Αφηρημένο

Καρκίνος βλαστικά κύτταρα (ΚΕΠ) μπορεί να εισβάλει και να μεταστάσεις από επιθηλιακά-to-μεσεγχυματικά μετάβασης (EMT). Ωστόσο, πώς θα ξεφύγουν από το ανοσοποιητικό επιτήρησης είναι ασαφής. B7H1 είναι ζωτικής σημασίας αρνητικές συν-διεγερτικό μόριο, αλλά λίγες πληροφορίες σχετικά με το αν λειτουργεί σε ΚΕΠ. Ως εκ τούτου, προσδιορίσαμε την έκφραση B7H1 και EMT που σχετίζονται με δείκτες σε καρκίνο του παχέος εντέρου βλαστικά κύτταρα που μοιάζουν να διερευνήσει ένα πιθανό τρόπο immunoevasion των ΚΕΠ. Εμπλουτίσαμε CD133

+ καρκίνο του παχέος εντέρου κύτταρα, τα οποία εκδηλώνονται τα ΚΕΠ, όπως ιδιότητες όπως τα υψηλότερα επίπεδα των άλλων δεικτών βλαστικών κυττάρων Oct-4 και Sox-2, σφαίρα όγκου ικανότητα διαμόρφωσης και πιο ογκογόνο σε ποντίκια NOD /SCID. Αυτά CD133

+ κύτταρα διαθέτουν προφίλ γονιδιακής έκφρασης EMT συμπεριλαμβανομένων υψηλότερο επίπεδο σαλιγκάρι, Twist, βιμεντίνη, φιμπρονεκτίνη και χαμηλότερο επίπεδο της E-cadherin. Επιπλέον, CD133

+ κύτταρα, τόσο κυτταρική σειρά και του παχέος ιστούς του καρκίνου εξέφρασαν υψηλό επίπεδο των αρνητικών συν-τόνωση μόριο B7H1. Επιπλέον, ορισμένα B7H1

+ καρκινικά κύτταρα έδειξαν επίσης το χαρακτηριστικό της EMT, υποδεικνύοντας κύτταρα EMT θα μπορούσαν να ξεφύγουν από το ανοσοποιητικό επίθεση κατά τη διάρκεια της μετάστασης. έκφραση B7H1 και φαινοτύπων EMT στο ΚΕΠ δείχνει ένα πιθανό τρόπο immunoevasion

Παράθεση:. Zhi Υ, Ζ Mou, Chen J, Ο Υ, Dong Η, Fu Χ, et al. (2015) Έκφραση B7H1 και επιθηλιακά-To-μεσεγχυματικά μετάβαση φαινότυποι για τον Καρκίνο του παχέος Stem-όπως τα κύτταρα. PLoS ONE 10 (8): e0135528. doi: 10.1371 /journal.pone.0135528

Επιμέλεια: Giuseppe Pirozzi, Istituto Nazionale Tumori, Ιταλία

Ελήφθη: 8 Μάρτη 2015? Αποδεκτές: 22 του Ιούλη του 2015? Δημοσιεύθηκε: 18 Αυγούστου, 2015

Copyright: © 2015 Zhi et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του χαρτιού

Χρηματοδότηση:. η εργασία αυτή χρηματοδοτήθηκε από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (στο ZM, Νο 30872466), Εθνικό Πρόγραμμα για τις βασικές Βασική Ερευνητικό Πρόγραμμα (973 Program) της Κίνας (στο ZM, Όχι 2010CB529404). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

καρκίνος του παχέος εντέρου είναι η τρίτη πιο συχνά διαγιγνώσκεται ο καρκίνος στους άνδρες και η δεύτερη στις γυναίκες [1], αλλά οι εξελίξεις της θεραπείας κατά του καρκίνου έχουν γίνει περιορισμένα τα τελευταία 50 χρόνια. Η αποτυχία της θεραπείας κατά του καρκίνου αποδίδεται σε έναν υποπληθυσμό καρκινικών κυττάρων που ονομάζεται καρκινικά βλαστικά κύτταρα (ΚΕΠ), που είναι η υποθετική καρκίνο κύτταρα έναρξης με τα χαρακτηριστικά των φυσιολογικών αρχέγονων κυττάρων, όπως η αυτο-ανανέωση, πολυδυναμικότητα και απεριόριστες πολλαπλασιασμό δυναμικό [ ,,,0],2]. Επιπλέον, τα ΚΕΠ πιστεύεται ότι είναι ζωτικής σημασίας για τα ναρκωτικά αντίστασης [3]. Ως εκ τούτου, πιστεύεται ότι ΚΕΠ είναι οι «σπόροι» του σχηματισμού καρκίνου και δύσκολο να εξαλειφθεί. Παχέος ΚΕΠ έχουν επίσης απομονωθεί και χαρακτηριστεί με βάση ΚΕΠ δείκτες όπως CD133 [4-9].

ΚΕΠ διαδραματίζουν καίριο ρόλο στην εισβολή καρκίνου και μετάσταση. Για να κατανοήσουμε πώς τα καρκινικά κύτταρα δημιουργούν μεταστάσεις, ο ρόλος της επιθηλιακής προς μεσεγχυματικά μετάβαση (ΕΜΤ) έχει μελετηθεί εκτενώς κατά την τελευταία δεκαετία. EMT παρέχει επεμβατική και μεταστατικό χαρακτηριστικά, αντοχή σε θεραπείες, και ΚΕΠ φαινοτύπων σε καρκινικά κύτταρα σε πειραματικά μοντέλα [10-15]. Τα καρκινικά κύτταρα που υποβάλλονται σε ΕΜΤ ρυθμίζουν προς τα κάτω τις πρωτεΐνες που συνδέονται με την προσκόλληση των κυττάρων, όπως Ε-καδερίνης, και ρυθμίζουν προς τα πάνω πρωτεΐνες που εκφράζονται σε μεσεγχυματικά κύτταρα, όπως βιμεντίνη, Ν-cadherin και ινονεκτίνης [13], και παράγοντες μεταγραφής συμπεριλαμβανομένων

σαλιγκάρι

,

Twist

, και

Slug

καθώς και [16]. EMT διευκολύνει επίσης την επιβίωση των καρκινικών κυττάρων μετά από θεραπεία με αντικαρκινικά φάρμακα, τα οποία στοχεύουν υποδοχείς επί των επιθηλιακών κυττάρων [12, 17]. Επιπλέον, η επαγωγή της EMT στα καρκινικά κύτταρα με φάρμακα ή υπερέκφραση του EMT μεταγραφικών παραγόντων οδηγεί σε απόκτηση ακινήτων μεσεγχυματικών και στην έκφραση των δεικτών των βλαστικών κυττάρων [18-20]. Από την άλλη πλευρά, τα καρκινικά κύτταρα μετά από θεραπεία με αντικαρκινικά φάρμακα, τα οποία έχει αποδειχθεί να εμπλουτίσουν ΚΕΠ, εκδηλώνουν τα φαινοτύπους και γονιδιακής έκφρασης, όπως ΕΜΤ [21]. Τα ευρήματα αυτά δείχνουν την στενή σχέση μεταξύ ΚΕΠ και την εξαγορά της EMT. Ωστόσο, η πλειοψηφία των παθολόγων είναι ακόμα πυρίμαχο με τη θεωρία EMT επειδή οριστική απόδειξη της ΕΜΤ συμβαίνουν σε ανθρώπινους όγκους που λείπει μέχρι στιγμής.

ΚΕΠ διαθέτουν εγγενή βιολογικά χαρακτηριστικά για το σχηματισμό του όγκου και μπορεί να εισβάλει ιστούς μέσω EMT. Αλλά είναι σαφές ότι το πώς θα αποφύγει την επιτήρηση του ανοσοποιητικού για την τελική επιβίωση σε ξενιστές ανοσοεπαρκών. Immunoevasion μπορεί να βοηθήσει ΚΕΠ να επιβιώσουν και μετά το σχηματισμό όγκων [3]. Προηγούμενες εκθέσεις έχουν προτείνει εγγενείς συνδέσεις μεταξύ ανοσοκαταστολή και EMT, όπως ότι σαλιγκάρι που προκαλείται από επαγόμενη EMT ρυθμιστικά Τ κύτταρα και μειωμένη δενδριτικά κύτταρα [22]. Στο σύνολό τους, υποθέτουμε immunoevasion είναι σημαντικό για τα ΚΕΠ που υποβάλλονται EMT μέσω παρανεοπλασματικό περιοχή της φλεγμονής χωρίς ανοσοποιητικό κάθαρση και στη συνέχεια να εφαρμόσουν την εισβολή και τη μετάσταση. Ωστόσο, τα δεδομένα εξακολουθούν να σπανίζουν των μηχανισμών immunoevasion σε ΚΕΠ [3].

B7H1, ένας συνδέτης του προγραμματισμένου κυτταρικού θανάτου 1 (PD-1), έχει γνωστό ως κρίσιμο συν-διεγερτικό μόριο και διαδραματίζει σημαντικό ρόλο στην επαγωγή και συντήρηση περιφερική ανοχή [23]. B7H1 αυξορρυθμίζεται στις σημαντικές είδη καρκινικών κυττάρων η οποία προσφέρει τα αρνητικά σήματα και οδηγεί σε ανοσοκαταστολή μέσω αλληλεπίδρασης PD-1-B7H1 μεταξύ καρκινικών κυττάρων και Τ κύτταρα [24, 25], με αποτέλεσμα ογκο-διηθητικά κύτταρα Τ δυσλειτουργία και στρατολόγηση Treg [26] . Αυτά τα χαρακτηριστικά καθιστούν B7H1 γίνει ένα πολλά υποσχόμενο στόχο για τον έλεγχο του καρκίνου. Παρ ‘όλα αυτά, η έκφραση B7H1 επί ΚΕΠ δεν είναι γνωστό καλά σε ορθοκολικό καρκίνο. Έτσι, ανιχνεύσαμε την έκφραση B7H1 σε καρκίνο του παχέος εντέρου σε αυτή τη μελέτη και έδειξε B7H1 έκφρασης και EMT φαινοτύπων για καρκίνο του παχέος εντέρου βλαστικά κύτταρα όμοια, το οποίο θα μπορούσε να είναι μηχανισμοί για την ΚΕΠ για να ξεφύγουν από το ανοσοποιητικό επιτήρησης και να εισβάλουν μακρινό ιστούς.

Υλικά και μέθοδοι

δήλωση Ηθικής

το ανθρώπινο ορθοκολικό καρκίνο ιστοί ελήφθησαν από το Νοσοκομείο Southwest κάτω ηθική πρωτόκολλα που εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας της Τρίτης Στρατιωτικό Ιατρικό Πανεπιστήμιο, Chongqing, Κίνα. Όλοι οι ασθενείς με την προϋπόθεση γραπτή συγκατάθεση. πειράματα σε ζώα εγκρίθηκαν από την Επιτροπή Θεσμικών ζώων Φροντίδα και Χρήση του τρίτου Στρατιωτικό Ιατρικό Πανεπιστήμιο. Όλες οι διαδικασίες ήταν, σύμφωνα με το Εθνικό Ινστιτούτο Υγείας Οδηγός για τη Φροντίδα και Χρήση των Ζώων Εργαστηρίου.

καρκινικούς ιστούς και κυτταρικές Γραμμή

Τα ανθρώπινα παχέος όγκοι ιστοπαθολογικά αξιολογούνται και κατατάσσονται από την από όγκο κόμβος-Μετάσταση σύστημα (TNM) στάσης (Πίνακας 1). Τα κύτταρα του παχέος εντέρου κυτταρική γραμμή ΗΤ29 (Αριθμός καταλόγου: TCHu 103, αγόρασε στις 29 του Μάη 2010 από την Τράπεζα Κυττάρων της Κινεζικής Ακαδημίας Επιστημών, Σαγκάη, Κίνα) καλλιεργήθηκαν σε McCoy 5Α (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου μόσχου (FBS) (Gibco, Grand Island, ΝΥ, USA).

Η

μαγνητική διαλογή κυττάρων

ΗΤ29 κύτταρα συλλέχθηκαν σε φάση εκθετικής ανάπτυξης με 0,25% θρυψίνη ( περιείχαν EDTA), στη συνέχεια, κατατάσσονται σύμφωνα με CD133 κελί απομόνωσης Kit (Miltenyi Biotec GmbH, Μπέργκις Γκλάντμπαχ, Γερμανία) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Τα νεκρά κύτταρα απομακρύνθηκαν με Dead Απομάκρυνση Κυττάρων Kit (Miltenyi Biotec) πριν από τη διαλογή. Το CD133

+ και CD133

– κλάσματα συλλέγονται χωριστά και χρωματίστηκαν με ανθρώπινο /2 (293C3) αντίσωμα CD133 ΡΕ-συζευγμένο (Miltenyi Biotec). ΡΕ-συζευγμένα ποντικού IgG2b (Miltenyi Biotec) χρησιμοποιήθηκε ως αντίσωμα ελέγχου ισοτύπου. Η καθαρότητα των κυττάρων εκτιμήθηκε με κυτταρομετρία ροής (BD FACSCanto Ⅱ, San Jose, CA, USA).

Ογκογονικά δοκιμασίες σε ποντίκια

/LtSz-scid /scid (/SCID NOD) ποντίκια NOD (που αγοράστηκαν από το Πεκίνο Εργαστήριο Κέντρο Animal Research, Κίνα) εκτράφηκαν και διατηρήθηκαν στην Ατομική Αεριζόμενες εγκλωβισμού Σύστημα υπό όρους που εγκρίνει η Επιτροπή Θεσμικών Ζωικά Φροντίδα και Χρήση του τρίτου Στρατιωτικό Ιατρικό Πανεπιστήμιο. CD133

+ και CD133

– κύτταρα ταξινομήθηκαν και μετρήθηκαν πριν από τον εμβολιασμό. Τα καρκινικά κύτταρα αιωρήθηκαν σε ένα μίγμα 1: 1 των μέσων ενημέρωσης και matrigel (BD Biosciences, Bedford, UK) και ενέθηκαν υποδορίως στα πλευρά των 4 ποντικών (περίπου ηλικίας 8-10 εβδομάδων). Κάθε πλευρά εγχύθηκε 1 × 10

4 κύτταρα. Η ανάπτυξη των όγκων παρακολουθήθηκε εβδομαδιαία και μετρήθηκε ο όγκος με μήκος Χ πλάτος Χ πλάτος /2. Όλα τα ποντίκια θυσιάστηκαν μετά από 7 εβδομάδες μεταμόσχευση. Τα ξενομοσχεύματα αφαιρέθηκαν, μονιμοποιήθηκαν με 10% ρυθμιστικό διάλυμα φορμόλης και χρωματίζονται με αιματοξυλίνη και ηωσίνη (ΗΕ)

Σφαίρα σχηματισμό δοκιμασία

Η ταξινομημένη CD133

+ και CD133

. – τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε απαλλαγμένο από ορό μέσο (NS-ένα βασικό μέσο, ​​StemCell Technologies, Vancouver, BC, Canada) συν 10% NS-Α Συμπληρώματα Πολλαπλασιασμού (Άνθρωπος) (StemCell Technologies), επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGF) (20 ng /mL) (StemCell Technologies), βασικό αυξητικό παράγοντα ινοβλαστών (bFGF) (10 ng /mL) (StemCell Technologies) και ηπαρίνη (2 μg /mL) (Invitrogen). Το μέσο καλλιέργειας αντικαταστάθηκε κάθε 3 ημέρες. Οι εικόνες από τις σφαίρες είχαν συλληφθεί μετά από 20 ημέρες από το μικροσκόπιο και μετρήθηκαν οι αριθμοί κάτω από 100 × μεγέθυνση σε τυχαία οπτικά πεδία. Μερικές σφαίρες χρωματίστηκαν με ΡΕ-συζευγμένο /2 (293C3) αντίσωμα CD133 (Milteny Biotect). Μερικές σφαίρες όγκου διαχωρίστηκαν με κολλαγενάσης τύπου Ⅳ (Sigma-Aldrich, St Louis, ΜΟ, USA) και στη συνέχεια καλλιεργήθηκαν σε μέσο άνευ ορού ως αναφορά παραπάνω για να προσδιοριστεί αν θα μπορούσε να σχηματίσει σφαιρίδια και πάλι.

εκχύλιση RNA, cDNA σύνθεση, και Q-PCR

CD133

+ και CD133

– κύτταρα ΗΤ29 συλλέχθηκαν αντίστοιχα και προστίθεται TriPure (Roche Diagnostics, Indianapolis, IN, USA) για την εξαγωγή RNA. 500 ng RNA για κάθε δείγμα αντίστροφα μεταγράφηκε σε ένα μίγμα αντίδρασης 20 μι (ΤΟΥΟΒΟ Bio-Technology, Σαγκάη, Κίνα). Το επίπεδο έκφρασης του κάθε γονιδίου προσδιορίστηκε με πραγματικού χρόνου ποσοτική PCR (Q-PCR). Επίπεδο προϊόντος προσδιορίστηκε με SYBR Green (TAKARA Βιοτεχνολογίας, Dalian, Κίνα). Q-PCR διεξήχθη με σύστημα Mx3000P qPCR (Agilent Technologies) με το ακόλουθο πρόγραμμα: αρχική αποδιάταξη για 2 λεπτά στους 95 ° C που ακολουθείται 45 κύκλοι PCR (95 ° C για 10 δευτερόλεπτα, 60 ° C για 30 δευτερόλεπτα, 72 ° C για 30 δευτερόλεπτα). Μετά από αυτή ενός κύκλου που σχεδιάστηκε από λογισμικό Mx3000P (95 ° C για 60 δευτερόλεπτα, 55 ° C για 30 δευτερόλεπτα, 95 ° C για 30 δευτερόλεπτα) προστέθηκε για ανάλυση καμπύλης τήξης. Primer αλληλουχίες που παρατίθενται στον Πίνακα 2. Η γλυκεραλδεΰδη φωσφορικής αφυδρογονάσης (GAPDH) χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος γονίδιο καθαριότητας.

Η

ανοσοφθορισμού χρώση

Οι κατεψυγμένες τομές των ιστών του καρκίνου βάφτηκαν σύμφωνα με απευθείας σύνδεση πρωτόκολλο (https://www.ihcworld.com/_protocols/general_IHC/immunofl.htm). Αντισώματα κατά της ανθρώπινης CD133, B7H1, Ε-καδερίνη και βιμεντίνης χρησιμοποιήθηκαν για να προσδιοριστεί η έκφραση των δεικτών EMT για CD133 θετικά ή B7H1 θετικά κύτταρα. Παρομοίως, τα αντισώματα κατά της ανθρώπινης CD133, B7H1 και EpCAM χρησιμοποιήθηκαν για την ανίχνευση της έκφρασης CD133 και B7H1 σε καρκινικούς ιστούς. Οι λεπτομέρειες της επιλογής αντισώματα που παρατίθενται στον Πίνακα 3. Δευτεροβάθμια αντισώματα αγοράστηκαν από Beyotime Ινστιτούτο Βιοτεχνολογίας, Σαγκάη της Κίνας. Διαμιδινο-φαινυλ-ινδόλη (DAPI) (Beyotime Biotechnology) χρησιμοποιήθηκε για τη χρώση πυρήνα. Οι μάρτυρες περιελάμβαναν: 1) Κενό: χρησιμοποιείται αντίσωμα ρυθμιστικό διάλυμα αραίωσης (5% αλβουμίνη βόειου ορού σε φωσφορικό-ρυθμιστικό αλατούχο διάλυμα, ρΗ 7,2) μόνο? 2) Αρνητικός μάρτυρας: χρησιμοποιείται αντίσωμα ρυθμιστικό διάλυμα αραίωσης συν δευτερογενή αντισώματα? 3) έλεγχος ισοτύπου αντισώματος: χρησιμοποιείται IgG από είδος αντισώματος αραιώνεται με ρυθμιστικό διάλυμα αραίωσης αντισώματος συν δευτερογενή αντισώματα. Οι έλεγχοι χρησιμοποιήθηκαν για να αποφευχθεί η μη ειδική φθορισμού.

Η

ΗΤ29 κύτταρα χρώση πρωτόκολλο ήταν παρόμοιο με τους ιστούς του καρκίνου, αλλά πριν από αυτό τα κύτταρα σπάρθηκαν πάνω σε πολυ-Ε-λυσίνη (Sigma-Aldrich) προεπικαλυμμένα-καλυπτρίδες, καλλιεργημένα σε μέσο McCoy 5Α για 24 ώρες και στη συνέχεια σταθεροποιήθηκαν με Καθήλωση και διαπερατότητα Solution (BD Biosciences).

Μετά τη χρώση, όλα τα πλακίδια διατηρήθηκαν σε υγροποιημένη θαλάμους μακριά από το φως στους 4 ° C μέχρι τη λήψη εικόνας.

εικόνες σύλληψη και την έκφραση ανάλυση

Όλα τα συνεστιακή εικόνες συλλήφθηκαν με σάρωση με λέιζερ ομοεστιακό μικροσκόπιο φθορισμού (Leica TCS-SP5, Γερμανία). Έλεγχοι χρησιμοποιήθηκαν για να ρυθμίσετε τη σωστή κατάσταση λήψης για να αποφευχθεί η μη ειδική παρεμβολή φθορισμού. Το ίδιο δείκτη σε διαφορετικές διαφάνειες ανιχνεύθηκε υπό τις ίδιες συνθήκες. ρυθμοί έκφρασης μετρήθηκαν με απαρίθμηση που αντιστοιχεί θετικά κύτταρα στις εικόνες σύλληψη. Κάθε διαφάνεια μετρήθηκε πάνω από 5 πεδία και μετρήθηκαν τουλάχιστον 1000 κύτταρα.

Η στατιστική ανάλυση

Οι διαφορές των όγκων ξενομοσχεύματος, αριθμούς σφαίρα και το επίπεδο έκφρασης του mRNA μεταξύ CD133

+ και CD133

– κύτταρα αναλύθηκαν από Φοιτητών

t-test

. Ένα

σ

-τιμή & lt? 0,05 θεωρήθηκε σημαντική διαφορά. Όλες οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του λογισμικού SPSS (έκδοση 13.0).

Αποτελέσματα

CD133

+ κύτταρα έχουν περισσότερες ογκογόνο ικανότητα σχηματισμού δυναμικού και του όγκου σφαίρας

Καθώς οι συζητήσεις της εξακολουθούν να υπάρχουν ΚΕΠ δείκτες [27, 28], ελέγξαμε τα καρκινικά βλαστικά χαρακτηριστικά παρόμοια με των ταξινομημένων CD133

+ κύτταρα πρώτα. CD133

+ και CD133

– κύτταρα ΗΤ29 συλλέχθηκαν για τον προσδιορισμό της κυτταρικής ογκογονικότητας. Το ποσοστό των CD133

+ κυττάρων ήταν περίπου 90% (Σχήμα 1Α). Δέκα χιλιάδες CD133

+ και CD133

– υποδόρια ένεση στις διάφορες πλευρές της NOD /SCID ποντίκια. Από 5 εβδομάδες μετά την ένεση, οι όγκοι που προέρχονται από CD133

+ κύτταρα άρχισαν να είναι σημαντικά μεγαλύτερα από αυτά που προέρχονται από CD133

– κύτταρα (Εικόνα 1Β και 1Γ). Το CD133

+ κυττάρων ξενομοσχεύματα έδειξαν κακοήθη ιστολογία όπως ο καρκίνος του παχέος εντέρου (Εικ 1D), υποδηλώνοντας ότι CD133

+ κύτταρα είναι πιο ογκογόνα. Επιπλέον, ο σχηματισμός σφαίρα είναι ένα από τα χαρακτηριστικά των ΚΕΠ [4], που καθορίζεται σχηματισμό σφαίρα της CD133

+ κύτταρα και διαπίστωσε ότι CD133

+ κύτταρα που σχηματίζονται σημαντικά περισσότερες σφαίρες του όγκου από το CD133

– κυττάρων σε ελεύθερο ορού ελεύθερο μέσο καλλιέργειας

in vitro

(Σχήμα 1 Ε). Επιπλέον, σχεδόν όλα τα κύτταρα στο CD133

+ κύτταρα που προέρχονται σφαίρες όγκου εκφράζεται υψηλό επίπεδο CD133 (Σχήμα 1 F). Επιπλέον, μετά διαστάσεως κυττάρων με κολλαγενάση, τα κύτταρα θα μπορούσαν να σχηματίσουν σφαίρες όγκου πάλι σε μέσο ελεύθερο ορού (Σχήμα 1G), υποδεικνύοντας την ικανότητα αυτο-ανανέωσης των CD133

+ κύτταρα. Συνολικά, αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι CD133

+ κύτταρα κατείχε ΚΕΠ-όπως ιδιότητες.

ΗΤ29 κύτταρα καθαρίστηκαν με CD133 μαγνητικά σφαιρίδια. Η καθαρότητα του CD133

+ κυττάρων προσδιορίστηκε με κυτταρομετρία ροής (Α). 1 × 10

4 CD133

+ και CD133

– κύτταρα υποδόρια ένεση στις διάφορες πλευρές της NOD /SCID ποντίκια. καμπύλη ανάπτυξης του ξενομοσχεύματος όγκων σε ποντίκια NOD /SCID δείχνει διαφορετική ικανότητα της ογκογένεσης σε δύο υποπληθυσμούς (Β). Η κινητική του μεγέθους του όγκου παρακολουθήθηκε μία φορά την εβδομάδα (η = 4, μέση ± SD, **,

ρ & lt?

0.01) .A εκπρόσωπος του ποντίκια φαίνεται στις 7 εβδομάδες μετά τον εμβολιασμό (C). Τα τμήματα των ξενομοσχευμάτων (D) από CD133

+ κύτταρα (αριστερή, 200 × μεγέθυνση) και CD133

– κύτταρα (δεξιά, 200 × μεγέθυνση) αναλύθηκαν με αιματοξυλίνη και ηωσίνης (bar = 100 μm). CD133

+ κυττάρων δείχνουν πολύ πιο ισχυρό από το σχηματισμό σφαίρας από CD133

– αυτοί (Ε). Οι αριθμοί ιστόγραμμα δείχνει σφαιρών που προέρχονται από διαφορετικούς υποπληθυσμούς (**,

p & lt?

0.01). σφαίρες όγκου εκφράζουν CD133 (F, κορυφή: ουδέτερο φως? κάτω: φθορισμού, κόκκινο? bar = 100 μm). Μετά την αποσύνδεση, τα κύτταρα που σχηματίζονται σφαίρες και πάλι (G, κάτω) σε μέσο καλλιέργειας ελεύθερο ορού, όπως μεγαλύτερης ηλικίας τους (G, επάνω) (bar = 100 μm).

Η

CD133

+ ΗΤ29 κύτταρα εκφράζουν τόσο βλαστικών κυττάρων που σχετίζονται και ΕΜΤ-μόρια που συνδέονται

ΚΕΠ είναι η υποθετική καρκίνος-κύτταρα έναρξης με τα χαρακτηριστικά των φυσιολογικών αρχέγονων κυττάρων που εκφράζουν δείκτες πλειοδυναμίας, όπως Sox-2 και Oct-4 [29-31] . Για να προσδιορίσετε αν CD133

+ ΗΤ29 κύτταρα εκφράζουν επίσης τις κυττάρων που σχετίζεται με παράγοντες στέλεχος, το μεταγραφικό επίπεδο Oct-4 και Sox-2 έκφραση μετρήθηκε. Όπως ήταν αναμενόμενο, δύο δείκτες βλαστικών κυττάρων Oct-4 και Sox-2 εκφράστηκαν σημαντικά υψηλότερο σε CD133

+ υποπληθυσμό (

σ

& lt? 0,05) από ό, τι CD133

– κυττάρων (Σχήμα 2Α), η οποία είναι συνεπής με Oct-4 και Sox-2 υπερέκφραση σε χαμηλής διαφοροποίησης όγκους [32].

Σχετικά επίπεδα έκφρασης του mRNA των δεικτών των βλαστικών κυττάρων Oct-4 και Sox-2 (Α), συνδέεται EMT παράγοντες μεταγραφής Twist και σαλιγκάρι (Β), και EMT σημειωτές Ε-καδερίνης, ινωδονεκτίνη, και βιμεντίνη (C) προσδιορίσθηκαν με πραγματικού χρόνου ποσοτική PCR και ομαλοποιήθηκε ως προς την έκφραση GAPDH. *,

p & lt?

0,05? **

p & lt?.

0.01

Η

Προηγούμενη μελέτη έδειξε ότι η EMT εμπλέκεται στη μετατροπή των όγκων σε πρώιμο στάδιο επεμβατική κακοήθειες [33]. Είναι ενδιαφέρον ότι, συσσωρεύοντας αποδείξεις δείχνουν ότι η επαγωγή της ΕΜΤ φαινοτύπων από διαφορετικούς παράγοντες επίσης επάγει CSC-όπως κυττάρων [15]. Ωστόσο, δεν είναι σαφές εάν οι φαινότυποι ΚΕΠ οθόνη EMT. Για να απαντηθεί αυτό το ερώτημα, η έκφραση της EMT-μόρια που συνδέονται σε κύτταρα ΗΤ29 ανιχνεύθηκε, συμπεριλαμβανομένων των παραγόντων μεταγραφής σαλιγκάρι και Twist, επιθηλιακά πρωτεΐνη E-cadherin, δείκτες μεσεγχυματικών βιμεντίνη και ινωδονεκτίνη. CD133

+ κυττάρων εξέφρασαν σημαντικά υψηλότερα επίπεδα σαλιγκάρι, Twist, βιμεντίνη και φιμπρονεκτίνη από CD133

– κυττάρων (

p & lt?

0,05) (Σχήμα 2Β και 2Γ). Αντίθετα, η έκφραση Ε-καντερίνης CD133

+ κυττάρων ήταν σημαντικά χαμηλότερη (

σ

& lt? 0,05). (Σχήμα 2C), υποδεικνύοντας CD133

+ κύτταρα εκδηλώνεται EMT που σχετίζονται με τα χαρακτηριστικά

CD133

+ κυττάρων στους ιστούς των ασθενών εμφανίζουν EMT φαινοτύπων

Αν και η EMT ήταν ευρέως μελετηθεί

in vitro

, το βασικό ερώτημα σχετικά με EMT ήταν ότι η άμεση απόδειξη αυτού του φαινομένου που συμβαίνει στο ανθρώπινο καρκινικούς ιστούς έλειπε. Για την αντιμετώπιση αυτού του ζητήματος, η έκφραση του CD133 και EMT-φαινοτυπική μόρια αναλύθηκε στην ανθρώπινη παχέος καρκινικούς ιστούς. CD133 εκφράστηκε dispersedly δίπλα στο αδενοκαρκίνωμα φωλιά (Σχήμα 3), αλλά όχι στην παρανεοπλασματική ιστού (S1 Σχήμα). Είναι ενδιαφέρον, βρήκαμε ότι ορισμένοι CD133

+ κύτταρα εκφράζουν βιμεντίνη (Σχήμα 3Β) αλλά όχι Ε-καδερίνης σε 13/20 ανιχνεύεται ανθρώπινο ορθοκολικό καρκίνο ιστούς (Σχήμα 3Α). Με χρώση αυτών των τριών μορίων στο ίδιο τμήμα, επιβεβαιώσαμε ένα τμήμα του CD133

+ κυττάρων σε διαφορετικά δείγματα (20% -40% της συνολικής CD133

+ κύτταρα) έδειξε αυτό το φαινότυπο (Σχήμα 3C). Ανέφερε την άμεση απόδειξη ότι ορισμένοι CD133

+ καρκινικά βλαστικά κύτταρα που μοιάζουν είχε EMT φαινοτύπων σε ανθρώπινους καρκινικούς ιστούς.

Η έκφραση του CD133 (κόκκινο), Ε-καντερίνη (πράσινο) (Α) ή CD133 (κόκκινο) και βιμεντίνης (πράσινο) (Β) ή CD133 (κόκκινο), Ε-καδερίνης (πράσινο) και βιμεντίνης (μπλε) (C) προσδιορίστηκαν με χρώση ανοσοφθορισμού. Οι πυρήνες βάφτηκαν με DAPI (Α, Β: μπλε? C: γκρι). Έχει αποδειχθεί ένας εκπρόσωπος του παχέος εντέρου μετρίως διαφοροποιημένο αδενοκαρκίνωμα, T3N0M0. (Bar = 20 μm)

Η

Συν-έκφραση B7H1 και CD133 σε ΗΤ29 κυτταρική σειρά και του παχέος καρκινικούς ιστούς

Για να διερευνήσουν τον μηχανισμό πώς ΚΕΠ ξεφύγουν από το ανοσοποιητικό επιτήρησης, η έκφραση B7H1 προσδιορίστηκε σε κυτταρική γραμμή ΗΤ29 και του παχέος καρκινικούς ιστούς. Βρήκαμε ότι η συν-έκφραση B7H1 και CD133 ήταν πανταχού παρούσα σε ΗΤ29 κύτταρα (Σχ 4Α). Να καθορίσει την περαιτέρω έκφραση B7H1 στους ιστούς των ασθενών, συλλέχθηκαν παχέος καρκινικούς ιστούς. EpCAM, ένα επιθηλίου του αυλού δείκτη, χρησιμοποιήθηκε για να διακρίνει τις φωλιές του καρκίνου και την περιοχή στρωματικά [34]. Βρήκαμε ότι B7H1 εκφράστηκε κυρίως σε καρκινικά κύτταρα σε περισσότερα από τα μισά (11/20) του παχέος ιστούς καρκίνου (Πίνακας 4). Ακόμη πιο ενδιαφέρον, περίπου το 50% του CD133 καρκινικά κύτταρα που εκφράζουν εκφράζονται B7H1 (Εικόνα 4Β και 4C, Πίνακας 4). Επιπλέον, B7H1 και CD133 ήταν πάντοτε συν-εκφράζονται σε ΕρΟΑΜ

+ κύτταρα (Εικόνα 4Β και 4C). Δείχνει CD133

+ ΚΕΠ θα μπορούσε να ξεφύγει από το ανοσοποιητικό επιτήρησης εκφράζοντας ανασταλτικό μόριο B7H1.

Η έκφραση του CD133 (κόκκινο) και B7H1 (πράσινο) σε κύτταρα ΗΤ29 (Α) (Bar = 20 μm), και έκφραση του EpCAM (μπλε), CD133 (κόκκινο) και B7H1 (πράσινο) σε ορθοκολικό καρκινικούς ιστούς (Β) (Bar = 50 μm) προσδιορίστηκαν με χρώση ανοσοφθορισμού. Οι πυρήνες βάφτηκαν με DAPI (γκρι). Η περιοχή ορθογώνιο στην εικόνα μεγεθύνεται (C) και δείχνει μια τυπική συν-έκφραση του CD133 και B7H1 (υποδεικνύεται με τα βέλη). Έχει αποδειχθεί έναν εκπρόσωπο του ορθού μετρίως διαφοροποιημένο αδενοκαρκίνωμα, T3N0M0.

Η

B7H1 κύτταρα που εκφράζουν εμφανίζουν φαινοτύπους EMT στην παχέος ιστούς

Βρήκαμε ότι B7H1 εκφράστηκε για CD133

+ κύτταρα και θα μπορούσαν να παίξουν ένα ρόλο στην immunoevasion καρκίνου βλαστικών κυττάρων που μοιάζουν. Θα ήταν ενδιαφέρον να μάθουμε αν η έκφραση B7H1 σχετίζεται με EMT. Για να αντιμετωπιστεί αυτό άμεσα, η έκφραση σε κύτταρα B7H1 φαινοτυπική EMT προσδιορίστηκε σε 11 δείγματα ανθρώπινου ορθοκολικού καρκίνου κατά την οποία CD133 συν-εκφράζεται με B7H1. Παρόμοια με προηγούμενες μελέτες [35], B7H1 εκφράστηκε σε καρκινικά κύτταρα ειδικά στην άκρη του καρκίνου (Σχήμα 5). Σε αυτές τις περιπτώσεις, ιδίως όταν φαινόταν σαν όγκου εκκολαπτόμενους, διαπιστώσαμε ότι το 20% -40% των B7H1expressing καρκινικών κυττάρων κάτω-ρυθμιζόμενη E-cadherin (Σχήμα 5Α). Επιπλέον, το 10% -25% των B7H1

+ καρκινικά κύτταρα εξέφρασαν vimentin, ένα μεσεγχυματικά δείκτη (σχήμα 5Β), υπάρχουν αναφέροντας φαινότυπο EMT σε ορισμένες B7H1

+ κύτταρα. Στο σύνολό τους, πρότεινε ότι η υπερέκφραση της B7H1 θα μπορούσε να είναι ένας από immunoevasive μηχανισμών όχι μόνο για

+ ΚΕΠ CD133, αλλά και για την παροδική καρκινικά κύτταρα EMT φαινοτυπική.

Η έκφραση της B7H1 (πράσινο) και Ε- καδερίνης (κόκκινο) (Α) ή B7H1 (πράσινο) και βιμεντίνης (κόκκινο) (Β) προσδιορίστηκαν με χρώση ανοσοφθορισμού. Ένα από B7H1 κυττάρων που εκφράζουν υποδεικνύεται με ένα βέλος. Οι πυρήνες βάφτηκαν με DAPI (μπλε). Έχει αποδειχθεί ένας εκπρόσωπος του παχέος εντέρου μετρίως διαφοροποιημένο αδενοκαρκίνωμα, T3N0M0. (Bar = 20 μm)

Η

Συζήτηση

Τα ΚΕΠ θεωρούνται ότι είναι οι «σπόροι» των καρκίνων και μπορεί να εμπλουτιστεί με κυτταρική διαλογή με βάση κάποιες συγκεκριμένες δείκτες επιφάνειας. Αν και οι δείκτες των ΚΕΠ είναι ακόμα αμφισβητήσιμη, τα καρκινικά κύτταρα που εκφράζουν ορισμένα ειδικά μόρια εμφανίζουν ΚΕΠ-όπως ιδιότητες [9]. CD133 είναι ένας από τους δείκτες των αιμοποιητικών βλαστικών κυττάρων και θεωρείται ότι είναι ένας δείκτης CSCs σε καρκίνο του παχέος εντέρου [5-7, 27, 28, 36]. Σε αυτή τη μελέτη, CD133

+ κύτταρα είχαν ΚΕΠ-όπως χαρακτηριστικά δείχνοντας ικανότητα της σφαίρας σχηματίζουν και ογκογονικότητα, εκφράζοντας υψηλότερα επίπεδα δεικτών βλαστοκυττάρων Oct-4 και Sox-2 που υπερεκφράζεται σε πτωχά διαφοροποιημένο όγκους [29, 31] . Επιπλέον, αυτά τα κύτταρα εκδηλώνεται προφίλ γονιδιακής έκφρασης EMT, η οποία είχε θεωρηθεί ότι είναι μια σημαντική ιδιαιτερότητα που συνδέουν σε ΚΕΠ [15].

Τα αποτελέσματα των ΚΕΠ-όπως χαρακτηριστικά του + κυττάρων CD133

ήταν σύμφωνες με προηγούμενες μελέτες [5-7]. Αντίθετα, υπάρχουν κάποια άλλα αποτελέσματα έδειξαν ότι τα αρνητικά κύτταρα CD133 κατείχε ΚΕΠ-όπως ιδιότητες, αντί [27, 28]. Για παράδειγμα, μία αρνητική κυτταρική σειρά CD133 (NANK) ιδρύθηκε από ξενομοσχεύματα που προέκυψαν από φρέσκο ​​χειρουργική δείγματα ανθρώπινης κολονικής πρωτογενούς και μεταστατικού ωοθηκών καρκινικούς ιστούς του μεταμοσχεύθηκαν σε NOD /SCID ποντικούς [28]. κύτταρα NANK κατείχε ΚΕΠ-όπως χαρακτηριστικά όπως ο σχηματισμός σφαίρα και ογκογένεσης με NOD ποντίκια /SCID. Σε σύγκριση με τη μελέτη μας, μπορεί να διαπιστωθεί ότι η προέλευση των καρκινικών κυττάρων ήταν αρκετά διαφορετική, το οποίο θα μπορούσε να επηρεάσει τη συνοχή των αποτελεσμάτων. Επιπλέον, τα κύτταρα NANK διέφερε από την αρχική τους καρκίνο, καθώς, όπως αυτή που CD133 και CD44 εκφράστηκαν στην αρχική του καρκίνου, αλλά μάλλον ασθενώς σε NANK. Ως εκ τούτου, φαίνεται ότι αυτή η αντίθεση υποδηλώνει το συγκρότημα του καρκίνου παρά τα λάθη των ερευνητικών μεθόδων. Αν αυτό δεν είναι αρκετό αυστηρή για να χρησιμοποιήσετε CD133 και μόνο για να προσδιορίσουν τα ΚΕΠ, είναι επιβεβαίωσε ότι ΚΕΠ εμπλουτίστηκαν με CD133

+ υποπληθυσμό και έκανε την εμφάνιση ΚΕΠ-όπως χαρακτηριστικά. Είναι ενδιαφέρουσα και πολύτιμη για να διερευνήσει τα χαρακτηριστικά αυτού του υποπληθυσμού.

CD133

+ καρκίνο του παχέος εντέρου κύτταρα και στις δύο κυτταρικές γραμμή και καρκινικούς ιστούς που εκδηλώθηκε τα χαρακτηριστικά τους έκανε ιδιαίτερη και πιο εύκολο να εισβάλει και να μεταστάσεις. Σε αυτή τη μελέτη, διαπιστώσαμε ότι CD133

+ ΗΤ29 κύτταρα έδειξαν φαινοτύπων EMT και συν-εκφράζεται B7H1, υποδεικνύοντας ΚΕΠ μπορούν να εκφράσουν B7H1 να αποφύγει το ανοσοποιητικό επιτήρησης όταν εισβάλουν μέσα EMT. Παρόμοια με τα κύτταρα ΗΤ29, επίπεδο έκφρασης CD133 σε ορθοκολικό καρκινικούς ιστούς ήταν μεταβλητή σε διαφορετικά κύτταρα. Προηγούμενες μελέτες έδειξαν ότι CD133 εκφράστηκε σε καρκινικά κύτταρα αλλά όχι αιμοκύτταρα [4, 5] και τα περισσότερα κύτταρα καρκινώματος εξέφρασαν μεμβράνη γλυκοπρωτεΐνη EpCAM [34], το οποίο θεωρείται ως ένα από δείκτες CSC σε διάφορους τύπους καρκινώματος [37] Εμείς διαπίστωσε ότι CD133 εκφράστηκε στις EpCAM

+ κύτταρα (Σχήμα 4), υποδεικνύοντας τα CD133 κύτταρα που εκφράζουν τα ορθοκολικού καρκίνου κύτταρα. Αν και EMT ενδείκνυται ως το χαρακτηριστικό του ΚΕΠ, αν υπάρχει εγγενής σχέση μεταξύ τους παραμένουν ασαφείς. Σε προηγούμενες μελέτες, ΚΕΠ που μοιάζουν με κύτταρα θα μπορούσαν να δημιουργηθούν από επαγόμενη ενεργοποίηση EMT σε κυτταρικές γραμμές ή μοντέλο ποντικού [19, 38]. Έτσι, σκεφτήκαμε ότι παρόμοιο φαινόμενο μπορεί να υπάρχουν στον καρκίνο του παχέος εντέρου. Στην τρέχουσα πείραμα, ομοεστιακό μικροσκόπιο χρησιμοποιήθηκε για την ανίχνευση διαφόρων δεικτών έκφραση σε καρκίνους, η οποία θα μπορούσε να παρατηρήσει έκφραση πολλών πρωτεϊνών σε κάθε κύτταρο ταυτόχρονα. Όπως ήταν αναμενόμενο, βρήκαμε ότι CD133

+ κυττάρων σε ανθρώπινο ορθοκολικό καρκινικούς ιστούς είχε EMT φαινοτύπους, προς τα κάτω ρύθμιση της Ε-καδερίνης και προς τα πάνω ρύθμιση βιμεντίνη. Αυτό το φαινόμενο συνέβη σε ένα τμήμα του CD133 θετικών κυττάρων, τα οποία θα μπορούσαν να ασχολούνται με το λόγο που EMT ήταν μια δυναμική πορεία και σκληρά για να πιάσει το διακόπτη. Στο σύνολό τους, τα αποτελέσματά μας δείχνουν την άμεση σχέση μεταξύ ΚΕΠ και EMT στο παχέος καρκινικούς ιστούς.

ΚΕΠ έχουν εγγενή βιολογικά χαρακτηριστικά για να σχηματίσουν όγκους και μπορεί να κάνει μετάσταση μέσω EMT. Θα ήταν ενδιαφέρον να καθορίσει πώς θα αποφύγει την επιτήρηση του ανοσοποιητικού για την τελική επιβίωση ειδικά σε ανοσοεπαρκείς ξενιστές. B7H1 είναι ένα κρίσιμο αρνητικό συν-διεγερτικό μόριο που οδηγεί σε immunoevasion σε καρκίνους. B7H1 έκφραση CD133

+ καρκινικά κύτταρα δείχνει ότι B7H1 μπορεί να διαδραματίσει έναν ρόλο στην ΚΕΠ. Πρόσφατα κλινικές δοκιμές έδειξαν ότι η αναστολή του PD-1-B7H1 μονοπάτι καταλήγει σε σχετικά καλή πρόγνωση σε αντικαρκινική θεραπεία και την έκφραση B7H1 σε καρκινικούς ιστούς συνδέεται με έκβαση της θεραπείας [39]. Με βάση αυτά που βρήκαμε εδώ, αυτό το αξιοθαύμαστο αποτέλεσμα μπορεί να σχετίζεται με τον έλεγχο των ΚΕΠ στοχεύοντας μονοπάτι PD-1-B7H1. B7H1 θεωρείται καλύτερη στόχο από μια άλλη αρνητική συν-διέγερσης μόριο CTLA-4, επειδή η κατανομή των B7H1 /PD-1 άξονας είναι εντός μικροπεριβάλλον του όγκου πιο επιλεκτικά [40, 41]. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι η στόχευση B7H1 θα μπορούσε να βλάψει την «προνομιακή ένοχος» του καρκίνου, καρκινικά βλαστικά κύτταρα, σε καρκίνο του παχέος εντέρου. Επιπλέον, ορισμένες B7H1

+ εκδηλωμένη EMT-φαινότυπο, υπονοώντας την πιθανή σύνδεση της immunoevasion και EMT. Στο διαγονιδιακό μοντέλο ποντικών, είχε αποδειχθεί ότι η ρύθμιση προς τα άνω του Β7-Η1 στο δέρμα επιθηλιακά κύτταρα προωθούνται EMT και επιταχύνει την καρκινογένεση [42], η οποία ήταν σύμφωνη με το εύρημα μας ότι B7H1 εκφράζουν τα καρκινικά κύτταρα είχαν EMT φαινοτύπων σε παχέος καρκινικούς ιστούς.

στο σύνολό τους, τα αποτελέσματά μας έδειξαν έκφραση B7H1 και φαινοτύπων EMT στο CD133

+ κύτταρα, υποδεικνύοντας τους πιθανούς μηχανισμούς ΚΕΠ για να ξεφύγουν από το ανοσοποιητικό επιτήρησης και να εισβάλουν μακρινό ιστούς. Αν και μερικές μελέτες αμφιβάλλουν για CD133 για δείκτη ΚΕΠ », τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι το CD133

+ υποπληθυσμό περιλαμβάνεται ένα τμήμα των κυττάρων διαθέτει χαρακτηριστικά βοηθώντας τα κύτταρα εισβάλλουν και μεταστάσεις, κυρίως στην οποία πρόδηλη φαινοτύπους EMT και να εκφράσουν B7H1. Ένα τέτοιο μικρό τμήμα των καρκινικών κυττάρων έχουν ισχυρό ογκογενετικότητας και θα μπορούσε να εισβάλει και να μεταστάσεις χωρίς ανοσολογική επίθεση, η οποία μπορεί να κλείσει τα θεωρητικά ΚΕΠ σε λειτουργικές πτυχές. Παρ ‘όλα αυτά, εξακολουθεί να είναι αβέβαιο εάν ΕΜΤ και B7H1 έκφραση ΚΕΠ είναι δύο ανεξάρτητα γεγονότα ή ρυθμίζονται από την ίδια οδό σηματοδότησης ταυτόχρονα. Αποδείχθηκε ότι το σήμα mTOR και υποξία παράγοντας -1α, η οποία ήταν ένας σημαντικός παράγοντας για την επαγωγή EMT, ρυθμισμένη έκφραση CD133 σε καρκινικά κύτταρα [43], υποδηλώνοντας ότι CD133 έκφρασης και EMT φαινότυποι που σχετίζονται με υποξία και θα μπορούσε να ρυθμίζεται από mTOR σήμα. Επιπλέον, B7H1 ρυθμιζόταν από PTEN μέσω του PI3K /AKT /mTOR σηματοδότησης σε καρκίνο του παγκρέατος [44]. Αυτές οι μελέτες πρότειναν ότι η σηματοδότηση mTOR μπορεί να εμπλέκεται στη σχέση μεταξύ EMT και το ανοσοποιητικό φοροδιαφυγής σε ΚΕΠ. Στη συνέχεια, προσπαθούμε να μάθουμε τον ενδιαφερόμενο με EMT και immunevasion στο ΚΕΠ σε περαιτέρω μελέτη σημαντικό μονοπάτι, το οποίο μπορεί να είναι ένα κρίσιμο στόχο στη θεραπεία του καρκίνου.

Υποστήριξη Πληροφορίες

S1 Εικ. CD133 είναι μόλις και μετά βίας εκφράζεται σε paraneplastic ιστό.

Ανοσοφθορισμός κατεψυγμένων τμήμα του δείγματος καρκίνου του παχέος εντέρου δείχνει ότι υπάρχει μια περιοχή της σχετικής κανονικής δίπλα φωλιές του καρκίνου, όπου CD133 (κόκκινο) είναι μάλλον ασθενέστερη (αριστερά) από ό, τι στη φωλιά του καρκίνου (δεξιά) . DAPI (γκρι) χρησιμοποιήθηκε για τη χρώση των πυρηνικών. Έχει αποδειχθεί ένας εκπρόσωπος του παχέος εντέρου μετρίως διαφοροποιημένο αδενοκαρκίνωμα, T3N0M0. (Bar = 50 μm)

doi: 10.1371 /journal.pone.0135528.s001

(ΔΕΘ)

Ευχαριστίες

Σας ευχαριστούμε Δρ Yongwen Chen για τις διορατικές σχόλια, Καθηγητής Lieping Chen για B7H1 αντισώματος και Wei Ήλιος και Liting Wang για την εξαιρετική τεχνική βοήθεια για τη συλλογή εικόνων με σάρωση με λέιζερ ομοεστιακό μικροσκόπιο φθορισμού.