Αφηρημένο

Anti-EGFR θεραπεία χρησιμοποιείται συνήθως για τη θεραπεία του καρκίνου του παχέος εντέρου (CRC), αν και μόνο ένα υποσύνολο των ασθενών να επωφεληθούν από τη θεραπεία. Ενώ

KRAS

μετάλλαξη προβλέπει μη ανταπόκριση, θετική προγνωστική δείκτες δεν είναι στην κλινική πράξη. Έχουμε στο παρελθόν έδειξαν ότι η ανοσοϊστοχημεία (IHC) -guided

EGFR

αριθμού αντιγράφων γονιδίου ανάλυση (GCN) μπορεί να εντοπίσει ασθενείς CRC επωφελείται από αντι-EGFR θεραπείας. Εδώ δοκιμάσαμε την προγνωστική αξία της εν λόγω ανάλυσης chemorefractory μεταστατικό CRC, διευκρινίσθηκε

EGFR

GCN ετερογένεια εντός των όγκων, και αξιολόγησε τη σχέση μεταξύ

EGFR

GCN,

KRAS

κατάσταση , και αντι-ΕΟΡΚ απόκριση αντισώματος σε κυτταρικές σειρές CRC. Η chemorefractory ομάδα ασθενών αποτελούνταν από 54

KRAS

άγριου τύπου (WT) μεταστατικό ασθενείς CRC.

EGFR

κατάσταση GCN αναλύθηκε με ασημί

in situ υβριδισμού

χρησιμοποιώντας αποκοπής αξίας 4,0

EGFR

γονίδιο αντίγραφα /κύτταρο.

KRAS

Μ.Β. και

KRAS

μεταλλαγμένες κυτταρικές σειρές CRC με διαφορετικές

EGFR

GCN χρησιμοποιήθηκαν σε

in vitro

μελέτες. Οι chemorefractory όγκοι CRC με

EGFR

αύξηση GCN (≥4.0) ανταποκρίθηκαν καλύτερα να αντι-EGFR θεραπείας από ό, τι

EGFR

GCN (& lt? 4.0) όγκους (κλινικό όφελος,

P

= 0,0004? PFS, HR = 0,23, 95% CI 0,12 – 0,46).

EGFR

GCN υπολογίζονται χρησιμοποιώντας EGFR IHC καθοδήγηση ήταν σημαντικά υψηλότερη από την τιμή από τυχαία επιλεγμένες περιοχές επαλήθευση εντός του όγκου

EGFR

GCN ετερογένεια. Σε κυτταρικές σειρές CRC,

EGFR

GCN συσχετίζεται με την έκφραση του EGFR. Καλύτερο αντι-EGFR ανταπόκριση παρατηρήθηκε με

KRAS

Μ.Β.,

EGFR

GCN = 4 κυττάρων και των φτωχότερων απόκριση με

KRAS

Μ.Β.,

EGFR

GCN = 2 κύτταρα. Αντι-EGFR απόκριση συνδέθηκε με ΑΚΤ και φωσφορυλίωση ERK1 /2, η οποία ανεστάλη αποτελεσματικά μόνο σε κύτταρα με

KRAS

Μ.Β. και αυξημένη

EGFR

GCN. Εν κατακλείδι, IHC-καθοδηγούμενη

EGFR

GCN είναι μια πολλά υποσχόμενη προγνωστικός δείκτης της αποτελεσματικότητας αντι-EGFR θεραπείας σε chemorefractory CRC

Παράθεση:. Ålgars Α, Avoranta Τ, Osterlund P, Lintunen Μ, Sundström J , Jokilehto Τ, et al. (2014) Η ετερογενής

EGFR

Gene Αριθμός Αντιγραφή αύξηση είναι κοινή στον καρκίνο του παχέος εντέρου και Ορίζει απάντηση σε αντι-EGFR θεραπεία. PLoS ONE 9 (6): e99590. doi: 10.1371 /journal.pone.0099590

Επιμέλεια: Αντώνης W. Ι Lo, το Κινεζικό Πανεπιστήμιο του Χονγκ Κονγκ, Χονγκ Κονγκ

Ελήφθη: 19 Γενάρη 2014? Αποδεκτές: 15 Μάη, 2014? Δημοσιεύθηκε: 18 του Ιούνη 2014

Copyright: © 2014 Ålgars et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε από το Ιατρικό Ίδρυμα της Φινλανδίας, το Ίδρυμα Καρκίνου της Φινλανδίας, η Εθνική Graduate School of κλινικές έρευνες, Πανεπιστήμιο Turku Νοσοκομείο EVO επιχορήγηση, η Ακαδημία της Φινλανδίας, και το The Cancer Society of South-Western Finland. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. AA, ML, JS, RR και OC είναι εφευρέτες σε ένα δίπλωμα ευρεσιτεχνίας που σχετίζονται με αυτό εργασία: US 20110217296 Α1 Μέθοδος για την επιλογή ασθενών για αγωγή με έναν αναστολέα EGFR. Όλοι οι υπόλοιποι συγγραφείς έχουν δηλώσει δεν υπάρχει καμία σύγκρουση συμφερόντων. Αυτό δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων να PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών.

Εισαγωγή

υποδοχέα του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGFR) σηματοδότησης συνήθως ενεργοποιείται σε καρκίνο του παχέος εντέρου (CRC). EGFR στόχευση μονοκλωνικά αντισώματα (mAb) έχουν γίνει ένα πρότυπο θεραπευτική επιλογή, ιδιαίτερα στην chemorefractory φάση της μεταστατικής νόσου [1].

KRAS,

ένα μόριο σηματοδότησης καθοδικά του EGFR, είναι μεταλλαγμένο στο 40% περίπου του ΚΕΣ [1] και αυτές οι μεταλλάξεις ενεργοποίησης μεταφέρουν αντοχή θεραπεία αντι-ΕΟΡΚ [2]. Σε

KRAS

άγριου τύπου (WT) όγκων, την αντικειμενική ανταπόκριση επιτυγχάνεται σε κάθε τρίτο των ασθενών που δείχνει ότι και άλλοι παράγοντες συμβάλλουν στην αποτελεσματικότητα του φαρμάκου [3]. Έτσι, υπάρχει επείγουσα ανάγκη για νέα έξυπνη δείκτες.

EGFR

αριθμού αντιγράφων γονιδίου αύξηση (GCN) έχει συνδεθεί με την ανταπόκριση στη θεραπεία αντι-EGFR. Οι περισσότερες μελέτες έχουν δείξει μία συσχέτιση μεταξύ του επιπέδου GCN και κλινικό όφελος, ελεύθερη εξέλιξης επιβίωση (PFS), και σε ορισμένες περιπτώσεις, με τη συνολική επιβίωση (OS) [4] – [6]. Ωστόσο,

EGFR

GCN δεν είναι επί του παρόντος χρησιμοποιείται σε κλινικό πλαίσιο, λόγω των τεχνικών εμποδίων και σημαντικές διαφορές μεταξύ των συστημάτων βαθμολόγησης [7]. Έχουμε αναφερθεί πρόσφατα ένα νέο αλγόριθμο, η οποία μπορεί να βελτιώσει την προγνωστική αξία του

EGFR

GCN. Πρέπει πρώτα έδειξε ότι το

EGFR

GCN όπως αναλύθηκε από ασήμι

in situ υβριδισμού

(SISH) συσχετίζεται θετικά με ανοσοϊστοχημεία (IHC), όταν η αξιολόγηση πραγματοποιήθηκε από τις περιοχές του όγκου της υψηλότερης έντασης χρώσης [ ,,,0],8]. Δείξαμε επίσης ότι η αυξημένη

EGFR

GCN, χρησιμοποιώντας τιμή αποκοπής (≥4.0), συσχετίζεται θετικά με την απάντηση στην αντι-EGFR θεραπείας σε όλες τις τρεις παραμέτρους που αναλύθηκαν: κλινικό όφελος, PFS και OS.

EGFR

GCN ήταν ανεξάρτητη από

KRAS

κατάσταση, και όταν ενώθηκαν οι δύο αναλύσεις, είχαν προβλέψει την ανταπόκριση στη θεραπεία καλύτερα από μόνη της κάθε δοκιμής. Η μέση

EGFR

GCN, όπως αναλύθηκε με τη μέθοδο αυτή ήταν 5,5, και αντιγράψτε αύξηση αριθμού ≥4.0 παρατηρήθηκε στο 64% των όγκων. Η αύξηση GCN τυπικά σχετίζεται με το χρωμόσωμα 7 πολυσωμία, ενώ η ενίσχυση υψηλού επιπέδου ήταν σπάνια.

Ένας λόγος για τη διακύμανση στις δημοσιευμένες

EGFR

αποτελέσματα GCN μπορεί να είναι η ετερογένεια των όγκων, η οποία δεν έχει απευθύνεται σε προηγούμενες μελέτες. Υπάρχουν κάποιες ενδείξεις ότι ο EGFR μπορεί να εκφραστεί με ετερογενή στο πλαίσιο των επιμέρους όγκων παχέος εντέρου, τόσο σε επίπεδο γονιδίων και πρωτεϊνών [5]. Ετερογένεια μπορεί να περιπλέξει την ανάλυση της πρωτεϊνικής έκφρασης EGFR και τον αριθμό αντιτύπου αλλαγές και να οδηγήσει σε κακή δοκιμασία αναπαραγωγιμότητας [7], [9]. Αυτό μπορεί να είναι ιδιαίτερα σημαντική σε ανάλυση FISH με βάση, όπου η καταμέτρηση GCN δεν μπορεί να συσχετιστεί με ιστολογία [7]. Εάν

EGFR

ετερογένεια παίζει ένα βιολογικό ρόλο, στη συνέχεια, έναν αλγόριθμο, στην οποία η έκφραση της πρωτεΐνης (IHC) οδηγοί

EGFR

αξιολόγηση GCN, θα μπορούσε να βελτιώσει την προγνωστική αξία.

Ο στόχος αυτής της μελέτης ήταν να δοκιμαστεί η νέα

EGFR

μέθοδο GCN σε μια ανεξάρτητη ομάδα των ασθενών και να αξιολογήσει τον αντίκτυπο των

EGFR

κατάσταση GCN με αποτέλεσμα σε συνδυασμό chemorefractory ομάδα ασθενών. Και στις δύο ομάδες ασθενών ένας

EGFR

αύξηση (≥4.0) φάνηκε να συνδέσει με μια βελτιωμένη κλινική έκβαση, όπως το ποσοστό κλινικού οφέλους, PFS και OS. Δευτερεύοντες στόχοι ήταν να φωτιστούν

EGFR

GCN ετερογένεια εντός των όγκων και να δοκιμάσει, αν κυτταρικές σειρές CRC με διάφορους

EGFR

GCN, αντιδρούν διαφορετικά σε EGFR μονοκλωνικά αντισώματα. Σύμφωνα με τα αποτελέσματά μας,

EGFR

GCN είναι ετερογενής στο CRC και οι τιμές που λαμβάνονται με IHC καθοδήγηση από επιλεγμένες περιοχές του όγκου είναι υψηλότερες από εκείνες που λαμβάνονται με τυχαία επιλογή. Σημαντικό είναι μόνο η

EGFR

GCN συνυπολογίζεται με την καθοδήγηση του EGFR IHC ήταν σε θέση να προβλέψουν την ανταπόκριση στην αντι-EGFR θεραπείας. Μας

in vitro

μελέτες υποστηρίζουν τα κλινικά ευρήματα μας, δεδομένου ότι η καλύτερη απάντηση σε αντι-EGFR θεραπείας παρατηρήθηκε σε

KRAS

WT,

EGFR

GCN = 4.0 κυττάρων και των φτωχότερων ανταπόκριση στο

KRAS

WT,

EGFR

GCN = 2 κύτταρα.

Υλικά και Μέθοδοι

ασθενείς

η αρχική Πανεπιστήμιο Turku Νοσοκομείο ανακάλυψη κοόρτη έχει αναφερθεί [8]. Η ομάδα επικύρωσης αποτελούνταν από 31

KRAS

Μ.Β. ασθενείς που έλαβαν θεραπεία με EGFR μονοκλωνικά αντισώματα σε δεύτερη έως έκτη γραμμή στο Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο του Ελσίνκι για τον μεταστατικό CRC μεταξύ Ιουνίου του 2008 και τον Ιούλιο του 2010. Τα κριτήρια επιλογής για αυτή τη μελέτη ήταν: (Ι ) ιστού ήταν διαθέσιμο από τον πρωτογενή όγκο κατά τη διάγνωση πριν από την έναρξη οποιασδήποτε θεραπείας, (ΙΙ) ο όγκος ήταν

KRAS

Μ.Β., (ΙΙΙ) οι ασθενείς έλαβαν θεραπεία δεύτερης στην έκτη γραμμή με cetuximab ή panitumumab με ή χωρίς χημειοθεραπεία, και (IV) οι ασθενείς δεν είχε άλλη κακοήθεια στην ιστορία τους. Η ιστολογική εξέταση της κάθε περίπτωσης επικύρωσης ομάδα επαναξιολογήθηκε από έναν εμπειρογνώμονα σε GI-παθολογία (AR).

Η συνδυασμένη ομάδα των chemorefractory ασθενών που συμπεριλήφθηκαν 54 ασθενείς, 25 από την αρχική ομάδα Turku και 29 από την επικύρωση του Ελσίνκι σειρά. Ο chemorefractory κοόρτη ασθενών περιελάμβανε ασθενείς που έλαβαν θεραπεία με αντι-ΕΟΡΚ mAbs σε τρίτη γραμμή ή περισσότερο, είτε ως μεμονωμένοι θεραπεία ή σε συνδυασμό με ιρινοτεκάνη +/- φθοριοπυριμιδίνη. Τα βασικά χαρακτηριστικά των τριών κοορτών περιγράφεται στον Πίνακα 1.

Η

Η απόκριση σε αντι-EGFR θεραπείας αξιολογήθηκε με αξονική τομογραφία (CT) ή απεικόνιση μαγνητικού συντονισμού (MRI) σύμφωνα με τα Κριτήρια απόκρισης Αξιολόγηση σε συμπαγείς όγκους (RECIST έκδοση 1.1) [10]. Το κλινικό όφελος θεωρήθηκε μερική ανταπόκριση (PR) ή τουλάχιστον 3 μήνες σταθερή νόσος (SD). Επιβίωση χωρίς εξέλιξη (PFS) υπολογίστηκε από την έναρξη της αντι-EGFR θεραπεία μέχρι την εξέλιξη της νόσου. Η συνολική επιβίωση (OS) υπολογίστηκε από την έναρξη της αντι-EGFR θεραπείας μέχρι το θάνατό του από οποιαδήποτε αιτία.

Δήλωση Ηθικής

Η μελέτη διεξήχθη σύμφωνα με την Διακήρυξη του Ελσίνκι. Τα κλινικά δεδομένα ανακτήθηκαν και ιστολογικά δείγματα που συλλέγονται και αναλύονται με την έγκριση της Εθνικής Αρχής για Medico-Νομικών Θεμάτων, καθώς και το Διοικητικό Συμβούλιο αναθεώρηση Θεσμική του Νοσοκομείου Περιφέρειας της Νοτιοδυτικής Φινλανδίας και Ηθικά Review Board στο Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο του Ελσίνκι. Γραπτή ή προφορική συγκατάθεση δεν λήφθηκε λόγω του γεγονότος ότι ένα μεγάλο μέρος των ασθενών που περιλαμβάνονται στην παρούσα αναδρομική μελέτη είχε πεθάνει από τη νόσο τους. Η ανάγκη για πληροφορημένη συναίνεση από τους συμμετέχοντες είχε παραιτηθεί από την Εθνική Αρχή για Medico-Νομικών Θεμάτων.

IHC και SISH Διαδικασίες

KRAS

ανάλυση μετάλλαξη έγινε με την DxS KRAS κιτ μετάλλαξης (DxS Ltd, Manchester, UK). Λεπτομερείς μέθοδοι για EGFR IHC και

EGFR

GCN έχουν περιγραφεί [8]. Εν συντομία, τρία μm τομές πρώτα χρωματίστηκαν με EGFR (κλώνος 5B7) mAb (Ventana Medical Systems /Roche Diagnostics, Tucson ΑΖ, USA). Χρώσεις πραγματοποιήθηκαν με BenchMark XT (Ventana /Roche) χρησιμοποιώντας τα

ultra

VIEW Οικουμενική DAB Detection Kit (Ventana /Roche).

EGFR

γονιδίου ανιχνεύθηκε από τα επόμενα πέντε μm τμήματα με

EGFR

DNA Probe (Ventana /Roche) και

ultra

VIEW κιτ ανίχνευσης SISH (Ventana /Roche). Σε κάθε όγκο,

EGFR

GCN σαράντα καρκινικά κύτταρα αναλύθηκε χρησιμοποιώντας ένα αντικειμενικό 40χ από δύο παρατηρητές (ML, JS) από περιοχές της μεγίστης δραστικότητας IHC. Οι ερευνητές είχαν τυφλωθεί των κλινικών πληροφοριών. Για την αξιολόγηση του μέσου όρου

EGFR

GCN μέσα σε κάθε όγκο, πέντε τομείς όγκου αυθαίρετα επιλέξει. Από κάθε μία από αυτές τις περιοχές,

EGFR

GCN 20 τυχαία επιλεγμένων καρκινικών κυττάρων μετρήθηκε με δύο παρατηρητές (TA, JS). Τα αποτελέσματα αναφέρθηκαν ως μέσος όρος και το εύρος εντός κάθε περιοχής.

Γραμμές Cell, Western Blotting και κυτταροτοξικότητα Δοκιμασίες

Ο C2BBe1, κυτταρικές γραμμές SK-CO-1 και NCI-H747 αγοράστηκαν από την ATCC (Manassas, VA, USA) και η κυτταρική σειρά CW-2 από το κέντρο τους βιολογικούς πόρους RIKEN (Tsukuba, Japan). Τα κύτταρα NCI-H747 και CW-2 καλλιεργήθηκαν σε RPMI-1640, τα κύτταρα SK-CO-1 σε κύτταρα ΕΜΕΜ και C2BBe1 σε DMEM συμπληρωμένο με 0.01 mg /ml ανθρώπινης τρανσφερίνης (Sigma, Saint Louis, ΜΟ, USA). Όλα τα μέσα συμπληρώθηκαν με 10% FBS, 2 mM γλουταμίνη και 1% πενικιλίνη /στρεπτομυκίνη.

Για τα κύτταρα ανάλυση μονοπατιού σηματοδότησης αναπτύχθηκαν επί 6 φρεατίων πλάκες και αφέθηκαν να προσκολληθούν για 12 ώρες σε κανονικό μέσο. Στη συνέχεια άλλαξαν σε μέσο με 1% FBS και δεδομένου 0-200 μg /ml cetuximab (Erbitux, Merck Serono) για 24 ώρες. 25 mg /ml EGF δόθηκε στα κύτταρα για πέντε λεπτά προ της λύσεως.

επίπεδα πρωτεΐνης αναλύθηκαν με κηλίδωση Western των κυττάρων λύθηκαν σε ρυθμιστικό RIPA (50 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, 1% Nonidet Ρ -40, 0.5% δεοξυχολικό, 0.1% SDS, 1 mM ορθοβαναδικό, και μείγμα αναστολέα πρωτεάσης, ρΗ 7.4). Οι πρωτεΐνες διαχωρίστηκαν με SDS-PAGE και μεταφέρθηκαν σε μεμβράνες νιτροκυτταρίνης. Μετά από ολονύκτια επώαση σε + 4C ° με πρωτογενές αντίσωμα [αντι-EGFR (D38B1, Cell Signaling Technology, Danvers, ΜΑ, USA), φωσφο-EGFR (Tyr1173, 53A5, Cell Signaling Technology), ERK2 (Κ-23, Santa Cruz Biotechnology , Dallas, ΤΧ, USA), φωσφορομολυβδαινικής /2 (Thr202 /Tyr204, D13.14.4E, Cell Technology σηματοδότηση), φωσφο-ΑΚΤ (Ser 473), panAKT (C67E7, Cell Signaling Technology)], οι μεμβράνες επωάστηκαν ERK1 για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου με χρένο δευτερεύον αντίσωμα συζευγμένο με υπεροξειδάση (Dako, Glostrup, Denmark) και τα σήματα ανιχνεύτηκαν με SuperSignal West Pico χημειοφωταύγειας υποστρώματος (Thermo Scientific, Waltham, ΜΑ, USA). Anti-α-τουμπουλίνης mAb (Β-1-5-1-2, Sigma) ή HRP-συζευγμένο αντι-GAPDH mAb (mAbcam 9484, Abcam, Cambridge, UK) χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης.

για δοκιμασίες κυτταρικής βιωσιμότητας, 5000 κύτταρα /φρεάτιο απλώθηκαν σε πλάκες 96 φρεατίων. Μετά από ολονύκτια επώαση σε παρουσία 2% FBS, τα κύτταρα εκτέθηκαν σε 0-200 μg /ml cetuximab (Erbitux, Merck Serono) ή panitumumab (Vectibix, Amgen) για 72 ώρες σε μέσο συμπληρωμένο με 1% FBS. Κάθε αγωγή έγινε εις τριπλούν και το πείραμα επαναλήφθηκε τέσσερις φορές. Η βιωσιμότητα των κυττάρων εκτιμήθηκε με τη δοκιμασία κυτταρικού πολλαπλασιασμού CellTiter 96 Υδατικό One Solution (Promega, Madison, WI, USA). Η βιωσιμότητα των κυττάρων δίδεται ως ποσοστό των κυττάρων ελέγχου.

Στατιστική Ανάλυση

Οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τα προγράμματα SAS 9.2 και Enterprise Guide 4.2 (SAS Institute Inc., Cary, NC). δεδομένα του πίνακα συχνοτήτων αναλύθηκαν με το χ2-test ή την ακριβή δοκιμασία του Fisher. Η διαφορά στο

EGFR

τιμές GCN που λαμβάνονται με διαφορετικές μεθόδους αξιολόγησης (κανονικά κατανεμημένες μεταβλητές) υπολογίστηκε με το Students t-test. τεστ log-rank Kaplan-Meier και καθώς το μοντέλο παλινδρόμησης αναλογικού κινδύνου του Cox χρησιμοποιήθηκαν για την μονοπαραγοντική ανάλυση επιβίωσης. Όλες οι στατιστικές δοκιμασίες ήταν δύο όψεων.

P

-τιμές & lt? 0,05 θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές. Η στατιστική σημαντικότητα για τις δοκιμασίες κυτταρικής βιωσιμότητας υπολογίστηκε με το Microsoft Excel 2011 και StatPlus: mac LE (Έκδοση 2009, AnalystSoft Inc.). Η σημαντικότητα μεταξύ των διαφορών στις απαντήσεις στις κυτταρικές γραμμές προσδιορίστηκε με αμφίδρομη ΑΝΟνΑ ακολουθούμενη από πολλαπλούς t-tests.

Αποτελέσματα

EGFR

GCN Test Validation με ανεξάρτητο ασθενής Cohort

για να επικυρώσετε τα προηγούμενα αποτελέσματα μας σχετικά με τη σύνδεση μεταξύ του

EGFR

GCN και την ανταπόκριση στη θεραπεία αντι-EGFR, μελετήσαμε μια ανεξάρτητη ομάδα ασθενών αντιμετωπίζονται στο Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο του Ελσίνκι. Οι μέθοδοι για

EGFR

ανίχνευσης GCN και την τιμή αποκοπής για την αύξηση GCN ήταν ταυτόσημη με τη μελέτη ανακάλυψη [8]. Στην ομάδα επικύρωσης, 18 από τους 31 (58%) όγκοι είχαν

EGFR

GCN πάνω από την τιμή αποκοπής (≥4.0), σε σύγκριση με 64% στην αρχική σειρά ανακάλυψη. Δεκατέσσερις (78%) του υψηλού

EGFR

GCN (≥4.0)

KRAS-

WT ασθενείς παρουσίασαν κλινικό όφελος [μερική ανταπόκριση (PR) + σταθερή νόσο (SD)] από αντι-EGFR θεραπεία, ενώ μόνο 4 (31%) των χαμηλών

EGFR

GCN (& lt? 4,0) επωφελήθηκαν από τη θεραπεία (Chi-square test,

P

= 0,009). Μια αυξημένα

EGFR

GCN σχετίζονται σημαντικά με βελτιωμένη επιβίωση. Ο μέσος χρόνος PFS του

EGFR

GCN≥4.0 ήταν 25 εβδομάδες σε σύγκριση με μόλις 11 εβδομάδων από την

EGFR

GCN & lt? 4,0 ασθενείς (δοκιμασία log-rank,

P

= 0.002? δοκιμασία Cox,

P

= 0,003, HR = 0,28, 95% CI 0,12 – 0,65? Σχήμα 1α). Επιπλέον, η

EGFR

GCN≥4.0 σχετίζονται σημαντικά με βελτιωμένη OS (διάμεση τιμή 12,1 έναντι 8,2 μηνών? Δοκιμασία log-rank,

P

= 0,004? Δοκιμασία Cox,

P

= 0,006, HR = 0,32, 95% CI 0,14 – 0,72?. Σχήμα 1β)

ελεύθερη εξέλιξης επιβίωση (α) και τη συνολική επιβίωση (β) της κλάσης επικύρωσης δοκιμής σύμφωνα με το

EGFR

αριθμό αντιγράφων του γονιδίου. Επιβίωση χωρίς εξέλιξη (γ) και τη συνολική επιβίωση (δ) της συνδυασμένης chemorefractory ομάδα ασθενών.

Η

Συσχέτιση

EGFR

GCN και Θεραπεία Ανταπόκριση στο Chemorefractory ασθενείς

συνδυάσαμε την chemorefractory

ασθενών KRAS

WT και από τις δύο ομάδες (

n

= 54) για περισσότερες στατιστικές αναλύσεις. Το ογδόντα τοις εκατό (28 από 35) των ασθενών με υψηλό

EGFR

GCN (≥4.0) επιτυγχάνεται κλινικό όφελος. Αντίθετα, το ποσοστό κλινικού οφέλους ήταν μόνο 32% (6 από 19) για τους ασθενείς με χαμηλή

EGFR

GCN (& lt? 4,0) (chi-square test,

P

= 0,0004).

Εμείς ανέλυσε ξεχωριστά τις 31 chemorefractory ασθενείς που έλαβαν θεραπεία με cetuximab (57%) και 21 με panitumumab (39%). Δύο ασθενείς υποβλήθηκαν σε θεραπεία και με τα δύο αντισώματα αντι-ΕΟΡΚ αποκλείονται διαδοχικά και ως εκ τούτου από την ανάλυση. Το ποσοστό κλινικό όφελος σε ασθενείς υπό θεραπεία με cetuximab +/- κυτταροτοξική θεραπεία με ένα υψηλό

EGFR

GCN σε πρωτοπαθείς όγκους τους ήταν 86% (18/21) σε σύγκριση με το 20% (2/10) στην ομάδα των ασθενών με ένα

EGFR

GCN & lt? 4.0 (ακριβής δοκιμή Fishers,

P

= 0.0007). Στην ομάδα των ασθενών που έλαβαν θεραπεία με panitumumab +/- κυτταροτοξική θεραπεία κλινικό όφελος ήταν 67% (8/12) σε ασθενείς με υψηλό

EGFR

GCN και 44% (4/9) σε άτομα με χαμηλό

EGFR

GCN. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται πιο αναλυτικά στον Πίνακα S1.

Αυξημένη

EGFR

GCN Associates με βελτιωμένη PFS και OS σε Chemorefractory Νοσημάτων

Η διάμεση PFS του chemorefractory ομάδα των ασθενών ήταν σημαντικά μεγαλύτερο στο

EGFR

ασθενείς GCN≥4.0 σε σχέση με το

EGFR

GCN & lt? 4,0 ασθενείς? . 29.5

vs

10,8 εβδομάδες (δοκιμασία log-rank,

P

& lt? 0,0001? Δοκιμασία Cox,

P

& lt? 0,0001, HR = 0,23, 95% CI 0,12 -0.46). Ο μέσος χρόνος OS για τους ασθενείς με

EGFR

όγκους GCN≥4.0 ήταν 12,5 μήνες σε σύγκριση με 7,2 μήνες για τα άτομα με

EGFR

GCN κάτω από την τιμή αποκοπής (δοκιμασία log-rank,

P

= 0,0002? δοκιμασία Cox,

P

= 0,0003, HR = 0,32, 95% CI 0,17 – 0,59). Οι καμπύλες επιβίωσης Kaplan-Meier φαίνεται στο Σχήμα 1 c-d.

PFS παρέμεινε πλέον στους ασθενείς με υψηλό

EGFR

GCN ανεξάρτητα από το ποια αντι-ΕΟΡΚ mAb χρησιμοποιήθηκε. Στους ασθενείς που έλαβαν θεραπεία με cetuximab +/- κυτταροτοξική θεραπεία ο μέσος χρόνος OS ήταν στατιστικά σημαντικά μεγαλύτερη στην ομάδα των ασθενών με

EGFR

GCN≥4.0 σε σύγκριση με εκείνους με μια

EGFR

GCN κάτω από 4.0 (12.5

vs

4,6 μήνα?. δοκιμασία log-rank

P

= 0,0006? Cox test

P

= 0,001, HR 0,25, 95% CI 0,10 – 0,58 ), ενώ καμία στατιστικά σημαντική διαφορά OS παρατηρήθηκε στους ασθενείς που έλαβαν θεραπεία με panitumumab. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται στον Πίνακα S1.

Τα δεδομένα επιβίωσης του αρχικού discovery-, την ανεξάρτητη validation-, και σε συνδυασμό chemorefractory ομάδες ασθενών σε σύγκριση στο σχήμα 2.

Οι αναλογίες κινδύνου και την εμπιστοσύνη τα χρονικά διαστήματα από την αρχική ανακάλυψη, την επικύρωση, και σε συνδυασμό chemorefractory ομάδες ασθενών εμφανίζεται. Ένα υψηλό

EGFR

GCN (IHC καθοδηγείται SISH) συνδέεται με μια βελτιωμένη έκβαση της νόσου σε όλα τα τρία

KRAS

άγριου τύπου μεταστατικό καρκίνο του παχέος εντέρου ομάδες ασθενών που έλαβαν θεραπεία με αντι-EGFR θεραπεία (δύο ανεξάρτητες ομάδες και μία συνδυασμένη ομάδα των chemorefractory ασθενείς).

η

EGFR

GCN ετερογένεια εντός των όγκων

EGFR

GCN ήταν τυχαία αξιολογήθηκαν, χωρίς καθοδήγηση IHC, από όλους τους όγκους ομάδα 31 επικύρωση. Η μέση

EGFR

τιμές GCN από τυχαία επιλεγμένες περιοχές ήταν σημαντικά χαμηλότερες σε σύγκριση με τη μέθοδο όπου το

EGFR

GCN αξιολογήθηκε επιλεκτικά από τις περιοχές με την υψηλότερη έκφραση της πρωτεΐνης EGFR (

P

& lt? 0,0001). Η διάμεση

EGFR

GCN αυτών 31 πρωτογενείς όγκους CRC ήταν 4,3 όταν χρησιμοποιήθηκε IHC καθοδήγηση και 3,3 όταν η ανάλυση πραγματοποιήθηκε κατά τυχαίο τρόπο. Η ετερογένεια του

EGFR

GCN εντός ενός δείγματος όγκου CRC καταδεικνύεται στο Σχήμα 3.

EGFR IHC δείχνει ετερογενές χρώση με εντατική μεμβρανώδη αντιδραστικότητα στη μέση (α).

EGFR

SISH από τα εντατικά λεκιασμένο γονίδιο συστάδες περιοχή δείχνει (β).

EGFR

SISH από τις γύρω περιοχές με αδύναμο ή αρνητική χρώση EGFR IHC παρουσιάζει οριακά αυξημένη ή κανονικό αριθμό αντιγράφων του γονιδίου (γ-δ).

Η

Όταν η τυχαία επιλεγμένο

EGFR

τιμές GCN χρησιμοποιήθηκαν για την επιβίωση αναλύσεις (

EGFR

GCN≥4.0

vs EGFR

GCN & lt? 4.0.) δεν παρατηρήθηκε στατιστικά σημαντική διαφορά δεν παρατηρήθηκε μεταξύ των δύο ομάδων (PFS:

P

= 0,07, HR 0,40, 95% CI 0,15 – 1,08? OS:

P

= 0,22, HR = 0,58, 95% CI 0,25 – 1,38). Δεν παρατηρήθηκε σημαντική διαφορά στην αντι-EGFR αποτελεσματικότητα της θεραπείας (κλινικό όφελος

vs.

Προοδευτική νόσο) παρατηρήθηκαν είτε (ακριβής δοκιμή Fishers,

P

= 0,19).

EGFR

GCN και να αντιμετωπίζουν την αντι-EGFR Abs In vitro

Ψάξαμε τη βάση δεδομένων γραμμή καρκινικών κυττάρων Sanger Center (https://www.sanger.ac.uk/cgi-bin/genetics/CGP /cghviewer/CghHome.cgi) για

EGFR

GCN αλλαγές. Ένα χαμηλό επίπεδο του

EGFR

αύξηση GCN (4-15 αντίγραφα /κύτταρο), συνήθως λόγω χρωμόσωμα 7 πολυσωμία, παρατηρήθηκε σε 18 από τις 39 κυτταρικές σειρές (46%). Να συσχετίσει το

EGFR

GCN και

KRAS

κατάστασης με την απάντηση αντι-EGFR mAb, επιλέξαμε τέσσερις γραμμές για την ανάλυση. Το κυτταρικές σειρές C2BBe1 CW-2 και είναι

KRAS

Μ.Β. και έχουν δύο και τέσσερα αντίγραφα του

EGFR,

αντίστοιχα. NCI-H747 και SK-CO-1 είναι και τα δύο

KRAS

μεταλλαγμένα και έχουν περισσότερα από τέσσερα αντίγραφα (6-7) του

EGFR

. Η

EGFR

GCN επιβεβαιώθηκε από SISH (Σχήμα 4α). Η

EGFR

GCN αντανακλάται άμεσα στην έκφραση της πρωτεΐνης EGFR όπως προκύπτει από την ανάλυση κηλίδας Western (Σχήμα 4β). Σε προσδιορισμούς κυτταρικής βιωσιμότητας, η

KRAS

Μ.Β. κυτταρική γραμμή με

EGFR

GCN 4 (C2BBe1) ήταν η πιο ευαίσθητη τόσο cetuximab και θεραπεία panitumumab (Σχήμα 4γ). Η διαφορά ήταν πολύ σημαντική σε σύγκριση με οποιαδήποτε από τις άλλες κυτταρικές γραμμές (έλεγχος τ,

P

& lt? 0.001). Είναι ενδιαφέρον, το

EGFR

disomic, WT

KRAS

κυτταρική σειρά (CW-2) ήταν πιο ανθεκτική στη θεραπεία mAb. Οι κυτταρικές σειρές με μεταλλαγμένο

KRAS

και

EGFR

GCN & gt? 4 έδειξε ενδιάμεση ευαισθησία, ειδικά σε panitumumab θεραπεία. Τα αποτελέσματα είναι έτσι σε συμφωνία με κλινικά δεδομένα μας δείχνουν ότι τόσο

EGFR

GCN και

KRAS

κατάσταση καθορίζουν το καρκινικό κύτταρο απόκριση σε αντι-EGFR μονοκλωνικά αντισώματα.

(α)

EGFR

ανάλυση GCN SISH των διαφορετικών κυτταρικών σειρών. (Β) Ένα εικόνας κηλίδα Western που δείχνει τα επίπεδα της πρωτεΐνης EGFR στις διάφορες κυτταρικές γραμμές. α-τουμπουλίνης χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος για ίση φόρτωση. Η κυτταρική βιωσιμότητα των διαφορετικών κυτταρικών σειρών σε διάφορες συγκεντρώσεις του (γ) cetuximab και (δ) panitumumab. Τα αποτελέσματα δίνονται ως ποσοστό των βιώσιμων κυττάρων σε σύγκριση με τα μη κατεργασμένα κύτταρα (μέση ± SE από πέντε πειραμάτων). (Ε) στυπώματα Western που δείχνει EGFR μονοπάτι μόρια στις διαφορετικές κυτταρικές σειρές σηματοδότησης. Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε προεπεξεργασία με τις υποδεικνυόμενες ποσότητες cetuximab για 24 ώρες σε μέσο που περιείχε 1% FBS και με δεδομένο EGF (25 μg /ml) για 5 λεπτά πριν από τη λύση. Τα αναφερόμενα μόρια σηματοδότησης αναλύθηκαν με western αποτύπωση. GAPDH χρησιμοποιήθηκε σαν δείγμα αναφοράς για ισοδύναμο φορτίο.

Η

περαιτέρω εξέτασαν την επίδραση των αντι-ΕΟΡΚ mAb θεραπεία για την ενδοκυτταρική σηματοδότηση σε αυτές τις κυτταρικές γραμμές. Στις

KRAS

μεταλλαγμένες κυτταρικές σειρές με περισσότερα από τέσσερα

EGFR

αντίγραφα γονιδίου, η φωσφορυλίωση του EGFR ήταν εμφανής και αποτελεσματικά παρεμποδίζεται από αντι-ΕΟΡΚ mAb (Σχήμα 4Ε). Αντι-EGFR αναστολή μειωθεί εν μέρει /2 επίπεδα pERK1, ενώ το επίπεδο των ρΑΚΤ δεν επηρεάστηκε. Σε

KRAS

Μ.Β. κυτταρικές σειρές με 2-4

EGFR

αντίγραφα του γονιδίου EGFR φωσφορυλίωσης ήταν κάτω από το όριο ανίχνευσης (δεν απεικονίζεται). Ωστόσο, η οδός ήταν προφανώς λειτουργική όπως φαίνεται από τις απαντήσεις στις κατάντη σηματοδότησης. Στο

EGFR

disomic γραμμή CW-2, η θεραπεία με αντι-EGFR mAb μειωμένη /επίπεδο pERK1 2, αλλά δεν επηρέασε ΑΚΤ φωσφορυλίωση (Σχήμα 4Ε). Μόνο στο

ανιχνεύθηκε EGFR

polysomic και άγριου τύπου

KRAS

κύτταρα C2BBe1, μια αποτελεσματική παρεμπόδιση της τόσο ERK1 /2 και AKT σηματοδότησης, (Σχήμα 4Ε). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι με αυτόν τον τρόπο τόσο

EGFR

GCN και

KRAS

κατάσταση μετάλλαξης προσδιοριστεί η επίδραση της αντι-EGFR mAb για EGFR κατάντη σηματοδότησης και του παχέος την επιβίωση των καρκινικών κυττάρων.

Συζήτηση

σε αυτή τη μελέτη, έχουμε αποδείξει ότι ετερογενή

EGFR

αύξηση GCN αποτελεί ισχυρό προγνωστικό παράγοντα προς όφελος αντι-EGFR θεραπεία στο μεταστατικό CRC. Τα αποτελέσματα επεκτείνουν προηγούμενα ευρήματα μας από ένα μόνο ίδρυμα ομάδα των ασθενών σε μια ανεξάρτητη ομάδα επικύρωσης. Επιπλέον, αποδεικνύουν την προγνωστική αξία του

EGFR

GCN για την αποτελεσματικότητα αντι-EGFR θεραπεία σε ασθενείς chemorefractory CRC, την πιο σημαντική ομάδα ασθενών που είναι επιλέξιμες για αυτή τη θεραπεία. Τα αποτελέσματα δείχνουν επίσης ότι ενδονεοπλαστική

EGFR

GCN ετερογένεια είναι κοινή σε CRC. Υποθέτουμε ότι αυτό το παρελθόν αγνοούνται

EGFR

ετερογένεια είναι ένας λόγος για την αναφερόμενη φτωχή συσχέτιση μεταξύ

EGFR

ανάλυση GCN και την αποτελεσματικότητα των αντι-EGFR θεραπείας, και να προτείνει μια βελτιωμένη μέθοδο για την προγνωστική

EGFR

δοκιμές GCN.

Το υλικό των ασθενών στη μελέτη μας περιελάμβανε ασθενείς που έλαβαν θεραπεία με αντι-EGFR θεραπείας τόσο σε πρώιμο και chemorefractory φάση της μεταστατικής θεραπείας CRC. Για τον έλεγχο για τις συγχυτικές επιδράσεις της ευαισθησίας χημειοθεραπεία όταν συνδυάζεται με αντι-EGFR μονοκλωνικά αντισώματα για τα αποτελέσματά μας, η προγνωστική αξία του

EGFR

GCN για την ανταπόκριση στη θεραπεία αντι-EGFR αξιολογήθηκε ξεχωριστά στην υποομάδα των ασθενών που έλαβαν θεραπεία με chemorefractory φάση (τρίτη γραμμή ή περισσότερο). Τα αποτελέσματα που ελήφθησαν στο chemorefractory υποομάδα ήταν παρόμοια με τα αποτελέσματα του συνόλου της κοόρτης του ασθενούς, η οποία υποστηρίζει την ερμηνεία μας ότι ένα υψηλό

EGFR

GCN είναι πράγματι ένα προγνωστικό των ευνοϊκών αντι-EGFR ανταπόκριση στη θεραπεία.

Τόσο cetuximab και panitumumab στην chemorefractory υποομάδα ασθενών κατέδειξε βελτιωμένη PFS σε

EGFR

ασθενείς GCN≥4.0. Η συνολική επιβίωση και το ποσοστό ελέγχου της νόσου ήταν στατιστικά βελτιωθεί για την ομάδα cetuximab, και αριθμητικά αλλά όχι στατιστικά στο μικρό panitumumab ομάδα. Οι δύο θεραπευτικές Abs είναι διαφορετικού τύπου, panitumumab είναι ένα πλήρως ανθρώπινο mAb, ενώ το cetuximab είναι ένα ποντίκι-ανθρώπινη χίμαιρα.

In vitro

δοκιμασία κατέδειξε πανομοιότυπες κυτταροτοξικότητας για τις εξετασθείσες γραμμές CRC, αλλά

in vivo

, άλλοι μηχανισμοί, συμπεριλαμβανομένων εξαρτώμενη από αντίσωμα κυτταροτοξικότητα (ADCC) μπορεί να είναι λειτουργικό. Από την άποψη αυτή, το cetuximab και panitumumab μπορεί να είναι διαφορετική και, ως εκ τούτου, αυξημένη

EGFR

GCN θα μπορούσε να δείξει καλύτερα την ευαισθησία στην θεραπεία με cetuximab [11]. Σύμφωνα με την προ-κλινικά και ορισμένα κλινικά δεδομένα κυτταροτοξικών θεραπειών +/- ανοσορρυθμιστικά φάρμακα, συμπεριλαμβανομένων π.χ. η GILF (γεμσιταβίνη, ιρινοτεκάνη, levofolinic, και 5-φθοριοουρακίλη), GILFI (γεμσιταμπίνη, ιρινοτεκάνη, levofolinic οξύ, φθοριοουρακίλη, αλδεσλευκίνης), και GOLFIG (γεμσιταμπίνη, οξαλιπλατίνη, levofolinate, 5-φθοριοουρακίλη, GM-CSF, αλδεσλευκίνη) αγωγές, έχουν την ικανότητα να αποτελεσματικά ρυθμίζουν έκφραση EGFR σε καρκινικά κύτταρα κόλου, ενισχύοντας έτσι την ευαισθησία των καρκινικών κυττάρων του παχέος εντέρου στο cetuximab διαμεσολαβούμενη ADCC [12] – [14]. Στη μελέτη μας, panitumumab χρησιμοποιήθηκε ως ενιαία θεραπεία πιο συχνά από ό, τι cetuximab, 42.9

vs

6,5% αντίστοιχα, η οποία τουλάχιστον εν μέρει, μπορεί να εξηγήσει τη διαφορά που παρατηρείται στα αποτελέσματα αποτελεσματικότητας μεταξύ των δύο αντισωμάτων. Αμφότερα τα αντισώματα, όταν δεν χορηγείται ως μόνη αγωγή, συνδυάστηκαν με ιρινοτεκάνη χημειοθεραπευτικά σχήματα που βασίζονται. Στη μελέτη μας, οξαλιπλατίνη ή μονά καπεσιταβίνη δεν συνενώθηκαν σε αντι-EGFR θεραπεία στην chemorefractory φάση της νόσου. Δύο ασθενείς έλαβαν cetuximab και panitumumab διαδοχικά και ως εκ τούτου, εξαιρούνται από αυτή τη μελέτη. Ως εκ τούτου, ούτε ο συνδυασμός κυτταροτοξικό φάρμακο ούτε η χορήγηση και των δύο αντισωμάτων διαδοχικά, εξηγεί τη διαφορά στα αποτελέσματα που λαμβάνονται με τα διαφορετικά αντισώματα αντι-ΕΟΡΚ. Εναλλακτικά, αποτέλεσμα μας μπορεί να αντανακλά τη διαφορά μεταξύ των ασθενών που έλαβαν θεραπεία. Cetuximab χρησιμοποιείται πιο συχνά στην ομάδα ανακάλυψη, η οποία όρισε την τιμή αποκοπής της δοκιμής, και panitumumab στην κοόρτη επικύρωση μόνο με chemorefractory ασθενείς. Καθώς και οι δύο ομάδες ήταν αναδρομική, δεν μπορούμε να αποκλείσουμε διαφορές στους πληθυσμούς των ασθενών, η οποία θα μπορούσε να εξηγήσει τις διαφορές στα αποτελέσματα της θεραπείας.

όγκου ετερογένεια έχει προταθεί να συμβάλει στην δυσκολίες που ανέκυψαν κατά την επικύρωση των βιοδεικτών ογκολογίας [15] . Στην παρούσα εργασία, η μέση

EGFR

τιμές GCN ήταν σημαντικά χαμηλότερα όταν αναλύθηκαν κατά τυχαίο τρόπο σε σύγκριση με τις τιμές που λαμβάνονται με την επιλογή των κυττάρων με την υψηλότερη GCN. Μόνον η τελευταία μέθοδος ήταν σε θέση να διακρίνουν τους ασθενείς σύμφωνα με αντι-ΕΟΡΚ απόκριση θεραπεία τους. Αυτό ενισχύει την άποψη ότι η θεραπευτική διαδικασία λήψης αποφάσεων βασίζεται σε σκοράροντας το κυρίαρχο φαινότυπο μπορεί να είναι παραπλανητική [15]. Ακόμη και ένα μικρό ποσοστό των μεταλλαγμένων αλληλομόρφων και των προφίλ γονιδιακής έκφρασης μπορεί να είναι ζωτικής σημασίας για την ανταπόκριση στη θεραπεία [16].

EGFR

GCN ετερογένεια είναι μια καλά εδραιωμένη φαινόμενο στα γλοιώματα [17]. Παρά το γεγονός ότι

EGFR

GCN ετερογένεια στο CRC μπορεί να έχουν εντοπιστεί νωρίτερα, η διαπίστωση αυτή έχει γενικά αγνοηθεί, και να μην χρησιμοποιηθεί ως παράμετρος σε διαγνωστικές αναλύσεις. Από ορισμένες απόψεις, η συσχέτιση μεταξύ των

EGFR

GCN και την ανταπόκριση στη θεραπεία μοιάζει με τα ευρήματα ενός άλλου μέλους της οικογένειας του EGFR,

Her 2,

σε γαστρικό καρκίνο.

Her2

ενισχύεται ή υπερεκφράζεται σε 7-34% των γαστρικών καρκίνων [18]. Σε αντίθεση με τον καρκίνο του μαστού, η έκφραση του Her2 σε γαστρικό καρκίνο δείχνει σημειώνονται ενδονεοπλαστική ετερογένεια, και ως εκ τούτου διαγνωστική ερμηνεία δοκιμή διαφέρει από τον καρκίνο του μαστού [19]. Οι τρέχουσες πρόβλεψης διάγνωση για τη θεραπεία trastuzumab στο γαστρικό καρκίνο βασίζεται σε ένα συνδυασμό των Her2 IHC και

Her2

GCN ανάλυση των περιοχών με την υψηλότερη χρώση IHC. Σε βιοψίες, τέτοιες περιοχές μπορούν να καλύπτουν μόνο το 5% του όγκου [19]. Παρά το γεγονός ότι υπάρχουν παραλληλισμοί, η Her2-γαστρικό καρκίνο αλγόριθμο διαφέρει από το

EGFR

GCN στο CRC. Σε καρκίνο του στομάχου, η τιμή αποκοπής βασίζεται σε γονίδιο σε αναλογία χρωμόσωμα ≥2.0, αν και οι πλέον πρόσφατες συστάσεις προτείνουν ότι

Her2

GCN & gt? 6.0 μπορεί να θεωρηθεί ως θετική. Σε CRC, η

EGFR

αύξηση GCN είναι συνήθως αποτέλεσμα του χρωμοσώματος 7 πολυσωμία και ως εκ τούτου, το γονίδιο για την αναλογία χρωμόσωμα δεν είναι κατατοπιστική. Από την άλλη πλευρά χρωμόσωμα 17 είναι σπάνια πολυπλοειδών σε καρκίνο του στομάχου, το οποίο υποδεικνύει μια διαφορετική βιολογικός μηχανισμός για

EGFR

και

Her2

αύξηση.

όγκου ετερογένεια έχει προταθεί να αποτελούν τη βάση αντοχή σε στοχευμένες θεραπευτικές του καρκίνου [15]. Από αυτή την άποψη, το εύρημα ότι ένα μικρό πληθυσμό

EGFR

υψηλής κύτταρα GCN ορίζει απάντηση στη θεραπεία είναι απροσδόκητη.