Αφηρημένο

Οι λειχήνες είναι συμβιωτική οργανισμοί που παράγουν διάφορες μοναδικές χημικές ουσίες που μπορούν να χρησιμοποιηθούν για φαρμακευτικούς σκοπούς. Με σκοπό την εξέταση νέων αντικαρκινικών παραγόντων που αναστέλλουν την κινητικότητα των κυττάρων του καρκίνου, δοκιμάσαμε την ανασταλτική δραστικότητα των επτά λειχήνα ειδών που συλλέγονται από τα βουνά Ρουμανική Καρπάθια κατά τη μετανάστευση και την εισβολή ανθρώπινων καρκινικών κυττάρων του πνεύμονα και περαιτέρω ερευνήθηκε των μοριακών μηχανισμών που διέπουν αντι- τους μεταστατική δραστηριότητα. Μεταξύ αυτών,

Αλεκτόρεια samentosa

,

Flavocetraria nivalis

,

Αλεκτόρεια ochroleuca

, και

Usnea Φλόριντα

έδειξαν σημαντική ανασταλτική δράση έναντι της κινητικότητας των καρκινικών κυττάρων ανθρώπινου πνεύμονα . Αποτελέσματα HPLC έδειξε ότι usnic οξύ είναι η κύρια ένωση σε αυτές τις λειχήνες, και (+) – usnic οξύ έδειξε παρόμοια ανασταλτική δραστηριότητα που έχουν ακατέργαστο εκχύλισμα. Μηχανιστικά, η δραστικότητα TOPFLASH β-κατενίνης μεσολάβηση και KITENIN μεσολάβηση δραστικότητα ΑΡ-1 μειώθηκαν κατά (+) – θεραπεία usnic οξύ σε έναν δοσο-εξαρτώμενο τρόπο. Η ποσοτική πραγματικού χρόνου δεδομένα PCR έδειξαν ότι η (+) – usnic οξύ μείωσε το επίπεδο του mRNA του CD44, η κυκλίνη D1 και c-myc, τα οποία είναι τα κατάντη γονιδίων στόχων και των δύο β-κατενίνης /LEF και c-jun /ΑΡ-1 . Επίσης, Rac1 και RhoA δραστηριότητες μειώθηκαν με επεξεργασία με (+) – usnic οξύ. Είναι ενδιαφέρον, παρατηρήθηκε υψηλότερη ανασταλτική δραστικότητα για την κυτταρική εισβολή όταν τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με (+) – usnic οξύ και cetuximab. Αυτά τα αποτελέσματα υπονοείται ότι η (+) – usnic οξύ μπορεί να έχουν πιθανή δραστικότητα σε αναστολή των καρκινικών κυττάρων της μετάστασης, και (+) -. Usnic οξύ θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί για αντικαρκινική θεραπεία με μια ξεχωριστή μηχανισμούς δράσης

Citation : Γιανγκ Υ, Nguyen TT, Jeong ΜΗ, Crişan F, Yu YH, Ha HH, et al. (2016) ανασταλτική δράση της (+) – Usnic οξύ εναντίον μη-μικροκυτταρικού καρκίνου καρκίνο του πνεύμονα κινητικότητα. PLoS ONE 11 (1): e0146575. doi: 10.1371 /journal.pone.0146575

Επιμέλεια: Frédéric André, Πανεπιστήμιο Aix-Marseille, Γαλλία

Ελήφθη: 2η του Σεπτεμβρίου 2015? Αποδεκτές: 18η Δεκεμβρίου 2015? Δημοσιεύθηκε: 11 του Ιανουαρίου 2016

Copyright: © 2016 Yang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Όλη η δεδομένα είναι εντός του χαρτιού

Χρηματοδότηση:. η μελέτη αυτή χρηματοδοτήθηκε από το Εθνικό Ίδρυμα Ερευνών της Κορέας (NRF-2013R1A1A2004677, NRF-2013R1A2A2A07067609, NRF-2015R1A4A1041219 και MRC-2011 – 0030132) και από την Korea National Research των πόρων του Προγράμματος Κέντρο (NRF-2014M3A9B8002115). Αυτή η μελέτη έλαβε επίσης την υποστήριξη από την επιχορήγηση της έρευνας που χρηματοδοτείται από το Ερευνητικό Κέντρο Sunchon Φυσικών Ιατρικής

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Συντομογραφίες: AP-1, ενεργοποιητή πρωτεΐνη-1? EGF, επιδερμικό αυξητικό παράγοντα? DMSO, διμεθυλοσουλφοξείδιο? HPLC, υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης? KITENIN, KAI1 COOH-τερματικό τετρασπανίνη Αλληλεπίδραση? LEF, λεμφικών παράγοντα ενίσχυσης της? PBD, περιοχή p21-δεσμευτική? PCR, αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης? RBD, Rho-δεσμευτική τομέα

Εισαγωγή

Ο καρκίνος του πνεύμονα είναι η κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο στις αναπτυγμένες χώρες. Λόγω της έλλειψης αποτελεσματικής θεραπείας για προχωρημένη νόσο, η πρόγνωση του καρκίνου του πνεύμονα παραμένει ανεπαρκής, με λιγότερο από το 15% επιβιώνουν πέντε χρόνια μετά τη διάγνωση [1]. Παρακείμενες εισβολή και μακρινή μετάσταση είναι οι κύριες αιτίες θανάτου από καρκίνο σχετίζονται [2]. Ως εκ τούτου, η αναζήτηση για αναστολείς για τον καρκίνο των κυττάρων εισβολή και την ικανότητά της μετανάστευσης θα μπορούσε να αποκαλύψει ένα νέο θεραπεία για τη θεραπεία του καρκίνου. Παρά το γεγονός ότι τα βότανα έχουν χρησιμοποιηθεί στην θεραπεία των καρκίνων για χιλιάδες χρόνια, παραμένουν μια πολύ σημαντική πηγή βιολογικώς δραστικών προϊόντων. Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να προσδιοριστούν πιθανοί θεραπευτικοί παράγοντες για τη βελτίωση της επιβίωσης των ασθενών με μετάσταση καρκίνου του πνεύμονα.

λειχήνες είναι συμβιωτική οργανισμοί που παράγουν ένα μεγάλο αριθμό βιοδραστικών ουσιών πάνω από 800 [3], η οποία περιλαμβάνει πολλές κατηγορίες ενώσεις: παράγωγα αμινοξέων, αλκοόλες σακχάρων, αλειφατικά οξέα, γ-, δ- και μακροκυκλικές λακτόνες, μονοκυκλικές αρωματικές ενώσεις, κινόνες, χρωμόνες, ξανθόνες, διβενζοφουράνια, depsides, depsidones, depsones, τερπενοειδή, στεροειδή, καροτενοειδή [4] και διφαινυλαιθέρες [5, 6]. Σιγά-σιγά αυξάνεται οργανισμούς σε ενδιαιτήματα χαμηλών πόρων παράγουν υψηλότερα επίπεδα της άμυνας χημικών ουσιών [7]. Ως εκ τούτου, λειχήνες αποτελούν πηγή μοναδικών χημικών παραγόντων εκ των οποίων ορισμένοι έχουν ήδη αποδειχθεί ότι είναι αποτελεσματική έναντι διαφόρων καρκινικών

in vitro

μοντέλα [8]. Εδώ, η παρούσα μελέτη εξετάστηκε η ανασταλτική δράση των επτά λειχήνες είδη που συλλέγονται από τα βουνά της Ρουμανίας Καρπάθια κατά τη μετανάστευση και την εισβολή ικανότητα των ανθρώπινων κυττάρων καρκίνου του πνεύμονα και η περαιτέρω διερευνώνται οι πιθανές μοριακών μηχανισμών που διέπουν αντι-μεταστατική δράση τους για τον εντοπισμό πιθανών ενώσεων για τα νέα αντι- παράγοντες μετάσταση.

Υλικό και Μέθοδοι

Παρασκευή εκχυλισμάτων λειχήνες

δείγματα λειχήνα που χρησιμοποιούνται σε αυτή τη μελέτη, τα οποία συλλέγονται από τη Ρουμανία το 2011, εντοπίστηκαν στην κορεατική λειχήνα Research Institute ( KoLRI), Sunchon Εθνικό Πανεπιστήμιο, την Κορέα. Εν συντομία, θάλεια από λειχήνες συλλέχθηκαν από τη Ρουμανία το 2011, κατά τη διάρκεια της εκδρομής στο Εθνικό Πάρκο Calimani (47 ° 07’28.6 «Ν, 25 ° 13’34.8» Ε) και το Φυσικό Πάρκο Bucegi (45 ° 20’21.7 «Ν , 25 ° 27’41.4 «E) που οργανώθηκε από τον Δρ Crişan στο Πανεπιστήμιο Babeş-Bolyai, Cluj-Napoca, Ρουμανία [9]. Η άδεια για τη συλλογή λειχήνες δείγματα από αυτές τις θέσεις εκδόθηκε από τη Διοίκηση του Εθνικού Πάρκου Calimani και τη Διοίκηση του Φυσικού Πάρκου Bucegi, με την έγκριση της Επιτροπής για την Προστασία των Φυσικών Μνημείων (Ρουμανική Ακαδημία). Οι μελέτες πεδίο δεν συνεπάγεται καμία απειλούμενα ή προστατευόμενα είδη. Τα αντίγραφα αυτά κατατίθενται στην κορεατική λειχήνες και Allied Bioresource Center (KOLABIC) στην κορεατική λειχήνα Research Institute (KoLRI), Εθνικό και Καποδιστριακό Πανεπιστήμιο Sunchon, την Κορέα. Το ξηρό θάλεια των λειχήνες εκχυλίστηκαν με ακετόνη σε θερμοκρασία δωματίου για 48 ώρες. Τα εκχυλίσματα ακετόνης στη συνέχεια διηθείται και ξηραίνεται σε περιστροφικό εξατμιστήρα κενού στους 45 ° C. Τα ξηρά εκχυλίσματα διαλύθηκαν σε διμεθυλοσουλφοξείδιο (DMSO) ως 5 mg /ml συγκέντρωση (1000 Χ) για όλα τα πειράματα. Επτά ρουμανική είδη λειχήνων και αριθμούς δείγμα κουπόνι τους που χρησιμοποιούνται στην παρούσα μελέτη παρατίθενται στον Πίνακα 1.

Η

υγρής χρωματογραφίας υψηλής απόδοσης (HPLC) ανάλυση του υλικού λειχήνες

εκχύλισμα ακετόνης της λειχήνες θάλεια σε συγκέντρωση 5 mg /ml υποβλήθηκαν σε υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης (HPLC) αναλύσεις (LC-20Α? Shimadzu, Kyoto, Japan) σε μια YMC-Pack Οϋδ-Α (150 χ 3,9 mm ΙΟ) ανάστροφης φάσης στήλης που περιέχει πλήρως καλυμμένο άκρον υλικό C18 (μέγεθος σωματιδίων, 5 μm? μέγεθος πόρων, 12 nm). Η έκλουση διεξήχθη με ρυθμό ροής 1 ml /min κάτω από τις ακόλουθες συνθήκες πριν επακόλουθη ένεση: θερμοκρασία στήλης, 40 ° C? σύστημα διαλύτη, μεθανόλη: νερό: φωσφορικό οξύ (80: 20: 1, ν /ν /ν). Αναλύσεις παρακολουθήθηκαν με έναν ανιχνευτή συστοιχίας φωτοδιόδων (SPD-M20A? Shimadzu) με μια σειρά από 190 ~ 800 nm όλο το τρέξιμο HPLC. Οι παρατηρούμενες κορυφές σαρώθηκαν μεταξύ 190 και 400 nm. Το πρότυπο που χρησιμοποιείται για salazinic οξύ (t

R = 2,27 ± 0,2 min) απομονώθηκε από λειχήνες

Lobaria pulmonaria

. Usnic οξύ που χρησιμοποιείται στη μελέτη μας αγοράστηκε από την Sigma-Aldrich (St. Louis, USA) (329967-5G). Voucher δείγματα κατατέθηκαν στο ερμπαρίου του λειχήνα & amp? Allied Bioresource Κέντρο στο Ινστιτούτο Κορέας λειχήνα Ερευνών, Εθνικό και Καποδιστριακό Πανεπιστήμιο Sunchon, Νότια Κορέα.

υγρή χρωματογραφία-φασματομετρία μάζας (LC-MS) και οπτική περιστροφή analaysis υλικού λειχήνες

LC-MS φάσματα καταγράφηκαν σε ένα φασματόμετρο με μια πηγή ιονισμού ηλεκτροψεκασμού χρησιμοποιώντας Agilent 6460 τριπλό τετραπολικό LC /MS. Οι τιμές οπτικής περιστροφής μετρήθηκαν στους 25 ° C χρησιμοποιώντας Jasco P-1010 πολωσίμετρο με ένα λαμπτήρα νατρίου, και περιγράφεται ως εξής: [α] D, T (c (g /100 mL), διαλύτης). Ειδική περιστροφή του καθαρού (+) – usnic οξύ (Sigma-Aldrich, St. Louis, USA) είναι μια φυσική ιδιότητα του σε ένα δεδομένο μήκος κύματος και της θερμοκρασίας και μπορεί να ανευρεθεί στη βιβλιογραφία

Κυτταρική καλλιέργεια

Τα ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα πνεύμονα συμπεριλαμβανομένων Α549, Η460, H1650, και H1975 καλλιεργήθηκαν σε RPMI 1640 μέσο καλλιέργειας συμπληρωμένο με 10% εμβρυϊκό βόειο ορό, 1% διάλυμα πενικιλλίνης-στρεπτομυκίνης υπό υγροποιημένη 5% CO

2 ατμόσφαιρα στους 37 ° C.

πληγών επούλωσης

δοκιμασία

Α549 κύτταρα επιστρώθηκαν σε πυκνότητα 2.5 χ 10

5 κύτταρα /φρεάτιο σε πλάκες 6 φρεατίων καλλιέργειας ιστού (Corning, Νέα Υόρκη , USA) και αναπτύχθηκαν όλη τη νύκτα για συρροή. κύτταρα μονόφυλλο ήταν γδαρμένο με ένα ρύγχος πιπέτας για να δημιουργήσετε μια πληγή. Τα κύτταρα στη συνέχεια πλύθηκαν δύο φορές με RPMI 1640 χωρίς ορό για να απομακρυνθεί επιπλέοντα κύτταρα και επωάστηκαν σε μέσο RPMI1640 καλλιέργειας συμπληρωμένο με 2% FBS με 5 μg /ml του εκχυλίσματος λειχήνα ή 5 μΜ usnic οξύ. Οι φωτογραφίες των κυττάρων πάρθηκαν στα 0, 24, 48, και 72 ώρες μετά τον τραυματισμό για να μετρηθεί το πλάτος του τραύματος. Για κάθε δείγμα, λήφθηκε ένας μέσος όρος πέντε δοκιμασίες τραύματος για να καθορίσει το μέσο ποσοστό της μετανάστευσης σε μια δεδομένη συγκέντρωση του εκχυλίσματος ακετόνης ή usnic οξύ. Τα πειράματα επαναλήφθηκαν τουλάχιστον τρεις φορές.

δοκιμασία Invasion

δοκιμασίες Εισβολή διεξήχθησαν σε επικοινωνούντα δοχεία (Corning, Νέα Υόρκη, ΗΠΑ) με 8 μm πόρου μεμβράνη μεγέθους πολυανθρακικό επικαλυμμένα με 1% ζελατίνη. Τα κύτταρα επιστρώθηκαν σε 2 χ 10

5 κύτταρα /φρεάτιο σε ΚΡΜΙ1640 που περιείχε 0,2% αλβουμίνη βόειου ορού στο ανώτερο διαμέρισμα του θαλάμου, με ή χωρίς 5 μg ml εκχυλίσματα /ακάθαρτο λειχήνα. Στη συνέχεια, μέσο RPMI1640 με 10 μg /ml ινονηκτίνης προστέθηκε στον κάτω θάλαμο για να χρησιμεύσει ως χημειοτακτικό παράγοντα. Μετά από 48-h επώασης, τα κύτταρα στον άνω θάλαμο μονιμοποιήθηκαν με Diff Quik kit (Sysmex, Kobe, Japan). Στη συνέχεια, τα κύτταρα στο εσωτερικό του θαλάμου μηχανικώς απομακρύνθηκαν από την μεμβράνη με μια μπατονέτα, και τα κύτταρα προσκολλημένο στην κάτω πλευρά της μεμβράνης χρωματίστηκαν και μετρήθηκαν υπό μικροσκόπιο φωτός (5 πεδία ανά θάλαμο). Κάθε δοκιμασία επαναλήφθηκε εισβολή σε τρία ανεξάρτητα πειράματα. Τα αποτελέσματα εκφράζονται ως ο μέσος αριθμός κυττάρων που μεταναστεύουν ανά πεδίο υψηλής ισχύος.

Reporter δοκιμασία

κύτταρα ΗΕΚ293Τ απλώθηκαν σε πλάκες 24 φρεατίων 12 ώρες πριν από την επιμόλυνση. Μετά την επιμόλυνση του TOPFLASH ή ΑΡ-1 πλασμίδιο ανταποκριτή με το αντίστοιχο ενεργοποιητή, β-κατενίνης ή KITENIN, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με usnic οξύ για 48 ώρες και στη συνέχεια αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας Dual-Luciferase

® σύστημα προσδιορισμού ανταποκριτή (Promega, Madison , WI, USA). Η Renilla πλασμίδιο αναφοράς λουσιφεράσης (PRL-ΤΚ) χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικός έλεγχος για την αποτελεσματικότητα της επιμόλυνσης. Τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν εις τριπλούν, και τουλάχιστον τρία αποτελέσματα από ανεξάρτητα πειράματα συμπεριλήφθηκαν στην ανάλυση. Fold αλλαγές υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας τιμές κανονικοποιούνται προς δραστικότητα λουσιφεράσης Renilla.

Ποσοτική PCR πραγματικού χρόνου

Η ποσοτική PCR πραγματικού χρόνου πραγματοποιήθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [9]. Εν συντομία, ολικό RNA απομονώθηκε από ανθρώπινο καρκίνο του πνεύμονα κύτταρα χρησιμοποιώντας RNAiso Plus (Takara, Otsu, Shiga 520-2193, Japan) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Ολικό RNA (1 μ§) από κάθε ομάδα κατεργασμένων κυττάρων μετατράπηκε σε cDNA χρησιμοποιώντας ένα Μ-ΜΕν αντίστροφης μεταγραφάσης kit (Invitrogen, Carlsbad, USA) και SYBR πράσινο (Enzynomics, Σεούλ, Κορέα). Οι εκκινητές που χρησιμοποιήθηκαν για PCR πραγματικού χρόνου ήταν Κυκλίνη D1 (προς τα εμπρός) 5′-ccgtccatgcggaagatc-3 ‘και (ανάστροφη) 5′-gaagacctcctcctcgcact-3′? c-myc (προς τα εμπρός) 5’-aatgaaaaggcccccaaggtagttatcc-3 ‘και (ανάστροφη) 5′-gtcgtttccgcaacaagtcctcttc-3′? CD44 (προς τα εμπρός) 5’-tgccgctttgcaggtgtat-3 ‘και (ανάστροφη) 5′-ggcctccgtccgagaga-3′? GAPDH (προς τα εμπρός) 5’-atcaccatcttccaggagcga-3 ‘και (ανάστροφη) 5′-agttgtcatggatgaccttggc-3’. Σε πραγματικό χρόνο αντίδρασης και την ανάλυση PCR πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση CFX (Bio-Rad, Hercules, USA).

Affinity Καθίζηση της Κυτταρικής GTPases

Οι κυτταρικές δραστηριότητες Rac1 και Cdc42 προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας GST-RBD /PBD όπως περιγράφηκε προηγουμένως [10, 11]. Εν συντομία, τα κύτταρα λύθηκαν σε ρυθμιστικό διάλυμα λύσης (50 mM Tris, ρΗ 7,4, 1% Triton Χ-100, 0.5% δεοξυχολικό νάτριο, 0.1% SDS, 500 mM NaCl, 10 mM MgCl

2, και μείγμα αναστολέα πρωτεάσης) . Τα προϊόντα λύσης επωάστηκαν με σφαιρίδια GST-RBD /PBD σε RT για 1 ώρα. Τα σφαιρίδια στη συνέχεια πλύθηκαν τέσσερις φορές με ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης (50 mM Tris, ρΗ 7,4, 1% Triton Χ-100, 150 mM NaCl, 10 mM MgCl

2, και μείγμα αναστολέα πρωτεάσης). Οι δεσμευμένες πρωτεΐνες Rac1 και Cdc42 ανιχνεύθηκαν με ανοσοκηλίδωση χρησιμοποιώντας ένα μονοκλωνικό αντίσωμα έναντι Rac1 (Millipore 05-389) και Cdc42 (Santa Cruz SC-87). Η σχετική δραστικότητα εκάστου ΟΤΡάσης προσδιορίστηκε με ποσοτικοποίηση κάθε ζώνη του GTP-δεσμευμένη ΟΤΡάσης και το συνολικό ποσό της ΟΤΡάσης χρησιμοποιώντας Multi-Gauge 3.0, και οι τιμές των ΟΤΡ-δεσμευμένη ζώνες κανονικοποιήθηκαν προς την αξία του συνολικού ποσού. Όλα τα αποτελέσματα προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας τρεις διαφορετικές εκθέσεις από τουλάχιστον τρία ανεξάρτητα πειράματα.

Αποτελέσματα

Η αναστολή της Α549 κυτταρικής κινητικότητας με εκχυλίσματα λειχήνες

Η μετανάστευση των κυττάρων διαδραματίζει κρίσιμο ρόλο κατά τη διάρκεια του καρκίνου μετάσταση. Για να βρείτε το αντι-μεταναστευτικό λειχήνες δευτερογενής μεταβολίτης στα ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα του πνεύμονα, επούλωσης πληγών δοκιμασία διεξήχθη μεταξύ επτά εκχυλίσματα ακετόνης της ρουμανικής λειχήνες που παρατίθενται στον Πίνακα 1. λειχήνες παράγει μοναδικά πολυκετιδίου δευτερογενείς μεταβολίτες, συμπεριλαμβανομένων depsides, depsidones, διβενζοφουράνια, και depsones? και αυτές οι υδρόφοβες ενώσεις κανονικά εκχυλίζονται με ακετόνη [12]. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 1Α,

Αλεκτόρεια samentosa

,

Flavocetraria nivalis

,

Αλεκτόρεια ochroleuca

, και

Usnea Φλόριντα

ανέστειλε τη μετανάστευση Α549 κυττάρων σε συγκέντρωση 5 μg /ml. Η απόσταση μεταξύ των άκρων της πληγής στις 72 ώρες με τους εν λόγω υποψήφιους ήταν σημαντικά ευρύτερη από ότι στην ομάδα που DMSO-κατεργασμένα ή μη ενεργό δείγμα (

Bryoria capillaris

). Ειδικότερα,

F

.

nivalis

έδειξε ανασταλτική δραστηριότητα άνω του 60% σε σύγκριση με τον έλεγχο (Σχήμα 1Α και 1Β).

(Α-Β) Ποσοτική ανάλυση της δοκιμασίας μετανάστευσης των κυττάρων Α549 σε επεξεργασία με 5 μg /ml του εκχυλίσματα ακετόνης του

Αλεκτόρεια samentosa

,

Flavocetraria nivalis

,

Αλεκτόρεια ochroleuca

,

Bryoria capillaris

,

Hypogymnia physodes

,

Usnea Φλόριντα

και

Evernia διχαλωτό

(Α), και αντιπροσωπευτικές εικόνες της δοκιμασίας μετανάστευσης των κυττάρων Α549 που έλαβαν θεραπεία με τα εκχυλίσματα του

A

.

samentosa

,

F

.

nivalis

,

Μια

.

ochroleuca

,

U

.

Φλώριδα

και

Β

.

capillaris

(Β). (C-D) δοκιμασία Εισβολή των Α549 κυττάρων σε επεξεργασία με 5 μg /ml των εκχυλισμάτων ακετόνης του

A

.

samentosa

,

F

.

nivalis

,

Μια

.

ochroleuca

,

U

.

Φλώριδα

και

Β

.

capillaris

(C), και ποσοτική ανάλυση των εισέβαλαν αριθμούς κυττάρων σε κάθε ομάδα (D). Αντιπροσωπευτικές εικόνες δείχθηκαν από τρία ανεξάρτητα πειράματα, η = 3. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση τιμή ± S.E.M. (Τυπικό σφάλμα του μέσου όρου). *** P & lt? 0.001? NS, καμία σημαντική διαφορά σε σύγκριση με το 0,01% των κυττάρων Α549 DMSO-θεραπεία.

Η

Τα αποτελέσματα των εκχυλισμάτων ακετόνης του

A

.

samentosa

,

F

.

nivalis

,

Μια

.

ochroleuca

, και

U

.

Φλώριδα

στην Α549 κυτταρική εισβολή στη συνέχεια προσδιορίζεται με τη χρήση φρεατίων δοκιμασία εισβολής θάλαμο. Ως αποτέλεσμα, τα εκχυλίσματα λειχήνα μειώθηκαν σημαντικά τα εισέβαλαν αριθμούς κυττάρων με όσο το 50% σε σύγκριση με DMSO ή

B

.

τριχοειδή

(αρνητικός έλεγχος) (Εικόνα 1C και 1D). Τα ευρήματα αυτά απέδειξαν ότι εκχυλίσματα ακετόνης του

A

.

samentosa

,

F

.

nivalis

,

Μια

.

ochroleuca

, και

U

.

Φλώριδα

ανέστειλε τόσο τη μετανάστευση και την εισβολή ικανότητα των καρκινικών Α549 κύτταρα του πνεύμονα.

Usnic οξύ είναι ο δραστικός αναστολέας από το είδος λειχήνα

Για να προσδιορίσει τα συστατικά του εκχυλίσματος ακετόνης της λειχήνες,

Μια

.

samentosa

,

F

.

nivalis

,

Μια

.

ochroleuca

, και

U

.

Φλόριντα

εκχυλίσματα λειτουργούν με HPLC. Όπως φαίνεται στο σχήμα 2Α, usnic οξύ ταυτοποιήθηκε ως η κύρια ένωση σε όλα τα τέσσερα από αυτούς τους υποψηφίους μετά τη σύγκριση με το εσωτερικό πρότυπο του καθαρισμένο (+) – usnic οξύ (Sigma-Aldrich, St. Louis, USA), και αυτά ήταν συνεπή με προηγούμενη έκθεση (Πίνακας 1) [13-20]. Ταυτότητα του usnic οξέος και η οπτική τους καθεστώς αναλύθηκαν με ανάλυση LC-MS και ανάλυση οπτική δραστηριότητα, αντίστοιχα (S1 File). Η ένταση% της κορυφής για την usnic οξύ στις υποψήφιες λειχήνες σε συγκέντρωση 5 mg /ml ελήφθη δια συγκρίσεως με εκείνη της κορυφής για την καθαρή 5 mg /ml usnic οξύ. Αξίζει να σημειωθεί ότι το περιεχόμενο usnic οξύ είναι υψηλότερη σε

F

.

nivalis

απόσπασμα, το οποίο μπορεί να εξηγήσει ισχυρή ανασταλτική δράση της για τη μετανάστευση των κυττάρων (Σχήμα 2Α). Ήταν σκεφτεί ότι η (-) – usnic οξύ έχει παρόμοια ή περισσότερο ισχυρή ανασταλτική δράση επί της κυτταρικής κινητικότητος ως εκχύλισμα ακετόνης του

A

.

samentosa

και

Μια

.

ochroleuca

τα οποία είναι γνωστό ότι έχουν (-) – usnic οξύ ως υποσυνιστώσα τους [13, 16, 18] έδειξε παρόμοια ή περισσότερο ισχυρή ανασταλτική δράση για τη μετανάστευση και την εισβολή, αντίστοιχα, από (+) – usnic οξέος που περιέχει

U

.

Φλόριντα

(Σχήμα 1). Στην προηγούμενη έκθεσή μας, δείξαμε ότι το εκχύλισμα ακετόνης από λειχήνες

F

.

cucullata

και συστατικό, usnic οξύ, ανέστειλε ογκογενετικότητας και την κινητικότητα των καρκινικών κυττάρων [9]. Σύμφωνα με αυτό, (+) – usnic οξύ σε συγκέντρωση 5 μΜ ανέστειλε σημαντικά την μετανάστευση και εισβολή των κυττάρων Α549 (Σχήμα 2). Σε αυτή τη συγκέντρωση, usnic οξύ δεν έδειξε κυτταροτοξικότητα και /ή αναστέλλουν τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων (IC

50 αξία των usnic οξύ σε κύτταρα Α549 = 65,3 ± 0,65 μΜ) [9]. Όπως φαίνεται στο σχήμα 2Β-2Ε, ανασταλτική δράση της (+) – usnic οξύ σε 5 μΜ είναι τόσο υψηλή όσο το 50% σε αγωγή 72 ώρες για τη μετανάστευση και είναι περίπου 40% στις 48 ώρες θεραπείας για την εισβολή. Για να εξεταστεί περαιτέρω η ανασταλτική δράση της (+) – usnic οξύ επί των άλλων κυττάρων του καρκίνου του πνεύμονα, δοκιμασία εισβολή πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας H1650, H1975 και κύτταρα. Ως αποτέλεσμα, η (+) – θεραπεία usnic οξύ μειώθηκε σημαντικά εισέβαλαν αριθμό κυττάρων των κυττάρων H1650 και H1975 σε συγκέντρωση 5 μΜ (Εικόνα 3Α). Η ποσοτική ανάλυση αποκάλυψε ότι η αναστολή ήταν τόσο υψηλή όσο το 40% και στις δύο κυττάρων σε σύγκριση με κύτταρα υπό αγωγή με όχημα (Εικόνα 3Β). Μαζί, τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η (+) – usnic οξύ έχει ανασταλτική δράση έναντι κυτταρική κινητικότητα των ανθρώπινων κυττάρων καρκίνου του πνεύμονα

(Α) Υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης (HPLC) ανάλυση των εκχυλισμάτων λειχήνα ακετόνης.. Η ένταση% της κορυφής για την usnic οξέος στο εκχύλισμα σε μια συγκέντρωση 5 mg /ml ελήφθη δια συγκρίσεως με εκείνη της κορυφής για την καθαρή 5 mg /ml usnic οξύ. (Β-Ο) δοκιμασία μετανάστευση κυττάρων Α549 σε επεξεργασία με 5 μΜ του (+) – usnic οξύ (Β), και ποσοτική ανάλυση του μήκους του τραύματος (C). (D-Ε) δοκιμασία Εισβολή των Α549 κυττάρων σε επεξεργασία με 5 μΜ του (+) – usnic οξύ (D), και ποσοτική ανάλυση των εισέβαλαν αριθμούς κυττάρων σε κάθε ομάδα (Ε). Αντιπροσωπευτικά εικόνες παρουσιάζονται από τρία ανεξάρτητα πειράματα, η = 3. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση τιμή ± S.E.M. (Τυπικό σφάλμα του μέσου όρου). *** P & lt? 0.001? NS, καμία σημαντική διαφορά σε σύγκριση με 0,01% των κυττάρων Α549 DMSO-αγωγή

Η

(ΑΒ) Εισβολή δοκιμασία H1650, H1975 και κύτταρα επεξεργασμένα με 5 μΜ (+) -. Usnic οξύ (Α), και ποσοτική ανάλυση των εισέβαλαν αριθμούς κυττάρων σε κάθε κυτταρική σειρά (Β). Αντιπροσωπευτικά εικόνες παρουσιάζονται από τρία ανεξάρτητα πειράματα, η = 3. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση τιμή ± S.E.M. (Τυπικό σφάλμα του μέσου όρου). ** P & lt? 0,01? *** P & lt? 0.001? NS, καμία σημαντική διαφορά σε σύγκριση με 0,01% των κυττάρων Α549 DMSO-αγωγή

Η

(+) -. Usnic οξύ μειώνει β-κατενίνης μεσολαβεί δραστικότητα TOPFLASH και KITENIN μεσολάβηση δραστικότητα ΑΡ-1

για να διερευνηθεί υποκείμενων μηχανισμών για την ανασταλτική δράση της (+) – usnic οξύ, εκτελέσαμε TOPFLASH και προσδιορισμούς ρεπόρτερ ΑΡ-1 για να αξιολογηθεί κατά πόσον (+) – usnic οξύ μπορούν να διαμορφώσουν β-κατενίνης μεσολαβεί ή /και KITENIN μεσολάβηση σηματοδότηση δραστηριότητα. Όπως φαίνεται στο Σχ 4Α, (+) – usnic οξύ μειώθηκε σημαντικά δραστηριότητα TOPFLASH κατά 18% σε 1 μΜ και 37% στα 10 μΜ. Όσο για δραστικότητα ΑΡ-1, δοσοεξαρτώμενες μειώσεις παρατηρήθηκαν από 0.5 μΜ, και η μείωση ήταν σημαντική, όσο το 50% στα 10 μΜ. Επιπλέον, (+) – usnic οξύ επίσης σημαντικά μειωμένη EGF-ενεργοποιημένα KITENIN μεσολάβηση δραστικότητα ΑΡ-1 κατά 32% σε 1 μΜ και 41% στα 10 μΜ (Σχήμα 4Β). Για να ελέγξετε αν το επίπεδο των κατάντη γονιδίων στόχων της β-κατενίνης /LEF και c-jun /ΑΡ-1 επλήγησαν από (+) – θεραπεία usnic οξύ, ποσοτική ανάλυση σε πραγματικό χρόνο PCR διεξήχθη. Όπως φαίνεται στο σχήμα 5, τα σχετικά επίπεδα έκφρασης του CD44, κυκλίνη D1, και c-myc ήταν σημαντικά μειώθηκε κατά (+) – θεραπεία usnic οξέος σε καρκινικά κύτταρα πνεύμονα σε διαφορετικό βαθμό (Σχήμα 5Α-5ϋ). Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι η (+) – usnic οξύ εμφανίζει ανασταλτική δραστικότητα έναντι κυτταρική κινητικότητα μέσω της ρύθμισης της β-κατενίνης με τη μεσολάβηση και KITENIN μεσολάβηση δραστηριότητα σηματοδότησης σε κύτταρα καρκίνου του πνεύμονα

(Α) β-κατενίνης μεσολάβηση. μεταγραφική δραστικότητα του προαγωγού TOPFLASH μειώθηκε κατά (+) – θεραπεία usnic οξύ. κύτταρα ΗΕΚ 293Τ επιμολύνθηκαν με β-κατενίνης και πλασμίδιο TOPFLASH ανταποκριτή. Μετά από 12 ώρες διαμόλυνσης, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με (+) – usnic οξύ για 48 ώρες. (Β) KITENIN μεσολάβηση μεταγραφική δραστικότητα του προαγωγού ΑΡ1 μειώθηκε κατά (+) – θεραπεία usnic οξύ. Τα κύτταρα ΗΕΚ 293Τ επιμολύνθηκαν με KITENIN και ΑΡ-1 πλασμίδιο ανταποκριτής. Μετά από 12 ώρες διαμόλυνσης, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με (+) – usnic οξύ για 48 ώρες με ή χωρίς EGF. Διεξήχθησαν πειράματα σε τουλάχιστον τρεις ανεξάρτητες καλλιέργειες, η = 3. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση τιμή ± S.E.M. (Τυπικό σφάλμα του μέσου όρου). * P & lt? 0,05? ** P & lt? 0,01? *** P & lt? 0.001? NS, καμία σημαντική διαφορά σε σύγκριση με τα κύτταρα ΗΕΚ 293Τ DMSO επεξεργασμένο 0,01%.

Η

(AD) Ποσοτική ανάλυση του επιπέδου mRNA του CD44, c-myc, και Κυκλίνη D1 σε Α549 (Α), H1650 (Β), H1975 (C), και Η460 (D) κύτταρα κατεργασμένα με 5 μΜ (+) – usnic οξύ. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση τιμή ± S.E.M. (Τυπικό σφάλμα του μέσου), η = 3. * ρ & lt? 0,05? *** P & lt? 0.001? NS, καμία σημαντική διαφορά σε σύγκριση με την ομάδα DMSO επεξεργασμένο 0,01% σε κάθε κυτταρική σειρά

Η

(+) -. Usnic οξύ μειώνει GTP-Rac1 και -RhoA επίπεδο

Η οι δραστηριότητες της Rac1 και Cdc42 εμπλέκονται σε μεσεγχυματικά λειτουργία της μετανάστευσης [21, 22]. Για να προσδιορίσετε αν (+) – usnic οξύ μπορεί να επηρεάσει τις δραστηριότητες αυτών των πρωτεϊνών στα κύτταρα Α549, αναλύσεις pull-down GST πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας GST-PBD (περιοχή p21-σύνδεση). Όπως φαίνεται στο σχήμα 6, (+) – θεραπεία usnic οξύ μείωσε σημαντικά το ύψος των GTP-Rac1 κατά 22% συγκριτικά με κύτταρα υπό αγωγή με όχημα (Εικόνα 6Α). Ωστόσο, καμία σημαντική αλλαγή στο επίπεδο του GTP-Cdc42 παρατηρήθηκε με (+) – θεραπεία usnic οξύ (Σχήμα 6Β). RhoA προωθεί συνδετική σχηματισμό, ακραία συστολή, και μειώνει την πρόσφυση και την εξάπλωση των κυττάρων [23, 24]. Για να καθοριστεί εάν (+) – usnic οξύ μπορεί να επηρεάσει τη δραστηριότητα των RhoA σε κύτταρα Α549, αναλύσεις καθέλκυσης GST διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας GST-RBD (τομέας Rho-σύνδεση). Όπως φαίνεται στο Σχ 6C, (+) – θεραπεία usnic οξύ μείωσε σημαντικά το ύψος των GTP-RhoA κατά 40% σε σύγκριση με κύτταρα που υποστεί αγωγή με έκδοχο. Λαμβανόμενα μαζί, αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι η (+) -. Usnic οξύ αναστέλλει την κυτταρική κινητικότητα μέσω της ρύθμισης του Rho GTPases

(AC) Τα επίπεδα του GTP-δεσμευμένη Rac1, Cdc42 και RhoA μετρήθηκαν σε κύτταρα Α549 σε επεξεργασία με 5 μΜ (+) – usnic οξύ. GTP-Rac1 και -Cdc42 μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας GST-PBD, και GTP-RhoA μετρήθηκε χρησιμοποιώντας GST-RBD. Τα συνολικά ποσά των RhoA, Rac1, και Cdc42 έχουν επίσης δείξει. Οι σχετικές δραστηριότητες της Rac1 (Α), Cdc42 (Β), και RhoA (C) προσδιορίστηκαν όπως περιγράφεται στο Υλικά και Μέθοδοι. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν τη μέση τιμή ± SEM (τυπικό σφάλμα του μέσου), η = 3. ** ρ & lt? 0,01? *** P & lt? 0.001? NS, καμία σημαντική διαφορά σε σύγκριση με το 0,01% των κυττάρων Α549 DMSO-θεραπεία

Η

(+) -. Usnic οξύ παρουσιάζει πρόσθετο ανασταλτική δράση με cetuximab

Το cetuximab (Erbitux, C225), μονοκλωνικό αντίσωμα προς τον υποδοχέα του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGFR) χρησιμοποιείται ως ένας αντι-EGFR παράγοντες για τη θεραπεία του μεταστατικού παχέος εντέρου και του καρκίνου του πνεύμονα. Για να εξεταστεί κατά πόσον (+) – usnic οξύ έχει θεραπευτική σχετικότητα με cetuximab, δοκιμασία εισβολή πραγματοποιήθηκε με διάφορες συγκεντρώσεις του cetuximab ή /και (+) – usnic οξύ. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 7, η ανασταλτική δράση του cetuximab ήταν ~ 30% σε 1 μg /ml και ~ 40% στα 10 μg /ml σε κύτταρα Α549, και τη θεραπεία των 5 μΜ (+) – usnic οξύ έδειξε παρόμοια ανασταλτική δράση με 10 μg /ml του cetuximab (~ 40% αναστολή) σε αυτά τα κύτταρα. Είναι ενδιαφέρον, παρατηρήθηκε υψηλότερη ανασταλτική δραστικότητα για την κυτταρική εισβολή όταν τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 1 μg /ml του cetuximab μαζί με 5 μΜ (+) – usnic οξύ (Σχήμα 7). Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι η (+) – usnic οξύ όχι μόνο μπορούν να αναστείλουν την κινητικότητα των κυττάρων του καρκίνου του πνεύμονα από μόνη της, αλλά επίσης μπορεί να ενισχύσει την θεραπευτική δραστικότητα του cetuximab. Όπως usnic οξύ μειώθηκε KITENIN μεσολάβηση δραστικότητα ΑΡ-1 (Σχήματα 4 και 5) και KITENIN /ErbB4 μεσολάβηση κατάντη σήμα του EGF παίζει ένα από τα μοριακή βάση για προσδίδει αντίσταση σε αντι-EGFR παράγοντες [25], τα αποτελέσματα αυτά υποδηλώνουν ότι usnic οξύ μπορεί να έχουν πιθανές ευεργετικές δραστικότητα στην αντιμετώπιση της περιορισμένης κλινικής αποτελεσματικότητα των αντι-EGFR θεραπεία

(ΑΒ) δοκιμασία εισβολή των Α549 κυττάρων σε επεξεργασία με 5 μΜ του (+) -. usnic οξύ και /ή διάφορες συγκεντρώσεις του cetuximab (Α), και ποσοτική ανάλυση των εισέβαλαν αριθμούς κυττάρων σε κάθε ομάδα (Β). Αντιπροσωπευτικά εικόνες παρουσιάζονται από τρία ανεξάρτητα πειράματα, η = 3. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση τιμή ± S.E.M. (Τυπικό σφάλμα του μέσου όρου). * P & lt? 0,05? ** P & lt? 0,01? *** P & lt? 0.001? NS, δεν υπάρχει σημαντική διαφορά μεταξύ υποδεικνύεται ομάδα.

Η

Συζήτηση

κυττάρων του καρκίνου αποκτά βιολογικές δυνατότητες συμπεριλαμβανομένων αντιστέκονται κυτταρικό θάνατο, τη διατήρηση πολλαπλασιαστική σηματοδότηση, αποφεύγοντας καταστολείς ανάπτυξης, ενεργοποιώντας την εισβολή και τη μετάσταση, και έτσι εμπρός στην ανάπτυξη από τις αρχές έως τα τέλη της στάδια [26, 27], και η στόχευση είτε από αυτές τις κατακτήσεις μπορούν να ομαδοποιηθούν ως «αντικαρκινική». Από αυτή την άποψη, οι παρατηρήσεις μας ότι (+) – usnic οξύ αναστέλλει τη μετανάστευση και την ικανότητα εισβολής των καρκινικών κυττάρων του πνεύμονα είναι νέα στην αντικαρκινική δράση της (+) – usnic οξύ. Επιπλέον, τα αποτελέσματα μας έδειξαν ότι (+) – usnic οξύ έχουν συγκεκριμένα μηχανισμούς δράσης για την αντικαρκινική τους δράση, και αυτά είναι αρκετά διαφορετικές από εκείνες των προηγούμενων βιβλιογραφία που δείχνουν κυτταροτοξικότητα, ένα από μηχανισμό δράσεων για την αντικαρκινική δράση της (+) – usnic οξέος σε διάφορα καρκινικά κύτταρα.

ηπατοτοξικότητα της usnic οξέος μπορεί να περιορίσει το δυναμικό ιατρική χρήση τους στη θεραπευτική του καρκίνου [28]. Ωστόσο, οι περισσότεροι από ηπατοτοξικότητα σε ανθρώπινα παρατηρήθηκε όταν υψηλή δόση usnic οξέος από το στόμα χορηγείται ως συμπλήρωμα διατροφής για το σκοπό της απώλειας βάρους [29-31]. Σε θεραπευτικά καρκίνου, ηπατοτοξικότητα μπορεί να αποφευχθεί με την προσαρμογή της δοσολογίας, σκεύασμα ή /και τη διαδρομή του φαρμάκου. Για παράδειγμα, da Silva Santos et al. έδειξε ότι οι νανο-ενθυλάκωση των usnic οξέος επιτρέψει να διατηρήσει και να βελτιώσει την αντικαρκινική δράση και μειώνουν σημαντικά την ηπατοτοξικότητα [32]. Επιπλέον, έχει δειχθεί ότι η συμπλήρωση των αντι-οξειδωτικό, δηλ βιταμίνη Ε, μαζί με usnic οξύ θα μπορούσε να μειώσει σημαντικά την ηπατοτοξικότητα usnic οξύ επαγόμενη σε πρωτογενείς καλλιεργημένα ηπατοκύτταρα ποντικού [33]. Θα πρέπει επίσης να σημειωθεί ότι ορισμένα από τα έγγραφα που δείχνουν ηπατοτοξικότητα διεξήχθησαν επί κυττάρων HepG2, προήλθε από ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα ιστό 15 ετών αρσενικό έφηβος [34, 35]. Σε προηγούμενες χαρτί μας [9], αποδείξαμε ότι usnic οξύ έχει κάπως εκλεκτική κυτταροτοξικότητα σε καρκινικά κύτταρα σε σύγκριση με τα φυσιολογικά κύτταρα. Στην εναλλακτική απόψεων, σοβαρή κυτταροτοξικότητα της usnic οξέος στα κύτταρα HepG2 αντανακλά επιλεκτική και ειδική αντικαρκινική δράση της usnic οξύ για καρκίνο του ήπατος σε συγκεντρώσεις που ελέγχθηκαν.

Στην προηγούμενη έκθεσή μας, φάνηκε ότι η κυτταροτοξικότητα της usnic οξέος είναι ειδικά για καρκινικά κύτταρα, όπως ΗΤ29 (ορθοκολικό καρκίνο κύτταρα? IC

50 = 95,2 ± 0,85 μΜ), AGS (γαστρικό καρκινικό κύτταρο? IC

50 = 15.01 ± 0.52 μΜ), Α549 (πνεύμονας καρκινικών κυττάρων? IC

50 = 65,3 ± 0,65 μΜ), και CWR22Rv-1 (κύτταρα καρκίνου προστάτη? IC

50 = 24,1 ± 0,63 μΜ), ενώ τα μη-καρκινικά κύτταρα, όπως MDCK (Mardin-Darby νεφρού σκύλου? IC

50 = 133,04 ± 3,5 μΜ), RIE (επιθηλιακά κύτταρα αρουραίου εντερικό? IC

50 = 126 ± 4.25 μΜ), ΝΙΗ 3Τ3 (ποντικός εμβρυϊκών ινοβλαστών? IC

50 = 164,2 ± 3,7 μΜ) και HaCaT ( ανθρώπινα κερατινοκύτταρα? IC

50 = 185,7 ± 4,8 μΜ) κύτταρα, δεν υπέστησαν σοβαρές ζημιές [9]. Δεδομένου ότι η μέση κυκλοφορούντος όγκου αίματος για ποντικούς είναι 72 ml /kg [36] και το μοριακό βάρος του usnic οξέος είναι 344, LD

50 αξία του usnic οξύ (ποντικού-στόματος? 838 mg /kg) σε MSDS φύλλο usnic οξύ μπορεί να υπολογιστεί σε 33,8 mM. Ως ανασταλτική δραστικότητα usnic οξέος στην αναστολή του καρκίνου του πνεύμονα κυτταρική κινητικότητα παρατηρείται σε συγκέντρωση 5 μΜ, τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι usnic οξύ θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί για παράγων αντι-μετάσταση με μικρή τοξικότητα σε συγκεντρώσεις εργασίας.

Usnic οξύ έχει ένα χαμηλό βαθμό διαλυτότητας στο νερό, το οποίο είναι ένα εμπόδιο στην ανάπτυξη φαρμάκου καθώς είναι πιθανό να οδηγήσει σε χαμηλή βιοδιαθεσιμότητα. Για να αποφευχθεί αυτό το πρόβλημα, διάφορες προσεγγίσεις μπορούν να γίνουν για την ενίσχυση της διαλυτότητας με τη δική ένωση του με αναγωγή του μεγέθους των σωματιδίων, κρύσταλλο μηχανική, σχηματισμό άλατος, στερεά διασπορά, η χρήση του επιφανειοδραστικού, συμπλοκοποίηση, και ούτω καθεξής [37]. Η επιλογή της μεθόδου ενίσχυσης θα πρέπει να καθορίζεται για κάθε φάρμακο σε απαιτούμενα χαρακτηριστικά μορφή δοσολογίας. Για usnic οξύ, πρόσφατο άρθρο ανέφερε ότι άλας καλίου του usnic οξέος (usnate κάλιο) έχει 100% διαλυτότητα χωρίς να χάσει την βιολογική του δραστικότητα στα 10 μg /ml (περίπου 26 μΜ) [38]. Μαζί με τα γεγονότα που (+) και (-) εναντιομερών μορφών usnic οξύ έδειξε μέτρια έως ισχυρή βιολογική δράση [39, 40], απαιτείται περαιτέρω μελέτη για να αξιολογήσει το δυναμικό φαρμακευτικό χρήση usnic οξέος σε αντικαρκινική θεραπεία διαφόρων μορφών καρκίνου

Υποστήριξη Πληροφορίες

S1 αρχείου. LC-MS ανάλυση (εικόνα Α S1 File) και Οπτική ενεργότητα Ανάλυση (Σχήμα Β στο S1 File) των δειγμάτων που χρησιμοποιούνται σε αυτή τη μελέτη

doi:. 10.1371 /journal.pone.0146575.s001

(PDF)