Αφηρημένο

Ιστορικό

ποδοκαλυκίνη-όπως 1 (PODXL) είναι μια γλυκοπρωτεΐνη κυτταρικής προσκόλλησης που συνδέονται με την επιθετική φαινότυπο όγκου και κακή πρόγνωση σε πολλές μορφές καρκίνου. Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να διερευνηθεί η έκφραση PODXL σε καρκίνο του στομάχου με τη χρήση δύο διαφορετικών αντισωμάτων.

Μέθοδοι

Με μικροσυστοιχίες όγκου των ιστών και ανοσοϊστοχημεία αξιολογήσαμε την έκφραση PODXL σε δείγματα όγκων από 337 ασθενείς ο οποίος υποβλήθηκε σε χειρουργική επέμβαση για αδενοκαρκίνωμα στομάχου στο Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο του Ελσίνκι. Χρησιμοποιήσαμε δύο διαφορετικά αντισώματα:. HPA2110, το οποίο είναι ένα πολύκλωνο αντίσωμα και ένα μονοκλωνικό αντίσωμα in-house ονομάζεται HES9, για να διερευνηθεί η συσχέτιση της έκφρασης PODXL με κλινικοπαθολογική μεταβλητές και την επιβίωση των ασθενών

Αποτελέσματα

χρώση PODXL ήταν θετικό με το πολυκλωνικό αντίσωμα σε 153 (57,5%) περιπτώσεις και με το μονοκλωνικό αντίσωμα σε 212 (76%). έκφραση Πολυκλωνικό αντίσωμα συνδέθηκε με εντερική τύπο καρκίνου (ρ & lt? 0.001). χρώση μονοκλωνικό αντίσωμα που συνδέεται με ηλικία άνω των 66 (p = 0,001), με καρκίνου του εντέρου (ρ & lt? 0.001), και με μικρό μέγεθος του όγκου (≤ 5 εκατοστά? p = 0.024). Αμφότερα τα αντισώματα συνδέονται με κλάσμα υψηλής φάση S (p = 0.022? P = 0,010), και δείκτης πολλαπλασιασμού υψηλή όγκου (Ki-67? P = 0,003? P = 0,001). PODXL θετικότητα με το πολυκλωνικό αντίσωμα ενδεικνυόμενη μειωμένη γαστρική-ειδική για τον καρκίνο 5-ετή επιβίωση του 24,0% (95% CI 16,9 έως 31,1), σε σύγκριση με 43,3% (95% CI 33,7 έως 52,9) για ασθενείς με PODXL αρνητικότητα (p = 0,001 ). Το αποτέλεσμα παρέμεινε σημαντικός στην πολυπαραγοντική ανάλυση. (HR = 3,17? 95% CI 1,37 – 7,34, p = 0,007)

Συμπέρασμα

Σε καρκίνο του στομάχου, PODXL έκφραση από το πολυκλωνικό HPA2110 αντίσωμα είναι ένα ανεξάρτητος δείκτης κακής πρόγνωσης

Παράθεση:. Laitinen Α, Böckelman C, Hagström J, Κοκκόλα Α, κλείσιμο C, Nilsson O, et al. (2015) ποδοκαλυκίνη ως προγνωστικός δείκτης για τον καρκίνο του στομάχου. PLoS ONE 10 (12): e0145079. doi: 10.1371 /journal.pone.0145079

Επιμέλεια: Yves St-Pierre, INRS, Καναδάς

Ελήφθη: 15 Σεπτεμβρίου του 2015? Αποδεκτές: 29 Νοέμβρη του 2015? Δημοσιεύθηκε: 16 Δεκεμβρίου 2015

Copyright: © 2015 Laitinen et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του χαρτιού

Χρηματοδότηση:. η μελέτη αυτή χρηματοδοτήθηκε από Finska Läkaresällskapet, το Kurt och Doris Ίδρυμα Palander, το Ίδρυμα Sigrid Juselius, και Medicinska understödsföreningen Liv och Hälsa. Fujirebio Diagnostics AB και Onson Consulting παρέχεται στήριξη με τη μορφή των μισθών για τους δημιουργούς CF και μετά, αλλά δεν είχε καμία πρόσθετη ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου.

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

τις τελευταίες δεκαετίες, η συχνότητα εμφάνισης του καρκίνου του στομάχου έχει μειωθεί, ειδικά στις δυτικές χώρες, προφανώς λόγω της μείωση της επίπτωσης του

Helicobacter pylori

, σε καλύτερη υγιεινή, και σε λιγότερο πολυσύχναστες διαβίωσης. Επειδή καρκίνο του στομάχου έχει κακή πρόγνωση, εξακολουθεί να είναι παγκοσμίως η δεύτερη συνηθέστερη αιτία θανάτου από καρκίνο σχετίζονται [1]. Το ποσοστό επιβίωσης 5 ετών, παρά την θεραπευτική χειρουργική επέμβαση, είναι μόνο περίπου 10-30% [2]. Η υψηλή θνησιμότητα οφείλεται κυρίως στην καθυστερημένη διάγνωση.

Η UICC όγκου Κόμβος Μετάσταση (TNM) ταξινόμηση είναι μακράν η πιο συνεπής προγνωστικό σύστημα ταξινόμησης σήμερα. Ωστόσο, ακόμη και εντός των ίδιων όγκων ομάδα στάδιο, η πορεία της νόσου μπορεί να ποικίλει. Δημιουργία μεθόδους για ακριβέστερη εκτίμηση της επιθετικότητας νεοπλασίας θα ήταν πολύτιμη κατά την αξιολόγηση της πρόγνωση των μεμονωμένων ασθενών με καρκίνο του στομάχου.

ποδοκαλυκίνη-σαν 1 (PODXL) είναι ένα αντι-συγκολλητικό διαμεμβρανική γλυκοπρωτεΐνη που ανήκει στην οικογένεια CD34 . Εκφράζεται συνήθως από νεφρό ποδοκύτταρα [3], αιμοποιητικών προγονικών κυττάρων [4], αγγειακά ενδοθήλια [5], και τα επιθηλιακά κύτταρα μαστού [6].

Η κλινική σημασία των PODXL σε εξέλιξης του καρκίνου έχει διερευνηθεί σε διαφόρων τύπων καρκινώματος, πρώτα ως ένας δείκτης βλαστικών κυττάρων του καρκίνου των όρχεων [7]. Μια μεταγενέστερη εύρημα είναι ότι καρκινικών κυττάρων-ειδική έκφραση PODXL συνδέεται με μια πιο επιθετική φαινότυπο και δυσμενούς έκβασης σε αρκετούς τύπους καρκίνου, για παράδειγμα, στο μαστό [6], του προστάτη [8], των ωοθηκών [9], του παχέος [10- 12], urothelial της ουροδόχου κύστης [13], του παγκρέατος [14], και periampullary καρκίνου [15].

Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να διερευνηθεί η έκφραση PODXL στο γαστρικό καρκίνο για να αποκαλύψει τον πιθανό ρόλο της στην επιθετικότητα και την πρόγνωση. Αποφασίσαμε να χρησιμοποιήσουμε δύο αντισώματα PODXL αναγνωρίζουν διαφορετικά επιτόπια: ένα μονοκλωνικό in-house HES9 αντίσωμα και ένα εμπορικά διαθέσιμο πολύκλωνο αντίσωμα HPA2110. Πρόσφατα μάθαμε ότι αυτά τα δύο αντισώματα είναι ανεξάρτητα δείκτες κακής πρόγνωσης σε καρκίνο του παχέος εντέρου [12]. Τα δύο αντισώματα μπορούν να αναγνωρίσουν δύο ομάδες των ασθενών με καρκίνο του παχέος εντέρου, και οι δύο από τους οποίους έχουν μια κακή πρόγνωση? συνδυασμένη χρήση αυτών των αντισωμάτων αποκάλυψε μια ομάδα ασθενών με ακόμα χειρότερη πρόγνωση [16].

Υλικά και Μέθοδοι

Ασθενείς

Η μελέτη περιελάμβανε 337 διαδοχικούς ασθενείς που υποβλήθηκαν σε χειρουργική επέμβαση για ιστολογικά επαληθεύεται γαστρικό αδενοκαρκίνωμα στο Τμήμα Χειρουργικής, Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο του Ελσίνκι, από το 1983 έως το 1999. η διάγνωση και η σταδιοποίηση σύμφωνα με την ταξινόμηση UICC παρέχονται 100 (29,7%) το στάδιο IA-IB, 41 (12,2%) το στάδιο II, 96 (28,5%) το στάδιο IIIA-IIIB, και 100 (29,7%) φάση IV ασθενείς. μεταστάσεις λεμφαδένων εμφανίστηκαν σε 184 (55%) και απομακρυσμένες μεταστάσεις σε 93 (28%) περιπτώσεις. Η διάμεση ηλικία ήταν 66 έτη (εύρος 30-87) και 163 (48%) ήταν γυναίκες και 174 (52%) άνδρες. Ολική ή μερική γαστρεκτομή με επεκταθεί (D2-D2 +) λεμφαδενεκτομή πραγματοποιήθηκε σε 34 (10%) ασθενείς, ολική γαστρεκτομή με D1-λεμφαδενεκτομή σε 161 (48%), και υφολική γαστρεκτομή με D1-λεμφαδενεκτομή σε 142 (42%). Συνολικά, 143 (43%) ασθενείς χειρουργήθηκαν με θεραπευτική πρόθεση, ενώ 176 (52%) υποβλήθηκαν σε παρηγορητική χειρουργική επέμβαση. Κανένας έλαβαν εισαγωγική θεραπεία, αλλά 32 (9%) ασθενείς έλαβαν μετεγχειρητική επικουρική θεραπεία (28 χημειοθεραπεία, ακτινοθεραπεία 2? 2 έλαβε δύο). στοιχεία επιβίωσης και αιτία θανάτου μέχρι το Νοέμβριο, 2013 προήλθε από τους φακέλους των ασθενών, το Κέντρο Μητρώου Πληθυσμού, της Φινλανδίας και Στατιστική Υπηρεσία της Φινλανδίας.

Η μελέτη εγκρίθηκε από την Χειρουργική Επιτροπή Δεοντολογίας του Πανεπιστημιακού Νοσοκομείου του Ελσίνκι (Dnro HUS 226 /E6 /06, επέκταση TMK02 §66 04.17.2013) και η Εθνική Εποπτική Αρχή της Πρόνοιας και Υγείας έδωσε την άδεια να χρησιμοποιήσει τα δείγματα ιστών χωρίς ατομική συναίνεση σε αυτήν την αναδρομική μελέτη (Valvira Dnro 10041 /06.01.03.01 /2012).

δείγματα ιστών

δείγματα χειρουργική ιστού σε παραφίνη ενσωματωμένο φορμόλη-σταθερή και ήρθε από τα αρχεία του Τμήματος Παθολογίας. Οι ιστοί των ασθενών ήταν de-εντοπίστηκαν και αναλύθηκαν ανώνυμα. Ιστοπαθολογικά αντιπροσωπευτικές περιοχές των δειγμάτων όγκου ορίζεται και αναγράφεται σε haematoxylin- και ηωσίνη-βάφονται διαφάνειες. Τρία δοκίμια που λαμβάνονται από κάθε μπλοκ όγκου του δείγματος με ποντες 0,6-mm και ενσωματωμένα σε ένα νέο μπλοκ παραφίνης από ένα ημι-αυτόματο microarrayer ιστών (Tissue arrayer 1, Beecher Instruments Inc., Silver Spring, MD, USA). Από τις έξι μπλοκ ιστού συστοιχία που παρασκευάζεται, το καθένα περιείχε 24 έως 192 δείγματα όγκων. Τμήματα 4 μm κάθε κόπηκαν και επεξεργασία για ανοσοϊστοχημεία.

Αντισώματα

σύγκριση δύο αντισώματα PODXL εναντίον διαφορετικών επιτόπων. Το πολυκλωνικό αντίσωμα (HPA2110, Atlas Antibodies, Στοκχόλμη, Σουηδία) εγέρθηκε έναντι ενός πεπτιδίου με τα υπολείμματα αμινοξέων 278-415 των PODXL, και το μονοκλωνικό in-house αντίσωμα HES9 [12] αναγνωρίζει τα υπολείμματα αμινοξέων 189-192 της PODXL . Και οι δύο επίτοποι συμβαίνουν στο εξωκυτταρικό τμήμα του μορίου PODXL. Η ακολουθία επιτόπου του HPA2110 ταιριάζει παραλλαγές ματίσματος κωδικοποίησης PODXL τρεις πρωτεΐνη με 100% (PODXL 001, 005 και 201, η ανθρώπινη πρωτεΐνη Atlas). Η τέταρτη παραλλαγή ματίσματος ταιριάζει με 87% (PODXL 202). Οι αλληλουχίες επιτόπιο του HES9 ταιριάζει 100% με όλες τις παραλλαγές ματίσματος. Τα αντισώματα περιγράφονται λεπτομερώς [12,17,18].

Ανοσοϊστοχημεία

τομές σταθεροποιήθηκαν σε πλακίδια και ξηραίνεται για 12 έως 24 ώρες στους 37 ° C, στη συνέχεια αποπαραφινοποιήθηκαν σε ξυλόλιο και επανυδατώθηκαν μέσω βαθμιαία μειούμενες συγκεντρώσεις αιθανόλης σε αποσταγμένο νερό. Για ανάκτηση αντιγόνου, οι τομές υποβλήθηκαν σε επεξεργασία σε μια λειτουργική μονάδα προεπεξεργασίας (Lab Vision Corp., Fremont, CA, USA) σε ρυθμιστικό Tris-HCl (ρΗ 8.5) για 20 λεπτά στους 98 ° C. Οι τομές χρωματίστηκαν σε ένα Autostainer 480 (Lab Vision) από το Σύστημα Ανίχνευσης Dako REAL EnVision, υπεροξειδάσης /DAB +, Κουνέλι /ποντίκι (Dako, Glostrup, Δανία). Οι πλάκες υποβλήθηκαν σε επεξεργασία για 5 λεπτά με 0.3% διάλυμα Dako REAL υπεροξειδάσης-Blocking να εμποδίσει ενδογενών υπεροξειδασών. Στη συνέχεια, τα πλακίδια επωάστηκαν για 1 ώρα με πολυκλωνικό (αραίωση 1: 250 = 2,5 μg /ml) ή το μονοκλωνικό αντίσωμα (αραίωση 1: 500 = 5 μg /ml) σε θερμοκρασία δωματίου. Ως θετικός μάρτυρας για κάθε σειρά χρώσης που χρησιμοποιούνται δείγματα από νεφρικό ιστό.

Η βαθμολόγηση της ανοσοδραστικότητας

HPA2110 και HES9 ανοσοθετικότητα βαθμολογήθηκε σε όλες τις διαθέσιμες πυρήνες όγκου. Κυτταροπλασματική PODXL και HES9 ανοσοθετικότητα βαθμολογήθηκε με 0-3 με βάση την ένταση των καρκινικών κυττάρων ανοσολογική αντίδραση, και η υψηλότερη βαθμολογία από τους τρεις πυρήνες υπηρέτησε για περαιτέρω ανάλυση. Αρνητική ανοσοαντιδραστικότητα βαθμολογήθηκε ως 0, διάχυτη αδύναμη κυτταροπλασματική θετικότητα ως 1, μέτρια θετική ή εστιακά έντονα θετική ένταση όπως 2, και ομοιογενώς ισχυρή ένταση όπως 3. Όλα τα δείγματα βαθμολογήθηκαν ανεξάρτητα από δύο ερευνητές (AL και JH) τύφλωσε με την κλινική κατάσταση και την έκβαση δεδομένα. Δείγματα με ασύμφωνα βαθμολογίες επανεκτιμάται, και η συναίνεση βαθμολογία υπηρέτησε για περαιτέρω ανάλυση. Ήμασταν σε θέση να επεξεργαστεί και να σκοράρει HPA2110 χρώση σε 266 και HES9 χρώση σε 279 δείγματα.

Η στατιστική ανάλυση

Σύλλογοι μεταξύ HPA2110 και HES9 θετικότητα και κλινικοπαθολογική μεταβλητές αξιολογήθηκαν από το chi-square test ή ακριβής δοκιμασία του Fisher. Οι συσχετίσεις μεταξύ των δύο αντισώματα ποδοκαλυκίνη αξιολογήθηκαν με τη δοκιμασία συσχέτισης Spearman. Νόσος-ειδική επιβίωση υπολογίστηκε από την ημερομηνία της επέμβασης σε θάνατο από καρκίνο του στομάχου.

Οι καμπύλες επιβίωσης κατασκευάσθηκαν σύμφωνα με τη μέθοδο Kaplan-Meier και συγκρίθηκαν με το τεστ logrank. Για την ανάλυση μονοπαραγοντική και πολυπαραγοντική επιβίωσης, το μοντέλο αναλογικού κινδύνου Cox είχε τεθεί οι ακόλουθοι συμπαράγοντες: η ηλικία, το φύλο, το στάδιο, το βαθμό, Laurens ταξινόμηση, το μέγεθος του όγκου, εντόπιση όγκου, η έκφραση PODXL καθορίζεται από HPA2110 χρώση και χρώση HES9, DNA πλοειδία, S- κλάσμα φάσης, Ki-67 έκφραση, και έκφραση ρ53. Στάδιο, βαθμός, ταξινόμηση Laurens, το μέγεθος του όγκου, το DNA πλοειδία, κλάσμα S-φάση, και έκφραση PODXL, HES9, Ki-67, και p53 είχαν εγγραφεί ως κατηγορηματική συμπαράγοντες. πλοειδία του DNA και το κλάσμα S-φάση είχε εκτιμηθεί νωρίτερα με κυτταρομετρία ροής, και ρ53, και η έκφραση των ιστών Ki-67 με ανοσοϊστοχημεία [19,20]. Μια τιμή ρ & lt? 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική. Όλες οι στατιστικές αναλύσεις έγιναν με το IBM SPSS Statistics έκδοση 20.0 για Mac (IBM Corporation, Armonk, NY, USA).

Αποτελέσματα

Η ανοσοϊστοχημεία

Η κυτταροπλασματική HPA2110 αντιδραστικότητα, αξιολογούνται 266 περιπτώσεις, ήταν αρνητική κατά 113 (42,5%), ασθενώς θετικός σε 120 (45,1%), μέτρια θετική σε 29 (10,9%), και ισχυρά θετικά σε 4 (1,5%) περιπτώσεις. Από τις 279 περιπτώσεις χρωματίστηκαν με επιτυχία για κυτταροπλασματική έκφραση με HES9, 67 (24,0%) ήταν αρνητικά, 137 (49,1%) ασθενώς θετικά, 54 (19,4%) μετρίως θετική, και 21 (7.5%) ισχυρώς θετικά. Σε τελική ανάλυση, αδύναμη να έντονα θετική HPA2110 και HES9 ανοσολογική αντίδραση (σκορ 1-3) θεωρήθηκε ως θετική έκφραση. Εκπρόσωπος εικόνες της ανοσοκηλιδώσεις είναι στο σχήμα 1. Τόσο HPA2110 και HES9 χρωματίζονται ομοιόμορφα σε όλο το κυτταρόπλασμα, με τα πυρηνικά ούτε κυττάρων μεμβρανώδη ανοσοθετικότητα αισθητή. Η κυτταροπλασματική έκφραση της ποδοκαλυκίνη από δύο διαφορετικά αντισώματα HPA2110 και HES9 συσχετίζεται (r

s = 0,455, p & lt? 0,001, δοκιμασία συσχέτισης τάξης Spearman του)

Εικόνες μ.Χ. χρωματίζονται με το αντίσωμα πολυκλωνικό HPA2110 και EH με. το μονοκλωνικό αντίσωμα HES9. Αρχική μεγέθυνση 40x

Η

Σύλλογος HPA2110 και HES-9 με κλινικοπαθολογοανατομικές μεταβλητές και βιοδείκτες

Οι ενώσεις HPA2110 και HES9 με κλινικοπαθολογοανατομικές μεταβλητές και μοριακοί βιοδείκτες έχουν ως εξής:. Θετικό (βαθμολογίες 1-3) χρώση HPA2110 συνδέθηκε με εντερική τύπο καρκίνου (ρ & lt? 0.001), θετική χρώση HES9 συνδέθηκε με ηλικία άνω των 66 (p = 0,001), με καρκίνο του εντέρου (ρ & lt? 0.001), και με μικρό (≤ 5 cm) το μέγεθος του όγκου (p = 0,024). Τόσο HPA2110 και HES9 συσχετίστηκαν με κλάσμα υψηλής φάσης S (SPF, ρ = 0.022? P = 0,010) και υψηλό δείκτη πολλαπλασιασμού του όγκου (Ki-67, ρ = 0,003? P = 0,001) (Πίνακες 1 και 2).

Η

επιβίωση αναλύει

έκφραση Θετική HPA2110 έδειξε καρκίνο του στομάχου ειδικά 5-ετή επιβίωση του 24% (95% CI 16,9 έως 31,1), σε σύγκριση με τους ασθενείς με αρνητικό χρώση HPA2110 με 5-ετή επιβίωση του 43% (95% CI 33,7 – 52,9) (p = 0.001 δοκιμασία log-rank) (Σχήμα 2 και Πίνακας 3). Το γαστρικό καρκίνο ειδικά 5-ετής επιβίωση των ασθενών με χρώση HES9 θετικών όγκων ήταν 30% (95% CI 23,1 έως 36,1), καθώς και για τα άτομα με αρνητική χρώση, το 40% (95% CI 27,7 – 52,1? P = 0.130 log -rank τεστ) (Σχήμα 2).

Η

(Α) HPA2110 και (Β) έκφραση HES9 και την επιβίωση σε ασθενείς με καρκίνο του στομάχου.

Η

στην ανάλυση υποομάδων, HPA2110 ήταν ένα σημαντικό δείκτη της φτωχή πρόγνωση σε ομάδες των νεότερων ασθενών (ηλικία κάτω των 66 ετών) (p = 0.006), και για το άρρεν φύλο (p = 0,002), ο καρκίνος διάχυτου τύπου (p = 0.001), και το στάδιο Ι ασθενείς (p = 0.048) (Σχήμα 3 και Πίνακας 3). Σε άλλες υποομάδες που μελετήθηκαν, HPA2110 δεν χρησιμεύουν ως προγνωστικός δείκτης

Η

Η έκφραση HPA2110 παρέμειναν σημαντικές σε πολυπαραγοντική ανάλυση (HR = 3,17?. 95% CI 1,37 – 7,34? P = 0,007? Πίνακας 4 ). Άλλοι ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες στην πολυμεταβλητή ανάλυση ήταν το στάδιο, το βαθμό και το DNA πλοειδίας.

Η

Συζήτηση

Δείχνουμε εδώ ότι η ειδική για τον καρκίνο 5-ετή επιβίωση ήταν σημαντικά καλύτερη για τους ασθενείς με καρκίνο του στομάχου έχει μια PODXL-αρνητικό όγκου. Στην πραγματικότητα, μεταξύ σταδίου 1 ασθενείς με PODXL-αρνητικούς όγκους, μόνο ένας ασθενής πέθανε από καρκίνο. Στην πολυπαραγοντική ανάλυση, θετική έκφραση PODXL υπηρέτησε ως ανεξάρτητος δείκτης κακής πρόγνωσης. Θετική έκφραση PODXL τόσο από το πολυκλωνικό αντίσωμα HPA2110 και το μονοκλωνικό αντίσωμα HES9 συσχετίστηκε με υψηλό δείκτη προστασίας με κυτταρομετρία ροής και χρώση Κί-67, και τα δύο δείκτες υψηλής πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων και έτσι του χειρότερη πρόγνωση.

Θετική έκφραση PODXL και από τα δύο αντισώματα συνδέονται με την εντερική τύπου καρκίνου, αλλά μια PODXL αρνητικών όγκων αποδείχθηκε ότι δεν είναι ένας προγνωστικός δείκτης σε καρκίνο του εντέρου. Αντιστρόφως, καρκίνος-ειδικά 5-ετή επιβίωση στην υποομάδα της διάχυτης καρκίνο του τύπου ήταν σημαντικά χειρότερη σε ασθενείς με PODXL θετικό όγκου. Σε γενικές γραμμές, διάχυτο καρκίνο του τύπου έχει συσχετιστεί με χειρότερη πρόγνωση από την εντερική έχει τον τύπο [21].

Για το καλύτερο της γνώσης μας, είμαστε η πρώτη για να αναφέρετε μια προγνωστική αξία για PODXL σε καρκίνο του στομάχου. Αυτό ήταν εμφανές για αρκετούς άλλους τύπους καρκίνου, όπως του μαστού [6], του προστάτη [8], των ωοθηκών [9], του παχέος εντέρου [10-12], urothelial κύστη [13], παγκρεατικό [14], και του καρκίνου του periampullary [15] . Μια μελέτη για καρκίνο του παχέος εντέρου δείχνουν αντιστοιχία μεταξύ πρωτογενών όγκων και των αντίστοιχων λεμφαδενικές μεταστάσεις σε μεμονωμένους ασθενείς, και η έκφραση PODXL παραμένει ανεπηρέαστη από εισαγωγική θεραπεία με ακτινοβολία. Αυτά τα ευρήματα υποστηρίζουν την κλινική χρησιμότητα της PODXL ως δείκτης της κακής πρόγνωσης [22]. Εδώ δεν είχαμε μελετήσει την έκφραση PODXL σε λεμφαδενικές μεταστάσεις σε γαστρικό καρκίνο, και κανένας από τους ασθενείς στην ομάδα αυτή έλαβε προεγχειρητική χημειοθεραπεία, αν και επί του παρόντος είναι μάλλον ρουτίνα. Αυτές οι επιδράσεις της προεγχειρητικής χημειοθεραπείας στην έκφραση PODXL στο γαστρικό καρκίνο χρειάζεται περαιτέρω αξιολόγηση.

Χρησιμοποιήσαμε δύο αντισώματα που αναγνωρίζουν PODXL, ένα εμπορικά διαθέσιμο πολυκλωνικό HPA2110 αντίσωμα και ένα in-house μονοκλωνικό αντίσωμα HES9 [16]. Immunoexpression από το HES9 μονοκλωνικό αντίσωμα ήταν ισχυρότερη από το πολυκλωνικό αντίσωμα. Αμφότερα τα αντισώματα χρωματίζονται ομοιόμορφα σε όλο το κυτταρόπλασμα, και δεν χρωματίζονται πυρήνες ούτε κυτταρική μεμβράνη. Η ποικιλία στην ένταση χρώσης και διανομή ήταν μικρότερος κατά τη χρήση του πολύκλωνου αντισώματος, κάνοντας το σκορ πιο δύσκολη. Βασικά PODXL είναι ένα διαμεμβρανικό μόριο, και ως εκ τούτου ήταν εκπληκτικό να μην το βρείτε σε κυτταρικές μεμβράνες στο γαστρικό καρκινικά κύτταρα είτε με αντίσωμα. Η έννοια της κυτταροπλασματικής, μη-μεμβρανικό, η έκφραση του PODXL, ο ρόλος και η λειτουργία του, χρειάζεται περαιτέρω αξιολόγηση.

Αυτά τα διαφορετικά αντισώματα που χρησιμοποιήσαμε αναγνωρίζουν άνισα μέρη του μορίου PODXL, πιθανώς εξηγεί γιατί η έκφραση τους σε ορισμένα από τα δείγματα διέφεραν και τα αποτελέσματα δεν ήταν ταυτόσημα. Kaprio et al. [16], χρησιμοποίησε αυτά τα ίδια τα αντισώματα σε καρκίνο του παχέος εντέρου, και βρήκε μια ενδιαφέρουσα διαφορά μεταξύ των προτύπων χρώσης. Το πολυκλωνικό αντίσωμα θετικότητα ήταν μεμβρανώδης [9,10] αλλά, το μονοκλωνικό αντίσωμα θετικότητα ήταν εμφανής κυρίως στο κυτταρόπλασμα. Σε καρκίνο του παχέος εντέρου, η ισχυρή θετικότητα τόσο με το μονοκλωνικό και το πολυκλωνικό αντίσωμα αποκάλυψε μια υποομάδα των ασθενών με ακόμη χειρότερη επιβίωση. Δεν βρήκαμε αυτό το είδος της συσχέτισης σε γαστρικό δείγματα καρκίνου. Συνολικά, θετικότητα μεταξύ των ασθενών με καρκίνο του στομάχου ήταν χαμηλότερη από ό, τι σε ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου. Σε καρκίνο του παχέος εντέρου περίπου 94% των περιπτώσεων ήταν θετικά για PODXL με αυτά τα δύο αντισώματα, ενώ σε γαστρικό καρκίνο θετικότητα εμφανίστηκε στο 76% των περιπτώσεων με το μονοκλωνικό αντίσωμα και σε 58% με το πολυκλωνικό αντίσωμα. Η συχνότητα των PODXL θετικότητα σε γαστρικό καρκίνο ήταν κοντά με αυτή που παρατηρήθηκε σε καρκίνο του μαστού και των ωοθηκών (40% και 67%) [6,9].

PODXL είναι μία διαμεμβρανική γλυκοπρωτεΐνη. Έχει δειχθεί ότι βλεννίνες, οι οποίες είναι επίσης γλυκοπρωτεΐνες, παίζουν ένα ρόλο σε επιθηλιακά μεσεγχυματικά να μετάβαση (ΕΜΤ) [23,24]. Ο ρόλος των PODXL στον καρκίνο είναι άγνωστος, αλλά μπορεί να σκεφτεί ότι επίσης PODXL μπορεί να έχει ένα ρόλο στην EMT. EMT μπορεί να εξηγήσει γιατί οι ασθενείς με υψηλή έκφραση PODXL έχουν χειρότερη επιβίωση.

Η ισχύς της παρούσας μελέτης είναι μια μεγάλη ομάδα ασθενών με καρκίνο του στομάχου και η μακροχρόνια παρακολούθηση με αξιόπιστες κλινικές χρόνο παρακολούθηση και δεδομένα επιβίωσης. Με την τεχνική TMA, μόνο μικρές περιοχές του όγκου αξιολογήθηκε σε σύγκριση με τομές ολόκληρου του ιστού. Σε καρκίνο του παχέος εντέρου, Larsson et al. [22] βρήκαν ότι η χρήση ολόκληρων τμημάτων επέτρεψε ταυτοποίηση ενός μεγαλύτερου αριθμού όγκων όπως PODXL θετικοί από ό, τι ανάλυση TMA. Επειδή η έκφραση PODXL είναι ετερογενής, χρήση της τεχνικής της ΤΜΑ μπορεί να οδηγήσει σε υποτίμηση των θετικών περιπτώσεων. Η βαθμολόγηση των δύο μονοκλωνικού αντισώματος και έκφραση πολυκλωνικό αντίσωμα ήταν για μερικούς δείγματα δύσκολο? περιπτώσεις με μόνο μερικά καρκινικά κύτταρα και εκείνα στα οποία η αξία των καρκινικών κυττάρων ήταν αδιευκρίνιστες ήταν ως εκ τούτου αποκλείστηκαν από την ανάλυση. Αυτό, εν μέρει, εξηγεί το μεγάλο αριθμό των αποκλεισμένων περιπτώσεις. Από την άλλη πλευρά, η τεχνική TMA επιτρέπει την ανάλυση μεγάλων ομάδων ασθενών με ομοιογενή μέθοδο χρώσης.

Εν κατακλείδι, PODXL ανοσοχρώση χρησιμεύει ως ανεξάρτητος δείκτης κακής πρόγνωσης σε καρκίνο του στομάχου. Αυτό είναι, με τις γνώσεις μας, την πρώτη έκθεση σχετικά με την προγνωστική αξία της έκφρασης PODXL σε καρκίνο του στομάχου. Μελλοντικές μελέτες θα πρέπει να επιβεβαιώσουν αυτή τη συσχέτιση και την επίλυση των μηχανισμών με τους οποίους PODXL επηρεάζει την ανάπτυξη και τη συμπεριφορά του καρκίνου του στομάχου.

Ευχαριστίες

Σας ευχαριστούμε Päivi Peltokangas και Ελίνα Aspiala για την εξαιρετική τεχνική βοήθεια τους.