Αφηρημένο

Οι στόχοι αυτής της μελέτης ήταν να αξιολογήσει ταυτόχρονα την έκφραση Υ-box δεσμευτική πρωτεΐνη-1 ( ΥΒ-1) σε μη νεοπλασματικά ορθού ιστού και του ορθού καρκινικό ιστό, και να συλλέγουν δεδομένα κλινικής παρακολούθησης για μεμονωμένους ασθενείς. Επιπλέον, έχουμε ως στόχο να διερευνήσει τις αναπτυξιακές λειτουργίες και προγνωστική αξία της YB-1 σε καρκίνο του ορθού. Πραγματοποιήσαμε ανοσοϊστοχημικές μελέτες για την εξέταση ΥΒ-1 έκφραση σε δείγματα ιστών από 80 ασθενείς με καρκίνο του ορθού, 30 ασθενείς με ορθού σωληνοειδές αδένωμα, και 30 ασθενείς με rectitis. Οι βαθμολογίες ιστολογικής μέση ΥΒ-1 για τον καρκίνο του ορθού, του ορθού σωληνοειδές αδένωμα, και rectitis δείγματα ιστών ήταν 205.5, 164.3, 137.7 και, αντίστοιχα. Μικρότεροι χρόνοι ελεύθερη νόσου και συνολική επιβίωση βρέθηκαν σε ασθενείς με καρκίνο του ορθού οι οποίοι είχαν υψηλότερες ΥΒ-1 έκφραση σε σχέση με εκείνους με χαμηλότερη έκφραση (38,2 μήνες έναντι 52,4 μηνών, p = 0,013? Και 44,4 μήνες έναντι 57,3 μηνών, p = 0,008, αντίστοιχα). Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι YB-1 έκφραση είναι υψηλότερη σε ορθού καρκινικό ιστό από ό, τι στην ορθού σωληνωτό αδένωμα και rectitis ιστών και ότι μπορεί να είναι ένας ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας για τον καρκίνο του ορθού

Παράθεση:. Zhang Υ, Zhao PW, Feng G, Xie G, Wang AQ, Yang YH, et al. (2015) Το επίπεδο έκφρασης και προγνωστική αξία της Y-Box Δεσμευτική Πρωτεΐνη-1 σε καρκίνο του ορθού. PLoS ONE 10 (3): e0119385. doi: 10.1371 /journal.pone.0119385

Ακαδημαϊκό Επιμέλεια: Hiromu Suzuki, Σαπόρο Ιατρικό Πανεπιστήμιο, ΙΑΠΩΝΙΑ

Ελήφθη: 15, Οκτωβρίου 2014? Αποδεκτές: 30 Ιανουαρίου 2015? Δημοσιεύθηκε: 19, Μαρτίου, 2015

Copyright: © 2015 Zhang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του χαρτιού

χρηματοδότηση:.. Οι συγγραφείς δεν έλαβαν καμία ειδική χρηματοδότηση για το έργο αυτό

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν ανταγωνιστικά συμφέροντα υπάρχουν

Εισαγωγή

καρκίνο του ορθού είναι ένα από τα πιο κοινά κακοήθεις όγκους του πεπτικού συστήματος. Η εισαγωγή του επικουρικού χημειοραδιοθεραπεία για τη θεραπεία του καρκίνου του ορθού βελτίωσε τα ποσοστά επιβίωσης, αλλά ένα υψηλό ποσοστό θνησιμότητας είναι ακόμη συνδέεται με την κακοήθεια. Οι κύριοι παράγοντες που επηρεάζουν την πρόγνωση των ασθενών με καρκίνο του ορθού περιλαμβάνουν το στάδιο του όγκου, την απόσταση μεταξύ του όγκου και του πρωκτού, και το περιφερειακό περιθώριο εκτομής [1-2]. Επειδή παρόμοια ασθενείς μπορούν να λάβουν ακόμα την ίδια μεταχείριση, τελικά, έχουν διαφορετικά αποτελέσματα, υποθέτουμε ότι υπάρχουν και άλλοι παράγοντες που συμβάλλουν.

δεσμευτική Y-box πρωτεΐνη-1 (YB-1) είναι η πιο εξελικτικά συντηρημένη νουκλεϊκών οξέων δέσμευσης πρωτεΐνη γνωστή [3]. Είναι εμπλέκεται στη ρύθμιση της μεταγραφής και της μετάφρασης, την επιδιόρθωση του DNA, εναλλακτικό μάτισμα του mRNA, επισκευή RNA, τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, την απόπτωση, και αντοχή φαρμάκου [4-7]. Ένας αυξανόμενος αριθμός μελετών έχουν δείξει σύνδεση μεταξύ YB-1 και διάφορες μορφές καρκίνου. Για παράδειγμα, αυτή η πρωτεΐνη θα μπορούσε να οδηγήσει τη μετάβαση G1-S σε καρκινικά κύτταρα μέσω της οδού CDC6 να προάγει πολλαπλασιασμό [8]. ΥΒ-1 μπορεί να δρα ως αρνητικός ρυθμιστής του γονιδίου ρ53 ογκοκατασταλτικό και καταστολέα του προαγωγού ρ53 [9]. ΥΒ-1 μπορούν να σχηματίσουν σύμπλοκα με πρωτεΐνη ενεργοποίησης 2 και ρ53. Μεταγενέστερες πρόσδεσης στο στοιχείο απόκρισης RE-1 της μεταλλοπρωτεϊνάσης μήτρας στοιχείο ενισχυτή 2 (ΜΜΡ2) γονίδιο ενεργοποιεί τη μεταγραφή του

ΜΜΡ2

, προωθώντας έτσι μετάσταση όγκου [10]. PIK3CA, του υποδοχέα του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGFR), και μεσεγχυματικά-επιθηλιακά παράγοντας μετάβαση ρυθμίζονται από ΥΒ-1 για να προωθήσει την ανάπτυξη και την επιβίωση των καρκινικών κυττάρων του μαστού [11-13]. ΥΒ-1 έχει επίσης συνδεθεί με την αντίσταση των καρκινικών κυττάρων να θεραπευτικών [14-15].

Αρκετές μελέτες κατέδειξαν ότι ΥΒ-1 υπερέκφραση συνδυάζεται με πτωχή πρόγνωση για τους ασθενείς με κακοήθεις όγκους όπως το κεφάλι και καρκίνο του τραχήλου της [16], μη-Hodgkin λέμφωμα [17], του καρκίνου του μαστού [18], οστεοσάρκωμα [19], μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα [20], γαστρικού καρκίνου [21], και οισοφαγικό καρκίνωμα των πλακωδών κυττάρων [22]. Επί του παρόντος, υπάρχουν ελάχιστες αναφορές για το αν η έκφραση YB-1 επηρεάζει την πρόγνωση των ασθενών με καρκίνο του ορθού. Προηγούμενες μελέτες κατέδειξαν ότι η φλεγμονή παίζει έναν εξαιρετικά σημαντικό ρόλο στην έναρξη και την εξέλιξη του καρκίνου, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του παχέος εντέρου [23]. Οι στόχοι αυτής της μελέτης ήταν να αξιολογηθεί η έκφραση του YB-1 σε μη νεοπλασματικά ορθού ιστού και του ορθού καρκινικό ιστό, και για την αξιολόγηση της σχέσης μεταξύ ΥΒ-1 έκφραση και την πρόγνωση των ασθενών με καρκίνο του ορθού.

υλικά και Μέθοδοι

δείγματα ιστών και κλινικά δεδομένα

Η μελέτη εγκρίθηκε από την Επιτροπή Ιατρικής Δεοντολογίας των Mianyang Κεντρικό Νοσοκομείο. Όλοι οι ιστοί ελήφθησαν με τη συγκατάθεση των ασθενών, καθώς και γραπτή συγκατάθεση από τους δότες ή τον πλησιέστερο συγγενή λήφθηκε για τη χρήση των δειγμάτων ιστού για ερευνητικούς σκοπούς. Για τη μελέτη αυτή, 140, δείγματα ιστών εγκλεισμένα σε παραφίνη σταθεροποιημένα με φορμαλίνη ελήφθησαν μεταξύ 2008 και 2009 από το Τμήμα Παθολογίας σε Mianyang Κεντρικό Νοσοκομείο. Τα δείγματα συλλέχθηκαν από 140 ασθενείς, συμπεριλαμβανομένων 80 με καρκίνο του ορθού, 30 με ορθού σωληνοειδές αδένωμα, και 30 με rectitis. Όλοι οι ασθενείς με καρκίνο του ορθού υποβλήθηκε σε χειρουργική επέμβαση, και μετά από χειρουργική επέμβαση, 69 από αυτούς τους ασθενείς έλαβαν έκδοχο (DT δόση ακτινοβολίας: 50 Gy /25 κλάσματα? 5-φθοριοουρακίλη [5-FU] -με βάση σχήμα χημειοθεραπείας) χημειοραδιοθεραπεία. Ο μέσος χρόνος παρακολούθησης ήταν 46,8 μήνες (εύρος: 7-75 μήνες). Οκτώ ασθενείς με καρκίνο του ορθού χάθηκαν κατά την παρακολούθηση, και έτσι, τα κλινικά δεδομένα συλλέχθηκαν για 72 ασθενείς.

Ανοσοϊστοχημεία

Η ανοσοϊστοχημική ανάλυση πραγματοποιήθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [24]. Τέσσερις-μικρόμετρο πάχους σταθεροποιημένο με φορμαλίνη, τμήματα ιστού ενσωματωμένα σε παραφίνη αποπαραφινοποιήθηκαν, επανυδατώθηκαν σε βαθμίδωση αλκοόλης, και υποβάλλεται σε ένα ρυθμιστικό ανάκτησης επιτόπου θερμότητα επαγόμενη που αποτελείται από Tris-EDTA σε ρΗ 7,4. Οι πλάκες στη συνέχεια βράζεται για 3 λεπτά σε μια χύτρα ταχύτητας και στη συνέχεια ψύχθηκε σε ρυθμιστικό για να ανακτήσει τα επιτόπια. Τα πλακίδια εμβαπτίσθηκαν σε 3% Η

2O

2 για 8 λεπτά και στη συνέχεια πλύθηκε με νερό. Αυτά στη συνέχεια επωάστηκαν σε αραίωση 1: 200 ενός πολυκλωνικού αντισώματος κουνελιού που εγείρεται έναντι ανθρώπινου ΥΒ-1 (Cell Signaling Technology, Inc., Boston, MA, USA) για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου. Μετά την επώαση με δευτερεύον αντίσωμα κατσίκας αντι-κουνελιού, βιοτίνη σημασμένο με ένζυμο υπεροξειδάση χράνου πολυμερές από την Ανίχνευση Dako ChemMate EnVision Kit (Dako Diagnostics Co. Ltd., Shanghai, China) προστέθηκε. Το χρωμογόνο ήταν 3,3′-διαμινοβενζιδίνη (Dako Diagnostics Co. Ltd.). Τέλος, οι τομές με αιματοξυλίνη. διαφάνειες ιστός καρκίνος του μαστού, χρησιμοποιήθηκαν ως θετικός έλεγχος για χρώση ΥΒ-1. Μια διαφάνεια που δεν υπέστη κατεργασία με το πρωτογενές αντίσωμα χρησιμοποιήθηκε ως αρνητικός έλεγχος. YB-1 ανοσοθετικότητα αναλύθηκε ημιποσοτικά. Αυτή η μέθοδος, που αναπτύχθηκε από McCarty et al., Ονομάζεται η YB-1 ιστολογική βαθμολογία (Η-βαθμολογία) [25]. Η-βαθμολογία αντιπροσωπεύει τόσο την ένταση της χρώσης και το ποσοστό των κυττάρων που χρωματίζονται για κάθε επίπεδο ένταση χρώσης. Οι HSCOREs ελήφθησαν χρησιμοποιώντας τον ακόλουθο αλγόριθμο: Η-βαθμολογία = Σ (I × PC), όπου Ι και Υ αντιπροσωπεύουν την ένταση της χρώσης και το ποσοστό των κυττάρων τα οποία χρωματίστηκαν για κάθε επίπεδο χρώσης έντασης, αντίστοιχα. Εντάσεις είχαν ταξινομηθεί από το μηδέν (καμία χρώση) έως τρεις (πολύ ισχυρή χρώση). Όλες οι διαφάνειες εξετάστηκαν και βαθμολογήθηκαν ανεξαρτήτως από τρεις παθολόγους που δεν γνώριζαν τόσο τα κλινικά και παθολογικά δεδομένα. YB-1 ανοσοθετικότητα ορίστηκε ως η παρουσία οποιουδήποτε ειδική χρώση στο κυτταρόπλασμα ή /και τον πυρήνα.

Η στατιστική ανάλυση

Εμείς πραγματοποιείται στατιστική ανάλυση με τη χρήση SPSS στατιστικού λογισμικού (IBM Corp., Armonk, ΝΥ, USA). Η διαφορική έκφραση των YB-1 σε δείγματα ιστών από ασθενείς με ορθού rectitis, πρωκτική σωληνοειδές αδένωμα, και του καρκίνου του ορθού αναλύθηκε χρησιμοποιώντας ANOVA στατιστικές δοκιμές. ANOVA ή

t

-ΜΕΛΕΤΕΣ χρησιμοποιήθηκαν για την ανάλυση της συσχέτισης μεταξύ των κλινικοπαθολογοανατομικών παραμέτρων και YB-1 έκφρασης. Ένα μοντέλο παλινδρόμησης αναλογικού κινδύνου του Cox χρησιμοποιήθηκε σε μια πολυπαραγοντική ανάλυση των επιπτώσεων των προγνωστικών παραγόντων στην επιβίωση. Ρ τιμές & lt?. 0.05 θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές σε όλες τις δοκιμές

Αποτελέσματα

YB 1-έκφραση στον καρκίνο του ορθού και μη νεοπλασματικών ορθού ιστών

ορθού καρκινικά κύτταρα εκτίθενται διάχυτη ΥΒ-1 χρώση στο κυτταρόπλασμα (Σχ. 1-3). Σε μη-καρκινικές ορθού ιστός, παρατηρήθηκε μόνο ασθενή χρώση ΥΒ-1. Πυρηνική χρώση σπάνια παρατηρείται σε κανένα από τα δείγματα ιστών. Η μέση HSCOREs ΥΒ-1 για τον καρκίνο του ορθού, σωληνοειδές αδένωμα, και rectitis δείγματα ιστού ήταν 205.5, 164.3, 137.7 και, αντίστοιχα. επίπεδα έκφρασης ΥΒ-1 ήταν υψηλότερες σε ιστό από ασθενείς με καρκίνο του ορθού σε σύγκριση με μη νεοπλασματικά ορθού ιστού (Ρ = 0,000? Πίνακας 1). Ωστόσο, YB-1 δεν εμφανίζει καμία εμφανή συσχέτιση με την ηλικία του ασθενούς (P = 0,153), το φύλο (P = 0.657), το στάδιο του καρκίνου (P = 0,245), ή επίκουρο χημειοακτινοθεραπεία (P = 0,761). Τα κλινικά χαρακτηριστικά των ασθενών αυτών φαίνονται στον Πίνακα 2.

Η

Η

Η

Επιβίωση ανάλυση των YB-1 έκφραση στον καρκίνο του ορθού

Ανώτατη YB-1 (η-βαθμολογία ≥ 200) συσχετίστηκε με κακή επιβίωση ελεύθερη νόσου (DFS) και τη συνολική επιβίωση (OS) (Εικ. 4-5). Η μέση DFS ήταν 38,2 μήνες σε 50/72 ασθενείς με καρκίνο του ορθού, η οποία ήταν μικρότερη από εκείνη των ασθενών με χαμηλότερο ΥΒ-1 έκφραση (Η-βαθμολογία & lt? 200). Η μέση DFS σε ασθενείς με χαμηλότερη έκφραση YB-1 ήταν 52,4 μήνες (P = 0,013). Μια ανάλυση του OS αποκάλυψε παρόμοια αποτελέσματα. Ο μέσος χρόνος OS ασθενών με υψηλότερη έκφραση ΥΒ-1 (Η-βαθμολογία ≥ 200) ήταν 44,4 μήνες έναντι 57,3 μηνών (Ρ = 0,008) για ασθενείς με χαμηλότερο ΥΒ-1 έκφρασης (ΥΒ-1 Η-βαθμολογία & lt? 200).

Η

Η επιρροή των κλινικών και παθολογικών χαρακτηριστικών για τον καρκίνο του ορθού αναλύθηκε σε μία ανάλυση πολλαπλών μεταβλητών, χρησιμοποιώντας αναλογικό μοντέλο κινδύνου ενός Cox. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το κλινικό στάδιο, επίκουρο χημειοραδιοθεραπεία, και ΥΒ-1 έκφραση συσχετίζεται με DFS και OS και ότι μπορούν να είναι ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες που επηρεάζουν τους χρόνους επιβίωσης των ασθενών με καρκίνο του ορθού (Πίνακας 3).

Η

Συζήτηση

Πολλές πρωτεΐνες αναφερθεί ότι σχετίζεται με την πρόγνωση των ασθενών με καρκίνο του ορθού, συμπεριλαμβανομένων vasohibin-1 [26] και miR-25 [27]. Λίγες μελέτες έχουν επικεντρωθεί στην συσχέτιση μεταξύ YB-1 και του καρκίνου του ορθού χρησιμοποιώντας μια ανοσοϊστοχημική προσέγγιση. Προς τα πάνω ρύθμιση του ΥΒ-1 παρατηρήθηκε σε αρκετές όγκους του πεπτικού συστήματος. Για παράδειγμα, ΥΒ-1 υπερεκφράζεται στο κυτταρόπλασμα των κυττάρων του οισοφάγου πλακώδες καρκίνωμα [22]. Υψηλότερη έκφραση του ΥΒ-1 επίσης παρατηρείται στο κυτταρόπλασμα των γαστρικών καρκινικών κυττάρων, αλλά πυρηνική χρώση παρατηρείται σπάνια [21]. Στη μελέτη μας, παρατηρήσαμε έκφραση ΥΒ-1 στο κυτταρόπλασμα των κυττάρων από τρεις διαφορετικούς ιστούς. Η-βαθμολογία για πρωκτική ιστό καρκίνου ήταν σημαντικά υψηλότερες από εκείνες για τις μη νεοπλασματικές ορθού ιστούς, γεγονός που υποδηλώνει ότι

ΥΒ-1

μπορεί να είναι ένας από του ορθού σχετίζονται με τον καρκίνο ογκογονίδιο.

ΥΒ-1 είναι ένας δείκτης της πρόγνωσης σε πολλές μορφές καρκίνου. Για παράδειγμα, το ποσοστό υποτροπής ήταν υψηλότερη σε ασθενείς με ρινοφαρυγγικό καρκίνωμα με υψηλή ΥΒ-1 έκφραση από ότι σε ασθενείς με χαμηλή έκφραση της πρωτεΐνης αυτής [28]. Στον καρκίνο του μαστού, η αυξημένη έκφραση της πυρηνικής ΥΒ-1 μπορεί να συσχετιστεί με βραχύτερο DFS, συγκεκριμένες ασθένειες επιβίωση, και OS [29]. Η μελέτη μας έδειξε παρόμοια αποτελέσματα. Η μέση DFS και OS ασθενών με υψηλότερη έκφραση του ΥΒ-1 ήταν 38,3 και 44,4 μήνες αντίστοιχα, έναντι 52,4 και 57,3 μήνες αντίστοιχα, σε ασθενείς με χαμηλότερη έκφραση ΥΒ-1. Ασθενείς με υψηλότερη έκφραση της YB-1 είχε μικρότερη DFS (P = 0,013) και το λειτουργικό σύστημα (P = 0,008) από εκείνες με χαμηλότερη έκφραση YB-1. Πολυπαραγοντική ανάλυση της πρόγνωσης των ασθενών με τη χρήση ενός μοντέλου Cox proportional κινδύνους έδειξε ότι το στάδιο του όγκου, την ηλικία, το φύλο και δεν είχε καμία σχέση με την πρόγνωση, αλλά ότι η έκφραση YB-1 ήταν ένα ανεξάρτητο προγνωστικό παράγοντα για τον καρκίνο του ορθού.

Η κακή πρόγνωση ασθενείς με υπερέκφραση του ΥΒ-1 μπορεί να οφείλεται σε ΥΒ-1-επαγόμενη αντίσταση σε χημειοακτινοθεραπεία. Σε καρκινικά κύτταρα του μαστού, η ενεργοποίηση του ΥΒ-1 σε σερίνη 102 διαμεσολαβεί αντίσταση στην τραστουζουμάμπη με την αύξηση του αριθμού των CD44-θετικών κυττάρων [30]. ΥΒ-1 θα μπορούσε να ρυθμίζουν την αντιδραστικότητα των κυττάρων του όγκου με την ταμοξιφαίνη και fulvestrant επηρεάζοντας τον υποδοχέα οιστρογόνου (ER) -ανθρώπινη EGFR2 μονοπατιού σηματοδότησης σε ER-θετικά κύτταρα καρκίνου του μαστού [31]. YB-1 μπορεί να ενεργοποιήσει το γονίδιο ανθεκτικότητας σε πολλά φάρμακα

MDR1

και η πολυανθεκτικά αντίσταση-πρωτεΐνης που συνδέεται με [32-35]. Μπορεί επίσης να προκαλέσει αντίσταση στην μιτομυκίνη και σισπλατίνη [36]. ΥΒ-1 είναι άμεσα εμπλεκόμενα στη ρύθμιση της 5-FU-επαγόμενη ενεργοποίηση του υποκινητή MVP, η οποία μεσολαβεί αντοχή φαρμάκου [37]. Το σχήμα χημειοθεραπείας που χρησιμοποιούνται στην παρούσα μελέτη βασίστηκε σε πλατίνα και 5-FU. Υποθέτουμε ότι η κακή πρόγνωση των ασθενών θα μπορούσε να προκύψει από την αντίσταση του φαρμάκου που προκαλείται από YB-1 υπερέκφραση. Ακτινοβολία επαγόμενη ΥΒ-1 φωσφορυλίωσης προάγει την επισκευή του δίκλωνα σπασίματα του DNA και την επιβίωση μετά την ακτινοβόληση μέσω φωσφατιδυλινοσιτόλη 3-κινάση /ΑΚΤ και εξωκυτταρικό μονοπάτια ΜΑΡΚ /σήμα ρυθμίζεται κινάσης σηματοδότησης, οι οποίες είναι προς τα κάτω του σηματοδότηση EGFR. Επιπλέον, η εξάντληση του ΥΒ-1 με siRNA θα μπορούσε να αυξήσει την ευαισθησία των καρκινικών κυττάρων του μαστού σε ακτινοβολία [38]. Είναι πιθανό ότι παρόμοιοι μηχανισμοί αποτελούν τη βάση των ευρημάτων στη μελέτη μας. Ωστόσο, οι μηχανισμοί που βρίσκονται πίσω από YB-1 υπερέκφραση σε ασθενείς με καρκίνο του ορθού και τις λειτουργικές συνέπειες παραμένουν ασαφείς.

Συμπέρασμα

Εν κατακλείδι, η μελέτη μας δείχνει ότι YB-1 έκφραση είναι υψηλότερη σε ορθού καρκινικού ιστού από ό, τι στην πρωκτική σωληνωτό αδένωμα και rectitis ιστού. Αυξημένα έκφραση του ΥΒ-1 μπορεί να υποδεικνύει κακή πρόγνωση για τους ασθενείς με καρκίνο του ορθού. Μια πιο λεπτομερής κατανόηση των μονοπατιών σηματοδότησης στην οποία ΥΒ-1 συμμετέχει μπορεί να οδηγήσει στην αναγνώριση νέων θεραπευτικών στόχων για πρωκτική θεραπεία του καρκίνου.