας τις εκφράσεις αυτών των πρωτεϊνών (Σχ. 4Β, μεσαία και δεξιά πάνελ). TRAIL δεν έχει σημαντική επίδραση επί της έκφρασης του ρ27 αλλά ανέστειλε ελαφρώς την έκφραση της κυκλίνης D1. Συγκριτικά, η ρεσβερατρόλη επαγόμενη τις εκφράσεις του ρ27, και ανέστειλε την έκφραση της κυκλίνης D1. Αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι η ρεσβερατρόλη μπορεί να ρυθμίσει τον κυτταρικό κύκλο με up-ρύθμιση της έκφρασης της ρ27 και αναστολή της έκφρασης της κυκλίνης D1.

In vivo

ρύθμιση της ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9 έκφραση με οι ρεσβερατρόλη και /ή TRAIL

αυξημένα εκφράσεις των μεταλλοπρωτεϊνασών μήτρας (MMPs) σχετίζεται με αυξημένο μεταστατικό δυναμικό σε πολλά κύτταρα όγκου [35], [36], [37]. Ως εκ τούτου, επιδιώκεται να εξεταστούν οι επιδράσεις της ρεσβερατρόλης στην ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9 εκφράσεις σε ιστούς όγκων που προέρχονται από ξενομοσχεύτηκε γυμνούς ποντικούς με ανοσοϊστοχημεία και ανάλυση Western blot. Θεραπεία της xenogrfated ποντικών με ρεσβερατρόλη είχε σαν αποτέλεσμα την αναστολή της ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9 εκφράσεις από εκείνα του ελέγχου ή ομάδα που έλαβε αγωγή TRAIL (Σχ. 5Α και Β). Ο συνδυασμός της ρεσβερατρόλης και TRAIL ήταν πιο αποτελεσματική στην αναστολή της ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9 εκφράσεις από απλός παράγων μόνος. Εμείς επόμενη επιβεβαίωσαν τα δεδομένα ανοσοϊστοχημείας εξετάζοντας τις εκφράσεις αυτών των πρωτεϊνών με ανάλυση κηλίδας Western (Εικ. 5C). TRAIL δεν έχει σημαντική επίδραση στις εκφράσεις της ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9. Συγκριτικά, η ρεσβερατρόλη ή ρεσβερατρόλη συν TRAIL ανέστειλαν τις εκφράσεις του ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9. Αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι η ρεσβερατρόλη και /ή TRAIL μπορεί να αναστέλλει τη μετάσταση του καρκίνου του προστάτη μέσω της αναστολής ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9.

(Α), Ανοσοϊστοχημεία διεξήχθη για να μετρηθούν οι εκφράσεις του ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9 σε ιστούς όγκων που προέρχονται από τον έλεγχο, η ρεσβερατρόλη και /ή TRAILtreated ποντικών την εβδομάδα 6. (Β), Ποσοτικοποίηση της ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9 θετικά κύτταρα σε ιστούς όγκων. (C), Εκφράσεις της ΜΜΡ-2, ΜΜΡ-9 και β-ακτίνης σε ιστούς όγκων μετρήθηκαν για την εβδομάδα 6 με ανάλυση κηλίδος Western.

Η

In vivo

ρύθμιση της αγγειογένεσης με ρεσβερατρόλη ή /και TRAIL

είτε παλινδρόμησης στην ανάπτυξη του όγκου κατά ρεσβερατρόλη και /ή TRAIL οφειλόταν στην αναστολή της αγγειογένεσης, αναλύσαμε τους δείκτες της αγγειογένεσης με ανοσοϊστοχημεία σε ιστούς όγκων που προέρχονται από τον έλεγχο και την αγωγή ποντίκια (Εικ . 6). Εξετάσαμε πρώτα τις επιδράσεις της ρεσβερατρόλης και /ή θεραπεία TRAIL σχετικά με τον αριθμό των αιμοφόρων αγγείων σε ιστούς όγκων με τη χρήση τριών διαφορετικών προσεγγίσεων (Σχ. 6Α). Τα αιμοφόρα αγγεία εξετάσθηκαν με χρώση των καρκινικών ιστών με Η &? Ε, αντι-CD31 αντίσωμα, και αντι-vWF αντίσωμα. Η αγωγή των ποντικών με ρεσβερατρόλη ή TRAIL προκάλεσε μια αναστολή του αριθμού των αιμοφόρων αγγείων. Συγκριτικά, η θεραπεία των ποντικών με έναν συνδυασμό ρεσβερατρόλης συν TRAIL ανέστειλαν περαιτέρω τον αριθμό των αιμοφόρων αγγείων.

(Α), αριστερό πλαίσιο, τομές ιστού του όγκου που προέρχεται από τον έλεγχο, η ρεσβερατρόλη και /ή TRAIL ποντίκια με αγωγή επί εβδομάδα 6 βάφτηκαν με Η &? Ε και οι αριθμοί των αιμοφόρων αγγείων μετρήθηκαν στα 400 Χ μεγέθυνση. Κάθε στήλη αντιπροσωπεύει το μέσο ± SD. * Ή ** = σημαντικά διαφορετικό από τον έλεγχο, η P & lt? 0,05. Μέση πάνελ, ποσοτικοποίηση των αιμοφόρων αγγείων σε όγκους που προκύπτουν με την εβδομάδα 6. τομές όγκου από ποντικούς ελέγχου και πήραν φάρμακο βάφηκαν με αντι-CD31 αντίσωμα, και μετρήθηκαν οι αριθμοί των CD31-θετικών αιμοφόρα αγγεία. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SD. * Ή ** = σημαντικά διαφορετικό από τον έλεγχο, η P & lt? 0,05. Δεξιά πάνελ, τομές όγκου από ποντικούς ελέγχου και πήραν φάρμακο που λαμβάνεται επί εβδομάδες 6 χρωματίστηκαν με αντι-παράγοντα von Willebrand (vWF) αντίσωμα για να αξιολογήσει τα αιμοφόρα αγγεία. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SD. * Ή ** = σημαντικά διαφορετικό από τον έλεγχο, η P & lt? 0,05. (Β), αριστερό πλαίσιο, ανοσοϊστοχημεία εκτελέστηκε για να μετρηθεί η έκφραση του VEGF σε ιστούς όγκων που προέρχονται από ποντικούς ελέγχου και των ναρκωτικών αντιμετωπίζεται εβδομάδα 6. Δεξιό πλαίσιο, ποσοτικοποίηση των VEGF θετικών κυττάρων σε ιστούς όγκων. Δεξιά πάνελ, ποσοτικοποίηση των VEGF θετικά κύτταρα. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SD. * Ή ** = σημαντικά διαφορετικό από τον έλεγχο, η P & lt? 0,05. Κάτω πάνελ, εκφράσεις του VEGF και β-ακτίνης σε ιστούς όγκων που προκύπτουν με την εβδομάδα 6 μετρήθηκαν με ανάλυση κηλίδος Western. (C), VEGF υποδοχέα 2 (VEGF-R2) -θετικό κυκλοφορούντων ενδοθηλιακών κυττάρων σε ποντικούς για την εβδομάδα 6. Τα κύτταρα του αίματος από το περιφερικό αίμα συνδέονται με το slide χρωματίστηκαν με αντι-VEGF-R2 αντίσωμα, και ο αριθμός των VEGF-R2 θετικών κυττάρων μετρήθηκε κάτω από μικροσκόπιο. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SD. * Ή ** = σημαντικά διαφορετικό από τον έλεγχο, Ρ & lt?. 0.05

Η

Εξετάσαμε επόμενο την έκφραση του VEGF με ανοσοϊστοχημεία και ανάλυση κηλίδας Western (Σχήμα 6). Εξέταση των ιστών όγκου με ανοσοϊστοχημεία έδειξε ότι τα ποντίκια ελέγχου είχαν αυξηθεί VEGF-θετικά ενδοθηλιακά κύτταρα σε σύγκριση με ρεσβερατρόλη ή ποντικούς που υπέστησαν αγωγή TRAIL (Σχ. 6Β, αριστερά και δεξιά πάνελ). Ο συνδυασμός της ρεσβερατρόλης συν TRAIL παρουσίασαν σημαντικά λιγότερη χρώση VEGF από μόνο παράγοντα μόνο. Εμείς επόμενη επιβεβαίωσε τα δεδομένα ανοσοϊστοχημείας της έκφρασης του VEGF εξετάζοντας τα επίπεδα της πρωτεΐνης με ανάλυση κηλίδας Western (Σχ. 6Β, κάτω πίνακας). Η αγωγή των ποντικών με ρεσβερατρόλη και TRAIL μόνος ανέστειλε την έκφραση του VEGF. Συγκριτικά, η ρεσβερατρόλη συν TRAIL ανέστειλαν την έκφραση του VEGF.

Έχουμε αποδείξει ότι ο αριθμός των κυκλοφορούντων υποδοχέα του αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα 2 (VEGF-R2) -θετικό ενδοθηλιακά κύτταρα συσχετίζεται άμεσα με την αύξηση της αγγειογένεσης των όγκων και μπορεί να χρησιμεύσει όπως

in vivo

δείκτες της αγγειογένεσης του όγκου [31], [38]. Όπως αναμενόταν, οι ποντικοί ελέγχου είχαν αυξηθεί κυκλοφορούν VEGF-R2-θετικά ενδοθηλιακά κύτταρα σε σύγκριση με αγωγή ρεσβερατρόλης ποντίκια (Σχ. 6C). Η ρεσβερατρόλη συν ομάδα TRAIL-αγωγή έδειξαν σημαντικά μικρότερη VEGFR2-θετικών κυττάρων από εκείνη της ρεσβερατρόλης ή TRAIL αγωγή ομάδα. Αυτά τα δεδομένα καταδεικνύουν έντονα ότι η ρεσβερατρόλη μπορεί να αναστέλλουν την ανάπτυξη του όγκου με αναστολή της αγγειογένεσης, και μπορεί επίσης να προωθήσει αντικαρκινική δραστικότητα του TRAIL

in vivo

.

In vivo

ρύθμιση του μεταγραφικού παράγοντα FKHRL1

ΑΚΤ έχει δειχθεί ότι φωσφορυλιώνει FKHRL1, και η αναστολή της φωσφορυλίωσης FKHRL1 προκαλεί πυρηνική μετατόπιση του, δεσμευτική ενισχυμένη DNA και μεταγραφική δραστηριότητα [39]. Στη συνέχεια εξετάσαμε αν οι αντικαρκινικές δράσεις της ρεσβερατρόλης και /ή TRAIL που ασκείται μέσω της ενεργοποίησης του FKHRL1 (Εικ. 7). Η ρεσβερατρόλη και TRAIL ανέστειλαν την φωσφορυλίωση της FKHRL1? Ωστόσο, η ρεσβερατρόλη ήταν πιο αποτελεσματικό από TRAIL. Ο συνδυασμός της ρεσβερατρόλης και TRAIL είχε περισσότερη επίδραση στην αναστολή της φωσφορυλίωσης της FKHRL1 από μόνο παράγοντα μόνο. Στη συνέχεια εξετάσαμε τη φωσφορυλίωση του FKHRL1 σε ιστούς όγκων με ανοσοϊστοχημεία (Σχ. 7Β και C). Η ρεσβερατρόλη και TRAIL ανέστειλαν τα κυτταροπλασματικά επίπεδα φωσφορυλιωμένου FKHRL1 όπως φαίνεται στο Σχ. 7Β και ποσοτικοποιούνται στο Σχ. 7C. Ο συνδυασμός της ρεσβερατρόλης συν TRAIL είχε περισσότερη επίδραση στην αναστολή cytoplamic επίπεδα φωσφορυλιωμένης FKHRL1 από μόνο παράγοντα μόνο. Αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι η ρεσβερατρόλη και TRAIL μπορεί να αναστέλλουν τη φωσφορυλίωση του FKHRL1, η οποία μπορεί ως αποτέλεσμα πυρηνική μετατόπιση και ενεργοποίηση της.

(Α), η αναστολή της φωσφορυλίωσης FKHRL1 με ρεσβερατρόλη. Η ανάλυση στυπώματος Western εκτελέστηκε για να μετρηθεί η έκφραση φωσφο-FKHRL1 σε ιστούς όγκων που προέρχονται από τον έλεγχο ή /και ποντίκια που πήραν φάρμακο επί εβδομάδες 6. (Β), Ανοσοϊστοχημική εξέταση της φωσφο-FKHRL1. Ανοσοϊστοχημεία εκτελέστηκε για να μετρηθεί η έκφραση φωσφο-FKHRL1 σε ιστούς όγκων που προέρχονται από τον έλεγχο, η ρεσβερατρόλη και /ή ποντικούς που υπέστησαν αγωγή TRAIL για την εβδομάδα 6. (C), Ποσοτικοποίηση του FKHRL-θετικών κυττάρων σε ιστούς όγκων. (D), δραστικότητα δέσμευσης FKHRL1-DNA. Πυρηνικά εκχυλίσματα παρασκευάστηκαν από ιστούς όγκων που προέρχονται από τους ποντικούς ελέγχου και αγωγής με φάρμακο. δοκιμασία Gelshift εκτελέστηκε για να μετρηθεί η δραστικότητα δέσμευσης FKHRL1-ΟΝΑ, όπως περιγράφεται στο Υλικά και Μέθοδοι.

Η

Στη συνέχεια εξετάσαμε τη δραστικότητα δέσμευσης με δοκιμασία gelshift (Σχ. 7D) FKHRL1-DNA. Πυρηνικά εκχυλίσματα παρασκευάστηκαν από ιστούς όγκων που προέρχονται από ρεσβερατρόλη και /ή ποντικούς που υπέστησαν αγωγή TRAIL. δεδομένων Gelshift αποκάλυψε ότι TRAIL και η ρεσβερατρόλη βελτιωμένη δραστηριότητες δέσμευσης FKHRL1-DNA. Ο συνδυασμός της ρεσβερατρόλης και TRAIL είχαν σημαντικά μεγαλύτερη δραστηριότητα δέσμευσης FKHRL1-DNA από το μοναδικό παράγοντα μόνο. Συνολικά, τα στοιχεία αυτά δείχνουν ότι η ρεσβερατρόλη και TRAIL μπορεί να αναστέλλει τη φωσφορυλίωση της FKHRL1 οδηγεί σε αυξημένη πυρηνική μετατόπιση της και τις δραστηριότητες δέσμευσης του DNA.

Συζήτηση

Έχουμε δείξει πρόσφατα ότι η ρεσβερατρόλη προκαλεί απόπτωση σε ρυμουλκουμένων ευαίσθητα κύτταρα PC-3, και ευαισθητοποιεί TRAIL-ανθεκτικά κύτταρα LNCaP

in vitro

μέσω της ενεργοποίησης πολλαπλές οδούς σηματοδότησης [14], [15]. Η ρεσβερατρόλη απόπτωση εμπλέκεται μιτοχόνδρια, όπως φαίνεται από μία πτώση στο δυναμικό μιτοχονδριακής μεμβράνης και ενεργοποίηση της κασπάσης-3 και κασπάσης-9 και στις δύο PC-3 και LNCaP κύτταρα καρκίνου του προστάτη [14], [15]. Η ρεσβερατρόλη επαγόμενη έκφραση προαποπτωτικών πρωτεϊνών (Βαχ, Bak, Puma, Noxa και ΒΙΜ), υποδοχείς θανάτου (TRAIL-R1 /DR4 και TRAIL-R2 /DR5), και ανέστειλε την έκφραση των αντι-αποπτωτικών πρωτεϊνών (Bcl-2 και Bcl-X

L) και ΙΑΡ (ΧΙΑΡ και survivin). Σε πρόσφατη μελέτη μας, η ρεσβερατρόλη ρυθμίζεται η έκφραση του TRAIL, DR4, DR5, Bim, p27

/KIP1 και κυκλίνης D1 μέσω FOXO παράγοντες μεταγραφής

in vitro

, και η αναστολή της FKHRL1, FKHR και AFX με RNAi μπλοκάρει αυτά επηρεάζει ρεσβερατρόλης [40]. Στην παρούσα μελέτη, έχουμε επικυρωθεί

in vitro

ευρήματά μας και απέδειξαν ότι η ρεσβερατρόλη και TRAIL ανέστειλαν μόνη την ανάπτυξη των PC-3 ξενομοσχεύματα, μετάσταση και την αγγειογένεση μέσω της ενεργοποίησης των μεταγραφικών παραγόντων FOXO. Είναι ενδιαφέρον ότι, ο συνδυασμός ρεσβερατρόλης και TRAIL είχε μεγαλύτερη επίδραση επί της αναστολής της ανάπτυξης του όγκου, μετάσταση και αγγειογένεση από τον κάθε παράγοντα ξεχωριστά.

In vitro

ρεσβερατρόλη μειωτικά τις εκφράσεις του Bcl-2 και Bcl -X

L και ρυθμίζεται προς τα πάνω τις εκφράσεις του p53, Bax, Bak, Puma, Noxa, και ΒΙΜ σε mRNA και τα επίπεδα πρωτεΐνης σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη [41]. Έχουμε επίσης καταδείξει ότι η ρεσβερατρόλη ρυθμίζεται προς τα πάνω την έκφραση, φωσφορυλίωση, ακετυλίωση και του ρ53 σε κύτταρα ανδρογονο-εξαρτώμενη LNCaP [41]. Η ικανότητα της ρεσβερατρόλης να ρυθμίζουν τη μεταγραφή γονιδίων ήταν επίσης εμφανής, δεδομένου ότι προκαλείται ακετυλίωση ιστόνης Η3 και Η4 σε κύτταρα LNCaP [41]. Επιπλέον, η θεραπεία των κυττάρων LNCaP με ρεσβερατρόλη είχε ως αποτέλεσμα τη μετατόπιση του Βαχ και ρ53 στα μιτοχόνδρια, την παραγωγή δραστικών ειδών οξυγόνου, πτώση του δυναμικού της μιτοχονδριακής μεμβράνης, η απελευθέρωση των μιτοχονδριακών πρωτεϊνών (κυτόχρωμα c, Smac /DIABLO και Omi /HtrA2), και ενεργοποίηση κασπάσης-3 που οδηγούν σε απόπτωση [41]. Επιπλέον, η διαγραφή του Βαχ και Bak γονιδίων αναστέλλεται πλήρως ρεσβερατρόλη επαγόμενη κυτοχρώματος c και αποδέσμευσης Smac /DIABLO σε εμβρυϊκούς ινοβλάστες ποντικού [42]. Στην παρούσα μελέτη, η θεραπεία της ξενομοσχευθέντος ποντικών με ρεσβερατρόλη είχε ως αποτέλεσμα μειορύθμιση της Bcl-2 και ανοδική ρύθμιση του Βαχ. Ο συνδυασμός της ρεσβερατρόλης συν TRAIL ήταν πιο αποτελεσματικό στη ρύθμιση Bcl-2 μελών της οικογένειας από απλός παράγων μόνος. προηγουμένως δημοσιευθεί

in vitro

δεδομένα μας είναι σε συμφωνία με την τρέχουσα

in vivo

μελέτες που αποδεικνύουν ότι η ρεσβερατρόλη μπορεί να εμπλακεί κύτταρο-ενδογενούς οδού απόπτωσης με ρύθμιση της έκφρασης Bcl-2 οικογένεια πρωτεϊνών.

παράγοντες μεταγραφής FOXO είναι καταστολείς όγκων που αδρανοποιούνται στην πλειονότητα των ανθρώπινων καρκίνων, λόγω της υπερενεργοποίηση του μονοπατιού ΡΙ3Κ /ΑΚΤ [43]. πρωτεΐνες FOXO μπορεί να ρυθμίσει μία ποικιλία γονιδίων που επηρεάζουν τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό, την επιβίωση, τον μεταβολισμό και την απόκριση στο στρες [19], [20], [44]. Οι παράγοντες μεταγραφής FOXO ρυθμίζονται με σύνθεση, ακετυλίωση, φωσφορυλίωση και ουβικιτινίωση σε τρία διαφορετικά επίπεδα: υποκυτταρικό εντοπισμό, τη σταθερότητα και την μεταγραφική δραστηριότητα [19], [20], [44]. Κατά την ενεργοποίηση της σηματοδότησης PI3K /AKT, FOXOs υποβάλλονται σε φωσφορυλίωση μεσολαβεί η ΑΚΤ, η οποία προωθεί τη σύνδεση με 14-3-3, πυρηνική εξαγωγή μέσω CRM1 και κυτταροπλασματική παγίδευση. Υπό συνθήκες στρες ή απουσία ανάπτυξης ή επιβίωσης, όταν η οδός ΡΙ3Κ /ΑΚΤ αναστέλλεται, FOXO πρωτεΐνες μετατοπίζονται στον πυρήνα του κυττάρου, όπου μπορεί να εκτελεσθεί λειτουργίες μεταγραφικής τους [45]. Μια δεύτερη ρυθμιστική στρώση είναι FOXO ακετυλίωση με p300, CBP (πρωτεΐνη CREB-δεσμευτικές) και pCAF (p300 /CBP που σχετίζονται με παράγοντες) για την αντιμετώπιση του οξειδωτικού στρες ή DNA δεσμευτική [46], [47], [48], ακολουθούμενη από αποακετυλίωση με τάξης Ι και II αποακετυλασών ιστόνης [48], [49], [50], συμπεριλαμβανομένων SIRT1, το NAD

+ – εξαρτώμενη αποακετυλάσης που κωδικοποιείται από το ορθόλογο του γονιδίου μακροζωίας ζύμης Sir2 [51]. Έχουμε αποδείξει προσφάτως ότι η αναστολή της ΡΙ3Κ /ΑΚΤ οδού ενισχυμένη FOXO-δέσμευσης DNA και μεταγραφική δραστηριότητα [40], [52]. Επιπλέον, η φωσφορυλίωση με ανεπάρκεια μετάλλαγμα του FOXO ενισχυμένη FOXO μεταγραφική δραστικότητα ρεσβερατρόλη επαγόμενη και την απόπτωση. Μετα-μεταφραστική τροποποίηση των πρωτεϊνών FOXO είναι ένας σημαντικός μηχανισμός που ρυθμίζει την ικανότητα των διαφόρων παραγόντων μεταγραφής να ενεργοποιήσει ξεχωριστές σειρές γονιδίων, που εμπλέκονται στην αναστολή του κυτταρικού κύκλου [53], η απόπτωση [54], η άμυνα έναντι του οξειδωτικού στρες και την επιδιόρθωση του DNA [55]. Η ενισχυμένη δραστικότητα δέσμευσης DNA χρησιμεύει επίσης για να περιορίζουν τη διαθεσιμότητα των πρωτεϊνών FOXO για φωσφορυλίωση από ΑΚΤ [46]. Στην παρούσα μελέτη, έχουμε δείξει ότι η προκαλούμενη από ρεσβερατρόλη απόπτωση σε καρκινικά κύτταρα του προστάτη μέσω της ενεργοποίησης των μεταγραφικών παραγόντων FOXO. Παρομοίως σε άλλη μελέτη, έχουμε δείξει ότι η αναστολή των παραγόντων μεταγραφής FOXO από shRNA μπλοκάρει ρεσβερατρόλη επαγόμενη προς τα πάνω ρύθμιση του Bim, TRAIL, DR4, DR5, ρ27

/Kip1 και απόπτωση, και ρεσβερατρόλη επαγόμενη αναστολή της κυκλίνης D1 σε καρκίνο του προστάτη κύτταρα

in vitro

[40]. Τα δεδομένα μας υποδηλώνουν ότι η ρεσβερατρόλη προκαλεί αναστολή του κυτταρικού κύκλου και της απόπτωσης μέσω της ρύθμισης των παραγόντων μεταγραφής FOXO σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη.

Η FOXO έχουν παράγοντες μεταγραφής έχει δειχθεί ότι ενεργοποιείται ιδιοσυστατικά σε διάφορους ανθρώπινους κακοήθειες, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του προστάτη [39] , [56]. Οι FOXOs αποδειχθεί ότι συμβάλλουν στην ανάπτυξη ή /και την πρόοδο της κακοήθειας με τη ρύθμιση της έκφρασης των γονιδίων που εμπλέκονται στην κυτταρική ανάπτυξη, τη διαφοροποίηση, την απόπτωση, την αγγειογένεση και την μετάσταση [39], [56].